MXPA03003144A

MXPA03003144A - Anticuerpos humanizados anti-lt-??-r.

Info

Publication number: MXPA03003144A
Application number: MXPA03003144A
Authority: MX
Inventors: Paul Lyne
Original assignee: Biogen Inc
Priority date: 2000-10-13
Filing date: 2001-10-12
Publication date: 2004-12-06
Also published as: WO2002030986A3; NZ525793A; JP2004532608A; IS6779A; CN1547590A; US20090092601A1; SK5672003A3; IL155340A0; NO20031642D0; CA2425809A1; EA200300464A1; WO2002030986A2; EA006945B1; EP1326897A2; BG107802A; GEP20063752B; YU28503A; PL366307A1; CZ20031307A3; HUP0302573A2

Abstract

Se proporcionan los anticuerpos humanizados para LT-??-R y los metodos para utilizarlos.

Description

ANTICUERPOS HUMANIZAPOS ????-??-ß-? SOLICITUDES RELACIONADAS Es una continuación en parte de U.S.S.N. 60/299,987, presentada el día 21 de junio de 2001 que es una continuación en parte de U.S.S.N. 60/275,289, presentada el día 13 de marzo de 2001 que es una continuación en parte de U.S.N.N. 60/240,285, presentada el día 13 de octubre de 2000. La divulgación completa de todas estas solicitudes de patente se incorpora aquí por referencia. CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere, en términos generales, a anticuerpos humanizados específicos para el receptor de linfotoxina beta (LT-ß-?) . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El receptor de linfotoxina beta (conocido aquí como LT-ß-?) es un miembro de la familia de factores de necrosis tumoral que tiene una función bien descrita tanto en el desarrollo del sistema inmune como en el mantenimiento funcional de numerosas células en el sistema inmune incluyendo células dendríticas foliculares y numerosos tipos de células estromales (Matsumoto y colaboradores, Immunol. Rev. 156:137 (1997) . Ligandos conocidos para LT-ß-? incluyen y un segundo ligando llamado LIGHT (Mauri y colaboradores, Immunity 8:21 (1998)). La activación de LT~ - induce la muerte apoptótica de ciertas líneas de células cancerosas in vivo (PCT/US96/01386) . El tratamiento con agentes agonistas que activan ??-ß-R, como por ejemplo anticuerpos anti-LT-p-R humanizados específicos seria útil para el tratamiento o la reducción del avance, severidad o efectos de neoplasias en su etos (por ejemplo, seres humanos) . COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención ofrece anticuerpos humanizados antireceptor de linfotoxina beta (LT-p-R) y métodos para utilizar estos anticuerpos para tratar o reducir, severidad o efectos de neoplasia en sujetos (por ejemplo, seres humanos) . Específicamente, la invención abarca un anticuerpo humanizado que se une específicamente a LT-p-R (por ejemplo, LT-p-R de ser humano) . Este anticuerpo comprende regiones determinantes complementarias de cadena ligera definidas por los residuos de aminoácidos 24 a 34, 50 a 56, y 89 a 97 de SEQ ID NO: 1, y/o regiones determinantes complementarias de cadena pesada definidas por los residuos de aminoácidos 31 a 35, 50 a 66 y 99 a 109 de SEQ ID NO: 2 y además por lo menos uno (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, ó 5) de los residuos siguientes en su cadena ligera: K3, W41, 146, Q69 y Y71; o por lo menos uno (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 ó 5) de los residuos siguientes de cadena pesada: F37, T40, A49, M89 y V93 (convención de numeración de Kabat) . El anticuerpo humanizado de esta invención puede comprender una secuencia de dominio variable de cadena ligera definida por los residuos de aminoácidos 1 a 107 de SEQ ID NO: 8 y/o una secuencia de dominio variable de cadena pesada definida por los residuos de aminoácidos 1 a 120 de SEQ ID NO: 16. El anticuerpo humanizado puede comprender también las mismas secuencias de polipéptidos de cadena pesada y/o ligera que un anticuerpos producido por la linea de células E46.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3357) o linea de células E77.4 (designación de depósito de patente ATCC 3765) . En otra modalidad, el anticuerpo humanizado de la presente invención conserva sustancialmente las propiedades de enlace del anticuerpo de origen. En una modalidad, el anticuerpo humanizado de esta invención se une a ???-ß-R con una afinidad funcional, como por ejemplo, de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 10 pM, alternativamente, de aproximadamente 10 pM a aproximadamente 20 pM, alternativamente, de aproximadamente 20 pM a aproximadamente 30 pM, alternativamente, de aproximadamente 30 pM a aproximadamente 40 pM, alternativamente, de aproximadamente 40 pM a aproximadamente 50 pM, alternativamente, de aproximadamente 50 pM a aproximadamente 60 pM, alternativamente, de aproximadamente 60 pM a aproximadamente 70 pM, alternativamente, de aproximadamente 70 pM a aproximadamente 80 pM y alternativamente, de aproximadamente 80 pM aproximadamente 90 pM, en donde la afinidad funcional se mide por FACS de conformidad con el Ejemplo 8.

En otra modalidad, el anticuerpo humanizado de esta invención está unido a una inmunotoxina (por ejemplo, cadena A de resina y Pseudonomas toxin) . El anticuerpo humanizado de la invención puede también estar unido a un fármaco quimioterapéutico (por ejemplo, Adriamicina, 5FU, Vinblastina, Actinomicina D, Etopósido, Cisplatina, Metotrexato y doxorubicina) o bien un radioisótopo. La presente invención abarca también una terapia de combinación en la cual, por ejemplo, el anticuerpo humanizado de la presente invención unido a una inmunotoxina es utilizado en combinación con un anticuerpo humanizado de la presente invención unido a un fármaco quimioterapéutico. La presente invención abarca además una composición adecuada para su administración a un mamífero (por ejemplo ser humano) que tiene un tumor que sobre-expresa LTßR, que comprende a) un anticuerpo humanizado anti-LT3R ya sea solo o enlazado a un fármaco quimioterapéutico o a una inmunotoxina y b) un factor de citotóxico, cada uno presente en cantidades efectivas para reducir el volumen del tumor al ser administrado al mamífero. El factor citotóxico puede incluir, por ejemplo TNF-a, TNF-ß, IL-1, INF-?, IL-2. Alternativamente, el factor citotóxico puede ser un fármaco quimioterapéutico. El fármaco quimioterapéutico puede incluir, por ejemplo, Adriamicina, 5FU, Vinblastina, Actinomicina D, Etopósido, Cisplantina, Metotrexato y Doxorubicina.

El anticuerpo de esta invención, puede ser, por ejemplo, un anticuerpo entero (es decir, con dos cadenas ligeras de longitud completa y dos cadenas pesadas de longitud completa) de cualquier isotipo y subtipo (por ejemplo, IgM, IgD, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgE, IgAl e IgA2) ; alternativamente, puede ser un fragmento de enlace con antigenos (por ejemplo, Fab, F(ab' )2/ y Fv) de un anticuerpo entero. Dentro del marco de la invención se encuentra también una composición que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable; un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para SEQ ID NO: 8/ un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para SEQ ID NO: 16; un ácido nucleico que comprende una secuencia codificadora para la cadena ligera de un anticuerpo producido por la linea de células E46.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3357) o una línea de células E77.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3765) ; un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para la cadena pesada de un anticuerpo producido por la cadena de células E 6.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3357) ; o bien por la línea de células E77.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3765) ; un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para los residuos 1-107 de SEQ ID NO: 8, y un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para los residuos 1-120 de SEQ ID NO: 16. Dentro del marco de la presente invención se encuentran también células provenientes de lineas de células que producen anticuerpo humanizado anti-I^R, incluyendo, como por ejemplo, linea de células E46.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3357) ; y linea de células E77.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3765) . En una modalidad, la linea de células produce de aproximadamente 250 mg/L a aproximadamente 300 mg/L de dicho anticuerpo. Alternativamente, la linea de células produce de aproximadamente 300 mg/L a aproximadamente 350 mg/L de dicho anticuerpo, alternativamente, la linea de células produce de aproximadamente 350 mg/L a aproximadamente 400 mg/L de dicho anticuerpo, alternativamente, la linea de células produce de aproximadamente 400 mg/L a aproximadamente 450 mg/L de dicho anticuerpo, alternativamente, la linea de células produce de aproximadamente 450 mg/L a aproximadamente 500 mg/L de dicho anticuerpo, alternativamente, la linea de células produce de aproximadamente 500 mg/L a aproximadamente 550 mg/L de dicho anticuerpo, y alternativamente, la linea de células produce de aproximadamente 550 mg/L a aproximadamente 600 mg/L de dicho anticuerpo. La concentración del anticuerpo producido por las lineas de células se mide como un titulo de cosecha a partir de un cultivo en lotes alimentado de 10 días. La presente invención ofrece también un método para tratar o reducir el avance, severidad o efectos de neoplasias en un sujeto (por ejemplo, un ser humano) que comprende la administración al sujeto de una cantidad efectiva de un anticuerpo de esta invención. Una cantidad efectiva de la composición puede ser administrada en una o varias dosificaciones . En otra modalidad, la presente invención ofrece un método para tratar o reducir el avance, severidad o efectos de neoplasias en un sujeto (por ejemplo, ser humano), que comprende la administración al sujeto de una cantidad efectiva de un anticuerpo de esta invención y un factor citotóxico. El factor citotóxico puede incluir por ejemplo, TNF-a, TNF-ß, IL-1, INF-y, IL-2. Alternativamente, el factor citotóxico puede ser un fármaco quimioterapeutico . El fármaco quimioterapéutico puede incluir, por ejemplo, Adriamicina, 5FU, Vinblastina, Actinomicina D, Etopósido, Cisplatina, Metotrexato y Doxorubicina. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra una gráfica de la citotoxicidad en células WiDr. iuCBEll (murino) (rombo) , uCBEl 1#2 (anticuerpo humanizado anti-LT-^-R que comprende la versión 2 de la cadena ligera (VL#2) y versión 2 de la cadena pesada (VH#2) ) (circulo) , huCBEll#4 (anticuerpo humanizado anti-LT- -R que comprende la versión 3 de la cadena ligera (VL#3) y versión 4 de la cadena pesada (VH#4) ) (estrellas) . La Figura 2 muestra una gráfica de agonismo de IL-8 en células A375. mCBEll (rombos), huCBE#2 (murino) (rombo), huCBEl 1#2 (anticuerpo humanizado anti-LT-p-R que comprende la versión 2 de la cadena ligera (VL#2) y versión 2 de la cadena pesada (YH#2) ) (circulo), huCBEll#4 (anticuerpo humanizado anti-LT- -R que comprende la versión 3 de la cadena ligera (VL#3) y versión 4 de la cadena pesada (VH#4) ) (estrellas) . La Figura 3 muestra una gráfica de volumen tumoral versus días de administración. mCBEll (triángulos), huCBEll#4 (anticuerpo humanizado anti-LT-3-R que comprende la versión 3 de la cadena ligera (VL#3) y versión 4 de la cadena pesada (VH#4) ) (circuios) sin tratamiento (cuadrados) . La Figura 4 muestra una gráfica de la supervivencia porcentual de animales versus días de inyección después del tumor. mCBEll (triángulos), huCBEll#4 (anticuerpo humanizado anti-LT-^-R que comprende la versión 3 de la cadena ligera y la versión 4 de la cadena pesada) (circuios) sin tratamiento (cuadrados) . La Figura 5 muestra una gráfica del volumen tumoral versus días después de la inyección. HuCBEll#4 (anticuerpo humanizado anti-LT^-R que comprende la versión 3 de la cadena ligera (VL#3) y versión 4 de la cadena pesada (VH#4) ) (circuios) y control sin tratamiento (cuadrados) . La Figura 6 muestra una gráfica de volumen tumoral antes del cultivo versus días después del tratamiento. Control (cuadrado) ; huCBEll#4 (anticuerpo humanizado anti-LT-ß-?. que comprende la versión 3 de la cadena ligera (VL#3) y versión 4 de la cadena pesada (VH#4) ) en dosificaciones diferentes: 500ug (circuios), 100 ug (triángulos), y 20ug (rombos); mCBEll (cruces) . La Figura 7 muestra una gráfica del porcentaje de supervivencia de animales con tumores antes del cultivo versus días después de tratamiento. Control (cuadrado); huCBEll#4 (anticuerpo humanizado anti-LT-3-R que comprende la versión 3 de la cadena ligera (VL#3) y versión 4 de la cadena pesada (VH#4) ) en dosificaciones diferentes: 500ug (circuios) , 100 ug (triángulos) , y 20ug (rombos) ; mCBEll (cruces) . La Figura 8 muestra una gráfica de la intensidad media de la fluorescencia versus concentraciones de huCBEll#4 en una escala logarítmica. DESCRIPCIÓN DETALLADA Números de identificación de secuencias Secuencias de nucleótidos y aminoácidos mencionas en la especificación han recibido los siguientes números de identificación de secuencia: SEQ ID NO: 1 - Secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada de mCBEll. SEQ ID NO: 2 — Secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera de mCBEll.

