MXPA98002030A - Un metodo para determinar la sensibilidad de agente antimicrobiano de un microorganismo no parafinofilico y un aparato asociado - Google Patents

Abstract

Un método para determinar la sensibilidad de por lo menos un microorganismo no parafinofílico a partir de una muestra obtenida de un paciente para un agente antimicrobiano diferente y cantidades predeterminadas del mismo. El método incluye proporcionar por lo menos un recipiente que contiene una solución acuosa e inocular la solución con la muestra. El método incluye además colocar dentro del recipiente (i) un portaobjetos recubierto con una fuente de carbono y (ii) una cantidad predeterminada de un agente antimicrobiano que se va a probar. Observando el crecimiento del microorganismo no parafinofílico o la carencia del mismo sobre el portaobjetos, puede determinarse si la cantidad predeterminada del agente antimicrobiano es efectiva para inhibir el crecimiento del microorganismo no parafinofílico sobre el portaobjetos. Se describe también un aparato asociado.

Description

UN MÉTODO PARA DETERMINAR LA SENSIBILIDAD DE AGENTE ANTIMICROBIANO DE UN MICROORGANISMO NO PARAFHMOFÍLICO Y UN APARATO ASOCIADO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a un método para determinar la sensibilidad de agente antimicrobiano de un microorganismo no parafinofílico y un aparato asociado. El tratamiento de infecciones comprende muchas veces las suposiciones instruidas del personal médico sobre la naturaleza del microorganismo involucrado y el agente antimicrobiano correcto y la cantidad del mismo necesaria para tratar efectivamente el microorganismo presente en el tejido infectado. Frecuentemente existe la necesidad de tratar una flora mixta de varios microorganismos. El personal médico está realmente interesado en determinar rápidamente que agentes antimicrobianos y en que dosis, son necesarios para asegurar la inhibición efectiva del crecimiento de todos los microorganismos presentes en el paciente. No existe actualmente una forma eficiente, efectiva y económica para que un médico determine rápidamente que agente antimicrobiano y que dosis es necesaria a fin de tratar al paciente Un médico simplemente no tiene disponible pare el tipo de información con respecto a la sensibilidad del agente antimicrobiano que haría posible una selección más exacta de un agente antimicrobiano y, una vez que se selecciona un agente antimicrobiano apropiado, facilita una dosis más precisa de tratamiento. Si esta información estuviera disponible, un médico podría tratar de manera más efectiva la infección. Además, debido a que los agentes antimicrobianos son costosos , la información podría usarse de manera que solamente la cantidad de agente antimicrobiano necesaria podría emplearse para tratar la infección. Finalmente, y de manera más importante, ya que los agentes antimicrobianos pueden tener efectos colaterales indeseables, la información puede utilizarse para encontrar un agente antimicrobiano más efectivo y la dosis del mismo, lo cual limitará los efectos colaterales indeseables. Como se usa en la presente, el término "microorganismo no parafinofílico" representa a cualquier microorganismo sostenido por una fuente de carbono diferente de la parafina. Ejem plos de tales microorganismos no parafinofílicos incluyen , aunque no están limitados a los siguientes: Mycobacterium tuberculosis; Mycobacterium paratuberculosis; Mycobacterium leprae; Staphylococcus; Streptococcus; E. Coli; Listeria; Brucellae; Humemophilus; Treponema; Pneumococcus; Clostridium: Cryptococcus; Coccidioides; e Histoplasma. Asimismo, como se usa en l a presente, el térm ino "paciente" se refiere a u n m iem bro del reino animal , incluyendo seres humanos , cuya muestra de cuerpo se está procesando mediante el método y el aparato de la invención .

