MX2013014240A - Compuesto de 1,1-dioxido de [1,2,4]tiadiazina para reducir acido urico en suero. - Google Patents

Abstract

La presente invención describe compuestos de 1,1-dióxido de [1,2,4]tiadiazina y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, que son útiles en la reducción de ácido úrico en suero en un paciente en necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de un compuesto de 1,1-dióxido de [1,2,4] tiadiazina.

Description

COMPUESTOS DE 1,1-DIOXIDO DE [1,2,4] TIADIAZINA PARA REDUCIR ACIDO URICO EN SUERO Campo de la invención La invención proporciona compuestos de 1,1-dióxido de [1 , 2 , 4] tiadiazina y composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos, útiles para la reducción de ácido úrico en suero y tratar o prevenir enfermedades tales como hiperuricemia, gota, enfermedad de inflamación, urolitiasis urinaria, enfermedad por reperfusión, disfunción renal, síndrome de lisis tumoral, hipertensión y enfermedad cardiovascular .

Antecedentes de la invención Un aumento anormal en el nivel de ácido úrico en la sangre, en este caso, hiperuricemia, es un trastorno que tiene estrecha relación con la gota, disfunción renal, urolitiasis, etc. (Diagnosis and Treatment, 220-224, 244-248 (2002) ) . Se sabe que, en el trasplante de órganos (Ren. Fail., 361-7 (2002)) o quimioterapia para cáncer (Am. J. Health Syst . Pharm., 2213-22 (2003)), los niveles de ácido úrico en suero aumentan significativamente, provocando de este modo disfunción renal, o en el caso de quimioterapia, los niveles de ácido úrico en suero aumentan significativamente debido a la cantidad rápida de destrucción celular (síndrome de lisis tumoral) .

Ref.: 245456 La hiperuricemia es una condición o trastorno que precede a la gota, lo que resulta del aumento de producción incrementada o excreción disminuida de ácido úrico, o de una combinación de los dos procesos. En un individuo con hiperuricemia, plasma y fluidos extracelulares son sobresaturados con urato, y la deposición de cristales en los tejidos es probable que ocurra, lo que resulta en las manifestaciones clínicas de la gota. Cuando se forman cristales en las articulaciones causan ataques recurrentes de inflamación articular. La gota crónica también puede conducir a depósitos de protuberancias duras de ácido úrico en y alrededor de las articulaciones y puede causar destrucción de las articulaciones y disminución de la función renal.

Un agente para tratar hiperuricemia puede ser más o menos clasificado en un agente uricosúrico o un inhibidor de la síntesis de ácido úrico. El agente uricosúrico puede ser ineficaz para los casos cuya función renal ha disminuido, por lo que el alopurinol, un inhibidor de la síntesis de ácido úrico, se utiliza de manera apropiada para pacientes que tienen una función renal disminuida.

La xantina oxidasa es una enzima que controla la biosíntesis de ácido úrico, y el uso de un inhibidor de xantina oxidasa para inhibir esta enzima es un tratamiento eficaz de hiperuricemia y diversas enfermedades causadas de este modo, como un inhibidor de la síntesis de ácido úrico.

El alopurinol es el único inhibidor de xantina oxidasa que se ha puesto en uso práctico en la actualidad para el tratamiento clínico, a pesar de que se sabe que induce efectos secundarios indeseables.

Sumarlo de la invención La presente invención describe compuestos de 1,1-dióxido de [1 , 2 , 4] tiadiazina y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, que son útiles en la reducción de ácido úrico en suero en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de 1,1-dióxido de [1 , 2 , 4] tiadiazina .

En un aspecto general, la invención se refiere a un método para la reducción de ácido úrico en suero en un paciente con un compuesto de la Fórmula I en donde el Anillo B es A es o Z es - (CR^R12)^, Y es - (CR13R14)m- , n es 1 o 2, m es 2 o 3, R1 es H, -NH2, o - (CH2) q-NH-S (O) 2CH3, en donde q es 0 o 1, R2 es alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C6, arilo o - (CH2) -R15 , en donde R15 es en donde R16, R17, R18, R19 y R20 son independientemente H, alquilo Ci-C6, hidroxi, o halo, R3, R4, R5, R6 , R7, R8, R9 , R10 , R11, R12 , R13, y R14 son independientemente H o alquilo Ci-Cg, en donde cada alquilo, cicloalquilo, o arilo están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes alquilo, hidroxilo, o halo, o una sal, hidrato, solvato, tautómero o estereoisómero farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar compuestos de la Fórmula I en la que el anillo B es En una modalidad, la invención se refiere a un método utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que q es 1 y anillo B es En una modalidad, la invención se refiere a un método utilizar compuestos de la Fórmula I en la que R1 es H.

En una modalidad, la invención se refiere a un método utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que R2 es (CH2) -R15 y R15 se selecciona de En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que q es 0.

En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que n es 1.

En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que q es 0 y n es 1.

En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar los compuestos de la Fórmula I en donde R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, y R14 son H.

En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que R16, R17, R18, R19, y R20 son independientemente H, metilo, o halo.

En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que R1S, R17, R18, R19, y R20 son independientemente H o halo.

En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que R18 es fluoro y R16, R17, R19, y R20 son H.

En una modalidad, la invención se refiere a un método de utilizar los compuestos de la Fórmula I en la que q es 0 y n es 1, R3, R4, R5, R6 , R7, R8, R9, R10 , R11 , R12 , R13 , y R14 son H, y R16, R17, R18, R19 y R20 son independientemente H o halo. En otra modalidad, la invención se refiere a compuestos seleccionados de N- {3- [ (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo[6.2.1.02'7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-ilmetil} -metanosul fonamida , N- { 3 - [ ( IR, 23 , 7R, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) - 6 -hidroxi -4 -oxo- 3 -aza-triciclo [6.2.1. O2"7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida , (IR, 2S, 7R, 8S) -5- ( 1 , 1-dioxo- 1 , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1, 2,4] tiadiazin-3 - il ) -3- (4 - fluoro-bencil ) -6-hidroxi-3-aza-triciclo[6.2.1.02"7] undec-5-en-4-ona, (4aR, 7aS) -N- {3- [1- (4-fluoro-bencil) -4 -hidroxi-2 -oxo-2 , 4a, 5,6,7, 7a-hexahidro-lH- [1] iridin-3 - il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida, N- [3- (1R,2S,7R,8S) -3 -ciclopentil-6 -hidroxi -4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec-5-en-5-il) -1 , 1-dioxo-l , -dihidro-lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il] -metanosulfonamida , (IR, 2S, 7R, 8S) -5- (7-amino-l, 1-dioxo-1 , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3- (4 - fluoro-bencil ) -6 -hidroxi -3-aza-triciclo [6.2.1. O2"7] undec-5-en-4-ona, N- [3- (1S, 2R, 7S, 8R) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6 -hidroxi-4 -oxo- 3-aza-triciclo[6.2.1.02 7] undec-5-en-5-il) -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida , (IR, 2S, 7R, 8S) -N- {3- [3- (4 -fluoro-bencil ) -6 -hidroxi -4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-tieno [2 , 3-e] [1 , 2 , 4 ] tiadiazin-7 -ilmetil } -metanosulfonamida , N- { 3 - [ ( S , 7R) -3- (4-fluoro-bencil) -6 -hidroxi -4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 7] dodec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l , 4-dihidro-lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7 -il } -metanosulfonamida, N- [3- (1S, 2S, 7R, 8R) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6 -hidroxi-4 -oxo- 3-aza-triciclo[6.2.1.02'7] undec-5-en-5-il) -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida, y N-[3-(lR,2R,7S,8S)-3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il) -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7 - il } -metanosulfonamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En un aspecto, la invención abarca un método para el tratamiento o prevención de hiperuricemia, gota, enfermedad de inflamación, urolitiasis urinaria, una enfermedad por reperfusión, disfunción renal, síndrome de lisis tumoral, hipertensión, o enfermedad cardiovascular, en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula I y un excipiente, portador, o vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención abarca un método para reducir ácido úrico en suero en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula I y un excipiente, portador, o vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención abarca un método para tratar o prevenir una enfermedad asociada con una anormalidad del nivel de ácido úrico en plasma seleccionado de nefropatía hiperuricémica y nefropatía aguda por ácido úrico.

En otro aspecto, la invención abarca un método para tratar o prevenir hiperuricemia, gota, enfermedad de inflamación, urolitiasis urinaria, una enfermedad por reperfusión, disfunción renal, síndrome de lisis tumoral, hipertensión, o enfermedad cardiovascular en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula I y un agente terapéutico adicional.

Descripción detallada de la invención Cuando se utilizan los siguientes términos en esta especificación, se usan como se define a continuación: Los términos "que comprende", "que tiene" y "que incluye" se usan en este documento en su sentido abierto, no limitante .

El término "Me" significa metilo, "Et" significa etilo, y "Ac" significa acetilo.

El término "alquilo" , como se usa en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, incluye 1-6 radicales de hidrocarburo monovalentes saturados que tienen restos lineales o ramificados.

El término "cicloalquilo" , como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario se refiere a un hidrocarburo no aromático, saturado o parcialmente saturado, monocíclico o fusionado, bicíclico o tricíclico espiro o no fusionado referido en el presente documento que contiene un total desde 3 hasta 10 átomos de carbono, preferiblemente 5-8 átomos de carbono en el anillo. Cicloalquilos ejemplares incluyen anillos monocíclicos que tienen desde 3-7, preferiblemente 3-6, átomos de carbono, tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y similares. Ejemplos ilustrativos de cicloalquilo son derivados de, pero no se limitan a, los siguientes: El término "arilo" , como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, incluye un radical orgánico derivado de un hidrocarburo aromático por eliminación de un hidrógeno, y tiene desde 6-14 átomos de carbono en su sistema de anillo, tal como fenilo o naftilo.

El término "prevención" se refiere a la capacidad de un compuesto o composición de la invención de prevenir una enfermedad identificada en el presente documento en pacientes diagnosticados que tienen la enfermedad o que están en riesgo de desarrollar la enfermedad. El término también abarca la prevención de la progresión adicional de la enfermedad en pacientes que ya sufren o tienen síntomas de la enfermedad.

El término "paciente" o "sujeto" significa un animal (por ejemplo, vaca, caballo, oveja, cerdo, pollo, pavo, codorniz, gato, perro, ratón, rata, conejo, cobaya, etc.) o un mamífero, incluyendo animales y mamíferos quiméricos y transgénicos . En el tratamiento o prevención de, por ejemplo, gota o hiperuricemia, el término "paciente" o "sujeto" significa preferiblemente un mono, chimpancé o un humano, más preferiblemente un humano.

El término una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad del compuesto de la invención suficiente para proporcionar un beneficio en el tratamiento o prevención de, por ejemplo, gota o hiperuricemia, para retrasar o minimizar los síntomas asociados con la prevención de gota o hiperuricemia, o para curar o mejorar la enfermedad o infección o causar los mismos. En particular, una cantidad terapéuticamente eficaz significa una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico in vivo. Usado en relación con una cantidad de un compuesto de la invención, el término abarca preferiblemente una cantidad no tóxica que mejora la terapia global, reduce o evita síntomas o causas de la enfermedad, o aumenta la eficacia terapéutica de o sinergias con otro agente terapéutico.

El término "gota" se refiere a un grupo de trastornos que incluyen artritis inflamatoria, deposición de cristales de urato en articulaciones, deposición de cristales de urato en el parénquima renal, urolitiasis, y nefrolitiasis .

El término "en combinación" se refiere al uso de más de un agente profiláctico y/o terapéutico simultáneamente o secuencialmente y de una manera que sus respectivos efectos son aditivos o sinérgicos.

El término "tratamiento" se refiere a: (i) prevenir una enfermedad, trastorno, o afección en un animal que puede estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o afección, pero que aún no se ha diagnosticado que la tiene; (ü) inhibir la enfermedad, trastorno, o afección, en este caso, detener su desarrollo; y (iii) aliviar la enfermedad, trastorno, o afección, en este caso, provocar la regresión de la enfermedad, trastorno, y/o afección.

Los términos "R" y "S" indican la configuración estereoquímica específica de un sustituyente en un átomo de carbono asimétrico en una estructura química como es resumido .

El término "rae" indica que un compuesto es un racemato, que se define como una mezcla equimolar de un par de enantiómeros . Un compuesto "rae" no presenta actividad óptica. El nombre químico o fórmula de un racemato se distingue de los enantiómeros por el prefijo (±) - o rae- (o racem-) o por los símbolos RS y SR.

Los términos "endo" y "exo" son descriptores de la orientación relativa de los sustituyentes unidos a átomos que no son cabeza de puente en un biciclo [x, y, z] alcano (x>y>z>0) .

Los términos "syn" y "anti" son descriptores de la orientación relativa de los sustituyentes unidos a los átomos cabeza de puente en un biciclo [x, y, z] alcano (x>y>z>0) .

El término exo se le da a un sustituyente (por ejemplo, Br unido a C-2 en el ejemplo a continuación) que es orientado hacia el puente numerado más alto (puente z, por ejemplo, C-7 en el ejemplo a continuación) , y si el sustituyente está orientado lejos del puente numerado más alto se da la descripción "endo" .

El término "syn" se da a un sustituyente unido al puente numerado más alto (puente z, por ejemplo, F unido a C-7 en el ejemplo a continuación) y está orientado hacia el puente numerado más bajo (puente x, por ejemplo, C-2 y C-3 en el ejemplo a con inuación) , si el sustituyente está orientado lejos del puente numerado más bajo se da la descripción "anti". exo-bromo-7-syn-fluoro-biciclo [2.2.1] heptano 2 -endo-bromo-7-anti - fluoro-biciclo [2.2.1] heptano Los términos "cis" y "trans" son descriptores que muestran la relación entre dos ligandos unidos a átomos separados que están conectados por un doble enlace o están contenidos en un anillo. Los dos ligandos se dice que se encuentran ubicados en cis entre sí si se encuentran en el mismo lado de un plano. Si están en lados opuestos, su posición relativa se describe como trans. El plano de referencia apropiado de un doble enlace es perpendicular al de los enlaces-s pertinentes y pasa a través del doble enlace. Para un anillo este es el plano medio del anillo.

Los compuestos utilizados en los métodos de la invención pueden exhibir el fenómeno de tautomerismo . Aunque la Fórmula I no puede representar expresamente todas las posibles formas tautoméricas , debe entenderse que la Fórmula I pretende representar cualquier forma tautomérica del compuesto representado y no se limita simplemente a una forma de compuesto específico representado por los dibujos de la fórmula .

Algunos de los compuestos pueden existir como estereoisómeros individuales (en este caso, esencialmente libre de otros estereoisómeros) , racematos, y/o mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros . Todos estos estereoisómeros individuales, racematos y mezclas de los mismos se pretende que estén dentro del alcance de la presente invención. Preferiblemente, los compuestos que son ópticamente activos se usan en forma ópticamente pura.

Como es entendido generalmente por las personas experimentadas en la técnica, un compuesto ópticamente puro que tiene un centro quiral (en este caso, un átomo de carbono asimétrico) es uno que consiste esencialmente de uno de los dos enantiómeros posibles (en este caso, es enantioméricamente puro) , y un compuesto ópticamente puro que tiene más de un centro quiral es uno que es tanto diastereoisoméricamente puro como enantioméricamente puro. Preferiblemente, los compuestos utilizados en los métodos de la presente invención se usan en una forma que está por lo menos 90% libre de otros enantiómeros o diastereómeros de los compuestos, es decir, una forma que contiene por lo menos 90% de un isómero individual (80 % de exceso enantiomérico ("e.e.") o exceso diastereomérico ("d.e.")), más preferiblemente por lo menos 95% (90% de e.e. o d.e.), incluso más preferiblemente por lo menos 97.5% (95% de e.e. o d.e.), y lo más preferiblemente por lo menos 99% (98% de e.e. o d.e.).

Además, la Fórmula I está prevista para cubrir formas solvatadas así como no solvatadas de las estructuras identificadas. Por ejemplo, la fórmula I incluye compuestos de la estructura indicada tanto en formas hidratadas y no hidratadas. Otros ejemplos de solvatos incluyen las estructuras en combinación con isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, acetato de pentilo, ácido acético, o etanolamina .

Además de los compuestos de la Fórmula I, la invención incluye profármacos farmacéuticamente aceptables, metabolitos farmacéuticamente activos, y sales farmacéuticamente aceptables de tales compuestos y metabolitos.

"Un profármaco farmacéuticamente aceptable" es un compuesto que puede ser convertido bajo condiciones fisiológicas o mediante solvolisis en el compuesto especificado o a una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto antes de exhibir su efecto farmacológico. Típicamente, el profármaco es formulado con el objetivo de estabilidad química mejorada, aceptación y el cumplimiento del paciente mejorados, biodisponibilidad mejorada, duración de acción prolongada, selectividad de órganos mejorada, formulación mejorada (por ejemplo, aumento de la solubilidad en agua) , y/o disminución de los efectos secundarios (por ejemplo, toxicidad). El profármaco se puede preparar fácilmente de los compuestos de la Fórmula I utilizando métodos conocidos en el arte previo, tales como los descritos por Medicinal Burger's Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, 1, 172-178, 949-982 (1995) . Ver también Bertolini et al., J. Med. Chem. , 40, 2011-2016 (1997) ; Shan, et al, J. Pharm. Sci . , 86 (7) , 765-767; Bagshawe, Drug Dev. Res., 34, 220-230 (1995) ; . Bodor, Advances in Drug Res., 13, 224-331 (1984) ; Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985) ; Larsen, Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al, eds, Harwood Academic Publishers, 1991) ; . Dear et al, J. Chromatogr. B, 748, 281-293 (2000) ; Spraul et al, J. Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 10, 601-605 (1992) , y Prox et al., Xenobiol, 3, 103-112 (1992).