SEQ ID NO: 3 - Secuencia de ácido nucleico de región variable de cadena ligera de CBE11 humanizado (versión 1-VL#1) . SEQ ID NO: 4 - Secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera de CBE11 humanizado (versión 1-VL#1) . SEQ ID NO: 5 - Secuencia de ácido nucleico de región variable de cadena ligera de CBE11 humanizado (versión 2-"VL#2) . SEQ ID NO: 6 - Secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera de CBE11 humanizado (versión 2-VL#2) . SEQ ID NO: 7 - Secuencia de ácido nucleico de región variable de cadena ligera de CBE11 humanizado (versión 3-VL#3) . SEQ ID NO: 3 - Secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera de CBE11 humanizado (versión 3-VL#3) . SEQ ID NO: 9 - Secuencia de ácido nucleico de región variable de cadena pesada de CBE11 humanizado (versión 1-VH#1) . SEQ ID NO: 10 - Secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera de CBE11 humanizado (versión 1-VH#1) . SEQ ID NO: 11 - Secuencia de ácido nucleico de región variable de cadena pesada de CBE11 humanizado (versión 2-VH#2) . SEQ ID NO: 12 - Secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera de CBE11 humanizado (versión 2-VH#2) . SEQ ID NO: 13 - Secuencia de ácido nucleico de región variable de cadena pesada de CBE11 humanizado (versión 3-VH#3) . SEQ ID NO: 14 - Secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera de CBEll humanizado (versión 3-vH#3) . SEQ ID NO: 15 - Secuencia de ácido nucleico de región variable de cadena pesada de CBEll humanizado (versión 4-VH#4) . SEQ ID NO: 16 - Secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera de CBEll humanizado (versión 4-VH#4) . SEQ ID NO: 17 - Cebador FRl para introducir un sitio Bsu36I. SEQ ID NO: 18 - Cebador FR2 para introducir sitios Ncil y Hpall SEQ ID NO: 19 - Cebador FR3 para introducir sitios Bsu36I y PstI. ' SEQ ID NO: 20 - Cebador FR2 para introducir sitio Sitial . SEQ ID NO: 21 - Cebador FR3 para introducir sitio Pvul . SEQ ID NO: 22 - Cebador FR2 para introducir sitios Sitial y Hhal. SEQ ID NO: 23 - Cebador FR3 para introducir sitios PvuII y Fspl. SEQ ID NO: 24 - Cebador FRl para introducir sitios Hinfl y Nsil . SEQ ID NO: 25 - Cebador FR2 para introducir sitios Haell y Hhal. SEQ ID NO: 26 - Cebador FR3 para introducir sitios Bsu36l, Ddel y PstI. SEQ ID NO: 27 - Cebador FRl para introducir sitio EcoRV. SEQ ID NO: 28 - Cebador FR3 para introducir sitio Rsal .

SEQ ID NO: 29 - Cebador FR1 para introducir sitio EcoRV. SEQ ID NO: 30 - Cebador FR2 para introducir sitio HindIII. SEQ ID NO: 31 - Cebador FR3 para introducir sitio Rsal . SEQ ID NO: 32 - Cadena ligera de huCBEll entera (versión 3) que incluye dominio constante. SEQ ID NO: 33 - Cadena pesada de huCBEll entera (versión 4) que incluye dominio constante. Definiciones El término anticuerpo humanizado, como se emplea aquí, se refiere a un anticuerpo derivado de un anticuerpo no humano, típicamente murino, que conserva o conserva sustancialmente las propiedades de enlace con antígeno del anticuerpo de origen pero que es menos inmunogénico en seres humanos . El término región de determinación de complementaridad (CDR) , como se emplea aquí, se refiere a las secuencias de aminoácidos que conjuntamente definen la afinidad de enlace y la especificidad de la región de Fv natural de un sitio de enlace de inmunoglobulina nativa de conformidad con lo delineado por Kabat y colaboradores (1991) . El término región de estructura (FR) , como se emplea aquí, se refiere a las secuencias de aminoácido interpuestas entre las CDRs. Estas porciones del anticuerpo sirven para mantener las CDRs en orientación apropiada (permiten que las CDRs se unan a antígeno) . El término región constante (CR) , como se emplea aquí, se refiere a la porción de molécula de anticuerpo que confiere funciones efectoras. En la presente invención, regiones constantes de murino están sustituidas por regiones constantes humanas. Las regiones constantes de los anticuerpos quiméricos humanizados sujetos son derivadas de inmunoglobulinas humanas. La región constante de cadena pesada puede ser seleccionada a partir de cualesquiera de los cinco isótopos: alfa, delta, epsilon, gamma, o mu. Además, cadenas pesadas de varias subclases (como por ejemplo las subclases IgG de cadenas pesadas) son responsables de diferentes cadenas efectoras y por consiguiente, mediante la selección de la región constante de cadena pesada deseada, se pueden producir anticuerpos con una función efectora deseada. Regiones constantes preferidas son gamma 1 (igGI) , gamma 3 (IgG3) y gamma 4 (IgG4) . Con mayor preferencia es una región Fe del isotipo gamma 1 (IgGI) . La región constante de cadena ligera puede ser kappa o lambda, de preferencia del tipo kappa. El término "anticuerpos quiméricos" como se emplea aqui, se refiere a un anticuerpo que contiene secuencias derivadas de dos anticuerpos diferentes que son típicamente de especies diferentes. Más típicamente los anticuerpos quiméricos comprenden fragmentos de anticuerpos humanos y de murino, generalmente región constante de ser humano y región variable de murino.

El término inmunogenicidad, como se emplea aquí, se refiere a la medición de la capacidad de una proteína de enfoque o porción terapéutica para provocar una respuesta inmunológica (humoral o celular) cuando se administra a un receptor. La presente invención se refiere a la inmunogenicidad de los anticuerpos humanizados sujetos. Un anticuerpo humanizado de inmunogenicidad reducida se refiere a un anticuerpo humanizado que presenta una inmunogenicidad reducida con relación al anticuerpo de origen, por ejemplo, anticuerpo de murino. Un anticuerpo humanizado que conserva sustancialmente las propiedades de enlace del anticuerpo de origen se refiere a una anticuerpo humanizado que conserva la capacidad de unirse específicamente con el antígeno reconocido por el anticuerpo de origen utilizado para producir dicho anticuerpo humanizado. De preferencia, el anticuerpo humanizado presenta la misma afinidad y avidez de enlace con antígeno que el anticuerpo de origen o bien sustancialmente la misma afinidad y avidez. Idealmente, la afinidad del anticuerpo no será inferior al 10% de la afinidad del anticuerpo de origen, con mayor preferencia dicha afinidad no será inferior a aproximadamente 30%, y con mayor preferencia dicha afinidad no será inferior al 50% de la afinidad despresada por el anticuerpo de origen. Métodos para ensayar la afinidad de enlace de antígeno son bien conocidos en la técnica e incluyen ensayos de unión semi-máxima, ensayos de competencia y análisis de Scatchard. Ensayos de enlace de antigenos adecuados se describen en esta solicitud. La presente invención se enfoca a anticuerpos monoclonales humanizados que se unen con LT- -R humanizado y a su uso como agentes terapéuticos . La presente invención se enfoca además hacia secuencias de ácidos nucleicos que codifican dichos anticuerpos humanizados, y a su expresión en células huéspedes recombinantes . Más específicamente, la presente invención se enfoca hacia anticuerpos humanizados derivados de CBE11 de murino que se unen específicamente a LT-p-R de ser humano . CBE11 de murino (mCBEll) es un anticuerpo capaz, IgGl de murino, aislado de un ratón inmunizado con una proteína de fusión humano ??-ß-R-Ig (Bro ning y colaboradores, J. Immunol. 154:33 (1995)). mCBEll activa funcionalmente L ^-R tanto in vitro como in vivo (PCT/US96/01386) y su asilamiento y propiedades antitumorales han sido descritos (Browning y colaboradores, J. Exp. Med. 183:867 (1996)). La línea de células de hibridoma que produce mCBEll ha sido previamente depositada ante la American Type Culture Collection (ATCC) según las disposiciones del Tratado de Budapest por los Solicitantes de la presente invención y recibió el número acceso ATCC HB 11793. (PCT/US96/01386) . Los solicitantes han mostrado también que la reticulación ,de receptor LT-ß con varios anticuerpos anti-LT-ß-?. agonistas activan el receptor de LT-ß (es decir, pueden imitar los efectos de los ligandos naturales) . (PCT/US96/01386. La activación de receptores a su vez inhibe el crecimiento tumoral en varios modelos de tumor in vivo para los cuales el receptor LT-ß es expresado. El receptor LT-ß es expresado en numerosasétulas cancerosas incluyendo como por ejemplo, células de cáncer pulmonar de células pequeñas (NSCLC) , células de cáncer colo-rectal (CRC) , células de cáncer de mama, asi como en células de cáncer de próstata, piel, estómago, esófago, vejiga y gástrico. Ejemplos no limitativos de tumores que los anticuerpos agonistas de LT-ß-? inhiben incluyen los siguientes tumores sólidos: adenocarcinoma de colon HT29, carcinoma cervical HT3, melanoma ?375, carcinoma de mama MDA-231 y tumores primarios de colon. Por consiguiente, anticuerpos agonista de LT-^-R poseen propiedades que los hacen útiles para el tratamiento de enfermedades en donde la activación de LT- -? y/o la modulación de la interacción LT-ß-R/ligando de LT- -? es deseable incluyendo por ejemplo, el tratamiento o la reducción del avance, severidad o efectos de neoplasias en un sujeto (por ejemplo, ser humano) . La humanización del anticuerpo monoclonal de mCBEll incluyendo el análisis de modelado retromutaciones que se requieren para conservar sustancialmente las propiedades de enlace del anticuerpo monoclonal mCBEll se describe aquí.

