MXPA04005509A

MXPA04005509A - Poliaminas sustituidas con cicloalquilo para terapia de cancer y metodos de sintesis de las mismas.

Info

Publication number: MXPA04005509A
Application number: MXPA04005509A
Authority: MX
Inventors: J Marton Laurence
Original assignee: Slil Biomedical Corp
Priority date: 2001-12-07
Filing date: 2002-12-06
Publication date: 2004-12-06
Also published as: US6982351B2; WO2003050072A1; AU2002364539A1; US20070287754A1; US7235695B2; US7453011B2; CA2469354A1; EP1453787A1; US20060030735A1; JP2005511734A; US20030195377A1

Abstract

Se describen compuestos de poliamina conformacionalmente restringidos utiles en el tratamiento del cancer y otras enfermedades marcadas por la proliferacion anormal de celulas. Tambien se describen metodos mejorados para sintetizar tales compuestos. En un metodo de la invencion se hace reaccionar un compuesto que porta carbeno o que porta un equivalente de caberno con el enlace doble de un compuesto de alqueno para formar el anillo de ciclopropilo como la primera etapa en la sintesis.

Description

POLIAMINAS SUSTITUIDAS CON CICLOALQUILO PARA TERAPIA DE CANCER Y METODOS DE SINTESIS DE LAS MISMAS Campo de la Invención Esta invención se refiere a compuestos análogos de poliaminas sustituidas con cicloalquilo, particularmente a compuestos análogos de poliamina que contienen ciclopropilo, útiles como tratamientos de quimioterapia en cáncer y en otros padecimientos provocados por la proliferación celular anormal, asi como a los métodos mejorados para sintetizar tales compuestos.

Antecedentes de la Invención ? pesar de que existe un avance substancial en la prevención, detección y tratamiento de ciertas formas de cáncer, permanece aún como una de las principales causas de muerte en el mundo desarrollado. Ciertas formas de cáncer, tales como el cáncer de próstata, tiene proporciones elevadas de supervivencia de 5 años, cuando se detecta en etapas tempranas, pero tiene proporciones de supervivencia muy inferiores cuando se detecta después de la metástasis. Por lo tanto, existe una necesidad de nuevos agentes mejorados para tratar el cáncer y otras enfermedades marcadas por la proliferación celular anormal. Las poliaminas son compuestos que se presentan Ref . :156583 naturalmente, que son esenciales para el crecimiento y la división celular. Las poliaminas (que incluyen putrescina, espermidina y espermina) se incrementan en cuestiones de proliferación. Un número de poliaminas análogas han demostrado ser una promesa como agentes anticancerígenos . Estas son capaces de matar células e inhibir el crecimiento celular tanto in vitro como in vivo. Entre los análogos más exitosos se encuentran los derivados de a-?, ?-? alquilo de los homólogos superior e inferior de espermina, a pesar de que varias diaminas alquiladas demuestran también ser una promesa como inhibidores de la proliferación celular de tumores. Ver, por ejemplo, la patente norteamericana Nos. 5,541,230 y 5,880,161. Diversas hipótesis han sido adelantadas para explicar los efectos biológicos de las poliaminas; una de las hipótesis más precisas atribuye sus efectos a las poliaminas que enlazan a los ácidos nucleicos y a los objetivos de los receptores. Puesto que la espermidina y la espermina son bases fuertes, se encuentran formando protones con un pH fisiológico y pueden por lo tanto, enlazarse a los ácidos nucleicos cargados negativamente ya sea mediante interacciones electrostáticas o mediante enlaces de hidrógeno . Las poliaminas son conocidas por interactuar e inducir los cambios estructurales en el ADN de los sistemas de células libres. Las espermidina y la espermina puede provocar que el ADN se condense y se agregue para inducir ambas transiciones, B a Z y B a A en ciertas secuencias de ADN. Los estudios mecánicos moleculares de interacciones de espermina-ADN demuestran que, en una conformación de energía mínima, la espermina se enlaza en una conformación cisoidal que se enrolla alrededor de la hendidura principal de doble hélice. La espermina y sus homólogos inferiores y superiores bisetilados a-N, co-N, así como la espermidina, han demostrado enlazarse al ARN-t. Usando el análisis ¾ RMN, se encuentra que la espermina y la 12N-bisetilspermina (BES) se enlazan al lazo TvyC del t-ARNfe. El enlace no es de naturaleza electrostática, sino más bien, es consecuencia de los distintos modos para enlazar hidrógeno, que pueden establecerse entre ambos tipos de moléculas. Finalmente, las poliaminas han demostrado recientemente enlazarse a receptores tales como el receptor N-metil-D-glutamato (NMDA) y el receptor de glutamato (Glu- ) para bloquear y modular un número de canales de iones, resultados que abren nuevas perspectivas en la farmacología de las poliaminas. Los fármacos que interactúan con el ADN han sido de interés como agentes anticancerígenos . Los modelos mecánicos de hélice doble de ADN han creado la imagen de una estructura rígida; sin embargo, la evidencia experimental sugiere que el ADN tiene una flexibilidad considerable. Cuando se diseñan los análogos de poliamina que pueden enlazarse al ADN, modificaciones estructurales consideradas incluyen variaciones en el cálculo de la distancia de los carbonos entre los nitrógenos y/o sustituciones N-terminal de diferentes tipos. Esta invención se refiere al diseño y a la síntesis de análogos quirales de espermina y otras poliaminas que se presentan naturalmente y no naturalmente, que enlazan ADN, t-ARN u otros sitios que enlazan poliaminas, en un forma selectiva y modificada debido a su rigidez conformacional incrementada. La introducción de la restricción en la rotación libre, alrededor de los enlaces simples en una molécula flexible tal como la espermina (que tiene una gran cantidad de conformaciones potenciales) puede resultar en una rigidez espacial, que puede introducir curvaturas, ensortijamiento o lazos en su dominio de enlace. La introducción de la restricción conformacional ha sido muy fructífera en el diseño de los peptidomiméticos , un informe reciente ha descrito la sxntesis de poliaminas de pirrolidilo quirales . Como un punto de inicio, los análogos rígidos de espermina se construyen cuando los átomos o enlaces agregados tienen un efecto mínimo en tamaño y peso molecular del compuesto de origen. La adición simple de un anillo de ciclopropilo al segmento de butano de espermina introduce la quiralidad y la restricción conformacional en una molécula de otra manera flexible .

La estructura (I) muestra la conformación de XN, 12N-bisetilespermina (BES) , mientras que las dos estructuras (II) y (III) muestra la conformación del trans-isómero (II) y cis-isómero (III) que resulta de la colocación del segmento de butano central en la BES con los residuos trans- y cis-1,2-dimetilciclopropilo, respectivamente . Los derivados de ciclopropano se conocen también por tener funciones biológicas importantes . Incorporar una porción de ciclopropano dentro de una estructura de poliamina puede aumentar el efecto anticáncer de la poliamina análogo vía los mecanismos adicionales complementarios al efecto conformacional en el análogo de la poliamina.

El diseño de nuevas y más eficaces tetraminas ofrece varias ventajas. A pesar de que los mecanismos precisos mediante los cuales las poliaminas matan las células de los tumores, y provocan una toxicidad sistémica aún no son totalmente claras, se ha establecido que las poliaminas y sus análogos se enlazan a los ácidos nucleicos y alteran sus conformaciones, se pueden enlazar a los objetivos del receptor, reduciendo drásticamente el nivel de descarboxilasa de ornitina (la primer enzima en la trayectoria que conduce a la biosíntesis de espermina en mamíferos) , que sobreregulan los niveles de espermidina/espermina N-acetiltransferasa (la enzima involucrada en el catabolismo y la trayectoria de salvamento de espermina y espermidina) , que pueden inhibir la absorción de las poliaminas naturales mediante las células, y que, como resultado, disminuyen las fusiones de poliaminas endógenas necesarias para la replicación celular. La muerte celular puede resultar a partir de cualquiera de uno de estos efectos o a partir de varios de las mismos que actúan estructuralmente uno delante de otro. Por otra parte, la principal ventaja en el diseño de nuevas tetraminas es que los estudios de estructura-actividad (SARs) han demostrado que los cambios estructurales relativamente pequeños en los esqueletos alif ticos de las poliaminas, pueden provocar diferencias pronunciadas en su comportamiento farmacológico y en los efectos secundarios tóxicos, así como en sus actividades antineoplásticas, tanto en los niveles celulares como en los modelos animales . Se ha demostrado repetidamente que, N, 14N-bisetilhomoespermina (BE4-4-4) , un homólogo superior de bisetilespermina, es un fármaco citotóxico poderoso pero que tiene una ventana terapéutica estrecha. Los resultados para las pruebas animales reportados contra tumores tales como, carcinoma de pulmón de Lewis o leucemia L1210 injertada en ratones desnudos atímicos fueron verdaderamente impresionantes; se logró aproximadamente un incremento de 6 veces en la vida útil, en comparación al de control. Sin embargo, se encontró que los valores de la dosis tolerada máxima (MTD) para los programas de inyección múltiple (ip) , fueron dosis de casi 6 mg/kg, cercanas a los niveles necesarios para lograr una actividad antitumor eficiente en xenoinjertos de tumor humano. Por lo tanto, es deseable diseñar compuestos con una ventana terapéutica más amplia. En la búsqueda de este objetivo, las restricciones conformacionales se introdujeron dentro de la estructura BE-4-4-4 para incrementar su actividad terapéutica, impulsada por los resultados prometedores obtenidos con análogos conformacionalmente restringidos de bisetilespermina. Puesto que los últimos se encontró recientemente que son altamente citotóxicos contra una linea de células de cáncer de próstata de humano, las nuevas tetraminas se probaron contra varias líneas de células de cáncer de próstata de humano. Las LnCap, DU 145, DuPro y PC-3. Los resultados sugieren que es posible mejorar notablemente la eficacia terapéutica de compuestos tipo BE-4-4-4 contra células de cáncer de próstata de humano, mediante la introducción de ciertas restricciones conformacionales . Se han descrito métodos y análogos de poliamina conformacionalmente restringidos para sintetizar tales análogos en las patentes norteamericanas Nos. 5,889,061 y 6,392,098 y las solicitudes de patente internacional WO 98/17624 y WO 00/66587. En vista de la utilidad de estos compuestos, para tratar el crecimiento de células neoplásticas, son deseables métodos sintéticos adicionales, particularmente, métodos sintéticos sujetos a una síntesis a gran escala. Esta invención proporciona métodos mejorados para sintetizar análogos de poliamina que contienen ciclopropilo, así como análogos de poliamina nuevos que contienen grupos ciclopropilo.

Descripción de la Invención En varias modalidades, la invención abarca nuevos métodos para hacer análogos de poliamina, así como análogos de poliamina novedosos (los cuales pueden hacerse por los métodos de la invención, o por cualquier otro método sintético) .

En una modalidad, la invención abarca un método para hacer una poliamina que contiene un grupo ciclopropilo al agregar un compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno a través de un enlace doble de un compuesto de alqueno para formar un anillo ciclopropilo, donde el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, o el compuesto de alqueno, o ambos tienen grupos funcionales adicionales los cuales pueden hacerse reaccionar en etapas adicionales. Opcionalmente , pueden realizarse reacciones químicas adicionales en los grupos funcionales adicionales incorporados en el anillo de ciclopropano del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, o del compuesto de alqueno, o en ambos. Los grupos que portan amino pueden entonces hacerse reaccionar con los grupos funcionales adicionales los cuales son incorporados en el anillo de ciclopropano del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, o del compuesto de alqueno, o de ambos. En una modalidad, el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno es un iluro, tal como un iluro de azufre. En modalidades adicionales, los grupos funcionales adicionales incorporados en el anillo de ciclopropano del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, o del compuesto de alqueno, o de ambos, incluye al menos un éster carboxílico.

En una modalidad donde los grupos funcionales adicionales incluyen al menos un éster carboxílico,. el éster carboxílico está en el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, la carga negativa formal del carbeno en el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno está en el carbono en la posición alfa al carbono carbonilo del grupo éster carboxílico. En otras modalidades donde los grupos funcionales adicionales incluyen al menos un éster carboxílico, el éster carboxílico está en el compuesto de alqueno, y el enlace doble del compuesto de alqueno está entre los carbonos en las" posiciones alfa y beta al carbono de carbonilo del grupos éster carboxílico. Todavía en modalidades adicionales, el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno tiene al menos un éster carboxílico, el compuesto de alqueno tiene al menos un éster carboxílico, y la etapa de realizar opcionalmente reacciones químicas adicionales se lleva a cabo en ambos de los grupos funcionales adicionales del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno y el compuesto de alqueno, y comprende la etapa de convertir los ésteres carboxílicos a ácidos carboxílicos libres. En otra modalidad, la química adicional se realiza para activar los ácidos carboxílicos con un grupo de partida, tal como por reacción con cloruro de tionilo para producir cloruros de ácido carboxílico.

