MXPA99008750A

MXPA99008750A - Prevencion y tratamiento antimicrobianos de virus de inmunodeficiencia humana y otras enfermedades infecciosas

Info

Publication number: MXPA99008750A
Application number: MXPA/A/1999/008750A
Authority: MX
Inventors: Squires Meryl
Original assignee: Squires Meryl J
Priority date: 1997-03-26
Filing date: 1999-09-24
Publication date: 2000-06-05

Abstract

La presente invención se refiere a medicina y tratamiento médico mejorados para resolver rápida y seguramente infecciones de HIV y otras microbianas. La medicina económica puede ser autoadministrada y mantenida por el tiempo prescrito. La atractiva medicina comprende un concentrado antimicrobiano que contiene inhibidores de microbios, productos fitoquímicos o aislados. Convenientemente, la medicina eficaz comprende un surfactante y un portador o solvente acuoso y un nutriente. En la forma preferida, la medicina comprende:fitoquímicos de Echinacea y Commiphora myrrha, cloruro de benzalconio, una solución de agua estéril yácido fólico.

Description

PREVENCIÓN Y TRATAMIENTO ANTIMICROBIANOS DE VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA Y OTRAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al virus de inmunodeficiencia humana y más particularmente a tratamientos médicos y prevenciones para el virus de inmunodeficiencia humana y otras infecciones microbianas. Se ha reportado que en la actualidad hay aproximadamente 22 millones de personas infectadas con el virus de inmunodeficiencia humana (HIV = Human Inmunodeficiency Virus) por todo el mundo. La mayor proporción de los casos dados HIV se ha originado en África y en el Caribe. El avance típico de la infección HIV está divido en diferentes etapas: (1) transmisión viral; (2) síndrome retroviral agudo; (3) sero conversión; (4) período latente clínico con o sin linfadenopatía generalizada persistente (PGL = Persistent Generalized Lymphadenopathy) ; (5) temprana infección HIV sintomática previamente conocida como complejo relacionado de SIDA o ARC = AIDS Related I Complex) y más recientemente referido como "síntomas B" de acuerdo con la clasificación de CDC de 1993); (6) Síndrome de inmudeficiencia adquirida (SIDA) (AIDS)) la condición indicadora del SIDA (AIDS) de acuerdo con los criterios del CDC de 1987 y los criterios revisados del CDC de 1993 que incluyen un conteo de células CD4 menor a 20O/milímetro cúbico; y (7) infección HIV avanzada, caracterizada por una cuenta celular CD4 menor a 50/milimetro cúbico; células CD4 son linfocitos objetivo del HIV. En 1993 el CDC cambió la definición de SIDA para incluir a todos los pacientes con una cuenta CD4 menor a 200/mm3; esta definición incluye pacientes en las etapas 4 a 7, independientemente de los síntomas. El síndrome retroviral agudo inicial está acompañado por una disminución precipitado en cuentas de células CD4, alta viremia de plasma cultivable y altas concentraciones de ARN de HIV en el plasma. La recuperación clínica ocurre y se reducen el alto nivel de viremia de plasma ARN HIV con el desarrollo de la respuesta de linfocitos citotóxicos T (CPL) . El conteo de células CD4 gradualmente disminuye durante varios años y luego muestra una disminución acelerada de 1.5 a 2 años antes de un diagnostico que define el SIDA. Las concentraciones de ARN HIV en el plasma son relativamente estables hasta que el HIV está en una etapa tardía cuando la cuenta CD4 es menor a 200/mm3, y el curso clínico se caracteriza por infecciones, tumores selectos, desgate (debilitamiento y adelgazado progresivo) y complicaciones neurológicas. En general, aproximadamente 10% de los pacientes desarrollan un diagnóstico que define SIDA antes de que la cuenta CD4 disminuya a 200/mm3. El tiempo mediano presente a una complicación que define SIDA después de la cuenta CD4 de 200/mm3 es de 12 a 18 meses. En la ausencia de terapia dirigida contra HIV o profilaxis PCP, el tiempo promedio de transmisión viral a un diagnóstico que defina SIDA es de aproximadamente 10 años, y la supervivencia después de una complicación que define el SIDA previamente era de un año aproximado. Toda la secuencia de eventos para un paciente promedio en la ausencia de tratamiento dirigido contra HIV, es de aproximadamente 10 años desde sero conversión a la muerte. El tiempo mediano desde sero conversión de HIV a SIDA, se ha reportado que es de aproximadamente 7 años para receptores de transfusión, 10 años para hemofilíacos, 10 años para adictos a drogas y 8 a 12 años para homosexuales. Las velocidades de avance parecen similares por sexo, raza y categoría de riesgo, si se ajustan por la calidad de la atención. Para pacientes con edades de 16 a 24 años en sero conversión, el tiempo mediano era de 15 años, para aquellos con más de 35 años en la sero conversión era de 6 años. La infección HIV puede adquirirse a través de relación sexual, por transfusiones de droga con sangre contaminada, por adictos a drogas con agujas infectadas o por transmisión perinatal. La infección HIV primaria y sintomática también referida como síndrome retroviral agudo se ha reportado en las categorías de riesgo precedentes con una frecuencia de 50 a 90%. Este síndrome también se ha notado en 7 de 8 trabajadores del cuidado de la salud, con transmisión de HIV que sigue a la exposición ocupacional. El tiempo de la exposición al inicio de los síntomas usualmente es de 2 a 4 semanas, pero la incubación puede ser tan prolongada como a 6 semanas. Síntomas típicos son: fiebre, adenopatia, faringitis, ronchas que comprenden maculopapular eritematoso con lesiones de 5 a 10 mm en la cara y el tronco, en ocasiones en las extremidades incluyendo las palmas y las plantas de los pies o ulceración mucocutánea en la boca, esófago o los genitales, nelgias o artralgias diarrea, dolores de cabeza, hepatoesplenomegalia, aftas, náusea y vómito. Síntomas neurológicos pueden incluir: meningo encefalitis, neuropatía periférica, parálisis facial, síndrome de Guillain-Barré, neuritis braquial , radiculopatía, desequilibrio cognocitivo y sicosis. La enfermedad aguda generalmente está acompañada por viremia HIV de alto nivel con antigenemia p24, viremia de plasma y altos títulos de HIV en las células mononucleares de sangre periférica. La respuesta de linfocito citotóxico T (CTL) es primero y usualmente precede la respuesta humoral detectable por varias semanas. La respuesta CTL está acompañada por un decremento 3 a 5 log en concentración de HIV en sangre periférica. El alto nivel de viremia durante esta fase aguda de la enfermedad puede estar asociado con diseminación del virus al CNS y tejido linfático. El tejido de linfa sirve como el recipiente principal de la carga y replicación de HIV. La infección de órganos no linfoides con altos niveles de HIV parece ocurrir en etapas tardías de HIV. La presencia de síntomas en vez de la sero conversión asintomática así como una enfermedad prolongada mayor a 14 días parecen correlacionarse con un avance más rápido al SIDA. La sero conversión con serología HIV positiva, generalmente se lleva a cabo de 6 a 12 semanas después de transmisión tal como transfusión o lesión con agujas a un trabajador del cuidado de la salud. El intervalo mediano es de 63 días. La respuesta CTL está asociada con una marcada reducción en carga viral cuantitativa en sangre, recuperación clínica del síndrome retroviral agudo y retorno de la cuenta de células CD4 a niveles superiores que a menudo están en el rango normal para la mayoría de los laboratorios. El paciente de HIV se vuelve clínicamente asintomático y en general sin hallazgos en el examen físico excepto por linfadenopatía generalizada persistente (PGL) que comprende nodos de linfa agrandados. Estudios de nodos de linfa muestran altas concentraciones de HIV como virus extracelular atrapado en los procesos de células dendríticas foliculares dentro de los centros germinales y como un virus intracelular predominantemente en forma latente. El tejido de linfa sirve como un depósito principal para HIV, las células dendríticas foliculares filtran y atrapan virus libres y células CD4 infectadas, y la carga viral en las células mononucleares de sangre periférica es relativamente baja. Con enfermedad progresiva, la configuración de los nodos de linfa se interrumpe por HIV. Estudios virológicos en pacientes con infección HIV asintomática, muestran altas velocidades de replicación de HIV con producción de un promedio de 109 viriones diariamente. La replicación viral está acompañada por destrucción masiva y la producción de 109 células CD4 diariamente. El tiempo de vida de las células CD4 representa 6 a 7% del total de células CD4 en el cuerpo, de manera tal que todo el suministro tiene un tiempo de vida de cada 15 días. El SIDA se ha considerado una consecuencia de una replicación de alto nivel continua de HIV-1, lo que lleva a terminación mediada inmune y virus de los linfocitos CD4. Infección HIV avanzada ocurre en paciente con una cuenta celular CD4 menor a 50/mm3. Los pacientes tienen una esperanza de vida limitada con una supervivencia mediana de 12 a 18 meses. Virtualmente todos los pacientes que mueren por complicaciones relacionadas con HIV están en este estrato de la cuenta celular CD4. La adiministracón de drogas y alimentos de los E.U.A. (FDA = Food and Drug Administration) ha probado muchos inhibidores de transcriptasa inversa (RT) . Las enzimas RT convierten ARN viral en ADN. Los inhibidores RET pueden interrumpir este proceso. El inhibidor RT AZT, que se vende bajo las marcas de Retrovir y zidovudine por Glaxo Wellcome, fue aprobado por la FDA en 1987. El inhibidor RT ddl, que se vende bajo las marcas con Videx y didanosine por Bristol-Myers Squibb, se aprobó por la FDA en 1991. El inhibidor RT ddC que se vende bajo las marcas de HIVID y dideoxycytidine por Hoffman-LaRoche, fue aprobado por la FDA en 1992. El inhibidor RT d4T que se vende bajo las marcas de Zerit y stavudine por Bristol-Mayer Squibb, se aprobó por la FDA en 1991. El inhibidor RT ddC que se vende bajo las marcas de Epivir y lamivundine por Glaxo Wellcome fue aprobado por FDA en 1995. El inhibidor TR Nevirapine, que se vende bajo la marca de Viramune por Boehringer Ingelheim, fue aprobado por la FDA en 1996. La Administración de Drogas y Alimentos (FDA) ahora ha aprobado tres inhibidores de proteasa para el tratamiento de infección de virus de inmudeficiencia humana (HIV) . Saquinavir que se vende bajo la marca de Invirase por Hoffman-LaRoche Laboratories, fue el primer agente inhibidor de proteasa aprobado por la FDA. Ritonavir, otro inhibidor de proteasa, que se vende bajo la marca Norvir por Abbott Laboratories, recibió aprobación de la FDA en marzo de 1996 al igual que indinavir que se vende bajo la marca de Crixivan por Merck & Co. Los inhibidores de proteasa tienen un mecanismo diferente de acción que aquel de las drogas anti-HIV previamente aprobadas, tales como los análogos de nucleósido AZT y 3TC que se venden bajo las marcas de Sidobvudine y Lamivundine por Glaxo Wellcome, ddl y d4T que se vende bajo las marcas didanosine y stavudine por Bristol-Myers Squibb, y ddC que se vende bajo la marca de dideoxycytydine por Roche Laboratories. Inhibidores de proteasa bloquean la enzima que requiere HIV para terminar su ciclo de replicación y formar virus nuevos viables. Sin la enzima proteasa, las proteínas estructurales virales no pueden ser fabricadas adecuadamente y se forma un virus no infeccioso defectuoso. Los análogos de nucleósido bloquean una diferente enzima-transcriptasa inversa. Esta acción puede evitar que el ARN viral produzca ADN viral que luego puede incorporarse en el ADN de las células humanas. Combinar uno o más inhibidores de transcriptasa inversa con un inhibidor de proteasa, en ocasiones referido como un "coctail", se reclama que ataca la replicación de HIV en dos puntos en e lcislo de replicación. Pruebas clínicas que combinan saquinavir con AZT, ddC o ambos, demuestran una declinación mucho mayor mayor en el número de partículas de HIV en la sangre, en ocasiones referidas como carga viral, y un mayor incremento en células CD4 (linfocitos T) que el observado previamente con los inhibidores de transcriptasa inversa solos. En ocasiones, los cocteles han sido tóxicos e ineficaces para algunos pacientes. El beneficio clínico en términos de supervivencia mejorada o velocidad reducida en el avance de enfermedad, sin embargo aún no se ha demostrado completamente para la combinación (cocteles) de inhibidores RT e inhibidores de proteasa. Los médicos sin embargo empiezan a considerar HIV como una enfermedad crónica manejable en vez de una sentencia de muerte. Los inhibidores de proteasa saquinavir, han sido aprobados por la FDA para uso en combinación con inhibidores de transcriptasa inversa en pacientes con SIDA (AIDS) avanzado. Los inhibidores de proteasa saquinavir pueden ser tolerados por algunos pacientes sin las toxicidades neurológicas o hematológicas que se encuentran con los análogos de nucleósidos. Ciertas medicinas de receta incluyen rifampin, rifabutin, fenobarbital , dilantin, y dexametasona pueden disminuir significativamente los niveles en plasma de los inhibidores de proteasa saquinavir y deberán ser evitados en pacientes que toman saquinavir. La resistencia viral a inhibidores de proteasa saquinavir como con otras drogas anti-HIV ha sido reportada. Los inhibidores de proteasa ritonavir e indinavir parecen ser más potentes contra HIV que la formulación actual de saquinavir. Los inhibidores de proteasa ritonavir requieren refrigeración. Los inhibidores de proteasa ritonavir actualmente se emplean en combinación con análogos de nucleósido (drogas como AZT) o como monoterapia. Un estudio temprano trató 32 pacientes con ritonavir más AZT más ddC. Después de 20 semanas, el conteo celular CD4 mediano aumentó de 83 células/milómetro cúbico en la línea base a 106 células/milímetro cúbico. La carga viral, una medida del número de copias virales en la sangre, disminuyó casi en 100 veces. Se dosifica ritonavir a 600 mg oralmente dos veces al día, lo que puede requerir 12 cápsulas cada día. La droga está disponible en cápsulas de 100 mg. Efectos secundarios son bastante comunes incluyendo: síntomas gastrointestinales con náusea, vómito y diarrea. Otros efectos secundarios incluyen entumecimiento y hormigueo, particularmente alrededor de la boca, e inflamación del hígado que comprende una forma de hepatitis.