Análisis de Modelado de las Regiones Variables de Ratón Las CDRs contienen los residuos que presentan la mayor probabilidad de enlazarse con antigeno y deben conservarse en el anticuerpo re-formado. Las CDRs son definidas por secuencia según Kabat y colaboradores, Seqúense of Proteins of Immunological Interest [Secuencias de Proteínas de Interés Inmunológico] , 5a. Edición, El Departmento de Salud y Servicios Humanos de los Estados Unidos de América, Oficina de Impresión del Gobierno Norteamericano, 1991. Las CDRs caen en clases canónicas (Chothia y colaboradores, 1989 Nature, 342, 877-883) en donde residuos claves determinan en gran medida la conformación estructural del bucle de CDR. Estos residuos son casi siempre conservados en el anticuerpo reformado. La secuencia de polipéptidos del dominio variable de cadena ligera de mCBEll se muestra a continuación con las CDR' s subrayadas y los números de posiciones de residuos son designados de conformidad con el sistema de numeración de Kabat : 1 DIK TQSPSS MY7ASLGERVT ITCKAGQDIK SYLSWYQQKP 41 WKSPKILITY ATRLADGVPS RFSGSGSGQD YSLTISSLES 81 DDTATYYCLQ HGESPWTFGG GTKLEIK (SEQ ID NO: 1) La secuencia de polipéptidos del dominio variable de cadena pesada de mCBEll se muestra abajo con las CDR' s subrayadas y los números de posición de residuos son designados de conformidad con el sistema de numeración de Kabat: 1... EVQLVESGGG LVKPGGSLKL SC7AASGFTFS DYYMYWFRQT 41 PEKRLEWVAT ISDGGSYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNNLY 81.. LQMSSLKSED TAMYYCVREE NGNFYYFDYW GQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 2) Las cadenas variables pesadas y ligeras de mCBEll fueron comparadas con las secuencias de consensos para subgrupos de ratón y ser humano (Johnson, G. , Wu, T.T. Kabat Datábase and its applications: future directions Nucleic Acid Research, 29, 205-206, 2001; Wu y Kabat, J. Exp. Med. 132:211-250 (1970) ) utilizando el programa FASTA. La cadena ligera variable de mCBEll es un miembro del subgrupo de ratón V con una identidad del 74% en un empalme de 110 aminoácidos y la cadena pesada variable de mCBEll es miembro de subgrupo de ratón Illd con una identidad del 79% en un empalme de 132 aminoácidos. La cadena ligera variable corresponde al subgrupo I humano con una identidad del 66% en un empalme de 113 aminoácidos. La cadena pesada variable corresponde al subgrupo humano III con una identidad del 71% en un empalme de 131 aminoácidos Las CDRs de la presente invención fueron clasificadas en clases canónicas. El bucle de Ll cayó en la clase canónica 2 (bucle de 11 residuos), el bucle L2 cayó en la clase 1 (7 residuos) y el bucle L3 cayó en la clase 1 (9 residuos) . El bucle Hl cayó en la clase 1 (5 residuos) y el bucle H2 cayó clase 3 (17 residuos) . El bucle H3 no perteneció a ninguna clase canónica. Los residuos en la interfaz entre las cadenas variables ligeras y pesadas han sido definidos (Chothia y colaboradores, 1985 J. Mol. Biol., 186, 651-663). Estos residuos son conservados habitualmente en el anticuerpo reformado. En mCBEll, varios de sus residuos son inhabituales en la interfaz, específicamente S34, 146, L89, H91 en VL y Y35, F37, V93, E95 en VH. Residuos de estructura no habituales fueron determinados por análisis de todas las secuencias de cadenas variables de ratón y de ser humano en la versión de septiembre de 1999 de la base de datos Kabat [NCBI, NIH] . Se cree que diferencias específicas para mCBEll pueden indicar mutaciones somáticas que incrementan la actividad de enlace si estas diferencias estuvieran cerca del sitio de enlace. Residuos de ratón no habituales más alejados del sitio de enlace y residuos humanos no habituales fueron removidos si pudieran crear epítopos inmunogenieos en el anticuerpo re-formado. Residuos de estructura no habituales encontrados en mCBEll fueron K3, Mil, Y12, W41, Q69, S72, D81, T83 en la cadena ligera; y F37, T40, E42, A49, N77 en la cadena pesada. Mientras que la mayoría de esos residuos no fueron conservados en los anticuerpos de CBE11 humanizados, algunos de estos residuos de estructura no habituales fueron conservados incluyendo pro ejemplo, F37 y A49 en las cadenas pesadas. Modelado de la Estructura de las Regiones Variables Las cadenas ligeras y pesadas de la presente invención fueron alineadas contra la base datos no redundante para determinar cuadros estructurales a utilizar para construir tres modelos dimensionales en las cadenas ligeras y pesadas de mCBEll. Utilizando BLAST, se encontró que la cadena ligera tenia una identidad de secuencia de 93% con el anticuerpo monoclonal de murino 5g9 (1AHW) , y la cadena pesada tenia una identidad de secuencia del 81% con el fragmento Fab de IGGA2 de murino (Fab 17/9) (1IFH) . Utilizando el paquete de modelado molecular Sybyl (Tripos Inc.), las estructuras tridimensionales de las cadenas ligeras y pesadas fueron construidas utilizando la cadena ligera de 5g9 y la cadena pesada del fragmento IGGA2 Fab, respectivamente. La integridad estructural de los modelos fue evaluada en la consola y se encontró que era razonable. Diseño de las Regiones Variables Re-formadas La correspondencia de homología fue utilizada para seleccionar estructuras de aceptador de ser humano para "aceptar" CDRs de mCBEll . Tanto la base de datos de Kabat como la base de datos no redundante de NCBI, ENTRZ (The National Institutes of Health) fueron investigadas utilizando el programa BLAST. La elección de estructuras de aceptador de ser humano fue efectuada con base en identidad de secuencia entre las estructuras de mCBEll y las estructuras humanas (excluyendo estructuras de anticuerpos previamente humanizados) . La elección eventual de estructuras humanas fue a partir de anticuerpo TNF-Al'CL ( abat ID 004770) contra el factor alfa de necrosis tumoral de ser humano (Griffiths y . colaboradores, 1993 EMBO J. 12:725-734) para la cadena ligera variable (VL) (subgrupo I kappa humano) y anticuerpo FLA-IgG'CL (kabat id 040003) de especificidad desconocida (Malisan y colaboradores, 1996 Blood 87:717-724) para la cadena pesada variable (VH) (subgrupo III humano) . Las estructuras VL y VH de ser humano tienen 15 y 11 diferencias de residuos en comparación con las secuencias de murino. Retromutaciones de las Estructuras de Ser Humano El procedimiento más impredecible en la humanización de anticuerpos monoclonales es la identificación de residuos de estructura críticos a partir del anticuerpo de origen (es decir, en el caso actual, el anticuerpo de origen es de ratón) que deben ser conservados con el objeto de retener sustancialmente las propiedades de enlace del anticuerpo de origen mientras se minimiza al mismo tiempo la inmunogenicidad potencial del anticuerpo resultante. Es especialmente importante conservar residuos canónicos, residuos de empaque de interfaz así como residuos de murino no habituales que están cerca del sitio de enlace. Además, residuos en la "Zona de Vernier" (que forma una plataforma en la cual se apoyan las CDRs) {Foote & Winter, 1992 J. Mol. Biol. 224, 487-499) y los residuos cercanos a CDR H3 se consideran. Mutaciones hacia atrás hacia el anticuerpo de origen (es decir, mutación hacia atrás desde los residuos de estructura de ser humano hasta ratón) se conocen a continuación como retromutaciones . Se efectuaron tres versiones de la cadena re-formada ligera variable (hu-CBEll VL) y cuatro versiones de la cadena re-formada pesada variable (hu-CBEll VH) . En general, la primera versión contiene la mayoría de las retromutaciones y la tercera versión contiene el menor número de retromutaciones (es decir, la más "humanizada") excepto en el paso de la cuarta versión de hu-CBEll VH. La presente invención contempla anticuerpos humanizados derivados de mCBEll que poseen una cadena ligera variable seleccionada entre las cadenas ligeras variables descritas abajo (es decir, VL#1, VL#2 o VL#3) y una cadena pesada variable seleccionada entre las cadenas pesadas variables descritas abajo (es decir, VH#1, VH#2, VH#2, o VH#4) en cualquier combinación. (?) . Cadena ligera: 3 Q (glutamina) ~>K (Usina) Se conserva en la primera versión puesto que experimentos de re-formación previos han mostrado (por ejemplo, olbinger y colaboradores, 1993 Prot. Eng., 6, 971-980) que puede ser importante para el enlace de antigeno o para conformación de CDR. 41 G (glicina) ->W (triptófano) Se conservó en la primera y segunda versiones. 46 L (leucina)->I (isoleucina) Se conservó en la primera y segunda versiones puesto que se trató tanto de un residuo en la interfaz como en la zona de vernier. Además, es un residuo no habitual que ocurre 9 veces en secuencias de ratón y una vez en el ser humano. Afecta probablemente el empaque de las cadenas variables y puede estar en contacto con CDRs. 69 T (treonina) ->Q (glutamina) Este residuo se encuentra en la zona de vernier y puede influenciar la conformación de CDR. El cambio de una T corta a una Q más larga puede también significar que está en contacto con antigeno. La Q ocurre habitualmente 58 veces en ratón y dos veces en el ser humano. Se conservó en la primera versión. 71 F (fenilalanina) ->Y (tirosina) Este residuo está en una posición canónica y fue conservada en todas las versiones . Es también relativamente no habitual en secuencias humanas ocurriendo solamente 25 veces. (B) . Cadena Pesada: 37 V (valina)->F (fenilalanina) Se conservó en la primera, segunda y cuarta versiones. La F en esta posición no es habitual, ocurriendo solamente 15 veces en ratón y 18 veces en el ser humano. Es también un residuo de interfaz. 40 A (alanina)->T (treonina) Se conservó en la primera versión. Mutación en esta posición ha sido ensayada en 5 experimentos de humanización previos aún cuando nunca el cambio A a T. Un ejemplo es el cambio de ? a S en el cubrimiento de BrE-3 (Couto y colaboradores, 1994 Hibridoma, 13, 215-219) en donde se incrementó la afinidad de enlace, aún cuando, la razón nunca fue determinada. En este caso, la cadena pesada fue también del subgrupo III humano. 49 S (seriña)->A {alanina) Este residuo se encuentra bajo las CDRs y en; la zona de vernier y fue conservado en. todas las versiones . : I 89 V (valina)->M (metionina) Fue conservado en la primera I versión. Esta posición ha sido retromutadá en varios i ; experimentos de humanización. Fue conservado en la primera versión. 93 A (alanina) ->V (valina) Esta posición se encuentra tanto en un residuo de interfaz como en la zona de vernier. Se conservó en la primera y segunda versiones. Las secuencias de aminoácidos y ácido nucleico de cada ;una versiones 'diferentes de las cadenas variables ligeras y pesadas fueron de conformidad con lo siguiente: Cadenas Ligeras Variables Re-formadas Í Cadena ligera variable re-formada de CBE11 - versión I cadena I ligera (VL#1) (Plásmido pAND066) 1 GATATTAAGATGACCCAGTCTCCATCATCCTTGTCTGCATCGGTGGGAGACAGGGTCACT 60 D I |K M T Q S P S S L S A S V G D R V T i 61 ATCACTTGCAAGGCGGGTCAGGACATTAAAAGCTATTTAAGCTGGTACCAGCAGAAACCA 120 I T C A G Q D I K S Y L S W Y Q Q K P 121 TGGAAAGCGCCTAAGATCCTGATCTATTATGCAACAAGGTTGGCAGATGGGGTCCCATCA 180 W K A P I L I Y Y A T R L A D G V P S aa41 aa 6 181 AGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGGCAAGATTATACTCTAACCATCAGCAGCCTGCAGCCT 2 0 R F S G S G S G Q D Y T L T I S S L Q P aa69 aa71 241 GAGGATTTCGCAACTTATTACTGTCTACAGCATGGTGAGAGCCCGTGGACGTTCGGTGGA 300 E D F A T Y Y C L Q H G E S P W T F G G 301 GGCACCAAGCTGGAGATCAAA 321 G T K L E I SEQ ID NO: 3 - representa la', secuencia de ácido nucleico de la cadena ligera re-formada Vli#l arriba. SEQ ID NO: 4 - representa la; secuencia de aminoácidos de la cadena ligera re-formada VL#1.arriba. Cadena ligera variable re-formada de CBEll - versión 2 cadena ligera (VL#2) (Plásmido p¾ND0 0) 1 GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCCTTGTCTGCATCGGTGGGAGACAGGGTCACT 60 D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T 61 ATCACTTGCAAGGCGGGTCAGGACATTAAAAGCTATTTAAGCTGGTACCAGCAGAAACCA 120 I T C A G Q D I S I Y L S W Y Q Q P 121 TGGAAAGCGCCTAAGATCCTGATCTATTATGCAACAAGGTTGGCAGATGGGGTCCCATCA 180 W K A P K I L I Y Y A ;T R L A D G V P S aa41 aa46 181 AGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACAGATTATACTCTAACCATCAGCAGCCTGCAGCCT 240 R F S G S G S G T D Y 'T L- T I S S L Q P aa7Í 241 GAGGATTTCGCAACTTATTACTGTCTACAGCATGGTGAGAGCCCGTGGACGTTCGGTGGA 300 E D F A T Y Y C L Q H 'G E S P W T F G G 301 GGCACCAAGCTGGAGATCAAA 321 ¡ G T K L E I K i SEQ ID NO: 5 - representa la j secuencia de ácido nucleico de la cadena ligera variable re-formada VL#2 arriba. SEQ ID NO: 6 - representa la .secuencia de aminoácidos de la cadena ligera variable re-formada VL#2 arriba.

