MX2014008030A - Composicion de agentes de deteccion para celulas tumorales epiteliales y metodo de preparacion para la misma. - Google Patents

Abstract

Se proporciona en la presente invención una composición de agentes de detección para células vivas, especialmente células tumorales epiteliales; la composición contiene de 0-5 % de ácido fólico, de 0-10 % de complejo de ácido fólico, de 0.01-5 % de azul de metileno, de 0.1-10 % de agente reductor de carbohidratos, de 2-6 % de ácido acético y de 3-95 % de agua; también se proporciona en la presente invención un método de preparación para la composición de agentes de detección y kits que contienen la composición de agentes de detección.

Description

COMPOSICIÓN DE AGENTES DE DETECCIÓN PARA CÉLULAS TUMORALES EPITELIALES Y MÉTODO DE PREPARACIÓN PARA LA MISMA CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se relaciona con una composición de agente detector, especialmente con una composición de agente detector para células tumorales epiteliales basándose en el cambio de color. La invención además se relaciona con un método para preparar la composición de agente detector y un kit que comprende la composición de agente detector.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Actualmente los métodos para la tinción vital de células tumorales epiteliales principalmente incluyen métodos basados en la prueba del acetoblanco, la prueba del yodo, la prueba de toluidina azul, la tinción con azul de metileno, la tinción con hematoxilina y similares.

Específicamente, la prueba del acetoblanco es aplicar solución de ácido acético, por ejemplo, solución de ácido acético del 3-5 %, sobre el tejido epitelial cervical/vaginal, y observar si hay alguna región sensible al acetoblanco en el tejido epitelial al que se le aplicó la solución después de esperar algo de tiempo. Si hay alguna región de acetoblanco, se sospecha que este tejido tumoral contiene células tumorales. Sin embargo, aunque este método tiene alta sensibilidad, su especificidad es pobre, y esto es porque además de células tumorales, algunas células inflamatorias también pueden generar acetoblancura, produciendo así resultados de falso positivo. Además, la especificidad de este método se ve muy afectada por el nivel de habilidad y experiencia del operador.

El mecanismo de la prueba del yodo es la reacción con glucógeno. Involucra el aplicar yodo de Lugol sobre tejidos epiteliales cervicales y detectar por medio de observación la tinción con yodo de las células epiteliales, en la que el epitelio normal exhibe colores pardos rojizos o negros, mientras que el epitelio anormal exhibe colores amarillos mostaza intensos o pardos amarillentos. Sin embargo, si hay inflamación epitelial, estas regiones pueden no teñirse con el yodo o exhibir una carga de color. Por lo tanto, la prueba de yodo tiene especificidad pobre sobre la tinción de las células epiteliales Los métodos que usan azul de toluidina pueden causar la tinción de los escombros nucleares de neutrófilos y bacteriales, resultando en una velocidad alta de falso positivo. También es difícil teñir cáncer y leucoplasia con queratinización superficial, la cual tiende a causar falso negativo*2'.

Después de la tinción de tejidos epiteliales con hematoxilina, se necesita un microscopio de alto poder para la observación con operación complicada y altos requerimientos en la especialidad y experiencia del operador, así como un tiempo largo de inspección.

La afinidad entre el azul de metileno y las células cancerosas hace que los tejidos malignos sean proclives a la tinción azul. Se ha reportado que el usarlo para muestreo de biopsia in situ de tejidos epiteliales esofágicos tiene el efecto de mejorar la velocidad positiva de biopsia [3J. Sin embargo, no hay reporte en la técnica para combinar la reacción redox de cambio de color de azul de metileno con ácido fólico o complejo de ácido fólico para ubicar y detectar rápidamente células tumorales epiteliales por medio de tinción y reacción de cambio de color.

