MXPA02008112A - Arilpiperazinas y arilpiperidinas y su uso agentes inhibidores de metaloproteinasa. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a compuestos de la formula (I) utiles como inhibidores de metaloproteinasa, especialmente como inhibidores de MMP 13. (ver formula).

Description

ARILPIPERAZ NAS Y ARILPIPERIDI AS Y SU USO COMO AGENTES INHIBIDORES DE META OPROTEINASA Campo de la Invención La presente invención se refiere a compuestos útiles en la inhibición de metaloproteinasas y en particular a formulaciones farmacéuticas que comprenden éstas, así como a su uso.

/Antecedentes de la Invención Los compuestos de esta invención son inhibidores de una o más enzimas de metaloproteinasa. Las metaloproteinasas son una superfamilia de proteinasas (enzimas) cuyos miembros en años recientes se han incrementado dramáticamente. Con base en las consideraciones estructurales y funcionales, estas enzimas han sido clasificadas en familias y subfamilias como se describe en N.M. Hooper (1994) FEBS Letters 354:1-6. Los ejemplos de las metaloproteinasas incluyen las metaloproteinasas de matriz (MMP) tales como las colagenasas (MMP1, MMP8, MMP13) , las gelatinasas (MMP2, MMP9) , las estromelisinas (MMP3, MMP10, MMPll), matrilisina (MMP7) , metaloelastasa (MMP12) , enamelisina (MMP19) , las MT-MMPs (MMP14, MMP15, MMP16, MMP17) ; la reprolisina o adamalisina o la familia de MDC la cual incluye las secretasas y las Bef.140443 sheddasas tales como las enzimas convertidoras de TNF (ADAM10 y TACE) ; la familia de astacina la cual incluye enzimas tales como la proteinasa que procesa el procolágeno (PCP) ; y otras metoloproteinasas tales como agrecanasa, la familia de la enzima convertidora de la endotelina y la familia de la enzima convertidora de la angiotensina. Las metaloproteinasas se cree que van a ser importantes en una gran cantidad de procesos de enfermedades fisiológicas que involucran la remodelación del tejido tales como el desarrollo embriónico, la formación de los huesos y la remodelación uterina durante la menstruación. Esto está basado en la capacidad de las metaloproteinasas para segmentar una gama amplia de substratos de matriz tales como el colágeno, proteoglicano y fibronectina. Las metaloproteinasas también se cree que van a ser importantes en el procesamiento, o secreción, de mediadores celulares biológicos importantes, tales como el factor de necrosis del tumor (TNF) ; y el procesamiento de proteólisis pos traduccional, o la difusión, de proteínas de la membrana importantes biológicamente, tales como el receptor de IgE CD23 de afinidad baja (para una lista más completa véase N. M. Hooper et al . , (1997) Biochem J. 321:265-279) . Las metaloproteinasas han sido asociadas con muchas condiciones de enfermedad. La inhibición de la actividad de una o más metaloproteinasas puede ser de mucho beneficio en estas condiciones de enfermedad, por ejemplo: varias enfermedades inflamatorias y alérgicas tales como, la inflamación de las articulaciones (especialmente artritis reumatoide, osteoartritis y gota) , la inflamación del tracto gastrointestinal (especialmente la enfermedad inflamatoria del intestino, la colitis ulcerativa y la gastritis), la inflamación de la piel (especialmente psoriasis, eccema, dermatitis) ; en la metástasis o invasión tumorígena; en la enfermedad asociada con la degradación no controlada de la matriz extracelular tal como la osteoartritis; en la enfermedad de resorción de los huesos (tal como la osteoporosis y la enfermedad de Paget) ; en las enfermedades asociadas con la angiogénesis aberrante; la remodelación de colágeno mejorada asociada con la diabetes, la enfermedad periodontal (tal como la gingivitis) , la ulceración corneal, la ulceración de la piel, las condiciones posoperativas (tales como la anastomosis colónica) y el sanado de las heridas dérmicas; las enfermedades de desmielinación de los sistemas nervioso periférico y central (tales como la esclerosis múltiple) ; la enfermedad de Alzheimer; la remodelación de la matriz extracelular observada en las enfermedades cardiovasculares tales como restenosis y ateroesclerosis; y las enfermedades pulmonares obstructivas crónicas, COPD (por ejemplo, el papel de los MMPs tales como MMP12 se describió en Anderson & Shinagawa, 1999, Current Opinión in Anti-inflammatory and Immunomodulatory Investigational Drugs, 1 (1) : 29-38. Ya se conocen varios inhibidores de metaloproteinasas; diferentes clases de compuestos pueden tener diferentes grados de potencia y selectividad para inhibir varias metaloproteinasas. Se ha descubierto una nueva clase de compuestos que son inhibidores de las metaloproteinasas y son de interés particular en la inhibición de la MMP-13, asi como la MMP-9. Los compuestos de esta invención tienen propiedades farmacocinéticas y/o de potencia benéficas. La MMP13, o colagenasa 3, fue clonada inicialmente a partir de una biblioteca de ADNc derivada de un tumor del pecho [J. M. P. Freije et al. (1994) Journal of Biological Chemistry 269(24) : 16766-16773] . El análisis de PCR-ARN de los ARNs de una amplia gama de tejidos indicó que la expresión de la MMP13 estuvo limitada a los carcinomas del pecho cuando la misma no se encontró en los fibroadenomas del pecho, glándula mamaria normal o en condiciones de reposo, placenta, hígado, ovario, útero, próstata o glándula parótida o en las lineas celulares del cáncer del pecho (T47-D, MCF-7 y ZR75-1) . De manera subsiguiente a esta observación la MMP13 se ha detectado en los queratinocitos epidérmicos transformados [H. Johansson et al., (1997) Cell Growth Differ. 8 (2) :243-250] , los carcinomas celulares escamosos [N. Johansson et al., (1997) Am. J. Pathol. 151 (2) :499-508] y los tumores epidérmicos [K. Airóla et al., (1997) J. Invest. Dermatol. 109 (2) :225-231] . Estos resultados son sugestivos de que la MMP13 es secretada por las células epiteliales transformadas y puede estar involucrada en la degradación de la matriz extracelular y la interacción de la célula-matriz asociada con la metástasis especialmente cuando se observa en las lesiones del cáncer del pecho invasivas y en el crecimiento epitelial maligno en la carcinogénesis de la piel. Los datos publicados recientemente implican que la MMP13 desempeña un papel en el cambio de otros tejidos conectivos. Por ejemplo, de manera consistente con la especificidad del substrato de MMP13 y la preferencia para degradar el colágeno del tipo II [P. G. Mitchell et al., (1996) J. Clin. Invest. 97 (3) :761-768; V. Knauper et al., (1996) The Biochemical Journal 271:1544-1550], la MMP13 se tiene la teoría que desempeña un papel durante la osificación primaria y la remodelación del esqueleto [M. Stahle-Backdahl et al., (1997) Lab. Invest. 76(5) :717-728; N. Johansson et al., (1997) Dev. Dyn. 208 (3) :387-397] , en las enfermedades destructivas de las articulaciones tales como la artritis reumatoide y la osteo-artritis [D. ernicke et al., (1996) J. Rheumatol. 23:590-595; P. G. Mitchell et al., (1996) J. Clin. Invest. 97 (3) :761-768; O. Lindy et al., (1997) Artritis Rheum 40(8) :1391-1399]; y durante el aflojamiento aséptico de los reemplazos de la cadera [S. Imai et al., (1998) J. Bone Joint Surg. Br. 80 (4) :701-710] . La MMP13 también ha sido implicada en la periodontitis de adulto crónica cuando la misma ha sido localizada en el epitelio del tejido gingival humano de la mucosa inflamada crónicamente [V. J. Uitto et al., (1998) Am. J. Pathol 152 (6) :1489-1499] y en la remodelación de la matriz del colágeno en las heridas crónicas [M. Vaalamo et al., (1997) J. Invest. Dermatol. 109(1) :96-101] . La MMP9 (Gelatinasa B; la Colagenasa del Tipo IV de 92 kDa; la Gelatinasa de 92 kDa) es una proteína secretada que fue purificada primero, luego clonada y secuenciada, en 1989 (S.M. Wilhel et al (1989) J. Biol. Chem. 264 (29) :17213-17221. La errata publicada en J. Biol. Chem. (1990) 265 (36) :22570) . Una revisión reciente de la MMP9 proporciona una fuente excelente para la información y las referencias detalladas sobre esta proteasa: T.H. Vu & Z. Werb (1998) (En: Matrix Metalloproteinases. 1998. Editada por W.C. Parks & R.P. Mecham. pp.115-148. Academic Press. ISBN 0-12-545090-7). Los siguientes puntos son extraídos de esta revisión por T.H. Vu & Z. Werb (1998) .