"Un metabolito farmacéuticamente activo" está previsto que signifique un producto farmacológicamente activo producido a través del metabolismo en el cuerpo de un compuesto o sal del mismo especificado. Después de entrar en el cuerpo, la mayoría de los fármacos son substratos para reacciones químicas que pueden cambiar sus propiedades físicas y efectos biológicos. Estas conversiones metabólicas, que normalmente afectan a la polaridad de los compuestos de la Fórmula I, alteran la forma en que los fármacos se distribuyen y se excretan del cuerpo. Sin embargo, en algunos casos, se requiere el metabolismo de un fármaco para el efecto terapéutico. Por ejemplo, medicamentos contra el cáncer de la clase ant i-metabolito deben convertirse a sus formas activas después de que hayan sido transportados en una célula cancerosa.

Puesto que la mayoría de los fármacos sufren una transformación metabólica de algún tipo, las reacciones bioquímicas que juegan un papel en el metabolismo de fármacos pueden ser numerosas y diversas. El sitio principal de metabolismo del fármaco es el hígado, aunque otros tejidos también pueden participar.

Un rasgo característico de muchas de estas transformaciones es que los productos metabólicos, o "metabolitos" , son más polares que los fármacos originales, aunque un fármaco polar algunas veces no produjo un producto menos polar. Las sustancias con un alto coeficiente de partición lípido/agua, que pasan fácilmente a través de las membranas, también se difunden fácilmente de la orina tubular a través de las células tubulares renales en el plasma. Por lo tanto, tales sustancias tienden a tener un bajo aclaramiento renal y una larga persistencia en el cuerpo. Si un fármaco es metabolizado a un compuesto más polar, uno con un coeficiente de partición inferior, su reabsorción tubular se reducirá en gran medida. Por otra parte, los mecanismos secretores específicos para aniones y cationes en los túbulos renales proximales y en las células hepáticas parenquimales operan sobre sustancias altamente polares.

Como un ejemplo específico, la fenacetina (acetofenetidina) y la acetanilida son ambos analgésicos suaves y agentes antipiréticos, pero son transformados dentro del cuerpo a un metabolito más polar y más eficaz, p-hidroxiacetanilida (acetaminofeno) , que se utiliza ampliamente hoy en día. Cuando se administra una dosis de acetanilida a una persona, el pico metabolitos sucesivos decae en el plasma secuencialmente . Durante la primera hora, la acetanilida es el componente principal de plasma. En la segunda hora, puesto que el nivel de acetanilida se cae, la concentración de acetaminofen metabolito alcanza un pico.

Finalmente, después de unas pocas horas, el componente de plasma principal es un metabolito adicional que es inerte y puede ser excretado del cuerpo. Por lo tanto, las concentraciones en plasma de uno o más metabolitos, así como del propio fármaco, pueden ser farmacológicamente importantes .

"Una sal farmacéuticamente aceptable" está previsto que signifique una sal que retiene la eficacia biológica de los ácidos y bases de libres del compuesto especificado y que no es biológicamente o de lo contrario indeseable. Un compuesto utilizado en los métodos de la invención puede poseer un grupo suficientemente ácido, suficientemente básico, o ambos grupos funcionales, y por lo tanto reaccionan con cualquiera de un número de bases inorgánicas u orgánicas, y ácidos inorgánicos y orgánicos, para formar una sal farmacéuticamente aceptable. Sales farmacéuticamente aceptables ejemplares incluyen aquellas sales preparadas por reacción de los compuestos de la presente invención con un ácido mineral u orgánico o una base inorgánica, tales como sales que incluyen sulfatos, pirosulfatos , bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrogenofosfatos , dihidrogenofosfatos , metafosfatos , pirofosfatos , cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos , caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butino-1,4-dioatos, hexino-1, 6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos , metilbenzoatos , dinitrobenzoatos , hidroxibenzoatos , metoxibenzoatos , ftalatos, sulfonatos, xilenosulfonatos , fenilacetatos , fenilpropionatos , fenilbutiratos , citratos, lactatos, ?-hidroxibutiratos, glicolatos, tartratos, metano-sulfonatos, propanosulfonatos , naftaleno-l-sulfonatos , naftaleno-2 -sulfonatos , y mandelatos.

Si el compuesto es una base, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse por cualquier método apropiado disponible en la técnica, por ejemplo, tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico, tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares, o con un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, un ácido piranosidílico, tal como ácido glucurónico o ácido galacturónico, un ácido a-hidroxi, tal como ácido cítrico o ácido tartárico, un aminoácido, tal como ácido aspártico o ácido glutámico, un ácido aromático, tal como ácido benzoico o ácido cinámico, un ácido sulfónico, tal como ácido p-toluenosulfónico o ácido etanosulfónico, o similares .

Si el compuesto es un ácido, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse por cualquier método apropiado, por ejemplo, tratamiento del ácido libre con una base inorgánica u orgánica, tal como una amina (primaria, secundaria o terciaria) , un hidróxido de metal alcalino o hidróxido de metal alcalinotérreo, o similares. Los ejemplos ilustrativos de sales apropiadas incluyen sales orgánicas derivadas de los aminoácidos, tales como glicina y arginina, amoníaco, aminas primarias, secundarias, y terciarias, y aminas cíclicas, tales como piperidina, morfolina y piperazina, y sales inorgánicas derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y litio.

En el caso de agentes que son sólidos, es entendido por las personas experimentadas en la técnica que los compuestos y sales pueden existir en diferentes formas de cristal, co-cristal, o polimórficas , todas las cuales están previstas a estar dentro del alcance de la presente invención y las fórmulas especificadas.

MÉTODOS DE TRATAMIENTO Y PREVENCIÓN DE HIPERURICEMIA, ETC.

La presente invención proporciona métodos para reducir ácido úrico en suero y tratar o prevenir hiperuricemia, gota, enfermedad por inflamación, urolitiasis urinaria, una enfermedad por reperfusión, disfunción renal, síndrome de lisis tumoral, hipertensión, o enfermedad cardiovascular en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula I y un excipiente, portador, o vehículo farmacéuticamente aceptable.

La magnitud de una dosis profiláctica o terapéutica de un compuesto de la Fórmula I de la invención o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de los mismos en el tratamiento agudo o crónico o prevención de los niveles elevados de ácido úrico variará. La dosis, y en algunos casos la frecuencia de la dosis, también variará de acuerdo con la enfermedad o afección a tratar, la edad, el peso corporal, y la respuesta del paciente individual. Regímenes de dosificación apropiados se pueden seleccionar fácilmente por las personas experimentadas en la técnica con la debida consideración de tales factores.

Dosis La toxicidad y eficacia de los compuestos utilizados en los métodos de la invención pueden ser determinados mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) y ED50 (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50% de la población) . La proporción de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la proporción LD5o/ED5o.

Los datos obtenidos de los ensayos de cultivo celular y estudios en animales pueden usarse para formular un intervalo de dosificación de los compuestos para su uso en seres humanos. La dosificación de los compuestos se encuentra preferiblemente dentro de un intervalo de concentraciones de circulación que incluye ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. Para cualquier compuesto usado en el método de la invención, la dosis terapéuticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Una dosis puede formularse en modelos animales para conseguir un intervalo de concentración de plasma de circulación que incluye CE50 (en este caso, la concentración del compuesto de prueba que provoca una respuesta a medias entre la línea base y la respuesta máxima) como es determinado en cultivo celular; alternativamente, la dosis del compuesto de la Fórmula I puede formularse en modelos animales para conseguir un intervalo de concentración de plasma de circulación del compuesto que corresponde a la concentración requerida para lograr una magnitud de respuesta fija. Tal información se puede utilizar para determinar con mayor precisión las dosis útiles en seres humanos. Los niveles en plasma se pueden medir, por ejemplo, por cromatografía líquida de alto rendimiento.

Los protocolos y composiciones utilizadas en los métodos de la invención son probados preferiblemente in vitro, y después in vivo, para la actividad terapéutica o profiláctica deseada, antes de su uso en seres humanos. Por ejemplo, ensayos in vitro que pueden ser utilizados para determinar si la administración de un protocolo terapéutico específico está indicada, incluyen ensayos de cultivo celular in vitro en los que las células que son sensibles a los efectos de los compuestos de la Fórmula I se exponen al ligando y la magnitud de respuesta se mide mediante una técnica apropiada. La valoración del compuesto de la Fórmula I es evaluada después con respecto a la potencia del compuesto de la Fórmula I, y el grado de conversión del profármaco del compuesto de la Fórmula I, en los casos en donde el compuesto a ser probado es un profármaco. Los compuestos para uso en los métodos de la invención pueden ser probados en sistemas de modelos animales apropiados antes de ensayos en seres humanos, incluyendo pero no limitado a, ratas, ratones, pollos, vacas, monos, chimpancés, conejos, hámsters, etc. Los compuestos pueden después ser utilizados en los ensayos clínicos apropiados.

Los regímenes de dosificación apropiados se pueden seleccionar fácilmente por las personas experimentadas en la técnica con la debida consideración de tales factores. En una modalidad, la dosis administrada depende del compuesto específico a ser utilizado, y el peso y la condición del paciente. Además, la dosis puede diferir para diversos compuestos particulares de la Fórmula I; las dosis apropiadas pueden ser pronosticadas sobre la base de las mediciones in vitro mencionadas anteriormente y sobre la base de los estudios en animales, de tal manera que dosis más pequeñas serán apropiadas para los compuestos de la Fórmula I que muestran eficacia a concentraciones menores que otros compuestos de la Fórmula I, cuando se mide en los sistemas descritos o referidos en este documento. En general, la dosis por día está en el intervalo desde aproximadamente 0.001 hasta 100 mg/kg, preferiblemente aproximadamente 1 hasta 25 mg/kg, más preferiblemente aproximadamente 5 hasta 15 mg/kg.

Además, la dosis diaria recomendada puede administrarse en ciclos como agentes individuales o en combinación con otros agentes terapéuticos. En una modalidad, la dosis diaria es administrada en una sola dosis o en dosis divididas igualmente. En una modalidad relacionada, la dosis diaria recomendada puede administrarse una vez por semana, dos veces por semana, tres veces por semana, cuatro veces por semana o cinco veces por semana.

En una modalidad, los compuestos utilizados en los métodos de la invención se administran para proporcionar la distribución sistémica del compuesto dentro del paciente. En una modalidad relacionada, los compuestos de la invención se administran para producir un efecto sistémico en el cuerpo.

En otra modalidad, los compuestos utilizados en los métodos de la invención se administran por vía oral, mucosa (incluyendo sublingual o bucal) , parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, inyección de bolo, intraarterial , o intravenosa), transdérmica, o administración tópica. En una modalidad específica los compuestos de la invención se administran a través de la mucosa (incluyendo sublingual o bucal), parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, inyección de bolo, intraarterial, o intravenosa), administración transdérmica o tópica. En otra modalidad específica, los compuestos de la invención se administran a través de administración oral. En otra modalidad específica, los compuestos de la invención no se administran a través de administración oral.

Terapia de combinación Los métodos específicos de la invención además comprenden la administración de un agente terapéutico adicional (en este caso, un agente terapéutico distinto de un compuesto de la invención) . En ciertas modalidades de la presente invención, los compuestos de la invención se pueden usar en combinación con por lo menos otro agente terapéutico.

Los agentes terapéuticos incluyen, pero no se limitan a colchicinas, agentes anti-inflamatorios, glucocorticoides intraarticulares , antagonistas IL-lb (por ejemplo, rilonacept, canakumab) , inhibidores de la producción de ácido úrico, como los inhibidores de xantina oxidasa o profármacos de tales inhibidores como febuxostat, oxipurinol, alopurinol, agentes que degradan el ácido úrico como pegloticasa y otros agentes de uricasas y uricosúricos como probenecida y sulfinpirazona . Los compuestos de la invención y otros agentes terapéuticos pueden actuar aditivamente o, más preferiblemente, sinérgicamente . En una modalidad, una composición que comprende un compuesto de la invención se administra simultáneamente con la administración de otro agente terapéutico, que puede ser parte de la misma composición o en una composición diferente de la que comprende los compuestos de la invención. En otra modalidad, un compuesto de la invención se administra antes o después de la administración de otro agente terapéutico. En una modalidad separada, un compuesto de la invención se administra a un paciente que no ha sufrido previamente o no se encuentra actualmente en tratamiento con otro agente terapéutico.

En una modalidad, los métodos de la invención comprenden la administración de uno o más compuestos de la invención sin un agente terapéutico adicional .

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y FORMAS DE DOSIFICACIÓN Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación unitaria individuales que comprenden un compuesto utilizado en los métodos de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, o hidrato del mismo, también están abarcados por la invención. Formas de dosificación individuales de la invención pueden ser apropiadas para administración oral, mucosa (incluyendo sublingual o bucal), parenteral (incluyendo administración subcutánea, intramuscular, inyección de bolo, intraarterial , o intravenosa), transdérmica, o administración tópica. Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación de la invención típicamente comprenden también uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Formas de dosificación estériles también se contemplan.

En una modalidad alternativa, la composición farmacéutica abarcada por esta modalidad incluye un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, o hidrato del mismo, y por lo menos un agente terapéutico adicional. Ejemplos de agentes terapéuticos adicionales incluyen, pero no se limitan a, los enumerados anteriormente.

La composición, forma, y tipo de formas de dosificación de la invención típicamente variarán dependiendo de su uso. Por ejemplo, comprende una forma de dosificación usada en el tratamiento agudo de una enfermedad o una enfermedad relacionada puede contener mayores cantidades de uno o más de los ingredientes activos que una forma de dosificación usada en el tratamiento crónico de la misma enfermedad. Del mismo modo, una forma de dosificación parenteral puede contener cantidades más pequeñas de uno o más de los ingredientes activos que una forma de dosificación oral usada para tratar la misma enfermedad o trastorno. Estas y otras maneras en las que las formas de dosificación específicas abarcadas por esta invención variarán de una a otra, serán fácilmente evidentes para las personas experimentadas en la técnica. Ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. , Mack Publishing, Easton PA (1990) . Ejemplos de formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a: tabletas; comprimidos; cápsulas, tales como cápsulas de gelatina blanda elásticas; sellos; pildoras; pastillas; dispersiones; ungüentos; cataplasmas (emplastos) ; pastas; polvos; apositos; cremas; emplastos; soluciones; parches; geles; formas de dosificación líquidas apropiadas para la administración oral o mucosal a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo, suspensiones acuosas o líquidas no acuosas, emulsiones de aceite en agua, o una emulsión agua en aceite de emulsiones líquidas) , soluciones y elixires; formas de dosificación líquidas apropiadas para administración parenteral a un paciente, y sólidos estériles (por ejemplo, sólidos cristalinos o amorfos) que pueden ser reconstituidos para proporcionar formas de dosificación líquidas apropiadas para administración parenteral a un paciente.

Las composiciones farmacéuticas típicas y las formas de dosificación comprenden uno o más portadores, excipientes o diluyentes. Excipientes apropiados son bien conocidos por las personas experimentadas en la técnica de farmacia, y ejemplos no limitantes de excipientes apropiados se proporcionan en el presente documento. Si un excipiente particular es apropiado para su incorporación en una composición farmacéutica o forma de dosificación depende de una variedad de factores bien conocidos en la técnica, incluyendo, pero no limitado a, la manera en que la forma de dosificación se administrará a un paciente. Por ejemplo, formas de dosificación oral tales como tabletas pueden contener excipientes no apropiados para uso en formas de dosificación parenterales . La conveniencia de un excipiente particular también puede depender de los ingredientes activos específicos en la forma de dosificación.

Esta invención abarca además composiciones farmacéuticas anhidras y formas de dosificación que comprenden ingredientes activos, ya que el agua puede facilitar la degradación de algunos compuestos. Por ejemplo, la adición de agua (por ejemplo, 5%) es ampliamente aceptada en las técnicas farmacéuticas como medio de simular el almacenamiento a largo plazo con el fin de determinar características tales como la vida útil o la estabilidad de las formulaciones con el tiempo. Ver, por ejemplo, Carstensen, Drug Stability: Principies & Practice, 2d. Ed. , Marcel Dekker, NY, NY, 1995, pp 379-80. En efecto, el agua y el calor aceleran la descomposición de algunos compuestos. Por lo tanto, el efecto del agua sobre una formulación puede ser de gran importancia puesto que la humedad se encuentra comúnmente durante la fabricación, manejo, empaque, almacenamiento, envío, y uso de formulaciones .

Las composiciones farmacéuticas anhidras y formas de dosificación de la invención se pueden preparar usando ingredientes anhidros o que contienen baja humedad y condiciones de baja humedad.