Se necesita con urgencia en la técnica una composición para detectar células tumorales epiteliales, especialmente para células tumorales epiteliales cervicales/vaginales por medio de tinción y cambio de color que tiene alta sensibilidad, alta especificidad y operación simple y rápida.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN El inventor de la invención ha encontrado que los tejidos epiteliales anormales se pueden teñir precisa y específicamente uniendo el ácido fólico y/o el complejo de ácido fólico con receptor de ácido fólico expresado excesivamente en células tumorales, endocitosis y cambio de color de azul de metileno en reacción redox con azul de metileno en estado de reducción que participa en el sistema redox de las células tumorales, distinguiéndolas así de los tejidos normales, y por medio de cambio de color de la composición de la invención si las células del tejido puesto a prueba son células tumorales y se muestran rápidamente, proporcionando así la ubicación y detección rápida, simple, precisa y sensible de tejidos epiteliales anormales, completando así la invención. La composición de agente detector de la invención tiene sensibilidad alta, alta especificidad, operación simple y tiempo corto de inspección, y el operador no necesita entrenamiento técnico. Adicionalmente, el azul de metileno, como agente ampliamente usado clínicamente, tiene la ventaja de ser efectivo, seguro, barato y fácilmente obtenible, habilitando así la composición y método de la invención para tener estas ventajas también.

Por lo tanto, la invención proporciona una composición de agente detector que comprende los siguientes componentes (por porcentaje en peso): Ácido fólico 0-5 % Complejos de ácido fólico 0-10 % Azul de metileno 0.01-5 % Agente reductor de carbohidratos 0.1-10 % Ácido acético 2-6 % Agua 3-95 % En una modalidad preferida de la composición de agente detector antes mencionada, la cantidad de ácido fólico preferiblemente es de 0-4.5 %, más preferiblemente de 0-1 %.

En otra modalidad preferida, la cantidad del complejo de ácido fólico preferiblemente es de 0-8 %, más preferiblemente de 0-1 %.

Incluso en otra modalidad preferida, la cantidad de azul de metileno preferiblemente es de 0.05-4.5 %, más preferiblemente de 0.05-0.5 %.

En incluso en otra modalidad preferida, la cantidad de ácido acético preferiblemente es de 3-5 %.

El agente reductor de carbohidratos usado en la composición de agente detector de la invención incluye varios carbohidratos y derivados de los mismos, preferiblemente glucosa, fructosa, galactosa, hexosa, lactosa, maltosa y derivados de los mismos, y similares.

Otro aspecto de la invención se relaciona con un método para preparar el agente detector de la invención, que comprende o consiste en los siguientes pasos en orden: (a) disolver ácido fólico y/o complejo de ácido fólico en un solvente acuoso por medio del porcentaje en peso antes mencionado para formar una solución, (b) agregar, agitar y disolver azul de metileno en la solución (a) por medio del porcentaje en peso antes mencionado, (c) agregar el agente reductor de carbohidratos en la solución (b) por medio del porcentaje en peso antes mencionado, (d) agitar la solución obtenida en el paso (c) por 30 minutos, (e) agregar, agitar y disolver ácido acético en la solución (d) por medio del porcentaje en peso antes mencionado, y los pasos antes mencionados se conducen bajo temperatura y presión normales.

En un aspecto preferido, el agente detector de la invención o el agente detector preparado por medio del método de la invención se usan para la detección de células tumorales epiteliales.

La invención además se relaciona con un método para detectar la lesión de un tejido epitelial que comprende: (a) aplicar los agentes detectores de célula vital de la invención a la superficie del tejido epitelial del sujeto por medio de un portador; (b) observar el cambio de color sobre el portador; y (c) determinar si hay una lesión en el tejido epitelial puesto a prueba por medio del cambio de color.

En una modalidad preferida, el método para detectar la lesión de un tejido epitelial adicionalmente comprende: (d) observar si la respuesta a acetoblanco se genera en la región superficial del tejido epitelial al que se le aplica el agente detector de células vitales de la invención.

En una modalidad preferida, en el método para detectar la lesión de un tejido epitelial de conformidad con la invención, la observación en el paso (b) se hace visualmente.