Los inhibidores de proteasa indinavir recibieron aprobación acelerada de la FDA con base en estudios que demuestran aumentos promedio en cuentas CD4 de aproximadamente 100 células/milímetro cúbico y reducciones en carga viral de casi 100 veces, en combinación de AZT más 3 ce más indinavir. Indinavir se dosifica a 800 mg oralmente tres veces por día (dos cápsulas, tres veces al dia). En contraste con ritonavir, indinavir puede tomarse en ayunas para mejorar la absorción. Indinavir provoca menos efectos secundarios gastrointesinales que ritonavir y parece ser mejor tolerado en total por algunos pacientes. El efecto secundario principal de los inhibidores de proteasa indinavir es en desarrollo de cálculos en el riñon. La droga se excreta parcialmente en la orina y puede cristalizarse para formar cálculos si no se mantiene hidratación adecuada. Los inhibidores de proteasa índinavir también pueden afectar el hígado, provocando un aumento en niveles de sangre de bilirrubina, es decir un pigmento de bilis formado a partir de la ruptura de células de glóbulos rojos de la sangre. Los inhibidores de proteasa indinavir también pueden provocar interacciones con drogas. El análisis de resistencia a inhibidores de proteasa aún no se ha determinado completamente. Los inhibidores de proteasa saquinavir y ritonavir pueden actualmente costar al paciente aproximadamente 600 dólares de los E.U.A. por mes. Los inhibidores de proteasa indinavir tienen un precio de aproximadamente 30% inferior a este nivel. Una combinación de tres drogas de AZT más 3TC más inhibidores de proteasa ritonabir puede costar a un paciente más de 1,000 dólares de los E.U.A./mes. Combinaciones (cocteles) de inhibidores RT e inhibidores de proteasa pueden costar tanto como 25,000 dólares de los E.U.A. por año. Aunque los inhibidores de proteasa pueden auxiliar, la comunidad médica y la sociedad aún no han resuelto los problemas de costo al paciente para estas drogas costosas. El virus herpes simplex (HSV = Herpes Simplex Virus), comúnmente referido como "virus herpes" o "herpes", es una enfermedad infecciosa que también ha alcanzado proporciones de crisis nacionalmente, con números estimados de personas infectadas del 70 a 80% de nuestra población como se reporta por la Asociación de Salud de la Sociedad Americana (ASHA = American Societal Health Assosiation) y crecen más bien de 500,000 personas. Hay dos tipos comunes de herpes: virus herpes simplex 1 (HSV1) y virus herpes simplex 2 (HSV2). El herpes entra al cuerpo humano a través de minúsculas rupturas o fallas en el tejido epidérmico usualmente por contacto con un huésped infectado y se marca por erupción de una o más vesículas, usualmente en grupos, siguiendo a un período de incubación aproximadamente de 4 días. Típicamente, el curso del brote infeccioso se inicia con la etapa prodromal; avanzando a la erupción vesicular; seguido por ulceración, coalescencia, resolución y el período de latencia. El brote puede durar varias semanas y en promedio dura de dos a tres semanas. En algunos individuos inmuno comprometidos, el brote puede durar meses. Las vesículas pueden aparecer en cualquier parte en la piel o mucosa, típicamente surgiendo en los labios como herpes labial, en glándulas, mucosa oral, conjuntiva y córnea, genitales y mucosa y tejido perianeal. Los síntomas de herpes incluyen: hinchado inguinal, dolor, fiebre, malestar, dolores de cabeza, dolores musculares y glándulas hinchadas. Algunos individuos que tienen el nervio trigémino comprometido con herpes oral, tienen dolor facial extremo, dificultad para tragar, comer e hinchado facial. Individuos con el nervio sacro afectado tienen severo dolor en la parte superior de las piernas, hinchado y enorme dificultad para caminar. La infección de virus herpes simplex (HSV) recrudece, residiendo en los ganglios de los nervios, luego recurre debido a algunos estímulos aún no conocidos. Las infecciones herpéticas recurrentes pueden ser precipitadas casi por cualquier cosa incluyendo: sobre exposición a la luz del sol; deficiencias nutritivas; tensión, menstruación; inmuno supresión, ciertos alimentos; drogas, enfermedad febril; etc. Recientemente, se aisló el virus de herpes de tejido cardíaco. Las infecciones HSV1 y HSV2 presentan muy serias amenazas a la salud provocando a menudo: ceguera; e incrementado riesgo de cáncer en el cuello del útero; meningitis aséptica y encefalitis; muertes neonatales; viremia; etc. Los efectos devastadores de esta enfermedad, van más allá del alcance médico del sufrimiento humano. HSV es responsable por serias aflicciones psicológicas y emocionales así como substancial pérdida económica para la nación y el mundo. Se han propuesto hacer diversos tratamientos de herpes y han incluido aplicación tópica de agentes tales como povodone-yodo, idoxuridine, trifluorotimidina o aciclovir. Estos tratamientos se han encontrado con grados variantes de éxito. La mayoría de los tratamientos previos han demostrado ser decepcionantes. Aciclovir, que se toma oralmente para tratamiento sistémico de HSV es algo eficaz. Sin embargo, el aciclovir solamente es exitoso para interrumpir la replicación del virus. No es exitoso para tratar un brote infeccioso ya sea sistémicamente o atópicamente. Cepa resistentes a aciclovir han sido reportadas. Individuos con Síndrome de Auto Inmunodeficiencia (SIDA) están seriamente inmuno comprometidos y sufren especialmente brotes debilitantes de HSV. Adicionalmente, individuos con SIDA pueden transportar cepas resistentes a aciclovir de HSV, que pueden hacer al aciclovir ineficaz para estos individuos. Por lo tanto es conveniente el desarrollar un tratamiento médico seguro y exitoso para ayudar en tratar y evitar los muy serios problemas de HIV y otras enfermedades infecciosas. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Se proporcionan una medicina y tratamiento médico mejorados que, cuando se administran sistémicamente inhiben la conexión o unión del virus de inmunodeficiencia humano (HIV) a células objetivo y evita la dispersión de HIV. Ventajosamente, el uso de medicina y tratamiento médico novedosos puede ayudar a evitar la transmisión sexual de HIV y otros virus. Significativamente, la medicina y tratamiento médico mejorados son seguros, menos costosos y eficaces. La medicina mejorada, también referida como Viracea 2 HIV-4, comprende novedosas composición médica, formulación, compuesto antimicrobiano y solución. El nuevo tratamiento médico antimicrobiano y la medicina microbicida son exitosos para tratar HIV, primordialmente en forma sistémica y puede ser utilizados para tratar otras infecciones microbianas incluyendo aunque no limitados a virus de varicela Zoster (herpes zoster) y citomegalovirus . En algunas circunstancias, puede ser conveniente el utilizar tópicamente la medicina novedosa. Mientras que el compuesto antimicrobiano y la medicina novedosos son particularmente útiles en inhibir dramáticamente la infección de virus de inmunodeficiencia humana (HIV) , pueden ser útiles en tratar otras enfermedades microbianas (enfermedades que provocan microbios) tales como: Epstein Barr, virus de papiloma, celulitis, estafilococos, estreptococos, micobacterias, influenza, parainfluenza, adenovirus, encefalitis, meningitis, arbovirus, arenavirus, bacilos anaeróbisos, picornavirus, coronavirus y virus sincitial, asi como virus de herpes simplex, virus de varicela zoster y citomegalovirus. Mientras que la medicina y tratamiento médico son particularmente útiles para inhibir HIV y otras enfermedades infecciosas, en personas (seres humanos) (homo sapiens) , también pueden ser útiles para propósitos veterinarios para tratar infecciones virales y bacterianas y enfermedades infecciosas en animales tales como perros, gatos, aves, caballos, vacas, ovejas, cerdos (puercos y marranos) , y otros animales de granja, así como roedores y otros animales que se ven en los zoológicos.