Una composición farmacéutica anhidra debe ser preparada y almacenada de manera que se mantiene su naturaleza anhidra. Por lo tanto, las composiciones anhidras se envasan preferiblemente usando materiales conocidos para prevenir la exposición al agua de tal manera que pueden ser incluidas en kits de formulación apropiados. Ejemplos de empaque apropiados incluyen, pero no se limitan a, láminas herméticamente selladas, plásticos, recipientes de dosis unitarias (por ejemplo, viales) , envases de blíster, y envases de tiras.

La invención abarca además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden uno o más compuestos que reducen la velocidad a la que un ingrediente activo se descompondrá. Tales compuestos, que se denominan en la presente descripción como "estabilizadores", incluyen, pero no se limitan a, antioxidantes tales como ácido ascórbico, soluciones amortiguadoras de pH, o soluciones amortiguadoras de sales.

Al igual que las cantidades y tipos de excipientes, las cantidades y tipos específicos de ingredientes activos en una forma de dosificación pueden diferir dependiendo de factores tales como, pero no limitados a, la ruta por la que se va a administrar a los pacientes. Sin embargo, las formas de dosificación típicas de la invención comprenden compuestos de la invención, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable de los mismos comprenden 0.1 mg a 1500 mg por unidad para proporcionar dosis de aproximadamente 0.01 hasta 200 mg/kg por día.

Formas de dosificación oral Las composiciones farmacéuticas utilizadas en los métodos de la invención que son apropiadas para administración oral pueden presentarse como formas de dosificación discretas, tales como, pero no limitadas a, tabletas (por ejemplo, tabletas masticables) , comprimidos, cápsulas y líquidos (por ejemplo, jarabes saborizados) . Tales formas de dosificación contienen cantidades predeterminadas de ingredientes activos, y se pueden preparar por métodos de farmacia bien conocidos por las personas experimentadas en la técnica. Ver, generalmente, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. , Mack Publishing, Easton PA (1990).

Las formas de dosificación orales típicas de la invención se preparan combinando el ingrediente activo en una mezcla íntima con por lo menos un excipiente de acuerdo con técnicas de composición farmacéutica convencionales. Los excipientes pueden tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Por ejemplo, los excipientes apropiados para su uso en formas de dosificación líquidas orales incluyen, pero no se limitan a, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes , conservadores, y agentes colorantes. Ejemplos de excipientes apropiados para uso en formas de dosificación orales sólidas (por ejemplo, polvos, tabletas, cápsulas y comprimidos ovalados) incluyen, pero no se limitan a, almidones, azúcares, celulosa microcristalina , diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, y agentes disgregantes .

Debido a su facilidad de administración, las tabletas y las cápsulas representan las formas de dosificación unitarias oral más ventajosas, en cuyo caso se emplean excipientes sólidos. Si se desea, las tabletas se pueden recubrir por técnicas acuosas o no acuosas estándar. Tales formas de dosificación se pueden preparar por cualquiera de los métodos de farmacia. En general, las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación se preparan mezclando uniformemente y estrechamente los ingredientes activos con portadores líquidos, portadores sólidos finamente divididos, o ambos, y después formar el producto en la presentación deseada si es necesario .

Por ejemplo, una tableta puede ser preparada por compresión o moldeo.

Las tabletas comprimidas se pueden preparar comprimiendo en una máquina apropiada los ingredientes activos en una forma de flujo libre tal como polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con un excipiente. Las tabletas moldeadas se pueden hacer moldeando en una máquina apropiada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente de líquido inerte .

Ejemplos de excipientes que se pueden usar en formas de dosificación oral de la invención incluyen, pero no se limitan a, aglutinantes, rellenadores , desintegrantes, y lubricantes. Los aglutinantes apropiados para uso en composiciones farmacéuticas y formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a, almidón de maíz, almidón de patata, u otros almidones, gelatina, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, alginato de sodio, ácido algínico, otros alginatos, tragacanto en polvo, goma de guar, celulosa y sus derivados (por ejemplo, etil celulosa, acetato de celulosa, calcio carboximetil celulosa, carboximetil celulosa de sodio) , polivinil pirrolidona, metil celulosa, almidón pregelatinizado, hidroxipropil metil celulosa, (por ejemplo, Nos. 2208, 2906, 2910), celulosa microcristalina , y mezclas de los mismos.

Ejemplos de rellenadores apropiados para uso en las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación descritas en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, talco, carbonato de calcio (por ejemplo, gránulos o polvo) , celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pre-gelatinizado, y mezclas de los mismos. El aglutinante o rellenador en las composiciones farmacéuticas de la invención está presente típicamente en desde aproximadamente 50 hasta aproximadamente 99 por ciento en peso de la composición farmacéutica o forma de dosificación .

Las formas apropiadas de celulosa microcristalina incluyen, pero no se limitan a, los materiales vendidos como AVICEL-PH-101, AVICEL-PH- 103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH- 105 (disponibles de FMC Corporation, American Viseóse División, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) , y mezclas de los mismos. Un aglutinante específico es una mezcla de celulosa microcristalina y carboximetil celulosa de sodio vendida como AVICEL RC-581. Excipientes o aditivos anhidros o de baja humedad apropiados incluyen AVICEL-PH- 103™ y Almidón 1.500 LM.

Los desintegrantes se utilizan en las composiciones de la invención para proporcionar comprimidos que se desintegran cuando se exponen a un ambiente acuoso. Las tabletas que contienen demasiado desintegrante se pueden desintegrar en almacenamiento, mientras que las que contienen muy poco pueden no desintegrarse a una velocidad deseada o bajo las condiciones deseadas. Por lo tanto, una cantidad suficiente de desintegrante que no es ni demasiada ni muy poca para alterar perjudicialmente la liberación de los ingredientes activos se debe utilizar para formar formas de dosificación oral sólidas de la invención. La cantidad de desintegrante usada varía basándose en el tipo de formulación, y es fácilmente discernible para las personas experimentadas en la técnica. Las composiciones farmacéuticas típicas comprenden desde aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 15 por ciento en peso de desintegrante, específicamente desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 5 por ciento en peso de desintegrante.

Los desintegrantes que se pueden utilizar en composiciones farmacéuticas y formas de dosificación de la invención incluyen, pero no se limitan a, agar-agar, ácido algínico, carbonato de calcio( celulosa microcristalina, croscarmelosa de sodio, crospovidona, polacrilina de potasio, almidón glicolato de sodio, almidón de patata o de tapioca, almidón pre-gelatinizado, otros almidones, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas, y mezclas de los mismos.

Los lubricantes que se pueden usar en composiciones farmacéuticas y formas de dosificación de la invención incluyen, pero no se limitan a, estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol , otros glicoles, ácido esteárico, lauril sulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de sésamo, aceite de oliva , aceite de maíz y aceite de soya) , estearato de cinc, oleato de etilo, laurato de etilo, agar, y mezclas de los mismos. Los lubricantes adicionales incluyen, por ejemplo, un gel de sílice siloide (AEROSIL 200, fabricado por R Grace Co. de Baltimore, MD) , un aerosol coagulado de sílice sintético (comercializado por Degussa Co . de Plano, TX) , CAB-O-SIL (un producto de dióxido de silicio pirogénico vendido por Cabot Co . , de Boston, RA), y mezclas de los mismos. Si se usan, los lubricantes se usan típicamente en una cantidad de menos de aproximadamente 1 por ciento en peso de las composiciones farmacéuticas o formas farmacéuticas en las que se incorporan.

Formas de dosificación de liberación retardada Los ingredientes activos utilizados en los métodos de la invención se pueden administrar por medios de liberación controlada o por dispositivos de liberación que son bien conocidos por las personas experimentadas en la técnica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, los descritos en las patentes US Nos: 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; y 4,008,719, 5,674,533, 5,059,595, 5,591,767, 5,120,548, 5,073,543, 5,639,476, 5,354,556, y 5,733,566, cada una de las cuales se incorpora en el presente documento por referencia. Tales formas de dosificación se pueden utilizar para proporcionar liberación controlada o lenta de uno o más ingredientes activos usando, por ejemplo, hidropropilmetil celulosa, otras matrices poliméricas, geles, membranas permeables, sistemas osmóticos, recubrimientos multicapa, micropartículas , liposomas, microesferas , o una combinación de los mismos para proporcionar el perfil de liberación deseado en proporciones variables. Formulaciones de liberación controlada apropiadas, conocidas por las personas experimentadas en la técnica, incluyendo las descritas en el presente documento, se pueden seleccionar fácilmente para uso con los ingredientes activos de la invención. Así pues, la invención abarca formas de dosificación unitaria individuales apropiadas para administración oral tales como, pero no limitada a, tabletas, cápsulas, cápsulas de gel y comprimidos que están adaptadas para la liberación controlada.

Todos los productos farmacéuticos de liberación controlada tienen el objetivo común de mejorar la terapia de fármacos sobre la alcanzada por sus contrapartes no controladas. Idealmente, el uso de una preparación de liberación controlada óptimamente diseñada en tratamiento médico se caracteriza por un mínimo de sustancia de fármaco que se emplea para curar o controlar la condición en una cantidad mínima de tiempo. Ventajas de formulaciones de liberación controlada incluyen actividad prolongada del fármaco, frecuencia de dosificación reducida, y un aumento de la conformidad del paciente. Además, las formulaciones de liberación controlada se pueden usar para afectar el tiempo de inicio de acción u otras características, tales como niveles en sangre del fármaco, y por lo tanto pueden afectar la ocurrencia de efectos secundarios (por ejemplo, adversos) .

La mayoría de formulaciones de liberación controlada están diseñadas para liberar inicialmente una cantidad de fármaco (ingrediente activo) que produce rápidamente el efecto terapéutico deseado, y liberar gradualmente y continuamente otras cantidades de fármaco para mantener este nivel de efecto terapéutico o profiláctico durante un período de tiempo prolongado. Con el fin de mantener este nivel constante de fármaco en el cuerpo, el fármaco debe ser liberado de la forma de dosificación a una velocidad que reemplace la cantidad de fármaco que está siendo metabolizada y excretada del cuerpo. La liberación controlada de un ingrediente activo puede ser estimulada por varias condiciones incluyendo, pero no limitadas a, pH, temperatura, enzimas, agua, u otras condiciones fisiológicas o compuestos. Formas de dosificación parenteral Las formas de dosificación parenteral se pueden administrar a pacientes por diversas vías incluyendo, pero no limitadas a, subcutánea, intravenosa (incluyendo inyección en bolo), intramuscular e intraarterial . Debido a que su administración típicamente deriva las defensas naturales de los pacientes contra los contaminantes, las formas de dosificación parenterales son preferiblemente estériles o capaces de ser esterilizadas antes de la administración a un paciente. Ejemplos de formas de dosificación parenteral incluyen, pero no se limitan a, soluciones listas para inyección, productos secos y/o liofilizados listos para ser disueltos o suspendidos en un vehículo farmacéuticamente aceptable para inyección (polvos reconstituibles ) , suspensiones listas para inyección y emulsiones.

Los vehículos apropiados que se pueden usar para proporcionar formas de dosificación parenteral de la invención son bien conocidos por las personas experimentadas en la técnica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: Agua para Inyección USP, vehículos acuosos tales como, pero no limitados a, Inyección de Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer, Inyección de Dextrosa, Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio, e Inyección de Lactato de Ringer, vehículos miscibles en agua tales como, pero no limitados a, alcohol etílico, polietilenglicol , y polipropilenglicol y vehículos no acuosos tales como, pero no limitados a, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo, y benzoato de bencilo.

Los compuestos que aumentan la solubilidad de uno o más de los ingredientes activos descritos en la presente descripción también se pueden incorporar en las formas de dosificación parenteral de la invención.

Formas de dosificación transdérmica Las formas de dosificación transdérmica incluyen parches "tipo depósito" o "tipo matriz" , que se pueden aplicar a la piel y llevarse durante un periodo de tiempo específico para permitir la penetración de una cantidad deseada de ingredientes activos.

Los excipientes apropiados (por ejemplo, portadores y diluyentes) y otros materiales que se pueden utilizar para proporcionar formas de dosificación transdérmica y tópicas abarcadas por esta invención son bien conocidos para las personas experimentadas en las técnicas farmacéuticas, y dependen del tejido particular al que se aplicarán una composición farmacéutica o forma de dosificación dadas. Con este hecho en mente, los excipientes típicos incluyen, pero no se limitan a, agua, acetona, etanol, etilenglicol , propilenglicol , butano- 1 , 3 -diol , miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral, y mezclas de los mismos .

Dependiendo del tejido específico que será tratado, los componentes adicionales se pueden utilizar antes de, junto con, o después del tratamiento con ingredientes activos de la invención. Por ejemplo, potenciadores de penetración se pueden usar para ayudar en la liberación de los ingredientes activos al tejido. Potenciadores de penetración apropiados incluyen, pero no se limitan a: acetona; varios alcoholes tales como etanol, oleilo, y tetrahidrofurilo; alquil sulfóxidos tales como sulfóxido de dimetilo; dimetil acetamida; dimetil formamida; polietilenglicol ; pirrolidonas tales como polivinilpirrolidona; grados de Kollidon (Povidona, Polividona) , urea y diversos ésteres de azúcar solubles o insolubles en agua tales como Tween 80 (polisorbato 80) y Span 60 (monoestearato de sorbitán) .

El pH de una composición farmacéutica o una forma de dosificación, o del tejido al que se aplica la composición farmacéutica o forma de dosificación, también se puede ajustar para mejorar la liberación de uno o más ingredientes activos. De manera similar, la polaridad de un portador de solvente, su fuerza iónica, o tonicidad se puede ajustar para mejorar la liberación. Los compuestos tales como estearatos también se pueden agregar a las composiciones farmacéuticas o formas de dosificación para alterar ventajosamente la hidrofilicidad o lipofilicidad de uno o más ingredientes activos así como para mejorar la liberación. A este respecto, los estearatos pueden servir como un vehículo de lípidos para la formulación, como un agente emulsionante o tensioactivo, y como un agente potenciador de liberación o potenciador de penetración. Diferentes sales, hidratos o solvatos de los ingredientes activos se pueden utilizar para ajustar adicionalmente las propiedades de la composición resultante. Formas de dosificación tópica Las formas de dosificación tópica de la invención incluyen, pero no se limitan a, cremas, lociones, ungüentos, geles, soluciones, emulsiones, suspensiones, u otras formas conocidas para una persona experimentada en la técnica. Ver, por ejemplo, Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18th eds . , Mack Publishing, Easton PA (1990) ; and Introduction to a pharmaceutical Dosage Forms, 4th ed, Lea & Febiger, Philadelphia (1985) .

Los excipientes apropiados (por ejemplo, portadores y diluyentes) y otros materiales que se pueden utilizar para proporcionar formas de dosificación tópicas y transdérmicas incluidas en esta invención son bien conocidas para las personas experimentadas en las técnicas farmacéuticas, y dependen del tejido particular al que se aplicará una composición farmacéutica o forma de dosificación dadas. Con este hecho en mente, los excipientes típicos incluyen, pero no se limitan a, agua, acetona, etanol, etilenglicol , propilenglicol , butano- 1 , 3 -diol , miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral, y mezclas de los mismos .

Dependiendo del tejido específico a tratar, los componentes adicionales se pueden utilizar antes de, junto con, o después del tratamiento con ingredientes activos de la invención. Por ejemplo, potenciadores de penetración se pueden usar para ayudar en la liberación de los ingredientes activos al tejido. Potenciadores de penetración apropiados incluyen, pero no se limitan a: acetona; diversos alcoholes tales como etanol, oleilo, y tetrahidrofurilo ; alquil sulfóxidos tales como sulfóxido de dimetilo; dimetil acetamida; dimetil formamida; polietilenglicol ; pirrolidonas tales como polivinilpirrolidona; grados de Kollidon (Povidona, Polividona) , urea y diversos ésteres de azúcar solubles o insolubles en agua tales como Tween 80 (polisorbato 80) y Span 60 (monoestearato de sorbitán) .

Formas de dosificación de la mucosa Las formas de dosificación de la mucosa de la invención incluyen, pero no se limitan a, soluciones oftálmicas y aerosoles, u otras formas conocidas para una persona experimentada en la técnica. Ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th eds, Mack Publishing, Easton PA (1990); and introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th ed. , Lea & Febiger, Philadelphia (1985) .

Además de las formulaciones descritas previamente, un compuesto utilizado en los métodos de la invención también puede formularse como una preparación de depósito. Tales formulaciones de acción prolongada pueden administrarse por implantación (por ejemplo por vía subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos se pueden formular con materiales poliméricos o hidrofóbicos apropiados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados poco solubles, por ejemplo, como una sal poco soluble .