En una modalidad preferida, en el método para detectar la lesión de un tejido epitelial de conformidad con la invención, la observación y determinación en los pasos (b) y (c) se conducen basándose en los siguientes estándares: sin cambio de color del portador, lo que indica que no hay lesión en el tejido epitelial; el portador se vuelve de color verde azulado claro, lo cual indica que no hay lesión anormal del tejido epitelial; el portador se vuelve verde azulado intenso/verde negruzco/negro púrpura, lo cual indica que hay lesión anormal del tejido epitelial. Además, si el portador se vuelve verde negruzco/negro púrpura, la región del tejido epitelial que genera respuesta a acetoblanco se puede muestrear por medio de biopsia para examen patológico con el consentimiento del paciente si el seguimiento del paciente no se puede asegurar.

En una modalidad preferida, la lesión anormal es una neoplasia (>CIN II) y carcinogénesis dentro de un tejido epitelial.

La composición de agente detector para células tumorales epiteliales de la invención se puede administrar usando diferentes vías. Las vías de administración incluyen, pero no están limitadas a, aplicación. La administración se puede realizar usando un portador que incluye, pero no está limitado a, hisopos de algodón absorbente, gasa, microcápsulas, membranas de celulosa, papel filtro, nanomateriales, aerogel y similares.

La composición de agente detector para células tumorales epiteliales de la invención se puede administrar a tejidos epiteliales de diferentes sitios, que incluyen, pero no están limitados a, tejidos epiteliales del cerviz, vagina, cavidad bucal, esófago, tejidos epiteliales gastrointestinales y similares.

Los porcentajes involucrados en la invención son porcentajes en peso, a menos que se especifique de otra manera.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se muestra en estudios clínicos que los receptores de ácido fólico se expresan excesivamente en la superficie de la mayoría de las células tumorales, mientras que sólo están presentes en una pequeña cantidad en células normales. Por lo tanto, el ácido fólico y los complejos de ácido fólico (derivados de ácido fólico) pueden servir como molécula de direccionamiento específico de tumor para el diagnóstico y tratamiento de tumores14"51.

En la invención, el término "complejo de ácido fólico" se define como un complejo formado a partir de la unión de la molécula de ácido fólico con uno o más de otros componentes, en donde el grupo carboxílico del ácido fólico se une a uno o más de otros componentes por medio de acoplamiento o conjugación. El uno o más componentes pueden ser, por ejemplo, fármacos, nucleidos radioactivos, colorantes, genes, agentes de desarrollo y similares. Los ejemplos del complejo de ácido fólico son complejo de ácido-mitomicina y complejo ácido fólico -DTPA y similares. En la composición y método de la invención, el ácido fólico y/o complejo de ácido fólico se puede administrar simultáneamente, o se puede usar solo. El complejo de ácido fólico usado en la composición de agente detector descrita en la invención incluye conjugados de ácido fólico formados acoplando varios compuestos moleculares pequeños con ácido fólico, que incluyen, pero no están limitados a, -?-cisteína de ácido fólico, (R)-2-(2-(R)-3,4-dihidroxi-5-carbonil-2,5-dihidrofurano)-2-hidroxietil-4-(6-(2-ami no-4-carbonil-3,4-dihidropteridina)metilamino)benzoato, y similares.

La cantidad de ácido fólico en la composición de la invención es de 0-5 %, preferiblemente de 0-4.5 %, 0-4 %, 0-3.5 %, 0-3 %, 0-2.5 %, 0-2 %, 0-1.5 %, incluso más preferiblemente de 0-1 % de porcentaje en peso. La cantidad de complejo de ácido fólico en la composición de la invención es de 0-10 %, preferiblemente de 0-8 %, 0-7 %, 0-6 %, 0-5 %, 0-4 %, 0-3 %, 0-2 %, incluso más preferiblemente de 0-1 % de porcentaje en peso.