En otra modalidad, la etapa de hacer reaccionar los grupos que portan amino con los grupos funcionales adicionales del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, o el compuesto de alqueno, o ambos, se lleva a cabo en ambos de los grupos funcionales adicionales del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno y el compuesto de alqueno. Todavía en otras modalidades, la invención abarca métodos para hacer un compuesto de la fórmula: E-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH ( -B-A-B-NH) X-E en donde A se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, C2-C6 alquilo, C2-C6 hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, C2-C3 alquinilo, C3-C6 cicloalquilo, C3-C6 cicloarilo, y C3-C6 cicloalquenilo; B se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, Cx-Ce alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, y C2-C6 alquenilo; E se selecciona independientemente del grupo que consiste de H, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, y C2-C6 alquinilo; y x es un entero desde 0 hasta 16; con la condición de que al menos una porción A es ciclopropilo, y que cada subunidad -B-A-B- contiene al menos dos átomos de carbono; y todas las sales y estereoisomeros de los mismos; comprende formar al menos una de las porciones ciclopropilo A por el método descrito arriba. En otras modalidades, x es un entero desde 1 hasta 16. En modalidades adicionales, la molécula contiene una, y sólo una, porción ciclopropilo. En modalidades adicionales, la molécula contiene una, y sólo una, porción cicloalquilo, y que la porción cicloalquilo es una porción ciclopropilo. En otras modalidades, el compuesto a sintetizarse por los métodos de la invención es de la fórmula: E- H-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-E . En modalidades adicionales, el compuesto es de la fórmula: E- H-B-A-B- H-B-A-B-NH-B-A-B- H-B-A-B- H-E . Todavía en modalidades adicionales, el compuesto es de la fórmula: E-NH-B-A-B-NH-B-A-B- H-B-A-B-NH ( -B-A-B-NH) X-E en donde x es un entero entre 2 y 16. Todavía en modalidades adicionales, para el compuesto a sintetizarse arriba, E se selecciona de H, C!-C2 alquilo, y t-butilo; o E es --CH2CH3. Todavía en modalidades adicionales, cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de C2-C4 alquilo; o -CH2CH2CH2CH2- ; o -CH2CH2CH2-; o se selecciona independientemente de CH2CH2CH2- y -CH2CH2CH2CH2- . Todavía en modalidades adicionales, cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo es en la configuración E; o cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo es en la configuración Z; o cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de en la configuración E o Z . La invención también abarca composiciones de materia que comprende un compuesto de la fórmula : E-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH (-B-A-B- H) X-E en donde A se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, C2-C6 alquilo, C2-C6 hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, C2-C6 alquinilo, C3-C6 cicloalquilo, 03-0e cicloarilo, y C3-C6 cicloalquenilo; B se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, y C2-C6 alquenilo; E se selecciona independientemente del grupo que consiste · de H, Ci-C6 alquilo, C-Ce hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, y C2-C6 alquinilo; y x es un entero desde 0 hasta 16; con la condición de que al menos una porción A sea ciclopropilo, y que cada subunidad -B-A-B- contenga al menos dos átomos de carbono; y todas las sales y estereoisomeros de los mismos. En modalidades adicionales, x es un entero desde 1 hasta 16. En modalidades adicionales, la molécula contiene una, y sólo una, porción ciclopropilo. En modalidades adicionales, la molécula contiene una, y sólo una, porción cicloalquilo, y tal porción cicloalquilo es una porción ciclopropilo. En modalidades adicionales, el compuesto es de la fórmula: E-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-E. En modalidades adicionales, el compuesto es de la fórmula : E-NH-B-A-B-NH-B-A-B- H-B-A-B-NH ( -B-A-B-NH) X-E en donde x es un entero entre 2 y 16. Todavía en modalidades adicionales de estos compuestos, E se selecciona de H, Ci-C2 alquilo, y t-butilo, o E es --CH2CH3. Todavía en modalidades adicionales de estos compuestos, cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de C2-C alquilo, o -CH2CH2CH2CH2- , o - CH2CH2CH2-, o cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de - CH2CH2CH2- y -CH2CH2CH2CH2- . Todavía en modalidades adicionales, cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo es en la configuración E; o cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo es en la configuración Z o cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de en la configuración E o Z. En otra modalidad, la invención abarca un compuesto de la fórmula: en donde los substituyentes alquilarrtina en el anillo ciclopropilo son trans uno al otro, y todas las sales de los mismos .

Breve Descripción de las Figuras La figura 1 es una gráfica que describe los efectos del SL-11093 en células TSU-PRL después de 5 días de incubación.

La figura 2 es una gráfica que describe el efecto de SL-11093 y SL-11098 células de tumor de próstata humano DuPro que sobreviven por el ensayo CFE. La figura 3 es una gráfica que describe el efecto de la citotoxicidad SL-11218 en células DuPro después de 5 días de incubación. La figura 4 es una gráfica que describe el efecto de SL- 11232 en células PC-3 después de 5 días de incubación. La figura 5 es una gráfica que describe el efecto de SL-11241 en células PC-3 después de 5 días de incubación. La figura 6 es una gráfica que describe el efecto de SL-11218 en la línea de célula de tumor de próstata humano DuPro después de 5 días de incubación. La figura 7a es una gráfica que describe la eficacia de SL-11218 contra xenoinjertos DU145 (50 or 75 mg/kg i. p. una vez a la semana x4 q 3 semanas) . Los círculos indican vehículo de control salino, los triángulos indican SL-11218 a dosis de 50 mg/kg, los cuadrados indican SL-11218 a dosis de 75 mg/kg. La figura 7b es una gráfica que describe el efecto de SL-11218 en el peso corporal del animal. Los círculos indican vehículo de control salino, los triángulos indican SL-11218 a dosis de 50 mg/kg, los cuadrados indican SL-11218 a dosis de 75 mg/kg. La figura 8a es una gráfica que describe el efecto de SL-11231 en el crecimiento de DU-145 en xenoinjerto. Los círculos indican datos para control, los cuadrados indican datos para SL-11231. La figura 8b es una gráfica que describe el efecto de SL-11231 en el peso corporal del animal. Los círculos indican datos para control, los cuadrados indican datos para SL-11231. La figura 9 es una gráfica que describe el efecto de SL-11218 en el volumen de tumor pancreático humano BxPC-3. Los círculos indican datos para control, los cuadrados indican datos para SL-11218. La figura 10 es una gráfica que describe el efecto de SL-11231 en el crecimiento del xenoinjerto de tumor pancreático humano BxPC-3. Los círculos indican datos para control, los cuadrados indican datos para SL-11231. La figura lia es una gráfica que describe la eficacia de la solución salina contra SL-11218, contra xenoinjertos DU145 grandes (tratamiento iniciado D66 qlw x 4 durante 2 ciclos) . Los círculos indican datos para control, los triángulos indican datos para SL-11218. La figura 11b es una gráfica que describe el efecto del tratamiento SL-11218 en el peso corporal de animales que presentan un tumor grande. Los círculos indican datos para control, los triángulos indican datos para SL-11218.

Mejor Modo para Llevar a Cabo la Invención La invención se dirige a varios análogos de poliamina novedosos y métodos para hacerlos como se describe en la presente. La invención incluye todas las sales de los compuestos descritos en la presente. Se prefieren particularmente las sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables son aquellas sales que mantienen la actividad biológica de las bases libres y que no son biológicamente o de otra manera indeseables . La sal deseada puede prepararse por métodos conocidos por aquellos de experiencia en el arte, al tratar la poliamina con un ácido. Los ejempos de ácidos inorgánicos incluyen, pero no se limitan a, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, y ácido fosfórico. Los ejemplos de ácidos orgánicos incluyen, pero no se limitan a, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maléico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido sulfónico, y ácido salicílico. Las sales de las poliaminas con aminoácidos, tales como sales de aspartato y sales de glutamato, también pueden prepararse . La invención también incluye todos los estereoisómeros de los compuestos, incluyendo diastereómeros y enantiomeros, asi como mezclas de estereoisómeros, incluyendo, pero no se limitan a, mezclas racémicas . Salvo que la estereoquímica se indique explícitamente en una estructura, la estructura se pretende que abarque todos los estereoisómeros posibles del compuesto descrito. El término "poliamina" en su sentido más general se refiere a un compuesto que contiene más de un grupo amino. Como se usa en la presente, "poliamina" se usa para referirse a cualesquiera de un grupo de aminas de cadena recta, alifáticas derivadas biosintéticamente de aminoácidos; tales poliaminas se revisan en Marton et al. (1995) Ann. Rev. Pharm. Toxicol . 35: 55-91. Por "análogo de poliamina" significa un compuesto que contiene dos o más grupos amino, donde los grupos amino se enlazan por porciones de hidrocarburo substituidas o no substituidas . Las porciones hidrocarburo pueden ser grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquinilo, o arilo substituidos o no substituidos, o cualquier combinación de los mismos. Los análogos de poliamina pueden ser estructuralmente similares a las poliaminas que se presentan naturalmente tales como espermina y/o espermidina y su precursor, la diamina putrescina. Los análogos de poliamina pueden ser ramificados o no ramificados. El término "alquilo" se refiere a grupos alifáticos saturados incluyendo grupos cíclicos de cadena recta, cadena ramificada, y combinations de los mismos, que tienen el número de átomos de carbono especificado, o si no se especifica el número, tienen hasta 12 átomos de carbono. Los grupos "alquilo de cadena recta" o "alquilo lineal" se refiere a grupos alquilo que no son ni cíclicos ni ramificados, comúnmente designados como grupo "n-alquilo" . Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo, neopentilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, y adamantilo. Los grupos cíclicos pueden consistir de un anillo, que incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como cicloheptilo, o anillos fusionados múltiples, que incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como adamantilo o norbornilo. "Alquilo substituido" se refiere a grupos alquilo substituted con uno o más s bstituyentes que incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como halógeno (fluoro, cloro, bromo, y yodo), alcoxi, aciloxi, amino, hidroxilo, mercapto, carboxi, benciloxi, fenilo, bencilo, ciano, nitro, tioalcoxi, carboxaldehído, carboalcoxi y carboxamida, o una f ncionalidad que puede ser apropiadamente bloqueada, si es necesario para propósitos de la invención, con un grupo protector. Los ejemplos de grupos alquilo substituidos incluyen, pero no se limitan a, -CF3, -CF2-CF3, y otros grupos perfluoro y perhalo. "Hidroxialquilo" específicamente se refiere a grupos alquilo que tienen el número de átomos de carbono especificado substituido con un grupo -OH. De esta manera, "hidroxialquilo lineal C3" se refiere a -CH2CH2CHOH- , CH2CHOHCH2-, y -CHOHC¾CH2- . El término "alquenilo" se refiere a grupos alifáticos saturados que incluyen grupos cíclicos de cadena recta (lineal) , cadena ramificada, y combinaciones de los mismos, que tienen el número de átomos de carbono especificado, o si no se especifica el número, tienen hasta 12 átomos de carbono, que contienen al menos un enlace doble (-C=C-). Los ejemplos de grupos alquenilo incluyen, pero no se limitan a, -CH2-CH=CH-CH3; y -C¾-CH2-ciclohexenilo, donde el grupo etilo puede estar enlazado a la porción ciclohexenil en cualquier valencia de carbono disponible. El término "alquinilo" se refiere a grupos alifáticos saturados incluyendo grupos cíclicos de cadena recta (lineal) , cadena ramificada, y combinaciones de los mismos, que tienen el número de átomos de carbono especificado, o si no se especifica el número, tienen hasta 12 átomos de carbono, los cuales contienen al menos un enlace triple (-C=C-) . "cadena de hidrocarburo" o "hidrocarbilo" se refiere a cualquier combinación de grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, o arilo de cadena recta, cadena ramificada, o cíclicos, y cualquier combinación de los mismos. "Alquenilo substituido", "alquinilo substituido", y "cadena de hidrocarburo substituida" o "hidrocarbilo substituido" se refiere al grupo respectivo substituido con uno o más substituyentes , que incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como halógeno, alcoxi, aciloxi, amino, hidroxilo, mercapto, carboxi, benciloxi, fenilo, bencilo, ciano, nitro, tioalcoxi, carboxaldehído , carboalcoxi y carboxamida, o una funcionalidad que puede ser apropiadamente bloqueada, si es necesario para propósitos de la invención, con un grupo protector . "Arilo" o "Ar" se refiere a un grupo carbocíclico aromático que tiene un anillo sencillo (que incluye, pero no se limita a, grupos tales como fenilo) o anillos condensados múltiples (que incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como naftilo o antrilo) , e incluye grupos arilo tanto substituidos como no substituidos. "Arilos substituidos" se refiere a arilos substituidos con uno o más substituyentes, que incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como alquilo, alquenilo, alquinilo, cadenas de hidrocarburo, halógeno, alcoxi, aciloxi, amino, hidroxilo, mercapto, carboxi, benciloxi, fenilo, bencilo, ciano, nitro, tioalcoxi, carboxaldehído, carboalcoxi y carboxamida, o una funcionalidad que puede ser apropiadamente bloqueada, si es necesario para propósitos de la invención, con un grupo protector. "Heteroalquilo" , "heteroalquenilo" , y "heteroalquinilo" se refieren a grupos alquilo, alquenilo, y alquinilo, respectivamente, que contienen el número de átomos de carbono especificad (o si no se especifica el número, tienen hasta =12 átomos de carbono) que contiene uno o más heteroátomos como parte de las cadenas principal, ramificada, o cíclica en el grupo. Heteroátomos incluye, pero no se limitan a, N, S, O, y P; N y 0 se prefieren. Los grupos heteroalquilo, heteroalquenilo, y heteroalquinilo pueden enlazarse al resto de la molécula ya sea en un heteroátomo (si la valencia está disponible) o en el átomo de carbono. Los ejemplos de grupos heteroalquilo incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como -0-CH3, -CH2-0-CH3, -CH2-CH2-0-CH3 , -S-CH2-CH2-CH3 , -C¾-CH(CH3) -S-CH3, -CH2-CH2- H-CH2-CH2-, l-etil-6-propilpiperidino, 2-etiltiof nilo, y morfolino. Los ejemplos de grupos heteroalquenilo incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como -CH=CH-NH-CH(CH3) -CH2- . "Heteroarilo" o "HetAr" se refiere a un grupo carbociclico aromático que tiene un anillo sencillo (que incluyen, pero no se limitan a, ejemplos tales como piridilo, tiofeno, o furilo) o anillos condensados múltiples (que incluyen, pero no se limitan a, ejemplos tales como imidazolilo, indolizinilo o benzotienilo) y que tiene al menos un heteroátomo, que incluyen, pero no se limitan a, heteroátomos tales como N, O, P, o S, dentro del anillo. Salvo que se especifique de otra manera, los grupos heteroalquilo, heteroalquenilo, heteroalquinilo, y heteroarilo tienen entre uno y cinco heteroátomos y entre uno u veinte átomos de carbono. Grupos "heteroalquilo substituido" , "heteroalquenilo substituido" , "heteroalquinilo substituido" , y "heteroarilo substituido" se refieren a grupos heteroalquilo, heteroalquenilo, heteroalquinilo, y heteroarilo substituidos con uno o más substituyentes, que incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como alquilo, alquenilo, alquinilo, bencilo, cadenas de hidrocarburo, halógeno, alcoxi, aciloxi, amino, hidroxilo, mercapto, carboxi, benciloxi, fenilo, bencil, ciano, nitro, tioalcoxi, carboxaldehído, carboalcoxi y carboxamida, o una funcionalidad que puede ser apropiadamente bloqueada, si es necesario para propósitos de la invención, con un grupo protector. Los ejemplos de tales grupos heteroalquilo substituidos incluyen, pero no se limitan a, piperazina, substituida en un nitrógeno o carbono por un grupo fenilo o bencilo, y enlazada al resto de la molécula por cualquier valencia disponible en un carbono o nitrógeno, -NH~S02- fenilo, -NH- (C=0) 0-alquilo, -NH- (C=0) O-alquil-arilo, y - H- (C=0) -alquilo. Si es químicamente posible, los heteroátomos así como los átomos de carbono del grupo pueden substituirse.