Alternativamente, se pueden emplear otros sistemas de liberación farmacéutica. Liposomas, emulsiones, sistemas auto-emulsionantes (SEDDS) , y auto micro-emulsionantes (SMEDDS) son ejemplos bien conocidos de vehículos de liberación que pueden ser utilizados para liberar composiciones de la invención conocidos. Tales sistemas también pueden contener ácidos grasos, sales biliares y mezclas de mono-, di-y triglicéridos para mejorar los efectos potenciales de los alimentos. Otros excipientes de lípidos funcionales incluyen ésteres de glicerol, ésteres de PEG, ésteres de propilenglicol y ésteres de poliglicerol. También pueden emplearse ciertos solventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido, aunque normalmente a costa de una mayor toxicidad. Un compuesto de la invención también se puede liberar en un sistema de liberación controlada. En una modalidad, una bomba puede ser utilizada (Sefton, CRC Crit. RefBiomed Eng. , 1987, 14, 201; Buchwald et al., Surgery, 1980, 88, 507; Saudek et al, N. Engl . J. Med. , 1989, 321, 574) . En otra modalidad, pueden utilizarse materiales polimérícos (ver Medical Applications of. Controlled Reléase, Langer and Wise (eds.), CRC Pres . , Boca Ratón, Fia. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, J. Macromol . Sci. Rev. Macromol . Chem. , 1983, 23, 61 ; ver también Levy et al., Science, 1985, 228, 190; During et al., Ann. Neurol . , 1989,25,351; Howard et al, J. Neurosurg., 71, 105 (1989) . En aún otra modalidad, un sistema de liberación controlada puede ser colocado en proximidad del objetivo de los compuestos de la invención por lo que se requiere sólo una fracción de la dosis sistémica (ver, por ejemplo, Goodson, in Medical Applications of Controlled Reléase, supra, vol . 2, p . 115 (1984)). Otros sistemas de liberación controlada se pueden usar (ver, por ejemplo, Langer, Science, 1990, 249, 1527) .

Los excipientes apropiados (por ejemplo, vehículos y diluyentes) y otros materiales que se pueden usar para proporcionar formas de dosificación de la mucosa abarcadas por esta invención son bien conocidos para las personas experimentadas en las técnicas farmacéuticas, y dependen del sitio particular o método que una composición farmacéutica o forma de dosificación dadas será administrada. Con este hecho en mente, excipientes típicos incluyen, pero no se limitan a, agua, etanol, etilenglicol , propilenglicol , butano- 1, 3 -diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral, y mezclas de los mismos, que son no tóxicos y farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de tales ingredientes adicionales son bien conocidos en el arte previo. Ver, por ejemplo, Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18th eds . , Mack Publishing, Easton PA (1990) .

El pH de una composición farmacéutica o forma de dosificación, o del tejido al que la composición farmacéutica o forma de dosificación es aplicada, también se puede ajustar para mejorar la liberación de uno o más ingredientes activos. De manera similar, la polaridad de un portador solvente, su fuerza iónica, o tonicidad se puede ajustar para mejorar la liberación. Los compuestos tales como estearatos también se pueden agregar a las composiciones farmacéuticas o formas de dosificación para modificar ventajosamente la hidrofilicidad o lipofilicidad de uno o más ingredientes activos así como para mejorar la liberación. A este respecto, los estearatos pueden servir como un vehículo de lípidos para la formulación, como un agente emulsionante o tensioactivo, y como un agente potenciador de administración o potenciador de penetración. Diferentes sales, hidratos o solvatos de los ingredientes activos se pueden utilizar para ajustar adicionalmente las propiedades de la composición resultante. Kits La invención proporciona un paquete o kit farmacéutico que comprende uno o más recipientes que comprenden un compuesto de la invención útil para la reducción de ácido úrico en suero y el tratamiento o prevención de, por ejemplo, gota o hiperuricemia . En otras modalidades, la invención proporciona un paquete o kit farmacéutico que comprende uno o más recipientes que comprenden un compuesto de la invención útil para la reducción de ácido úrico en suero y el tratamiento o la prevención de gota o hiperuricemia y uno o más recipientes que comprenden un agente terapéutico adicional .

La invención también proporciona un paquete o kit farmacéutico que comprende uno o más recipientes que comprenden uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas de la invención. Opcionalmente asociada con tal contenedor puede ser una nota en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o biológicos, cuya nota refleje la aprobación por la agencia de la fabricación, uso o venta para administración humana.

Los agentes de la invención se pueden preparar usando las rutas de reacción y esquemas sintéticos como se describe a continuación, empleando las técnicas generales conocidas en la técnica usando materiales de partida que están fácilmente disponibles. La síntesis de compuestos no ejemplificados de acuerdo con la invención puede realizarse con éxito por modificaciones evidentes para las personas experimentadas en la técnica, por ejemplo, mediante la protección apropiadamente a los grupos que interfieren, cambiando a otros reactivos apropiados conocidos en el arte previo, o haciendo modificaciones rutinarias de los condiciones de reacción. Alternativamente, o'tras reacciones descritas en este documento o, generalmente conocidas en la técnica se reconocerán como que tienen aplicabilidad para preparar otros compuestos de la invención.

Preparación de los compuestos En los esquemas de síntesis descritos a continuación, a menos que se indique lo contrario todas las temperaturas se indican en grados Celsius y todas las partes y porcentajes son en peso. Los reactivos se adquirieron de proveedores comerciales tales como Aldrich Chemical Company o Alfa Aesar y se usaron sin purificación adicional a menos que se indique lo contrario. Todos los solventes se adquirieron de proveedores comerciales tales como Aldrich, Merck Chemicals o de Fisher y se utilizaron tal como se recibieron. Las reacciones indicadas a continuación se realizaron generalmente bajo una presión positiva de argón o nitrógeno a una temperatura ambiente (a menos que se indique otra cosa) en solventes anhidros, y los matraces de reacción estaban equipados con septos de caucho para la introducción de sustratos y reactivos mediante una jeringa. Material de vidrio se secaron en horno y/o se secaron con calor.

Las reacciones fueron probadas por TLC y/o fueron analizadas por LC-MS o HPLC y terminada a juzgar por el consumo del material de partida. Cromatografía de capa fina (TLC) se realizó sobre placas de vidrio recubiertas previamente con placas de 0.25 mm de gel de sílice 60 F254 (Merck) y visualizadas con luz ultravioleta (254 nm) y/o yodo en gel de sílice y/o calentamiento con tinciones de TLC como ácido etanólico fosfomolíbdico, solución de ninhidrina, solución de permanganato de potasio o solución de sulfato de cérico. La cromatografía de capa fina preparativa (TLCprep) se realizó en placas de vidrio recubiertas previamente con placas de 0.5 mm de gel de sílice 60 F254 (20 x 20 cm, de Thomson Instrument Company) y visualizadas con luz ultravioleta (254 nm) .

Los tratamientos se realizaron típicamente duplicando el volumen de reacción con el solvente de reacción o solvente de extracción y lavando después con las soluciones acuosas indicadas usando 25% por volumen del volumen de extracción a menos que se indique lo contrario. Las soluciones de productos se secaron sobre sulfato de sodio y/o sulfato de magnesio anhidro antes de la filtración y evaporación de los solventes a presión reducida en un evaporador rotatorio y se observaron como solventes eliminados in vacuo. La cromatografía de columna se completó bajo presión positiva usando gel de sílice Merck 60, alúmina neutra malla 230-400 o malla 50-200, cromatografía flash de Teledyne Isco utilizando columnas de gel de sílice RediSep preempaquetadas, o cromatografía de columna flash Analogix usando columnas de gel de sílice preempaquetadas SuperFlash. La hidrogenolisis se realizó a la presión indicada en los ejemplos o a presión ambiente.

Espectros 1H-NMR y 13C-NMR se registraron en un instrumento Varían Mercury-VX400 que opera a 400 MHz. Los espectros de MR se obtuvieron como soluciones ODCl3 (en ppm) , usando cloroformo como estándar de referencia (7.27 ppm para el protón y 77.00 ppm para el carbono), CD3OD (3.4 y 4.8 ppm para los protones y 49.3 ppm para el carbono), DMS0-d6 (2.49 ppm para los protones), o tetrametilsilano internamente (0.00 ppm) cuando sea apropiado. Se utilizaron otros solventes de NMR como sea necesario. Cuando se reportan multiplicidades de los picos, se usan las siguientes abreviaturas: s (singlete) , d (doblete) , t (triplete) , q (cuarteto) , m (multiplete) , br (ampliado) , bs (singulete ancho) , dd (doblete de dobletes) , dt (doblete de tripletes) . Las constantes de acoplamiento, cuando se dan, se expresan en Hertz (Hz) .

Espectros infrarrojos (IR) se registraron en un espectrómetro ATR FT-IR como aceites o sólidos puros, y cuando se dan se expresan en números de onda (cm"1) . Los espectros de masas reportados son (+) -ES o APCI (+) LC/MS conducidos por el Departamento de Química Analítica de Anadys Pharmaceuticals, Inc. Análisis elementales fueron conducidos por Atlantic Microlab, Inc. en Norcross, GA. Los puntos de fusión (mp) se determinaron en un aparato capilar abierto, y están sin corregir.

Los valores de exceso enantiomérico (ee) se determinaron por análisis por HPLC usando columnas Chiralpak (Chiral Technologies Inc.) AS-RH, 2.1 x 150 mm, 5 mieras, ? = 312 nm o AS-RH, 4.6 x 250 mm, 5 mieras, ? = 310 nm. AS-RH, 2.1 x 150 mm, 5 mieras: separación de HPLC por gradiente binario. Solvente A: ácido fórmico al 0.1% en agua, solvente B: ácido fórmico al 0.1% en acetonitrilo . 10 µ? inyectados de la muestra disuelta en 50% de metanol - 50% de agua [0.1 mg/ml] . Tiempo (min) % B Flujo (ml/min) 0.0 55 0.3 5.0 95 0.3 5.5 95 0.3 6.0 55 0.3 12.0 55 0.3 AS-RH, 4.6 x 250 mm, 5 mieras: separación de HPLC por gradiente binario. Solvente A: 0.05% de TFA en agua, Solvente B: 0.05% de TFA en acetonitrilo . 3-5 µ? inyectados de la muestra disuelta en acetonitrilo [1 mg/ml] .

Tiempo (min) %B Fluj o (ml/min) 0.0 50 0.8 8.0 95 0.8 10.0 95 0.8 11.0 50 0.8 13.0 50 0.8 Los mecanismos sintéticos descritos y los procedimientos experimentales utilizan muchas abreviaturas químicas comunes, 2,2-DMP (2 , 2-dimetoxipropano) , Ac (acetilo) , ACN (acetonitrilo) , Bn (bencilo) , BnOH (alcohol bencílico) , Boc (terc-butoxicarbonilo) , Boc20 (dicarbonato de di-terc-butilo) , Bz (benzoilo) , CSA (ácido canforsulfónico) , CSI (isocianato de clorosulfonilo) , DBU (1,8-diazabiciclo [5 , 4 , 0] undec-7-eno) , DCC (?,?'-diciclohexilcarbodiimida) , DCE ( 1 , 2 -dicloroetano) , DCM (diclorometano) , DEAD (dietilazodicarboxilato) , DIBAL (hidruro de diisobutilaluminio) , DIEA (diisopropiletilamina) , DMA (?,?-dimetilacetamida) , DMAP (4-(N,N-dimetilamino) piridina) , DMF (N, -dimetilformamida) , DMSO (sulfóxido de dimetilo), EDC (1- ( 3 -dimetilaminopropil ) -3-etilcarbodiimida) , Et (etilo) , EtOAc (acetato de etilo) , EtOH (Etanol) , HATU (O- (7-azabenzotriazol-1-il) -1,1,3,3- tetrametiluronio hexafluorofosfato) , HBTU (O-benzotriazol - 1-il-N,N,N' ,?' -tetrametiluronio) , HF (fluoruro de hidrógeno), HOAc (ácido acético) , HOBT (hidrato de 1-hidroxibenzotriazol ) , HPLC (cromatografía líquida de alta presión) , IPA (alcohol isopropilico) , KHMDS (bis (trimetilsilil) amida de potasio), KN(TMS)2 (bis (trimetilsilil) amida de potasio), KOfcBu (ter-butóxido de potasio) , LDA (diisopropilamina de litio) , MCPBA (ácido 3-cloroperbenzoico) , Me (metilo) , MeCN (acetonitrilo) , MeOH (metanol) , aC B3 (cianoborohidruro de sodio) , NaH (hidruro de sodio), NaN(TMS)2 (bis (trimetilsilil) amida de sodio), NaOAc (acetato de sodio) , NaOEt (etóxido de sodio) , NEt3 (trietilamina) , NMM (N-metilmorfolina) , Phe (fenilalanina) , PPTS (p-toluenosulfonato de piridinio) , PS (soportado en polímero) , Py (piridina) , pyBOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi) tripirrolidinofosfonio) , TEA (trietilamina) , TFA (ácido trifluoroacético) , TFAA (anhídrido trifluoroacético) , THF (tetrahidrofurano) , TLC (cromatografía en capa fina) , Tol (toluoil) , Val (valina) , y similares.

El esquema de reacción 1 proporciona un procedimiento específico que se usó para preparar el compuesto del Ejemplo 1, un derivado de 1,1-dióxido de N-metileno metanosulfonamida [1,2,4] tiadiazina .

Esquema de reacción 1 El intermediario del éster del ácido ß-amino cíclico N- sustituido mostrado fue acoplado a ácido (7-yodo-l, 1-dioxo- 1, 4 -dihidro- lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il ) -acético (preparado como se describe en W02007150001 Al) en la presencia de hexafluorofosfato de O- {l-azabenzotriazol-l-il) - 1 , 1 , 3 , 3 -tetrametiluronio (HATU) y N-metilmorfolina para producir el intermediario amida que fue ciclizada en la presencia de trietilamina para dar el intermediario cíclico deseado. El desplazamiento de la fracción de yodo con cianuro de cobre (I) dio el intermediario nitrilo deseado.

La reducción del nitrilo bajo condiciones de hidrogenación estándar dio el derivado de bencil amina deseado que después fue tratado con cloruro de metanosulfonilo para producir el compuesto 1,1-dióxido [1, 2 , 4] tiadiazina deseado.