El azul de metileno es un colorante comúnmente usado clínicamente. Su mecanismo de tinción y cambio de color principalmente está basado en sus diferentes colores en estado de oxidación y estado de reducción. Específicamente, el azul de metileno en estado de reducción no tiene color, mientras que la solución acuosa de azul de metileno en estado de oxidación exhibe un color azul. Además, el azul de metileno oxidado, mientras está presente en la composición de la invención, también puede exhibir un color verde azulado, verde negruzco (verde parduzco) y negro púrpura. El colorante biológico azul de metileno tiene alta afinidad con células cancerosas y melanina171, cuya propiedad de oxidación y reducción causa que el azul de metileno aparezca diferentes espectros de cambio de color en los estados de oxidación y reducción de los tejidos tumorales. Dichos cambios de color se pueden identificar directamente por medio de observación visual rápida.

La capacidad anti-oxidación de tejidos tumorales se mejora significativamente en comparación con tejidos normales en general. Sin embargo, aún existe estrés oxidativo significativo en dichos tejidos tumorales161. El estrés oxidativo indica lesión oxidativa del tejido, el cual es un periodo de progresión patológica oculta del tejido. Aunque la propiedad de reducción de células tumorales se mejora, su balance de oxidación-reducción aún está inclinado a la oxidación, a menos que las células tumorales estén en un estado apoptótico o inhibido. Por lo tanto, en el ambiente intracelular de dichas células vitales, el azul de metileno en la composición de la invención se oxida para exhibir el color verde, verde azulado, verde negruzco y negro púrpura del estado de oxidación.

En la composición de la invención, el complejo de ácido fólico y una pequeña cantidad de ácido fólico pueden formar un complejo de ácido fólico-azul de metileno con el azul de metileno. Debido al efecto de unión entre la molécula de ácido fólico y el receptor de ácido fólico expresado excesivamente sobre la superficie de las células tumorales, el complejo de ácido fólico-azul de metileno puede entrar más fácilmente en las células con la promoción por medio de ácido acético, y liberar el azul de metileno en estado de reducción. Además, en las células tumorales en estrés oxidativo, el azul de metileno se oxida rápidamente y así genera el cambio de color. Con diferente grado de malignidad del tumor, el azul de metileno se vuelve de color verde azulado obscuro, verde negruzco y negro púrpura, mientras que en presencia de lesión inflamatoria, excrecencia de coliflor (infección por el virus HPV) o lesión CIN I, el color del azul metileno es verde o verde azulado claro.

El "agente reductor de carbohidratos" en la invención se refiere a cualquier carbohidrato reductivo, derivados del mismo o combinaciones del mismo. El carbohidrato incluye, pero no está limitado a, un monosacárido, un disacárido o un polisacárido. Específicamente, el agente de reducción de carbohidratos puede ser glucosa, fructosa, galactosa, hexosa, lactosa, maltosa y similares. El "derivado de carbohidrato" descrito en la invención está definido como derivados como polisacáridos, glicoproteínas, ácidos orgánicos y similares formados por polimerización, esterificación, oxidación y similares de sustancias de carbohidratos. La cantidad de agente de reducción de carbohidratos en la composición y método de la invención es de 0.1-10 %, preferiblemente de 0.3-8 %, 0.1-3 % y 0.05-1 %.

El agente de reducción de carbohidratos en la composición y el método de la invención reducen el azul de metileno en el estado de oxidación a azul de metileno sin color en el estado de reducción. El ácido fólico y/o el complejo de ácido fólico se une al receptor de ácido fólico sobre la superficie de la célula tumoral. En un ambiente ácido de pH 5.0-5.5, el ácido fólico y/o complejo de ácido fólico media la internalización y liberación de azul de metileno en estado reductivo en el citosol. El azul de metileno en estado reductivo participa en el estrés oxidativo de los tejidos tumorales. El azul de metileno en estado reductivo se convierte en el estado oxidativo. Mientras tanto, la presión osmótica del fluido intracelular se incrementa, causando que el azul de metileno en estado oxidativo se escape de las células y que inmediatamente exhiba un cambio de color diferente. Dicho azul de metileno escapado se puede adherir al portador para la administración de la invención, causando así inmediatamente que la composición sobre el portador exhiba un cambio de color. Específicamente, la composición cambia de color pardo amarillento claro a verde azulado intenso, verde negruzco y negro púrpura. Mientras tanto, las células tumorales tienen núcleos agrandados y proteína nuclear incrementada, los cuales están precipitados y coagulados por medio de ácido acético para producir una respuesta transitoria, en la que el tejido epitelial anormal se muestra como una región de respuesta a acetoblanco, lo cual proporciona ubicación para el muestreo patológico del tejido epitelial anormal.