Cadena ligera variable re-formada de CBVE11 - versión 3 cadena ligera (VL#3) (Plásmido pAND074) 1 GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCCTTGTCTGCATCGGTGGGAGACAGGGTCACT 60 D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T 61 ATCACTTGCAAGGCGGGTCAG3ACATTAAAAGCTATTTAAGCTGGTACCAGCAGAAACCA 120 I T C K A G Q D I K S Y L S W Y Q Q P 121 GGGAAAGCGCCTAAGCCTCTGATCTATTATGCAACAAGGTTGGCAGATGGGGTCCCATCA 180 G A P K L L I Y Y A T R L A D G V P S 181 AGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACAGATTATACTCTAACCATCAGCAGCCTGCAGCCT 240 R F S G S G S G T D Y T . L T I S S L Q P aa7X 241 GAGGATTTCGCAACTTATTACTGTCTACAGCATGGTGAGAGCCCGTGGACGTTCGGTGGA 300 E D F A T Y Y C L Q H G ; E S P W T F G G 301 GGCACCAAGCTGGAGATCAAA 321 I G T K L E I K SEQ ID NO: 7 - representa la secuencia de ácido nucleico de la cadena ligera variable re-formada VL#3 arriba. SEQ ID NO: 8 - representa la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera variable re-formada VL#3 arriba. Cadenas Pesadas Variables Re-formadas Cadena pesada variable: reformada de CBE11 - versión 1 cadena pesada (VH#1) (Plásmido pADNQ67) 1 GAGGTACAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGGC C 60 E V Q L V E S G G G L V K P G G S IJ R L 61 TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATTACATGTATTGGTTTCGCCAGACT 120 S C A A S G F T P S D Y Y M Y W F R Q T aa37 aa40 121 CCGGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTACACCTACTAT 180 P G K G L E W V A T I S D G G S Y T Y Y : aa49 181 CCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAGCCTCTAC 2 0 P D S V K G R F T I S R D N A K N S L Y 2 1 CTGCAGATGAGCAGCCTGAGGGCTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTAAGAGAGGAG 300 L Q M S S L R A E D T A M Y Y C V R E E aa89 aa93 301 AATGGTAACTTTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA 360 N G N F Y Y F D Y W G Q G T T V T V S S SEQ ID NO: 9 - representa la secúencia de ácido nucleico de la cadena pesada variable re-formada VH#1 arriba. SEQ ID NO: 10 - representa la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada variable re-formada VH#1 arriba. Cadena pesada variable re-formada de CBE11 - versión 2 cadena pesada (VH#2) (Plásmido pADND071) i 1 GAGGTACAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGÁAGCCTGGAGGGTCCCTGAGGCTC 60 E V Q L V S S G G G L V k P G G S L K L 61 TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATTACATGTATTGGTTTCGCCAGGCC 120 S C A A S G F T F S D Y Y M Y W F R Q A a&37 121 CCGGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTACACCÍACTAT 180 P G K G L E W V A T I S D G G S T Y Y aa49 j 181 CCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAGCCTCTAC 240 P D S V G R F T I S R D N A K N S L Y 1 CTGCAGATGAGCAGCCTGAGGGCTGAGGACACAGCTGTGTATTACTGTGTAAGAGAGGAG 300 L Q M S S L R A E D T A V Y Y C V R E E aa93 301 AATGGTAACTTTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA 360 N G N F Y Y F D Y W G Q G T T V T V S S SEQ ID NO: 11 - representa la secuencia de ácido nucleico de la cadena pesada variable re-formada VH#2 arriba. SEQ ID NO: 12 - representa la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada variable re-formada VH#2; arriba. Cadena pesada variable re-formada de CBE11 - versión 3 cadena pesada (VH#3) (Plásmido pADN075) 1 GAGGTACAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGGCTC 60 E V Q L V E S G G G L V K P G G S L R L 61 TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATTACATGTATTGGGTGCGCCAGGCC 120 S C A A S G F T F S D Y Y M Y, W V R Q A 121 CCGGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTACACCTACTAT 180 P G G L E W V A T I S D G G S Y T Y Y aa 181 CCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAGCCTCTAC 240 P D S V G R F T , I S D N A N S L Y 241 CTGCAGATGAGCAGCCTGAGGGCTGAGGACACAGCTGTGTATTACTGCGCAAGAGAGGAG 300 L Q M S S L R A E D T A V Y Y C A R E E 301 AATGGTAACTTTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA 360 N G N F Y Y F D Y 'W G Q G- T T V T V S S SEQ ID NO: 13 - representa la secuencia de ácido nucleico de la cadena pesada variable re-!-formada VH#3 arriba. SEQ ID NO: 14 - representa la secuencia de aminoácidos de la i cadena pesada variable re-formada VH#3 arriba. Cadena pesada variable re-formada de CBE11 - versión 4 cadena pesada (VH#4) (Plásmido pADNQ90) 1 GAGGTACAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCT AGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGGCTC 60 - E V Q L V E S G G G L V P G G S L R L 61 TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTC^GTGACTATTACATGTATTGGTTTCGCCAGGCC 120 S C A A S G F T F S D Y Y M Y W F R Q A aa37 121 CCGGGAAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCAA.CCATTAGTGATGGTGGTAGTTACACCTACTAT 180 P G K G L E W V A Ij l S D G G S Y T Y Y aa 9 ' 181 CCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAGCCTCTAC 240 P D S V K G R F T Í S R D N A K N S L Y 241 CTGCAGATGAGCAGCCTGAGGGCTGAGGACACAGCTGTGTATTACTGCGCAAGAGAGGAG 300 li Q S S L R A E D T A V Y Y C A R E E 301 AATGGTAACTTTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA 360 N G N F Y Y F D Y W G Q G T T V T V S S SEQ ID NO: 15 - representa l'a secuencia de ácido nucleico de la cadena pesada variable re-formada VH#4 arriba. 1 SEQ ID NO: 16 - representa la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada variable re-formada VH#4 arriba. Anticuerpos que consisten de versiones diferentes de las cadenas ligera y pesada fueron elaborados y utilizados para estudios adicionales. Por ejemplo, el anticuerpo que consiste de la cadena variable ligera versión 3 de huCBEll reformada (VL#3) y de la cadena variable pesada versión 4 de huCBEll re-formada (VH#4) , que se conoce como huCBEll#4 o hCBEll, fue elaborado y lineas de células, E46.4 y E77.4, que producen el anticuerpo fueron depositadas ante A. T.C.C. (designación de depósito de patente ATCC PTA-3357 y 3765, respectivamente) - La invención contempla además equivalente y variantes de las secuencias de VH y VL re-formadas, es decir, las que contienen una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos que no afectan sustancialmente la unión de LT-ß-R. Anticuerpos de LT-ß-? humanizados que contienen estas secuencias pesada y ligera variables humanizadas pueden ser obtenidos por métodos reco binantes de conformidad con lo descrito en los Ejemplos. Usos Los anticuerpos anti- LT-p-R humanizados de la presente invención tienen uso en el tratamiento de condiciones de enfermedad en donde la activación de LT-ß-? es terapéuticamente benéfica. Tales condiciones incluyen el tratamiento, la prevención o la reducción del avance, severidad o efectos de neoplasias.

Una modalidad de la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de un mamífero (es decir, un ser humano) para una condición asociada con una proliferación celular indeseada por administración al mamífero de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende anticuerpos LT-p-R humanizado de la presente invención. En otra modalidad de la invención se trata de un método para el tratamiento de un mamífero (por ejemplo, un ser humano) que tiene un tumor sólido (por ejemplo, carcinoma) que sóbreexpresa ???-ß-R, que comprende la administración a dicho mamífero de un anticuerpo ???-ß-R humanizado que se une a LT-ß-R en una cantidad efectiva para reducir el volumen del tumor. Ejemplos de cánceres cuya proliferación celular es modulada por LT-p-R pueden ser tamizados por la medición in vitro del nivel de mensaje de LT-p-R y/o ligando de LT-^-R (es decir, Ltoflp2 o LIGHT) expresado en bibliotecas de tejido tumoral. Bibliotecas de tejido tumoral en las cuales mensaje de ?,?-ß-R y/o ligando de ?,?-ß-R (es decir LTcd^2 o LIGHT) es altamente expresado serían candidatos. Losa tipos de tumores contemplados en la presente invención incluyen tumores sólidos incluyendo, sin limitarse a estos ejemplos, cáncer pulmonar no de células pequeñas (NSCLC) , cáncer colo-rectal (CRC) , cáncer de mama, así como cáncer de próstata, cáncer gástrico, cáncer de piel, de estómago, de esófago y de vejiga.

Los anticuerpos humanizados de la presente invención que son utilizados en el tratamiento de condiciones asociadas con la proliferación indeseadas de células en particular terapia tumoral, inhiben de manera provechosa el crecimiento de células tumorales, de conformidad con lo medido, por ejemplo, por la disminución del volumen del tumor mayor que aproximadamente 10%, 20%, 30% ó 40% y con mayor provecho mayor que aproximadamente 50%. Los anticuerpos humanizados son obtenidos a través de tamizado (véase, por ejemplo, los comentarios en el Ejemplo 3) . Por ejemplo, anticuerpos humanizados para uso en la presente invención pueden ser seleccionados con base en un volumen tumoral disminuido versus células cancerosas no tratadas (es decir, mayor que aproximadamente 10%, 20%, 30% 40% ó 50%) . La presente invención ofrece también composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo humanizado de la presente invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Vehículos adecuados, por ejemplo, y sus formulaciones, se describen en Remington' Pharmaceutical Sciences, 16a edición, 1980, Mack Publishing Co., editado por Oslo y colaboradores. Típicamente, una cantidad apropiada de una sal farmacéuticamente aceptable se utiliza en la formulación para que la formulación sea isotónica. Ejemplos del vehículo incluyen amortiguador, como por ejemplo, solución salina, solución de Ringer y solución de dextrosa.

El pH de la solución es de preferencia de aproximadamente 5 a aproximadamente 8, y con mayor preferencia de aproximadamente 7.4 a aproximadamente 7.8. Vehículos adicionales incluyen preparaciones de liberación prolongada como por ejemplo, matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos cuyas matrices están en forma de artículos conformados, por ejemplo, liposomas, películas o micropartículas . Será aparente a los expertos en la materia que ciertos vehículos pueden ser más preferibles según la vía de administración y la concentración de la composición farmacéutica administrada. La administración puede lograrse por inyección (inyección intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular) o bien por otros métodos tales como infusión que aseguran la entrega al torrente sanguíneo de manera efectiva. Los anticuerpos humanizados de la presente invención pueden ser administrados en una dosis efectiva para tratar la condición clínica particular en cuestión. La determinación de una formulación farmacéutica preferida y un régimen de dosificación terapéuticamente eficiente para una aplicación dada está dentro del alcance de la técnica tomando en cuenta, por ejemplo, el peso y la condición del paciente la magnitud del tratamiento deseado y la tolerancia del paciente con relación al tratamiento. Por ejemplo, una dosificación efectiva estará dentro de un rango de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 100 miligramos por kilogramo de peso corporal por día. Más particularmente, aproximadamente 0.05 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, o 25 mg, por kilogramo de peso corporal por día. Alternativamente, aproximadamente 0.05 a aproximadamente 100 miligramos, más particularmente, aproximadamente 0.05 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, ó 25 mg, por kilogramo de peso corporal por semana. Alternativamente, de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 100 miligramos, más particularmente, aproximadamente, 0.05 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, ó 25 mg, kilogramo de peso corporal por dos semanas. Alternativamente, de aproximadamente 0.0.5 a aproximadamente 100 miligramos, con mayor particularidad, aproximadamente 0.05 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.67 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mb, 9 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg ó 25 mg, kilogramo de peso corporal por tres semanas. Alternativamente, aproximadamente 0.0.5 a aproximadamente 100 miligramos, más particularmente, aproximadamente 0.05 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.67 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mb, 9 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg ó 25 mg, kilogramo de peso corporal por cuatro semanas . La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique lo siguiente, técnicas convencionales de biología celular, cultivo celular, biología molecular, microbiología, ADN recombinante, química de proteína, e inmunología, que se encuentra dentro del alcance de la técnica. Tales técnicas se describen en la literatura. Véase, por ejemplo, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [Clonación Molecular: Un Manual de Laboratorio], 2a edición. (Sambrook, Fritsch y Maniatis, eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989; DNA Cloning [Clonación de AND], Volúmenes I y II (D.N. Glover, ed.), 1985; Oligonucleotide Synthesis [Síntesis de Oligonucleótidos] , (M.J. Gait, ed. ) , 1984; Patente Norteamericana No. 4,683,195 (Mullís y colaboradores); Nucleic Acid Hybridization [Hibridación de Ácido Nucleico] (B.D. Hames y S.J. Higgins, eds.), 1984; Transcripción y traducción (B.D. Hames y S.J. Higgins, eds.), 1984; Culture of Animal Cells [Cultivo de Células Animales] (R.I. Freshney, ed.). Alan R. Liss, Inc. 1987; Immobilized Cells and Enzymes [de Células y Enzimas Inmovilizadas], IRL Press, 1986; A Practical Guide to Molecular Cloning [Una Guía Práctica de la Clonación Molecular] (B. Perbal) , 1984; Methods in Enzymology [Métodos en Enzimologías] , Volúmenes 154 y 155 (Wu y colaboradores eds.), Academic Press, Nueva York; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells [Vectores de Transferencia de Genes para Células de Mamíferos] (J.H. Miller y M.P. Calos, eds.), 1987, Cold Spring Harbor laboratory; Imiaunochemical Methods in Cell and Molecular Biology [Métodos inmunoquimicos en Biología Celular y Molecular] (Mayer y Walker, eds.)f Academic Press, Londres 1987; Handbook of Experiment Immunology [Manual de Inmunología Experimental], Volúmenes I-IV (D.M. Weir y C.C. Blackwell, eds.), 1986; Manipulating the Mouse Emgbryo [Manipulación del Embrión de Ratón], Cold Spring Harbor laboratory Press, 1986. Los siguientes Ejemplos se ofrecen para ilustrar la presente invención y no deben considerarse como limitativos de la misma. EJEMPLOS: E emplo 1 Construcción y Expresión de chCBEll 7ADNc que codifican las regiones variables de CBE11 de murino de las cadenas pesada y ligera fueron utilizados para construir vectores para la expresión de quimeras murino-ser humano (chCBEll) en donde las regiones variables de muCBEll fuero unidas a las regiones constantes kappa IgGl de ser humano . Para la construcción de las quimeras de cadena pesada, se sub-clonó un fragmento PstI-BstEII de 0.36 kb a partir del sub-clon de cadena pesada CBE11, pEAG970, en el fragmento de vector PstI-BstEII de 2.82 kb fosfatado a partir de los plásmidos de cadena pesada 5a8 pLCB7 (5a8 es un mAb específico para CD4 clonado moleculármente previamente caracterizado en Biogen) , para agregar una secuencia de señal de cadena pesada de murino y empalmar el sitio de donador a la región variable de cadena pesada de muCBEll. En este plásmido, que se conoce como pEAG979, el extremo N maduro de cadena pesada difiere por dos residuos de la secuencia N-terminal de cadena pesada de CBE11 auténtica purificada derivada de degradación de Edman, puesto que fue determinada por cebador durante una reacción en cadena de polimerasa. Para corregir el extremo N de cadena pesada, pEAG979 fue sometida a mutagénesis por eliminación de sitio único (USE) empleando un kit de mutagénesis USE de Amersham Pharmacia Biotech siguiendo el protocolo recomendado por el fabricante. Los plásmidos sometidos a mutación fueron identificados por tamizado para determinar la presencia de cambios Avall, PstI, y Rsal introducidos. La secuencia de cadena pesada en el plásmido resultante pEAG 81 fue confirmada por secuenciamiento de ADN. El fragmento de dominio variable de cadena pesada Notl-HindIII de 0.44 kb proveniente de pEAG981 y el fragmento HindIII-Notl de 1.21 kb del plásmido pEAG964, que contiene una región constante de IgGl de ser humano, fueron sub-clonados en el sitio Notl del plásmido derivado de vector de expresión EBV de pCEP4 (Invitrogen) , pCH269, produciendo el plásmido pEAG983.