La expresión de la MMP9 está restringida normalmente a pocos tipos de células, incluyendo trofoblastos, osteoclastos, neotrófilos y macrófagos. Sin embargo, su expresión puede ser inducida en estas mismas células y en otros tipos de células por varios mediadores, incluyendo la exposición de las células a los factores de crecimiento o citocinas. Estos son los mismos mediadores implicados frecuentemente en el inicio de una respuesta inflamatoria. Como con otras MMPs secretadas, la MMP9 es liberada como una pro-enzima inactiva la cual es desdoblada subsiguientemente para formar la enzima activa enzimáticamente. Las proteasas requeridas para esta activación in vivo no son conocidas. El balance de la MMP9 activa contra la enzima inactiva es regulado adicionalmente in vivo por la interacción con el TIMP-1 (Inhibidor del Tejido de las Metaloproteinasas-1) , una proteína que está presente de manera natural. El TIMP-1 se une a la región C-terminal de la MMP9, conduciendo a la inhibición del dominio catalítico de la MMP9. El balance de la expresión- inducida de la Pro-MMP9, el desdoblamiento de la Pro-MMP9 a la MMP9 activa y la presencia del TIMP-1, se combinan para determinar la cantidad de la MMP9 activa catalíticamente la cual está presente en un sitio local. La MMP9 activa proteolíticamente los substratos que incluyen gelatina, elastina, y colágenos del Tipo IV y del Tipo V naturales; la misma no tiene actividad contra el colágeno del Tipo I natural, proteoglicanos o lamininas. Ahora existe un conjunto creciente de datos que implican que la MMP9 desempeña algunos papeles en varios procesos fisiológicos y patológicos. Los papeles fisiológicos incluyen la invasión de los trofoblastos embriónicos a través del epitelio uterino en las etapas iniciales del implante embriónico; algún papel en el crecimiento y desarrollo de los huesos; y la migración de las células inflamatorias desde la vasculatura hacia los tejidos. La expresión de la MMP9 incrementada se ha observado en ciertas condiciones patológicas, por lo cual se implica a la MMP9 en procesos de enfermedades tales como la artritis, metástasis del tumor, enfermedad de Alzheimer, Esclerosis Múltiples, y ruptura de la placa en la ateroesclerosis que conduce a condiciones coronarias agudas tales como Infarto al Miocardio.

WO-98/05635 reivindica los compuestos de la fórmula general B-X- (CH2) n-CHR1- (CH2) m-COY como compuestos que tienen actividad inhibidora de la MMP y TNF.

Descripción Detallada de la Invención Ahora se han descubierto compuestos que son inhibidores potentes de MMP13 y tienen perfiles de actividad deseables . En un primer aspecto de la invención se proporcionan ahora los compuestos de la fórmula I en donde B representa un grupo fenilo monosubstituido en las posiciones 3 o 4 por halógeno o trifluorometilo, o disubstituido en las posiciones 3 y 4 por halógeno (el cual puede ser el mismo o diferente) ; o B representa un grupo 2-piridilo o 2-piridiloxi monosubstituido en las posiciones 4, 5 o 6 por halógeno, trifluorometilo, ciano o alquilo con Cl-C4; o B representa un grupo 4-pirimidinilo opcionalmente substituido en la posición 6 por halógeno o alquilo Cl-4; X representa un átomo de carbono o nitrógeno; Rl representa un grupo trimetil-1-hidantoína alquilo C2-4 o trimetil-3-hidantoína alquilo C2-4; fenilo o fenilalquilo C2-4 monosubstituido en las posiciones 3 o 4 por halógeno, trifluorometilo, tio o alquilo Cl-3 o alcoxi Cl-3; fenil-S02NHC alquilo 2-4; 2-piridilo o 2-piridilo alquilo C2-4; 3-piridilo o 3-piridilo alquilo C2-4; 2-pirimidina-SCH2CH2; 2-o 4-pirimidinilo alquilo C2-4 monosubstituido opcionalmente por uno de halógeno, trifluorometilo, alquilo Cl-3, alquiloxi Cl-3, 2-pirazinilo opcionalmente substituido por halógeno o 2-pirazinilo alquilo C2-4 opcionalmente substituido por halógeno; Cualesquiera grupos de alquilo descritos anteriormente pueden ser de cadena recta o ramificados.

Los compuestos preferidos de la invención son aquellos en donde aplican cualquiera de uno o más de los siguientes puntos: B representa 4-clorofenilo, 4-fluorofenilo, 4-bromofenilo o 4-trifluorofenilo; 2-piridilo o 2-piridiloxi monosubstituido en las posiciones 4 o 5 tales como 5-cloro-2-piridilo, 5-bromo-2-piridilo, 5-fluoro-2-piridilo, 5-trifluorofr?etil-2-piridilo, 5-ciano-2-piridilo, 5-metil-2- píridilo; especialmente 4-fluorofenilo, 5-cloro-2-piridilo o 5-trifluorometil-2-piridilo; X representa un átomo de nitrógeno; Rl es fenilmetilo (o bencilo) , feniletilo o (fenetilo), fenilpropilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 3-piridilo, 2-piridilpropilo, 2- o 4-pirimidiniletilo (opcionalmente monosubstituido por flúor) , 2- o 4-piri idinilpropilo, 2- (2-pirimidinil) propilo (monosubstituido opcionalmente por flúor) ; especialmente fenilmetilo, feniletilo, 2-pirimidinilpropilo, 2- (2-pirimidinil) propilo (monosubstituido opcionalmente por flúor) o 5-fluoro-2-pirimidiniletilo . Para los compuestos de la fórmula I, un subgrupo particular está representado por los compuestos en donde B es un grupo fenilo monosubstituido en las posiciones 3 o 4 por halógeno o trifluorometilo, o disubstituido en las posiciones 3 y 4 por halógeno (el cual puede ser el mismo o diferente) ; o B es un grupo 2-piridilo o 2-piridiloxi monosubstituido en las posiciones 5 o 6 por halógeno, trifluorometilo o ciano; o B es un grupo 4-pirimidinilo opcionalmente substituido en la posición 6 por halógeno o alquilo Cl-4; X es un átomo de carbono o nitrógeno; Rl es un un grupo trimetil-1-hidantoína alquilo C2-4 o trimetil-3-hidrantoína alquilo C2-4; o Rl es un fenilo o fenilalquilo C2-4 monosubstituido en las posiciones 3 o 4 por halógeno, trifluorometilo, tio o alquilo Cl-3 o alcoxi Cl-3; o Rl es fenil-S02NH alquilo C2-4; o Rl es 2-piridilo o 2-piridilo alquilo C2-4; o Rl es 3-piridilo o 3-piridilo alquilo C2-4; o Rl es 2-pirimidina-SCH2CH2; o Rl es 2- o 4-pirimidinilo alquilo C2-4 monosubstituido opcionalmente por uno de halógeno, trifluorometilo, alquilo Cl-3, alquiloxi Cl-3, 2-pirazinilo o 2-pirazinilo alquilo C2-4; cualquier grupo alquilo puede ser de cadena recta o ramificado. Se apreciará que los substituyentes particulares -y el número de substituyentes sobre B y/o Rl son seleccionados para evitar estéricamente combinaciones indeseables. Cada compuesto ejemplificado representa un aspecto particular e independiente de la invención. En donde existen centros activos ópticamente en los compuestos de la fórmula I, se describen la totalidad de las formas activas ópticamente individuales y las combinaciones de estas como modalidades específicas individuales de la invención, así como sus racematos correspondientes. Los racematos pueden ser separados en las formas activas ópticamente individuales utilizando procedimientos conocidos (cotéjese Advanced Organic Chemistry: 3/a. Edición: autor J.