Ejemplo 1: N- { 3 - [ ( IR, 2S , 7R, 8S) -3 - ( -Fluoro-bencil ) - -hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2"7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-1 , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7- ilmetil } -metanosulfonamida a) (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4-Fluoro-bencil) -6-hidroxi-5- (7-yodo-1, 1-dioxo-1, 4 -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il ) -3-aza-triciclo[6.2.1.02"7] undec-5 -en-4 -ona Ácido ( 7 -yodo- 1 , 1 -dioxo- 1 , 4 -dihidro-1?6-benzo [1, 2 , 4] tiadiazin-3-il) -acético (preparado como se describe en la solicitud de patente US 2008/0031852; 2.51 g, 6.86 mmol) , etil éster del ácido ( 1S , 2R, 3S , 4R) -3 - (4 -fluoro- benci1lamino) -biciclo [2.2.1] -2-heptano-carboxílico (Para la preparación de intermediarios de ácido ß-amino ver Ejemplos 2f-l descritos a continuación) (2 g, 6.86 mmol) y hexafluorofosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio (2.74 g, 7.2 mmol) se combinaron y se disolvieron en N, -dimetilformamida anhidra (18 mi). Se agregó N-metilmorfolina (3 mi, 27.44 mmol) y la mezcla se agitó a 25°C durante 2 horas. Se agregó trietilamina (3.82 mi, 27.44 mmol) y la mezcla se agitó a 60°C durante 16 horas. Después de enfriar, la mezcla se agregó lentamente a una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (200 mi) mientras se agitaba. El producto precipitó inmediatamente. Se continuó la agitación durante 5 min. El sólido se recogió por filtración al vacío, se lavó con agua (2 x 60 mi) y se secó al vacío durante 16 horas para proporcionar el producto deseado, (IR, 2R, 3S, 4R) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-5- (7-yodo-1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro-lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il ) -3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec-5-en-4-ona (1.94 g, 3.27 mmol, 48%) , como una espuma frágil blanca. 1H NMR (400 MHz, DMS0-d6) d: 1.20 - 1.23 (1H, m) , 1.38 - 1.61 (5H, m) , 2.50 - 2.53 (1H, m) , 2.62 (1H, d, J = 3.2 Hz) , 2.98 (1H, d, J = 9.3 Hz) , 3.52 (1H, d, J = 9.4 Hz) , 4.40 (1H, d, J = 15.7 Hz), 4.95 (1H, d, J = 14.9 Hz), 7.12 - 7.16 (2H, m) , 7.30 - 7.34 (3H, m) , 7.97 (1H, dd, Ji = 8.6 Hz, J2 = 1.4 Hz) , 8.07 (1H, d, J = 1.7 Hz). b) (1R,2S,7R,8S) -3- [3- (4-fluoro-bencil ) -6-hidroxi-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2,7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l, 4 dihidro- lA6-benzo [1, 2,4] tiadiazina-7-carbonitrilo (1R, 2S, 7R, 8S) -3- [3- (4-fluoro-bencil) -6-hidroxi-5- (7-yodo-1, 1-dioxo-l, 4 -dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3-aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec-5-en-4-ona (0.5 g, 0.84 mmol) y cianuro de cobre (I) (0.151 g, 1.7 mmol) se suspendieron en N, -dimetilformamida anhidra (4 mi) . La mezcla se agitó a 120°C, en atmósfera de nitrógeno durante 24 horas. Después de enfriar, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (20 mi) y se lavó con solución de cloruro de amonio acuoso saturado (3 x 15 mi) . La fase orgánica se pasó a través de un tapón corto de celita seguido por un tapón corto de gel de sílice (gel de sílice Merck 60, 40-63 ym) , eluyendo con acetato de etilo. El filtrado se concentró in vacuo para proporcionar un sólido de color amarillo. La purificación por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 25-100% de acetato de etilo en hexanos) seguido por concentración in vacuo proporcionó el producto deseado, (IR, 2S , 7R, 8S) -3 - [3 - (4-fluoro-bencil ) -6 -hidroxi -4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 -7] undec-5-en-5-il] -1 , 1 -dioxo- 1 ,'4 -dihidro- lA6-benzo [1, 2 , 4] tiadiazina-7-carbonitrilo (0.398 g, 0.808 mmol, 96%), como una espuma frágil blanca. 1H NMR (400 MHz , DMSO-d6) d: 1.15 - 1.15 (1H, m) , 1.34 - 1.61 (5H, m) , 2.48 -2.48 (1H, m) , 2.60 (1H, d, J = 3.3 Hz) , 2.90 (1H, d, J = 9.4 Hz) , 3.48 (1H, d, J = 9.4 Hz) , 4.38 (1H, d, J = 15.6 Hz) , 4.96 (1H, d, J = 15.4 Hz) , 7.11 - 7.16 (2H, m) , 7.31 (2H, dd, Ji = 8.6 Hz, J2 = 5.4 Hz) , 7.60 (1H, d, J = 8.6 Hz) , 8.02 (1H, dd, Ji = 8.6 Hz, J2 = 2.5 Hz) , 8.37 (1H, s) . LC-MS (ESI) calculado para C25H21F 4O4S 492.13, encontrado 493.1 [M+H+] . c) Hidrocloruro de ( IR, 2S , 7R, 8S) -5- ( 7 -aminometil - 1 , 1-dioxo-1, 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3- (4-fluoro-bencil ) -6 -hidroxi -3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-en-4- (1R,2S,7R,8S) -3 - [3- (4 -fluoro-bencil) -6-hidroxi -4-oxo-3 -aza-triciclo [IR, 2S, 7R, 8S] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro- lA6-benzo [1, 2 , 4] tiadiazina-7-carbonitrilo (0.38 g, 0.77 mmol) se disolvió en metanol (requirió calentamiento suave a través de la pistola de calor) . Se agregó una solución acuosa de ácido clorhídrico concentrado (5 mi) seguido de 10% de paladio sobre carbono (-150 mg) . La mezcla se desgasificó y se rellenó con gas hidrógeno vía globo. La mezcla se agitó a 25°C durante 3 horas. La mezcla se pasó a través de un tapón de celita, eluyendo con metanol adicional (200 mi) . El filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el producto deseado, hidrocloruro de (IR, 2S, 7R, 8S) -5- (7-aminometil-1 , 1-dioxo-l, 4 -dihidro- lAs-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3- (4-fluoro-bencil) -6-hidroxi-3-aza-triciclo [6.2.1. O2 '7] undec-en-4 -ona (-0.77 mmol), como un sólido de color amarillo pálido. El sólido se utilizó directamente en el siguiente paso sin purificación o caracterización adicional. LC-MS (ESI) calculado para C25H25FN404S 496.16, encontrado 497.3 [M+H+] . d) N-{3- (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4-fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2,7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-??6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7- ilmetil } -metanosulfonamida Hidrocloruro de (IR, 2S, 7R, 8S) -5- ( 7 -aminometil- 1 , 1-dioxo- 1 , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il ) -3- (4-fluoro-bencil) -6 -hidroxi-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-en-4 -ona (crudo del paso anterior, -0.77 mmol) se disolvió en cloruro de metileno (10 mi) . Se agregaron trietilamina (2 mi) y piridina (2 mi) . Se agregó cloruro de sulfonil metano (2 mi) y la mezcla se agitó a 25°C durante 20 min. Se agregó agua (50 mi) y la mezcla se agitó durante 5 minutos. La solución se diluyó con acetato de etilo (200 mi) y se lavó con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (3 x 300 mi), solución acuosa de cloruro de amonio saturado (2 x 200 mi) y solución acuosa de salmuera saturada (200 mi) . La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró in vacuo para producir un aceite claro. Purificación por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep.; 25-100% de acetato de etilo en hexanos) seguido por la concentración in vacuo proporcionó el producto deseado, N- { 3 - ( IR, 2S , 7R, 8S) -3 - (4 -fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1,1-dioxo- 1 , 4 -dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7- ilmetil } -metanosulfonamida (0.139 g, 0.238 mmol , 31%) como una espuma frágil blanca. ¾ NMR (400 MHz, DMS0-d6) d: 1.19 - 1.25 (1H, m) , 1.40 - 1.64 (5H, m) , 2.50 - 2.54 (1H, m) , 2.64 (1H, d, J = 2.5 Hz) , 2.92 (3H, s) , 3.04 (1H, d, J = 8.8 Hz) , 3.53 (1H, d, J = 9.5 Hz) , 4.25 (2H, d, J = 6.2 Hz) , 4.42 (1H, d, J = 15.8 Hz) , 4.97 (1H, d, J = 14.7 Hz), 7.12 - 7.17 (2H, m) , 7.33 (2H, dd, Ji = 7.7 Hz, J2 = 5.4 Hz) , 7.52 (1H, d, J = 8.7 Hz) , 7.63 - 7.70 (2H, m) , 7.81 (1H, s). LC-MS (ESI) calculado para C26H27FN4O6S2 574.14, encontrado 575.3 [M+H+] .

El Esquema de reacción 2 proporciona un procedimiento general que se puede utilizar para preparar compuestos 5,6- dihidro-lH-piridin-2-ona saturados de los Ejemplos 2, 3, 5, 6, 7, 9, 10 y 11. n = 1,2 .un grupo saliente DCC, DMF alifático o aromático Los intermediarios de éster de ácido ß-amino cíclico N-sustituido saturado se pueden obtener como se describe por uno de los métodos en los Esquemas de reacción 2a-2e, que puede ser condensado con un intermediario de ácido carboxílico utilizando condiciones de acoplamiento de péptidos estándar utilizados para la formación de enlaces amida, tales como DCC, para producir la amida mostrada. Este intermediario puede ser cicilizado con o sin aislamiento en la presencia de una base (por ejemplo, trietilamina) para dar los compuestos 5 , 6-dihidro-lH-piridin-2-ona saturados deseados.

Esquema de reacción 2a Anhídridos meso cíclicos saturados disponibles en el comercio pueden ser desimetrizados con la ayuda de enzimas o reactivos quirales, tales como alcaloides de cinchona (por ejemplo, quinina o quinidina) como se describe en la literatura para proporcionar monoésteres de ácidos dicarboxílieos cíclicos saturados ópticamente activos. Ver J. Org. Chem. , 65, 6984-6991 (2000) ; Synthesis, 11, 1719-1730 (2001) , y referencias citadas en el mismo. Estos intermediarios pueden ser elaborados adicionalmente en ásteres de ácidos ß-amino cíclicos saturados protegidos ópticamente activos (por ejemplo, protegidos con Cbz) a través de una reacción de reestructuración, tales como la reestructuración de Curtius (mostrada) o una degradación de Hofmann. La hidrogenación de los esteres de ácidos ß-amino cíclicos saturados protegidos bajo condiciones estándar se puede utilizar para eliminar el grupo protector y proporcionar los ásteres de ácido ß-amino cíclico saturado ópticamente activos, que pueden ser aislados (y usados) , ya sea como las bases libres o sus sales correspondientes. Los ésteres de ácido ß-amino cíclico saturado ópticamente activos (o sus sales) entonces pueden ser tratados con aldehidos o cetonas, en donde Rx y Rw son independientemente alquilo Ci-C5, cicloalquilo C3-C8 alquileno Ci-C5 (cicloalquilo C3-C8) , alquileno Ci-C5 (arilo) , alquileno i~C5 (heterociclilo) , arilo, o heterociclilo, o Rw se pueden combinar con Rx para formar un anillo de 3-8 miembros, en la presencia de un agente reductor (tal como cianoborohidruro de sodio) para proporcionar los intermediarios ésteres de ácido ß-amino cíclico N-substituido saturado ópticamente activos deseados. Alternativamente, la secuencia de reacción descrita anteriormente se puede realizar sin enzimas o reactivos quirales que conducen a los correspondientes intermediarios y productos aquirales.

El esquema de reacción 2b proporciona un procedimiento general que se puede utilizar para preparar intermediarios de éster de ácido ß-amino cíclico N-substituido de anhídridos insaturados .

Esquema de reacción 2b ROH Anhídridos meso cíclicos insaturados disponibles en el comercio pueden ser desimetrizados como se describió anteriormente en el Esquema de reacción 2b para proporcionar monoésteres de ácido dicarboxílico cíclico insaturado ópticamente activos. Estos intermediarios pueden ser elaborados además en esteres de ácido ß-amino cíclico insaturado ópticamente activos protegidos (por ejemplo, protegidos con Cbz) a través de una reacción de reestructuración, tales como la reestructuración de Curtius (mostrada) o una degradación de Hofmann. El grupo protector Cbz entonces puede ser retirado y la olefina reducida por hidrogenación catalítica, lo que conduce a los intermediarios de éster de ácido ß-amino cíclico insaturado ópticamente activo, que pueden ser aislados (y usados) , ya sea como las sales o sus bases libres correspondientes.

El esquema de reacción 2c proporciona un procedimiento general alternativo que se puede utilizar para preparar los intermediarios de éster de ácido ß-amino cíclico N-sustituido saturado .

Esquema de reacción 2c Olefinas bicíclicas, tales como norborneno, se pueden hacer reaccionar con isocianato de clorosulfonilo para producir las ß-lactamas mostradas. Estos intermediarios pueden ser hidrolizados en la presencia de un ácido fuerte (tal como ácido clorhídrico) para producir los ácidos ß-amino cíclicos saturados (o sus sales) , que después se pueden elaborar adicionalmente en los esteres correspondientes usando condiciones estándar. Los- ésteres de ácido ß-amino cíclico saturado entonces pueden ser tratados con aldehidos o cetonas en la presencia de un agente reductor, tal como cianoborohidruro de sodio, para proporcionar los intermediarios de éster de ácido ß-amino cíclico N-sustituido saturado deseados .

El esquema de reacción 2d proporciona un esquema de reacción general que describe un método que se puede utilizar para resolver los enantiómeros di-exo por cristalización diastereomérica .

Esquema de reacción 2d Los derivados de éster de ácido di-exo- -amino racémico obtenidos de norborneno como se describió anteriormente, se pueden resolver mediante la formación de sales diastereoméricas con un ácido ópticamente puro, tal como (1S) - (+) -10-canforsulfónico. Los derivados de éster de ácido (IR, 2R, 3S, 4S) -ß-amino forman una sal cristalina con ácido (1S) - (+) -10-canforsulfónico que puede ser aislado selectivamente por filtración de un solvente apropiado (por ejemplo, acetato de etilo) y se trata con una base, tal como carbonato de sodio, para proporcionar los ésteres de ácido ( IR, 2R, 3S , 4S) - ß-amino cíclico enantioméricamente puro libre.

Los ésteres de ácido (IR, 2R, 3S, 4S) -ß-amino cíclico enantiornéricamente puro (o sus sales) entonces pueden ser tratados con aldehidos o cetonas en la presencia de un agente reductor, tal como cianoborohidruro de sodio, para producir los intermediarios de éster de ácido (IR, 2R, 3S, 4S) -ß-amino N-substituido cíclico saturado ópticamente puro deseado.

El esquema de reacción 2e proporciona un procedimiento alternativo que se puede utilizar para preparar intermediarios de éster de ácido ß-amino N-substituido cíclico saturado enantioméricamente puro.

Esquema de reacción 2e K2C03, EtOAc La ß-lactama (preparada como se describió en el Esquema de reacción 2c) puede ser abierta y resuelta mediante la formación de sales diastereoméricas con un ácido ópticamente puro, tal como ácido (1S) - (+) -10-canforsulfónico (como se describe en el esquema de reacción 2d) en la presencia de un alcohol (por ejemplo, etanol) para dar directamente el éster del ácido (IR, 2R, 3S, 4S) -ß-amino diastereoméricamente puro como una sal con ácido (1S) -(+) -10-canforsulfónico . El tratamiento con una base, tal como carbonato de potasio, seguido por alquilacion reductora' con aldehidos o cetonas en la presencia de un agente reductor, tal como cianoborohidruro de sodio, proporciona los intermediarios de éster de ácido ( IR, 2R, 3S , 4S) - ß-amino N-sustituido cíclico saturado enantioméricamente puro deseados .

Ejemplo 2: N- {3- [ (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4-Fluoro-bencil) -6-hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec- 5 -en-5- il] - 1 , 1-dioxo-1 , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il } -metanosulfonamida a) ácido (1S, 2S, 3R,4R) -3- (metoxicarbonil) biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxílico El compuesto del título se preparó como se describe en J. Org. Chem. 2000, 65, 6984-6991. Anhídrido de cis-5-norborneno-endo-2 , 3 -dicarboxílico (5 g, 30.45 mmol) se suspendió en una mezcla 1:1 de tolueno y tetracloruro de carbono (610 mi) . La mezcla se agitó durante 10 min. Se agregó quinina (10.87 g, 33.5 mmol) y el matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno. La solución se enfrió a -55°C. Mientras se agitaba, se agregó metanol (3.7 mi, 91.35 mmol) . La mezcla se agitó a ~55°C durante 16 horas. Después de calentar a 25°C, la mezcla se concentró in vacuo hasta una espuma. La espuma se disolvió en una mezcla de acetato de etilo (400 mi) y la solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (400 mi) . Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó adicionalmente con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (2 x 200 mi), solución de salmuera saturada acuosa (100 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para producir el producto deseado, ácido (1S, 2S, 3R, 4R) -3- (metoxicarbonil) biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxílico (5.95 g, 30.3 mmol, rendimiento de 99%) como un aceite claro. H NMR (400 MHz , DMS0-d6) d: 1.31 (1H, d, J = 8.5 Hz), 1.98 (1H, d, J = 8.6 Hz) , 2.51 (2H, d, J = 1.6 Hz) , 2.95 (2H, bs) , 3.52 (3H, s) , 6.17 - 6.21 (2H, m) , 12.16 (1H, s) . b) (IR, 2R, 3S,4S) -3- { [ (benciloxi ) carbonil] aminojbiciclo [2.2.1] hept-5 -eno-2 -carboxilato de metilo Ácido (1S, 2S, 3R, 4R) -3- (metoxicarbonil) biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxílico (5.9 g, 30 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano anhidro (133 mi) . El matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno y la mezcla se enfrió a 0°C. Se agregó trietilamina (12.64 ml( 90 mmol) seguido de la adición gota a gota de cloroformiato de etilo (5.72 mi, 60 mmol) con agitación vigorosa. Se observó precipitación inmediata. La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora. La azida de sodio (5.86 g, 90 mmol) se disolvió en agua (40 mi) y se agregó a la mezcla de reacción a 0°C. La mezcla se agitó a 0°C durante 5 minutos. Se retiró el baño de hielo. La mezcla se calentó a 25°C y se continuó agitando durante 2 horas. La mezcla se vertió en agua (300 mi) y el producto se extrajo en acetato de etilo (300 mi) . La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución acuosa de bicarbonato de sodio ¾ saturado (2 x 100 mi) , solución acuosa de salmuera saturada (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró ín vacuo para producir un aceite de color marrón claro. El aceite se disolvió en benceno anhidro (66 mi) y se calentó a reflujo mientras se agitaba bajo nitrógeno durante 2 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se concentró in vacuo para proporcionar un aceite de color marrón claro. El aceite se disolvió en diclorometano (40 mi) y se agregó alcohol bencílico (3.41 mi, 33 mmol) seguido de trietilamina (8.44 mi, 60 mmol) . La mezcla se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante 16 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se concentró in vacuo para producir un aceite espeso. La purificación por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 µ, columna 1:3:1 hexanos/acetato de etilo; columna 2: 2:4:1 diclorometano/pentano/dietil éter) proporcionó el producto deseado, (IR, 2R, 3S,4S) -3- { [ (benciloxi)carbonil] aminojbiciclo [2.2.1]hept-5-eno-2-carboxilato de metilo (6.95 g, 23.09 mmol, rendimiento de 77%) como un aceite de color amarillo pálido. Hí NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.59 (1H, d, J = 9.3 Hz) , 1.96 (1H, d, J = 9.3 Hz), 2.66 (1H, d, J = 7.9 Hz) , 2.75 (1H, s) , 2.96 (1H, s) , 3.59 (3H, s) , 4.01 (1H, t, J = 8.5 Hz) , 5.09 (2H, q, J = 10.4 Hz) , 5.46 (1H, d, J = 9.4 Hz) , 6.17 - 6.22 (2H, m) , 7.29 - 7.36 (5H, m) . LC-MS (ESI) calculado para C17H19N04 301.13, encontrado 258.1 (100%), 302.2 [M+H+] (70%), 603.5 [2 +H+] (20%). c) Hidrocloruro (IR, 2S, 3S, 4S) -3-aminobiciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxilato de metilo (IR, 2R, 3S, 4S) -3-{ [ (benciloxi) carbonil] aminojbiciclo [2.2.1] hept-5-eno-2 -carboxilato de metilo (1 g, 3.32 mmol) se disolvió en acetato de etilo (15 mi) . Se agregó paladio sobre carbono al 5% (120 mg) . El matraz se desgasificó y se rellenó con gas hidrógeno vía globo. La mezcla se agitó a 25°C durante 16 horas. La mezcla se pasó a través de un tapón de Celita y el filtrado se concentró in vacuo para proporcionar un aceite transparente espeso. El aceite se disolvió en dietil éter (10 ml) y se agregó gota a gota, con agitación vigorosa, a una mezcla de solución de ácido clorhídrico 4.0 M en 1,4-dioxano (1.8 ml) en dietil éter (18 ml) . El producto deseado comenzó a precipitar como un sólido blanco. Se agregó dietil éter adicional (10 ml) y la mezcla se agitó durante 10 min. El precipitado se recogió por filtración en vacío, se lavó con dietil éter adicional (2 x 8 ml) . El sólido se secó adicionalmente in vacuo durante 1 hora para proporcionar el producto deseado, hidrocloruro de (IR, 2S,3S,4S) -3-aminobiciclo[2.2.1]heptano-2-carboxilato de metilo (0.64 g, 3.11 mmol, rendimiento de 94%) como un polvo blanco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 1.17 - 1.27 (3H, m) , 1.40 - 1.61 (2H, m) , 1.91 (1H, d, J = 10.7 Hz) , 2.36 (1H, d, J = 4.1 Hz) , 2.44 (1H, d, J = 3.1 Hz) , 2.75 (1H, d, J = 7.8 Hz) , 3.30 - 3.38 (1H, m) , 3.61 (3H, s) , 8.05 (3H, bs) . LC-MS (ESI) calculado para C9H15NO2 (amina libre) 169.11, encontrado 170.3 [M+H+] (100%) , 339.3 [2M+H+] (50%) . d) (1S,2R,3S,4R) -3- [ (4-f luorobencil) amino] biciclo [2.2.1] -heptano-2-carboxilato de metilo Hidrocloruro de (1S, 2R, 3S, 4R) -3-aminobiciclo [2.2.1] heptano- -2 -carboxilato de metilo (0.5 g, 2.43 mmol) se disolvió en metanol (12 ml) . Se agregó acetato de sodio (0.4 g, 4.86 mmol) seguido de tamices moleculares en polvo de 4Á (0.5 g) y 4-fluoro-benzaldehído (0.302 g, 2.43 mmol). Se agregó cianoborohidruro de sodio (0.305 g, 4.86 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 horas. La mezcla se vertió en una mezcla de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (200 mi) y acetato de etilo (300 mi) . Después de agitar, ambas capas se pasaron a través de un tapón de Celita. La fase orgánica se lavó adicionalmente con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 mi) , solución de salmuera saturada acuosa (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar el producto crudo, (1S,2R,3S,4R) -3- [ (4-fluorobencil) amino]biciclo [2.2.1] -heptano-2-carboxilato de metilo (0.663 g, 2.39 mmol, rendimiento de 98%) como un aceite claro. CL-EM (ESI) calculado para Ci6H2oFN02 277.15, encontrado 278.2 [M+H+] (100%) . e) N-{3- [ (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1.02'7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7 - il } -metanosulfonamida (1S, 2R,3S,4R) -3- [ (4-fluorobencil) amino] biciclo [2.2.1] heptano-2 carboxilato de metilo (0.6 g, 2.16 mmol) se disolvió en N, dimetilformamida anhidra (20 mi) . Se agregó ácido (7-metanosulfonilamino-1 , 1-dioxo-l, 4-dihidro-A6-benzo [1, 2,4] tiadiazin-3-il) -acético (US 7,939,524 B2) (0.72 g, 2.16 mmol) seguido de N-metilmorfolina (0.5 mi, 4.54 mmol) . La mezcla se agitó hasta que todo se disolvió, aproximadamente 5 minutos. Se agregó hidrocloruro de 1- (3-dimetilaminopropil ) -3 -etilcarbodiimida (0.435 g, 2.27 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 45 min. Se agregó trietilamina (0.91 mi, 6.48 mmol) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 horas.