Ventajosamente, la medicina y tratamiento médico mejorados de la presente invención producen resultados inesperados, sorprendentemente buenos. Esta solución microbicida fácil de utilizar, puede proporción absorción mejorada en administración parenteral. Ante administración, puede haber un ligero efecto de comezón. En minutos de aplicación, podrá experimentarse un sabor medicinal ligero en la boca. Inicialmente, la prueba in vitro de la medicina y tratamiento médico novedosos, demuestra efectos inhibidores extremadamente sorprendentes en virus de HIV. Convenientemente, la medicina novedosa se elabora a partir de productos o productos químicos fácilmente disponibles, de mostrador (OTC = Over The Counter) y proporciona un tratamiento económico seguro y cómodo. Convenientemente, la medicina novedosa (composición médica) incluye inhibidores de microbios que inhiben, suprimen y detienen infecciones microbianas por enfermedades que provocan los microbios. Los inhibidores de microbios comprenden aislados antimicrobianos, extractos botánicos o fitoquímicos de al menos una porción de una o más de las especies de plantas a continuación. Los inhibidores de microbios pueden comprender inhibidores virales para inhibir las enfermedades virales tales como: HIV, virus de herpes simplex 1 (HSV1) virus de herpes simplex 2 (HSV2), virus de varicela zoster (herpes zoster), citomegalo virus, Epstein Barr, virus de papiloma, influenza viral, parainfluenza viral, adenovirus, encefalitis viral, meningitis viral, arbovirus, arenavirus, picornavirus, coronavirus y virus sincitial. Los inhibidores de microbios también pueden comprender inhibidores de bacterias, para inhibir enfermedades bacterianas tales como celulitis, estafilococos, estreptococos, micolbacterias, encefalitis bacterial, meningitis bacterial y bacilos anaeróbicos. En algunas circunstancias, los inhibidores de microbios pueden incluir inhibidores de hongos. Pueden obtenerse mejores resultados si Echinacea y Commophora (también referida como Commiphora) u otras plantas, no se emplean en la medicina en bruto, sin tratar y en el estado sin cortar. Incluso para mejores resultados, la medicina puede excluir: Arabinosa, betaína, celulosa, cobre, fructosa, ácidos grasos, galactosa, glucosa, hierro, potasio, proteína, resina, sacarosa y xilosa. El tratamiento médico mejorado proporciona un método y proceso novedosos para utilizar en tratar las enfermedades infecciosas anteriores. Para algunas enfermedades infecciosas, los inhibidores microbianos pueden aplicarse y mantenerse en el área microbiana infectada o el área infectada (región o superficie) , hasta que los síntomas externos y las manifestaciones físicas de la infección desaparecen, residen o se resuelven respecto al área infectada. La medicina puede administrarse por inyección de jeringa, sublingual intramural, rociado, aplicación con toques, espolvoreado, aplicación con torunda, aplicación con esponja, aplicación con cepillo, vaciado, suministro, cobertura o fuerte revestimiento con la medicina en las áreas microbianas infectadas tales como: nodos de linfa, sistema linfático, células T, mucosa oral, mucosa nasal, tejido vaginal, tejido labial, tejido rectal y tejido anal, tejido perianal, labios, tejido cutáneo, tejido ocular, conjuntiva y párpados de los ojos. De preferencia, los inhibidores microbianos o el compuesto antimicrobiano se aplican sistémicamente con una jeringa en el canal rectal o vagina, para tratar o evitar la transmisión sexual de HIV. Los inhibidores microbianos o el compuesto antimicrobiano pueden ser aplicados en la forma precedente 4 a 20 veces por día por 4 a 18 días consecutivos para disminuir substancialmente la carga viral de pacientes infectados con HIV, es decir para disminuir la cantidad de virus de HIV y SIDA en el cuerpo. De preferencia, la medicina mejorada, composición médica o compuesto microbiano es un concentrado fitoquímico que se combina y aplica en forma simultánea o concurrente con un surfactante, un nutriente y un portador, solvente o diluyente, para proporcionar o una solución medicinal microbicida. El nutriente sirve como catalizador, activador7 iniciador fitoquímico, suplemento nutricional y portador auxiliar. El nutriente puede comprender uno o más de los siguientes: una vitamina soluble en agua, una vitamina soluble en grasa, vitamina A, complejo de vitamina B, (complejo de vitamina B) , vitamina D, vitamina E, vitamina K, vitamina Bl, vitamina B2, vitamina B5, vitamina B6, vitamina B12, vitamina B15 y de preferencia folacina o ácido fólico. Para este objetivo, la solución microbicida interesante comprende un surfactante detergente antimicrobiano con extractos botánicos. Los surfactantes de preferencia son surfactantes catiónicos que pueden comprender en forma sencilla o cualquier cantidad de cloruro de amonio cuaternarios que tienen 6 a 18 átomos de carbono tales como cloruro de alquil bencil dimetil amonio, mezclas de cloruro de alquil bencil dimetil amonio, cloruro de alquil dimetil/etil bencil amonio, cloruro de N-alquil dimetil bencil amonio, cloruro de diisobutil fenoxi etoxi etil dimetil bencil amonio, cloruro de M (ClzC iC16) dimetil bencil amonio, cloruro de benzalconio, cloruro de octil decil dimetil amonio, cloruro de didecil dimetil amonio, cloruro de dioctil dimetil amonio, cloruro de dialquil dimetil amonio, cloruro de dialquil metil bencil amonio, cloruro de octil decil dimetil amonio, cloruro de dimetil bencil amonio, cloruro de lauril dimetil bencil amonio, o-bencil-p-clorofenol, cloruro de didecil dimetil amonio, cloruro de dioctil dimetil amonio, cloruro dialquil (C14C12C16) dimetil bencil amonio, de preferencia comprende cloruro de alquil bencil dimetil amonio, en particular de preferencia cloruro de benzalconio. El rango de actividad del surfactante catiónico puede ser de 5 a 90% pero para mejores resultados 8 a 20%. Las sales de amonio cuaternarias están fácilmente disponibles en el comercio. En algunas circunstancias, puede ser útil utilizar otros surfactantes tales, como aunque no limitados a: DMSO, surfactantes de ácido glicólico, surfactantes de enzima, surfactantes anfolíticos, surfastantes s iteriónicos y surfactantes no iónicos. Los surfactantes pueden comprender detergentes, agentes humectantes, emulsificantes, desespumantes y/o agentes para reducción de tensión superficial. Son útiles portadores para mezclar los constituyentes, mantener los constituyentes en solución, y proporcionar un método fácil de aplicación al área afectada, ya sea por rociado, gotero o aplicador. Mientras que se prefieren para mejores resultados una solución acuosa, de preferencia un portador acuoso estéril y solvente, en algunas circunstancias puede ser conveniente el utilizar otros portadores líquidos o sólidos, tales como: glicerina, aceite mineral, sílice, aceite de semillas de algodón, aceite de coco, aceite vegetal, aceite de semilla, aceite de pescado o aceite de origen animal, alcohol, talco, harina de maíz, cera de abejas, cera de canova, beta caracteno, aceite de ajo, aceite de alcanfor, vitaminas solubles, minerales solubles, aceite de colza, aceites de nueces, aceite de oliva, liposomas, ácido ascórbico, aceite de hierba del asno, piogenol, aceite de semillas de uvas, lanolina, Ethocyn, colágeno, aloe vera, polen de abejas, jalea real, sulfato de condroitina A, vegetales marinos, EDTA, ácidos grasos, hierbas, lecitina, bioflavanoides, aceites o polvos de granos, algas, tés, vinagres, acidófilos, sales de células, ácidos ascórbicos, hydra 5, glandulares, amino ácidos, psyllium, derivados de plantas u otros portadores estériles. Los extractos botánicos, aislados antimicrobianos o fitoquímicos contenidos en estos nuevos tratamiento médico y medicina, pueden estar constituidos por: resina de goma de mirra, sesquiterpenos, cursenona, dihidrofuanodien-6-ona, 2-metoxil furandieno, elemol, ácido acético, -amirona, araminosa, a-bisaboleno, gama-bisaboleno, sadineno, campesterol, colesterol, cinamaldehído, comiferina, ácido comifórico, ácido beta comofórico, ácido gama-comifórico, ácido comiforínico, m-cresol, alcohol cúmico, cuminaldehido, dipenteno, elemol, 3-epi-a-amidina, eugenol, furanodieno, furano dienona, galactosa, goma, heeraboleno, a-heerabomirrol , beta-heerabomirol , heeraboreceno, limoneno, ácido 4-0-metil glucurónico, N-nonacesano, beta citosterol , xilosa, caropilenos, (carofilenos) , linderestireno (lindestireno) , arabinosa, betaína, cobre, equinacea, equinacina B, equinacósido, equinolona, enzimas, fructosa, ácidos grasos, galactosa, glucosa, ácido glucurónico, inulina, inuloide, hierro, pentadecadieno, compuestos de poliacelileno, polisacáridos, tales como aunque no limitados a, arabinogalactano, potasio, proteína, resina, ramnosa, sacarosa, azufre, taninos, vitaminas A, C y E, alquilamidas, apigenina, arabino galacta, ácido ascórbico, ácido behénico - etil ácido, betaina, borneol, bornil-acetato, ácido caféico, ácido 2-0-cafeoíl 3-(5-a-carboxibeta) 3,4-dihidroxifenilo, 2-0-cafeoíl-3-0-cumaroíl taraico, 3-0-cafeoól equinacósido, ácido 2-O-cafeoíl 3-0-feruloíl tartárico, ácido 2-0-cafeoíl tartárico, carbonato de calcio, ß-caroteno, carofileno-epóxido, cloruro, ácido clorgénico, ácido cicórico, metil éster de ácido cicórico, cobalto, cianadin-3-0-(beta-d-glicopiranósido) , cinadin-3-6-0-malonil beta-d-glicopiranósido, cinarina, ácido deca (2e, 4e, 6e) linóico-isobutil amida, 3-ramnosilverbascósido, ácido 3-5-dicafeoíl quínico, ácido 4,5-0-dicafeoíl quínico, ácido 2,3-0-diferulol tartárico, ácido do-deca( 2e, 4e) dienóico-isobutil amina, 2-deca-2, 4-dien-l-isovalerato, ácido do-deca (2e, 6z, 8e, lOe) tetrahenóico-isobutilamina, episobunol, betafarneceno, ácido 2-O-feruloíl tartárico, germacreno, hepta deca (8z, llz) diendosona, heteroxilano, humuleno 8-12, (e)-10-hidroxi-4, 10-dimetil-4, 11-dodecadien-2-ona, ácido 13-hidrooctadeca-9z, lie, 15z (trienóico, inulina, hierro, ácido isoclorogénico, isoramnetin-3-rutinósido, isotusilagina, caemferol, caemferol-3-glucósido, caemferol-3-nitunósido, limoneno, lutolina, liutolin-7-glucósido, magnesio, manganeso, 2-metil-tetradeca-5,12s-dieno, 2-metil-tetradeca 6,12-dieno, metil-p-hidroxicinamato, marceno, niacina, ácido palmítico, pentadeca-(8z, llz)-dien-2-ona, pentadeca-(8z, 13z)-dien-ll-lin-2-ona, pentadeca-8-en-2-ona, pentadeca-(8z)-en-2-ona, pentadeca-(8z)-en-ll, 13-dien-2-ona, 1-pentadeceno, penta-(l, 8z)-dieno, fósforo, a-pineno, beta-pineno, poliacetileño, epóxido pontica, potasio, proteína, quercetagetin-5-ona-glucósido, quercetina, quercetin-3-galactósido, quercetin-3-glucósido, quercetin-ter-robinósido, quercetin-xilósido, quercetin-3-xilosil galactósido, ramno rabinogalactano, riboflavina, rutina, rutósido, selenio, silicato, beta-sitoésterol , sitoesterol-3-beta O-glucósido, sodio, estigmasterol, sulfato, ácido tartárico, tetradeca-(8z)-en-ll, 13-dien-2-ona, tia ina, n-triacontanol , trideca-l-en-3 ,5,7,9, 10-pentaína, tusilagina, vainillina, verbascósido. Para mejores resultados, los concentrados fitoquímicos incluyen los fitoquímicos anteriormente mencionados, excluyendo arabinosa, betaína celulosa, cobre, fructosas, ácidos grasos, galactosa, glicosa, hierro, potasio, proteína, resina, sacarosa y xilosa. Los extractos botánicos , aislados antimicrobianos y productos fitoquímicos pueden ser separados, extraídos y aislados de porciones de plantas tales como: pimpinella anisum, myroxylon, aretostaphylos, carum, capsicum, eugenia mytacea, coriandrum, inula, allium, gentiana, juniperus, caléndula, origanum, mentha labiate, commiphora, plantago, rosmarinus, ruta, lamiaceae, meliosa, baptisa, artemisa, sago, mentha, partenium integrifollium, eucalipto, asteriacea y de preferencia: (1) del género Echinacea de la familia Astericaea, es decir Echinacea purpurea, Echinacea angustofollium, (Echinacea pallidae) , Echinacea vegetallis, Echinacea atribactilus y sus Echinacea pallidum y cultivos; así como de los géneros Commophora es decir Commophora myrrha, Commophora molmol, Commophora erythraea, y sus cultivos. Para mejores resultados, los productos fitoquímicos y aislados antimicrobianos se extraen de Echinacea purpurea, Echinacea angustifolium y Commophora myrrha. La tecnología, tratamiento y medicina de la invención producen resultados muy atractivas inesperados y sorprendentemente buenos y consistentes. Pruebas muestran que la solución microbicida (medicina) y el tratamiento médico son extremadamente útiles para controlar infección de HIV, inhibir el enlace del virus HIV a células objetivo, actuar como un mirobicida preventivo, extender los períodos de latencia de HIV y otras enfermedades e inhibir dramáticamente HIV y otros virus, mientras que en general es seguro para el paciente y el medio ambiente. Una explicación más detallada de la invención se proporciona en la siguiente descripción y reivindicaciones anexas. DESCRIPCT?w nCT?T.T.Ar>A r»F. LAS MODALIDADES PREFERIDAS Se proporcionan un microbicida y tratamiento para inhibir el virus de inmunodeficiencia humano, también referido como virus de inmunodeficiencia humana o HIV. Convenientemente, el microbicida HIV y el tratamiento inhiben completamente HIV, así como otras enfermedades microbianas infecciosas y son seguros y no tóxicos para humanos, animales y el medio ambiente. La medicina y microbicida de HIV pueden comprender un surfactante y un compuesto botánico herbáceo que proporciona un extracto botánico, fitoquímico, aislado antimicrobiano, aislado antiviral, inhibidor de microbios e inhibidor viral. La composición microbicida preferida puede comprender: un surfactante; un diluyente acuoso; un nutriente y un botánico herbáceo del género Echinacea (E) de la familia Asteracea, especie: purpurea, angustifolia, pallidae, vegetales, atribactilus y los cultivos así como botánico herbáceo del género Commiphera, especies: Commiphora myrrha, Commiphora molmol, Commiphora erythraea, y sus cultivos, de preferencia los botánicos herbanáceos, son extractos y aislados que comprenden productos fitoquímicos de Commiphora, y productos fitoquímicos de Echinacea, como se encuentran en y extraen de Commiphora myrrha, Echinacea purpurea, Echinacea pallidae y Echinacea angustifolia. Para mejores resultados, el tratamiento médico y microbicida (medicina) comprenden: un surfactante catiónico; los fitoquímicos de Echinacea purpurea, Echinacea angustofolia y Commiphora myrrha, un diluyente acuoso estéril y folacina. La proporción de Commiphora myrrha a Echinacea purpurea y Echinacea angustofolia de preferencia está en el rango desde 1:2 a 1:4. El surfactante proporciona un cierto desbridamiento al nivel de superficie celular con un amplio espectro de acción antimicrobiana. Surfactantes de esta naturaleza pueden comprender sales de amonio cuaternarias que contienen 6 a 18 átomos de carbono. De preferencia, el surfactante sal de amonio cuaternaria, es una mezcla de cloruros de alquil dimetil bencil amonio, que pueden ser: haluro de benzalconio, bromuro de benzalconio, cloruro de benzaltonio y más preferiblemente cloruro de benzalconio. El tratamiento de HIV puede comprender una solución acuosa 100% activa, pero también puede emplearse en forma concentrada. La solución puede comprender en peso diversas concentraciones de surfactantes tales como .55 % a .08 % de preferencia .02 % a .30% y más preferiblemente .02 % a .26%. Los productos fitoquímicos en la Echinacea botánica han demostrado una actividad impresionante contra bacterias, virus y algunos hongos. El mecanismo exacto es desconocido. Cuando el microbiocida de la invención se probó tópicamente en HIV y HCV 1 y 2, es efectivo para tratar brotes infecciosos de herpes simplex. Cuando se prueba in vitro muestra actividad inhibitoria contra HIV-1 y HCV 1 y 2. La composición de concentrado fitoquímico comprende los siguientes constituyentes aislados, extractos botánicos, inhibidores microbianos y aislados antimicrobianos: polisacáridos, equinaceno, equinaceína, equinacósido (éster de ácido caféico) , equinolona, equinadiol, enzimas, ácido glucurónico, inuloide, pentadecadieno, compuestos de poliacetileno, arabino galactano, ramnosa, PS1 (1,4-0-metil-glucurono-arabinoxilano, Mt 35 kD) y PS II (un ácido ramnoarábinogalactano, Mt 450 kD) , cinarina, ácido 1,5-di-ion-0_-cafeoíl quínico), ácido chicórico (ácido 2,3-0-di-cafeoíl tartárico) y derivados, alquil amidas, ceto-alquinos y -alquenos; quinonas, aceites incluyendo borneol, acetato de bornilo; pentadeca-8(z_)-en-2-ona, germacreno D; cariofileno; epóxido de cariofileno, antocianinas , pirrolizidina alcaloides; amidas lipofílicas, isobutilamidas; poliacetilenos, resina de goma de mirra; curzerenona (de tipo furahoeudesmano) , dihidro fuanodien-6-ona; 2-metoxi-furanodieno (tipo furano elemeno); elamol; lindestireno (tipo furano germacrano); alquilamidas; apigenina, arabinogalacta, ácido ascórbico, ácido behénico-etil-ácido, betaína, borneol, bornil-acetato, ácido caféico, ácido 2-p_-cafeoíl-3-(5)-a-carboxi-ß-( 3 ,4-dihidroxifenil, 2-0-safeoíl-3-0_-cumaroil taráico, 6-0-cafeoíl equinacósido, ácido 2-0-cafeoíl-3-0-feruloíl tartárico, ácido 2-0-cafeoíl tartárico, calcio, carbonato, beta caroteno, carofileno, epóxido de carofileno, cloruro, ácido clorgénico, ácido sicórico, metil éster de ácido cichórico, cobalto, cianadin-3-?-ß-de-glicopiranósido (cinadin-3-) 6-Q-malonil-ß-de-glicopiranósido (cinarin, deca iso butil amida-ácido deca (2, 4e, 6e,) trienóico, des-ramnosil verbascósido, ácido 3-5-dicafeoíl quínico, ácido 4-5-0-dicafeoíl quínico, ácido 2 , 3-Q-diferulol tartárico, isobutil amida dodesa ácido 2-dk (2e, 4e) -dinoico, dodeca-2,4-dien-l-il isovalerato, isobutil amida de ácido dodeca (2e, 6z, 8e, lOe) tetraenóico, epishobunol, ß-farmeceno, ácido-2-?-feruloíl tartárico, germacreno, hepta deca (8z, llz) -dien-2-ona, heteroxilano, humuleno 8-12, (e)-10-hidroxi-4, 10-dimetil 4, ll-dodecadien-2-ona, ácido 13-hidroxi-octadeca (9z, lie, 15z) trienóico, inulina, hierro, ácido clorogénico, isoramnetin-3-ritunósido, isotusilagina, caemferol, caemferol-3-glucósido, caemferol-3-nutósido, limoneno, luteolina, luteolin-7-glucósido, magnesio, manganeso, 2-metil-tetradeca-5,12-dieno, 2-metil tetradeca-6-12-dieno, etil-p-hidroxicinamato, marceno, niacina, ácido palmítico, pentadeca-(8z, llz)-dien-2-ona, pentadeca-(8z, 13z)-dien-ll-lin-2-ona, pentadeca-8-en -2-ona, pentadeca-(8z)-en -2-ona, pentadeca-(8z)-en-ll, 13-dien-2-ona, 1-pentadeceno, penta-(l, 8z)-dieno, fósforo, a-pineno, ß-pineno, poliacetilenos, epóxido póntica, potasio, proteína, quercetagetin-7-glucósido, quercetina, quercetin-3-galactósido, quercetin-3-glucósido, quercetin-3-robinósido, quercetin-3-xilósido, quercetin-3-xilosilgalactósido, ramnoarabino galactano, riboflavina, rutina, rutósido, selenio, silicato, ß-sitosterol, sitosterol-3-ß-o-glucósido, sodio, estigmasterol, sulfato, ácido tartárico, tetra-deca-(8z)-en 11, 13-dien-2-ona, tiamina, n-triacontanol , trideca-l-en-3 ,5,7,9, 10-pentaína, tusilagin , vainillina, verbascósido, sesquiterpenos, ácido acético, -amirona, arabinosa, a-bisaboleno, ?-bisaboleno, cadineno, campesterol, colesterol, cinamaldehído, comiferina, ácido a-comifó ico, ácido ß-comifórico, ácido ?-comifórico, ácido comiforínico, m-cresol, alcohol cúmico, cuminaldehído, dipenteno, elomol, 3-etr-a-amidina, eugenol, furanodieno, furanodienona, galactosa, goma heeraboleno, a-heerabomirrol , ß-heerabomirrol, heeraboresceno, limoneno, ácido 4-O-metil-glucurónico, n-nonacesano, ß-sitosterol, xilosa, carofilenos (carofileno ) , resina de goma de mirro, obsenona, furanodien-6-ona y 2-metoxi furandieno. Para mejores resultados, los aislados antimicrobianos del concentrado fitoquímico comprenden en peso (con base en el peso total de la composición médica inventiva): 0.3 a 9% de equinacósido; 0.1 a 7% PS I (-4-0-metilglucuoronoaraniloxilano, M^, 35 kD) y PS II (un ácido ramnoarabinogalactano, ffc 450 kD) ; .1 a 10% de cinarina (ácido 1,5-di-O-cafeoíl quínico) y ácido chicórico (ácido 2,3-0-di-cafeoíl tartárico) y derivados; .2 a 4% de equinolona; .2 a 8% de equinacina B; 0.1 a 6% de equinaceina; .2 a 7% de antosianinas que comprenden cianidina 3-O-ß-D-glucopiranósido y 3-0-(6-Q-malonil-ß-D-glucopiranósido) ; .01 a .06 % de pirrolizidina alcanoides que comprenden tusilagina e isotusilagina; .003 a .009 % de dodecaisobutilamidas isoméricas y ácido 2E, 4E, 8Z, 10E/Z-tetraenóico; .01 a 2% de cariopilenos; así como los fitoquimicos de Commophora myrrh que comprenden: resina de goma de mirra, cursenona, dihidro furano dien-6-ona, 2- etoxi furandieno, linderstireno (lindestreno) sesquiterpenos, ácido acético, aA-a irona, arabinosa, -bisaboleno, ?-bisaboleno, gama-bisaboleno, cadineno, campesterol, colesterol, cinamaldehído, comiferina, ácido a-comifórico, ácido beta-com ifórico, ácido ?-comifórico, ácido comiforinico, n-cresol, alcohol cúmico, cu inaldehído, dipenteno, ele ol, 3-epi-a-amirina, eugenol, furanodieno, furanodienona, galactosa, goma heeraboleno, -heerabomirrol , ß-heerabomirrol , heeraboreseno, limoneno, ácido 4-0-metil glucurónico, n-nonacesano, ß-sitosterol, xilosa, caropilenos, (caropilenos) y linderestireno (lindestireno) . El concentrado fitoquímico puede comprender en peso 2 a 90% de la composición química y solución y de preferencia comprende no menos de 15% de la composición y solución y p ra mejores resultados comprende 40 a 60% de la composición médica y solución. El diluyente disuelve el cloruro de benzalconio (surfactante) y los concentrados fitoquímicos y puede actuar como un portador en rocíos, tubos y botellas gotero. El diluyente preferido es un diluyente acuoso y de preferencia es un diluyente acuoso estéril. La proporción de agua en la solución acuosa a cloruro de benzalconio puede estar en la gama desde 30,000:1 a 250:1 y de preferencia de 5,000:1 a 750:1. La proporción de agua a los concentrados combinados de cloruro de benzalconio y fitoquímicos puede comprender un rango de 2:1 a 100:1, con un rango preferible de 4:1 a 40:1 y para mejores resultados puede comprender una proporción de 6:1 a 20:1. Para mejores resultados, la medicina (microbicida) y tratamiento microbicida mejorados para herpes, comprenden en peso: .02% a .3% de cloruro de benzalconio y para evitar toxicidad de preferencia menos de 0.26%, 40% a 60% de los fitoquímicos de Echinacea y Commophora; .01% a 25%, más preferiblemente 2% a 12% de nutriente; y 20% a 60%, más preferiblemente 29.74% a 59.8% de agua estéril. La medicina (microbicida) convenientemente comprende un nutriente de vitamina que sirve como un portador nutricional y proporciona un efecto sinergístico cuando se combina con Commophora myrrh, Echinacea purpurea, y Echinacea augustifolia. El nutriente puede comprender uno o más de los siguientes: Vitamina A, complejo de vitamina B, vitamina D, vitamina E, vitamina K, una vitamina soluble en agua, una vitamina soluble en grasa, vitamina Bl, vitamina B2, vitamina B5, vitamina B6, vitamina B12, vitamina B15 y de preferencia folacina o ácido fólico. Mientras que el agua es el diluyente preferido y portador acuoso, puede ser convenientemente en algunas circunstancias el utilizar otros portadores a fin de propulsar el concentrado a través de una jeringa o rociador, o para mayor solubilidad y eficacia, puede ser conveniente en algunas circunstancias el incluir un agente de control de viscosidad. Además, mientras que se estima que la vida o duración útil en almacenamiento de la medicina mejorada es de dos años, puede ser necesario el agregar un conservador apropiado. Para uso preferido, como un microbicida preventivo contra HIV, la solución médica (medicina) deberá aplicarse sistémicamente, vaginal ente o rectalmente. El método de aplicación de medicina puede ser por: aplicación por jeringa, rociado, aplicación por toques, goteo u otros métodos. La aplicación o revestimiento de la solución (medicina) deberá mantenerse durante el coito. Jabones aniónicos y detergentes aniónicos y especialmente jabones con contenido de proteínas pueden ser contraindicados. De preferencia, el área de aplicación deberá someterse a lavado, limpieza y secado antes de aplicación de la medicina. Para tratamiento como un antiviral de HIV, la medicina puede aplicarse por jeringa del tratamiento de dosificación al recto o vagina o por otros métodos. CLORURO DE BENZALCONIO Un surfactante preferido es cloruro de benzalconio. El cloruro de benzalconio en solución acuosa está comercialmente disponible bajo el nombre y marca comercial Zephiran" distribuido por Zanophy Winthrop Pharmaceuticas (anteriormente Winthrop Labs). El cloruro de benzalconio es un surfactante anti-infeccioso de rápida acción, con una duración de acción moderadamente prolongada. El surfactante es activo contra bacterias y algunos virus, hongos y protozoarios. Las esporas bacterianas se consideran resistentes. Las soluciones de cloruro de benzalconio son bacterioestáticas o bacteriocidas de acuerdo con la concentración. El mecanismo exacto de acción bacteriana del cloruro de benzalconio se desconoce pero se considera que se debe a la inactivación de enzimas. La actividad de cloruro de benzalconio generalmente se incrementa con aumento temperatura y pH. Bacterias gram-positivas son más susceptibles al cloruro de benzalconio que las bacterias gram-negativas. Desafortunadamente, el cloruro de benzalconio se inactiva por jabones, detergentes aniónicos, suero y ciertas proteínas. El cloruro de benzalconio ha caído del favor en muchos laboratorios por las razones anteriores . Cuando el cloruro de benzalconio se emplea solo y prueba tópicamente in vivo, fue ineficaz para brotes infecciosos de herpes simplex. Cuando se prueba in vi tro en HIV y HSV 1 y 2 , el cloruro de benzalconio demostró niveles indeseablemente elevados de toxicidad para las células, incluso a altas diluciones, lo que es médicamente inaceptable. La fórmula química del cloruro de benzalconio se ilustra a continuación. Otros tipos de cloruro de benzalconio pueden utilizarse.

FITOQUIMICOS Mientras que Echinacea no aislada sin procesar y sin tratar en crudo, generalmente no es conveniente para tratar HIV y herpes intramuralmente, cuando se filtra apropiadamente, puede ser factible la administración intramural . De manera significante, parece que algunos aunque no todos los constituyentes aislados y los extractos botánicos de Echinacea y Commiphora (como se describió con anterioridad) proporcionan productos fitoquímicos, aislados antimicrobianos, extractos botánicos, e inhibidores de microbios que tienen o exhiben actividad antimicrobiana, que parece ser eficaz para tratar HIV, virus de herpes y otras enfermedades infecciosas. Como se estableció previamente, la composición de concentrado fitoquímico comprende los siguientes constituyentes aislados, extractos botánicos, inhibidores microbianos y aislados antimicrobianos: polisacáridos, echinacen, Echinaceina, Echinacósido (éster de ácido caféico), Echinolona, Echinadiol, enzimas, ácido glucurónico, inuloide, pentadecadieno , compuestos de poliacelileno , arabinogalactano, ramnosa, PS I (-4- 0.-metilglucuoronoarabinoxilano, M , 35 kD) y PS II (un ácido ramnoarabinogalactano, tfc 450 kD), cinarina (ácido 1,5-di-O-cafeoíl quinico) ácido chicórico (ácido 2,3-O-di-cafeoll tartárico) y derivados, alquilamidas, ceto-alquinos y -alquenos; quinonas, aceites incluyendo: borneol, acetato de bornilo, penta deca-8(z)-en-2-ona, germacreno D; carofileno; epóxido de carofileno, antocianinas pirrolizidina alcaloides; amidas lipofílicas; isobutil amidas; poliacetilenos; resina de goma de mirra; curzerenona (tipo furahoeudesmano) , dihidro fuanodien-6-ona; 2-metoxi furanodieno (tipo furanoelemeno) ; elamol; lindestreno (tipo furanogermacrano) ; alquil amidas, apigenina, arabinogalacta, ácido ascórbico, ácido behénico-etil-ácido, betaína, borneol, bornil-acetato, ácido caféico, 2-0-cafeoí1-3- (ciclo-a-carboxibeta) 3,4-dihidroxifenilo, ácido 2-0-caf oíl-3-0-cumaroíl tartárico, 6-O-cafeoíl equinacósido, ácido 2-0-cafeoíl-3-0-feruloíl tartárico, ácido 2-O-cafeoíl tartárico, calcio, carbonato, beta-caroteno, carofileno, carofileno-epóxido, cloruro, ácido clorgénico, ácido cichórico, ácido cichórico-metiléster, cobalto, cianadin-3-0-(ß-d-glico-piranósido) , cinadin-3-(6-0-manolin-ß-d-glocipiranósido) , cinarin, isobutil amida de ácido deca (2E, 4E, 6E) trienóco, desramnosil verbascósido, ácido 3,5-dicafeoíl quínico, ácido 4-5-O-dicafeoíl quínico, ácido 2,3-O-diferulol tartárico, isobutil amina de ácido 2-deca-(2E, 4E)-dienóico, dodeca-2,4-dienil-l-il isovalerato, isobutil amina de ácido dodeca (2e, 6z, 8e, l0e)-tetraenóico, epishobunol, ß-farmeceno, ácido 2-O-feruloíl tartárico, germacreno, hepta deca-(8z-llz)-en-2-ona, hetereoxilano, umuleno 8-12, (e)-10-hidroxi-4, l?-dimetil-4, 11-dodecadien-2-ona, ácido 13-hidroxi-hepta-(9z, lie, 15z)-enóico, inulina, hierro, ácido isoclorogénico, isoramnetin-3-rutinósido, isotussilagino, caemferol, caemferol-3-glucósido, caemferol-3-nutinósido, limoneno, luteolina, luteolin-7-glucósido, magnesio, manganeso, 2-metil tetradeca-5, 12-dieno, 2-metil tetradeca-6, 12-dieno, metil-p-hidroxicinamato, marceno, resina, ácido palmítico, pentadeca-(8z, llz)-dien-2-ona, penta deca-(8z, 13z)l-dien-ll-lin-2-ona, penta deca-8-en-2-ona, penta deca-(8z)-en-2-ona, penta deca-(8z)-en-ll, 13-dien-2-ona, 1-pentadeceno, penta-(l, 8z)-dieno, fósforo, -pineno, ß pineno, poliacetilenos, epóxido póntico, potasio, proteína, quersetagetin-7-glucósido, quercetina, quercetin-3-galactósido, quercetin-3-glucósido, quercetin-3-robinósido, quercetin-3-xilósido, quercetin-3-xilosil galactósido, ramnoarabino galactano, riboflavina, rutina, rutósido, selenio, silicato, ß-sitosterol, sitosterol-3-ß-0-glucósido, sodio, estigmasterol, sulfato, ácido tartárico, tetra deca-(8z)-en-ll, 13-dien-2-ona, tia ina, n-triacontanol , trideca-l-en-3 ,5,7,9, 10-pentaino, tusilágeno, vainillina, verbascósido sesquiterpenos; ácido acético, -amirona, arabinosa, a-bisaboleno, ?-bisaboleno, cadineno, campesterol, colesterol, cinamaldehído, co iferina, ácido a-comifórico, ácido ß-comifórico, ácido ?-comifórico, ácido comiforínico, m-cresol, alcohol cúmico, cuminaldehído, dipenteno, elemol, 3-epi-a-amirina, eugenol, furanodieno, furanodienona, galactosa, goma, heeraboleno, a-heerabomirrol, ß-heerabomirrol , heeraboreceno, limoneno, ácido 4-0.-metil-glucurónico, D-nonacesano, ß-citosterol, xilosa, caropilenos (carofilenos) , linderestireno (lindestireno) , caropilenos (carofilenos) , resina de goma mirra, cursenona, dihidrofrianodina-6-ona , 2-metoxifurandieno y linderstireno (lindestireno) .