Para la construcción de la quimera de cadena ligera, un fragmento Notl-EcoRV de 0.11 kb del plásmido pMDR985 y un fragmento EcoVR-BamHI de 0.37 kb proveniente del plásmido de dominio variable de cadena ligera de CBE11, pEAG967, fueron sub-clonados en el fragmento de vector Notl-BamHI de 2.94 kb fosfatado del vector de clonación pBluescriptIISK+ de Stratagene, para agregar una secuencia de señal de cadena ligera de murino y un sitio 5' Notl en el plásmido resultante, pEAG978. Este plásmido fue sometido a mutagénesis USE utilizando un kit de mutagénesis de USE de Amersham Pharmacia Biotech siguiendo el protocolo recomendado por el fabricante, con cebadores mutagénicos que codificaron una sustitución V3K para corresponder al extremo N de cadena ligera CBE11 auténtico, y que introdujo un sitio BglII en el extremo 3' del dominio variable de cadena ligera. Plásmidos mutados fueron identificados por tamizado para determinar la presencia de cambio de sitio BglII, EcoRV, y Msel introducidos . La secuencia de cadena ligera en el plásmido resultante pEGA980 fue confirmada por secuenciamiento de ADN. El fragmento de dominio variable de cadena ligera Not-BglII de 0.41 kb de pEAG980 y el fragmento Bcll-Notl de 0.68 kb del plásmido pEAG963, que contiene el dominio constante de cadena ligera kappa de ser humano, fueron sub-clonados en el sitio Notl del plásmido derivado del vector de expresión de EBV pCEP4 (Invitrogen) , pCH269, produciendo el plásmido de pEAG982. Vectores de expresión (vector de cadena pesada de ChCBEll, pEAG983 y vector de cadena ligera de chCBEll, pEAG982) fueron co-transfectados en células 293-EBNA y células transfectadas fueron probadas para determinar la secreción de anticuerpos y la especificidad (vector vacio - y ch5c8 (un mAb especifico para CD154 clonado molecularmente previamente caracterizado en Biogen) - células transfectadas sirvieron como controles) . Un análisis Western blot (desarrollado con anticuerpos de cadena pesada y ligera anti-humano) de inmunoprecipitados de proteina A de Usados de células enteras y medio acondicionado indicaron que células transfectadas por chCBEll sintetizaron y secretaron eficientemente cadenas pesadas y ligeras a niveles similares a las células transfectadas con ch5c8. Un análisis FACS de células ?,?-ß-R que expresan HT-29 teñidas con medio acondicionado de células transfectadas indicaron que el anticuerpo de chCBEll se unió y produjo patrones de tinción similares a los de muCBEll, mientras que el medio acondicionado de células transfectadas con ch5c8 y ficticia no tiñeron LT-ß-?. en células HT-29. CBE11 quimérico producido a partir de transfección transiente fue purificado y demostró que inducía la secreción de IL-8 por células de melanoma A375 que expresa ???-ß-R y que inhibió el crecimiento de células de adenocarcinoma de WiDRr en ratones desnudos . Ejemplo 2 Construcción y Expresión de huCBEll El diseño de los dominios variables reformados para producir CBE11 humanizado (huCBEll) se efectuó de conformidad con lo descrito arriba. La elección de estructuras de aceptador de ser humano fue por correspondencia de homología: sub-grupo kappa humano I mftb TNF-A1 para la cadena ligera (Griffiths y colaboradores, 1993) , y subgrupo de ser humano III mAb FLA-IgG para la cadena pesada (Malisan y colaboradores, 1996) . Se diseñaron tres versiones de cada una de las cadenas reformadas ligeras variables y cuatro versiones de las cadenas reformadas pesadas variables. En general, la primer versión contiene la mayor cantidad de retromutaciones a las secuencias de donador de murino, mientras que la última versión contiene el menor número de dichas retromutaciones (es decir, es la versión más "humanizada") . Las regiones variables de huCBEll fueron elaboradas por mutagénesis de eliminación de sitio único (USE) empleando un kit de mutagénesis USE de Amersham Pharmacia Biotech siguiendo el protocolo recomendado por el fabricante, empleando los plásmidos de dominio variable de chCBEll como templados de inicio. Los cebadores mutagénicos para los cambios de estructura (FR) se describen a continuación. La secuencia ADNc de las estructuras de aceptadores de ser humano (base de datos de Kabat #004770 para la cadena ligera y Kabat #040003 para la cadena pesada) fue utilizada, con mutaciones silenciosas introducidas para producir cambios de sitio de restricción para facilitar la identificación de los plásmidos mutados. Los plásmidos mutados fueron identificados por tamizado de los cambios introducidos de sitios de restricción. Las secuencias de ADNc de región variable en los plásmidos resultantes fueron confirmadas por secuenciamiento de ADN. VH#1 utilizó el templado de pEAG981 con los cebadores siguientes: cebador de FR1 5' GCC TGG AGG GTC CCT GAG GCT CTC CTG TGC AGC CTC 3' (SEQ ID NO: 17), que introdujo un sitio Bsu36I, cebador FR2: 5' GTT TCG CCA GAC TCC GGG AAA GGG GCT GGA GTG GGT CGC AAC 3' (SEQ ID NO: 18), que introdujo sitios Ncil y Hpall; y cebador FR3: 5'CAG AGA CAA TGC CAA GAA CAG CCT CTA CCT GCA GAT GAG CAG CCT GAG GGC TGA GGA CAC AGC CAT G 3' (SEQ ID NO: 19) , que introdujo sitios Bsu361 y PstI y remueve un sitio Rsal. El plásmido VH#1 resultante fue designado pADN067. VH#2 utilizó el templado pAND067 con los cebadores siguientes: cebador FR2 5' CAT GTA TTG GTT TCG CCA GGC CCC GGG AAA GGG GCT GC 3r (SEQ ID NO: 20), que introdujo un sitio Smal; y cebador FR3: 5' GGG CTG AGG ACA CAG CTG TGT ATT ACT GTG TAA GAG 3' (SEQ ID NO: 21), que introdujo un sitio PvuII. El plásmido VH#2 resultante fue designado pADN071. VH#3 utilizó el templado de pAND067 con los cebadores siguientes: cebador FR2: 5' GTG ACT ATT ACA TGT ATT GGG TGC GCC AGG CCC CGG GAA AGG GGC TGG AG 3' (SEQ ID NO: 22), que introdujo sitios Smal y Hhal; y cebador FR3: 5' GAG GGC TGA GGA CAC AGC TGT GTA TTA CTG CGC AAG AGA GGA GAA TGG TAA C 3' (SEQ ID NO: 23), que introdujo los sitios Pv II y Fspl. El plásmido VH#3 resultante fue designado pAND075. Los vectores de expresión para las cadenas pesadas de huCBEll fueron elaborados mediante la sub-clonación de los fragmentos de dominio variable de cadena pesada Notl-HindIII de 0.44 kb de pAND067, pAND071, o pAND075, y el fragmento HindIII-Notl de 1.21 kb a partir del plásmido pEAG964, que contiene una región constante de IgGl de ser humano, fueron sub-clonados en el sitio Notl del plásmido pCH269 derivado del vector de expresión de EBV pCEP4, produciendo vectores de expresión de cadena pesada pAND069 (VH#1) , pADN073 (VH#2), y pAND077 (VH#3) . VL#1 utilizó el templado de pEAG980 de plásmido con los cebadores siguientes: FR1: cebador 5' CTT GCA AGT GAT AGT GAC CCT GTC TCC CAC CGA TGC AGA CAA GGA TGA TGG AGA CTG GGT CAT C 3' (SEQ ID NO: 24), que removió los sitios Hinfl y Nsil; FR2 : cebador 5f CAT AAT AGA TCA GGA TCT TAG GCG CTT TCC ATG GTT TCT GCT G 3' (SEQ ID NO: 25) , que introdujo sitios Haell y Hhal; y cebador FR3 : 5' GTA GAC AGT AAT AAG TTG CGA AAT CCT CAG GCT GCA GGC TGC TGA TGG TTA GAG TAT AAT CTT GCC CAG ATC 3' (SEQ ID NO: 26), que introdujo sitios Bsu361, Ddel, y PstI. El plásmido "VL#1 resultante fue designado pAND066.