Después de enfriar a 25°C, la solución se diluyó con acetato de etilo (300 mi) y se lavó con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (3 x 300 mi), solución acuosa de salmuera saturada (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para producir un aceite dorado. La purificación por cromatografía flash en columna (gel de sílice Merck 60, 40-63 m, de 0 a 0.75% de metanol en diclorometano) proporcionó el producto como espuma blanca. La espuma se disolvió en metanol (10 mi) y el producto se precipitó mediante la adición de solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (20 mi) mientras se agitaba. El sólido se recogió por filtración a vacío y se secó adicionalmente in vacuo para proporcionar el producto deseado N- { 3 - [ (1R,2S, 7R, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4- dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida (0.573 g, 1.02 mmol, 47% de rendimiento) como un polvo blanco 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 1.16 - 1.22 (2H, m) , 1.37 - 1.65 (4H, m) , 2.49 - 2.53 (1H, m) , 2.63 (1H, d, J = 2.3 Hz) , 3.02 (1H, d, J = 8.5 Hz) , 3.05 (3H, s) , 3.52 (1H, d, J = 9.4 Hz), 4.41 (1H, d, J = 15.6 Hz) , 4.95 (1H, d, J = 15.6 Hz) , 7.14 (2H, t, J = 9.0 Hz) , 7.32 (2H, dd, Jx = 8.1 Hz, J2 = 5.7 Hz), 7.50 (1H, dd, Ji = 9.5 Hz, J2 = 2.3 Hz) , 7.55 -7.57 (2H, m) , 10.17 (1H, s) . LC-MS (ESI) calculado para C25H25F 406S2 560.12, encontrado 561.3 [M+H+] (100%) . ee = 90% [análisis por HPLC : Chiralpak AS-RH 2.1 x 150 mm, 5 mieras a temperatura ambiente, Solvente A - Solvente B (ver la tabla para gradiente), 0.3 ml/min, 312 nm, TL = 4.3 minutos (principal), t2 = 6.0 min] .

Alternativamente, N- { 3 - [ ( IR, 2S , 7R, 8S) -3 - (4 -Fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l, 4-dihidro-lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7- il } -metanosulfonamida se pueden preparar de la siguiente manera: (rac-di-exo) -3-aza-triciclo[4.2.1.02'5] nonan-4-ona rac-d\-exo A una solución de biciclo [2.2.1] hept-2-eno (21.29 g, 223.8 mmol) en dietil éter (100 mi) a 0°C se agregó una solución de isocianato de clorosulfonilo (20.0 mi, 225.7 mmol) en dietil éter (40 mi) gota a gota durante 10 minutos. La mezcla se dejó calentar lentamente a 25 °C durante 12 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se agregó una solución de sulfito de sodio (39.16 g, 301.4 mmol) en agua (300 mi) gota a gota con agitación. La mezcla se dejó calentar a 25 °C. A esta mezcla se agregó una solución de hidróxido de potasio acuoso al 10% hasta que el pH alcanzó 7-8. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con dietil éter (2 x 100 mi) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución de salmuera saturada acuosa (100 mi) , se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se concentraron a vacío, y se secaron a alto vacío para producir (raodi-exo) -3-aza-triciclo [4.2.1. O2 5] nonan-4-ona (23.37 g, 170.4 mmol, rendimiento de 76%) como un sólido blanco. ¾ MR (400 MHz, CDC13) d: 1.02 - 1.11 (2H, m) , 1.24 (1H, dt, J2 = 10.9 Hz, J2 = 1.6 Hz) , 1.51 -1.72 (3H, m) , 2.37 - 2.37 (1H, m) , 2.43-2.44 (1H, m) , 2.99-3.00 (1H, m) , 3.40 (1H, d, J = 3.4 Hz) , 5.73 (1H, bs) . g) Hidrocloruro del ácido (rac-di-exo) -3 -amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico rac-d\-exo A (rac-di-exo) -3-aza-triciclo [4.2.1. O2'5] nonan-4 -ona (23.37 g, 170.4 mmol) se agregó solución acuosa de ácido clorhídrico 12.0 M (150 mi). La mezcla se agitó a 25°C durante 12 horas. El solvente se evaporó in vacuo y el compuesto crudo se secó bajo alto vacío durante 0.5 horas. El compuesto crudo se trituró con acetona y se filtró para producir hidrocloruro de ácido (rac-di-exo) -3-amino-biciclo [2.2.1]heptano-2-carboxílico (28.43 g, 148.3 mrnol, rendimiento de 87%) como un sólido blanco. ? NMR (400 MHz, DMSO-ds) d: 1.15 - 1.26 (3H, m) , 1.42-1.59 (2H, m) , 1.87 (1H, d, J = 10.3 Hz) , 2.33 (1H, d, J = 3.4 Hz) , 2.45 (1H, d, J = 2.3 Hz) , 2.67 (1H, d, J = 7.6 Hz), 3.23-3.26 (1H, m) , 7.93 (3H, bs) , 12.73 (1H, bs) . h) Hidrocloruro de etil éster del ácido (rac-di-exo) -3-amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico rac-di-exo A etanol absoluto (75 mi) a -10°C se agregó cloruro de tionilo (4.1 mi, 54.5 mrnol) gota a gota seguido por hidrocloruro del ácido (rac-di-exo) -3-amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico (9.60 g, 50.1 mrnol). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora, a 25°C durante 4 horas, y se calentó a reflujo durante 0.5 horas. La solución se concentró in vacuo y se secó bajo alto vacío para proporcionar hidrocloruro de etil éster del ácido (rac-di-exo) -3-amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico (11.01 g, 50.1 mmol, 100 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. ?? NMR (400 MHz , DMSO-d6) d: 1.17-1.27 (3H, m) , 1.21 (3H, t, J = 7.0 Hz), 1.43-1.57 (2H, m) , 1.91 (1H, d, J = 10.0 Hz) , 2.36 (1H, d, J = 3.9 Hz) , 2.42 (1H, d, J = 3.0 Hz) , 2.72 (1H, d, J = 7.6 Hz), 3.28 (1H, d, J = 8.3 Hz) , 4.00-4.13 (2H, m) , 8.06 (3H, bs) . i) Etil éster del ácido (rac-di-exo) -3 -amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxí1ico A hidrocloruro de etil éster del ácido (rac-di-exo) -3-amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico (11.01 g, 50.1 mmol) se agregó solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (50 mi) y la mezcla se agitó a 25°C durante 0.5 horas. El producto crudo se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi) . La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró, se concentró a vacío y se secó bajo alto vacío durante 2 horas para dar el etil éster del ácido (rac-di-exo) -3 -amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico crudo (8.17 g, 44.6 mmol , rendimiento de 89%) como un aceite marrón. ? NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.10-1.26 (3H, m) , 1.29 (3H, t, J = 7.0 Hz) , 1.45-1.62 (2H, m) , 1.86 (2H, bs) , 1.95 (1H, dt, Jx = 10.3 Hz, J2 = 1.9 Hz) , 2.09 (1H, d, J = 4.5 Hz) , 2.49 (1H, d, J = 4.2 Hz) , 2.56 (1H, d, J = 9.0 Hz) , 3.24 (1H, d, J = 7.7 Hz) , 4.09-4.21 (2H, m) . j) (l'S) - ( + ) -10-camforsulfonato de (IR, 2S, 3R, 4S) -3-etoxicarbonil-biciclo [2.2. 1] hept-2-il -amonio A una solución de etil éster del ácido (rac-di-exo) -3-amino-biciclo [2.2.1] -heptano-2-carboxílico (4.00 g, 21.8 mmol) en acetato de etilo (120 mi) se agregó ácido (lS)-(+)-10 -canforsulfónico (2.57 g, 11.0 mmol) . La mezcla se agitó a 25°C vigorosamente durante 0.5 horas. El sólido (3.23 g, 7.77 mmol) se filtró y se recristalizó en acetato de etilo (360 mi) para producir ( 1 ' S) -(+) -10 -camforsulfonato de (1R,2S,3R,4S) -3-etoxicarbonil-biciclo [2.2.1] hept -2 -il -amonio (2.76 g, 6.64 mmol, rendimiento de 30%) como un sólido blanco. ^ NMR (400 MHz, CDCl3) d: 0.84 (3H, s) , 1.08 (3H, s) , 1.30 (3H, t, J = 6.9 Hz) , 1.32-1.43 (4H, m) , 1.58-1.75 (3H, m) , 1.89 (1H, d, J = 17.7 Hz) , 1.95-2.07 (3H, m) , 2.33 (1H, dt, Ji = 18.4 Hz, J2 = 3.9 Hz), 2.53 (1H, s) , 2.58-2.65 (1H, m) , 2.69 (1H, d, 7 = 2.9 Hz) , 2.76-2.79 (2H, m) , 3.26 (1H, d, J = 14.1 Hz) , 3.60 (1H, d, J = 7.4 Hz) , 4.14-4.27 (2H, m) , 7.80 (3H, bs) . k) Etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3 -amino-biciclo [2.2.1] 2 -heptano-carboxílico A (1' S) - (+) -10-canforsulfonato de (IR, 2S, 3R, 4S) -3-etoxicarbonil-biciclo [2.2.1] hept-2 -il-amonio (2.76 g, 6.64 mmol) se agregó acetato de etilo (28 mi) y solución de carbonato de sodio acuoso saturado (28 mi) y la mezcla se agitó a 25°C durante 0.5 horas. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mi) . La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se concentró in vacuo y se secó a alto vacío durante 1 hora para producir etil éster del ácido ( 1S , 2R, 3S , 4R) -3 -amino-biciclo [2.2.1] 2 -heptano-carboxílico (1.15 g, 6.28 mmol, rendimiento de 95%) como un aceite incoloro 1H NMR (400 MHz, CDC13) d : 1.10-1.26 (3H, m) , 1.29 (3H, t, J = 7.0 Hz) , 1.45-1.62 (2H, m) , 1.86 (2H, bs) , 1.95 (1H, dt , Jj. = 10.3 Hz , J2 = 1.9 Hz) , 2.09 (1H, d, J = 4.5 Hz) , 2.49 (1H, d, J = 4.2 Hz) , 2.56 (1H, d, J = 9.0 Hz) , 3.24 (1H, d, J = 7.7 Hz) , 4.09-4.21 (2H, m) .