Las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,153,119 y 5,316,918 describen métodos y el aparato para identificar y probar la sensibilidad antibiótica del Mycobacterium avium-intracellulare ("MAI"), un microorganismo no parafinofílico. El inventor nombrado en esas patentes es Robert A. Ollar, uno de los coinventores de la invención descrita en la presente. Este método involucra proporcionar un recipiente que contiene una solución acuosa e inoculando dentro de la solución una muestra. Después de esto, un portaobjetos recubierto con parafina es colocado dentro del recipiente. El portaobjetos es observado después para la presencia o ausencia de crecimiento de MAI. A pesar de la existencia de las patentes del Dr. Ollar, existe aun la necesidad de un método de prueba de la sensibilidad de agente antimícrobiano de uno o más microorganismos no parafinofílicos de una manera que reduce al mínimo la eficacia del agente antimicrobiano utilizado para inhibir el crecimiento de uno o mas microorganismos no parafinofílicos que pueden estar presentes en un paciente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención ha cumplido o superado las necesidad antes mencionada así como otras. El método para determinar la sensibilidad de por lo menos un microorganismo no parafinofílico de una muestra obtenida de un paciente a diferentes agentes antimicrobianos y cantidades predeterminadas del mismo comprende proporcionar por lo menos un recipiente que contiene una solución acuosa e inocular la solución con la muestra. El método incluye además colocar dentro deJ recipiente (i) un portaobjetos recubierto con una fuente de carbono y (ii) una cantidad predeterminada de un agente antimicrobiano que se va a probar. Observando el crecimiento del microorganismo no parafinofílico o la carencia del mismo en el portaobjetos , puede determinarse si la cantidad predeterminada del agente antimicrobiano es efectiva en inhibir el crecimiento del microorganismo no parafinofílico en el portaobjetos . Se describe también un aparato asociado. El aparato comprende un recipiente adaptado pa ra contener una solución acuosa , una cantidad de agente antimícrobiano que se va a probar y la muestra. El aparato incluye además un portaobjetos recubierto con una fuente de carbono, el portaobjetos estando adaptado para ser colocado en el recipiente. De nuevo, la observación del crecimiento del microorganismo no parafinofílico a partir de la muestra sobre el portaobjetos puede usarse para determinar la concentración del agente antimicrobiano necesario para resistir el crecimiento del microorganismo no parafinofílico en el portaobjetos .

BREVE DESCRIPCIÓN DEL DIBUJO Puede lograrse una completa comprensión de la invención a partir de la siguiente descripción detallada de la invención cuando se lea en conjunción con el único dibujo que le acompaña el cual muestra una modalidad del aparato de sensibilidad de agente antimicrobiano.

DESCRIPCIÓN DETALLADA El método y aparato de la invención proporcionan una forma eficiente, efectiva y económica de determinar la sensibilidad de por lo menos un microorganismo no parafinofílico a diferentes agentes antimicrobianos y las cantidades predeterminadas de los mismos. Haciendo referencia ahora a la única Figura, el método de sensibilidad del agente antimicrobiano se explicará con referencia a una modalidad del aparato de sensibilidad de agente antimicrobiano 50. El aparato 50 consta de seis recipientes en la forma de tubos de ensayo 60, 61, 62, 63, 64, 65 conteniendo cada uno una cantidad de una solución acuosa, tal como caldo de Czapek 70, 71, 72, 73, 74, 75. Se apreciará que la solución acuosa no contiene una fuente de carbono, como se desea para proporcionar una sola fuente de carbón en el portaobjetos (descrito a continuación) para cultivar de manera efectiva el microorganismo no parafinofílico que se va a probar en el portaobjetos y no en la solución acuosa. Las soluciones acuosas en los tubos de ensayo 61 -65 contienen intervalos uniformes de concentraciones crecientes de un agente antimicrobiano que se va a probar. El tubo de ensayo 60 se usa como un tubo de control que no contiene ningún agente antimicrobiano. La muestra a partir del paciente es inoculada después dentro de cada uno de los tubos de ensayo 60-65. La muestra puede ser una muestra de sangre; cualquier biopsia de tejido; fluido estomacal; orina; fluido cerebroespinal; mucosa nasofaríngea o saliva. Esas muestras pueden obtenerse del pacientes en el consultorio del médico o en la sala de emergencias de un hospital, por ejemplo, mediante técnicas conocidas. Los portaobjetos 80, 81 , 82 , 83 , 84 y 85 recubiertos con una fuente de carbono son colocados después dentro de los tubos de ensayo respectivos 60, 61 , 62 , 63, 64 y 65. Los portaobjetos son incubados durante un período de un mínimo de veinticuatro (24) horas. Observando el crecimiento del microorganismo no parafinofílico 90, 91 , 92 , 93, 94 en los portaobjetos 80-85, puede determinarse la concentración inhibidora mínima ("M IC") del agente antimicrobiano necesario para evitar que el crecimiento del m icroorganismo no parafinofílico, se encuentra por lo tanto la concentración de MIC en el tubo de ensayo 75. Se apreciará que una m uestra puede tener en ocasiones más de un microorganismo no parafinofílico presente en la m isma . Por ejemplo, si un paciente tiene un absceso en el cerebro asociado con endocarditis bacteriana , el paciente y tendrá mayor probabil idad de tener un patógeno individual (es decir, staphylococcus). Sin embargo, puede existir una flora mixta que ha crecido en el portaobjetos (es decir, staphylococcus y meningococci). Sin embargo, es imperativo tratar toda la flora bacteriana, ya que cualquier bacteria presente es causante, de patogenicidad en el paciente. Esta invención permite a un médico especificar un agente antimicrobiano y una dosis particular del mismo que inhibirá todo el crecimiento de flora en el portaobjetos y que por lo tanto, es efectivo para tratar todos los microorganismos no parafinofílicos que son causantes de patogenicidad en el paciente. Se apreciará que aunque el aparato 50 se muestra con múltiples recipientes y múltiples portaobjetos 80-85, que la invención no está limitada a los múltiples recipientes y los múltiples portaobjetos, sino que cubre también un solo recipiente y un solo portaobjetos. La fuente de carbono y los portaobjetos 80-85 pueden incluir una matriz gelatinosa que contiene una fuente de carbono. Una fuente de carbono puede ser una o más de aquellas seleccionadas del grupo que consta de glucosa, fructosa, glicenol, manitol, asparagina y caseína entre otros. Otra modalidad puede incluir el proporcionar un portaobjetos y el recubrimiento del portaobjetos con un adhesivo y asegurar una pluralidad de lechos de gel al adhesivo. La fuente de carbono puede entonces ser unida iónicamente o por afinidad a los lechos de gel.