Los heteroatomos también pueden estar en forma oxidada, si es químicamente posible. El término "alquilarilo" se refiere a un grupo alquilo que tiene el número de átomos de carbono designado, junto a uno, dos o tres grupos arilo. El término "alcoxi" como se usa en la presente se refiere a un alquilo, alquenilo, alquinilo, o cadena de hidrocarburo enlazado a un átomo de oxígeno y que tienen el número de átomos de carbono especificado, o si no se especifica el número, tienen hasta 12 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alcoxi incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como metoxi, etoxi, y t-butoxi. El término "alcanoato" como se usa en la presente se refiere a un grupo de ácido carboxílico ionizado, tal como acetato (C¾C (=0) -0(_11 ) , propionato (CH3CH2C (=0) -o'"1' ) , y similares. "Alquil alcanoato" se refiere a un ácido carboxílico esterificado con un grupo alcoxi, tal como acetato etílico (C¾C (=0) -0-CH2CH3) . "co-haloalquil alcanoato" se refiere a un alquil alcanoato que porta un átomo de halógeno en el átomo de carbono alcanoato además del grupo carboxilo de esta manera, el ?-bromo propionato etílico se refiere a 3 -bromopropionato etílico, ?-cloro n-butanoato metílico se refiere a 4-cloro n-butanoato metílico, etc. Los términos "halo" y "halógeno" como se usa en la presente se refieren a substituyentes Cl, Br, F o I.

"Grupo protector" se refiere a un grupo químico que exhibe las siguientes características: 1) reacciona selecctivamente con la funcionalidad deseada en un buen rendimiento para dar un substrato protegido que es estable a las reacciones proyectadas para las cuales se desea la protección; 2) se remueve selectivamente del substrato protector para producir la funcionalidad deseada; y 3) se remueve en buen rendimiento por reactivos compatibles con los otros grupos funcionales presentes o generados en tales reacciones proyectadas. Los ejemplos de grupos protectores apropiados pueden encontrarse en Greene et al. (1991) Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Ed. (John Wiley & Sons, Inc., New York). Los grupos amino protectores incluyen, pero no se limitan a, mesitilensulfonilo (Mes) , benciloxicarbonil (CBz o Z) , t-butiloxicarbonil (Boc) , t-butildimetilsilil (TBDI S o TBDMS) , 9-fluorenilmetiloxicarbonil (Fmoc) , tosil, bencensulfonilo, 2-piridil sulfonilo, o grupos protectores fotoestables tales como 6-nitroveratriloxi carbonil (Nvoc) , nitropiperonilo, pirenilmetoxicarbonil , nitrobencilo, dimetil dimetoxibencilo, 5-bromo-7-nitroindolinil , y similares. Los grupos protectores hidroxilo incluyen, pero no se limitan a, Fmoc, TBDIMS, grupos protectores fotoestables (tal como nitroveratril oximetil éter (Nvom) ) , Mom (metoxi metil éter) , y Mem (metoxi etoxi metil éter) , NPEOC (4-nitrofenetiloxicarbonil) y NPEOM (4-nitrofenotiloximetiloxicarbonil) . En una modalidad, la invención abarca métodos mejorados para hacer políaminas que contienen ciclopropilo . Uno de tales métodos utiliza la adición de un compuesto que porta un carbeno, o un compuesto que porta un equivalente de carbeno, a un enlace doble de un compuesto de alqueno, como una de las etapas en el método sintético. En otra modalidad, el compuesto de poliamina sintetizado por los métodos de la invención se selecciona de entre el grupo de compuestos de la fórmula: E-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH (-B-A-B-NH) X-E donde A se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, C2-C6 alquilo, C2-C6 hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, C2-C6 alquinilo, C3-C6 cicloalquilo, C3-C6 cicloarilo, y C3-Ce cicloalquenilo ; B se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, Cx-C6 alquilo, x~ 5 hidroxialquilo, y C2-C6 alquenilo; E se selecciona independientemente del grupo que consiste de H, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, y C2-C6 alquinilo; y x es un entero desde 0 hasta 16; con la condición de que al menos una porción A es ciclopropilo, y que cada subunidad -B-A-B- contiene al menos dos átomos de carbono; y todas las sales y estereoisómeros de los mismos .

Los compuestos de alqueno están bien definidos en la técnica como compuestos que contiene uno o más enlaces dobles; el término "compuestos olefínicos" también se usa y es sinónimo con "alquenos" . Los compuestos de carbeno son bien conocidos en la técnica. El término "carbenoido" se usa cuando no está presente un reactivo de carbeno libre, o cuando la presencia de un carbeno libre no puede demostrarse o está en duda. Los compuestos equivalentes de carbeno se definen como que incluyen carbenoides, y los compuestos con un carbono reactivo sencillo donde tal carbono sencilla forma enlaces dobles (ya sea un enlace doble o dos enlaces dobles) a otro compuesto. De esta manera, los compuestos equivalentes de carbeno incluyen (pero no se limitan a) compuestos tales como iluros, que pueden reaccionar con enlaces dobles de una manera análoga a la reacción de carbeno con enlaces dobles, aún a través del mecanismo actual por el cual los iluros reaccionan con enlaces dobles, se considera que es una adición nucleofílica . La reacción de carbenos o compuestos equivalentes de carbeno con alquenos es bien conocida en la técnica y procede como sigue en la reacción (IV) : (IV) donde el átomo de carbono sencillo al cual Rlf R2, R3, y R4 se enlazan forman dos enlaces al compuesto de alqueno (perdiendo R3 y R4 en el proceso; deberá notarse que R3 y R4 pueden ser dos substituyentes separados, o que R3 o R4 pueden ser una carga negativa formal en lugar de un substituyente, o R3 y R4 pueden juntos ser un enlace doble a un substituyente) donde la estereoquímica resultante de los grupos Rlf R2, R5, s, R7, y R8 depende de las características específicas de los reactivos. Para la reacción del iluro de azufre (V) ·. 1 isómero E del diéster ciclopropílico es el único producto ver el Ejemplo 1) . La reacción del iluro (VI) : proporciona el 2-cianociclopropancarboxilato etílico, que puede usarse como material de partida en el Ejemplo 6 abajo. Aunque los dos ejemplos anteriores producen los isómeros trans de ciclopropano, los métodos se conocen en el arte por los cuales los isómeros cis de ciclopropano pueden sintetizarse (ver, por ejemplo, Hamaker, CG et al., (2001) Organometallics 20(10): 2102-2108; Doyle, MP et al., (1993) Helv. Chim. Acta 76(6): 2227-2235; Nguyen, ST y Jin, W (1999) , Book of Abstracts, 218th ACS National eeting, New Orleans, Aug. 22-26,1999, INOR-104, Editorial: American Chemical Society, Washington, DC) . Después de la reacción del carbeno o el compuesto equivalente de carbeno con el alqueno, los diferentes grupos funcionales en la molécula (¾., R2, Rs, Re# y ¾) pueden derivarse además si son apropiadamente reactivos. Para la reacción del iluro de azufre (V) descrita arriba, Ri es - COOEt, R2 es -H, R5 es -COOEt, y R6, R7, y Rs son -H, formando trans-1, 2-dietoxicarbonil ciclopropano (dietil trans-1,2- ciclopropano dicarboxilato) . Los grupos éster pueden experimentar reacciones químicas adicionales bajo las condiciones que no destruyen el grupo ciclopropilo . En el Ejemplo 1, abajo, los grupos éster se convierten en grupos de ácido carboxílico; los grupos de ácido carboxílico se convierten entonces en los grupos de cloruro ácido. Los grupos de ácido carboxílico pueden, por supuesto, convertirse en otros grupos acilo reactivos de la forma -C(=0)-X, donde X es un buen grupo de partida, X puede ser un haluro, p-nitrofenol, N-hidroxisuccinimida, HOBt (1-hidroxibenzotriazol) o HOAt (l-hidroxi-7-azabenzotriazol ) donde el oxígeno hidroxilo de HOBt o HOAt se enlaza al grupo acilo, o uno cualesquiera de un número de otros buenos grupos de partida. Los esteres activos pueden entonces hacerse reaccionar con grupos amino u otros nucleófilos, y la química además puede realizarse en los compuestos resultantes. Alternativamente, el dietil trans-1 , 2-ciclopropan dicarboxilato puede reducirse a trans-1, 2-bis (hidroximetil) ciclopropano, como se describe en el Ejemplo 2 abajo. El diol resultante puede convertirse a un dibromuro, o alternativamente, los alcoholes pueden convertirse a otros grupos de partida, tales como otros haluros, tosilatos, mesitilatos, o mesilatos. Los carbonos que portan bromuro electrofílico (o que porta otro grupo de partida) pueden entonces hacerse reaccionar con aminas u otros nucleófilos, y la química adicional puede realizarse en los compuestos resultantes . Las aminas, amidas, y sulfonamidas las cuales pueden hacerse reaccionar con los derivados de ciclopropano electrofílicos incluyen, pero no se limitan a, compuestos de la forma R-NH2 y R-NH-PG, donde R es una porción de hidrocarburo y PG significa un grupo protector. Cuando PG es un grupo mesitileno, R-NH-PG es de la forma R-NH-S(=0)2-2 , 4 , 6-trimetilbenceno, esto es, el nitrógeno del compuesto es una sulfonamida. Varios ejemplos no limitantes de aminas, amidas, y sulfonamidas las cuales pueden hacerse reaccionar con los derivados de ciclopropano electrofílicos se dan en los Ejemplos de abajo, y pueden combinarse de cualquier manera para formar poliaminas que contienen ciclopropano. Los grupos de ciclopropano múltiples pueden incorporarse en las poliaminas de manera análoga a la que se describe en los Ejemplo 2, 3, y 6 abajo. Pueden agregarse unidades de hidroxialquilo a la molécula por varios métodos. El Ejemplo 7 abajo ilustra un método, donde la 2-hidroxi-?-butirolactona 120 se usa como el material de partida. (Este compuesto está comercialmente disponible tanto como isómeros R y S) . Después de la protección del grupo hidroxi con cloruro de t-butildimetilsililo (TBDMSC1) , la lactona resultante 121 se trata con una solución THF de EtNH2- La hidroxi amida 122 resultante se somete a una reacción Mitsunobu con ftalimida (PhTh) , dietilazodicarboxilato (DEAD) , y trifenilfosfina, seguido por la desprotección con hidracina para obtener la amina 123.