VL#2 utilizó el templado de pAND066 de plásmido con. los cebadores siguientes: F 1: cebador 5' GAT GGA GAC TGG GTC ATC TGG ATA TCA CCT CTG GCA CCT G 3' (SEQ ID NO: 27), que introdujoun sitio EcoRV; y cebador FR3: 5' GAT GGT TAG AGT ATA ATC TGT ACC AGA TCC ACT GCC ACT G 3' (SEQ ID NO: 28), que introdujo un sitio Rsal. El plásmido VL#2 resultante fue designado pAND070. VL#3 utilizó el templado de plásmido pAND066 con los cebadores siguientes: cegador FR1 5' GAT GGA GAC TGG GTC ATC TGG ATA TCA CCT CTG GCA CCT G 3' (SEQ ID NO: 29) , que introdujo un sitio EcoRv; cebador FR2 5f CAA CCT TGT TGC ATA ATA GAT CAG AAG CTT AGG CGC TTT CCC TGG ??? CTG CTG GTA CC 3' (SEQ ID NO: 30) , que introdujo un sitio HindIII y removió los sitios Ncol y Styl ; y el cebador FR3 5' GAT GGT TAG AGT ATA ATC TGT ACC AGA TCC ACT GCC ACT G3' (SEQ ID NO: 31); que introdujo un sitio Rsal. El plásmido VL#3 resultante fue designado pAND074. Vectores de expresión para las cadenas ligeras de huCBEll fueron formados mediante la sub-clonación de los fragmentos de dominio variable de cadena ligera Notl-BglII de 0.41 kb a partir de pAND066, pAND070, o pAND07 y el fragmento de Bell-Notl de 0.68 kb del plásmido pEAG963, que contiene un dominio constante de cadena ligera kappa de ser humano, fueron sub-clonados en el sitio Notl del plásmido derivado del vector de expresión pCEP4 EBV, pCH269, produciendo vectores de expresión de cadena ligera pAND068 (VL#1), pAND072 (VL#2) , y pAND076 (VL#3) . Vectores de expresión fueron co-transfectados en células 293-EBNA y células transfectadas fueron probadas para secreción de anticuerpos y especificidad (las células transfectadas con vector vacio sirvieron como control negativo) . Un análisis Western blot (desarrollado con anticuerpos de cadena pesada y ligera antihumanos) de proteina A inmunoprecipitó a partir de lisado de células enteras y medio acondicionado lo que indica que células transfectadas con huCBEll sintetizadas y secretadas eficientemente cadenas pesadas y ligeras en niveles similares a células transfectadas con chCBEll. Un análisis FACS de células HT-29 que expresan LT-p-R se tiñeron con medio acondicionado a partir de células transfectadas lo que indicó que mAb de huCBEll#3 se une menos que mAbs de huCBE#l y huCBEll#2 en comparación chCBEll (Tabla 1 abajo) en donde huCBE#l (VL#1) ; huCBE#2 (VL#2 con VH#2) y huCBEll#3 (VL#3 con VH#3) . Co-transfecciones mixtas y correspondientes sugieren que la reducción podria ser atribuida a VH#3, que se deferencia de VH#2 en dos residuos de estructura: FR2 F37V y FR3 V97A. Para examinar las contribuciones individuales de cada uno de estos cambios, se construyeron nuevos vectores de expresión de cadena pesada. El plásmido pAND089, la variante F37V de VH#2, fue elaborado mediante la sub-clonación del fragmento Notl-PstI de 311 pares de bases a partir de pAND075, el fragmento PstI-HindIII de 126 pares de bases de pAND071, y el fragmento HindIII-Notl de 1.21 kb del plásmido pEAG964 en el sitio Notl del plásmido derivado del vector de expresión pCEP4 EBV, pCH269. El plásmido pAND090, la variante V93A de VH#2, fue elaborado mediante la sub-clonación del fragmento Notl-PstI de 311 pares de bases de pAND0717 el fragmento PstI-HindIII de 126 pares de bases de pAND075, y el fragmento HindIII-Notl de 1.21 kb del plásmido pEAG964 en el sitio Wotl del plásmido derivado de vector de expresión pCEP4 EBV, pCH269. Estas cadenas pesadas quiméricas H2/H3 fueron co-transfectadas en células de 293-EBNA con VL#2 o VL#3. Un análisis FACS indicó que la variante V93A H2 restauró la unión LT-ß-? cuando fue aparada con VL#3 (Tabla 1, supra) . El acoplamiento de pAND076 y pAND090 fue designado huCBEll#4 (Tabla 1, supra) . Co-transfecciones de células 293-EBNA con chCBEll y huCBEll versiones #1-4 fueron incrementadas y se cosechó el medio acondicionado. El anticuerpo fue purificado en Protein A-Sepharose. mAbs purificados fueron ensayados para actividad. TABLA 1. Tinción FACS de células HT-29 por chCBEll y huCBEll Cadena Pesada Cadena Ligera Con relación a MFI ChCBEll pEAG982 pEAG983 1.00 HuCBEll#1 PAMD068 pAND069 1.00 HuCBEll#2 pAND072 pAND073 1.00 HuCBEll#3 pAND076 pAND077 0.62 L2/H3 pAND072 p7AND077 0.42 L3/H2 pAND076 pAD073 1.00 L2/F37V H2 pAND072 pAND089 0.65 L2/V93A H2 pAND072 pAND090 0.75 L3/F37V H2 pAND076 pAND089 0.80 HuCBEll#4 pANDO76 pAD090 1.00 El medio acondicionado a partir de células pasa eramente transíectadas fue utilizado para teñir células HT-29 mediante incubación durante 30 minutos en hielo, lavando las células dos veces con amortiguador de FACS (PBS con FBS al 5% y azida de sodio al 0.05%), tiñendo con IgG anti-humana conjugada con PE (H + L) , Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., durante 30 minutos en hielo en amortiguador de FACS, lavando las células dos veces con amortiguador de FACS, y resuspendiendo en amortiguador de FACS para análisis. MFI relativo se refiere a MFI medio normalizado al observador para chCBEll. Los datos muestran el promedio de dos transíecciones independientes. EJEMPLO 3 Agonismo de IL-8 en células A375 mAbs purificados fueron ensayados para determinar su actividad. Los resultados de un ensayo de liberación de IL-8 sobre células de melanoma de ser humano A375 como se muestra en la Figura 1 que mide la cantidad de IL-8 liberado al unirse anticuerpos anti-LT- -R con un LT-^-R expresado en la superficie de células de melanoma de ser humano A375. Las células A375 fueron colocadas en platos a 10°/mi en placas de 96 pozos que contenían ya sea anticuerpos solubles o bien anticuerpos capturados en pozos revestidos con IgG Fe antihumana de cabra (Jackson ImmunoResearch Laboratories) . Las placas de cultivo fueron incubadas durante la noche. El medio condicionado fue cosechado y analizado por IL-8 a través de ELISA. EJEMPLO 4 Cítotoxicidad en células WiDr Los resultados de un ensayo de citotoxicidad empleando células de cáncer de colon WiDr con anticuerpos anti-LT-p-R solubles en pozos revestidos con IgG Fe anti-humana que demuestran que los anticuerpos anti-LT-p-R incrementan la toxicidad en células cancerosas como se muestra en la Figura 2. Células WiDr fueron colocadas en placas a 6xl0Vml en presencia de 80 unidades/ml de -huIF -gamma en placas de 96 pozos que contenían ya sea anticuerpos solubles o bien anticuerpos capturados en pozos revestidos con IgG Fe antihumana de cabra (Jackson ImmunoResearch Laboratories) . Las placas de cultivo fueron incubadas durante 5 días. Se agregó MTT durante 4 horas y el precipitado resultante fue disuelto por incubación durante la noche con SDS al 10% en HCl 10 mM y se leyó la densidad óptica en un lector de microplacas. EJEMPLO 5 El anticuerpo que consiste de cadena variable ligera versión 3 de . huCBEll reformada (VL#3) y cadena variable pesada versión 4 de huCBEll reformada, que se conoce como huCBEll#4 o hCBEll, fue elaborado y la línea de células que produce el anticuerpo fue depositada ante A.T.C.C. (designación a depósito de patente ante ATCC PTA-3357) . Las: secuencias de polipéptidos enteras de cada una de las ; cadenas ligeras y pesadas, incluyendo los dominios constantes de conformidad con l siguiente: \ Secuencia de cadena ligera versión 3 de huCBEll madura ;(SEQ ID NO:; 32) : I ' 1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKAGODI SYLSWYOO P GKAPKLLIYY ' 51 ATRLADGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYCLQ HGESPWTFGG ! 101 GTKLEI |RTV AAPSVFIFPP SDEQL SGTA SWCLLNNFY PREA VQW V i 151 DNALQSGNSQ ESVTEQDS D STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG ' 201 LSSPVT SFN RGEC] Las CDRs son subrayadas; la retro-mutación F71Y se presenta en negritas; el dominio constante está entre corchetes. Secuencia de cadena pesada versión 4 de huCBEll madura (SEQ ID NO:, 33) : V37F S49A 1 EVQLVESGGG LV PGGSLRL SCAASGFTFS DYYMYWFRQA PGKGLEWVAT . 51 1SDGGSYTYY PDSVKGRFT1 SRDNA NSLY LOMSSLRAED TAVYYCAREE 101 NGNFYYFDYW GQGTTVTVSS [ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK 151 DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT 201 YICNVNHKPS' NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP 251 KDTLM1SRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN 301 STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ 351 VYTLPPSRDE'LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV 401 LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV HEALHNHYT QKSLSLSPGJ Las CDRs son subrayadas; las retro-mutaciones V37F y; S4 A se presentan en negritas; el dominio constante se encuentra indicado entre corchetes . ' i Ratones desnudos de 6 semanas de edad fueron inyectados de i . 1 manera intraper^toneal con 100 ug de anticuerpo ahti-LFA3 i (1E6), 100 ug de anticuerpo anti-LTBR (h CBEll#4) o ' bien no fueron inyectados (control) . Los animales fueron después I inyectados subcutáneamenté con lxl06 de células de adenocarcinoma de colon WIDR. Los ratones tratados con huCBEll#4 fueron! tratados de nuevo semanalmente con 100 ug de anticuerpo y los' animales mCBEll fueron tratados de nuevo el dia 14 solamente,. El tamaño del tumor fue medido semanalmente y se calculó el .volumen de la esfera tumoral (Figura 3) . Los animales fueron sacrificados cuando sus tumores alcanzaron el volumen de 2.01 cmá (16 mm de diámetro) y su muerte, fue anotada en la gráfica de supervivencia (Figura 4) . - EJEMPLO 6 Ratones desnudos de 6 semanas de edad fueron ya sea inyectados intraperitonealmente con 100 ug de anticuerpo anti-LTBR (huCBEll#4) o bien no fueron inyectados (control) . Los animales fueron después inyectados subcutáneamente con lxlO6 de células de adenocarcinoma de colon WIDR. Los ratones tratados con huCBEll#4 fueron tratados de nuevo semanalmente con 100 ug de huCBEll#4. El tamaño del tumor fue medido semanalmente y el volumen de la esfera de tumor fue calculado . Volúmenes tumorales mostrados representan el promedio de 10 animales de control y 8 animales tratados con huCBEll#4 (Figura 5) . El tratamiento semanal con huCBEll#4 inhibió significativamente la velocidad de crecimiento de tumores WIDR implantados subcutáneamente en ratones desnudo . Los animales tratados con anticuerpo hasta el día 21 siguen presentando velocidades reducidas de crecimiento tumoral dos semanas después de la suspensión del tratamiento. EJEMPLO 7 huCBEll#4 Disminuye el Crecimiento de Tumores de WIDR de Pre-cultívo e Incrementa la Supervivencia en Ratones Desnudos que llevan tumor WIDR 10° células WIDR fueron pre-cultivadas subcutáneamente durante 10 días en ratones desnudos. Los ratones recibieron inyecciones subcutáneas ya sea de. PBS o bien huCBEll#4 semanalmente o bien mCBEll una semana si una semana no. Los pesos de los tumores fueron calculados a partir de las mediciones de ancho y longitud y los animales con tumores mayores de 2000 mg fueron sacrificados, los pesos de sus tumores al momento del sacrificio contribuyeron al promedio estadístico. Barras de error representan el error estándar. Se calcularon los pesos de los tumores empleando la fórmula: (Ancho x Ancho x Longitud) /2- peso del tumor en mg. Los resultados se presentan gráficamente en la Figura 6 y muestran que huCBEll#4 puede reducir el crecimiento de tumores pre-crecidos in vivo. Además, tumores fueron cultivados y tratados de conformidad con lo descrito arriba y se determinó la supervivencia porcentual de los animales. Los resultados se presentan gráficamente en la Figura 7 y muestran que huCBEll#4 puede inducir una supervivencia prolonga in vivo en ratones con tumores pre-crecidos . EJEMPLO 8 Medición de afinidad de anticuerpo Células HT-29 fueron cultivadas en DMEM complementado con L-glutamina, aminoácidos no esenciales, piruvato de sodio y suero bovino fetal al 10%. Las células fueron lavadas una vez con PBS y removidas de la placa mediante incubación a temperatura ambiente durante cinco minutos con PBS más 20 mM EDTA. Las células fueron centrifugadas a 1000 rpm (110 x g) durante cinco minutos y resuspendidas a una densidad de 1 x 107 células/mL en PBS.

Anticuerpo anti-I^R de huCBEll#4 y anti-CD40L humanizado como control negativo fueron diluidos en PBS y se efectuó una dilución 1:4 en serie de 12 puntos hasta obtener un rango de concentraciones de 2.37 pM - 10 uM. 100 L de suspensión de células y 100 pL de dilución de anticuerpos fueron agregados juntos a cada pozo de una placa de microtitulación en fondo de V de 96 pozos. El anticuerpo y las células fueron incubados a una temperatura de 4°C durante 2 horas. La placa fue sometida a centrifugación a 1000 rpm (110 x g) durante 10 minutos a una temperatura de 4°C. El sobrenadante fue desechado y la pella de célula fue lavada con PBS frió seis veces . Se diluyó un conjugado de IgG antihumano de cabra-ficoeritrina (Jackson Immunoresearch) 1:100 en PBS y se agregaron 200 pL a cada pozo. Las células fueron incubadas con este anticuerpo secundario durante una hora a 4°C, centrifugadas de conformidad con lo descrito arriba, y lavadas una vez en PBS frió. Las células fueron después transferidas a tubos de ensayo de poliestireno. La intensidad de fluorescencia fue medida en un instrumento FACS Calibur (Beckton Dickinson) . Los valores de intensidad de fluorescencia medios de la tinción para control de enlace no especifico anti-CD40L fueron representados gráficamente contra la concentración de anticuerpo en Delta Graph. Los valores fueron ajustados a una linea recta y se restaron los valores de enlace no especifico teóricos para cada concentración de anticuerpo a partir de cada punto de dato para la serie de diluciones de huCBEll#4. Estos valores de intensidad de fluorescencia específicos fueron después representados gráficamente contra concentraciones de huCBEll#4 en una escala logarítmica. La curva resultante tiene una forma de campana y es simétrica, y refleja la auto-inhibición del enlace de anticuerpo en altas concentraciones . La mitad izquierda de esta curva fue ajustada a una ecuación de cuatro parámetros para encontrar la afinidad funcional del anticuerpo. El ajuste de curva resultante proporciona un valor EC50 de 60 pM para la unión de uCBEll#4 con células HT-29. Será aparente a los expertos en la materia que varias modificaciones y variaciones pueden efectuarse a los polipéptidos, composiciones y métodos de la invención sin salirse del espíritu y alcance de la invención. Por consiguiente, se contempla que la presente invención abarque las modificaciones y variaciones de esta invención a condición que se encuentren dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas y sus equivalentes.