La fórmula química de alguno de los extractos botánicos de Echinacea se ilustra a continuación.

Equinacósido Acido cicórico Equinaceína Equinolona La fórmula química de alguno de los extractos botánicos de Commiphora myrrha se ilustra a continuación.

Curzerenona 4, 8-Dihidrofuranodien-8-ona 2-Metoxifuranodienc (Tipo Furanoeudesmano) (Tipo Furanoelemano) Lindestreno Elemol (Tipo Furanogermacreno) Mirra también en ocasiones se refiere como: myrrh, irre y myrrhis, gummi myrrha, myrrha vera, goma de mirra, resina de Commiphora, goma de gruggal, resina de gruggal, mirra de Heerabol, myrrhe, mirra Manniliche, Opopanax y mirra de Hirabol. La mirra puede comprender resina de goma que se obtiene de cortes realizados en la corteza de árboles del genero Commifora myrrha, es decir el árbol de mirra. La mirra también comprende jugos balsámicos de Balsamodendrom myrrha, es decir el mirto árabe, un árbol buráceo. La mirra también puede emplearse de Osmorhiza o Washingtonia, que en ocasiones se refiere como perifollo oloroso dulce (s eet cicely). El árbol de mirra es nativo de Eritrea, Abisinia, Somalia, Yemen, Sudán y otras partes. La especie Commiphora que produce mirra son arbustos o pequeños árboles con grandes espinas de puntas filosas en el tronco. Las hojas trifoliadas desiguales son alternadas y se disponen pequeñas flores en panículos terminales. Cuando se daña, los ductos de resina esquizógenos producen la droga mirra. Mirra es una resina de óleo goma secada al aire que exhuda de la corteza de la especie Commiphora. El material comprende grumos o granos redondos irregulares de tamaños variantes con orificios y un rango de color desde café obscuro y casi negro a claro o naranja-café obscuro; algunas partes pueden ser amarillas o incoloras hasta amarillo pálido. La superficie primordialmente se cubre con un polvo gris a gris amarillento, la fractura es concoidal y produce fragmentos translúcidos delgados. La mirra también puede tener una dulce fragancia y un olor aromático. La mirra puede tener un sabor avinagrado y aromático. la mirra puede ser acre y puede pegarse a los dientes al masticar. Commiphora molmol y otras especies de Commiphora en cuanto a la composición química de su resina-goma es comparable con aquella de mirra DAB 10. Hay confusión considerable en la literatura respecto a las fuentes de mirra y la identidad de la especie Commiphora involucrada. Mirra común (o hirabol) parece derivarse de Commiphora myrrha. La mirra somalí se dice que proviene de Commiphora molmol. Sin embargo, la relación sistemática (taxonómica) entre Commiphora mirra y Commiphora molmol no es clara. La fuente de la mirra abisinia es Commiphora madagascarlensis o Commiphora abyssinica. Opopanax, que también se refiere como mirra bisabol o bedelio perfumado se considera que se origina sea de Commiphora erythraea (Ehrenb) o de Opopanax. La composición de la mirra es muy compleja y solo se conoce que parcialmente 40 a 60% de la mirra es soluble en etanol y comprende una resina y un aceite esencial, la mirra consiste casi totalmente de sesquiterpenos . Los componentes principales de sesquiterpenos son: furano sesquiterpenos de los tipos germacrano elemano, eudesmano y guayano. Además, hay hidrocarburos sesquirterpeno, por ejemplo ß y ?-elemeno, ß-burboneno, ß-cariofileno, humuleno y alcoholes sesquiterpenos por ejemplo elemol. De preferencia, algunos de los furano esquirterpenos son característicos del producto farmacéutico mirra. La goma cruda de mirra o mucílago crudo incluye 20% de proteínas y 65% de carbohidratos que están constituidos de galactosa, ácido 4-0-metil glucurónico y arabinosa. Los productos químicos de Comophora myrrhaphyto, comprenden: ácido acético, a-amirona, arabinosa, a-bisaboleno, ?-bisaboleno, carineno, campesterol, colesterol, cinamaldehído, comiferina, ácido a-comifórico, ácido aß-comifórico, ácido ?-comifórico, ácido comiforínico, -cresol, alcohol cúmico, cuminaldehído, dipenteno, elemol, 3-epi-a-amirina, eugenol, furanodieno, furanodienona, galactosa, goma, heeraboleno, a-heerabomirrol , ß-heerabomirrol , heeraboreseno, limoneno, ácido 4-0-metil-glucurónico, n-nonacesano, ß-sitosterol, xilosa, caropilenos, (carofilenos) , resina goma mirra, burzenona, dihidro fuanodien-6-ona, 2-metoxi-furandieno y linderstireno (lindestireno) . La tintura de mirra puede tener un efecto antiinflamatorio. La mirra macro y microscópicamente puede aparecer como un polvo amarillo cafetoso caracterizado por astillas amarillentas de granos esféricos con tamaños variantes, junto con material granural fino que se hincha en agua. En montes cloral-hidrato, solo hay unos cuantos fragmentos de tejido de la fuente de la planta: fragmentos rojizo café de corcho, individuales y grupos de células petrificadas polihédricas a oblongas, parcialmente con paredes enormemente engrosadas, picadas o con huecos, y lignificadas y contenidos cafetosos: fragmentos de fibras esclerenqui atosas y de parenquima de pared delgada y cristales prismáticos a polihédricos irregulares de 10 a 25 µm de oxalato de calcio. La mirra debe protegerse de la luz y la humedad en recipientes bien cerrados. Es mejor con un deshidratante, ya que la parte carbohidrato de la droga fácilmente absorbe agua. De preferencia, la mirra no deberá almacenarse en forma pulverulenta. ÁCIDO FÓLICO El nutriente preferido es ácido fólico para mejorar resultados. El ácido fólico también referido como folacina, ácido pteroil glutámico, foldina, folemina, foliamina, folicet, folipac, follets, folsan, folvite, incafólico, millafol o citofol es una vitamina soluble en agua, amarilla, cristalina del grupo de complejo B esencial para crecimiento y reproducción de células. El ácido fólico funciona como una co-enzima con las vitaminas B12 y la vitamina C en la ruptura y utilización de proteínas y en la formación de ácidos nucleicos y heme en hemoglobina. El ácido fólico también incrementa el apetito y estimula la producción de ácido clorhídrico en el tracto digestivo. El ácido fólico se almacena en el hígado y puede sintetizarse por la flora bacteriana del tracto gastro intestinal. La deficiencia de ácido fólico puede resultar en deficiente crecimiento, canas, glositis, estomatitis, lesiones gastrointestinales y diarrea, y puede conducir a anemia megaloblástica. La deficiencia se provoca por una absorción de dieta inadecuada de la vitamina, malabsorción o anormalidades metabólicas. La necesidad por el ácido fólico se incrementa como en el embarazo, infancia y por tensión. El ácido fólico tanto es lábil al calor y la luz y pérdida considerable de la vitamina ocurre cuando se ha almacenado por mucho tiempo. El ácido fólico no es tóxico y es eficaz para tratar estados de deficiencia específicos. La fórmula química del ácido fólico se ilustra a continuación : Ácido Fólico (ácido pteroilglutámico) La estructura del ácido fólico se presenta a continuación : áa do pteróico Ácido pteroílglutámico (ácido fólico) La molécula de ácido fólico contiene ácido glutámico, ácido p-amino benzoico y pterina; la combinación de pterina y ácido p-amino benzoico se denomina ácido pterósido. La estructura mostrada es el ácido pteroíl glutámico del hígado. El ácido fólico producido por bacterias contiene tres residuos de ácido glutámico combinados en un enlace ?-glutamilo. Muchos tejidos animales contienen ácido pteroíl heptaglutámico, los residuos de ácido glutámico de nuevo están en el enlace y-glutamilo. Ácidos pteroól poliglutámicos sintéticos en donde las moléculas de ácido glutámico están en enlaces a-glutamilo, están activos en ensayos del crecimiento bacterial; ácidos pteroíl-?-glutámicos son eficaces tanto en bacterias como en el tratamiento de anemia macrocítica en humanos. Una enzima en tejidos animales hidroliza los compuestos pteroíl poliglutamato de origen natural en ácido pteroíl monoglutámico y ácido glutámico libre. Otra forma estructural del ácido pteroíl glutámico (PteGlUi) se ilustra a continuación: pte monoheptaglu+ama+o posición radical congénere N» -<H3 C«2H,PitGlu Metilietrahi drofolato N! -CHO S-CHOH.ritGlu Acido Fólico (factor W —CHO lCCHOK teGI. 1 O-formiidecahidroFcJaio N»-? — U— S.HJ. i?^feG!. 5,1 O-met eniltetrahidrofolato MS-io — x..— iA t/¿ULHfuG1m 5,1 O-meiilentetrahidroFolato NJ - HÑH CHNHH~P¡cGk? farmininolfefrahidrofolaío K!" — CK-OH HjOHH^itC^ h idrtací etiltetrahi drofoiato Las estructuras y nomenclatura del ácido pteroil glutámico (ácido fólico) .

Porciones principales de la molécula del ácido fólico incluyen un anillo pteridina enlazado por un puente de metileno con ácido paraminobenzóico que se une por un enlace amida con ácido glutámico. Mientras que el ácido pteroílglutámico es la forma farmacéutica común del ácido fólico, ni es el congénere folato principal en alimentos ni la co-enzi a activa para metabolismo intracelular. Después de absorción, PteGlu,. se reduce rápidamente en las posiciones 5, 6, 7 y 8 en ácido tetrahidrofólico (H^PteGlu que luego actúa como un aceptor de una cantidad de unidades de un átomo de carbono. Estas se conectan en cualquier posición 5 o 10 del anillo piperidina o puentea estos átomos para formar un nuevo anillo de 5 miembros. La vitamina B12 y el ácido fólico son productos esenciales de la dieta para humanos. Una deficiencia de cualquier vitamina resulta en síntesis defectuosa del ADN en cualquier célula que intenta replicación y división cromosomal. Ya que los tejidos con la mayor velocidad de tiempo de vida de células muestran los cambios más dramáticos, el sistema hematopoyético es especialmente sensible a deficiencias de estas vitaminas. Clínicamente, el signo más temprano de deficiencia es una anemia megaloblástica, en donde la reducción en la síntesis de ADN resulta en anormalidad morfológica característica de las células precursoras en la médula ósea. Células de glóbulos rojos macrocíticos anormales son el producto y el paciente se vuelve severamente anémico. Metilcobalamina soporta la reacción metionina sintetasa que esencialmente es para el metabolismo normal de folato. Grupos metilo contribuidos por metil tetrahidrofolato (CHsHíPteGlUj.) se emplean para formar metil cobalamina, que luego actúa como un donador de grupo metilo para la conversión de ho ociteína en metionina. Esta interacción folato-cobalamina es pivotal para síntesis normal de purinas y pirimidinas y por lo tanto de ADN. La reacción metionina sintetasa es substancialmente responsable por el control del reciclado de cofactores folato; el mantenimiento de concentraciones intracelulares de folil poli glutamatos; y a través de la síntesis de metionina y su producto, S-adenosil metionina, el mantenimiento de una cantidad de reacciones de metilación. Ya que el metil tetrahidrofolato es el congénere folato principal suministrado a las células, la transferencia del grupo metilo en cobalamina es esencial para el suministro adecuado de tetrahidrofolato , el substrato para una cantidad de etapas metabólicas. El tetrahidrofolato es un precursor para la formación de folil poliglutamatos intracelulares; también actúa como el aceptor de una unidad de un carbono en la conversión de serina en glicina, con la formulación resultante de 5, 10-metilen tetrahidrofolato (5,10-CH2H4PteGlu) . Este último derivado dona el grupo metileno en deoxiuridilato para la síntesis de timidilato-una reacción extremadamente importante en la síntesis de ADN. En el proceso, el 5, lO-CHaHíP eGl í se convierte en dihidrofolato H,PteGlu.