Uso terapéutico de análogos de poliaminas Los análogos de poliaminas de la presente invención son útiles para el tratamiento de una variedad de padecimientos provocados por la proliferación no controlada de células, que incluyen cáncer, particularmente cáncer de próstata y otras líneas de células de cáncer. Los compuestos se usan para tratar mamíferos, preferiblemente humanos. "Tratar" un padecimiento usando un análogo de poliamina de la invención se define como, administrar uno o más análogos de poliamina de la invención, con o sin agentes terapéuticos adicionales, para prevenir, reducir, o eliminar ya sea el padecimiento o los síntomas del padecimiento, o para retrasar el progreso del padecimiento o los síntomas del padecimiento. "Uso terapéutico" de los análogos de poliamina de la invención se define como usar uno o más análogos de poliamina de la invención para tratar un padecimiento, como se definió arriba. Para evaluar la eficacia de un análogo de poliamina particular para una aplicación medicinal particular, los compuestos pueden probarse primero contra las células de prueba seleccionadas apropiadamente in vitro. En un ejemplo no limitante, los análogos de poliamina pueden probarse contra las células de tumor, por ejemplo, células de tumor de próstata. Los experimentos ejemplares pueden utilizar líneas celulares capaces de crecer en cultivos in vivo como en ratones descubiertos atimicos tales como L CaP. Horoszewicz et al. (1983) Cáncer Res. 43:1809-1818. El cultivo y tratamiento de líneas celulares de carcinoma, ciclo celular y muerte celular están determinadas en base a la citometría de flujo; ensayos de enzimas que incluyen actividades ODC, SAMDC y SSAT; y cromatografía líquida de alta resolución, la detección y cuantificación de poliaminas naturales y análogos de poliamina se describen en la técnica, por ejemplo, Mi et al. (1998) Prostate 34:51-600; Kramer et al. (1997) Cáncer Res. 57:5521-27; and Kramer et al. (1995) J\ Biol. Chem. 270:2124-2132. Pueden hacerse también, evaluaciones de los efectos de los análogos de poliamina en el metabolismo y crecimiento celular. El análisis se inicia con las determinaciones IC50 basadas en los intervalos de las curvas de respuesta de dosis de 0.1 hasta 1000 µt? realizadas en 72 horas. A partir de estos estudios, pueden definirse las condiciones que producen aproximadamente 50% de inhibición de crecimiento y usarse para: (a) seguir la dependencia en el tiempo de la inhibición de crecimiento hasta 6 días, con una atención particular para la disminución en el número de células, que puede indicar la muerte celular inducida por el fármaco; (b) caracterizar los efectos análogos de poliamina en la muerte celular y el progreso del ciclo celular usando citometría de flujo (el análisis puede desarrollarse en células unidas o aisladas) ; (c) examinar los efectos análogos de poliamina en los parámetros metabólicos celulares . Los efectos análogos de poliamina pueden normalizarse en concentraciones intracelulares (mediante el análisis de HPLC) , que proporcionan también un índice de su capacidad relativa para penetrar células. Las diferencias marcadas en la absorción de análogos de poliamina pueden caracterizarse además, mediante el estudio de la capacidad del compuesto, para utilizar y regular el transporte de poliaminas, así como para valorar los estudios de competición usando espermidina radioetiquetada, como se describió previamente en Mi et al. (1998) . Los análogos de poliamina podrían también ingresar a las células mediante un mecanismo de difusión. ueba in vivo de análogos de poliamina . Los análogos de poliamina encontrados, que tienen una actividad anti-proliferativa potente in vi tro con respecto a las células de carcinoma cultivadas pueden evaluarse en sistemas de modelo in vivo. El primer objetivo es determinar la toxicidad relativa de los compuestos en animales que no cargan tumores, tales como ratones DBA/2. Grupos de tres animales pueden inyectarse intraperitonealmente con concentraciones aumentadas de un análogo de poliamina, empezando por ejemplo, en 10 mg/kg. La toxicidad indicada por la morbilidad se monitorea estrechamente durante las primeras 24 horas. Un compuesto análogo de poliaminas bien caracterizado tal como BE-333, puede usarse como un estándar interno en estos estudios, puesto que una base de datos ya ha sido establecida con respecto a una toxicidad aguda vía un tratamiento de dosificación simple relativo a la toxicidad crónica vía un programa diario durante 5 días. Así, en el caso de análogos de poliamina, la toxicidad de dosis simple relativa a BE-333 se usa para proyectar el rango de dosis que va a ser usada en un programa diario durante 5 días . Después de que se deduce la dosificación mas alta tolerada en un programa diario durante 5 días, se determina la actividad antitumor. Típicamente, los tumores pueden implantarse subcutáneamente dentro de ratones atímicos descubiertos mediante trocar y se permiten alcanzar 100-200 mm3 antes de iniciar el tratamiento mediante una inyección intraperitoneal diaria durante 5 días. La mayoría de los análogos de poliamina pueden estar dados en un rango entre 10 y 200 mg/kg. Los análogos de poliamina pueden evaluarse en tres dosis de tratamiento, con 10 a 15 animales por grupo (puede usarse un mínimo de tres para cada estudio farmacodinámico, descrito abajo) . Los ratones pueden monitorearse y pesarse dos veces por semana para determinar el tamaño del tumor y su toxicidad. El tamaño del tumor se determina mediante la medición multi-direccional a partir de la cual el volumen se calcula en mm3. Los tumores pueden seguirse hasta que el volumen de tumor medio alcance los 1500 mm3 (es decir., 20% en peso corporal), tiempo en cual los animales puedan sacrificarse- A pesar de que los estudios anti-tumor iniciales se enfocan a un programa diario durante 5 días, la infusión constante puede desarrollarse vía el suministro de la bomba Alzet durante 5 días puesto que este programa mejora dramáticamente la actividad anti-tumor de BE-333 contra el carcinoma continuo de células grandes de humano A549. Sharma et al. (1997) Clin. Cáncer Res. 3:1239-1244. Además de valorar la actividad anti-tumor, los niveles análogos de poliamina libre en el tumor y los tejidos normales pueden determinarse en animales probados.

Métodos de administración de los análogos de poliamina. Los análogos de poliamina de la presente invención pueden administrarse a un mamífero, preferiblemente un sujeto humano, vía cualquier ruta conocida en la técnica, que incluye, pero no se limita a aquellos descritos aquí. Los métodos de administración incluyen pero no se limitan a, intravenosa, oral, intra arterial, intratumoral , intramuscular, tópica, inhalación, subcutánea, intraperitoneal , gastrointestinal y directamente a un órgano afectado o específico. Los análogos de poliamina descritos aquí, se administran en forma de tabletas, pildoras, mezclas de polvos, cápsulas, gránulos, inyectables, cremas, soluciones, supositorios, emulsiones, dispersiones, premezclas alimenticias y otras formas adecuadas . Los compuestos pueden administrarse también en formulaciones de liposomas . Los compuestos pueden administrarse también como profármacos, cuando el profármaco experimenta una transformación en el sujeto tratado en una forma en la cual es terapéuticamente efectiva. Se conocen métodos adicionales de administración en la técnica. La forma de dosificación farmacéutica que contiene los compuestos descritos aquí, se mezclan convenientemente con un portador orgánico farmacéutico no tóxico o un portador inorgánico farmacéutico no tóxico. Los portadores farmacéutic mente aceptables típicos incluyen por ejemplo, manitol, urea, dextranos, lactosa, papa, y almidón de maíz, estearato de magnesio, talco, aceites vegetales, glicoles de polialquileno, celulosa de etilo, poli (vinilpirrolidona) , carbonato de calcio, oleato de etilo, miristato de isopropilo, benzoato de bencilo, carbonato de sodio, gelatina, carbonato de potasio, ácido silícico y otros portadores aceptables empleados convencionalmente . La forma de dosificación farmacéutica puede contener también, sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes emulsificantes , conservadores o humectantes, y similares. Un portador adecuado es aquel que no provoca un efecto secundario intolerable, pero que permite a los nuevos análogos de poliamina, retener su actividad farmacológica en el cuerpo. Las formulaciones para el suministro de fármacos no parenterales y parenterales se conocen en la técnica y se establecen en Re ington 's Phar aceutical Science, 18a. Edición, Mack Publishing (1990) . Las formas sólidas tales como, tabletas, cápsulas y polvos, pueden fabricarse usando mecanismos para rellenar las cápsulas y revestir las tabletas convencionales, que se conocen bien en la técnica. Las formas de dosificación sólida, que incluyen tabletas y cápsulas para la administración oral en formas de presentación de dosis unitaria, pueden contener cualquier número de ingredientes no activos adicionales conocidos en la técnica, que incluyen tales aditivos convencionales como excipientes, desecantes, colorantes; agentes de ligamiento, por ejemplo, jarabes, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinilpirrolidona; rellenos, por ejemplo, lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina, lubricantes para tabletas, por ejemplo, estearato de magnesio, talco, polietilen glicol o sílice; desintegrantes, por ejemplo, almidón de papa; o agentes humectantes aceptables tales como sulfato de lauril de sodio. Las tabletas pueden estar revestidas de acuerdo a los métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica estándar. Las formas líquidas para la ingestión pueden formularse usando portadores líquidos conocidos, que incluyen portadores acuosos y no acuosos, suspensiones, emulsiones aceite en agua y/o agua en aceite, y similares. Las formulaciones líquidas pueden contener también cualquier número de ingredientes no activos adicionales, que incluyen colorantes, fragancias, saborizantes , modificadores de la viscosidad, conservadores, estabilizadores y similares. Para la administración parenteral, los análogos de poliamina pueden administrarse como dosificaciones inyectables de una solución o suspensión del compuesto, en un diluyente fisiológicamente aceptable o portador líquido estéril tal como agua o aceite, con o sin tensoactivos o auxiliares adicionales. Una lista ilustrativa de aceites portadores incluyen aceites vegetales y animales (por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de fríjol de soya) , aceites derivados del petróleo (por ejemplo, aceite mineral) y aceites sintéticos. En general, para dosis unitarias inyectables se prefieren portadores líquidos, agua, solución salina, dextrosa acuosa y soluciones de azúcar relacionadas, y soluciones de glicol y etanol tales como propilen glicol o polietilen glicol. La dosis unitaria farmacéutica seleccionada se fabrica y administra preferiblemente para proporcionar una concentración final de fármacos en el punto de contacto con las células de cáncer desde 1 µ? hasta 10 mM.

Se prefiere más, una concentración de 1 hasta 100 µ?. La concentración efectiva óptima de análogos de poliamina puede determinarse empíricamente y dependerá del tipo y severidad del padecimiento, vía de administración, avance del padecimiento, salud, masa o área corporal del paciente. Tales determinaciones se encuentran dentro de ¦ la habilidad de alguien en la técnica. Los análogos de poliamina pueden administrarse como el ingrediente activo solo, o puede administrarse en combinación con otro ingrediente activo, que incluye, pero no se limita a, agentes citotóxicos, antibióticos, antimetabolitos, nitrosourea, alcaloides vinca, polipéptidos, anticuerpos, citocinas, etc.

EJEMPLOS Se proporcionan los siguientes ejemplos para ilustrar los métodos de la invención, que no se construyen como limitantes de la invención en cualquier forma. La síntesis de SL-11093, un análogo de XN, 14W- (bisetil) homospermina en donde la restricción conformacional se debe a un anillo trans-ciclopropilo, se describe en el Ejemplo 1. La condensación de sulfuro de dimetilo y bromoacetato de etilo dieron el bromuro 1. En el medio alcalino se formó el iluro 2. La condensación de 2 con el acrilato de etilo dio solamente un diéster 3 de trans-ciclopropano. La saponificación de 3 dio el diácido 4 que se transformó en el dicloruro 5. La condensación de con la amida 6 dio la tetramida 7. La reducción de los enlaces de péptido con diborano, seguido por la desprotección de los residuos de nitrógeno dieron 8, el tetraclorhidrato SL-11093. Se obtuvo hexaclorhidrato SL-11231 (síntesis descrita en el Ejemplo 2) mediante la condensación de 11 y 13 para dar la hexamida 20. La desprotección del último dio 21, es decir, el hexacloruro SL-11231. La síntesis de SL-11242 y el ter-ciclopropiloligoamina SL-11232 se describió en el Ejemplo 3. Iniciando con el trans-1, 2-dibromometil-ciclopropano 9 y mediante la condensación con diamina 10 fue posible obtener 11. La reacción del derivado 11 de bromometilo con dimesitilenoputrescina 13 dieron la tetramida 14. Colocados uno tras otro mediante condensación de 9 con amida de mesitileno fue posible obtener 12. La dialquilación de 12 con 1, 4-dibromobutano dio 15. La condensación de 15 con 14 dio la decamida 16. La desprotección de los grupos sulfonamida con bromuro de hidrógeno dieron la decamina 17 (SL-11232) , asilada como su decahidrocloruro . La desprotección de la tetramida 14 dio 18, tetraclorhidrato SL-11242 (Esquema 3) . La síntesis de la decamina de ciclopropilo SL-11241 se logró mediante la condensación del diéster 22 con la pentamida 23 (ver el ejemplo 4) . La decamida 24 obtenida así, se desprotegió para dar 25, es decir, decaclorhidrato SL-11241. La síntesis de SL-11247 y SL-11245 se describió en el Ejemplo 5. La Bis-jV,W-tert-butil tetramina SL-11247 se preparó iniciando con la t-butilmesitilenamida 26 que se alquiló con 4-bromobutironitrilo para dar 27. La última se redujo a 28 y el residuo de amino libre se desprotegió para dar 29. La condensación con 22 dio la tetramida 30. la escisión de los grupos protectores en 30 en un medio alcalino dio 32 (SL-11247) mientras que la escisión en ácido dio 31, tetraclorhidrato SL-11245. El tetraclorhidrato SL-11215 se obtuvo como se describió en el Ejemplo 6. Iniciando con el derivado 33 trans-ciclopropilo conocido, se redujo con borohidruro de litio para el alcohol y el último se esterificó para dar 34. la alquilación del mesitilenamida de etilo con 34 dio , que se redujo al derivado de aminometilo y se desprotegió para dar 36. La alquilación de 36 con 22 dio la tetramida 37, que se desprotegió a 38; es decir, el tetraclorhidrato de SL-11215. Mediante la reacción de 36 con el diéster 39, se obtuvo la tetramida 40. Cuando se desprotegió, ésta dio 41, tetraclorhidrato SL-11218.

Ejemplo 1 Síntesis de SL-11093 Bromuro de (Etoxicarhonilmetil) dimetilsulfonio 1. Una solución agitada de bromoacetato de etilo (98%, 287 g, 1.68 mol) y sulfuro de metilo (99%, 156 mL, 1.25 eg.) en acetona (500 mL) se mantuvo a 15 °C. Un precipitado blanco comenzó a aparecer inmediatamente y se volvió espeso durante la agitación. Después se agitó durante 18 h a 22 °C, el sólido se filtró, se lavó con acetona (3 X 100 mL) , y se secó bajo vacío para proporcionar 1 (477 g, 83.4%) como cristales blancos. ¾ RMN (250 MHz, CDC13) d 5.20 (s, 2H) ; 4.29 (q, J = 7.2, 2H) ; 3.46 (S, 6H) ; 1.32 (t, J = 7.2, 3H) . 13C RMN (62.5 MHz, CDC13) d 164.36; 63.38; 44.38; 25.22; 13.92.

(Etoxicarbonilmetil) dimetilsulfonio ilid 2. Una mezcla de 50% de NaOH acuoso (183 g) y K2C03 saturado (1970 g) se agregó a una solución agitada de 1 (476 g, 2.08 mol) en CHC13 sobre un periodo de 15 min. a 10 °C. Después se agitó durante 1 h adicional, la capa orgánica superior se decantó, se secó sobre K2C03 durante 30 min., se filtró, y se concentró para dar 2 (282 g, 91.7%) como un aceite amarillo pálido. ¾ RMN (250 MHz, CDC13) d 4.04 (q, J = 7.1, 2H) ; 2.90 (S, 1H) ; 2.76 (S, 6H) ; 1.24 (t, J = 7.1, 3H) . 13C RMN (62.5 MHz, CDC13) d 170.25; 77.20; 57.83; 31.58; 30.62; 14.89.