Los portaobjetos 80-85 con la matriz gelatinosa que contiene una fuente de carbono puede prepararse mediante el siguiente método. Un recipiente, tal como un vaso para análisis, se llena primero con 100 ml de agua destilada. Dentro del vaso para análisis se colocan dos (2) gramos de agar (la matriz gelatinosa) y tres (3) gramos de la fuente de carbono (tal como glucosa). Está mezcla es puesta a ebullición y el vapor esterilizado y la matriz gelatinosa fundida es vertida dentro de un plato de petri, el cual es asentado sobre una placa caliente. De esta manera la matriz gelatinosa/fuente de carbono permanece fundida. Después de esto, un portaobjetos estéril tal como el portaobjetos 80 es introducido en la matriz gelatinosa fundida/fuente de carbono y se recubre con la misma. El portaobjetos ahora recubierto es retirado del plato de petri y se deja reposar durante un minuto o dos para solidificar el recubrimiento en el mismo. El portaobjetos con el recubrimiento de una matriz gelatinosa que contiene una fuente de carbono es colocado fácilmente en uno de los tubos de ensayo 60-65 que contiene la solución acuosa y la muestra. Un método alternativo de preparación del portaobjetos involucra recubrir primero el portaobjetos con un adhesivo, tal como colodión y después aplicar una pluralidad de lechos de gel (comercialmente disponibles de Pharmacia of Parsippany, New Jersey) al adhesivo. Los lechos de gel son de aproximadamente una miera de diámetro. El portaobjetos que contiene el recubrimiento de los lechos de gel se sumerge ahora en un agente de regulación de pH que contiene la fuente de carbono (tal como glucosa) para unir la fuente de carbono a los lechos de gel ya sea iónicamente o por afinidad. Los microorganismos no parafinofílicos que pueden ser identificados utilizando el método de la invención incluyen cualquier microorganismo sostenido por una fuente de carbono diferente de la parafina. Los microorganismos no parafinofílicos incluyen , pero no se limitan a Mycobacterium tuberculosis; Mycobacterium paratuberculosis; Mycobacterium leprae; Staphylococcus; Streptococcus; E. Coli; Listeria; Brucellae; Humemophilus; Treponema; Pneumococcus; Clostridium; Cryptococcus; Coccidioides; e Histoplasma. Se apreciará que se han descrito un método para determinar la sensibilidad de por lo menos un microorganismo no parafinofílico en una muestra y se ha descrito un aparato asociado. El método es efectivo y eficiente y no involucra el uso de equipo costoso y complicado. Se describe también un aparato asociado. En tanto que se han descrito las modalidades específicas de la invención , aquellos con experiencia en la técnica apreciarán que podrían desarrollarse varias modificaciones y alteraciones a esos detalles a la luz de las enseñanzas generales de la descripción . Por consiguiente, las dispo siciones particulares descritas están destinadas a ser ilustrativas solamente y no limitan el alcance de la invención que será dado por el amplio ca mpo de acción de las reivindicaciones anexas y cualesquiera y todos los equivalentes dé las mismas.