El ciclo luego se completa por la reducción de H2PteGlu en H4PteGlu por dihidrofolato reductasa, la etapa que se bloquea por antagonistas folato tales como metotrexato. Otras rutas también conducen a la síntesis de 5, 10 -metilen tetrahidrofolato. Tabla A: Biosíntesis de Ácido Fólico La biosíntesis del ácido fólico se ilustra a continuación. El símbolo ppp representa trifosfato. Síntesis El folato puede transportarse a tejidos como CHjEUPteGlu,.. El hígado reduce y etila activamente PteGlu,. (y H2 o HiPt GlUa.) y luego transporta el CHgHiPteGlu,. en la bilis para reabsorción por el intestino y subsecuente suministro a tejidos, CHsHí t GlUa. actúa como un donador metilo para la formación de metil cobalamina y como una fuente de H4PteGlu1 y otros congéneres folato como se describió previamente. El folato se almacena dentro de las células como poliglutamatos. SURFACTANTES Mientras que el cloruro de benzalconio es el surfactante preferido para mejores resultados, en algunas circunstancias puede ser conveniente el utilizar otros surfactantes de amonio cuaternario u otros surfactantes. El compuesto de amonio cuaternario puede ser cloruro de dicocodimonio , que también se conoce como cloruros de dicoco alquil dimetilo o cloruro de dicoco dimetil amonio o cloruro de Di-C8-18-alquil dimetilo. Esto puede emplearse en combinación con isopropanol tal como 20 a 30% de isopropanol. La fuente preferida de compuesto cuaternario comprende 70 a 80% de compuesto de amonio cuaternario y menos que .03% de cloruro de metilo, y una gravedad específica aproximada de 0.87 a 46°C (115°F), una presión de vapor de 33 mm/Hg a 20°C (68°F), un punto de ebullición inicial de 82 °C (180°F) a 760 mm/Hg y una volatilidad a 20 a 30%, y se produce bajo la marca CarSpray 300 por Witco Corporation, Dublin, Ohio, E.U.A. El compuesto cuaternario puede proporcionar cualidades desinfectantes y sirve como un fungicida para tratar infecciones de hongos y levaduras. Otros compuestos de amonio cuaternarios pueden ser útiles tales como los producidos bajo la marca Jet Quat 2C-75 por Jeteo Chemicals Inc., de Corsicana, Texas, E.U.A., o producen bajo las marcas CarSpray 400 y Carnabua Spray 200 por Witco Corporation, Dublin, Ohio, E.U.A. o que contiene 9% de alcohol etílico desnaturalizado tal como el que se vende bajo la marca BTC 2125M por Stephan Company, Northfield, Illinois, E.U.A., o los siguientes productos MAQUAT que comprenden cloruro de n-alquil dimetil benzil amonio, producido por Masón Chemical Company, Arlington Heights, Illinois, E.Ü.A. , LC-12S (67% C12, 25% C14, 7% C16, 1% C18), MC 1416 (5% C12, 60% C14, 30% C16 , 5% C18), MC1412 (40% C12, 50% C14, 10% C16), pasta u hojuelas de estearil SC-18 (5% C16, 95% C18), TC-76 O MQ-2525 (5% C12, 60% C14, 30% C16 Y 5% C18) Y MC6025-50% /25% C12, 60% C14 y 15% C16). Jet Quat 2C-75 comprende: 50 a 75% de cloruro de dicoco dimetil amonio cuaternario, 20 a 50% de alcohol isopropílico tiene una gravedad específica de .88 y un punto de ebullición de 82°C (180°F). CarSpray 400 comprende: 55 a 65 % de compuestos de amonio cuaternarios, 20 a 30% de aminas, isopropanol al 20% etoxilado, alquilo insaturado, con C14-18 y C16-18 y menos de 0.3% de cloruro de metilo, y tiene una gravedad específica de aproximadamente 0.88 a 23.9°C (75°F), una presión de vapor de 33 mm/Hg a 20°C (68°F), un punto de ebullición inicial de 82°C (180°F) a 760 mm/Hg y una volatilidad de 10 a 20%. Carnauba Spray 200 comprende: 50 a 60 % de compuestos de amonio cuaternario, 10 a 20% de isopropanol, 15 a 25% de agua, 1 a 10% de cera de carnauba alcohilada, y menos de .03% de cloruro de metilo, y tiene una gravedad específica aproximada de .90 a 26.7°C (80°F) una presión de vapor de 33 mm/Hg a 20°C (68°F), un punto de ebullición inicial de 82°C (180°F) a 760 mm/Hg y una volatilidad de 20 a 40%. Surfactantes no iónicos son compuestos tensioactivos que no se ionizan en solución en agua. A menudo, estos poseen características hidrofílicas en virtud de la presencia de una cadena oxigenada (por ejemplo una cadena poli-oxietileno) , la porción liofílica de la molécula se deriva de ácidos grasos, fenoles, alcoholes, amidas o aminas. Compuestos ejemplares son los condensados poli-(óxido de etileno) de alquil fenoles, por ejemplo el producto de condensación que se forma de un mol de nonil fenol y 10 moles de óxido de etileno y los productos de condensación de alcoholes alifáticos y óxido de etileno, por ejemplo el producto de condensación que se forma de 1 mol de tridecanol y 12 moles de óxido de etileno. Los surfactantes no iónicos pueden comprender fenoles etoxilatos que contienen un producto condensado de óxido de etilo y un alquil fenol o un alcohol alifático. Los surfactantes no iónicos de preferencia comprenden nonilfenol etoxilato tal como T-DET y/o octafenol etoxilato. Los surfactantes no iónicos son productos de reacción de óxido de etileno y nonol fenol y/u octafenol. La proporción del fenol al óxido de etileno puede estar en la gama de 2:20 a 4:16 y de preferencia de aproximadamente 2:12. Los surfactantes sintéticos no iónicos pueden comprender detergentes no iónicos. Surfactantes sintéticos no iónicos también pueden formarse al condensar óxido de etileno con una base hidrofóbica que se forma por la condensación de óxido de propileno con propilen glicol. La porción hidrofóbica de la molécula que por supuesto exhibe insolubilidad en agua, tiene un peso molecular de aproximadamente 1200 a aproximadamente 2500. La adición de radicales polioxietileno a esta porción hidrofóbica tiende a incrementar la solubilidad en agua de la molécula como un todo y el carácter liquido del producto puede retenerse hasta el punto en donde el contenido de polioxietileno es aproximadamente 50% del peso total del producto de condensación. Otro surfactantes sintéticos no iónicos pueden incluir los condensados de óxido de polietileno de alquil fenoles, por ejemplo los productos de condensación de alquil fenoles o dialquil fenoles, en donde el grupo alquilo contiene de aproximadamente 6 a 12 átomos de carbono, ya sea en configuración de cadena recta o cadena ramificada con óxido de etileno. El óxido de etileno puede estar presente en cantidades iguales a 8 a 25 moles de óxido de etileno por mol de alquil fenol. El substituyente alquilo de estos compuestos puede derirarse de propileno, diisobutileno, n-octeno o n-noneno polimerizados. Los surfactantes no iónicos también pueden producirse a partir de la condensación de óxido de etileno con el producto de reacción de óxido de propileno y etilendiamina, por ejemplo compuestos que contienen de aproximadamente 40% a aproximadamente 80% de polioxietileno en peso y tienen un peso molecular desde aproximadamente 5,000 a aproximadamente 11,000, que resulta en una reacción de grupos óxido de etileno con una base hidrofóbica que comprende el producto de reacción de etilendiamina y óxido de propileno en exceso; la base tiene un peso molecular en el orden de 2,500 a 3,000. Otros surfactantes no iónicos incluyen el producto de condensación de alcoholes alifáticos que tienen de 8 a 18 átomos de carbono ya sea en configuración de cadena recta o cadena ramificada, con óxido de etileno, por ejemplo un producto de condensación de óxido de etileno alcohol de coco, y la fracción de alcohol de coco que tiene de 10 a 14 átomos de carbono. Surfactantes adicionales no iónicos incluyen óxidos de amina terciaria de cadena larga que corresponden a la siguiente fórmula general: LRZ J ?O en donde RL es un radical alquilo con de aproximadamente 8 a 18 átomos de carbono y Ra y R3 cada uno son radicales metilo o etilo. La flecha en la fórmula es una representación convencional de un enlace semipolar. Ejemplos de óxidos de amina adecuados para utilizar incluyen: óxido de dimetil dodecila ina, óxido de dimetil octilamina, óxido de dimetil decilamina, óxido de dimetil tetracilamina y óxido de dimetilhexadecilamina. Otros surfactantes no iónicos pueden incluir: óxidos de fosfina terciaria de cadena larga que corresponden a la siguiente fórmula general: RR'R"P?0 en donde R es un radical alquilo, alquenilo o monohidroxialquilo en el rango de entre 10 a 18 átomos de carbono de longitud de cadena y R' y R" cada una son grupos alquilo o monohidroxialquilo que contienen de 1 a 3 átomos de carbono. La flecha en la fórmula es una representación convencional de un enlace semipolar. Ejemplos de óxidos de fosfina convenientes son: óxido de dimetil dodecil fosfina, óxido de dimetil tetradecil fosfina, óxido de etil metil tetradecil fosfina, óxido de cetildimetil fosfina, óxido de dimetil estearil fosfina, óxido de cetil etil propil fosfina, óxido de dietil dodecil fosfina, óxido de dietil tetradietil fosfina, óxido de dipropil dodecil fosfina, óxido de bis-(2-hidroximetil) dodecil fosfina, óxido de bis-(2-hidroxietil) dodecil fosfina, óxido de (2-hidroxipropil) metil tridecil fosfina, óxido de dimetiloletil fosfina y óxido de dimetil (2-hidroxidodecil)fosfina. En algunas circunstancias, puede ser útil emplear otros surfactantes tales como otros surfactantes catiónicos, surfactantes anfolítico o un surfactante z itteriónico. Los surfactantes catiónicos pueden incluir detergentes catiónicos. Los surfactantes catiónicos comprenden compuestos que ionizan en un medio acuoso para dar cationes que contienen el grupo liofílico. Típicos de estos compuestos son las sales de amonio cuaternarias que contienen un grupo alquilo de aproximadamente 12 a aproximadamente 18 átomos de carbono, tales como cloruro de lauril benzil dimetil amonio. Surfactantes anfolíticos son compuestos que tienen tanto grupos aniónicos como catiónicos en la misma molécula. Ejemplos de estos compuestos son derivados de aminas alifáticas que contienen una cadena larga de aproximadamente 8 a aproximadamente 18 átomos de carbono y un grupo solubilizante en agua, aniónico, por ejemplo carboxi sulfo, sulfo o sulfato. Ejemplos de detergentes anfolíticos son: sulfonato de 3-dodecil amino propano-sodio, taurato de n-metil-sodio y substancias relacionadas tales como amino ácidos disubstituidos con alquilo superior, betaínas, tetinas, aminas olefínicas de cadena larga sulfatadas y derivados imidazolina sulfatados. Surfactantes zwitteriónicos pueden incluir detergentes sintéticos. Los surfactantes zwitteriónicos en general son derivados de compuestos de amonio cuaternario alifático, en donde el radical alifático puede ser de cadena recta o ramificada y en donde uno de los substituyentes alifáticos contiene de aproximadamente 8 a 18 átomos de carbono y uno contiene un grupo solubilizante de agua aniónico, por ejemplo carboxi, sulfo o sulfato. Ejemplos de compuestos que caen dentro de esta definición son: 3-(N,N-dimetil-N-hexadecilamonio)-propano-l-sulfonato y 3-(N,N-dimetil-N-hexadecilamonio)-2-hidroxi-propano-l-sulfonato. FARMACOLOGÍA CLÍNICA Cuando los fitoquímicos Echinacea y Commiphora (aislados antimicrobianos, extractos botánicos e inhibidores de microbios) se mezclaron, combinaron y aplicaron con: un surfactante, de preferencia cloruro de benzalconio, un portador de nutriente, de preferencia ácido fólico; y un portador acuoso estéril, los resultados fueron inesperados y sorprendentemente buenos al resolver (tratar) HIV, y otras enfermedades infecciosas y la efectividad de la medicina (microbicida) se incrementa dramáticamente. De manera significativa cuando se prueban in vitro, el compuesto único demuestra actividad antiviral inesperada y sorprendentemente buena contra HIV incluyendo inhibición de la conexión HIV a las células objetivo. Cuando la medicina sinergística se probó tópicamente in vivo, se frenaron inmediatamente las infecciones de herpes simplex. Cuando la medicina sinergística se probó in vitro, el surfactante cloruro de benzalconio fue substancialmente menos tóxico y dentro de un nivel seguro y hubo un nivel superior de actividad inhibitoria contra HIV y HSV 1 y 2. La interacción de sinergia y el mezclado de los fitoquímicos de Echinacea y Commiphora, ácido fólico y surfactante, se demostró y observó al ver la rápida solubilidad de los componentes cuando se mezclan y la ligera calidad adhesiva creada por las propiedades en solución. Además, las propiedades químicas de los fitoquímicos Echinacea y Commiphora, portador de nutriente surfactante (nutriente) y la reactividad incrementada y estabilización mejorada de portador acuoso, que son útiles para tratar enfermedades infecciosas.

La medicina puede utilizarse en diluciones variantes en: mucosa oral y nasal; tejido vaginal; tejido labial; tejido anal y perianal; tejido del pene; tejido cutáneo; tejido sub-cutáneo abierto; y en superiores diluciones en infecciones oculares y de preferencia administración rectal o vaginal. Al variar las concentraciones, la medicina posiblemente puede administrarse en forma parenteral. La medicina puede ser contraindicada en los pasajes vaginales o anales; en compresa de aposito; en el canal auditivo; en revestimientos oclusivos; piezas vaciadas o ingestión y este uso puede producir irritación o quemaduras químicas.

Puede no ser recomendable el utilizar la medicina para tratar infecciones fúngales anaeróbicas, ya que algunos hongos pueden ser resistentes. EJEMPLOS 1-7 Prueba in vivo En una aplicación tópica inicial, el estudio in vivo que fue realizado para evaluar los efectos del tratamiento médico y la medicina de la presente invención sobre 7 sujetos de prueba humanos, quienes probaron positivos para HSV 1 o 2. Los sujetos se trataron tópicamente con la medicina que comprende el surfactante de cloruro de benzalconio en una solución acuosa (en una proporción de 1:750) en combinación con el herbáceo botánico Echinacea purpurea en forma pulverulenta que contiene los fitoquímicos previamente enlistados. La aplicación de la composición se realizó por un procedimiento en dos etapas, al primero humectar el área afectada o vesículas con el surfactante cloruro de benzalconio en una solución acuosa al rociar, aplicar toques, o utilizar un gotero; luego aplicar un revestimientos de los productos fitoquímicos pulverulentos sobre el área humectada, ya sea por aplicación por toques o rociado manual del polvo sobre el área infectada. Un aspecto importante en ese tratamiento es mantener la cobertura completa del área afectada por la duración del brote. Por lo tanto, el área de brote se mantiene cubierta con la composición médica al reaplicar según se requiera. De los siete sujetos, seis fueron mujeres y uno fue hombre. Al inicio de este estudio la edad del hombre fue de 38 años, las mujeres de 8, 27, 30, 32, 38 y 39 años. Hubo doce brotes infecciosos aproximadamente en seis semanas. Nueve de los brotes fueron HSV 2, herpes genital y 3 fueron HSV 1, fuegos, aftas o herpes labial. La pequeña de 8 años y la mujer de 27 años exhibieron HSV 1 (herpes labial). Las mujeres de 30 años, 38 años y 39 años exhibieron HSV 2 (herpes genital). La persona de 38 años también tuvo un herpes labial de HSV 1. El hombre exhibió HSV 2 (herpes genital). Todos los sujetos probados tuvieron una historia bien establecida de la enfermedad y pudieron identificar el curso standard de su enfermedad. Para obtener datos objetivos, ninguno de estos sujetos de prueba supo nada respecto al tratamiento de prueba o acción alguna de la medicina. En pruebas repetidas, a los sujetos se les dijo que podía haber placebos mezclados con las muestras de fórmula. En 7 casos, el compuesto antimicrobiano (medicina) se aplicó directamente en tejido en la etapa prodrómica. En 5 casos, el compuesto antimicrobiano se aplicó directamente en vesículas erupcionadas . El compuesto antimicrobiano se re-aplicó según sea necesario para mantener la cobertura. Observaciones: Con cada aplicación de la medicina, cada individuo (sujeto de prueba) reportó una sensación de picazón por unos cuantos segundos. También reportaron que había un grado substancial de adherencia del compuesto de la medicina (antimicrobiano a la o las vesículas o área afectada). La adherencia de la composición al tejido epitelial permaneció en un grado incluso después de bañarse o por enjuague con agua del área. Resultados: Los resultados de la prueba de los siete sujetos con el tratamiento médico y medicina fueron inesperadamente sorprendentes, buenos y muy consistentes.

En cada caso, el sujeto reportó felizmente que una vez que la composición (medicina) se aplicara al área afectada, se detuvo completamente el dolor en 10 a 20 minutos cuando nada en el pasado había reducido el dolor con anterioridad. En los siete casos, cuando el compuesto (medicina) se aplicó en la etapa prodrómica, los sujetos reportaron que se detuvo el dolor, todos los síntomas que previamente hubieran escalado a un brote completo cesaron y el brote nunca ocurrió de nuevo. Todos los síntomas externos y las manifestaciones físicas de herpes desaparecieron en unas cuantas horas después de que la medicina se aplicara. En los cinco casos en donde el compuesto (medicina) se aplicó a las vesículas en erupción, los sujetos reportaron que el dolor se detuvo en minutos y las sensaciones de quemado, comezón e irritación se resolvió de dos a cuatro horas y las vesículas se secaron y desaparecieron en 21 horas. En todos los casos, se detuvieron los otros síntomas más extremos y debilitantes de: fiebre, malestar, hinchado inguinal, ampollas, aftas rezumantes y orina dolorosa, una vez que se ha aplicado la medicina. Al darle seguimiento, en donde a los sujetos se les había proporcionado la composición (medicina) para probar en futuros brotes, se reportó que si se exhibieron los signos iniciales de un brote, señalando la etapa prodomal de un brote, el compuesto (medicina) se aplicó inmediatamente por los sujetos de acuerdo con las instrucciones y se frenó y resolvió totalmente el brote. Significativamente, también se reportó por sujetos que estaban acostumbrados a experimentar anualmente varios brotes, que tenían períodos de latencia notablemente más largos. En un seguimiento por 3 años con una persona que reportara varios brotes mensualmente por cuatro años antes de utilizar la medicina, esta reportó que no había tenido brote en más de un año desde que utilizara la medicina. Observaciones Adicionales: Un sujeto humano masculino reportó que después de la aplicación inicial durante la fase prodrómica de un brote, se bañó y se olvidó el volver a aplicar la composición (medicina) por un período aproximadamente de 30 horas. Consecuentemente, varias vesículas erupcionaron y empezaron a coalescer. El sujeto procedió a volver a aplicar la composición (medicina) y posteriormente mantuvo el área bien revestida con la composición. Subsecuentemente, el brote se resolvió en 21 horas en la misma forma que se describió con ios otros sujetos humanos. Otra observación indicó que la composición (medicina) puede debilitarse o ser menos efectiva en la presencia de ciertas proteínas o jabones. Una mujer, puede haber sido excesivamente celosa en limpiar el área afectada antes de aplicación de la composición (medicina) . Esto ocurrió durante un tercer brote después de haber tenido éxito con la composición (medicina) en los dos brotes previos. En este caso, cuando la composición (medicina) se aplicó, no hubo la familiar sensación de picazón y no hubo alivio de los síntomas. Aproximadamente 24 horas transcurrieron antes de que buscara asesoría y el brote escalara a la etapa de erupción vesicular completa con todos los síntomas anteriores de la enfermedad. Se le instruyó que enjuagara completamente cualquier residuo de jabón del área secara el área y volviera a aplicar la composición (medicina). Después de seguir las instrucciones, reportó que el brote había sido resuelto completamente como lo hubiera hecho en los dos brotes previos, al aplicar la composición médica. EJEMPLOS 8 A 13 Pruebas dermatológicas y veterinarias. Se realizaron pruebas en animales para determinar cualquier reacción alérgica dermatológica posible inducida por la composición médica (medicina) . Se emplearon seis sujetos animales. Los animales incluyeron 3 conejas (edades desconocidas), dos perros (una hembra de dos años y un macho de 9 años) ; un gato macho castrado de tres años . En estas pruebas en animales, la composición anterior (medicina) se aplicó, en el método anteriormente establecido al interior del oído externo de cada animal.