Con el fin de determinar el exceso enantiomérico, etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3-amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico fue derivatizado a la sal de (S) -mandelato de la siguiente manera: A una solución de etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3-araino-biciclo[2.2.1]heptano-2-carboxílico (34.2 mg, 0.187 mmol) en acetato de etilo (1 mi) se agregó ácido (S) -a-hidroxifeni lacé tico (28.7 mg, 0.187 mmol) y la mezcla se agitó a 25°C durante 0.5 horas. El sólido se filtró y se secó a alto vacío para producir (S) -a-hidroxifenilacetato de (IR, 2S, 3R, 4S) -3-etoxicarbonil-biciclo[2.2.1]hept-2-il-amonio (11.4 mg, 0.034 mmol, rendimiento de 18%, 97% de de) como un sólido blanco. ½? MR (400 MHz, CDCl3) d: 1.08-1.20 (3H, m) , 1.28 (3H, t., J = 7.1 Hz) , 1.50-1.59 (2H, m) , 1.79 (1H, d, J = 10.9 Hz) , 2.23 (1H, s) , 2.46-2.48 (2H, m) , 3.04 (1H, d, J = 7.8 Hz) , 4.05-4.18 (2H, m) , 4.89 (1H, s) , 5.49 (3H, bs) , 7.22-7.31 (3H, m) , 7.43 (2H, d, J = 6.9 Hz) . 1) Etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3- (4-f luorobenci lamino) -biciclo [2.2.1] -2-heptano-carboxí lico A una solución de etil éster del ácido ( 1S , 2R, 3S , 4R) -3-amino-biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico (1.15 g, 6.28 mmol) en etanol (30 mi) se agregó 4 - f luorobenzaldehído (0.68 mi, 6.31 mmol) , ácido acético glacial (0.4 mi, 6.99 mmol) , y cianoborohidruro de sodio (1.04 g, 15.7 mmol) a 25 °C. Después de agitar durante 3 horas, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y se inactivo con bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 mi) durante 0.5 horas. La mezcla se filtró a través de Celita. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 mi x 2) . Cuando se eliminó todo el solvente, se formó un sólido. El sólido se filtró, se lavó con agua, y se secó bajo vacío para proporcionar etil éster del ácido ( 1S , 2R, 3S , 4R). -3 - (4 -fluorobencilamino) -biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico (1.74 g, 5.97 mmol, rendimiento de 95%) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz , CDC13) d: 1.05-1.16 (2H, m) , 1.21 (1H, dt , Ji = 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz) , 1.27 (3H, t, J = 7.4 Hz) , 1.45-1.61 (2H, m) , 1.94 (1H, dt , Ji = 10.1 Hz, J2 = 1.9 Hz) , 2.28 (1H, d, J = 3.9 Hz) , 2.43 (1H, d, J = 3.3 Hz) , 2.60 (1H, dd, Ji = 8.8 Hz, J2 = 1.5 Hz), 2.94 (1H, d, J = 7.8 Hz), 3.66 (1H, d, J = 13.2 Hz) , 3.80 (1H, d, J = 13.5 Hz) , 4.13 (2H, q, J = 7.0 Hz) , 6.97 (2H, t, J = 8.5 Hz) , 7.26 (2H, t, J = 7.1 Hz) . m) Etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3- {4-fluorobencil ) - [2- (7-metanosulfonilamino-l, 1-dioxo-l, 4-dihidro-1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 -il) -acetil] -amino} -biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico A una solución de etil éster del ácido ( 1S , 2R, 3S , 4R) -3 -(4-fluorobencilamino) -biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxílico (100.6 mg, 0.345 mmol) en N, -dimetilformamida (3.0 mi) se agregó (7-metanosulf oni lamino -1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro-??6-benzo [1, 2,4] tiadiazin-3-il) -acético (USA 7,939,524 B2) (120.8 mg, 0.362 mmol) , 4 -dimetilaminopiridina (10.6 mg, 0.086 mmol) , y 1- [3 - (dimetilamino) propil] -3 -etilcarbodiimida (70.9 mg, 0.362 mmol) . Después de agitar a 25°C durante 12 horas, la mezcla se diluyó con acetato de etilo y se acidificó con solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M a H 1. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 mi) . La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró, se concentró a vacío, y se secó a alto vacío para producir etil éster del ácido (1S, 2R, 3S,4R) -3-{4-fluorobencil) - [2- (7-metanosul f oni lamino- 1,1- dioxo- 1,4- dihidro- 1,1- dioxo- 1,4- dihidro - 1?6 -benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -acetil] -amino} -biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxílico crudo como un aceite ligeramente amarillo. El producto crudo se usó en el siguiente paso sin purificación adicional. LC-MS (ESI) calculado para C27H31F 4O7S2 (M+H+) 607.17, encontrado 607.2. n) N-{3- [IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo- 3 -aza- triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulf onamida una solución de etil éster del ácido ( 1S , 2R, 3S , 4R) { (4-fluorobencil) - [2- (7-metanosulfonilamino-1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -acetil] -amino} -biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxilico (209.3 mg, 0.345 mmol) en etanol absoluto (3 mi) se agregó una solución al 21 % en peso de etóxido de sodio en etanol (0.51 mi, 1.37 mmol) . Después de agitar a 60°C durante 2 horas, la mezcla se diluyó con acetato de etilo y se acidificó con solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M a pH 1. La capa orgánica fue separada y la capa acuosa fue extraída con acetato de etilo (2 x 20 mi) . La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró, y se concentró in vacuo. La mezcla cruda fue purificada por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne CIUO RediSep, 0 a 100% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar N- {3- [IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4-Fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1.02'7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il } -metanosulfonamida (131.5 mg, 0.235 mmol, rendimiento de 68%) como un sólido de color blanco mate. ¾ NMR (400 MHz, MeOH-d4) d: 1.28 (2H, d, J = 11.0 Hz), 1.47 (1H, t, J = 10.8 Hz), 1.57-1.74 (3H, m) , 2.56 (1H, d, J = 3.2 Hz) , 2.75 (1H, d, J = 2.3 Hz) , 2.96 (1H, d, J = 9.2 Hz) , 3.02 (3H, s) , 3.58 (1H, d, J = 9.2 Hz) , 4.42 (1H, d, J = 15.5 Hz), 5.03 (1H, d, J = 15.7 Hz) ,' 7.04 (2H, t, J = 8.5 Hz) , 7.31 (2H, dd, Ji = 7.9 Hz , J2 = 5.5 Hz) , 7.37 (1H, d, J = 8.8 Hz) , 7.54 (1H, dd, J2 = 8.3 Hz, J2 = 2.3 Hz) , 7.69 (1H, d, J = 2.3 Hz). CL-E (ESI) calculado para C25H25FN406S2 (M+H+) 561.13, encontrado 561.4. ee = 98.5% [análisis por HPLC : Chiralpak AS-RH 2.1 x 150 mm, 5 mieras a temperatura ambiente, solvente A - solvente B (Ver la tabla anterior para el gradiente), 0.3 ml/min, 312 nm, ti = 7.58 minutos (principal ) , t2 = 8.95 min] .

Ejemplo 3: (IR, 2S, 7R, 8S) -5- ( 1 , 1-dioxo- 1 , 4 -dihidro-??6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 -il ) -3 - (4 - fluoro-bencil ) -6 -hidroxi -3 -aza-triciclo[6.2.1. O2'7] undec-5-en-4-ona a) etil éster d lfamoil-fenil) -malonámico 2 -Amino-bencenosulfonamida (5 g, 29 mmol) se disolvió en N, N-dimetilacetamida (25 mi) y dietil éter (25 mi) . 3-cloro-3 -oxo-propionato de etilo (4.6 g, 30.45 mmol) se agregó a la solución de reacción anterior. La mezcla de reacción se agitó a 25°C durante 3 horas. El producto comenzó a precipitar y se recogió por filtración al vacío. El sólido se disolvió en acetato de etilo (200 mi) y se extrajo con agua (200 mi) . La capa acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (200 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y se concentraron in vacuo para proporcionar el producto crudo, etil éster del ácido N- (2-sulfamoil-fenil) -malonámico, como un sólido blanco, que se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional 1H NMR (400 MHz, DMS0-d6) d: 1.23 (3H, t, J = 7.0 Hz), 3.61 (2H, S) , 4.14 (2H, cuarteto, J = 7.0 Hz) , 7.29 - 7.33 (1H, m) , 7.53 (2H, bs) , 7.56 - 7.60 (1H, m) , 7.84 - 7.86 (1H, m) , 7.97 - 7.99 (1H, m) , 9.54 (1H, bs) . LC-MS (ESI) calculado para CHH14N2O5S 286.06, encontrado 287.1 [M+H+] . b) ácido ( 1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro-??6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 -il) -acético Hidróxido de sodio sólido (3.48 g, 87 mmol) se disolvió en agua para hacer una solución saturada. El etil éster del ácido N- (2-sulfamoil-fenil) -malonámico crudo se agregó a la solución de hidróxido de sodio. La mezcla de reacción se calentó a 110°C durante 2.5 horas, y después se enfrió a 25°C. La mezcla de reacción se acidificó por adición lenta de una solución acuosa ácido clorhídrico 12.0 M (9.67 g, 116 mmol) mientras se enfriaba en un baño de hielo-agua. El producto precipitó y se recogió por filtración al vacío. El sólido se lavó con agua fría y se secó a alto vacío para dar el producto crudo, ácido (1, 1-dioxo-l, 4 -dihidro-??6-benzo [1, 2,4] tiadiazin-3-il) -acético (5 g, 20.8 mmol, 71.7% en dos pasos), como un sólido blanco. XH NMR (400 MHz, DMS0-d6) d: 3.58 (2H, s) , 7.31 (1H, d, J = 8.0 Hz) , 7.44 (1H, dd, Ji -7.8 Hz, J2 = 7.8 Hz) , 7.67 (1H, dd, Ji = 7.8 Hz , J2 = 7.8 Hz) , 7.79 (1H, d, J = 7.9 Hz) , 12.18 (1H, bs) , 13.03 (1H, bs) . LC-MS (ESI) calculado para C9H8N204S 240.02, encontrado 241.1 [M+H+] . c) Etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3- [ [2-1, 1-dioxo- 1 , 4-dihidro-lX6-benzo [1,2 , 4] tiadiazin-3 -il) -acetil] - (4-fluoro-bencil) -amino] -biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico Ácido (1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -acético (0.2 g, 0.833 mmol) se disolvió en N,N-dimetilformamida anhidra (8 mi) . Se agregó etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) - (4-fluoro-bencilamino) -biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico (preparado como se describió en el Ejemplo 21, 0.244 g, 0.833 mmol) seguido por 1- (3-dimetilaminopropil) -3 -etilcarbodiimida (0.168 g, 0.875 mmol). Después, se agregó N-metilmorfolina (0.177 g, 1.75 mmol) en la mezcla de reacción anterior. La mezcla se agitó a 25°C durante 16 horas. La solución se vertió en una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (100 mi). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mi) . La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar el producto crudo, etil éster del ácido (1S,2R,3S,4R) -3- [ [2 - 1 , 1-dioxo- 1 , -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il ) -acetil] - (4 - fluoro-bencil ) -amino] -biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxílico, como un aceite naranja, que se usó en el siguiente paso sin ninguna purificación adicional. LC-MS (ESI) calculado para C26H28F 3O5S 513.58, encontrado 514.4 [M+H+] . d) (IR, 2S, 7R, 8S) -5- ( 1 , 1-dioxo- 1 , 2 -dihidro-1?-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il) -3 - (4 - fluoro-bencil ) -6-hidroxi -3 -aza-trieicio [6.2.1. O2'7] undec-5-en-4-ona etil éster del ácido ( 1S , 2R, 3S , 4R) -3 - [ [2-1 , 1-dioxo 1, 4-dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il ) -acetil] - (4-fluoro-bencil ) -amino] -biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxílico crudo se disolvió en etanol (8 mi) , y una solución de 21 % en peso de etóxido de sodio en etanol (1.6 mi, 4,2 mmol) se agregó a la solución anterior. La mezcla se agitó a 60 °C durante 4 horas y se dejó enfriar hasta 25°C. La mezcla se vertió en solución acuosa de ácido clorhídrico 0.5 M (100 mi) . El producto comenzó a precipitar y se recogió por filtración al vacío. El precipitado se purificó por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 100% acetato de etilo) para producir el producto deseado, (IR, 2S, 7R, 8S) -5- (1 , 1-dioxo-1 , 2-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3- (4-fluoro-bencil ) -6-hidroxi-3-aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-4-ona, (0.242 g, 0.517 mmol, 62.1% en dos pasos), como un sólido blanco. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) d : 1.16 - 1.22 (2H, m) , 1.40 - 1.60 (4H, m) , 2.51 (1H, bs) , 2.64 (1H, d, J = 2.1 Hz) , 3.03 (1H, d, J = 8.0 Hz) , 3.54 (1H, d, J = 9.3 Hz) , 4.42 (1H, d, J = 15.6 Hz), 4.97 (1H, d, J = 15.7 Hz), 7.15 (2H, t, J = 8.8 Hz), 7.33 (2H, dd, Ji = 8.0 Hz, J2 = 5.9 Hz) , 7.45 -7.53 (2H, m) , 7.67 - 7.71 (1H, m) , 7.85 (1H, d, J = 7.9 Hz) . LC-EM (ESI) calculado para C24H22F 3O S 467.13, encontrado 468.2 [M+H+] . Anal, calculado para C24H22F 3O4S : C, 61.66, H, 4.74, N, 8.99 Encontrado: C, 61.96, H, 4.88, M, 8.99.

El esquema de reacción 3 proporciona un procedimiento específico que se usó para preparar el compuesto 5,6-dihidro-lH-piridin-2-ona del Ejemplo 4.

Esquema de reacción 3 Ejemplo 4: (4aR, 7aS) -N- {3- [1- (4-fluoro-bencil) -4-hidroxi-2-oxo-2 , 4a , 5 , 6 , 7 , 7a-hexahidro- H- [1] iridin- - il] - 1 , 1 -dioxo-1 , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7 - il } -metanosulfonamida a) Hidrocloruro metil éster del ácido ( IR, 2S) -2 -amino-ciclopentanocarboxílico Hidrocloruro del ácido (IR, 2S) -2-amino-ciclopentanocarboxílico (96 mg, 0.58 mmol) se disolvió en una mezcla de benceno y metanol 1:1 (6 mi) . La mezcla se enfrió a 0°C. Se agregó una solución 2.0 M de (trimetilsilil) diazometano en hexanos (0.44 mi, 0.87 mmol) y la reacción se agitó a 25°C durante 30 min. La mezcla se concentró y se secó in vacuo. El producto crudo se usó directamente en el siguiente paso. b) Metil éster del ácido (IR, 2S) -2- (4-fluoro-bencilamino) -ciclopentanocarboxílico A una solución de hidrocloruro de metil éster del ácido (IR, 2S) -2 -amino-ciclopentanocarboxílico (104 mg, 0.58 mmol) en tetrahidrofurano (6 mi) a 25°C se agregó sulfato de magnesio (200 mg) , trietilamina (0.085 mi, 0.61 mmol), y 4-fluorobenzaldehído (0.13 mi, 1.19 mmol) secuencialmente . La reacción se agitó a 25°C durante 16 horas. La mezcla se pasó a través de una almohadilla de celita corta y el filtrado se concentró y se secó in vacuo. El residuo se volvió a disolver en metanol (10 mi) a 25°C. A esta solución se agregó lentamente borohidruro de sodio (45 mg, 1.19 mmol). La mezcla se agitó a 25°C durante 1 hora. Después se vertió en una solución acuosa de bicarbonato de sodio saturada (10 mi) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo (20 mi) . La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para dar un aceite claro. La purificación por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 µp?; 0-15% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, metil éster del ácido (IR, 2S) -2- (4-fluoro-bencilamino) -ciclopentanocarboxílico (116 mg, 0.46 mmol, 79%), como un aceite claro. 1H NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.55 - 1.73 (2H, m) , 1.83 - 1.93 (3H, m) , 1.99 - 2.08 (1H, m) , 2.97 (1H, dd, Ji = 14.4 Hz, J2 = 8.0 Hz) , 3.31 (1H, dd, = 14.4 Hz, J2 = 7.2 Hz) , 3.70 (3H, s) , 3.77 (2H, dd, = 19.6 Hz, J2 = 12.0 Hz) , 4.67 (1H, s), 6.96 - 7.06 (2H, m) , 7.26 - 7.35 (2H, m) . LC-MS (ESI) calculado para CMHa8FN02 251.30, encontrado 252.1 [M+H+] . c) Metil éster del ácido (IR, 2S) -2- (4-fluoro-bencil) - [2- ( 7-metanosulfonilamino-1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -acetil] -amino} ciclopentanocarboxílico Metil éster del ácido ( IR, 2S) - (4 - fluoro-bencilamino) -ciclopentanocarboxílico (106 mg, 0.42 mmol) y ácido (7-metanosulfonilamino-1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1, 2 , 4] tiadiazin-3-il) -acético (preparado como se describió en US 7,939,524 B2 , 140 mg, 0.42 mmol) se disolvieron en una mezcla de diclorometano 1:1 y ?,?'-dimetilformamida (6 mi). Se agregó una solución 1.0 M de N, N' -diciclohexilcarbodiimida en diclorometano (0.46 mi, 0.46 mmol) . La reacción se agitó a 25°C durante 16 horas. La mezcla se concentró in vacuo y se purificó por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 µ?; 0-85% acetato de etilo en hexanos) para proporcionar el producto deseado, metil éster del ácido (IR, 2S) -2- (4-fluoro-bencil) - [2- (7-metanosulfonilamino-l, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il ) -acetil] -amino} ciclopentanocarboxílico (127 mg, 0.22 mmol, 52%), como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz , CDC13) d: 1.80 - 2.22 (6H, m) , 3.07 (3H, s) , 3.24 (1H, dd, = 18.8 Hz, J2 = 8.0 Hz) , 3.32 (1H, dd, = 15.6 Hz, J2 = 8.0 Hz), 3.69 (1H, s) , 4.63 (2H, d, J = 4.8 Hz) , 4.67 - 4.74 (1H, m) , 4.82 - 4.89 (1H, m) , 6.99 -7.14 (5H, m) , 7.51 - 7.64 (2H, m) . LC-MS (ESI) calculado para C24H27F 407S2 566.62, encontrado 567.1 [M+H+] . d) (4aR, 7aS) -N- {3- [1- (4-fluoro-bencil) -4-hidroxi-2-oxo-2 , 4a, 5, 6 , 7, 7a-hexahidro- 1H- [1] piridin-3 -il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7 - il } -metanosulfonamida Metil éster del ácido (IR, 2S) -2- (4-fluoro-bencil) - [2- (7- metanosulfonilamino-1 , 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 -il) -acetil] -amino} ciclopentanocarboxilico (117 mg, 0.21 mmol) se disolvió en etanol (10 ml) . Una solución de 21% peso/peso de etóxido de sodio en etanol (0.17 ml, 0.46 mmol) se agregó y la mezcla se agitó a 60°C durante 4 horas. La reacción se permitió enfriar a 25°C y se inactivo con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (10 ml) . La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml) Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, y se concentraron in vacuo. El material crudo se purificó por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 µt?; 0-5% de metanol en diclorometano) para producir el producto deseado, (4aR, 7aS) -N- {3- [1- (4-fluoro-bencil) -4-hidroxi-2 -oxo-2 , 4a , 5 , 6 , 7 , 7a-hexahidro- 1H- [1] piridin-3 - il] -1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7- il } -metanosulfonamida (80 mg, 0.15 mmol, 71%), como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz , DMSO-d6) d: 1.46 - 1.61 (4H, m) , 1.95 - 2.12 (2H, m) , 3.07 (3H, s) , 3.85 (1H, bs) , 4.48 (1H, bs) , 4.91 (1H, d, J = 14.8 Hz), 7.16 (2H, t, J = 8.4 Hz) , 7.40 (2H, bs) , 7.50 - 7.61 (3H, m) , 10.18 (1H, s) . LC-MS (ESI) calculado para C23H23FN406S2 534.58, encontrado 535.1 [M+H+] . ee = 98% [análisis HPLC: Chiralpak AS-RH 4.6 x 250 mm, 5 mieras a 25°C, 0.7 ml/min, 310 nm, ti = 14.89 min, t2 = 22.20 min (principal)]. aD 40.76 (c = 0.92, diclorometano/metanol 1:1). Anal, calculado para C23H23F O6S2 0.3 ?2?·0.3 EtOAc-0.2 Et20: C, 51.66; H, 4.86; N, 9.64, encontrado C, 51.64; H, 4.90; N, 9.56.