March, pl04-107) incluyendo por ejemplo la formación de derivados diastereoméricos que tienen especies auxiliares activas ópticamente, convenientes, seguido por la separación y luego el desdoblamiento de las especies auxiliares. Se apreciará que los compuestos de acuerdo con la invención pueden contener uno o más átomos de carbono substituidos asimétricamente. La presencia de uno o más de estos centros asimétricos (centros quirales) en un compuesto de la Fórmula I pueden ocasionar estereoisómeros, y en cada caso la invención se va a entender que se extiende a la totalidad de tales estereoisómeros, incluyendo los enantiómeros y los diastereómeros, y las mezclas que incluyen mezclas racémicas de los mismos. En donde existen los tautómeros en los compuestos de la fórmula I, se describen todas las formas tautoméricas individuales y las combinaciones de estas como modalidades específicas individuales de la invención. - Como se describió previamente, los compuestos de la invención son inhibidores de metaloproteinasa, en particular los mismos son inhibidores de MMP13. Cada una de las indicaciones anteriores para los compuestos de la fórmula I representa una modalidad independiente y particular de la invención. Aunque no se desea que sean limitados por consideraciones teóricas, los compuestos de la invención se cree que muestran una inhibición selectiva para cualquiera de las indicaciones anteriores con relación a cualquier actividad inhibidora de MMP1, a manera de ejemplo no limitativo los mismos pueden mostrar una selectividad de 100-1000 veces sobre cualquier actividad inhibidora de MMP1. Ciertos compuestos de la invención son de uso particular como inhibidores de agrecanasa, es decir inhibidores de la degradación del agrecano. Ciertos compuestos de la invención son de uso particular como inhibidores de MMP9 y/o MMP12. Los compuestos de la invención pueden ser provistos como sales farmacéuticamente aceptables. Estas incluyen sales de adición acida tales como sales de clorhidrato, bromhidrato, citrato y maleato y las sales formadas con ácido fosfórico y sulfúrico. En otro aspecto las sales adecuadas son sales básicas tales como la sal de metal alcalino por ejemplo sodio o potasio, una sal de metal alcalinotérreo por ejemplo calcio o magnesio, o una sal de amina orgánica por ejemplo trietilamina. Los mismos también pueden ser provistos como esteres hidrolizables in vivo . Estos son los esteres farmacéuticamente aceptables que se hidrolizan en el cuerpo humano para producir el compuesto original. Tales esteres pueden ser identificados administrando, por ejemplo intravenosamente a un animal de prueba, el compuesto bajo prueba y subsiguientemente examinando los fluidos corporales del animal de prueba. Los esteres hidrolizables in vivo adecuados para el carboxi incluyen metoximetilo y para el hidroxi incluyen formilo y acetilo, especialmente acetilo. Para usar un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o el éster del mismo hidrolizable in vivo para el tratamiento terapéutico (incluyendo el tratamiento profiláctico) de los mamíferos incluyendo los seres humanos, el mismo es formulado normalmente de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar como una composición farmacéutica. Por lo tanto en otro aspecto la presente invención proporciona una composición farmacéutica la cual comprende un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster hidrolizable in vivo y un portador farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden ser administradas de una manera estándar para la condición de enfermedad que se desea tratar, por ejemplo por administración oral, tópica, parenteral, bucal, nasal, vaginal o rectal o por inhalación. Para estos propósitos los compuestos de esta invención pueden ser formulados por medios conocidos en el arte en la forma, por ejemplo, de tabletas, cápsulas, soluciones acuosas o aceitosas, suspensiones, emulsiones, cremas, ungüentos, geles, soluciones para rociado nasal, supositorios, polvos finamente divididos o aerosoles para inhalación, y soluciones acuosas o aceitosas estériles para uso parenteral (incluyendo administración intravenosa, intramuscular o infusión) o suspensiones o emulsiones estériles. Además de los compuestos de la presente invención la composición farmacéutica de esta invención también puede contener, o ser co-administrada (simultánea o secuencialmente) con, uno o más agentes farmacológicos valiosos en el tratamiento de una o más condiciones de enfermedad referidas como aquí anteriormente. Las composiciones farmacéuticas de esta invención normalmente serán administradas a los seres humanos de modo que, por ejemplo, una dosis diaria de 0.5 a 75 mg/kg de peso corporal (y preferentemente de 0.5 a 30 mg/kg de peso corporal) sea recibida. Esta dosis diaria puede ser suministrada en dosis divididas cuando sea necesario, la cantidad precisa del compuesto recibido y la ruta de administración dependerán del peso, la edad y el sexo del paciente que es tratado y de la condición de enfermedad particular que es tratada de acuerdo con los principios conocidos en el arte.

Típicamente, las formas de dosificación unitaria contendrán aproximadamente 1 mg a 500 mg de un compuesto de esta invención. Por lo tanto en un aspecto adicional, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o éster del mismo hidrolizable in vivo para su uso en un método de tratamiento terapéutico del cuerpo de un ser humano o animal. En particular se describe el uso en el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la MMP13 y/o agrecanasa y/o MMP9 y/o MMP12. En todavía un aspecto adicional la presente invención proporciona un método de tratamiento de una condición de enfermedad mediada por la metaloproteinasa, que comprende administrar a un animal de sangre caliente una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable ín vivo. Las condiciones de enfermedad mediadas por la metaloproteinasa incluyen la artritis (tales como osteoartritis) , ateroesclerosis, enfermedades pulmonares obstructivas crónicas. (COPD) . En otro aspecto la presente invención proporciona un procedimiento para preparar un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vi vo, tal procedimiento comprende la conversión del compuesto II, en donde Y es un precursor o una forma protegida de CONHOH. El compuesto II puede ser preparado de las siguientes formas: a) haciendo reaccionar el compuesto III con el compuesto IV, el cual es obtenido convenientemente a partir del compuesto b) por la reducción del compuesto VI, el cual es obtenido convenientemente haciendo reaccionar el compuesto VII con el compuesto VIII; c) por la reacción del compuesto VII con el compuesto IX, en donde Z es un grupo de separación adecuado.

Vil / \ B—X N—SQ2 e ix B—X' N—SOj e VI! VIH Se apreciará que muchas de las materias primas relevantes están disponibles comercialmente o pueden ser encontradas en la literatura científica. Los compuestos de la invención pueden ser evaluados por ejemplo en los siguientes ensayos: Ensayos de Enzimas Aisladas Familia de la Metaloproteinasa de la Matriz incluyendo por ejemplo MMP13. La proMMP13 humana recombinante puede ser expresada y purificada como se describió por Khauper et al. [V. Knauper et al., (1996) The Biochemical Journal 271_: 1544-1550 (1996)]. La enzima purificada puede ser utilizada para verificar los inhibidores de la actividad como sigue: la proMMP13 purificada es activada utilizando ácido amino fenil mercúrico (APMA) 1 mM, 20 horas a 21 °C; la MMP13 activada (11.25 ng por ensayo) es incubada durante 4-5 horas a 35 °C en el amortiguador de ensayo (Tris-HCl 0. ÍM, pH 7.5 que contiene NaCl 0. ÍM, CaC12 20mM, ZnCl 0.02 mM y 0.05% (p/v) Brij 35 utilizando el substrato sintético 7-metoxicumarin-4-il) acetil. Pro. Leu. Gly. Leu.N-3- (2, 4-dinitrofenil) -L-2, 3-diaminopropionil .Ala.Arg.NH2 en la presencia o ausencia de inhibidores . La actividad es determinada midiendo la fluorescencia a ?ex 328nm y ?e 393nm. La inhibición porcentual es calculada como sigue: % Inhibición es igual a la [Fluorescenciams inhibidor - Fluorescenciafondo] dividida entre la [Fluorescenciameno3 nhibidor - Fluorescenciaf0ndo] • Un protocolo similar puede ser utilizado para otras pro MMPs expresadas y purificadas utilizando las condiciones de los substratos y amortiguadores óptimas para la MMP particular, por ejemplo como se describió en C. Graham Knight et al., (1992) FEBS Lett. 296 (3) : 263-266.