Claims (19)

REIVINDICACIONES

1 . Un método para determinar la sensibilidad de por lo menos un microorganismo no parafinofílico a partir de una muestra obtenida de un paciente para diferentes agentes antimicrobianos y las cantidades predeterminadas del mismo, el método que comprende: proporcionar por lo menos un recipiente que contiene una solución acuosa; inocular la solución con la muestra; colocar dentro del recipiente (i) un portaobjetos recubierto con una fuente de carbono y (ii) una cantidad predeterminada de un agente antimicrobiano; y observar el crecimiento del microorganismo no parafinofílíco o la carencia del mismo sobre el portaobjetos para determinar si la cantidad predeterminada del agente antimicrobiano es efectiva para inhibir el crecimiento del microorganismo no parafinofílico sobre el portaobjetos .

2. El método de la reivindicación 1 , que incluye emplear como dicho portaobjetos uno recubierto con una matriz gelatinosa que contiene la fuente de carbono.

3. El método de la reivindicación 1 , que incluye proporcionar e l portaobjetos adhiriendo primero al portaobjetos una pluralidad de lechos de gel y uniendo después a los lechos de gel la fuente de carbono .

4. El método de la reivindicación 3, en donde la fuente de carbono es unida iónicamente a los lechos de gel.

5. El método de la reivindicación 3, en donde la fuente de carbono es unida por afinidad a los lechos de gel.

6. El método de la reivindicación 3, que incluye adherir los lechos de gel al portaobjetos por medio de un adhesivo.

7. El método de la reivindicación 6, que incluye emplear como dicho adhesivo una matriz gelatinosa con la fuente de carbono.

8. El método de la reivindicación 1, que incluye emplear como dicha fuente de carbono una o más del grupo que comprende glucosa, fructosa, glicenol, manitol, asparagina y caseína.

9. El método de la reivindicación 1, que incluye emplear como dicha muestra una seleccionada del grupo que comprende sangre, fluido estomacal, orina, fluido cerebroespinal, mucosa nasofaríngea y saliva.

10. El método de la reivindicación 1, que incluye proporcionar una pluralidad de recipientes cada conteniendo una solución acuosa; inocular cada recipiente con una cantidad de la muestra; colocar (i) un portaobjetos separado recubierto con una fuente de carbono y (ii) una cantidad de agente antimicrobiano que se va a probar en cada recipiente, cada recipiente que contiene una cantidad predeterminada diferente del agente antimicrobiano; y observar el crecimiento del microorganismo no parafinofílico o la carencia del mismo sobre los portaobjetos para determinar la concentración inhibidora mínima del agente antimicrobiano para inhibir el crecimiento del microorganismo no parafinofílico.

11. Un aparato para determinar la sensibilidad de por lo menos un microorganismo no parafinofílico a partir de una muestra obtenida a partir de un paciente a diferentes agentes antimicrobianos y cantidades predeterminadas del mismo que comprende: un recipiente adaptado para contener (i) una solución acuosa; (ii) una cantidad de un agente antimicrobiano que se va a probar; y (iii) dicha muestra; y un portaobjetos recubierto con una fuente de carbono, la fuente de carbono estando adaptada para ser colocada en el recipiente, por lo que la observación del crecimiento del microorganismo no parafinofílico a partir de la muestra sobre el portaobjetos puede usarse para determinar la concentración del agente antimicrobiano necesario para resistir el crecimiento del microorganismo no parafinofílico sobre el portaobjetos.

12. El aparato de la reivindicación 11, en donde el portaobjetos es recubierto con una matriz gelatinosa que contiene la fuente de carbono.

13. El aparato de la reivindicación 11, en donde el portaobjetos es recubierto con una pluralidad de lechos de gel que han unido al mismo la fuente de carbono

14. El aparato de la reivindicación 13, en donde la fuente de carbono es unida iónicamente a los lechos de gel.

15. El aparato de la reivindicación 13, en donde la fuente de carbono es unida por afinidad a los lechos de gel.

16. El aparato de la reivindicación 13, en donde los lechos de gel son adheridos al portaobjetos mediante un adhesivo

17. El aparato de la reivindicación 16, en donde el adhesivo es colodión.

18. El aparato de la reivindicación 11, en donde la fuente de carbono es una o más seleccionada del grupo que comprende glucosa, fructosa, glicenol, manitol, asparagina, urea, caseína e hidrolizado.

19. El aparato de la reivindicación 11, que incluye una pluralidad de recipientes cada uno adaptado para contener (i) una solución acuosa; (ii) una cantidad de agente antimicrobiano que se va a probar; (iii) dicha muestra; y una pluralidad de portaobjetos cada uno recubierto con una fuente de carbono, cada uno de los cuales está adaptado para ser colocado en uno de los recipientes.