En todos los casos, el área a tratar se mantiene revestida con el compuesto por 24 horas, correspondiendo al tiempo que usaron los sujetos humanos. La prueba realizada en los seis sujetos animales indicó que no hubo signos de irritación dermatológica o reacción alérgica. EJEMPLO 14 El compuesto médico anterior que contiene inhibidores virales también se probó en una verruga o pequeño tumor provocado por virus de papilona en el hocico de un caballo de carreras de pura sangre, castrado, de 2 años de edad. Las verrugas de virus de papiloma son difíciles de tratar. La verruga midió 25 mm de diámetro. El compuesto antimicrobiano (medicina) fue aplicado dos veces al día. La verruga luego se midió en cada aplicación. Resultados: En forma bastante inesperada, la verruga disminuyó dramáticamente en tamaño en aproximadamente 3 milímetros por día, mientras que la medicina se aplicara a la verruga y el quinto día se desprendió completamente. Se observo que, al principio las capas superficiales de la verruga empezaron a degradarse, exponiendo grandes pápulas eritematosa . Luego, de manera interesante, la verruga no solo disminuyeron en tamaño al escamar o desprenderse, sino que disminuyeron en el punto de conexión en la epidermis del sujeto y se desprendieron algún algo intactas sin cicatrización de secuela. En un estudio in vivo a largo plazo continuo de esta invención, que empezara con los primeros siete sujetos en abril de 1989 y ahora ha durado 7 años, aproximadamente 100 brotes infecciosos se han tratado con la medicina en diferentes concentraciones como se describió con anterioridad. En todos los casos, los resultados sorprendentemente buenos fueron los mismos. El dolor desaparece en minutos; 2) no ocurre brote cuando la composición se aplica en la etapa prodrómica; 3) el brote se resuelve en 21 horas cuando se aplica en la etapa vesicular. PRUEBA IN VITRO Las pruebas de laboratorio se realizaron en la University of Chicago, Clinical Microbiology Laboratories (Laboratorios de Microbiología Clínica) para determinar la actividad inhibitoria in vitro del tratamiento médico y composición (medicina). Las pruebas de laboratorio se realizaron por el Director asociado, PhD y profesor asociado de patología. La prueba in vitro de la composición médica referida como la "droga" a continuación, produce resultados sorprendentemente buenos. Se determinó que el tratamiento médico y la composición en forma inesperada y sorprendente exhibieron actividad inhibitoria en HSV 1 y HSV 2. Se estableció por el patólogo que probó "centenares" de otros compuestos y nunca había visto nada tan bueno como esta composición. Las siguientes son las pruebas de la medicina que se realizaron y los resultados que se obtuvieron en la University of Chicago. Para facilidad de interpretar algunos de los datos científicos y resultados de prueba, aplican las siguientes definiciones: "MEM" se refiere a medio esencial mínimo. Este es el medio cultivo empleado en laboratorios para el crecimiento de células en las cuales se realizan las pruebas. "FIBROBLASTO" es una célula humana mesenquinal (una célula que se encuentra en tejido conectivo, sangre, huesos, linfáticos y cartílago). "IC50" Se refiere a la concentración inhibitoria. Para esta prueba, un punto extremo al 50% se elige, como es típico. El número siguiente indica la más grande dilución inferior a 50%. Por lo tanto, esta es la definición del punto extremo. Si un área bajo una dilución se deja en blanco, indica que puede haber toxicidad a esa dilución, puede ser que la prueba no valiera la lectura o que no hubieran datos interpretables.

Si un área bajo dilución se marca con un guión (-), indica que no hay placas y que hay una inhibición exitosa de herpes (HSV) . EJEMPLOS 15 A 17 En estas pruebas in vitro , las siguientes drogas (medicina) se emplearon: Drogas # 1 = Surfactante cloruro de benzalconio en una solución acuosa a una proporción de 1:750. El surfactante en la solución acuosa se filtra antes de utilizar y diluye en un volumen igual de 2X MEM para dar una dilución 1:1500 en IX MEM. Drogas # 2 — polvo de Echinacea (fitoquímico) en una solución acuosa. Esta preparación se extrae por infusión en caliente en agua estéril. Los productos fitoquímicos extraídos se centrifugan y filtran ante este uso. Los productos fitoquímicos filtrados se diluyeron en un volumen igual de 2X MEM para dar la preparación sin diluir en IX MEM. Drogas # 3 = polvo de Echinacea (fitoquímico) se extrae y combina con surfactante de cloro de benzalconio por un proceso de infusión en frío. La preparación combinada se centrifuga y filtra antes de utilizar y diluye en un volumen igual de 2X MEM para dar la preparación sin diluir en IX MEM. 1. Tres placas de 24 compartimientos se inocularon con fibroblastos. Tres diferentes extracciones (para comparación) en cinco concentraciones de la composición, se emplearon para clasificar actividad antiviral en concentraciones de: sin diluir, 1:2, 1:4, 1:8, y 1:16 en IX MEM. Hubo 4 compartimientos de control en cada placa que contiene MEM sin droga. 2. El medio de crecimiento se retira de los compartimientos y 200 ul de HSV-1 se agregan a cada compartimiento de la mitad superior de cada placa. HSV-1 se diluye 1:5000 (2.0 ul de material HSV-1 en 10 L de MEM). El titulo de virus fue 3 x 106 x mL. También, 200 ul de HSV-2 se agregan a cada compartimiento de la mitad inferior de cada placa. HSV-2 se diluye 1:2000 (5.0 ul de material HSV-2) en 10 mL de MEM. El título de virus fue 6 x 105 x mL. 3. Las placas se incubaron a 37°C por dos horas. 4. El inoculo se retiró y un mL del MEM que contiene las drogas # 1-3 se agregaron a los cuatro compartimientos. La concentración de la droga comparada con el MEM se indica a continuación. Tabla 1 Concentración Sin diluir 1:2 2:4 1:8 1:16 Droga (ul) 4000 2000 1000 500 250 MEM (ul) - 2000 3000 3500 3750 5. Resultados: HSV-1, capa superpuesta líquida, droga agregada inmediatamente después de absorción del virus . Placa 1, droga # 1 contaminada sin crecimiento bacterial, probablemente desechos. Placa 3 , droga # 3 los resultados se indican en las Tablas 2 y 3 a continuación. Tabla 2-Droga # 3 resultados de prueba HSV-1 Concentración Sin diluir 1:2 2:4 1:8 1:16 Placas 54 tóxico tóxico - 6* 12** Placas 42 tóxico tóxico 4* 16** Promedio 48 5 14 IC50 >1:16 Tabla 3-Droga # 3 HSV-2 resultados de prueba Concentración Sin diluir 1:2 2:4 1:8 1:16 Placas 46 tóxico tóxico - 22* 32** Placas 49 tóxico tóxico - 21* 28** Promedio 48 22 30 ICso = 1:8 * ligera toxicidad. ** Muy pequeñas placas. Comentarios: prueba con la medicina (Droga # 3) proporciona excelente resultado. Las células se ven bien sin contaminación. A las menores diluciones, la preparación puede ser tóxica para algunas de las células.

Esta preparación fue inesperadamente exitosa en su actividad inhibitoria. EJEMPLOS 18-20 Tres placas de 24 compartimientos se inocularon con fibroblastos y las siguientes drogas. Droga de prueba número 1A = a surfactantes de cloro de benzalconio en una solución acuosa, el surfactante de cloro de benzalconio se prepara al hacer una dilución 1:375 en agua (32 ul en 12.0 L de agua estéril) esto se filtró antes de uso. Esto se diluyó en un volumen igual de 2X MEM para dar 1:750 de dilución en IX MEM. La dilución se realiza para mantener la proporción. Droga de prueba # 2A = polvo de Echinacea purpurea (fitoquímicos) en una solución acuosa. Esta preparación fue una solución 50 mg/ml 300 mg en 6.0 mL de agua (de polvo de Echinacea purpurea en agua estéril. La mezcla se somete a torbellino y refrigera por 4 horas. La preparación de polvo de Echinacea se centrifuga a 3500 rpm por 15 minutos a 10 °C y filtra antes de utilizar y luego diluye en un volumen igual de 2X MEM para dar la preparación sin diluir en IX MEM. Droga de prueba # 3A = polvo de Echinacea purpurea (fitoquímicos) disuelto en surfactante y cloro de benzalconio. Esta preparación fue una solución de 50 mg/mL (300 mg en 6.0 mL de cloruro de benzalconio, 1:375). La mezcla se somete a torbellino y refrigera por 4 horas. La mezcla de fitoquí ico y surfactante se centrifuga a 3500 rpm por 15 minutos a 10 °C y filtra antes de uso y luego diluye en un volumen igual de 2X MEM para dar la preparación sin diluir en IX MEM. 1.- 3 placas se emplearon para clasificar las tres preparaciones de drogas. Las concentraciones requeridas para clasificar actividad antiviral fueron: 1:2, 1:4, 1:8 y 1:16 en IX MEM. Hubo cuatro compartimientos de control en cada placa que contiene MEM sin droga. 2. - El medio de crecimiento se retira de los compartimientos y 200 ul de HSV-1 se agregan a cada compartimiento de la mitad superior de cada placa. HSV-1 se diluye a 1:5000 (2-0 ul de material HSV-1 en 10 L de MEM). El titulo de virus fue 3 x 106 x mL. 3.- Las placas se incubaron a 37°C por cuatro horas . 4.- El inoculo se retiró y 1 mL del MEM que contiene las drogas # 1A-3A se agregan a los cuatro componentes. TABLA 4 Concentración sin diluir 1:2 2:4 1:8 1:16 Droga (ul) 4000 2000 1000 500 250 MEM (ul) - 2000 3000 3500 3750 5.- Resultados: HSV-l, composición sobre capa líquida, la composición se agrega inmediatamente después de absorción del virus. Tabla 5 - Droga #1A-HSV Resultado de Prueba Concent. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 placas 70 tóxico tóxico tóxico tóxico tóxico placas 68 placas 58 placas 74 Promedio 70 IC50 Comentarios: Estos compartimientos tienen un precipitado fino sobre las células. Cloruro de Benzalconio probablemente se precipita con la protelna en el medio. Tabla 6 - Droga #2A-HSV Resultado de Prueba Concent. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 placas 72 9* 12* placas 74 7 8 placas 79 4 12 placas 71 7 11 Promedio 70 ICso > 1:32 Comentarios: Aunque hubo algunas placas, fueron muy pequeñas.

Tabla 7 - Droga #3 -HSV Resultado de Prueba Concent. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 placas 72 tóxico tóxico tóxico tóxico -* placas 68 placas 67 -placas 70 - Promedio 70 IC50 > 1:32 Comentarios: Aunque hubo algo de toxicidad, esta droga forma fue muy exitosa para inhibir el virus, no parece haber placas. EJEMPLOS 21 - 24 Cuatro placas de 24 compartimientos se inocularon con fibroblastos. Droga de Prueba #1B = Surfactante cloruro de benzalconio en un diluyente acuoso. El cloruro de benzalconio se prepara al hacer una dilución 1:1000 en agua (10 µl en 10.0 mL de agua estéril). Esto se filtró antes de utilizar y diluyó en un volumen acuoso de 2X MEM para dar una dilución 1:2000 en XMEM (500 µl de droga más 500 µl de 2X MEM) . Droga de Prueba #2B = Polvo de Echinacea purpurea ( fitoquímicos) en una solución acuosa. Esta preparación fue una solución 50 mg/mL (250 mg en 5.0 L de agua) de polvo de Echinacea purpurea en agua estéril. La mezcla se sometió a torbellino y refrigeró por cuatro horas. Esta preparación pulverulenta de Echinacea se centrifugó a 3500 rpm por 15 minutos a 10°C y filtró antes de uso y diluyó en un volumen igual de 2X MEM para dar la preparación sin diluir en 1XMEM (500 µl droga más 500 µl de 2X MEM). Droga de Prueba #3B = Polvo de Echinacea purpurea (fitoquímicos) disuelta en surfactante cloruro de benzalconio. Esta preparación fue una solución 50 mg/mL (250 mg en 5.0 mL de cloruro de benzalconio, 1:1000). esta mezcla se sometió a torbellino y refrigeró por cuatro horas. Los productos fitoquimicos de Echinacea y surfactantes se centrifugaron a 3500 rpm por 15 minutos a 10°C y separaron por filtración antes de uso y luego diluyeron en un volumen igual de 2X MEM para dar la preparación en 1XMEM (500 µl de droga más 500 µl de 2X MEM) . Droga de Prueba #4B = Polvo de Echinacea purpurea (fitoquímicos) en una solución acuosa (diluyente) y luego mezclado con surfactante cloruro de benzalconio en una proporción de 1:1000. Esta preparación fue una solución 50 mg/mL (250 mg en 5.0 mL de agua) de polvo de Echinacea purpurea en agua estéril. La mezcla se somete a torbellino y refrigera por cuatro horas. Los productos fotoquímicos acuosos se centrifugaron a 3500 rpm por 15 minutos a 10°C y se separaron por filtración antes de uso. Esta preparación se diluyó en un volumen igual de cloruro de benzalconio en una proporción de 1:1000, para obtener la mezcla de cloruro de benzalconio-Echinacea . Esta mezcla se diluye con un volumen igual de 2X MEM para dar la preparación 1:4 en 1XMEM (500 µl droga #1 y 250 µl droga #2 más 500 µl de 2X MEM) . 1. Cuatro placas se emplearon para clasificar las cuatro preparaciones de droga. Las concentraciones requeridas para clasificar actividad antiviral fueron 1:20, 1:40, 1:80 y 1:160 y 1:320 en IX MEM. Hubo cuatro compartimientos de control en cada placa que contiene MEM sin droga. 2. El medio de crecimiento se retira de los compartimientos y 200 µl de HSV-1 se agregan a cada compartimiento de las dos hileras superiores de cada placa. HSV-1 se diluye 1:5000(2.0 µl de material HSV-1 en 10 L de MEM) . El titulo de virus fue 3xl06 por mL. También, 200 µl de HSV-2 se agregan a cada compartimiento de la mitad inferior de cada placa. HSV-2 se diluye 1:2,000 (5.0 µl de material HSV-2 en 10 mL de MEM) . El título de virus fue 6xl05 por mL. 3. Las placas se incubaron a 37 °C por cuatro horas . 4. El inoculo se retiró y un mL de MEM que contiene las drogas # 1-4 se agrega a los cuatro compartimientos . TABLA 8 Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 Droga (µl) 400 200 100 50 25 MEM (µl) 3600 3800 3900 3950 3975 . Resultados: HSV-1, sobre capa líquida, drogas agregadas inmediatamente después de absorción de virus. Tabla 9 - Droga #1B- HSV-1 Resultados de Prueba Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 placas 37 tóxico tóxico tóxico tóxico 157* placas 45 187* Promedio 41 ICso Comentarios: Ligeramente tóxico, la prueba fue difícil de leer. HSV-2, sobre capa líquida, drogas agregadas inmediatamente después de absorción de virus. Tabla 10 - Droga #1B- HSV-2 Resultados de Prueba Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 placas 38 tóxico tóxico tóxico tóxico 21 placas 42 17 Promedio 40 19 IC5O>l:320 Comentarios: La prueba fue demasiado tóxica para dar una buena lectura. Tabla 11 - Droga #2B- HSV-1 Resultados de Prueba Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 placas 39 2* 8* 23* 24 44 placas 40 3 18 11 28 38 Promedio 40 3 13 17 26 IC5O>l : 80 Comentarios: Pequeñas placas. Tabla 12 - Droga #2B- HSV-2 Resultados de Prueba Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 placas 48 21 33 placas 52 22 38 Promedio 50 21.5 35.5 ICSO>1:20 Tabla 13 - Droga #3B- HSV-1 Resultados de Prueba Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 placas 44 1* 17 31 37 placas 46 - 16 28 27 Promedio 45 - 17 30 32 ICSO>1:40 Comentarios: Aunque hubo algo de toxicidad, la droga fue muy exitosa, no pareció haber placas.

Tabla 14 - Droga #3B- HSV-2 Resultados de Prueba Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 pocas células 11* 27 30 35 placas 44 10 32 Promedio 44 11 29.5 ICSO>1:20 Comentarios: Una prueba difícil para obtener una lectura realmente buena. Sin embargo, la droga tiene exitosa actividad inhibitoria. Tabla 15 - Droga #4B- HSV-l Resultados de Prueba Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:640 placas 47 tóxico tóxico tóxico 33 placas 48 28 Promedio 48 30 IC5O>l:320 Comentarios: Demasiado tóxica a los niveles superiores. Sin embargo, la droga tiene exitosa actividad inhibitoria a 1:320. Tabla 16 - Droga #4B- HSV-2 Resultados de Prueba Concentrado 1:20 1:40 1:80 1:160 1:640 placas 38 tóxico tóxico tóxico 2* 16 placas 40 4 20 •Promedio 39 3 18 IC5O>l:640 Comentarios: La toxicidad probablemente debido a cloruro de benzalconio. La droga a dilución 1:320 mostró muy fuerte actividad inhibitoria.