Familia de Adamalisina incluyendo por ejemplo TNF convertasa La capacidad de los compuestos para inhibir la enzima de proTNFa convertasa puede ser evaluada utilizando un ensayo de enzima aislada, purificada parcialmente, la enzima es obtenida de las membranas de THP-1 como se describió por K. M. Moler et al., (1994) Nature 370:218-220. La actividad de la enzima purificada y la inhibición de la misma es determinada incubando la enzima purificada parcialmente en la presencia o ausencia de los compuestos de prueba utilizando el substrato de 4' , 5' -Dimetoxi-fluoresceinil Ser . Pro . Leu.Ala . Gln.Ala .Val .Arg. Ser. Ser . Ser .Arg. Cys (4- (3-succinimid-1-il) -fluorescein) -NH2 en el amortiguador de ensayo (Tris HCl 50 M, pH 7.4 que contiene 0.1% (p/v) de Tritón X-100 y CaCl2 2mM) , a 26 °C durante 18 horas. La cantidad de inhibición es determinada como para la MMP13 excepto que se utilizaron ?ex 490nm y ?e 530nm. El substrato fue sintetizado como sigue. La parte peptídica del substrato fue acoplada sobre la resina de Fmoc-NH-Rink-MBHÁ-poliestireno ya sea manualmente o sobre un smtetizador del péptido automatizado por los métodos estándares que involucran el uso de Fmoc-aminoácidos y hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N, N,N' ,N' -tetrametiluronio (HBTU) como el agente de acoplamiento con al menos un exceso de 4 o 5 veces de Fmoc-a inoácido y HBTU. Ser1 y Pro2 fueron acoplados doblemente. Se empleó la siguiente estrategia de protección de la cadena lateral: Ser1 (But) , Gln5 (Tritilo) , Arg8'12(Pmc o Pbf) , Ser9'10'11 (Tritilo) , Cys13 (Tritilo) . A continuación del acoplamiento, el grupo protector de Fmoc N-terminal se removió tratando la Fmoc-peptidilo-resina en DMF. La amino-peptidilo-resina así obtenida fue acilada por el tratamiento durante 1.5-2 h a 70 °C con 1.5-2 equivalentes de ácido 4' , 5' -dimetoxi-fluorescein-4 (5) -carboxílico [Khanna & Ullman, (1980) Anal Biochem. 108 : 156-161) el cual ha sido preactivado con diisopropilcarbodiimida y 1-hidroxibenzotriazol en DMF] . El dimetoxifluoresceinil-péptido fue desprotegido entonces simultáneamente y segmentado de la resina por el tratamiento con ácido trifluoroacético que contiene 5% de cada uno de agua y trietilsilano. El dimetoxifluoresceinil-péptido fue aislado por evaporación, trituración con éter dietílico y filtración. El péptido aislado se hizo reaccionar con 4- (N-maleimido) -fluoresceína en DMF que contiene diisopropiletilamina, el producto purificado por FI-CLAR -y finalmente aislado por el secado con congelamiento a partir del ácido acético acuoso. El producto estuvo caracterizado por EM MALDI-TOF y análisis de aminoácidos.

Substratos Naturales La actividad de los compuestos de la invención como inhibidores de la degradación del agrecano puede ser evaluada utilizando métodos basados por ejemplo en las descripciones de E. C. Arner et al-, (1998) Osteoarthritis and Cartilage 6:214-228; (1999) Journal of Biological Chemistry, 274 (10) , 6594-660Í y los anticuerpos descritos allí. La potencia de los compuestos para actuar como inhibidores contra las colagenasas puede ser determinada como se describió por T. Cawston y A. Barrett (1979) Anal. Biochem. 99:340-345.

Inhibición de la actividad de la metaloproteinasa en la Prueba de la actividad basada en la célula/ ejido como un agente para inhibir las Sheddasas de la membrana tales como la TNF convertasa La capacidad de los compuestos de esta invención para inhibir el procesamiento celular de la producción de TNFa puede ser evaluada en las células de THP-1 utilizando un ELISA para detectar el TNF liberado esencialmente como se describió por K. M. Moler et al., (1994) Nature 370:218-220. De un modo similar, el procesamiento o difusión de otras moléculas de membrana tales como aquellas descritas en N. M. Hooper et al., (1997) Bigche . J. 321:265-279 puede ser probado utilizando líneas celulares apropiadas con anticuerpos adecuados para detectar la proteína difundida.

Prueba co o un agente para inhibir la invasión a base de células La capacidad del compuesto de esta invención para inhibir la migración de las células en un ensayo de invasión puede ser determinada como se describió en A. Albini et al., (1987) Cáncer Research 47:3239-3245.

Prueba como un agente para inhibir la actividad de TNF Sheddasa en la sangre entera La capacidad de los compuestos de esta invención para inhibir la producción de TNFa es evaluada en un ensayo de la sangre entera humana en donde LPS es utilizado para estimular la liberación de TNFa. La sangre humana heparinizada (10 Unidades/ml) obtenida de los voluntarios es diluida 1:5 con un medio (RPMI1640 + bicarbonato, penicilina, estreptomicina y glutamina) y se incuba (160 µl) con 20 µl del compuesto de prueba (triplicados), en DMSO o el vehículo apropiado, durante 30 minutos a 37 °C en un incubador humidificado (5% C02/95% aire), previo a la adición de 20 µl de LPS (E. coli. 0111:B4; concentración final 10 µg/ml). Cada ensayo incluye los controles de la sangre diluida incubados con el medio solo (6 cavidades/placa) o un inhibidor de TNFa conocido como el estándar. Las placas son incubadas entonces durante 6 horas a 37 °C (incubador humidificado) , se centrifugaron (2000 rpm durante 10 minutos; 4 °C) , el plasma se colectó (50-100 µl) y se almacenó en placas de 96 cavidades a -70 °C antes del análisis subsiguiente para verificar la concentración de TNFa por ELISA.

Prueba como un agente para inhibir la degradación del cartílago in vitro La capacidad de los compuestos de esta invención para inhibir la degradación de los componentes del agrecano o del colágeno del cartílago pueden ser evaluada esencialmente como se describió por K. M. Bottomley et al., (1997) Biochem J. 323:483-488.

Prueba farmacodinámica Para evaluar las propiedades de depuración ~y biodisponibilidad de los compuestos de esta invención, se empleó una prueba farmacodinámica ex vivo la cual utiliza los ensayos del substrato sintético anterior o alternativamente CLAR o análisis espectro étrico de masa. Esta es una prueba genérica que puede ser utilizada para estimar la velocidad de depuración de los compuestos a través de una gama de especies. Los animales (por ejemplo las ratas, titís) son dosificadas iv o po con una formulación soluble del compuesto (tal como DMSO al 20% p/v, PEG400 al 60% p/v) y en instantes del tiempo subsiguientes (por ejemplo 5, 15, 30, 60, 120, 240, 480, 720, 1220 minutos) las muestras de la sangre son tomadas desde un recipiente apropiado en 10U de heparina. Las fracciones del plasma son obtenidas a continuación de la centrifugación y las proteínas del plasma precipitadas con acetonitrilo (concentración final de 80% p/v) . Después de 30 minutos a -20 °C las proteínas del plasma son sedimentadas por centrifugación y la fracción del sobrenadante es evaporada a sequedad utilizando un aparato Savant speed vac. El sedimento es reconstituido en el amortiguador de ensayo y analizado subsiguientemente para verificar el contenido del compuesto utilizando el ensayo del substrato sintético. Brevemente, una curva de concentración del compuesto-respuesta es construida para el compuesto bajo evaluación. Las diluciones en serie de los extractos del plasma reconstituidos son evaluadas para verificar la actividad y la cantidad del compuesto presente en la muestra del plasma original es calculada utilizando la curva de respuesta-concentración tomando en cuenta el factor de dilución del plasma total.

Evaluación in vivo Prueba como un agente anti-TNF La capacidad de los compuestos de esta invención como inhibidores de TNFa ex vivo es evaluada en la rata.