El término "ácido acético" usado en la invención es ácido etanoico. La composición de la invención comprende 2-6 % en peso de ácido acético. El ácido acético usado en la composición de la invención y el método de preparación del mismo proporciona un pH ácido, preferiblemente de 5.0-5.5. Adicionalmente, el uso de ácido acético ayuda a que la composición de la invención penetre rápidamente en la célula, interactuando así con el contenido de la célula para promover la ocurrencia del desarrollo de color. Además, como se mencionó anteriormente, después de que el azul de metileno, cuyo componente se usa para exhibir el cambio de color, escapa de la célula, la respuesta a acetoblanco generada por el ácido acético sobre el tejido epitelial anormal adicionalmente proporciona la base para la ubicación del tejido epitelial anormal.

Las células que se pueden teñir por medio de la composición de la invención son células tumorales, preferiblemente células tumorales epiteliales. Dichas células epiteliales incluyen, pero no están limitadas a, epitelio cervical, epitelio vaginal, epitelio gastrointestinal, epitelio oral y similares. Dichas células pueden venir de muestras de biopsia de tejido.

Las células de la invención se pueden derivar de sujetos mamíferos, dichos mamíferos incluyen, pero no están limitados a, humanos.

La invención se ilustra adicionalmente en los ejemplos y ejemplos comparativos más adelante. En los siguientes ejemplos y ejemplos comparativos, el tejido epitelial cervical se usa como el objeto para inspección, y los resultados de la inspección patológica de tejidos cervicales se usan como el estándar para referencia, la sensibilidad se usa para ilustrar la velocidad de detección del agente detector: mientras más alta es la sensibilidad, más fuerte es la habilidad para encontrar el tejido epitelial anormal; y la especificidad se usa para ilustrar la precisión del agente detector: mientras más alta es la especificidad, más alta es la coincidencia entre el tejido epitelial anormal detectado y los resultados de inspección patológica.

En la invención, la sensibilidad y la especificidad se definen y calculan de la siguiente manera: Sensibilidad = número de verdaderos positivos / (número de verdaderos positivos + número de falsos negativos) * 100 %, Especificidad = número de verdaderos negativos / (número de verdaderos negativos + número de falsos positivos) * 100 %, EJEMPLO 1 Bajo presión y temperatura normales, cada uno de los varios componentes como se especifican en el Cuadro 1 más adelante, se disolvieron individualmente en solvente acuoso, al cual se agregó el agente detector biológico azul de metileno, se agitó y disolvió, seguido por la adición del agente reductor glucosa y se agitó por 30 minutos, después se agregó ácido acético puro analítico, se agitó y se mezcló para hacer la composición de agente detector. La composición de agente detector se sumergió con un hisopo grande y se aplicó sobre un tejido epitelial cervical. El hisopo se sacó inmediatamente y el cambio de color del hisopo se observó inmediatamente. Si el color del hisopo era pardo amarillento, indicaba que no había lesión del tejido epitelial; si el color del hisopo era verde azulado claro, indicaba lesión inflamatoria, excrecencia de coliflor (infección por el virus HPV) o lesión CIN I; si el color del hisopo era verde azulado intenso, verde negruzco y negro púrpura, indicaba lesión anormal de CIN II o superior. Mientras tanto, se recomendó la colposcopía para tomar tejidos vivos de múltiples sitios para examen histopatológico, y después se probaron la sensibilidad y la especificidad del agente detector usando los resultados de la prueba histopatológica como el estándar. Los resultados de las pruebas se listan en el Cuadro 1.