Trans-1, 2-dietoxicarbonil-ciclopropano 3. Se agregó acrilato etílico (99%, 270 g, 1.4 eq.) a una solución de 2 (282 g, 1.91 mol) en CHC13 (1500 mL) a 5°C. El enfriamiento se removió y la reacción se agitó a 22 °C durante 12h. La evaporación del solvente y el -exceso de acrilato dejó un aceite naranja, el cual se destiló al vacío (p.e. 70-75°C/1 mm) para producir 3 (286 g, 80.6%) como un aceite espeso claro. 4í RMN (250 MHz, CDC13) d 4.15 (q, J = 7.1, 4H) ; 2.16 (dd, J = 7.5, 5.7, 2H) ; 1.41 (dd, J = 7.5, 5.7, 2H) ; 0.88 (t, J = 7.1, 6H) . 13C RMN (62.5 MHz , CDCl3) d 171.69; 60.96; 22.26; 15.18; 14.08. Ácido trans-1, 2-Ciclopropandicarboxílico 4. Se disolvió Dietil carboxilato 3 (16.9 g, 19.3 mmol) en 170 mi de NaOH 2N y se calentó bajo reflujo durante lh. La solución se agitó durante 18h adicionales a 22 °C. La solución se congeló, se ajustó hasta un pH 3 con HC1 2N, saturado con NaCl , y se extrajo finalmente con acetato de etilo (2 x 100 mi) . Los extractos agrupados se secaron (Na2S04) , se evaporaron hasta secarse, y los residuos blancos se usaron para la siguiente etapa sin purificación adicional (8.5 g, 79%); pf 175-176°C. ^"H-RM (D20) : d 1.42 (m, 2H) , 2.18 (m, 4H) . trans-1, 2-Diclorocarbonilciclopropano 5. Se disolvió ácido dicarboxilico 4 (3.4 g, 26.12 mmol) en 10 mi de cloruro de tionilo bajo nitrógeno y la solución se agitó y se calentó a 60°C durante 4h. Los excesos de cloruro de tionilo se destilaron completamente bajo presión reducida, y el residuo se destiló (40°C/0.1 mm) para dar 2.9 g (71 %) de dicloruro; """H-RMN (CDC13) : d 1.90 (m, 2H) , 2.91 (m, 2H) .

?,?' -Bis- (4-N- (mesitilen)N-etilbutila ina) -trans-1, 2-ciclopropanodiamida 7. Se preparó la amida 6 (6.3 g, 21 mmol; como se describe en Reddy et al (2001) J. Med. Chem. 44, 404-417) se disolvió en THF (100 mi) , 3 mi de trietilamina se agregó, la mezcla se enfrió a 5°C, y se agregó lentamente dicloruro 5 (1.77 g, 11 mmol) disuelto en 50 mi de THF seco. La mezcla se agitó durante 30 min, se agregó 3 mi de trietilamina, y se agitó continuamente durante 18h a 22°C. Se agregó luego acetato de etilo (100 mi) , la solución se lavó con 10% de HCl (3 x 50 mi) , luego con salmuera (50 mi) , la capa orgánica se separó, se secó (MgS0 ) , se evaporó hasta secarse y el residuo se cristalizó de hexano/acetato de etilo (1/1); 4.0 g de 7 se obtuvieron (73%); pf 135-136°C. 1H-RMN (CDC13) d 1.01 (t, J -7.15 Hz, 6H) , 1.29 (m, 2H) , 1.50 (m, 8H) , 1.88 (m, 2H) , 2.30 (s, 6H) , 2.58 (s, 12H) , 3.20 (m, 12H) , 6.08 (br, 2H) , 6.94 (s, 4H) ; 13C-RMN (CDC13) d 12.72, 12.90, 20.92, 22.75, 23.43, 24.99, 26.82, 39.20, 40.13, 44.76, 131.92, 140.10, 143.00, 171.80; EM-ESI (m/z) : 691.4 (M++l) .

SL-11093 tetrahidrocloruro 8. Se disolvió la Diamida 7 (2.0 g, 2.9 mmol) en THF seco y 70 mi de 1 diborano en THF se agregó, el matraz fue herméticamente tapado, y la solución se agitó durante 24h a 22 °C. Luego se agregó bromuro de hidrógeno (30%) en ácido acético glacial (10 mi) , y la mezcla se agitó a 22°C durante 18h. El THF luego se removió in vacuo, y 15 mi de cloruro de metileno se agregaron a la solución residual, seguido por .6.4 g de fenol y 40 mi de bromuro de hidrógeno en ácido acético glacial. La mezcla se agitó durante 18h a 22°C, se agregó agua (40 mi) para disolver las partículas suspendidas, y la solución se lavó con CH2C12 (4 x 50 mi) . La capa acuosa se evaporó hasta secarse in vacuo, el residuo se disolvió primero en 5 mi de NaOH, luego se agregaron 6 mi de NaOH 19N (base aceitosa separada) , y la mezcla se extrajo repetitivamente con CHC13 (6 x 30 mi) . Los extractos se agruparon, se secaron (MgS04) , se evaporaron hasta secarse, el residuo se disolvió en 15 mi de metanol seco y 10 ml.de éter seco, la solución se enfrió a 5°C y clorohidrato de SL-11093 se precipitó al burbujear cloruro de hidrógeno; 0.7 g (80% rendimiento) ; idéntico por """H-RMN; 13C-RMN; y E a una muestra de referencia preparada como se describe en Valasinas et al. (2001) J. Med. Chem. 44, 390-403.

Ejemplo 2 Síntesis de SL-11231 Trans-1, 2-Bis (bromómeti1) ciclopropano 9. Trans-1, 2-Bis (hidroximetil) ciclopropano 19 (2.6 g, 25 mmol, se preparó como se describe en Reddy et al (1998) J. Med. Chem. 41, 4723), se disolvió en 60 mi de CH2C12 seco bajo argón, se agregó P(Ph)3 (13 g, 50 mmol) , y la solución se enfrió hasta 5°C. Se agregó N-bromosuccinimida (9 g, 50 mmol) lentamente con agitación, y la mezcla se mantuvo a 22°C durante 18h, cuando, la solución se evaporó hasta secarse. El residuo- se extrajo con éter de petróleo (p.e. 35-60°C) (4 x 25 mi), los extractos agrupados se enfriaron a 5°C, y el precipitado de óxido de trifenilfosfina se filtró completamente. La solución se evaporó hasta secarse y el residuo 9 (4.7 g) se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional; ^-RM (CDC13) d : 0.85 (t, J = 6.76 Hz, 2H) , 1.33 (t, J = 6.30 Hz, 2H) , 3.35 (m, 4H) ; 13C-RMN (CDCl3) d : 17.27, 24.41, 36.75.

Bis (mesitilensulfonil) -12-bromo-10, 11- [ (E) -1,2-ciclopropil] -3, 8-diazadodecano 11. La Amida 10 (8.5 g, 18 mmol; que se preparó como se describe en Valasinas et al (2001) J. Med. Chem. 44, 390) se disolvió en DMF seco (150 mi) y se agregó NaH (60% en aceite, 0.85 g) . La mezcla se agitó durante 30 min. a 22°C, cuando 9 (4.0 g, 18 mmol) se disolvió en 40 mi, se agregó DMF seco y la mezcla se agitó durante 18h adicionales. Se agregó agua (10 mi) , la solución se evaporó hasta secarse in vacuo, el residuo se dividió entre CHC13 y una solución de NH4C1 saturado, la capa orgánica se separó, se evaporó hasta secarse y el aceite resultante se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice usando hexano/acetato de etilo (l/l) como eluyente; 2.7 g (26% rendimiento) de 11 se recuperaron; ^-RMN (CDC13) d : 0.55 (ra, 2H) , 0.92 (m, 2H) , 1.00 (t, J = 7.05 Hz, 3H) , 1.40 (m, 4H) , 2.30 (s, 6H) , 2.58 (s, 12H) , 2.90-3.20 (m, 10H) , 6.94 (s, 4H) ; 13C-RMN (CDCl3) d : 12.75, 13.74, 19.77, 20.92, 21.07, 22.75, 24.74, 24.80, 37.59, 40.09, 44.62, 45.27, 48.61, 131.91, 140.13, 142.21, 142.43. 3, 8, 13, 18 , 23 , 28-Hexaquis (mesitilensulfonil) -10, 11- [ (E) -1,2-ciclopropil] -20,21- [ (E) -1 , 2-ciclopropil] -3 , 8 ,13 ,18 ,23 ,28-hexaazatriacontano 20. Se disolvió la Amida 13 (0.85 g, 1.8 mmol) en 50 nú. de DMF seco, se agregó NaH (60% en aceite, 0. 15 g) , la mezcla se agitó durante 30 min. a 22°C, y el derivado de bromometilo 11 (2.3 g, 3.7 mmol) que se disolvió en 25 mi de DMF seco se agregó. La mezcla se agitó durante 18h a 22°C, y se siguió la preparación que se describe para 11. En la cromatografía de columna se usó cloroformo/acetato de etilo (9/1) como eluyente da 2.0 g (34% rendimiento) de 20; """H-RMN (CDC13) d: 0.31 (m, 4H) , 0.72 (m, 4H) , 0.97 (t, J = 7.12 Hz, 6H) , 1.26 (m, 12H) , 2.29 (s, 18H) , 2.54-2.55 (s, 36H) , 2.80 (m, 4H) , 3.15 (m, 20H) , 6.92 (s, 12H) ; MS-MALDI (m/z) ; 1567.39 (?G+ Na) .

SL-11231 hexahidrocloru.ro 21. La Hexamida 20 (2.0 g) se desprotegió con bromuro de hidrógeno en ácido acético glacial siguiendo el procedimiento descrito para las pentamidas (Reddy et al, (2001), loe. ext.)- El SL-11231 hexacloruro se cristalizó de etanol acuoso; 0.5 g (60% rendimiento) se obtuvo; ^-RM (D20) d .· 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 4H) , 1.23 (m, 4H) , 1.29 (t, J = 7.3 Hz, 6H) , 1.78 (m, 12H) , 2.89 (m, 4H) , 3.15 (m, 20H) ; 13C-RM (D20) d : 12.48, 12.95, 16.14, 25.28, 45.36, -48.71, 49.05, 49.35, 53.12 ; EM-ESI (m/z) : 453.6 (M++l) .

Ejemplo 3 Síntesis de SL-11232 y SL-11242 1. HBr/AcOH 2. HQ 17. R.-H.HC1 S 11232 3, 8 , 13 , 18-Tetraquís ( esitilensulfonil) -10, 11- [ (?) -ciclopropil] -3 , 8, 13 ,18-tetraazaoctadecano 14. La 1 , 4-Bis (mesitilensulfonil) utrescina 13 (5.6 g, 12.4 mmol) y el derivado bromometilo 11 del ejemplo 2 (3.9 g, 6.2 mmol) se disolvió en 150 mi de DMF seco, y se agregó NaH (60%, 0.92 g) en una porción. La mezcla se agitó durante 18H a 22°C, esto luego se apagó con 10 mi de ácido clorhídrico al 10%, la solución se evaporó hasta secarse, el residuo se disolvió en CHC13 (100 ML) , esta última se lavó primero con agua (2 x 50 mi) , luego con salmuera (50 mi) ; el solvente orgánico se evaporó hasta secarse y el residuo se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice usando CHCl3/Acetato de etilo (9/1) como eluyente; 2.3 g (37 % rendimiento) de 14 se recuperaron; pf 63 °C; 1H-RM (CDC13) d : 0.35 (m, 2H) , 0.80 (m, 2H) , 0.95 (t, J = 5.8 Hz, 3H) , 1.30-1.49 (m, 8H) , 2.30 (s, 12H) , 2.56 (s, 18H) , 2.59 (s, 6H) , 2.70-3.30 (m, 14H) , 4.66 (t, J = 6.4 Hz, 1H) , 6.93 (s, 8H) ; EM-MALDI (m/z) ; 1021 ( ++Na) . , 10-Bis (mesitilensulfonil) -1, 14-dibromo-7, 8- [(E) -1,2-ciclopropil] -5, 10-diazatetradecano 15. Bis (mesitilensulfonil) trans-l,2-diaminometil-ciclopropano 12 (1.4 g, 5.2 mmol (obtenido de trans-1,2-diaminometil ciclopropano siguiendo un procedimiento de mesitilación descrito previamente, ver Reddy et al (1998) J.