Brevemente, los grupos de ratas Wistar Alderley Park (AP) macho (180-210 g) son dosificadas con el compuesto (6 ratas) o el vehículo del fármaco (10 ratas) por la ruta apropiada por ejemplo peroral (p.o.), intraperitoneal (i.p.), subcutánea (s.c.). Noventa minutos más tarde las ratas son sacrificadas utilizando una concentración creciente de C02 y se les extrajo sangre por medio de la vena cava posterior en 5 Unidades de heparina sodio/ml de sangre. Las muestras de sangre son colocadas inmediatamente en hielo y centrifugadas a 2000 rpm durante 10 minutos a 4 °C y los plasmas colectados se congelaron a -20 °C para el ensayo subsiguiente de su efecto sobre la producción de TNFa por la sangre humana estimulada por LPS. Las muestras del plasma de la rata son descongeladas y se agregan 175 µl de cada muestra a un patrón de formato de conjunto en una placa de 96U cavidades.

Cincuenta µl de la sangre humana heparinizada son agregados entonces a cada cavidad, se mezclan y la placa es incubada durante 30 minutos a 37 °C (incubador humidificado) . Se agrega LPS (25 µl; concentración final 10 µg/ml) a las cavidades y la incubación se continúa durante unas 5.5 horas adicionales. Las cavidades de control son incubadas con 25 µl del medio solo. Las placas son centrifugadas entonces durante 10 minutos a 2000 rpm y se transfieren 200 µl de los sobrenadantes a una placa de 96 cavidades y se congelan a -20 °C para el análisis subsiguiente de la concentración de TNF por ELISA.

El análisis de los datos por un programa destinado para esto, calcula para cada compuesto/dosis: Inhibición porcentual = TNFa Promedio (controles) - TNFa Promedio (Tratado) X 100 de TNFa TNFa Promedio (Controles) Prueba como un agente anti-artrí ico La actividad de un compuesto como un anti-artrítico es probada en la artritis inducida por el colágeno (CÍA) como se definió por D. E. Trentham et al., (1977) J. Exp. Med. 146: 857. En este modelo el colágeno del tipo II natural soluble en ácido provoca la- poliartritis en las ratas cuando es administrado en el adyuvante incompleto de Freunds . Se pueden utilizar condiciones similares para inducir la artritis en ratones y primates .

Prueba como un agente anti-cáncer La actividad de un compuesto como un agente anti-cáncer puede ser evaluada esencialmente como se describió en I. J. Fidler (1978) Methods in Cáncer Research 15:399-439, utilizando por ejemplo la línea celular B16 (descrita en B. Hibner et al., Abstract 283 p75 lOth NCI-EORTC Symposium, Amsterdam Junio 16 - 19 1998) .

La invención será ilustrada pero no estará limitada por los siguientes Ejemplos: EJEMPLO 1 N-hidroxi-3- [4-fluorofenilpiperidin-1-ilsulfonil] -2-bencilpropionamida Una solución de 3- [4-fluorofenilpiperidin-l-ilsulfonil] -2-bencil-N-benciloxi?ropionamida (75 mg) en etanol (2 ml) que contiene 10% de paladio sobre carbón (8 mg) se hidrogena bajo una matraz de bola lleno de hidrógeno. El catalizador se filtra y el solvente es removido bajo vacío. El residuo se hizo pasar a través de una columna Bond-elute eluyendo con una mezcla de acetato de etilo e isohexano (1:1) para dar el compuesto del título, producción 29 mg como una espuma blanca. M+H = 421. X rmn (300 MHz, d6-DMSO + d3AcOD) d 1.45-1.65 (m, 2H) ; 1.7-1.8 (m, 2H) ; 2.5-2.6 ( [parcialmente oscurecido por el solvente], 2H) ; 2.65-2.9 ( , 5H) ; 3.4-3.5 (m, 1H) ; 3.5-3.6 (m, 2H) , 7.1 (dd, 2H) , 7.2-7.3 ( , 7H) . 3- [4-fluorofenilpiperidin-1-ilsulfonil] -2-bencil-N-benci1oxipropionamida Una solución de 3-clorosulfonil-2-bencil-N-benciloxipropionamida (720 mg) en cloruro de metileno (2 ml) se agrega por goteo a una solución de 4-fluorofenilpiperidiña (320 mg) y trietilamina (306 µl) en cloruro de metileno (6 ml) a 0 °C. La mezcla de la reacción se agita durante 14 horas, se lava con agua y se filtra a través de papel para la separación de las fases y se evapora a sequedad. El residuo se purifica por cromatografía a través de una columna Bond-elute con una mezcla de acetato de etilo e isohexano (1:4) como el eluyente para dar el compuesto del título como un sólido blanco, producción 75 mg, M+H = 511. 1H rmn (300 MHz, CDC13) d 1.65-1.85 (2 x m, 4H) ; 2.45-2. 6 ( , 1H) ; 2.65-3.1 ( , 6H) ; 3.6 (dd, 1H) ; 3.75-3.85 (m, 2H) ; 4.5 (Abe, 0.5H); 4.65-4.8 (m, 0.5H); 4.8 (Abe, 0.5H) ; 4.95-5.1 ( , 0.5H); 6.9-7.0 (m, 2H) ; 7.1-7.15 (m, 2H) ; 7.15-7.2 (m, 2H) ; 7.3-7.4 (m, 8H) . 3-Clorosulfoni1-2-benci1-N-benci1oxipropionamida El cloro se hizo pasar hacia una mezcla agitada vigorosamente de 3-acetiltio-2-bencil-N-benciloxipropionamida (750 mg) en cloruro de metileno (5 ml) y agua (5 ml) a 10 °C. El flujo de cloro se detuvo cuando la mezcla de la reacción llegó a ser de color amarillo y la agitación se continuó durante 14 horas. La mezcla de la reacción se purgó con argón y se extrajo con cloruro de metileno (3X10 ml) . Los extractos combinados se secaron y el solvente se removió para dar el compuesto del título como un aceite amarillo, producción 725 mg. Esto se hizo sin caracterización adicional. 3-Aceti1tio-2-benci1-N-benci1oxipropionamida Una mezcla de N-benciloxi-2-bencilacrilamida (0.61 g) y ácido tiolacético (0.32 ml) se agitó y se calentó a 70 °C durante 3 horas. Se agregó tolueno (5 ml) a la mezcla de la reacción la cual se evaporó a sequedad para dar el compuesto del título como una goma (M+H = 344) la cual se utilizó sin caracterización adicional.

N-benciloxi-2-bencilacrilamida • Una gota de DMF se agrego a una mezcla de ácido 2-bencilacrílico (0.4 g) (CAS No. 5669-19-2) y cloruro de oxalilo (0.22 ml) en cloruro de metileno (5 ml) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. El solvente se removió y se agregó cloruro de metileno (5 ml) y éste, a su vez, fue removido. El residuo se disolvió en cloruro de metileno (2 ml) y éste se agregó a una solución de clorhidrato de 0-bencilhidroxilamina (0.39 g) y trietilamina (0.69 ml) en cloruro de metileno. La mezcla se agita durante 1 hora, se lava con agua (2X10 ml) y se seca. El residuo obtenido durante la remoción del solvente se hizo pasar descendentemente sobre una columna Bond-elute eluyendo con cloruro de metileno inicialmente pero luego con un gradiente de acetato de etilo (hasta 10% de acetato de etilo/cloruro de metileno) para dar el compuesto del título, producción 420 mg como una goma, M+H = 268. 1H-RMN (CDC13) : 3.6 (s, 2H) , 4.83 (s, 2H) , 5.25 (s, 1H), 5.58 (s, 1H) , 7.1-7.37 ( , 1QH) , 8.1 (s, 1H) .