EJEMPLO 2 Se repitió el método del Ejemplo 1 usando los varios componentes cuyas cantidades se especifican en el siguiente Cuadro 1 , excepto porque el complejo de ácido fólico de ?-cisteína de ácido fólico se usó en lugar de ácido fólico. Los resultados de las pruebas se listan en el Cuadro 1.

EJEMPLO 3 Se repitió el método del Ejemplo 1 usando los varios componentes cuyas cantidades se especifican en el siguiente Cuadro 1 , excepto porque el ácido fólico y el complejo de ácido fólico benzoato de (R)-2-(2-(R)-3,4-dihidroxi-5-carboni^ no-4-carbonil-3,4-dihidropteridina)metilamino) se co-disolvieron en el solvente acuoso. Los resultados de las pruebas se listan en el Cuadro 1.

EJEMPLO 4 Se repitió el método del Ejemplo 1 usando los varios componentes cuyas cantidades se especifican en el siguiente Cuadro 1 , excepto porque el ácido fólico y el complejo de ácido fólico benzoato de (R)-2-(2-(R)-3,4-dihidroxi-5-carbonil-2,5-dihidrofurano)-2-hidroxietil-4-(6-(2-ami no-4-carbon¡l-3,4-d¡hidropteridina)metilamino) se co-disolvieron en el solvente acuoso, y el agente reductor, un derivado de hexosa se usó en lugar del agente reductor glucosa. Los resultados de las pruebas se listan en el Cuadro 1.

EJEMPLO COMPARATIVO 1 Bajo temperatura y presión normales, se agregaron 5 mi de ácido acético en 95 mi de agua destilada para mezclar y formar una solución de ácido acético al 5 %. La solución se sumergió con un hisopo grande de algodón y se aplicó sobre un tejido epitelial cervical. Después de esperar un minuto, se observó la presencia o ausencia de la región de acetoblanco sobre el tejido epitelial cerca de la frontera de la columna escamosa del cervical, y se observaron su frontera, grosor, color y tiempo de respuesta. Si había una región de acetoblanco con frontera clara, indicaba lesión de CIN I o superior. Se condujo colposcopía para tomar tejidos vivos de múltiples sitios para examen histopatológico, y después se probaron la sensibilidad y la especificidad de la solución de ácido acético al 5 % usando los resultados de la prueba histopatológica como el estándar. Los resultados de las pruebas se listan en el Cuadro 1.

EJEMPLO COMPARATIVO 2 Bajo temperatura y presión normales, se disolvieron 10 g de yoduro de potasio en 100 mi de agua destilada, a la cual se le agregaron 5 g de yodo, se agitó y disolvió para hacer una solución de yoduro de Lugol. La solución se sumergió con un hisopo grande de algodón y se aplicó sobre el tejido epitelial cervical para observar si el tejido epitelial se teñía con yodo. El epitelio normal exhibió color pardo rojizo o negro, mientras que el epitelio anormal exhibió color amarillo mostaza intenso o pardo amarillento. Se condujo colposcopía para tomar tejidos vivos de múltiples sitios para examen histopatológico, y después se probaron la sensibilidad y la especificidad de la solución de yodo de Lugol usando los resultados de la prueba histopatológica como el estándar. Los resultados de las pruebas se listan en el Cuadro 1.

CUADRO 1 A partir del Cuadro 1 anteriormente mencionado se puede ver que los ejemplos que usan la composición de agente detector de la presente invención tienen ventajas significativas en sensibilidad y especificidad en comparación con los agentes detectores en los ejemplos comparativos, indicando que la composición de la invención se puede usar sensible y específicamente para detectar tejido epitelial anormal.