LISTA DE SECUENCIAS <110> BIOGEN, INC. GARBEE., Ellen LYNE, Paul SALDHANA, Jose W. <120> ANTICUERPOS HUMANIZADOS ANTI—LT—ß-R <130> A100 PCT <150> 60/240,285 <151> 2000-10-13 <150> 60/275,289 <151> 2001-03-13 <150> 60/299,987 <151> 2001-06-21 <160> 33 <170> FastSEQ for Windows Versión 4.0 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> murino <400> 1 Asp lie Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp lie Lys Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys Ser Pro Lys lie Leu lie Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80 Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 2 <211> 120 <212> PRT <213> raurino <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyx Trp Phe Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr He Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 321 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 3 gatattaaga tgacccagtc tccatcatcc ttgtctgcat cggtgggaga cagggtcact 60 atcacttgca aggcgggtca ggacattaaa agctatttaa gctggtacca gcagaaacca 120 tggaaagcgc ctaagatcct gatctattat gcaacaaggt tggcagatgg ggtcccatca 180 agattcagtg gcagtggatc tgggcaagat tatactctaa ccatcagcag cctgcagcct 240 gaggatttcg caacttatta ctgtctacag catggtgaga gcccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 4 Asp lie Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp lie Lys Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys Ala Pro Lys lie Leu lie 35 40 45 Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg P e Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 5 <211> 321 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 5 gatatccaga tgacccagtc tccatcatcc ttgtctgcat cggtgggaga cagggtcact 60 atcacttgca aggcgggtca ggacattaaa agctatttaa gctggtacca gcagaaacca 120 tggaaagcgc ctaagatcct gatctattat gcaacaaggt tggcagatgg ggtcccatca 180 agattcagtg gcagtggatc tggtacagat tatactctaa ccatcagcag cctgcagcct 240 gaggatttcg caacttatta ctgtctacag catggtgaga gcccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 6 <211> 107 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 6 Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp lie Lys Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys Ala Pro Lys lie Leu lie 35 40 45 Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 7 <211> 321 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 7 gatatccaga tgacccagtc tccatcatcc fctgtctgcat cggtgggaga cagggtcact 60 atcacttgca aggcgggtca ggacattaaa agctatttaa gctggtacca gcagaaacca 120 gggaaagcgc ctaagcctct gatctattat gcaacaaggt tggcagatgg ggtcccatca 180 agattcagtg gcagtggatc tggtacagat tatactctaa ccatcagcag cctgcagcct 240 gaggatttcg caacttatta ctgtctacag catggtgaga gcccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 8 Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp lie Lys Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 9 <211> 360 <212> ANA <213> Homo Sapiens <400> 9 gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaggctc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccagact 120 ccgggaaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat 180 ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cagcctctac 240 ctgcagatga gcagcctgag ggctgaggac acagccatgt attactgtgt aagagaggag 300 aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 10 <211> 120 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 10 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr lie Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 11 <211> 360 <212> ANA <213> Homo Sapiens <400> 11 gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaggctc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccaggcc 120 ccgggaaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat 180 ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cagcctctac 240 ctgcagatga gcagcctgag ggctgaggac acagctgtgt attactgtgt aagagaggag 300 aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 12 <211> 120 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 12 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr lie Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 13 <211> 360 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 13 gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaggctc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccaggcc 120 ccgggaaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat 180 ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cagcctctac 240 ctgcagatga gcagcctgag ggctgaggac acagctgtgt attactgtgt aagagaggag 300 aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 14 <211> 120 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr lie Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 15 <211> 360 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 15 gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaggctc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggtt tcgccaggcc 120 ccgggaaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtagtta cacctactat 180 ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa cagcctctac 240 ctgcagatga gcagcctgag ggctgaggac acagctgtgt attactgcgc aagagaggag 300 aatggtaact tttactactt tgactactgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 16 <211> 120 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr lie Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 17 <211> 36 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 17 gcctggaggg tccctgaggc tctcctgtgc agcctc 36 <210> 18 <211> 42 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 18 gtttcgccag actccgggaa aggggctgga gtgggtcgca ac 42 <210> 19 <211> 67 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 19 cagagacaat gccaagaaca gcctctacct gcagatgagc agcctgaggg ctgaggacac 60 agccatg 67 <210> 20 <211> 38 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 20 catgtattgg tttcgccagg ccccgggaaa ggggctgg <210> 21 <211> 36 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 21 gggctgagga cacagctgtg tattactgtg taagag 36 <210> 22 <211> 50 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 22 gtgactatta catgtattgg gtgcgccagg ccccgggaaa ggggctggag 50 <210> 23 <211> 52 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 23 gagggctgag gacacagctg tgtattactg cgcaagagag gagaatggta ac 52 <210> 24 <211> 64 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 24 cttgcaagtg atagtgaccc tgtctcccac cgatgcagac aaggatgatg gagactgggt 60 cate 64 <210> 25 <211> 43 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 25 cataatagat caggatctta ggcgctttcc atggtttctg ctg 43 <210> 26 <211> 72 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 26 gtagacagta ataagttgcg aaatcctcag gctgcaggct gctgatggtt agagtataat 60 cttgcccaga te 72 <210> 27 <211> 40 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 27 gatggagact gggtcatctg gatatcacct ctggcacctg 40 <210> 28 <211> 40 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 28 gatggttaga gtataatctg taccagatcc actgccactg 40 <210> 29 <211> 40 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 29 gatggagact gggtcatctg gatatcacct ctggcacctg 40 <210> 30 <211> 59 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 30 caaccttgtt gcataataga tcagaagctt aggcgctttc cctggtttct gctggtacc 59 <210> 31 <211> 40 <212> ADN <213> Homo Sapiens <400> 31 gatggttaga gtataatctg taccagatcc actgccactg 40 <210> 32 <211> 663 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 32 Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp lie Lys Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly 210 215 220 Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 225 230 235 240 Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly 245 250 255 Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr lie Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr 260 265 270 Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn 275 280 285 Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp 290 295 300 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr 305 310 315 320 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 325 330 335 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 340 345 350 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 355 360 365 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 370 375 380 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 385 390 395 400 Ser Val Val Thr Val" Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr lie 405 410 415 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 420 425 430 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 435 440 445 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 450 455 460 Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 465 470 475 480 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 485 490 495 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 500 505 510 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 515 520 525 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 530 535 540 Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 545 550 555 560 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 565 570 575 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 580 585 590 Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 595 600 605 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 610 615 620 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 625 630 635 640 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 645 650 655 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 660 <210> 33 <211> 4852 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 33 Pro Asp lie Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu 1 5 10 15 Gly Glu Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp lie Lys Ser 20 25 30 Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys Ser Pro Lys lie Leu 35 40 45 lie Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Ser Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Pro Glu Val Gln 100 105 110 Leu "Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys 115 120 125 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Tyr 130 135 140 Trp Phe Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Thr lie 145 150 155 160 Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg 165 170 175 Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr Leu Gln Met 180 185 190 Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg Glu 195 200 205 Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 210 215 220 Val Thr Val Ser Ser Asp Gly Ala Thr Ala Thr Thr Ala Ala Gly Ala 225 230 235 240 Thr Gly Ala Cys Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys 245 250 255 Ala Thr Cys Cys Thr Thr Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Gly 260 265 270 Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Thr Cys Ala 275 280 285 Cys Thr Ala Thr Cys Ala Cys Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly Cys 290 295 300 Gly Gly Gly Thr Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Thr Thr Ala Ala Ala 305 310 315 320 Ala Gly Cys Thr Ala Thr Thr Thr Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Thr 325 330 335 Ala Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Gly 340 345 350 Gly Ala Ala Ala Gly Cys Gly Cys Cys Thr Ala Ala Gly Ala Thr Cys 355 360 365 Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr Thr Ala Thr Gly Cys Ala Ala 370 375 380 Cys Ala Ala Gly Gly Thr Thr Gly Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly 385 390 395 400 Gly Gly Thr Cys Cys Cys Ala Thr Cys Ala Ala Gly Ala Thr Thr Cys 405 410 415 Ala Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly 420 425 430 Gly Gly Cys Ala Ala Gly Ala Thr Thr Ala Thr Ala Cys Thr Cys Thr 435 440 445 Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly 450 455 460 Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Thr Thr Thr Cys Gly 465 470 475 480 Cys Ala Ala Cys Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Thr 485 490 495 Ala Cys Ala Gly Cys Ala Thr Gly Gly Thr Gly Ala Gly Ala Gly Cys 500 505 510 Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly Thr Thr Cys Gly Gly Thr Gly 515 520 525 Gly Ala Gly Gly Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala 530 535 540 Gly Ala Thr Cys Ala Ala Ala Pro Asp lie Lys Met Thr Gln Ser Pro 545 550 555 560 Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys 565 570 575 Ala Gly Gln Asp lie Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 580 585 590 Trp Lys Ala Pro Lys lie Leu lie Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp 595 600 605 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr 610 615 620 Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 625 630 635 640 Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 645 650 655 Glu lie Lys Asp Gly Ala Thr Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly 660 665 670 Ala Cys Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Ala Thr 675 680 685 Cys Cys Thr Thr Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr 690 695 700 Gly Gly Gly Ala Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Thr Cys Ala Cys Thr 705 710 715 720 Ala Thr Cys Ala Cys Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly Cys Gly Gly 725 730 735 Gly Thr Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Gly 740 745 750 Cys Thr Ala Thr Thr Thr Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys 755 760 765 Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Gly Gly Ala 770 775 780 Ala Ala Gly Cys Gly Cys Cys Thr Ala Ala Gly Ala Thr Cys Cys Thr 785 790 795 800 Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr Thr Ala Thr Gly Cys Ala Ala Cys Ala 805 810 815 Ala Gly Gly Thr Thr Gly Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly Gly Gly 820 825 830 Thr Cys Cys Cys Ala Thr Cys Ala Ala Gly Ala Thr Thr Cys Ala Gly 835 840 845 Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly Gly Thr 850 855 860 Ala Cys Ala Gly Ala Thr Thr Ala Thr Ala Cys Thr Cys Thr Ala Ala 865 870 875 880 Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala 885 890 895 Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Thr Thr Thr Cys Gly Cys Ala 900 905 910 Ala Cys Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Thr Ala Cys 915 920 925 Ala Gly Cys Ala Thr Gly Gly Thr Gly Ala Gly Ala Gly Cys Cys Cys 930 935 940 Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly Thr Thr Cys Gly Gly Thr Gly Gly Ala 945 950 955 960 Gly Gly Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala 965 970 975 Thr Cys Ala Ala Ala Pro Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 980 985 990 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Gly 995 1000 1005 Gln Asp lie Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys 1010 1015 1020 Ala Pro Lys lie Leu lie Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val 1025 1030 1035 1040 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 1045 1050 1055 lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 1060 1065 1070 His Gly Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie 1075 1080 1085 Lys Asp Gly Ala Thr Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Cys 1090 1095 1100 Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Ala Thr Cys Cys 1105 1110 1115 1120 Thr Thr Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr Gly Gly 1125 1130 1135 Gly Ala Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Thr Cys Ala Cys Thr Ala Thr 1140 1145 1150 Cys Ala Cys Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly Cys Gly Gly Gly Thr 1155 1160 1165 Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Gly Cys Thr 1170 1175 1180 Ala Thr Thr Thr Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala 1185 1190 1195 1200 Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala 1205 1210 1215 Gly Cys Gly Cys Cys Thr Ala Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Ala 1220 1225 1230 Thr Cys Thr Ala Thr Thr Ala Thr Gly Cys Ala Ala Cys Ala Ala Gly 1235 1240 1245 Gly Thr Thr Gly Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys 1250 1255 1260 Cys Cys Ala Thr Cys Ala Ala Gly Ala Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly 1265 1270 1275 1280 Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys 1285 1290 1295 Ala Gly Ala Thr. Thr Ala Thr Ala Cys Thr Cys Thr Ala Ala Cys Cys 1300 1305 1310 Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys 1315 1320 1325 Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Thr Thr Thr Cys Gly Cys Ala Ala Cys 1330 1335 1340 Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Thr Ala Cys Ala Gly 1345 1350 1355 1360 Cys Ala Thr Gly Gly Thr Gly Ala Gly Ala Gly Cys Cys Cys Gly Thr 1365 1370 1375 Gly Gly Ala Cys Gly Thr Thr Cys Gly Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly 1380 1385 1390 Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys 1395 1400 1405 Ala Ala Ala Pro Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 1410 1415 1420 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp 1425 1430 1435 1440 lie Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 1445 1450 1455 Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser 1460 1465 1470 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser 1475 1480 1485 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly 1490 1495 1500 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Asp 1505 1510 1515 1520 Gly Ala Gly Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly 1525 1530 1535 Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Cys Thr Thr 1540 1545 1550 Ala Gly Thr Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Ala Gly Gly Gly 1555 1560 1565 Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Cys Thr Cys Thr Cys Cys Thr 1570 1575 1580 Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr 1585 1590 1595 1600 Cys Ala Cys Thr Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Thr 1605 1610 1615 Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys 1620 1625 1630 Gly Cys Cys Ala Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Gly Gly Ala Ala Ala 1635 1640 1645 Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys 1650 1655 1660 Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Thr Thr Ala Gly Thr Gly Ala Thr Gly 1665 1670 1675 1680 Gly Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Thr Ala Cys Ala Cys Cys Thr Ala 1685 1690 1695 Cys Thr Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Thr Gly Thr Gly 1700 1705 1710 Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala 1715 1720 1725 Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr Gly Cys 1730 1735 1740 Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Ala Cys 1745 1750 1755 1760 Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys 1765 1770 1775 Thr Gly Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys 1780 1785 1790 Ala Gly Cys Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr 1795 1800 1805 Gly Thr Ala Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Thr Gly 1810 1815 1820 Gly Thr Ala Ala Cys Thr Thr Thr Thr Ala Cys Thr Ala Cys Thr Thr 1825 1830 1835 1840 Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Ala 1845 1850 1855 Gly Gly Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly 1860 1865 1870 Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 1875 1880 1885 Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 1890 1895 1900 Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln 1905 1910 1915 1920 Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr lie Ser Asp Gly Gly 1925 1930 1935 Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser 1940 1945 1950 Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg 1955 1960 1965 Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg Glu Glu Asn Gly Asn 1970 1975 1980 Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 1985 1990 1995 2000 Ser Asp Gly Ala Gly Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr 2Q05 2010 2015 Gly Gly Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Cys 2020 2025 2030 Thr Thr Ala Gly Thr Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Ala Gly 2035 2040 2045 Gly Gly Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Cys Thr Cys Thr Cys 2050 2055 2060 Cys Thr Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala 2065 2070 2075 2080 Thr Thr Cys Ala Cys Thr Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr 2085 2090 2095 Ala Thr Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr Gly Gly Thr Thr 2100 2105 2110 Thr Cys Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys Cys Cys Gly Gly Gly Ala 2115 2120 2125 Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly 2130 2135 2140 Thr Cys Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Thr Thr Ala Gly Thr Gly Ala 2145 2150 2155 2160 Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Thr Ala Cys Ala Cys Cys 2165 2170 2175 Thr Ala Cys Thr Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Thr Gly 2180 2185 2190 Thr Gly Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys 2195 2200 2205 Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr 2210 2215 2220 Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr 2225 2230 2235 2240 Ala Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly 2245 2250 2255 Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys 2260 2265 2270 Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr 2275 2280 2285 Gly Thr Gly Thr Ala Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala 2290 2295 2300 Thr Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Thr Thr Thr Ala Cys Thr Ala Cys 2305 2310 2315 2320 Thr Thr Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys 2325 2330 2335 Ala Ala Gly Gly Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Cys Ala Cys 2340 2345 2350 Cys Gly Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Pro Glu Val Gln Leu Val 2355 2360 2365 Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser 2370 2375 2380 Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Tyr Trp Phe 2385 2390 2395 2400 Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr lie Ser Asp 2405 2410 2415 Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 2420 2425 2430 lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser 2435 2440 2445 Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Glu Glu Asn 2450 2455 2460 Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 2465 2470 2475 2480 Val Ser Ser Asp Gly Ala Gly Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Thr Gly 2485 2490 2495 Gly Thr Gly Gly Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly 2500 2505 2510 Gly Cys Thr Thr Ala Gly Thr Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly 2515 2520 2525 Ala Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Cys Thr Cys 2530 2535 2540 Thr Cys Cys Thr Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly 2545 2550 2555 2560 Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Thr Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly Ala 2565 2570 2575 Cys Thr Ala Thr Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr Gly Gly 2580 2585 2590 Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys Cys Cys Gly Gly 2595 2600 2605 Gly Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly 2610 2615 2620 Gly Gly Thr Cys Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Thr Thr Ala Gly Thr 2625 2630 2635 2640 Gly Ala Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Thr Ala Cys Ala 2645 2650 2655 Cys Cys Thr Ala Cys Thr Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly 2660 2665 2670 Thr Gly Thr Gly Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Gly Ala Thr Thr Cys 2675 2680 2685 Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys Ala 2690 2695 2700 Ala Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr 2705 2710 2715 2720 Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys 2725 2730 2735 Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly 2740 2745 2750 Ala Cys Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala 2755 2760 2765 Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly 2770 2775 2780 Ala Ala Thr Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Thr Thr Thr Ala Cys Thr 2785 2790 2795 2800 Ala Cys Thr Thr Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly 2805 2810 2815 Cys Cys Ala Ala Gly Gly Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Cys 2820 2825 2830 Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Pro Glu Val Gln 2835 2840 2845 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg 2850 2855 2860 Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Tyr 2865 2870 2875 2880 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Thr lie 2885 2890 2895 Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg 2900 2905 2910 Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met 2915 2920 2925 Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu 2930 2935 2940 Glu Asn Gly Asn Phe Tyx Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 2945 2950 2955 2960 Val Thr Val Ser Ser Asp Gly Ala Gly Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys 2965 2970 2975 Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly 2980 2985 2990 Ala Gly Gly Cys Thr Thr Ala Gly Thr Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr 2995 3000 3005 Gly Gly Ala Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Cys 3010 3015 3020 Thr Cys Thr Cys Cys Thr Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys 3025 3030 3035 3040 Thr Gly Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Thr Thr Thr Cys Ala Gly Thr 3045 3050 3055 Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr 3060 3065 3070 Gly Gly Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys Cys Cys 3075 3080 3085 Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly 3090 3095 3100 Thr Gly Gly Gly Thr Cys Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Thr Thr Ala 3105 3110 3115 3120 Gly Thr Gly Ala Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Thr Ala 3125 3130 3135 Cys Ala Cys Cys Thr Ala Cys Thr Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Cys 3140 3145 3150 Ala Gly Thr Gly Thr Gly Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Gly Ala Thr 3155 3160 3165 Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala 3170 3175 3180 Cys Ala Ala Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys 3185 3190 3195 3200 Cys Thr Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala 3205 3210 3215 Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala 3220 3225 3230 Gly Gly Ala Cys Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr 3235 3240 3245 Thr Ala Cys Thr Gly Cys Gly Cys Ala Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly 3250 3255 3260 Ala Gly Ala Ala Thr Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Thr Thr Thr Ala 3265 3270 3275 3280 Cys Thr Ala Cys Thr Thr Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly 3285 3290 3295 Gly Gly Cys Cys Ala Ala Gly Gly Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Gly 3300 3305 3310 Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Pro Glu 3315 3320 3325 Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser 3330 3335 3340 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr 3345 3350 3355 3360 Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 3365 3370 3375 Thr lie Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 3380 3385 3390 Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 3395 3400 3405 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 3410 3415 3420 Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 3425 3430 3435 3440 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Asp Gly Cys Cys Thr Gly Gly Ala Gly 3445 3450 3455 Gly Gly Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Cys Thr Cys Thr Cys 3460 3465 3470 Cys Thr Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Ser Glu Glrt Asp 3475 3480 3485 Gly Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Ala Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly 3490 3495 3500 Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr 3505 3510 3515 3520 Gly Gly Gly Thr Cys Gly Cys Ala Ala Cys Ser Glu Gln Asp Cys Ala 3525 3530 3535" Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala 3540 3545 3550 Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly 3555 3560 3565 Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Gly 3570 3575 3580 Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys Ala Gly Cys Cys Ala Thr 3585 3590 3595 3600 Gly Asp Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys 3605 3610 3615 Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys Cys Cys Gly Gly Gly Ala Ala Ala 3620 3625 3630 Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Asp Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala 3635 3640 3645 Gly Gly Ala Cys Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr 3650 3655 3660 Thr Ala Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Ala Gly Ala Gly Asp Gly Thr 3665 3670 3675 3680 Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr 3685 3690 3695 Gly Gly Gly Thr Gly Cys Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys Cys Cys 3700 3705 3710 Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly 3715 3720 3725 Asp Gly Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys 3730 3735 3740 Ala Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Cys 3745 3750 3755 3760 Gly Cys Ala Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Thr Gly 3765 3770 3775 Gly Thr Ala Ala Cys Asp Cys Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly Thr Gly 3780 3785 3790 Ala Thr Ala Gly Thr Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Thr Cys Thr Cys 3795 3800 3805 Cys Cys Ala Cys Cys Gly Ala Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Ala Ala 3810 3815 3820 Gly Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Gly Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly 3825 3830 3835 3840 Gly Thr Cys Ala Thr Cys Asp Cys Ala Thr Ala Ala Thr Ala Gly Ala 3845 3850 3855 Thr Cys Ala Gly Gly Ala Thr Cys Thr Thr Ala Gly Gly Cys Gly Cys 3860 3865 3870 Thr Thr Thr Cys Cys Ala Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Cys 3875 3880 3885 Thr Gly Asp Gly Thr Ala Gly Ala Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Ala 3890 3895 3900 Ala Gly Thr Thr Gly Cys Gly Ala Ala Ala Thr Cys Cys Thr Cys Ala 3905 3910 3915 3920 Gly Gly Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala 3925 3930 3935 Thr Gly Gly Thr Thr Ala Gly Ala Gly Thr Ala Thr Ala Ala Thr Cys 3940 3945 3950 Thr Thr Gly Cys Cys Cys Ala Gly Ala Thr Cys Asp Gly Ala Thr Gly 3955 3960 3965 Gly Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Cys Ala Thr Cys Thr Gly 3970 3975 3980 Gly Ala Thr Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Cys Ala 3985 3990 3995 4000 Cys Cys Thr Gly Asp Gly Ala Thr Gly Gly Thr Thr Ala Gly Ala Gly 4005 4010 4015 Thr Ala Thr Ala Ala Thr Cys Thr Gly Thr Ala Cys Cys Ala Gly Ala 4020 4025 4030 Thr Cys Cys Ala Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Thr Gly Asp Gly Ala 4035 4040 4045 Thr Gly Gly Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Cys Ala Thr Cys 4050 4055 4060 Thr Gly Gly Ala Thr Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly 4065 4070 4075 4080 Cys Ala Cys Cys Thr Gly Asp Cys Ala Ala Cys Cys Thr Thr Gly Thr 4085 4090 4095 Thr Gly Cys Ala Thr Ala Ala Thr Ala Gly Ala Thr Cys Ala Gly Ala 4100 4105 · 4110 Ala Gly Cys Thr Thr Ala Gly Gly Cys Gly Cys Thr Thr Thr Cys Cys 4115 4120 4125 Cys Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Thr Ala 4130 4135 4140 Cys Cys Asp Gly Ala Thr Gly Gly Thr Thr Ala Gly Ala Gly Thr Ala 4145 4150 4155 4160 Thr Ala Ala Thr Cys Thr Gly Thr Ala Cys Cys Ala Gly Ala Thr Cys 4165 4170 4175 Cys Ala Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Thr Gly Pro Asp lie Gln Met 4180 4185 4190 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr 4195 4200 4205 lie Thr Cys Lys Ala Gly Gln Asp lie Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr 4210 4215 4220 Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Ala Thr 4225 4230 4235 4240 Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 4245 4250 4255 Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala 4260 4265 4270 Thr Tyr Tyr Cys leu Gln His Gly Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly 4275 4280 4285 Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 4290 4295 4300 He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 4305 4310 4315 4320 Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp 4325 4330 4335 Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr 4340 4345 4350 Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 4355 4360 4365 Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val 4370 4375 4380 Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly 4385 4390 4395 4400 Glu Cys Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 4405 4410 4415 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 4420 4425 4430 Ser Asp Tyr Tyr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 4435 4440 4445 Glu Trp Val Ala Thr He Ser Asp Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro 4450 4455 4460 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 4465 4470 4475 4480 Ser Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 4485 4490 4495 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Glu Asn Gly Asn Phe Tyr Tyr Phe Asp Tyr 4500 4505 4510 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 4515 4520 4525 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 4530 4535 4540 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 4545 4550 4555 4560 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 4565 4570 4575 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 4580 4585 4590 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr lie Cys Asn Val 4595 4600 4605 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 4610 4615 4620 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 4625 4630 4635 4640 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 4645 4650 4655 Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 4660 4665 4670 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 4675 4680 4685 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 4690 4695 4700 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 4705 4710 4715 4720 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 4725 4730 4735 Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 4740 4745 4750 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 4755 4760 4765 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala 4770 4775 4780 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 4785 4790 4795 4800 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 4805 4810 4815 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 4820 4825 4830 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 4835 4840 4845 Leu Ser Pro Gly 4850