EJEMPLO 2 N-hidroxi-3- [4-fluorofenilpiperazin-1-ilsul onil] -2-bencilpropionamida Una solución de 3- [4-fluorofenilpiperazin-l-ilsulfonil] -2-bencil-N-benciloxipropionamida (234 mg) en metanol que contiene 10% de paladio sobre carbón (30 mg) se hidrogenó bajo un matraz de bola lleno de hidrógeno durante 3.5 horas. El catalizador se removió por filtración a través de Celite y el filtrado se evaporó a sequedad para dar el compuesto del título, producción 165 mg, M+H = 422. ^?-RMN (CDC1 ) : 2.8-3.6 ( , 14H) , 6.8 (dd, 2H), 6.9 (t, 2H) , 7.4-7.9 (m, 5H) . 3-[4-fluorofenilpiperazin-l-ilsulfonil] -2-bencil-N-benci1oxipropiona ida Una mezcla de ácido 3- [N- (4-fluorofenil) piperazin-l-ilsulfonil]-2-bencilpropiónico (203 mg) , tetrabromuro de carbono (182 mg) , trietilamina (0.209 mi), 0-bencilhidroxilamina (76 mg) y trifenilfosfina soportada sobre un polímero (500 mg) en cloruro de metileno (5 ml) se agitó durante 14 horas. La mezcla de la reacción se diluyó con cloruro de metileno (10 ml) y se agregó poliestireno aminometilado (1 g) y la mezcla se agita durante 4 horas, se filtra a través de sílice (2g) lavando con cloruro de metileno. El filtrado se evapora hasta sequedad y el residuo se purifica por cromatografía sobre sílice eluyendo con volúmenes crecientes de acetato de etilo en isohexano (5% inicialmente incrementándose hasta 50%) . El compuesto del título fue obtenido como una goma clara, 237 mg, M-H = 510. ^-RMN (CDC13) : 2.75 (a, 1H) , 2.95 (m, 3H) , 3.1 (a, 4H) , 3.35 (a, 4H) , 3.6 (m, 1H) , 4.6 (d, 1H) , 4.8 (d, 1H) , 6.85 (c, 2H) , 6.95 (t, 2H) , 7.15-7.35 ( , 10H) , 8.0 (b, 1H) .

Acido 3- [N- (4-fluorofenil)piperazin-1-ilsulfonil] -2-bencilpropiónico . Se agregó hidróxido de litio (14 ml de una solución acuosa ÍM) a una solución de 3- [N- (4-fluorofenil) piperazin-1-ilsulfonil] -2-bencilpropionato de etilo (1 g) en THF (20 ml) y se agita vigorosamente durante 4 horas. La mezcla de reacción se acidifica a pH 1 con ácido clorhídrico (10 ml de 1.5M) y se extrae con acetato de etilo (3 x 25 ml) . Los extractos de acetato de etilo se lavan con agua y se secan. El residuo obtenido se evapora a sequedad y se trituró con éter dietílico para dar el compuesto del título como un sólido blanco, producción 219 mg, -RMN (CDC1 ) : 2.9 (dd, 1H) , 3.0 (dd, 1H) , 3.1 (t, 1H) , 3.15 (dd, 1H) , 3.25 (m, 1H) , 3.35 (m, 2H) , 3.45 (dd, 1H) , 6.85 (dd,' 2H) , 6.95 (t, 2H) , 7.2-7.25 (m,' 5H) . 3-[N- (4-fluorofenil)piperazin-l-ilsulfonil] -2-bencilpropionato de etilo Una mezcla de N- (4-fluorofenil) -piperazina (9.01 g) y trietilamina (7.0 ml) en cloruro de metileno (150 ml) se agrega por goteo a una solución enfriada (-15 °C) de cloruro de 2-etoxicarbonil-3-fenilpropansulfonilo (15.0 g) en cloruro de metileno (75 ml) a tal velocidad que la temperatura interna no excedió -5 °C. La mezcla se agitó durante 15 minutos y se le redujo la temperatura con HCl diluido (15 ml de 1.5M), se lavó con agua (2X100 ml) y salmuera (50 ml) . Los extractos acuosos se lavaron con cloruro de metileno (100 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron. El residuo obtenido durante la remoción del solvente se purificó por cromatografía sobre sílice eluyendo con una mezcla de acetato de etilo e isohexano (1 : 5) para dar el compuesto del título, producción 12.02 g, M+H = 435 (434). -RMN (CDC13) : 1.2 (t, 3H) , 2.85-3.0 (a, 2H) , 3.0-3.2 (a, 5H) , 3.25 (a, 1H) , 3.35 (a, 2H) , 3.45 (dd, 1H) , 4.15 (c, 2H) , 6.85 (a, 2H) , 7.0 (a, 2H) , 7.15-7.4 (m, 5H) .

Cloruro de 2-etoxicarbonil-3-fenilpropansulfonilo El gas cloro fue burbujeado en una suspensión de etil-2- (acetiltio etil) -3-fenilpropionato (16 g) hasta que la mezcla de la reacción llegó a ser amarilla. La mezcla de la reacción se purgó con nitrógeno y la mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo se extrae con cloruro de metileno (2X200 ml) se lava con salmuera (50 ml) y se seca para dar el compuesto del título como un aceite amarillo, producción 15.0 g el cual fue utilizado sin purificación adicional. 1H-RMN (CDC13) : 1.2 (t, 3H) , 2.95 (dd, 1H) , 3.2 (dd, 1H) , 3.45 (c, 1H), 3.65 (dd, 1H) , 4.2 (m, 3H) , 7.1-7.4 (m, 5H) .

Etil-2- (asetiltiometil) -3-fenilpropionato Una mezcla de 2-bencilacrilato de etilo (CAS No. 20593-63-9) (20 g) y ácido tiolacético (14.2 g) se calienta a 70 °C durante 14 horas. La mezcla se concentra bajo la presión reducida y el residuo se hace pasar a través de sílice (50 g) eluyendo con una mezcla de acetato de etilo/isohexano (1:9) para dar el compuesto del título como un aceite amarillo, producción 31 g. ^-RMN (CDC13) : 1.15 (t, 3H) , 2.3 (s, 3H) , 2.8-3.2 (m, 5H) , 4.1 (c, 2H) , 7.1-7.3 (m, 5H) .

EJEMPLO 3 [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) 3 -2-N-hidroxicarboxamida-4-fenilbutano " El ácido [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-carboxílico-4-fenilbutano (490 mg) se suspendió en diclorometano (5 ml) , se enfrió a 5 °C y se agregó DMF (2 µl) seguido por cloruro de oxalilo (0.43 ml) a una velocidad tal que se mantenga la temperatura a 5-7 °C. Después de 1 hora a esta temperatura la mezcla se evaporó a sequedad y se convirtió en un azeótropo con tolueno para dar un aceite amarillo. Este aceite se disuelve en diclorometano (5 ml) y se agrega a una solución enfriada de 50% de hidroxilamina acuosa (0.3 ml) en THF (10 ml) a 5 °C. Después de 10 minutos, la mezcla se evaporó a sequedad y se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se seca y se evapora a sequedad. La trituración con éter dio el [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-N-hidroxicarboxam?da-4-fenilbutano como un sólido (300 mg) . RMN CDCI3 d 7.3-6.8 (m, 9H) ; 3.5 (m, 1H) ; 3.1 (m, 4H) ; 3.3 (m, 4H) ; 2.8 - 2.5 (m, 4H) , 1.9-2.2 (amp., 2H) ; Espectro de Masa MH+ 436.