Med. C em. 41, 4723)) se disolvió en DMF seco (50 mi) bajo nitrógeno, y se agregó NaH (60%, 0.4 g) a la solución. La agitación comenzó y después de 10 min. a 22°C, se disolvió 1 , 4-dibromobutano (6.7 g, 31 mmol) en 25 mi de DMF seco y se agregó en una porción. Después se agitó la solución durante 18 horas adicionales, se agregó agua (5 mi) , y la mezcla de reacción se evaporó hasta secarse. El residuo se purificó por cromatografía de columna en sílice usando hexano/acetato de etilo (4/1) como eluyente; 1.5 g (68 % rendimiento) de 15 se obtuvieron; XH- M (CDC13) d : 0.41 (t, J = 6.9 Hz, 2H) , 0.82 (t, J = 6.0 Hz, 2H) , 1.66 (m, 8H) , 2.29 (s, 6H) , 2.58 (s, 12H) , 2.94 (m, 2H) , 3.21 (m, 10H) , 6.94 (s, 4H) ; 13C-R (CDC13) d : 11.04, 16.14, 20.93, 22,74, 25.70, 29.65, 32.88, 44.74, 48.88, 131.97, 160.12, 142.48; EM-MALDI (m/z) : 757.09 (M++Na) . 3, 8, 13,18,23,28,33, 38,43, 48-decakis (mesitilensulfonil) -10, 11-25, 26-40, 41-ter[ (B) -1, 2-ciclopropil] -3, 8, 13,23,28, 33, 38, 43, 48-decaazapentacontano 16. Se disolvió la tetramida 14 (1.4 g, 1.4 mmol) en 50 mi de DMF seco y mientras se mantuvo bajo argón, se agregó NaH (60%, 75 mg) y la mezcla se agitó durante 10 min. a 22°C. Una solución del derivado de dibromo 15 (0.5 g, 0.7 mmol) en 25 mi de DMF seco luego se agregó, y la mezcla se agitó durante 18 h a 22°C. Se agregó luego agua (5 mi) , la solución se ajustó a un H 7 con HC1 diluido, se evaporó hasta secarse in vacuo, y el residuo se purificó por cromatografía de columna en gel sílice usando cloroformo/acetato de etilo (9: 1) como eluyente; 1.0 g (28%) de 16 se obtuvieron; ^?-??? (CDC13) d : 0.29 (m, 6H) , 0.70 (m, 6H) , 0.96 (t, J = 6.98 Hz, 6H) , 1.26 (m, 2 H) , 2.28 (s, 30H) , 2.53, 2.54, 2.55 (s, s, s, 60H-) , 2.72 (m, 6H) , 3.09 (m, 34H) , 6.91 (s, 20H) ; 13C-RMN (CDC13) d : 11.03, 12.73, 15.88, 20.93, 22.72, 24.39, 40.07, 44.61, 44.89, 48.89, 48.72, 131.95, 133.27, 140.04, 142.34; EM-MALDI (m/z) 2594.1 ( ++Na) .

SL-11232 decahidrocloru.ro 17 10, 11-25,26-40, 41-ter[(E) -1, 2-ciclopropil] -3, 8, 13, 23 , 28, 33, 38, 43, 48-decaazapentacontano decahidrocloruro 17. La decamida 16 (1.0 g) se desprotegió con bromuro de hidrógeno (33%) en ácido acético glacial en la presencia de fenol siguiendo los procedimientos publicados ( eddy et al (1998) J. Med. Chem. 41, 4723) . Después del tratamiento con HC1, decahidrocloruro 17 se obtuvo en 80% rendimiento (0.3 g) ; ^-RM (D20) d : 0.85 (t, 6.9 Hz, 6H) , 1.23 (t, J = 6.9 Hz, 6H) , 1.28 (t, J = 7.22 Hz, 6H) , 1.78 (m, 24H) , 2.89 (m, 6H) , 3.10 (m, 34H) ; "C-RMN (D20) d : 12.65, 13.10, 16.28, 25.43, 45.51, 48.86, 49.21, 49.53, 53.28; EM-ESI (m/z) 750 (M++l) . 1. HBr / AcOH PhOH, CH,C1, 2. HCI -11242 tetrahidrocloruro La tetramida 14 (1 g) se disolvió en 10 mi de CH2C12 seco, y fenol (2.4 g) se agregó seguido por 13 mi de ácido bromhídrico (33%) en ácido acético glacial. La preparación sigue los procedimientos establecidos (Reddy et al., loe. cit) ; 230 mg (85%) de 18 se obtuvieron; ^-R (D20) d : 0.85 (m, 2H) , 1.24 (m, 5H) , 1.77 (m, 8H) , 2.91 (m, 2H) , 3.10 (m, 14H) ; EM-ESI (m/z) : 271.2 (M++l) .

Ejemplo 4 Síntesis de SL-11241 HBr/AcOH PhOH. CHjCt ; R- H.HCI SL-11241 3, 8, 13, 18, 23 ,28, 33, 38, 43 ,48 -decaquis ( esitilensulfonil) -25, 26 [(E) -1,2-ciclopropil] -3, 8, 13,23,28,33,38, 43, 48-decaazapentacontano 24. La pentamida 23 (6.5 g, 5.25 mmol; se preparó como se describe en la Solicitud de Patente Internacional O 00/66587, "Conformationally restricted polyamine analogs as disease therapies") se disolvió en 75 mi de DMF seco, y se agregó NaH (60%, 0.32 g) en varias porciones con agitación constante a 22 °C. Después de 10 min. , diéster 22 (1.2 g, 2.6 mmol; se preparó como se describe en Reddy et al (1998) loe. cit) se disolvió en 45 mi de DMF seco, se agregó lentamente a la solución de agitación y el último se mantuvo durante 18h a 22 °C. Se agregó agua (5 mi) , la solución se ajustó a un pH 7 con dil. HC1, se evaporó hasta secarse, el residuo se dividió entre CHC13 (200 mi) y agua (100 mi) , la capa orgánica se separó, se lavó con agua (2 x.100 mi) , y se evaporó hasta secarse. La decamida 24 se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice usando hexano/acetato de etilo (7/3) como eluyente; 3.0 g (23 %) ; 1H-RMN (CDC13) d: 0.30 (t, 2H) , 0.70 (t, 2H) , 0.98 (t, J = 7.0 Hz, 6H) , 1.27 (m, 32H) , 2.30 (s, 30H), 2.55 (s, 60H) , 3.0 (m, 40H) , 6.93 (s, 20H) ; 13C-RM (CDC13) d : 11.04, 12.25, 15.94, 20.93, 22.73, 24.39, 24.78, 40.08, 44.63, 45.19, 48.74, 131.94, 133.26, 140.07, 142.32; EM-MALDI (m/z) : 2567 (M++Na) .

SL-11241 decahidrocloru.ro 25. La decamida 24 (1 g) se desprotegió usando bromuro de hidrógeno (33%) en ácido acético glacial en la presencia de fenol como se describe en otra parte (Reddy et al (1998) loe cit) . El tratamiento con HCl da decahidrocloruro 25 en 85 % de rendimiento. 1H-R N (D20) d : 0.88 (t, J = 7.10 Hz, 2H) , 1.20 (t, J = 7.10 Hz, 2H) , 1.28 (t, J = 7.13 Hz, 6H) , 1.78 (m, 32H) , 3.10 (m, 40H) ; EM (m/z) : 725.8 (M++l) .

Ejemplo 5 Síntesis de SL-11245 y SL-11247 Tert-butil (mesitilen sulfonil) amida 26. La t-Butilamina (4.3 mi, 41 mmol) se disolvió en 50 mi de cloruro de metileno y 75 mi de 4% hidróxido de sodio. La solución se enfrió hasta 5°C, y cloruro de mesitilensulfonilo (11.7 g, 53.3 mmol) disuelto en 75 mi de cloruro de metileno, se agregó lentamente durante 1 h. La mezcla se agitó a 5°C durante 3h y luego a 22 °C durante 18 horas. La capa orgánica se separó luego, la capa acuosa se extrajo con 30 mi de cloruro de metileno, las capas orgánicas se combinaron, se secaron (MgS04) , se evaporaron hasta secarse y el residuo se recristalizó de hexano/acetato de etilo; 6.0 g (57 %) de 26 se obtuvieron; pf 149-150°C; XH-RMN (CDC13> d : 1.21 (s, 9H) , 2.29 (s, 3H) , 2.66 (s, 6H) , 4.68 (br, 1H) , 6.94 (s, 2H) ; 13C-RMN (CDC13) d : 20.83, 22.84, 29.99, 54.47, 131.95, 138.26, 141.53.

N, N-t-butil (mesitilensulfonil) -4-aminobutironitrilo 27. La amida 26 (2.55 g, 10 mmol) se disolvió en DMF seco (30 mi) bajo una atmósfera de argón y se agregó NaH (60%, 0.5 g) a 22°C. La mezcla se agitó durante 30 min. , y se agregó luego 4-bromobutironitrilo (1.6 g, 11 mmol) que se disolvió en 10 mi de DMF seco. La mezcla se mantuvo a 22°C durante 18 h, el DMF se evaporó in vacuo, y el residuo se dividió entre acetato de etilo (30 mi) y agua (30 mi) . La capa orgánica se separó, se evaporó hasta secarse y el residuo aceitoso se purificó por cromatografía en gel de sílice usando hexano/acetato de etilo (7/3) como eluyente; 1.7 g (52%) de el nitrilo 27 se recuperaron; pf 82°C; 1H-RMN (CDC13) d : 1.32 (s, 9H) ; 2.02 (m, 2H) , 2.29 (s, 3H) , 2.36 (t, J = 7.17 Hz, 2H) , 2.60 (s, 6?) , 3.48 (dd, J = 7.68, 7.86 Hz, 2H) , 6.93 (s, 2H) ; 13C-RMN (CDC13) d : 15.01, 20.81, 22.85, 27.27, 29.70, 45.12, 59.45, 118.97, 132.19, 138, 142.04.

N,4N- (bis-mesitilensulfonil) -N-t-butil-l, 4-diaminobutano 29. El nitrilo 27 (1.6 g, 5 mmol) que se disolvió en 15 mi de metanol y 15 mi de cloroformo se redujo con hidrógeno a 50 psi (3.5 kg/cm2) sobre óxido de platino (0.18 g) durante 18 horas. El catalizador se separó, el solvente se evaporó hasta secarse y el residuo (1.7 g de 28) se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Esto se disolvió en una mezcla de 20 mi de cloruro de metileno y 10 mi de hidróxido de sodio al 8%, y cloruro de mesitilensulfonilo (1.4 g, 6 mmol) disuelto en 20 mi de cloruro de metileno se agregó lentamente. La mezcla se agitó durante 18h a 22 °C, la capa orgánica se separó, la capa acuosa se lavó con 20 mi de cloruro de metileno, las capas orgánicas combinadas se evaporaron hasta secarse y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice usando hexano/acetato de etilo (7/3) como eluyente; 1.4 g (50%) de 29 se obtuvieron; pf 157°C; 1H-RMN (CDCI3) d : 1.28 (s, 9H) , 1.38 (m, 2H) , 1.57 (m, 2H) , 2.28 (s, 3H) , 2.30 (s, 3H) , 2.57 (s, 6H) , 2.63 (s, 6H) , 2.83 (q, J = 6.61 Hz, 2H) , 3.25 (dd, J = 7.60, 8.08 Hz, 2H) , 4.58 (t, 1H) , 6.90 (s, 2H) , 6.96 (s, 2H) / 13C-RMN (CDC13) 5 : 20.83, 22.88, 27.19, 28.70, 29.83, 42.03, 45.76, 59.19, 131.97, 132.06, 138.92, 141.0. 1, 13- (bis (t-butil)mesitilensulfonilamida) - [ (E) -7, 8-ciclopropil] -5, 10-bis (mesi tilensulfonil) -5, 10-diazatridecano 30. La diamida 29 (1.35 g, 2.7 mmol) y diéster 22 (0.6 g, 1.3 mmol , se prepararon como se describe en Reddy et al (1998) loe. cit . ) se disolvió en D F seco (20 mi) bajo argón, y se agregó NaH (60%, 0.14 g) . La mezcla se agitó durante 18h a 22°C, el solvente se destiló completamente in vacuo, el residuo se dividió entre 30 mi de acetato de etilo y 20 mi de agua, la capa orgánica se separó, se evaporó hasta secarse y el residuo se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice usando hexano/acetato de etilo (7/3) como eluyente; 0.8 g (54%) de 30 se obtuvieron; 1H-RMN (CDC13) d : 0.39 (t, 2H) , 0.78 (t, 2H) , 1.26 (s, 18H) , 1.36 (ra, 8H) , 2.28 (s, 6H) , 2.30 (s, 6H) , 2.57 (s, 24H) , 2.89 (m, 2H) , 3.19 (m, 10H) , 6.89 (s, 4H) , 6.94 (s, 4H) ; 13C-RMN (CDCl3) d : 16.02, 20.85, 22.89; 24.92, 28.88, 29.84, 45.33, 45.97, 48.76, 59.17, 131.99, 138.93, 140.11, 141.68, 142.37; EM-MALDI (m/z) 1105.57 (M++ Na) .

SL-11245 tetrahidrocloruro 31. La tetramina 31 se obtiene por desprotección 30 siguiendo el procedimiento descrito en eddy et al (1998) J. Med. Chem. 41, 4723. Rendimiento de 31 fue 63%; 1H-RM (D20) d: 0.85 (t, J = 6.77 Hz, 2H) , 1.34 (t, J = 6.99 Hz, 2H) , 2.03 (m, 8H) , 3.31 (m, 4H) , 3.44 (m, 8H) ; 13C-RMN (D20) d : 17.23, 24.38, 30.91, 32.42, 36.75; EM-ESI (m/z) 243.2 (M++l) .

SL-11247 tetrahidrocloruro 32. El tetrahidrocloruro 32 se obtiene de tetramida 30 por desprotección en un medio alcalino usando sodio en amoniaco líquido, siguiendo el procedimiento descrito por Bergeron et al. (1994) J. Med. Chem. 37, 3464; el rendimiento fue de 10%; aH-RMN (CDC13) d : 0.86 (m, 2H) , 1.23 (m, 2H) , 1.37 (s, 18H) , 1.77 (m, 8H) , 2.88 (m, 2H) , 3.10 (m, 10H) .