REFERENCIAS 1. Qiao Youlin, Zhang Wenhua, Zhao Fanghui, Pan Qinjing, Li Ling, "Screen, Early Diagnosis, and Early Treatment Solutions for Cervical Cáncer", July, 2003; 2. Mashberg, A:J. Amer. Dent. Assoc, 1983.106-112; 3. Canto MI, Setrakian S, Willis J, et al, Methylene blue-directed biopsies improve detection intestinal metaplasia and dysplasia in Barrett's esophagus [Jj.Gastrointest Endose, 2000,5:560; 4. Zhao XB, Lee RJ. Tumor-selective targeted delivery of genes and antisen seo ligo deoxyribonuc leo tides vía the folate receptor [J].Adv Drug Deliv Rev,2004,56(8):191-193; 5. Reddy JA, Allagadda Vm, Leamon CP. Targeting therapeutic and imaging agents to folate receptor positive tumors [J].Current Pham Biotech,2005,6,131-150; 6. Wu Chenheng, "Oxidative and Reductive States of Malignant Tumor Tissues: First Exploration of the Relation between Change of Antioxidation Capacity and Apoptosis and Mechanism Therefore", April 26, 2005; 7. Link EM, Blower PJ, Costa DC, et al, Early detection of melanoma metastases with radioiodinated methylene blue [J].Eur J Nuclear Med, 1998,25(9): 1322o 8. Leamon CP, Deprince RB, Hendren RW. Folate-mediated drug delivery: effect of alternative conjugation chemistry [J].Drug Target, 1999,7: 157-169. 9. Leamon CP, Cooper SR, Hardee GE. Folate-liposome-mediated antisense oligodeoxynucleotide targeting to cáncer cells: evaluation in vitro and vivo [J]. Bioconjug Chem, 2003,14:738-747.

Claims (11)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Una composición de agente detector que comprende los siguientes componentes por porcentaje en peso: ácido fólico 0-5 %, complejo de ácido fólico 0-10 %, azul de metileno 0.01-5 %, agente reductor de carbohidratos 0.1-10 %, ácido acético 2-6 % y agua 3-95 %

2. - La composición de agente detector de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la cantidad de ácido fólico es de 0-4.5 %, preferiblemente de 0-1 %.

3. - La composición de agente detector de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizada además porque la cantidad de complejo de ácido fólico es de 0-8 %, preferiblemente de 0-1 %.

4.- La composición de agente detector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada además porque la cantidad de azul de metileno es de 0.05-4.5 %, preferiblemente de 0.05-0.5 %.

5. - La composición de agente detector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada además porque el agente reductor de carbohidratos se selecciona de carbohidratos y derivados de los mismos.

6. - La composición de agente detector de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque el agente reductor de carbohidratos se selecciona de glucosa, fructosa, galactosa, hexosa, lactosa, maltosa y derivados de las mismas.

7. - La composición de agente detector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada además porque la cantidad de ácido acético es de 3-5 %.

8. - La composición de agente detector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada además porque la composición de agente detector es una composición de agente detector para células tumorales epiteliales.

9.- Un método para preparar la composición de agente detector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado en que el método comprende los siguientes pasos: (a) disolver ácido fólico y/o complejo de ácido fólico en un solvente acuoso, (b) agregar, agitar y disolver azul de metileno en la solución antes mencionada, (c) agregar un agente reductor de carbohidratos en la solución, (d) agitar la solución por 30 minutos, (e) agregar ácido acético para agitación, y los pasos antes mencionados se conducen bajo temperatura y presión normales.

10. - Un kit para detectar células tumorales epiteliales que comprende la composición de agente detector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, y opcionalmente un portador, preferiblemente el portador se selecciona de: hisopos de algodón absorbente, gasa, microcápsulas, membranas de celulosa, papel filtro, nanomateriales y aerogel.

11. - Un complejo de ácido fólico de las reivindicaciones 1 a 10, que es ácido fólico -?-cisteína, benzoato de (R)-2-(2-(R)-3,4-dihidroxi-5-carbon¡l-2,5-dihidrofurano)-2-hidroxiet¡l-4-(6-(2-am¡ no-4-carbonil-3,4-dihidropteridina)metilamino).