Las pruebas in vitro de los Ejemplos 21-24 utilizan materias primas sin refinar. Sin embargo, las pruebas demostraron actividad inhibitoria viral sorprendentemente buena y una sinergia probable entre los constituyentes. En las pruebas in vitro precedentes en donde las Drogas #3, 3A y 3B, fueron fitoquímicos de Echinacea purpurea extraídos y combinados con surfactante cloruro de benzalconio, la medicina resultante, demostró la mayor actividad antiviral y más notablemente demostró una sinergia entre los componentes Echinacea purpurea y cloruro de benzalconio. Esto posiblemente puede explicarse por una estabilidad compartida y reactividad mejorada entre los dos componentes. El cloruro de benzalconio en la mezcla sinergística exhibe un menor grado de toxicidad y la combinación sinergística (medicina) exhibe un mayor grado de actividad antiviral, particularmente con HSV-2. PRUEBAS HIV Viracea-1 y Viracea-2 se probaron para evaluación de actividad anti-HIV en ensayos de modelo de infección aguda. Ensayos adicionales se realizaron para evaluar el rango y mecanismo de acción de los dos componentes. Los compuestos Viracea-1 y Viracea-2 se suministran como soluciones. Formulaciones incluyen filtrar la solución y centrifugación. La alta concentración de prueba empleada en cada ensayo varío de una dilución 1:5 a una dilución 1:100 en medio de cultivo de tejido. Cada componente se almacenó a 70°C antes de uso. En estas pruebas, las siguientes drogas (composición) se emplearon. Viracea l = Viracea 2 = Propagación y Cuantificación de Líneas Celulares y Materiales de Virus Células utilizadas en los ensayos de clasificación de compuestos, se designaron como la línea celular CEM-SS. Estas células son altamente susceptibles a infección con HIV, forman rápidamente sincitia multinucleada, y eventualmente se exterminan por HIV. Estas células se mantienen fácilmente (2-7 x 103 células por mi) en medio de cultivo de tejido RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal al 10% glutamina y antibióticos. Las células se pasan dos veces semanalmente a dilución 1:20. El número de pasos se registra cada semana y las células se descartan después de veinte semanas por paso y células CEM-SS frescas se descongelan y utilizan en el ensayo. Materiales de células CEM-SS se han congelado en nitrógeno líquido en ampolletas NUNC de un 1 mi en suero bovino fetal al 90% y sulfóxido de dimetilo al 10% (DMSO) . Después de descongelado, las células CEM-SS están listas rutinariamente para utilizarse en el ensayo de clasificación primaria después de dos semanas en cultivo. Antes de reemplazar una línea celular de paso tardío, las nuevas células CEM-SS se prueban en el protocolo de ensayo de clasificación utilizando el material corriente de virus infeccioso y AZT. Si la infectividad del virus es significativamente diferente a las nuevas células o si AZT parece ser menos activo que lo esperado, las nuevas células no entrarán en el programa de clasificación. Pruebas de micoplasma se realizan rutinariamente en todas las líneas celulares (ver anteriormente). Depósitos de virus se preparan y titulan en células CEM-SS, colocan en alícuotas de 5 mi y congelan a -135°C. Después de descongelar, los virus sin usar se descartan para evitar cambios en título infeccioso. Ensayos de optimización han documentado una reducción de un-log en título de virus ante el primer ciclo de congelado-descongelado, y reducción de título menos drástica con rondas subsecuentes de congelado-descongelado. Depósitos de virus se preparan por la infección aguda de 5 x 10s de células CEM-SS con HIV en un volumen de 200 µl a una multiplicidad de infección determinada para dar exterminio completo de células en el día 7 posterior a infección (aproximadamente 0.05 para el aislado IIIB de HIV-1 y 0.01 para el aislado RF de HIV-1). La infección se permite que proceda por una hora a 37°C y luego las células se transfieren a un matraz T25 y el volumen se incrementa a 2 mi. En el día 1 posterior a infección el volumen se lleva a 5 mi y en el día 2 el volumen se incrementa a 10 mi. Empezando el día 4, las células se nodulizan, el sobrenadante se guarda y las células se resuspenden en una alícuota fresca de 10 mi de medio de cultivo de tejido. Cambios de medio completos en una base diaria, en vez de permitir crecimiento de las células en el medio por más largos períodos de tiempo, permiten que el inoculo de virus utilizado en la clasificación primaria permanezca relativamente sin agotar los nutrientes cuando se utiliza para infectar células. La reacción de manchado utilizada (XTT) requiere que la concentración de glucosa permanezca alta. A los pozos agotados de glucosa por crecimiento celular no se les permitirá conversación metabólica del colorante tetrazolio al producto formazano. Sobrenadantes libres de células de las células infectadas en forma aguda, se guardan en el día 4, día 5, día 6 y día 7. Una alícuota de sobrenadante se guarda por separada en cada día para utilizar en determinación de título. Las determinaciones de título incluyen ensayo de actividad de transcriptasa inversa, titulación de punto extremo o cuantificación de ensayo de placa (CEM-SS) de partículas infecciosas y cuantificación de cinéticas de exterminio de células. Se ha determinado que los niveles pico de virus infecciosos se producen en los cultivos infectados agudamente, ya que la viabilidad de las células cae hasta el nivel de 50%. Ya que el ensayo de clasificación primario cuantifica los efectos protectores de un compuesto por su habilidad para inhibir efectos citopáticos inducidos por HIV, la cantidad de virus requerida para exterminar células CEM-SS en 6 días, se utiliza rutinariamente para determinar la cantidad de virus requerida por pozo en el ensayo de clasificación primario. Cada uno de los recolectados diarios se titula en el protocolo del ensayo XTT de clasificación primaria al realizar diluciones dobles del virus empezando a la concentración alta de prueba de 50 µl de virus por depósito. El método de manchado XTT con colorante tetrazolio se utiliza para determinar la cantidad exacta de virus requerida para exterminar todas las células CEM-SS en cada pozo y esta cantidad mínima de virus se utiliza para realizar todas las pruebas primarias. Métodos idénticos se utilizan para preparar todos los aislados de virus utilizados en el laboratorio, incluyendo cepas derivadas de laboratorio de HIV-1, HIV-2 y STV. Aislados clínicos utilizados se pasan en células humanas frescas y los métodos para el crecimiento de estas células y la producción de recolectados de virus, se describen a continuación.

Ensayo XTT Antiviral Microtítulo Preparación de Células Células CEM-SS u otra línea celular humana establecida empleada en estos experimentos, se pasan en matraces T-150 para utilizar en el ensayo. El día precedente al ensayo, las células se dividen 1:2 para asegurar que estarían en una fase de crecimiento exponencial al tiempo de infección. El día del ensayo, las células se lavan dos veces con el medio de cultivo de tejido y resuspenden en medio de cultivo de tejido fresco. El conteo de viabilidad y células totales se realizan utilizando una hemacitómetro y exclusión de colorante azul triptano. La viabilidad celular fue mayor a 95% para que las células se utilizaran en el ensayo. Las células se nodulizaron y resuspendieron a 2.5 x 104 células por mi en medio de cultivo de tejido. Se agregaron células a las placas que contienen droga en un volumen de 50 µl. Preparación de Virus Una alícuota pretitulada de virus se retira del congelador (-80 °C) y deja que descongele lentamente a temperatura ambiente en un gabinete de seguridad biológica. El virus se resuspende y diluye en un medio de cultivo de tejido de manera tal que la cantidad de virus agregada a cada pared de un volumen de 50 µl, será la cantidad determinada para proporcionar exterminio celular completo a 6 días posterior a infección. En general, los recolectados de virus producidos con el aislado IIIB de HIV requieren la adición de 5 µl de virus por pozo. Recolectados de virus RF fueron cinco a diez veces más potentes requiriendo 0.5-1 µl por pozo. Cálculo de TCID50 por titulación de punto extremo en células CEM-SS indica que la multiplicidad de infección de estos ensayos estuvo en la gama desde 0.005-2.5. Formato de Placa El formato de la placa de prueba se ha estandarizado y contiene pozos de control de células (solo células), pozos de control de virus (virus más células), pozos de control de toxicidad de droga (células más droga solamente), pozos de control colorimétricos de droga (droga solamente) así como pozos experimentales (droga más células más virus) . EJEMPLOS 25-48 Manchado XTT de Placas de Clasificación Después de 6 días de incubación a 37°C en un incubador de C02 al 5%, las placas de prueba se analizaron al manchar con el colorante XTT-tetrazolio. XTT-tetrazolio se metaboliza por las enzimas mitocondriales de células de actividad metabólica en un producto de formazano soluble, permitiendo el análisis cuantitativo rápido de la inhibición de exterminio de células inducida por HIV por substancias de prueba anti-HIV. El día 6 posterior a infección las placas se retiraron del incubador y observaron. El uso de placas de microtitulación de fondo redondo, permite rápido análisis macroscópico de la actividad de un compuesto de prueba dado por la evaluación del tamaño del nodulo. Los resultados de las observaciones macroscópicas se confirmaron y mejoraron por adicional análisis microscópico. Solución XTT se prepara solo como un material de 1 mg/ml en PBS. Solución de metosulfato de fenazina (PMS) se prepara a 15 mg/ml en PBS y almacena en la oscuridad a -20 °C, material XTT/PMS se prepara inmediatamente antes de utilizar al diluir PMS 1:100 en PBS y agregar 40 µl por mi de solución XTT. Cincuenta microlitros de XTT/PMS se agregan a cada pozo de la placa y la placa se reincuba por 4 horas a 37°C. Se utilizaron selladores de placa adhesiva en vez de las tapas, la placa sellada se invierte varias veces para mezclar el producto formazano soluble y la placa se leyó espectrofotométricamente a 450 nm, con un lector de placas de Molecular Devices Vaax. Utilizando una Reducción % CPE, Viabilidad Celular %, IC2S, so y 95- TC2S, so y 95 y otros índices se calcularon.

TABLA } 7 RESULTADOS ANTIVIRALES IN VITRO ENSAYO XTT PARAVIRACEA 1 1 2 3 4 5 6 7 S 9 10 p 12 Reactivo de Fondo Plástico de Fondo 10 0169 0160 0160 D 159 154 0.167 0.066 0.063 0.058 0.061 0063 0067 Tox cc/vc Experimental Alta Conc Tox Tox Experimental Ba|a Conc cc/vc Tox 1.498 1461 0196 0378 0.278 1.466 1474 0204 0211 020S 1517 1511 1.392 1 61 0.192 0.196 0.293 1414 1 79 0205 0247 0.185 1.496 1497 00 1.333 1.426 0.3 ÍS 1.410 J.372 1356 1.482 0242 0182 0215 1.478 1.519 -o 1208 0219 1.134 1181 1110 1.206 1.487 0219 020S 0.215 0.189 1512 1032 0.193 0940 0828 0968 0.944 1.4S0 0.192 0207 0254 0309 J.506 0656 0222 0596 0582 0.544 0.572 1464 0206 0254 0.186 0.184 1468 Fondo Colorimétnco-Altas Concentraciones Fondo Color?métr?co-Ba|as Concentraciones 0.?S9 0 IS2 0168 0171 0166 0167 0.163 0.173 0172 66 0164 0180 20 TABLA 18 VIRACEA 1 o J5 TABLA 19 VIRACEA 1 15 TABLA 20 RESULTADOS ANTIVIRALES IN VITRO ENSAYO XTT PARAVIRACEA2 1 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Reactivo de Fondo Mástico de Fondo 10 0.169 0.163 0.164 0166 0160 0.170 0074 0072 0067 0067 0.067 0.068 Tox cc/vc Exper mental Alta Conc. Tox Tox Exper mental Bap Conc. cc/vc fox 1468 1421 0461 0.257 1.170 1467 1.501 0.207 0222 0.214 1506 1503 1321 1397 1 16 0.209 0191 1.340 1494 0.200 0.202 0.204 1446 1457 0906 1.345 0.249 0.764 0.836 0.953 1.4S5 0.227 0.179 0179 1453 1.500 0219 0.256 1.190 0,207 0.210 0.234 1491 0204 0.190 0228 0192 1 06 0168 0190 0161 0.161 0148 0157 1.503 0237 0195 0202 0186 1.501 0.242 0223 023S 0239 0230 0242 1495 0.201 0.204 0227 0189 1503 Fon do Colonme stpco-Altas Concentraciones Fo ido Colopmétpco-Bajas Concentraciones 0.258 0.172 0.159 0165 0.163 0.165 165 0.166 0.166 0171 0159 0169 TABLA 21 VIRACEA2 •o TABLA 22 VIRACEA 2 EJEMPLOS 49-54 Ensayo de Actividad de Tranßcriptasa Inversa Se emplea una reacción de transcriptasa inversa (RT) basada en microtítulo. Trifosfato de timidina tritiada (NEN) (TTP) se resuspende en H20 destilada a 5 Ci/ml. Poli rA y oligo dT se preparan como una solución de material que se mantiene a -20°C. El amortiguador de reacción RT se prepara fresco en una base diaria y consiste de 125 µl de MEGTA, 125 µl de dH203, 125 µl de Tritón X-100, 50 µl 1M de Tris (pH 7.4), 50 µl de IMDTT y 40 µl de IMMgCl2. Estas 3 soluciones se mezclaron en conjunto en una proporción de 1 parte de TTP, 2.5 partes de poli rA: oligo dT, 2.5 partes de reacción, el amortiguador de reacción y 4 partes de agua destilada. 10 microlitros de esta mezcla de reacción se colocan en una placa de microtitulación de fondo redondo y 15 µl de sobrenadante que contiene virus se agrega y mezcla. La placa se incuba a 37 °C e incuba por 60 minutos. Después de reacción, el volumen de reacción se mancha sobre esteras de filtro, lava 6 veces por 5 minutos cada vez en un amortiguador de fosfato de sodio al 5%, 2 veces por 1 minuto cada una en agua destilada, 2 veces por 1 minuto cada una en 70% de etanol y luego seca. La estera de filtro seco se coloca en una bolsa de muestra de plástico. Fluido de centelleo betaplate se agrega y la bolsa luego se termo sella. La radioactividad incorporada, se cuantifica utilizando un contador de destelleo Wallac Microbeta.

TABLA 23 VIRACEA-1: PBMC/ROJO ~ l TABLA 24 VIRACEA-1 : PBMC/ROJO 15 TABLA 25 VIRACEA-2: PBMC/ROJO O co TABLA 26 VIRACEA-2: PBMC/ROJO ELISA Equipos ELISA se adquirieron de Coulter. El ensayo se realiza de acuerdo con las recomendaciones de los fabricantes. Antes del análisis de ELISA, se realizaron rutinariamente ensayos de actividad de transcriptasa inversa y los valores se utilizaron para radio-actividad incorporada en el ensayo de actividad RT, para determinar la dilución de las muestras requeridas para ELISA. Curvas de control se generaron en cada ensayo para cuantificar en forma precisa la cantidad de cápsido de proteína en cada muestra. Se obtuvieron datos por análisis espectro-fotométrico a 450 nm utilizando un lector de placas Molecular Devices Vmax. Las concentraciones P24 se calcularon a partir de los valores de densidad óptica por uso del paquete de soporte lógico de Molecular Devices Soft Max. Partículas Infecciosas Partículas de virus infecciosos se cuantificaron utilizando el ensayo de placa CEM-SS y el ensayo de infectividad Cuantitativa para HIV-1 y HIV-2. Placas de microtítulos de 96 pozos de fondo plano, se revistieron con 50 µl de poli-L-lisina a 50 µg/ml por 2 horas a 37°C. Los pozos luego se lavaron con PBS y 2.5 x 10s células CEM-SS se colocaron en el pozo de microtitulación en donde se fijaron al fondo de la placa. Se agregaron suficientes células para formar una monocapa de céulas CEM-SS en cada pozo. Virus que contiene sobrenadante se agrega de cada pozo de la fase XTT, incluyendo virus y controles de células y cada dilución serial de la substancia de prueba. El número sincitial se cuantificó en la placa de microtitulación de 96 pozos con fondo plano con un microscopio invertido Olympus CK2 a una 4 días después de infección. Cada sincitio resultó de un virión HIV infeccioso sencillo. Actividad Anti-HIV en Células Humanas Frescas: Ensayo en T-linfocitos Humanos Frescos Linfocitos de sangre periférica humana frescos (PBL) se aislaron de donadores de la Cruz Roja voluntarios, seronegativo para HIV y HBV. Sangre sometida a leucofóresis se diluye 1:1 con salino amortiguado con fosfato Dulbecco (PBS), en capas sobre 14 mL de gradiente de densidad Ficoll-Hypaque en un tubo de centrífuga de 50 mL. Los tubos luego se centrifugaron por 30 minutos a 600 X.g. PBLs en bandas se aspiraron ligeramente de la interfase resultante y subsecuentemente lavaron 2X con PBS por centrifugación a baja velocidad. Después de lavado final, se numeraron las células por exclusión de azul triptano y resuspendieron a 1 x 107/mL en RPMI 1640 con Suero Bovino Fetal al 15% (FBS). 2 mM de L-glutamina, 4 µg/mL de PHA-P y dejó que incubaran por 48 - 72 horas a 37°C. Después de incubación, PBLs se centrifugaron y reinicializaron o reajustaron en RPMI 1640 con 15% FBS, 2 mM de L-glutamina, 100 U/mL de penicilina, 100 µg/mL de estreptomicina, 10 µg/mL de gentamicina y 20 U/mL de IL-2 humano recombinante. PBLs se mantuvieron en este medio a una concentración de 1-2 x 10E6/mL con cambios de medio cada dos semanas, hasta utilizar en el protocolo de ensayo. Para el ensayo PBL, células estimuladas con PHA-P de al menos dos donadores normales, se colectaron, colocaron en medio fresco a 2 x 10E6/mL y aplicaron en placas en los pozos interiores de una microplaca con fondo redondo de 96 pozos a 50 µL/pozo. Las diluciones de la droga de prueba se prepararon a una concentración de 2X en tubos de microtitulación y 100 µL de cada concentración y se colocan en puntos apropiados en un formato estandard. 50 µL de una dilución predeterminada de material de virus se colocan en cada pozo de prueba. Pozos con células y virus solos se emplearon para control de virus. Placas separadas fueron establecidas idénticamente sin virus para estudios de citotoxicidad de droga utilizando un sistema de ensayo XTT. En el ensayo PBL estandard (MOI: 0.2), el ensayo se termina el día 7 después de recolección de las muestras de sobrenadante libre de células del ensayo de actividad de transcriptasa inversa. En el ensayo de bajo MOI PBL (MOI: 0.02), muestras de sobrenadantes se recolectaron el día 6, día 11 y día 14 posterior a infección y analizaron para actividad Rl. Trifosfato de timidina tritiada (NEN) (TTP) se resuspende en H20 destilada a 5 Ci/ l. Poly rA y oligo dT se preparan como una solución de material que se mantiene a -20°C. El amortiguador de reacción RT se prepara fresco en una base diaria y consiste de 125 µl IMEGTA, 125 µl de dH20, 110 µl de 10% SDS, 50 µl 1M de Tris (pH 7.4), 50 µl 1M de DTT y 40 µl 1M de MgCl2. Estas tres soluciones se mezclaron en conjunto en una proporción de 2 partes TTP, 1 parte poly rA:oligo dT y 1 parte de amortiguador de reacción. Diez microlitros de esta mezcla de reacción se colocan en una placa de microtitulación de fondo redondo y 15 µl de sobrenadante que contiene virus se agrega y mezcla. La placa se incuba a 37°C en un baño de agua con un soporte de sólido para evitar inmersión de la placa e incuba por 60 minutos. Después de reacción, el volumen de reacción se mancha en trozos de papel DE81, lava 5 veces por 5 minutos cada una en un amortiguador fosfato de sodio al 5%, 2 veces por 1 minuto cada una en agua destilada, 2 veces por 1 minuto cada una en etanol al 70% y luego secan. Opti-Fluor O se agrega a cada muestra y la radioactividad incorporada se cuantifica utilizando un contador de destelleo líquido Wallac 1450 Microbetaplus.