Ejemplo 6 Síntesis de SL-11215 y SL-11218 2) MtsCI, P l)HBr/AcOH, PhOH 2)NaOH 3)HCI Trans-l-ciano-2 (mesitilensulfoniloximetil) -ciclopropano 34. Una solución de etil (E) -2-cianociclopropanocarboxilato 33 (Ashton et al . , J. Med. Chem. 1988, 31, 2304) (8 g, 57.5 mmol) en alcohol isopropílico (8 mL) se agregó durante 5 min. dentro de una solución barrida con M2 enfriada con hielo de LiBH4 (1.254 g, 57.5 mmol) en alcohol isopropílico (40 mL) . La mezcla de reacción se agitó durante 0.5 h en un baño de hielo, el baño se removió y la reacción se continuó a temperatura ambiente durante otras 3h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se evaporó 3 veces del tolueno. Se agregaron Et20 (130 mL) y ¾0 (2.5 mL) y la mezcla de reacción se agitó durante 10 h a temperatura ambiente. Esto se secó con Na2S0 , se filtró y se concentró en un evaporador rotatorio. El residuo, el 2-ciano-l-hidroximetilciclopropano crudo, se disolvió en piridina (50 mL) , se enfrió hasta 0°C y cloruro de mesitilensulfonilo (18.88 g, 86.34 mmol) en piridina (60 mL) se agregó lentamente dentro de la mezcla de reacción. Después de 3h de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vació en hielo (500 g) , se acidificó con HCl al 10%, y el producto 34 se extrajo con acetato de etilo. Esto se purificó por lavado con soluciones de HCl al 3%, NaHC03, y salmuera, seguido por cromatografía de columna (gel de sílice, hexano/acetato de etilo, 4:1). Rendimiento 5.25 g (33%); aH-RMN (CDC13) d 0.8-1.1 (m, 1H) , 1.25-1.40 (m, 2H) , 1.70-1.90 (m, 1?) , 2.33 (s, 3H) , 2.63 (s, 6H) , 3.80 (dd, J1 = 11.2 Hz, J2 = 7.2 Hz, 1H) , 4.03 (dd, J1 = 1.2 Hz, J2 = 5.9 Hz, 1H, 1H) , 7.00 (s, 2H) ; 13C-RMN (CDC13) d 2.28, 11.75, 19.35, 21.01, 22.53, 69.26, 119.90, 126.35, 131.88, 139.82, 143.75; E -ESI (m/z) 280.2 (M++l) .

N- (1-cianociclopropilmetil) -N-etil mesitilensulfonamida . Una suspensión de NaH (508 mg, 60% en aceite mineral, 12.7 mmol) en DMF (15 mL) se agregó a una solución agitada de 34 (2.33 g, 8.34 mmol) y N-etilmesitilensulfonamida (2.116 g, 9.32 mmol) a 5°C y la mezcla se agitó durante 1 h. El baño de enfriamiento se removió y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 10 h adicionales. Después de que la mezcla se enfrió en un baño de hielo, esto se apagó con H20, se neutralizó hasta un pH =7 con 2% HC1, se concentró en un evaporador rotatorio, se suspendió en CHC13 y se lavó 2 veces con H20 y salmuera. Se purificó por columna (gel sílice, hexano : EtOAc = 4: 1) rendimiento de 2.42 g (95%) del producto 35; ¾ RMN (CDCl3) d 0.85-1.00 (m, 1H) , 1.1 (t, 3H) , 1.20-1.30 (m, 1H) , 1.60-1.75 (m, 1H) , 2.31 (s, 3H) , 2.59 (s, 6H) , 3.06-3.26 (m, 2H) , 3.25-3.34 (ra, 2H) , 7.00 (s, 2H) ; 13C RMN (CDC13) d 2.75, 12.76, 12.98, 19.66, 20.88, 22.62, 41.06, 47.43, 120.62, 132.03, 132.63, 140.21, 142.76; EM-ESI (m/z) 307.4 (M++l) .

N-Etil ?,?' -bis (mesitilensulfonil) -trans-l, 2-bis (aminometilciclopropano) 36. Una solución de nitrilo 35 (2.42 g, 7.91 mmol) en Et20 (50 mL) se agregó lentamente dentro de una suspensión agitada de LiAlH4 (368 mg, 9.68 mmol) en Et20 (10 mL) a 0°C, La mezcla se agitó durante 2.5 h, El baño de enfriamiento se removió .y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 20 h a 23 °C. La mezcla de reacción se apagó con 2N NaOH a 0°C, el precipitado inorgánico se filtró y se lavó a fondo con Et20. La solución Et20 se secó (Na2S04) y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en C¾Cl2 (30 mL) , se agregó cloruro de mesitilensulfonilo (1.684 g, 7.7 mmol), la mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se trató con hidróxido de sodio (2N, 16 mL) . Después de 4 h, la mezcla de reacción se apagó con ¾0 (60 mL) , se acidificó hasta un pH = 1, el producto se extrajo con CHC13, se lavó con salmuera, se secó (Na2S04) y se purificó en una columna de gel de sílice (hexano: EtOAc = 4:1). Rendimiento 1.69 g (43%). XE RMN (CDCI3) d 0.40-0.52 (m, 2H) , 0.94 (t, 3H) , 0.95-1.15 (m, 2H) , 2.29 (s, 3H) , 2.30 (s, 3H) , 2.40-2.52 (m, 1H) , 2.57 (s, 6H) 2.59 (s, 6H) , 2.90-3.45 (m, 5H) , 5.58 (t, 1H) , 6.94 (4H) ; 13C RMN (CDCI3) d 10.10, 12.33, 16.45, 17.51, 20.87, 20.93, 22.55, 22.93, 40.01, 46.61, 47.71, 131.81, 131.88, 132.49, 133.96, 139.08, 140.39, 141.75, 142.52; EM-ESI (m/z) 493.4 (M++l) . 3, 8, 13 ,18-Tetraquis (mesi tilensulfonil) - ter[(E) -5, 6, (E) -10,11, (E) -15, 16-ciclopropil] -3,8, 13, 18-tetrazaeicosano 37. Se agregó hidruro de sodio (60% de suspensión en el aceite, 161 mg, 3,3. 97 mmol) a una mezcla agitada de diéster 22 (676 mg, 1.45 mmol, se preparó como se describe en Reddy et al. (1998) loe. cit) y diamida 36 (1.456 g, 2.95 mmol) en DMF seco (12 mL) a 0°C. El baño de enfriamiento se removió „y luego se agitó continuamente durante 10 . La mezcla de reacción se apagó con agua (1 mL) , se acidificó hasta un pH = 6 con HC1 acuoso (3%) , y se concentró hasta secarse in vacuo a 40°C. El residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con agua (3 veces) , salmuera, y se secó (Na2S0) . cromatografía de columna (gel de sílice, hexano: EtOAc = 3:1) rendimiento de tetrasulfonamida 37; 1.26 g (83%). lH RMN (CDC13) : 0.25-0.50 (m, 6H) , 0.70-0.95 (m, 6H) , 0.95-1.10 (m, 6H) , 2.29 (s, 12H) , 2.55 (s, 24H) , 2.85-3.10 (m, 6H) , 3.10-3.40 (m, 10H) , 6.92 (s, 8H) . 13C RMN (CDCI3) : 10.92, 11.15, 12.64, 16.00, 16.16, 16.32, 20.92, 22.67, 40.26, 48.41, 49.04, 49.22, 131.88, 133.23, 133.36, 140.16, 142.21, 142.32. EM- ALDI (m/z) 1073.6 (M++Na) .

SL-11215 tetrahidrocloruro 38. La tetrasulfonamida 37 (1.26 g, 1.2 mmol) se agitó durante 10 h en una mezcla de fenol (4.5 g, 48 mmol), HBr (33% en AcOH, 26 mL) , y CH2C12 (13 mL) . La mezcla se enfrió en un baño de hielo, se apagó con agua (5.5 mL) , se lavó 2 veces con CH2C12, y se concentró in vacuo. El residuo se neutralizó con 2N NaOH (1 mL) a 0o, luego se basificó con KOH (50%, 1 mL) hasta un pH = 12, se extrajo con CHC13 (5 veces) , se secó (N 2S04) , y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en Et20 y se precipitó con gas HCl . El producto se filtró, se lavó con Et20 y se secó in vacuo. Rendimiento 374 mg (66%) ; pf: arriba 200° (decorap.). ¾ RMN (D20) : 0.80-0.92 (m, 6H) , 1.15-1.85 (m, 6H) , 1.29 (t, J = 7.3, 6H) , 6.28-3.00 (m, 6H) , 3.12 (q, J = 7.3, 4H) , 3.10-3.35 (m, 6H) . 13C RMN (D20) : 10.03, 10.14, 10.60, 13.78, 42.69, 50.13, 50.45. E -ESI (m/z) 323.2 (M++l) .

SL-11218 tetrahidrocloruro 41. De forma análoga al procedimiento descrito arriba para obtener 37, la tetrasulfonamida 40 se preparó por condensación del diéster 39 y la amida 36 en 93% de rendimiento. ¾ RMN (CDC13) : 0.25-0.45 (m, 4H) , 0.65-0.85 (m, 4H) , 0.99 (t, J = 7.1, 6H) , 1.30-1.42 (m, 4H) , 2.29 (s, 12H) , 2.56 (s, 24H) , 2.55-2.95 (m, 4H) , 3.05-3.35 (m, 12H),. 6.92 (s, 8H) . 13C RMN (CDCI3) : 10.88, 12.65, 15.99, 16.22, 20.91, 22.67, 22.71, 24.42, 40.30, 45.24, 48.41, 48.78, 131.90, 133.33, 140.10, 142.23, 142.30. EM-MALDI 1061.5 (M++Na) . El tratamiento de 40 con HBr/AcOH en la presencia de fenol es como se describe por el 37 da 41 (71%). pf . : arriba 200°C (dec) ; XH RMN (D20) d : 0.85 (t, J = 7.1, 4H) , 1.15-1.30 (m, 4H) , 1.26 (t, J = 7.4, 6H) , 1.75-1.90 (m, 4H) , 2.82-3.00 (m, 4H) , 3.05-3.30 (m, 12H) ; 13C RMN (D20) d : 10.00, 10.60, 13.75, 22.89, 42.68, 46.65, 50.12, 50.74; E -ESI : 311:4 (M++l) .

Ejemplo 7 Preparación de los segmentos de hidroxialquilo . La 2-hidroxi-y-butirolactona 120 se usó como material de partida. (Este compuesto está comercialmente disponible como ambos isómeros R y S) . Siguiendo la protección del grupo hidroxi con cloruro de t-butildimetilsililo (TBDMSCl) , la resultante lactona 121 se trató con una solución de THF de EtNH2-. La hidroxi amida 122 resultante se sometió a una reacción Mitsunobu con ftalimida (PhTh) , díetilazodicarboxilato (DEAD) , y trifenilfosfina, seguido por desprotección con hidracina para obtener la amina 123.

El grupo amino resultante puede ser protegido con cloruro de mesitilensulfonilo y se usó en una manera análoga a los segmentos de amina anteriores, hasta introducir segmentos de hidroxialquilo dentro del análogo de poliamina como se desea. El grupo amida puede reducirse hasta un grupo amino por medio del tratamiento con un reactivo BH3-THF o hidruro de aluminio litio.

Ejemplo 8 Los análogos de poliamina inhibieron el crecimiento de las células de cáncer de próstata in vitro, como se indica en la tabla 1 y Figura 1, Figura 2, Figura 3, Figura 4, y Figura 5. Los cultivos de tejidos y el ensayo MTT se efectuaron como siguen. Se describen los protocolos adicionales para los ensayos in vitro en las Solicitudes de Patentes Internacionales O 00/66175, O 00/66528, WO 00/66587, WO 98/17624, Valasinas et al., J. Med. Chem. 44: 390-403 (2001), y Solicitud de Patentes Provisional de los Estados Unidos No. de serie 60/329,982 presentada el 16 de Octubre 2001. Cultivo de Tej idos . Se sembraron células en matraces de cultivo de 75 cm2 con 15 mi de medio esencial mínimo de Eagle, complementado con suero de becerro fetal al 10%, y aminoácidos no esenciales . Los matraces se incubaron en un atmósfera humidificada de 95% aire/5% C02. Las células se hicieron crecer por al menos 24 h para asegurarse de que están en la fase log de crecimiento, y luego se trataron con los · análogos de poliamina. Las células se cosecharon por tratamiento por 5 min con STV (solución salina A, 0.05% tripsina, 0.02% EDTA) a 37°C. Los matraces se golpearon en el banco del laboratorio, se pipetearon varias veces, y se retiraron alícuotas de la suspensión de células y se contaron usando un contador de partículas Coulter, que se había estandarizado para contar cada línea celular usando un hemacitómetro . Ensayo MTT : Se diluyeron suspensiones de células tratadas con tripsina, para sembrar 80 µ? de suspensiones que contienen 500 células en cada pozo de una placa de microtitulación Corning de 96 pozos, y se incubaron durante la noche a 37°C en un incubador humidificado en 5% de C02. 20 µ? de solución de reserva adecuadamente diluida de cada fármaco (i.e., análogo de poliamina) se agregaron a la mitad de 8 columnas de suspensión celular en las placas de microtitulación. Cada concentración de fármaco se corrió por cuadruplicado. Se usaron las columnas exteriores de las placas para controles de amortiguadores. Se incubaron las células con el fármaco por 6 días a 37°C en una atmósfera de 5% C02/H20. 25 µ? de 5 mg/ml de solución de bromuro de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2 , 5-difenil tetrazolio (MTT) se agregaron a cada pozo y se incubaron por 4 horas a 37°C en un incubador con 5% C02/H20. Se lisaron las células por incubación durante la noche con 100 µ?? de solución amortiguadora de lisis (500 mi de la solución amortiguadora de lisis contienen: 100 g lauril sulfato (SDS) , 250 mi de ?,?-dimetilformamida, y 2 mi de ácido acético glacial, completos en volumen con agua; pH 4.8). El color se observó a temperatura ambiente a 570 nm en un lector de Microplacas de precisión E-max (Molecular Devices Corporation, Sunnyvale, CA) y se analizaron los datos usando un software para supervivencia de células suministrado por Molecular Devices Corporation.