Acido [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-carboxí1ico-4-fenilb año El [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-etoxicarbonil-4-fenilbutano (1.7 g) se disuelve en una mezcla de THF (25 ml) y agua (8 ml) y se agrega monohidrato de hidróxido de litio (190 mg) . La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 18 h y luego se evapora casi a sequedad. Se agrega una solución de hidróxido de litio 1.0M (200 ml) y la solución se extrae con éter (100 ml) . La fase acuosa se acidifica a pH 4 con ácido cítrico y se extrae con acetato de etilo. Los extractos fueron secados y evaporados para dar el ácido [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-carboxílico-4-fenilbutano (540 mg) . RMN DMSO d 7.3-6.8 (m, 9H) ; 3.6 (m, 1H) , 3.5 ( , 1H) ; 3.4 ( , 4H) ; 3.15 (m, 4H) ; 2.8 (m, 2H) ; 2.7 (m, 2H) ; 1.9-2.2 (amp., 2H) ; Espectro de masa MH+ 421. [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-etoxicarboni1-4-fenilbu año El E- [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-etoxicarbonil-4-fenilbut-l-eno (10 g, 0.022M) se disolvió en tetrahidrofurano (50 ml) y etanol (500 ml) a 30-35 °C. Se agregó borohidruro de sodio (2.09 g, 0.055M), en porciones, manteniendo la temperatura abajo de 35 °C. La mezcla se agita durante 15 minutos, se agrega agua (100 ml) y el pH se ajusta a 4 con una solución de ácido cítrico ÍM. La mezcla se evapora a sequedad y el residuo se reparte entre diclorometano y agua. Las fases orgánicas fueron secadas y evaporadas a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía en columna instantánea eluyendo con iso-hexano/acetato de etilo 3:1 para dar el [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-etoxicarbonil-4-fenilbutano como un sólido blanco. (1.9 g) . RMN d 7.3-6.8 ( , 9H) ; 4.2 ( , 2H) ; 3.5 (m, 1H) , 3.4 (m, 4H) ; 3.15 (m, 4H) ; 3.0 (m, 2H) , 2.7 (m, 2H) ; 2.2-2.1 (amp., 2H) ; 1.3 (t, 3H) . EM MH+ 449.

E- [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-etoxicarboni1-4-fenilbut-1-eno La N- (4-fluorofenil) -N' - (metansulfonil) piperazina (12.9 g, 0.05M) se disolvió en tetrahidrofurano seco (500 ml) y se enfrió a -10 °C bajo una atmósfera de argón. Una solución 1. OM de bis (trimetilsilil) amida de litio en tetrahidrofurano (100 ml, 0.1M) se agregó por goteo a -10 °C, se agitó durante 30 minutos, luego se agregó clorotrimetil silano (5.45 g, 6.36 ml, 0.05M) manteniendo la temperatura a -10 °C. Después de agitación a -10 °C durante unos 30 minutos adicionales, se agregó por goteo una solución de etil-2-oxo-fenilbutirato (10.3 g, 9.5 ml, 0.05M) en tetrahidrofurano (20 ml) . Después de agitación a -10 °C durante 1 hora a la reacción se le reduce la temperatura con solución de cloruro de amonio saturada. Se diluye con acetato de etilo, se colecta la fase orgánica, se seca y se evapora a sequedad. El aceite residual, el cual fue una mezcla de isómeros E y Z, se separó por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con iso-hexano/acetato de etilo 3:1 para dar el E- [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-etoxicarbonil-4-fenilbut-1-eno como el isómero menos polar (6.6 g) . RMN d 7.3-6.6 (m, 9H) ; 5.8 (s, 1H) ; 4.2 ( , 2H) , 3.0 (m, 4H) ; 2.9 (m, 4H) ; 2.7 ( , 2H) ; 2.55 (m, 2H) ; 1.15 (t, 3H) EM MH+ 447, M+Na 469, MH- 445 « N- (4- luorofenil)—N' - (metansulfonil)piperazina A una solución de 1- (4-fluorofenil) piperazina (35 g, 194 mmoles) y piridina (17.5 ml) en diclorometano seco (200 ml) a 0 °C se agrega cloruro de metansulfonilo (20 ml, 258 mmoles) por goteo. La mezcla se agita durante 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla se lava con agua y se extrae con diclorometano (2 x 100 ml) . Las capas orgánicas se secan con MgS04 y se evaporan in vacuo. El residuo se tritura y se lava con metanol para dar la 1- (4-fluorofenil) -4- (metansulfonil) piperazina (39.35) como cristales blancos. aH-RMN (CDC13) : 7.00 ( , 2H) , 6.90 (m, 2H) , 3.40 (m, 4H) , 3.20 ( , 4H) , 2.83 (s, 3H) .

EJEMPLO 4 3-{ [4- (5-cloropirid-2-il) piperazino] sulfonil} -N-hidroxi-2-fenilpropanamida Una solución de ácido 3- { [4- (5-cloropirid-2-il)píperazino] sulfonil} -2-fenilpropanóico (416 mg, 1.02 mmoles) en DCM (3.5 ml) con DMF (1 gota) se agita a 0 °C, bajo una capa o atmósfera de argón. Se agrega por goteo cloruro de oxalilo (0.266 ml, 3.05 mmoles) y la reacción se agita durante 30 minutos. La mezcla se evapora in vacuo y se convierte en un azeótropo con tolueno. El aceite amarillo resultante se recibe en DCM (2.5 ml) y se agrega por goteo a una solución de hidroxilamina (50% de solución acuosa, 0.333 ml) en THF (2.5 ml) a 0 °C. Se agita durante 30 minutos a 5 °C antes de la evaporación in vacuo hasta una goma. El residuo se recibe en EtOAc antes del lavado con agua (X2) , luego se seca sobre Na2S04 y se evapora in vacuo para dar una espuma de color amarillo tenue (0.250 g) . X RMN (DMSO): 10.85 (s, 1H), 8.92 (s, 1H) , 8.10 (d, 1H) , 7.62 (dd, 1H) , 7.40-7.18 (m, 5H) , 6.90 (d, 1H) , 4.40-3.80 (m, 2H) , 3.56 (m, 3H) , 3.48 (m, 1H) , 3.25 (m, 1H) , 3.20 (m, 3H) ; EM (ES+) : 425.2 (MH+) .

Las materias primas se prepararon como sigue: La 2- (N-metansulfonilpiperazina) -5-cloropiridina (1.0 g, 3.63 mmoles) se recibe en THF anhidro (50 ml) bajo Argón luego se enfría a -10 °C antes de la adición de Li(TMSA) (3.8 ml de una solución 1.0M en THF, 3.81 mmoles).

La mezcla se agita a -10 °C durante 10 minutos antes de la adición por goteo de una solución pre-preparada [ -> - ácido bromofenilacético (1.24 g, 5.81 mmoles) tratada con Li (TMSA) (6.1 ml de una solución 1.0M en THF, 6.10 mmoles) en THF (40 ml) a -10 °C, bajo argón] . La mezcla en suspensión se agita a -10 °C durante 30 minutos luego se deja calentar a TA. Se le reduce la temperatura con cloruro de amonio acuoso y se acidifica con HCl concentrado a pH2 antes de que se extraiga con acetato de etilo (X3) . Las capas orgánicas se secan sobre Na2S0 y se evaporan in vacuo para dar una goma amarilla. La goma de disuelve en una cantidad pequeña de EtOAc y se precipita con Et20. Se filtra y se lava con Et20 para dar un sólido blanco (0.522 g) . -RMN (DMSO) : 7.95 (d, 1H) , 7.45 (dd, 1H) , 7.22-7.08 (m, 5H) , 6.75 (d, 1H) , 3.82-3.74 (m, 2H) , 3.38 (m, 4H) , 3.23 (m, 1H) , 3.04 (m, 4H) , 2.50 (m, 1H) , EM (ES+) : 410.4 (MH+) . 2- (N-metansulfonilpiperazina) -5-cloropiridina La 5-cloro-2-piperazinopiridina (95.1 g, 0.48M) se disuelve en CH2C12 (1000 ml) y se agrega trietilamina (67.6 ml, 0.48 M). Se enfría a 0-5 C y se agrega lentamente a una solución de cloruro de metan sulfonilo (37.4 ml, 0.48M) en CH2C12 (50 ml) . La mezcla de la reacción se agita a temperatura ambiente toda la noche. Se lava la mezcla de la reacción con H20 (300 ml) . Se colecta la fase orgánica, se seca sobre MgS04, se filtra y se evapora a sequedad para dar un sólido blanco. El sólido se agita en etanol (500 ml) a 60 °C. Se enfría y se colecta el sólido blanco. Se seca a 40C bajo vacío toda la noche. Producción 97.3 g.

RMN (CDCI3) d 8.1, d 1H; 7.4, dd 1H; 6.6, d 1H; 3.7, m 4H, 3.3, m 4H; 2.8, s 3H.