Claims

REIVINDICACIONES Un anticuerpo humanizado anti receptor de linfotoxina-beta (???-ß-R) cuyas regiones de determinación complementarias de cadena ligera son definidas por los residuos de aminoácidos 24 a 34, 50 a 56, y 89 a 97 de SEQ ID NO: 1, y cuyas regiones de determinación complementarias de cadena pesada son definidas por los residuos de aminoácidos 31 a 35, 50 a 66 y 99 a 109 de SEQ ID NO: 2., y en donde el anticuerpo comprende por lo menos uno de los residuos siguientes en su cadena ligera: K3, W41, 146, Q69 e Y71; o por lo menos uno de los residuos siguientes en su cadena pesada: F37, T40, A49, M89 y V93 (convención de numeración de Kabat) . Un anticuerpo humanizado anti receptor de linfotoxina-beta (???-ß-R) cuyas regiones de determinación complementarias de cadena ligera son definidas por los residuos de aminoácidos 24 a 34, 50 a 56, y 89 a 97 de SEQ ID NO: 1, y cuyas regiones de determinación complementarias de cadena pesada son definidas por los residuos de aminoácidos 31 a 35, 50 a 66 y 99 a 109 de SEQ ID NO: 2, y en donde el anticuerpo comprende el residuo Y71 en su cadena ligera (convención de numeración de Kabat) . Un anticuerpo humanizado anti receptor de linfotoxina-beta (LT^-R) cuyas regiones de determinación complementarias de cadena ligera son definidas por los residuos de aminoácidos 24 a 34, 50 a 56, y 89 a 97 de SEQ ID NO: 1, y cuyas regiones de determinación complementarias de cadena pesada son definidas por los residuos de aminoácidos 31 a 35, 50 a 66 y 99 a 109 de SEQ ID NO: 2, y en donde el anticuerpo comprende los residuos F37 a A49 en su cadena pesada (convención de numeración de Kabat) . El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo comprende una secuencia de dominio variable de cadena ligera definida por los residuos de aminoácidos 1 a 107 de SEQ ID NO: 8. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada definida por los residuos de aminoácidos 1 a 120 de SEQ ID NO: 16. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 4, en donde el anticuerpo comprende además una secuencia de dominio variable de cadena pesada definida por los residuos de aminoácidos 1 a 120 de SEQ ID NO: 16. Un anticuerpo que comprende las mismas secuencias de polipéptidos de cadena pesada y ligera que un anticuerpo producido por la linea de células E46.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3357) o linea de células E77.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3765) . 8. El anticuerpo de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde el anticuerpo conserva sustancialmente las propiedades de unión del anticuerpo de origen. 9. El anticuerpo de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde el anticuerpo está unido además a una inmunotoxina. 10. El anticuerpo de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde el anticuerpo está unido adicionalmente a un fármaco quimioterapéutico . 11. Una composición que comprende un anticuerpo de cualesquiera de las reivindicaciones 1-7 y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 12. Un método para el tratamiento o la reducción del avance, severidad o efectos de neoplasia en un ser humano, que comprende la administración de la composición de la reivindicación 11. 13. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para la cadena ligera de un anticuerpo producido por la línea de células E46.4 ((designación de depósito de patente ATCC PTA-3357) o una línea de células E77.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3765) . 14. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para la cadena pesada de un anticuerpo producido por la linea de células E46.4 ((designación de depósito de patente ATCC PTA-3357) o linea de células E77.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3765) . 15. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para residuos 1 a 107 de SEQ ID NO: 8. 16. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia codificadora para residuos 1 a 120 de SEQ ID NO: 16. 17. Una célula de linea de células E46.4 (designación de depósito de patente ATCC PTA-3357) o linea de células E77.4 (designación de depósito de patente ATCC 3765).