Tabla 1 Compuesto Valores ID50 (µ?) para lineas celulares de cáncer de próstata humano DuPro PC-3 DU145 LnCap Tsu-prl Tsu-prl-ADR SL-11093 0.20 4.17 0.01 0.21 0.07 >31.25 SL-11215 0.63 >31.25 0.06 SL-11218 0.26 >31.25 0.063 SL-11231 0.38 >31.25 0.08 0.15 SL-11232 0.20 0.30 SL-11241 0.34 0.40 0.20 SL-11242 >31.25 SL-11245 >31.25 >31.25 0.61 SL-11247 >31.25 >31.25 11.17 Ejemplo 9 Los efectos de SL-11218 y SL-11231 en el crecimiento de las líneas celulares de tumor de próstata humana PC-3, DU- 145, DuPro y LnCap y sobre líneas celulares de cáncer de mama humano MCF-7 y MDA- B-231 en cultivo, se determinaron por un ensayo MTT. Se expresaron los efectos inhibidores del crecimiento como un valor ID50 que se define como la concentración de fármaco requerida para inhibir el 50% del crecimiento celular después de 5 días de tratamiento. Los resultados se muestran en la Tabla 2; los números son el promedio de los valores determinados en al menos tres experimentos por separado. Ambos compuestos son efectivos para inhibir el crecimiento de células de tumor de próstata humano en cultivo. SL-11218 también muestra alguna actividad contra las células de cáncer de mama MCF-7.

Tabla 2 Valores ID50 de análogos de ciclopropil poliamina contra líneas celulares de tumor humano cuando se determinan por un ensayo MTT ND = no se determinó.

SL-11218 mostró una notable citotoxicidad contra la línea celular de tumor de próstata humano DuPro, cuando se determina por un ensayo de eficiencia de formación de colonias (CFE) . Los datos de CFE se muestran en la Fig. 6. El efecto de SL-11218 50 mg/kg y 75 mg/kg contra el DU-145, xenoinjerto del tumor de próstata humano en ratones descubiertos, se muestra en la Fig. 7a. Se les dieron inyecciones s.c. a ratones macho descubiertos atímicos, de 1 X 10s células DU-1 5 el día 0. Al comenzar el día 7, los ratones se trataron i.p qlw x 4 por 3 ciclos con solución salina, 50 mg/kg SL-11218 ó 75 mg/kg SL-11218 (pH 7.4) i.p. a 10 ml/kg de volumen de dosificación. (Problemas de jaula en la jaula de control se debieron a una fuga de una botella de agua, y a la falta de alimento durante 24 horas.) El tratamiento se efectuó una vez por semana durante cuatro semanas (qlw x 4) en 3 ciclos con un espacio de 4 semanas entre cada ciclo, (i.e., ciclo 1, administración en los días 7, 14, 21, 28; ciclo 2, administración en los días 49, 56, 63, 70; ciclo 3, administración en los días 98, 105, 112, 119) . Todos los valores de p se compararon para los ratones tratados con el vehículo. (En d 28, p=0.0007 para el grupo de 50 mg/kg; p=0.0006 para el grupo de 75 mg/kg; en d70, p=0.0066 y 0.00008 para 50 mg/kg y 75 mg/kg, respectivamente; en DL 19, p=0.0603 y 0.00005 para 50 mg/kg y 75 mg/kg, respectivamente . También se incluyeron los pesos corporals de los . animales tratados en la Fig. 7b. (Para vehículo en solución salina, N=14; para el grupo de 50 mg/kg, n=12; a d84, N=L 1 ; a d87, N=10; y p=0.0052 a d 119; para el grupo de 75 mg/kg, n=12 ; a d84, N=ll; a d87, n=10; a DL 15, n=9; y p=0.0007 a dll9.) Aunque el tratamiento de 50 mg/kg suspendió temporalmente el crecimiento del tumor, el tratamiento con 75 mg/kg suspendió el crecimiento del tumor a lo largo del periodo de tratamiento de 120 días sin una pérdida apreciable de peso corporal . El efecto de SL-11231 a 12.5 mg/kg por 5 días consecutivos contre el xenoinjerto del tumor DU-145 de próstata humana en ratones descubiertos, se muestra en la Fig. 8a. A esta dosis, SL-11231 también inhibe eficientemente el crecimiento del tumor sin efectos apreciables en el peso corporal del animal (Fig. 8b) . (Observar que el valor reportado en la Tabla 1 para SL-11231 contra las células DU-145, es para un experimento sencillo, aunque el valor reportado en la Tabla 2 es un promedio de experimentos múltiples . ) También, ambos SL-11218 y SL-11231 inhiben efectivamente el crecimiento del tumor pancreático humano en el xenoinjerto en ratones descubiertos a una dosis de 50 mg/kg (Fig. 9) y 12.5 mg/kg i.p. (Fig. 10), respectivamente, administrado i. p. qldx5 en 2 ciclos con un descanso de 10 días entre cada ciclo.

Además, SL-11218 a una dosis de 75 mg/kg i. p. por qlw x 4 grande estabilizado (- 2000 MM3) del xenoinjerto del tumor DU-145 por 2 ciclos, con un espacio de 4 semanas entre cada ciclo (Fig. 11 a) . Se les dieron inyecciones s.c. a los ratones atímicos macho descubiertos, de 1 X 106 células DU145 el día 0. Al comenzar el día 10, se les dio a los ratones oralmente un vehículo de agua acidificada a un volumen de dosificación de 10 ml/kg lx semanalmente durante 8 semanas. En el D66 los ratones comenzaron con su tratamiento seminal de solución salina contra SL-11218 i.p. Después del ciclo 1, hubo una reducción del 27% en el volumen de tumor en comparación con los controles tratados con vehículo. Después del ciclo 2, hubo una reducción importante del 64% con una caída del 15% en el peso corporal, que se recuperó entre los ciclos. (Ciclo 1, administración en los días 66, 73, 80, 87; ciclo 2, administración en los días 115, 122, 129, 136.) Los valores BW p se compararon con los controles sin tratar. En d87, p=0.005 para SL-11218. (Para el vehículo salino, N=9 ; a d 87 n=8; a d 101, N=4 ; para SL-11218 n=9; d 80 N=7 ; d 101 n= 5) . La Fig. 1 Ib indica el efecto de SL-11218 en el peso corporal del animal (vehículo salino, n=9, a d87, n=8; a dlOl n=4; por SL-11218, n=9; a d80, N=7, a dlOl n=5; p=0.015 a d98 y 0.001 a dl32) . Todas las referencias, publicaciones, patentes y solicitudes de patente aquí mencionadas se incorporan aquí como referencia en su totalidad. Aunque la invención anterior ha sido descrita en cierto detalle a manera de ilustración y ejemplo para propósitos de claridad y entendimiento, serán evidentes para aquellos expertos en la técnica, que pueden ser prácticos ciertos cambios y modificaciones. Por lo tanto, la descripción y ejemplos no se deben constituir como limitativos del alcance de la invención, que está delimitada por las reivindicaciones anexas . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Un método para hacer una poliamina que contiene un grupo ciclopropilo, caracterizado porque comprende: agregar un compuesto que porta carbeno o un equivalente de carbeno a través de un enlace doble de un compuesto de alqueno para formar un anillo ciclopropilo, donde el compuesto que porta carbeno o un equivalente de carbeno, o el compuesto de alqueno, o ambos tienen grupos funcionales adicionales los cuales pueden hacerse reaccionar en etapas adicionales ; realizar opcionalmente reacciones químicas adicionales en los grupos funcionales adicionales incorporados en el anillo de ciclopropano a partir del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, o del compuesto de alqueno, o ambos; y hacer reaccionar los grupos que portan amino con los grupos funcionales adicionales incorporados en el anillo de ciclopropano a partir del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, o del compuesto de alqueno, o ambos .
2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno es un iluro.
3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el iluro es un iluro de azufre.
4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque los grupos funcionales adicionales incluyen al menos un éster carboxilico.
5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque al menos un éster carboxilico está en el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, y la carga negativa formal del carbeno en el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno está en el carbono en la posición alfa al carbono de carbonilo del grupo éster carboxilico.
6. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque al menos un éster carboxilico está en el compuesto de alqueno, y el enlace doble del compuesto de alqueno está entre los carbonos en las posiciones alfa y beta al carbono de carbonilo del grupo éster carboxilico.
7. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno tiene al menos un éster carboxilico, el compuesto de alqueno tiene al menos un éster carboxilico, y la etapa de realizar opcionalmente reacciones químicas adicionales en los grupos funcionales adicionales del compuesto que porta carbeno o que porta un equivalente de carbeno, o el compuesto de alqueno, o ambos, se lleva a cabo en ambos de los grupos funcionales adicionales del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno y el compuesto de alqueno, y comprende la etapa de convertir los ésteres carboxílicos a ácidos carboxílicos libres.
8. El método de conformidad con la reivindicación .7, caracterizado además porque comprende la etapa de activar los ácidos carboxílicos con un grupo de partida.
9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la etapa de activar los ácidos carboxílicos con un grupo de partida consiste en hacer reaccionar los ácidos carboxílicos con cloruro de tionilo para producir cloruros de ácido carboxílico.
10. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la etapa de hacer reaccionar los grupos que portan amino con los grupos funcionales adicionales del compuesto que porta un equivalente de carbeno o que porta carbeno, o el compuesto de alqueno, o ambos, se lleva a cabo en ambos de los grupos funcionales adicionales del compuesto que porta carbeno o que porta un equivalente de carbeno y el compuesto de alqueno.
11. Un método para hacer un compuesto de la fórmula: E-NH-B-A-B- H-B-A-B- H-B-A-B- H(-B-A-B- H)X-E caracterizado porque A se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, C2-Ce alquilo, C2-C6 hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, C2-C3 alquinilo, C3-C6 cicloalquilo, C3-C6 cicloarilo, y C3-C6 cicloalquenilo; B se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, y C2-C6 alquenilo; E se selecciona independientemente del grupo que consiste de H, Ci-C3 alquilo, Ci~C6 hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, y C2-Ce alquinilo; y x es un entero desde 0 hasta 16; con la condición de que al menos una porción A es ciclopropilo, y que cada subunidad -B-A-B- contiene al menos dos átomos de carbono; y todas las sales y estereoisómeros de los mismos; comprende formar al menos una de las porciones ciclopropilo A por el método de conformidad con la reivindicación 1.
12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto es de la fórmula: E- H-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-E .
13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto es de la fórmula: E- H-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B- H-E.
14. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto es de la fórmula: E-NH-B-A-B-NH-B-A-B- H-B-A-B-NH ( -B-A-B- H) X-E en donde x es un entero entre 2 y 16.
15. El método de conformidad con las reivindicaciones 11, 12,13, ó 14, caracterizado porque E se selecciona de H, C!-C2 alquilo, y t-butilo.
16. El método de conformidad con las reivindicaciones 11,12, 13,14, ó 15, caracterizado porque E es --CH2CH3.
17. El método de conformidad con las reivindicaciones 11, 12, 13, 14, 15, ó 16, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de C2-C alquilo.
18. El método de conformidad con las reivindicaciones 11, 12, 13, 14, 15, 16, ó 17, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo es
19. El método de conformidad con las reivindicaciones 11, 12, 13, 14, 15, 16, ó 17, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo es
20. El método de conformidad con las reivindicaciones 11, 12, 13, 14, 15, 16, ó 17, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de -CH2CH2CH2- y -C¾CH2CH2CH2 - .
21. El método de conformidad con las reivindicaciones 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ó 20, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo es en la configuración E.
22. El método de conformidad con las reivindicaciones 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ó 20, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo es en la configuración Z.
23. Un compuesto de la fórmula: E-NH-B-A-B- H-B-A-B-NH-B-A-B-NH ( -B-A-B-NH) X-E caracterizado porque A se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, C2-C6 alquilo, C2-C3 hidroxialquilo, C2-C3 alquenilo, C2-C6 alquinilo, C3-C6 cicloalquilo, C3-C6 cicloarilo, y C3-C6 cicloalquenilo; B se selecciona independientemente del grupo que consiste de un enlace sencillo, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, y C2-C6 alquenilo; E se selecciona independientemente del grupo que consiste de H, Ci-CG alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, C2-C6 alquenilo, y C2-C6 alquinilo; y x es un entero desde 0 hasta 16; con la condición de que al menos una porción A es ciclopropilo , y que cada subunidad -B-A-B- contiene al menos dos átomos de carbono; y todas las sales y estereoisómeros de los mismos.
24. El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, en donde x es un entero desde 1 hasta 16.
25. El compuesto de conformidad con la reivindicación 23 de la fórmula: E- H-B-A-B- H-B-A-B-NH-B-A-B-NH-B-A-B-NH-E.
26. El compuesto de conformidad con la reivindicación 23 de la fórmula: E-NH-B-A-B- H-B-A-B-NH-B-A-B-NH ( -B-A-B-NH) X-E caracterizado porque x es un entero entre 2 y 16.
27. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 23, 24, 25, ó 26, caracterizado porque E se selecciona de H, Ci-C2 alquilo, y t-butilo.
28. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 23, 24, 25, ó 26, caracterizado porque E es --CH2CH3.
29. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 23, 24, 25, 26, 27, ó 28, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de C2-C4 alquilo.
30. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 23, 24, 25, 26, 27, ó 28, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo es
31. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 23, 24, 25, 26, 27, ó 28, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo es CH2CH2CH2- .
32. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 23, 24, 25, 26, 27, ó 28, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que no contiene una porción ciclopropilo se selecciona independientemente de -CH2CH2CH2- y -CH2CH2C¾CH2- .
33. El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, ó 32, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo es en la configuración E.
34. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, ó 32, caracterizado porque cada subunidad -B-A-B- que contiene una porción ciclopropilo es en la configuración Z.
35. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 11 de la fórmula : caracterizado porgue los substituyentes alquilamina en el anillo ciclopropilo son trans uno al otro, y todas las sales de los mismos'.