EM encontrado MH+ 276. 2-Cloro-2-piperazinopiridina La 2, 5-dicloropiridina (148 g, 1. OM) se disuelve en dimetilacetamida anhidra (1000 ml) y se agrega piperazina anhidra (258g, 3. OM) . Se agita a 120 °C durante 4 horas. Se enfría y se evapora bajo alto vacío en un aparato cold-finger buchi. El residuo se agita en acetato de etilo (3000 ml) . Se filtra el sólido, se lava con acetato de etilo (500 ml) . Los filtrados de acetato de etilo combinados se lavan con H20, se secan sobre MgS04, se filtran y se evaporan para dar un sólido amarillo. Producción 182.5 g.

RMN (CDCI3) d 8.1, d 1H; 1 . 4 dd 1H; 6.6, d 1H; 3.5, 4H; 3.0, m 1H; EM encontrado MH+ 198, EJEMPLO 5 (R,S) -N-Hidroxi-3- [4-fluorofenilpiperazin-l-ilsulfonil] -2-[ (R/S) -2-fenilpropil]propionamida El compuesto se preparó utilizando el método dado en el Ejemplo 1. En seguida se listan los compuestos intermedios y el producto final.

M+H = 372 ? 15 CAS No 99865-15-3 M+H » 296 EJEMPLO 6 Los siguientes compuestos fueron preparados utilizando el método dado en el Ejemplo 4.

Rl M+H 4-Cl-PhCH2 473/475 Ph(CH2)2 453/455 4-Cl-Ph 459/461 3,4-Dicloro-Ph 493/495 2-Pirimidinil (CH2) 3 469 EJEMPLO 7 Se preparó el siguiente compuesto utilizando el método dado en el Ejemplo 4.

Rl M+H Ph(CH2)2 468/470 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable ín vivo caracterizado porque : B es un grupo fenilo monosubstituido en las posiciones 3 o 4 por halógeno o trifluorometilo, o disubstituido en las posiciones 3 o 4 por halógeno (el cual puede ser el mismo o diferente) ; o B es un grupo 2-piridilo o 2-piridiloxi monosubstituido en las posiciones 4, 5, o 6 por halógeno, trifluorometilo, ciano o alquilo Cl-4; o B es un grupo 4-pirimidinilo opcionalmente substituido en la posición 6 por halógeno o alquilo Cl-4; X es un átomo de carbono o de nitrógeno;
2. Rl es un grupo trimetil-1-hidantoína alquilo C2-4 o trimetil^S-hidantoína alquilo C2-4; o Rl es fenilo o fenilaquilo C2-4 monosubstituido en las posiciones 3 o 4 por halógeno, trifluorometilo, tio o alquilo Cl-3 o alcoxi Cl-3; o Rl es fenil-S02NHC alquilo 2-4; o Rl es 2-piridilo o 2-piridilo alquilo C2-4; o Rl es 3-piridilo o 3-piridilo alquilo C2-4; o Rl es 2-pirimidina-SCH2CH2; o Rl es 2- o 4-pirimidinilo alquilo C2-4 monosubstituido opcionalmente por uno de halógeno, trifluorometilo, alquilo Cl-3, alquiloxi Cl-3, 2-pirazinilo opcionalmente substituido por halógeno o 2-pirazinilo alquilo C2-4 opcionalmente substituido por halógeno. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque: B es un grupo fenilo monosubstituido en las posicione 3 o 4 por halógeno o trifluorometilo, o disubstituido en las posiciones 3 y 4 por halógeno (el cual puede ser el mismo o diferente) ; o B es un grupo 2-piridilo o 2-piridiloxi monosubstituido en las posiciones 5 o 6 por halógeno, trifluorometilo o ciano; o B es un grupo 4-pirimidinilo opcíonalmente substituido en la posición 6 por halógeno o alquilo Cl-4; X es un átomo de carbono o nitrógeno;
3. Rl es un grupo trimetil-1-hidantoína alquilo C2-4 o trimetil-3-hidantoína alquilo C2-4; o Rl es fenilo o fenilaquilo C2-4 monosubstituido en las posiciones 3 o 4 por halógeno, trifluorometilo, tio o alquilo Cl-3 o alcoxi Cl-3; o Rl es fenil-S02NHC alquilo 2-4; o Rl es 2-piridilo o 2-piridilo alquilo C2-4; o Rl es 3-piridilo o 3-piridilo alquilo C2-4; o Rl es 2-pirimidina-SCH2CH2; o Rl es 2- o 4-pirimidinilo alquilo C2-4 monosubstituido opcionalmente por uno de halógeno, trifluorometilo, alquilo Cl-3, alquiloxi Cl-3, 2-pirazinilo o 2-pirazinilo alquilo C2-
4. 4. 3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque B es seleccionado de 4-clorofenilo, 4-fluorofenilo, 4-bromofenilo, 4-trifluorofenilo, 5-cloro-2-piridilo, 5-bromo-2-piridilo, 5-fluoro-2-piridilo, 5-trifluorometilo-2-piridilo, 5-ciano-2-piridilo, 5-metil-2-piridilo . . Un compuesto de conformidad con la reivindicación 3 o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque B es 4-fluorofenilo, 5-cloro-2-piridilo o 5-trifluorometil-2-piridilo.
5. 5. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque X es un átomo de nitrógeno.
6. 6. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque Rl es seleccionado de fenilmetilo, feniletilo, fenilpropilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 3-piridilo, 2-piridilpropilo, 2- o 4-pirimidiniletilo (monosubstituido opcionalmente por flúor) , 2- o 4-pirimidinilpropilo, 2- (2-pirimidinil) propilo (monosubstituido opcionalmente por flúor) .
7. 7. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 6 o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque Rl es fenilmetilo, feniletilo, 2-pirimidinilpropilo, 2- (2-pirimidinil) propilo (monosubstituido opcionalmente por flúor) o 5-fluoro-2-pirimidiniletilo.
8. 8. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque el compuesto de la fórmula I es como se ejemplificó aquí.
9. 9. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 8 o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque el compuesto es seleccionado de (R, S) -N-Hidroxi-3- [4-fluorofenilpiperazin-1-ilsulfonil] -2- [ (R, S) -2-fenilpropil]propionamida, 3-{ [4- (5-cloropirid-2-il) piperazino] sulfonil }-N-hidroxi-2-fenilpropanamida, [ (4-fluorofenil) -4- (piperazinilsulfonil) ] -2-N-hidroxicarboxamida-4-fenilbutano, N-hidroxi-3- [4-fluorofenilpiperazin-l-ilsulfonilj -2-bencilpropionamida, N-hidroxi-3- [4-fluorofenilpiperidin-1-ilsulfonil] -2-bencilpropionamida.
10. 10. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de la fórmula I de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo y un portador farmacéuticamente aceptable.
11. 11. Un compuesto de la fórmula I de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable o ' un éster del mismo hidrolizable in _ ivo, caracterizado porque se usa en un método de tratamiento terapéutico del cuerpo de un ser humano o animal .
12. 12. Un compuesto de la fórmula I de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, caracterizado porque se usa como un agente terapéutico.
13. 13. Un método de tratamiento de una condición de enfermedad mediada por una metaloproteinasa, caracterizado porque comprende administrar a un animal de sangre caliente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo .
14. 14. Un método de tratamiento de una condición de enfermedad mediada por una metaloproteinasa de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque comprende tratar una condición de enfermedad mediada por una o más de las siguientes enzimas: MMP13, agrecanasa, MMP9, MMP12.
15. 15. El uso de un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un precursor del mismo hidrolizable in vivo en la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento de una condición de enfermedad mediada por una o más enzimas de metaloproteinasa.
16. 16. El uso de un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un precursor del mismo hidrolizable in vivo en la preparación de un medicamento para su uso éh el tratamiento de la artritis.
17. 17. El uso de un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un precursor del mismo hidrolizable in vivo en la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento de la ateroesclerosis.
18. 18. El uso de un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un precursor del mismo hidrolizable in vivo en la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento de enfermedades pulmonares obstructivas crónicas.
19. 19. Un procedimiento para preparar un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster del mismo hidrolizable in vivo, tal procedimiento está caracterizado porque comprende convertir un compuesto de la fórmula II a un compuesto de la fórmula I en donde Y es un precursor o una forma protegida de CONHOH, y opcionalmente después de esto formar una sal farmacéuticamente aceptable o un éster hidrolizable in vivo del compuesto de la fórmula I .