La incorporación de timidina tritiada se mide en cultivos paralelos el día 7. Cada pozo se pulsa con 1 µCi de timidina tritiada y las células se cosecharon 18 horas después en un cosechador de células Skatron sobre los papeles filtro con fibras de vidrio. Los filtros se secan, colocan en una ampolleta de destelleo con 1 mi de coctel de destelleo y la radioactividad incorporada se cuantifica en un contador de destelleo líquido Packard Tri-Carbb 1900 TR. EJEMPLOS 55-58 Actividad Anti-HIV en Células Humanas Frescas: Ensayo en los macrófagos de Monocitos Humanos Frescos Para aislamiento de las células adherentes, 3 x 106 de células de sangre periférica no estimuladas con PHA, se resuspendieron en salino amortiguado Hanks con calcio y magnesio suplementado con suero AB humano al 10%. Las células se colocaron en una placa de microtitulación de 24 pozos a 37°C por 2 horas. Células no adherentes se retiraron por lavado vigoroso seis veces. Las células adherentes se cultivaron por 7 días en RPM1 1640 de medio de cultivo de tejido con suero bovino fetal al 15%. Los cultivos se monitorearon cuidadosamente para confluencia durante este período de incubación. Infección de las células se realiza con las cepas HIV-1 monocitotrópicas BaL o ADA y el par acoplado de aislados de virus resistentes a AZT y sensibles a AZT. Cada uno de estos aislados de virus se obtiene del NLAID AIDS Research and Reference Reagent Program (Programa de Reactivos de Referencia e Investigación de NLAID AIDS). Depósitos de alto título de cada uno de estos virus se han cosechado de los cultivos infectados de células adherentes de sangre periférica y congelado en alícuotas de 1.0 mi a -80 °C. Monocapas de monocito-macrófago se infectaron a un MOI de 0.1. Compuestos a evaluarse en las monocapas se infectaron a un MOI de 0.1. Compuestos a evaluarse en el ensayo onocito-macrófago se agregaron a las monocapas poco antes de infección a fin de llevar al máximo el potencial para identificar compuestos activos. A dos días después de la infección, el medio se decanta y los cultivos se lavan dos veces con medio completo a fin de retirar el virus en exceso. Medio fresco solo o medio que contiene la concentración apropiada de drogas se agregan y la incubación continua por 5 días adicionales. XTT-tetrazolio o ensayos de exclusión de azul triptano para viabilidad celular y ensayos de HIV p24 ELISA para producción de antigeno núcleo p24 se realizaron el día 7 post-infección. Equipos ELISA se adquirieron de Coulter. Curvas de control se generaron en cada ensayo para cuantificar en forma precisa la cantidad de cápsido de proteína en cada muestra. Se obtuvieron datos por análisis espectofotométrico a 450 nm, utilizando un lector de placas de Molecular Devices Vmax. Concentraciones p24 se calculan a partir de los valores de densidad óptica por uso del paquete de soporte lógico Soft Max de Molecular Device.

TABLA 27 ENSAYO MACROFAGO PARA VIRACEA 1 Actividad pg/mL P-24 o Os TABLA 28 ENSAYO MACROFAGO PARA VIRACEA 2 Actividad pg/mL P-24 o • i TABLA 29 ENSAYO MACROFAGO PARA VIRACEA 1 Actividad pg/mL P-24 o 00 TABLA 30 ENSAYO MACROFAGO PARA V1RACEA 2 Estudios de Toxicidad Absorbancia o sO !5 TABLA 31 ENSAYO DE MACROFASE ANTI-HIV (P24) Para VIRACEA #2-4 15 TABLA 33 ENSAYO DE MACROFASE ANTI-HIV (P24) Para VIRACEA #2-5 TABLA 34 VIRACEA #2-5 • TABLA 35 ENSAYO DE MACROFASE ANTI-HIV IN VITRO Para VIRACEA 1 TABLA 36 VIRACEA 1 • • TABLA 37 ENSAYO DE MACROFASE ANTI-HIV IN VITRO Para VIRACEA 2 15 EJEMPLOS 79-90 Ensayos de Unión e Inhibición de Fusión Estos ensayos utilizan células de galactosidasa-HeLa-CD4-LTR-ß que emplean una transactivación inducida por proteina tat del gen ß-galactosidasa dirigido por el promotor de repetición de terminal larga (LTR) HIV-1. El ensayo se utiliza para cuantificar tanto la unión de viriones infecciosos a células y los eventos de fusión célula-célula. Células infectadas sincitiales pueden contarse fácilmente en forma microscópica después de incubación con X-gal. El ensayo de inhibición de unión de HIV involucra el revestir en placas 1 x 10" HeLa-CD4-LTR-B-células-galactosidasa en 200 µl en placas de microtítulo de 96 pozos de fondo plano. Las células se incubaron durante la noche, el medio se retiró y reemplazó con 100 µl de diversas concentraciones de ISIS 5320 o compuesto de control. Una hora después, 100 µl de medio que contiene virus se agrega a cada pozo. Se incubaron células por una hora adicional y la monocapa se lava extensamente para retirar virus sin ligar y compuesto extracelular. A 48 horas, las células se fijaron y mancharon con X-gal. Células multinucleares azules luego se contaron bajo un microscopio invertido. El ensayo de inhibición de fusión célula-célula también se realizó en placas de microtitulación de 96 pozos con fondo plano. Células HeLa-CD4-LTR-ß-galactosidasa (5 x 103) se agregaron a cada pozo e incubaron con el compuesto de prueba por 1 hora antes de la adición de 5 x 103 HL2/3 células (28). Las células se incubaron por 48 horas adicionales y fijaron y mancharon con X-gal. Se contaron sincitia azules microscópicamente. El manchado de las células se realiza al fijar las células con una solución de 1% de formaldehído y 0.2% de glutaraldehído y manchar las células fijas con 4 µM con ferrocianuro de potasio, 4 µM de ferricianuro de potasio, 2 µM de MgCl2 y 0.4% de X-gal en PBS. La trans-activación de la expresión de ß-galactosidasa también se verifica por ELISA. Se prepararon extractos de células por congelado-descongelado y ensayaron para actividad de ß-galactosidasa de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Los resultados de ELISA se cuant i f i ca on espectrofotométricamente a 405 nm utilizando un lector de placas de microtítulo V ax de Molecular Devices.

TABLA 39 Ensayo de Fusión Beta-gal: Viracea #1 /SKI TABLA 41 Ensayo de Fusión Beta-gal: Viracea #2/SKl TABLA 42 Ensayo de Fusión Beta-gal- Viracea #2/SK2 TABLA 43 Ensayo de Fusión Beta-gal: Viracea #1 TABLA 45 Ensayo de Fusión Beta-gal: Viracea #2 15 Ensayo Microbicida Tópico Células epiteliales cervicales MEI 180 se revistieron en las paredes interiores de una placa de microtítulo con fondo plano de 96 pozos a una densidad de 5 x 10 células por pozo e incubaron durante la noche. Células H9 infectadas crónicamente se trataron con 200 µg/ml de itomicina C en medio completo por una hora, lavaron extensamente y resuspendieron a 4 x lo5 por mi. La concentración de mitomicina C utilizada resultó en el exterminio de las células crónicamente infectadas dentro de 48 horas de tratamiento, permitiendo tiempo suficiente para transmisión célula-célula de virus a las células ME-180 mientras que se asegura que la cuantificación de punto extremo de virus no incluirá una contribución de las células crónicamente infectadas. Los compuestos antivirales y las células crónicamente infectadas (2 x 10") se agregaron a cada pozo que contiene ME180 de células e incubaron por 6 horas. Después de co-cultivación, la monocapa se lava extensamente y se agrega medio fresco. Se retira el medio y medio fresco se agrega a 24 y 48 horas posterior a infección para retirar linfocitos muertos. El día 6 post-infección, muestras de sobrenadante se retiraron y analizaron para contenido de virus por p24 ELISA. Ensayo de Expresión CD4 Cuantificación del efecto de Viracea en expresión CD4 se realiza utilizando técnicas citométricas de flujo standard. Se trataron las células con Viracea por una hora a 37°C en medio de cultivo de tejido. Brevemente, células 105 CEM-SS se incubaron con o sin compuesto por 60 minutos a temperatura ambiente. Anticuerpos monoclonales anti-CD4 (20 µl, 4 µg/ml) (Becton-Dickinson, San Jos , CA) se agregan y las células se incubaron a 4°C por 40 minutos. Luego se lavaron las células dos veces con PBS, resuspendieron en 1°C de paraformaldehído y analizaron utilizando un citómetro de flujo FACSort de Becton-Dickinson. Síntesis Macromolecular Células CEM-SS se cultivaron en triplicado en la presencia o ausencia del compuesto 24 horas a 37°C en un incubador de C02 humidificado. A 24 horas, 1 µCl de [ etil-3H]-timidina, [5-3H]-uridina o [3, 4, 5-3H]-leucina se agrega al cultivo y la incubación se continúa por 8 horas adicionales. Las células se transfirieron a papeles filtro de fibras de vidrio por uso de cosechador de células Skatron. Las fibras de vidrio se lavaron con agua destilada, colocaron en una ampolleta de destelleo y la cantidad de radioactividad incorporada se cuantificó en un contador de destelleo Packard Tri-Carb. Resultados de Prueba HIV Viracea-1 y Viracea-2 se evaluaron en ensayo anti-HIV microtítulo que cuantifica la capacidad de un compuesto de prueba para inhibir la replicación de HIV y destrucción de células inducidas por HIV. Los dos compuestos se determinaron activos contra la cepa RF de HIV-1 en células CEM-SS. Efectos citopáticos inducidos por HIV, inducidos por Viracea-1 (IC30) a dilución de 1:400, mientras que Viracea-2 exhibe una IC25 a una dilución de 1,900 y no alcanza un valor inhibitorio al 50%. Tanto Viracea-1 como Viracea-2 exhiben toxicidad (TC30) a las células CEM-SS a diluciones de aproximadamente 1:20 y 1:250 respectivamente. El compuesto de control positivo, ddC, exhibe el nivel esperado de actividad contra el virus RF. Viracea-l y Viracea-2 se evaluaron por actividad en PBMCs humanos frescos infectados con el aislado HIV clínico ROJO. Este aislado de paso bajo se ha definido como un aislado de virus que induce sincitio sensible a droga (AZT, ddC, nevirapine) . Ni Viracea-l o Viracea-2 inhibieron la replicación de este aislado a concentraciones no tóxicas. Mayor evaluación de los compuestos en PMBCs infectado con ROJO se realizaron utilizando estimulación IL2 de PBMCs en vez de la blastogenésis PHA. De nuevo, no se detectó actividad por debajo de concentraciones que inhiben el crecimiento de PBMCs. AZT exhibe el nivel esperado de actividad en estos ensayos.

Viracea-l y Viracea-2 se evaluaron en monocitos-macrófagos de humanos, frescos infectados con ADA aislado clínico de paso bajo. En estos ensayos, ambos compuestos exhibieron altos niveles de actividad con Viracea-2 que es claramente superior. La concentración 50% efectiva de Viracea-l y Viracea-2 fue 1:4000 y 1:1000, respectivamente. No se detectó toxicidad a la monocapa de monocito-macrófago por examen morfológico o manchado de XTT-Tetrazolio. AZT exhibió el nivel esperado de actividad en estos ensayos. Viracea-l y Viracea-2 se encontró que inhiben la conexión de virus infeccioso a las células HeLa-CD4-LTR-ß-galactosidasa de expresión CD4. La inhibición de unión de virus a las células objetivo se detecta a diluciones de aproximadamente 1:1000 a 1:3200 para ambos compuestos. Ningún compuesto tuvo un efecto antiviral en la fusión de las células HL2/3 que expresan envolvente con las células HeLa-LTR-ß-galatosidasa. La toxicidad se anotó para ambos compuestos en el ensayo de fusión en donde el compuesto está presente para la duración completa del ensayo, así como con Viracea-2 en el ensayo de unión en donde el compuesto solo estuvo presente por 2 horas. Chicago Sky Blue, un colorante sulfonado exhibió el nivel esperado de actividad en cada uno de estos ensayos. Viracea-2 evitó la transmisión del virus de linfocitos crónicamente infectados a la línea de células epiteliales cervicales ME180 a una dilución de aproximadamente 1:500 (IC30) . No se detectó toxicidad en este ensayo a las células ME180. En este ensayo, la droga está presente durante el tiempo de infección solo (4 horas). Sulfato de dextrana (control positivo, polisacárido sulfatado) y dextrana (control negativo) exhibieron el nivel esperado de actividad en estos ensayos. Viracea-2 no tuvo efecto en la expresión de CD4 en la superficie celular. La inhibición de la incorporación de timidina (ADN) , uridina (ARN) o leucina (proteína) en macromoléculas de alto peso molecular se observa a diluciones mayores a 1:320. La inhibición de la síntesis de macromoléculas fue paralela a la toxicidad de los compuestos en células CEM-SS. Resumen de los Resultados de Prueba HIV Viracea-l y Viracea-2 inhiben infección de HIV en células-T establecidas con estrecho índice terapéutico. Viracea-l y Viracea-2 potencialmente inhiben otra replicación de HIV en monocito-macrófago. Viracea-l y Viracea-2 inhiben la conexión de virus a células objetivo pero no evitan la fusión de células infectadas y no infectadas. Viracea-2 inhibe la transmisión de virus en un ensayo microbicida tópico y puede ser útil para evitar transmisión sexual de HIV. Viracea-2 no tiene efecto en la expresión de CD4 en superficie celular. PREVENCIÓN Y TRATAMIENTO El compuesto antimicrobiano proporciona un microbicida y medicina que puede (1) ayudar a evitar la transmisión secual de HIV; (2) controlar la carga viral de HIV y otros virus; (3) erradicar HIV; (4) extender los períodos de latencia del síndrome de autoinmunodeficiencia (SIDA - AIDS) en pacientes que han contraído HIV; (5) disminuye el dolor y sufrimiento de los pacientes de HIV; (6) reduce la dispersión infecciosa de HIV; y (7) proporciona un tratamiento mejor y más exitoso de pacientes con HIV. El tratamiento médico también puede resolver los síntomas físicos de un brote infeccioso de HIV, herpes simplex, virus 1 o 2 (HSV 1 o HSV 2) u otras enfermedades microbianas infecciosas. Lo precedente puede lograrse por aplicación sistémica o inyección del compuesto antimicrobiano preferido anteriormente descrito (medicina) con una jeringa en el canal rectal (recto, tejido rectal, ano o tejido anal) o la vagina (tejido vaginal) de una paciente infectada con HIV u otra enfermedad microbiana infecciosa por 8 a 12 veces al día, de preferencia 10 veces al día a intervalos de cada dos horas, por un período de 10-18 días consecutivos, de preferencia 14 días consecutivos (dos semanas) para mejores resultados. La dosis, concentración y cantidad del compuesto antimicrobiano (medicina) pueden variarse dependiendo de la severidad y extensión de la enfermedad asi como la edad, sexo, peso, raza y salud del paciente. De manera conveniente, el área infectada se enjuaga (lava) y seca para retirar jabón o residuos en el área infectada antes de que se aplique el compuesto antimicrobiano (medicina) . Para el tratamiento de virus herpes simplex 1 o 2, el compuesto antimicrobiano puede aplicarse en el área infectada tal como por 19-24 horas. De preferencia, la erupción vesicular del virus herpes se resuelve en 19-24 horas y consecuentemente se sanan las lesiones de herpes. Entre las muchas ventajas del tratamiento médico y la medicina (composiciones) de la invención están: 1. Superior tratamiento y prevención de HIV y otras enfermedades infecciosas . 2. Superiores resultados para terminar el dolor de HIV, infecciones virales de herpes simplex y otras infecciones microbianas sin toxicidad. 3. Desempeño sobresaliente para resolver rápidamente brotes de HIV, virus herpes simplex y otras enfermedades microbianas . 4. Salvar vidas de recién nacidos, niños, adultos y animales.

. Reduce las pérdidas económicas mundiales por HIV, herpes y otras enfermedades microbianas. 6. Resuelve mucho de la angustia mental y emocional seria de los afectados por HIV y herpes. 7. Materiales fácilmente disponibles (ingredientes). 8. Económicas. 9. Seguridad. 10. Facilidad de uso. 11. Confiable. 12. Efectiva. Aunque se han mostrado y descrito modalidades y ejemplos de la invención, habrá de entenderse que diversas modificaciones y substituciones así como rearreglos de partes componentes y etapas de proceso, métodos y tratamientos pueden realizarse por aquéllos con destreza en la especialidad sin apartarse del espíritu y alcance novedoso de esta invención.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una composición que comprende un nutriente y una planta, caracterizada porque el nutriente comprende ácido fólico, la planta comprende un producto botánico herbáceo del género Echinacea y la Echinacea comprende Echinacea purpurea.
2. Una composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la composición además incluye una segunda planta que comprende un producto botánico herbáceo del género Commiphora.
3. Una composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque la Commiphora comprende una especie que consiste de Commiphora myrrha, Commiphora molmol o Commiphora erythraea.
4. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes 2-3, caracterizada porque la Commiphora comprende Commiphora mirra.
5. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la composición comprende en peso: de aproximadamente 2% a aproximadamente 12% de ácido fólico; de aproximadamente 40% a aproximadamente 60% de Echinacea purpurea y Commiphora myrrha; y de aproximadamente 20% a aproximadamente 60% agua.
6. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes 3-5, caracterizada porque la proporción de Commiphora myrrha a Echinacea purpurea está en la gama de aproximadamente 1 : 2 a aproximadamente 1:4.
7. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la composición además incluye de aproximadamente 0.02% a menos de 0.26% en peso de un surfactante de sal de amonio cuaternaria.
8. Una composición de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque el surfactante de sal de amonio cuaternaria comprende cloruro de benzalconio.
9. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento o prevención de la transmisión sexual del virus de inmunodeficiencia humana (HIV) .
10. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de virus herpes simplex 1.
11. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación íie un producto en el tratamiento de virus herpes simplex 2.
12. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de virus de varicela zoster (herpes zoster) .
13. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de citomegalovirus .
14. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de Epstein Barr.
15. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de virus de papiloma.
16. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de influenza.
17. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8 , en la preparación de un producto en el tratamiento de un virus que comprende adenovirus, arbovirus, arenavirus, picornavirus, coronavirus, virus sincitial o celulitis.
18. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de una infección bacteriana que comprende estafilococos, estreptococos micobacterias o bacilos anaeróbicos.
19. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de encefalitis que comprende encefalitis viral o encefalitis bacterial.
20. El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la preparación de un producto en el tratamiento de meningitis que comprende meningitis viral o meningitis bacterial.