Ejemplo 5: N- [3- (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4-Fluoro-bencil) -6-hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2"7] undec-5-en-5-il) -1, l-dioxo- 1 , 4 -dihidro-??6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il } -metanosulfonamida a) etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3-ciclopentilamino-biciclo [2.2.1] 2 -heptano-carboxílico Ciclopentanona (0.12 mi, 1.38 mmol) se agregó a una solución de etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3-amino-biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxílico (preparado como se describió en el Ejemplo 2k, 230 mg, 1.26 mmol) en metanol anhidro (10 mi) a 25°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar durante 10 min, ácido acético glacial (0.5 mi) y cianoborohidruro de sodio (260 mg, 3.15 mmol) se agregaron secuencialmente , y la mezcla resultante se agitó a 50°C durante 30 min. La mezcla de reacción se vertió en solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución de salmuera acuosa saturada, se secaron sobre sulfato de sodio y se filtraron. El filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el producto deseado, etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3-ciclopentilamino-biciclo [2.2.1] 2-heptano-carboxílico (237 mg, 0.94 mmol, 75%), como un aceite de color amarillo. LC-EM (ESI) calculado para C15H25N02 251.19, encontrado 252.0 [M+H+] . b) N- [3- (IR, 25, 7R, 8S) - 3 -Ciclopentil - 6 -hidroxi -4 -oxo- 3 -aza-triciclo[6.2.1.02'7] undec-5-en-5-il) -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-??6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7- il] -metanosulfonamida A una solución agitada de etil éster del ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3 -ciclopentilamino-biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxílico (150 mg, 0.60 mmol) y ácido (7-metanosulfonilamino-1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro-??6-benzo [1, 2 , 4] tiadiazin-3-il) -acético (preparado como se describe en US 7,939,524 B2 , 181 mg, 0.54 mmol) en N , N - dimet i 1 f ormami da anhidra (5 mi) bajo una atmósfera de nitrógeno, N -me t i lmorfol ina (0.12 mi, 1.08 mmol) e hidrocloruro 1 - ( 3 - dime t i 1 amino ro i 1 ) - 3 - etilcarbodiimida (104 mg, 0.54 mmol) se agregaron secuencialmente . La mezcla se agitó a 25 °C durante 45 minutos, se agregó trietilamina (0.25 mi, 1.76 mmol) y la mezcla resultante se agitó a 50°C durante 60 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a 25°C, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M y solución de salmuera acuosa saturada, se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró. El filtrado se concentró in vacuo y el residuo se purificó por HPLC preparatoria [Columna Luna 5µ C18 (2) 100Á AXIA 150 x 21.2 mm, 5 mieras, 30% -95% en 7 min @ 30 ml/min caudal, ácido trifluoroacético al 0.05% en acetonitrilo/ácido trifluoroacético al 0.05% en agua] para producir el producto deseado, N- [3- (IR, 25, 7R, 8S) -3-Ciclopentil-6-hidroxi-4-oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2-7] ndec- 5 -en-5-il) -1, 1 -dioxo- 1,4-dihidro-lA6-benzo [1 , 2 , 4] tiadiazin-7-il] -metanosul fonamida (80 mg , 0.15 mmol, 26%), como un sólido amarillo. 2? NMR (400 MHz, DMS0-d6) d: 1.20 - 1.65 (8H, m) , 1.75 - 1.95 (6H, m) , 2.42 (1H, s) , 2.60 (1H, s), 2.99 (1H, d, J = 9.2 Hz) , 3.05 (3H, s) , 3.60 (1H, d, J = 9.2 Hz) , 3.93 (1H, m) , 7.48 - 7.58 (3H, m) , 10.17 (1H, s) . LC-MS (ESI) calculado para C23H28N406S2 520.15, encontrada 521.4 [M+H+] .

Ejemplo 6: ( IR, 2S, 7R, 8S) -N- { 3 - [3 - (4 -fluoro-bencil ) -6 -hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2,7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-1, 4-dihidro-lA6-tieno [2,3-e] [1,2,4] tiadiazin-7-ilmetil} -metanosulfonamida a) (IR, 2S, 7R, 8S) -5- (7-Azido- 1 , 1-dioxo- 1 , 4 -dihidro-1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3- (4 - fluoro-bencil ) -6 -hidroxi-3 -aza-triciclo[6.2.1.02.7] undec-5-en-4-ona (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-5- (7-yodo-1 , 1 -dioxo-1 , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] thiadiazin-3 - il) -3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-4-ona (Preparada como se describe en el Ejemplo la, 0.513 g, 0.864 mmol), azida de sodio (1.12 g, 17.2 mmol), ascorbato de sodio (0.086 g, 0.43 mmol), yoduro de cobre (I) (0.16 g, 0.84 mmol), y trans-N, ' -dimetilciclohexano- 1 , 2 -diamina (0.20 mi, 1.27 mmol) se disolvieron en una mezcla 5:1 de sulfóxido de dimetilo y agua (10 mi) a 25°C. El matraz de reacción se desgasificó y se rellenó con nitrógeno (5 x) . Después de agitar a 25°C durante 14 horas, la mezcla de reacción se repartió entre agua (150 mi) y acetato de etilo {2 x 150 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se purificó por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 0 a 60% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar el producto deseado, (1R,2S,7R, 8S) -5- ( 7 -Azido- 1, 1-dioxo-l, 4 -dihidro-??6-benzo [1, 2, 4] tiadiazin-3-il) -3- (4-f luoro-bencil) -6-hidroxi-3-aza-triciclo[6.2.1.02.7]undec-5-en-4-ona (0.348 g, 0.684 mmol, 79%), como una espuma de color marrón oscuro, que se utilizó en la siguiente etapa sin ninguna purificación adicional . b) (IR, 2S, 7R, 8S) -5- (7-Amino-l , 1-dioxo-l , 4 -dihidro-??6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3- (4 - f luoro-bencil ) -6-hidroxi-3-aza- triciclo [6.2.1. O2.7] undec-5-en-4-ona (IR, 2S, 7R, 8S) -5- ( 7 -Azido- 1 , 1 -dioxo- 1 , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3- (4-f luoro-bencil) -6-hidroxi-3-aza-triciclo [6.2.1. O2,7] undec-5-en-4-ona (0.348 g, 0.684 mmol) se disolvió en una mezcla de metanol y acetato de etilo 1:1 (15 mi) a 25°C. Se agregó paladio sobre carbono (0.40 g, 5%, "húmedo") , dando como resultado una suspensión negra. La reacción se mantuvo bajo una atmósfera de hidrógeno (balón) a 25 °C durante 6 horas, y después se filtró a través de celita.

La celita se lavó con acetato de etilo (2 x 30 mi) y el filtrado se concentró in vacuo. El residuo se purificó por cromatografía de columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 50 hasta 100% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar el producto deseado, (0.159 g, 0.330 mmol, 48%), como un sólido de color amarillo pálido. ¾ MR (400 MHz, CDC13) d: 1.08 - 1.19 (3H, m) , 1.40 - 1.57 (3H, m) , 2.99 (1H, d, J = 7.2 Hz) , 3.31 (3H, s) , 3.36 - 3.37 (1H, m) , 3.50 (1H, d, J = 7.8 Hz) , 4.39 (1H, d, J = 14.6 Hz) , 4.93 (1H, d, J = 14.5 Hz) , 6.86 - 6.91 (3H, m) , 7.13 - 7.15 (2H, ra) , 7.21 (1H, d, J = 8.8 Hz) , 7.30 (2H, bs) , 13.79 (1H, s) . LC-MS (ESI) calculado para C24H23FN4O4S 482.14, encontrado 483.4 [M+H+] .

Ejemplo 7: N- { - [ (2S, 7R) -3- (4 - f luoro-bencil ) -6 -hidroxi -4 -oxo-3 -aza- trie i cío [6.2.1. O2"7] dodec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro- lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulf onamida a) ácido (IR, 2R, 3S, 4S) -3- (metoxicarbonil ) biciclo [2.2.1] -2-hept-5-eno carboxílico Este compuesto se preparó como se describe en J. Org.

Chem. 2000, 65, 6984-6991. anhídrido cis-5-norborneno-exo-2 , 3 -dicarboxílico (5 g, 30.45 mmol) se suspendió en una mezcla de tolueno y tetracloruro de carbono 1:1 (150 mi). La mezcla se agitó durante 10 min. Se agregó quinidina (10.9 g, 33.5 mmol) y el matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno. La solución se enfrió a -55°C. Mientras se agitaba, se agregó metanol (3.7 mi, 91.35 mmol) . La mezcla se agitó a -55 °C durante 16 horas. Después de calentar a 25°C, la mezcla se concentró in vacuo hasta una espuma. La espuma se disolvió en una mezcla de acetato de etilo (400 mi) y la solución (400 mi) acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó adicionalmente con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (2 x 100 mi) , solución saturada de salmuera acuosa (100 mi) y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, y se concentraron in vacuo para proporcionar el producto deseado, ácido (1R,2R,3S,4S) -3- (metoxicarbonil ) bicicio [2.2.1] -2-hept-5-eno carboxílico (5.92 g, 30.2 mmol, 99%), como un aceite claro. XH NMR (400 MHz, DMSO- ) d: 1.29 (1H, d, J = 10.2 Hz) , 1.96 (1H, d, J = 8.6 Hz) , 2.47 - 2.49 (2H, m) , 2.93 - 2.94 (2H, m) , 3.51 (3H, s) , 6.15 - 6.20 (2H, m) , 12.15 (1H, s) . b) (1S, 2S, 3R,4R) -3- { [ (benciloxi) carbonil] aminojbiciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxilato de metilo Este intermediario se preparó como se describe en Synthesis 2001, 11, 1719-1730. Ácido ( IR, 2R, 3S , 4S) -3- (metoxicarbonil) biciclo [2.2.1] -2-hept-5-eno carboxílico (5.9 g, 30 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano anhidro (133 mi) . El matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno y la mezcla se enfrió a 0°C. Se agregó trietilamina (12.64 mi, 90 mmol) seguido de la adición gota a gota de cloroformiato de etilo (5.72 mi, 60 mmol) con agitación vigorosa. Se observó la precipitación inmediata. La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora. La azida de sodio (5.86 g, 90 mmol) se disolvió en agua (40 mi) y se agregó a la mezcla de reacción a 0°C. La mezcla se agitó a 0°C durante 5 min. Se retiró el baño de hielo. La mezcla se calentó a 25°C y se continuó agitando durante 2 horas. La mezcla se vertió en agua (300 mi) y el producto se extrajo en acetato de etilo (350 mi) . La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado a la mitad (2 x 100 mi) , solución saturada de salmuera acuosa (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar un aceite de color marrón claro.

El aceite se disolvió en benceno anhidro (66 mi) y se calentó a reflujo mientras se agitaba bajo nitrógeno durante 2 horas. Después de enfriar a 25 °C, la solución se concentró in vacuo para proporcionar un aceite de color amarillo claro. El aceite se disolvió en diclorometano (40 mi) y alcohol bencílico (3.41 mi, 33 mraol) seguido de trietilamina (8.44 mi, 60 mmol) . La mezcla se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante 16 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se concentró in vacuo para producir un aceite espeso. La purificación por cromatografía en columna (gel de sílice Merck 60, 40-63 µp?; Ia columna: 3:1 hexanos/acetato de etilo, 2a columna: 2:4:1 diclorometano/pentano/dietil éter) proporcionó el producto deseado, ( 1S , 2S , 3R, 4R) -3 -{ [ (benciloxi) carbonil] aminojbiciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxilato de metilo (6.195 g, 20.58 mmol, 69%) , como un aceite ligeramente amarillo. ?? NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.60 (1H, d, J = 9.4 Hz) , 1.97 (1H, d, J = 9.3 Hz) , 2.66 (1H, d, J = 7.5 Hz) , 2.75 (1H, s), 2.96 (1H, s) , 3.60 (3H, s) , 4.02 (1H, t, J = 8.9 Hz) , 5.09 (2H, q, J = 10.5 Hz), 5.47 (1H, d, J = 8.8 Hz) , 6.18 - 6.23· (2H, m) , 7.29 - 7.37 (5H, m) . LC-MS (ESI) calculado para C17H19N04 301.13, encontrado 258.1 (100%), 302.2 [M+H+] (70%), 603.4 [2M+H+] (20%). c) Hidrocloruro de (IR, 2R, 3S, 4S) -3-aminobiciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxilato de metilo (1S, 2S, 3R,4R) -3- { [ (benciloxi) carbonil] aminojbiciclo [2.2.1] hept-5-eno-2 -carboxilato de metilo (1 g, 3.32 mmol) se disolvió en acetato de etilo (15 mi) . Se agregó paladio sobre carbono al 5% (120 mg) . El matraz se desgasificó y se rellenó con gas hidrógeno vía globo. La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 horas. La mezcla se pasó a través de un tapón de celita y el filtrado se concentró in vacuo para producir un aceite transparente espeso. El aceite se disolvió en dietil éter (10 mi) y se agregó gota a gota, con agitación vigorosa, a una mezcla de solución de ácido clorhídrico 4.0 M en 1,4-dioxano (1.8 mi, 7.2 mmol) en dietil éter (18 mi). El producto deseado comenzó a precipitar como un sólido blanco. Se agregó dietil éter adicional (10 mi) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. El precipitado se recogió por filtración a vacío y se lavó con dietil éter adicional (2 x 8 mi) . El sólido se secó adicionalmente in vacuo durante 1 hora para producir el producto deseado, hidrocloruro de ( IR, 2R, 3S , 4S) -3-aminobiciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxilato de metilo (0.554 g, 2.7 mmol, 81%), como un polvo blanco. 1H NM (400 MHz , DMSO- d6) d: 1.18 - 1.27 (3H, m) , 1.37 - 1.61 (2H, m) , 1.90 (1H, d, J = 11.0 Hz), 2.35 (1H, d, J = 3.8 Hz) , 2.44 (1H, d, J = 3.1 Hz) , 2.75 (1H, d, J = 8.7 Hz) , 3.29 - 3.34 (1H, m) , 3.61 (3H, s) , 8.03 (3H, bs) . LC-MS (ESI) calculado para (¾??5 02 (amina libre) 169.11, encontrado 170.3 [M+H+] (100%), 339.3 [2M+H*] (50%). d) (1R,2S,3R,4S) -3- [ (4-fluorobencil) amino] biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo Hidrocloruro (IR, 2S, 3R, 4S) -3-aminobiciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo (0.5 g, 2.43 mmol) se disolvió en metanol (12 mi) . Se agregó acetato de sodio (0.4 g, 4.86 mmol) seguido de tamices en polvo moleculares de 4Á (0.5 g) y 4-fluoro-benzaldehído (0.302 g, 2.43 mmol). Se agregó cianoborohidruro de sodio (0.305 g, 4.86 mmol) y la mezcla se agitó a 25°C durante 3 horas. La mezcla se vertió en acetato de etilo (300 mi) y se agitó con solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado (200 mi) . Las dos capas se pasaron a través de un tapón de celita. La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (100 mi), solución acuosa de salmuera saturada (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para producir el producto crudo, (IR, 2S, 3R, 4S) -3- [ (4 -fluorobencil) amino] biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo (0.675 g, 2.43 mmol, 99%), como un aceite claro. LC-MS (ESI) calculado para Ci6H2oFN02 277.15, encontrado 278.2 [M+H+] . e) N-{3- [ (1S, 2R, 7S, 8R) -3- (4-Fluoro-bencill) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1. O2.7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l , 4 -dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin- 7 - il } -metanosulfonamida (IR, 2S, 3R,4S) -3- [ (4-fluorobencil) amino] biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo (0.6 g, 2.16 mmol) se disolvió en N, -dimetilformamida anhidra (20 mi). Ácido (7-metanosulfonilamino-l, 1-dioxo-l, 4-dihidro- lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il) -acético (preparado como se describe en US 7,939,524 B2 , 0.72 g, 2.16 mmol) seguido de N-metilmorfolina (0.5 mi, 4.54 mmol) . La mezcla se agitó hasta que todo se disolvió, aproximadamente 5 minutos. 1- (3-dimetilaminopropil) -3 -etilcarbodiimida (0.435 g, 2.27 mmol) se agregó y la mezcla , se agitó a 25°C durante 45 minutos. Se agregó trietilamina (0.91 mi, 6.48 mmol) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se diluyó con acetato de etilo (300 mi) y se lavó con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (3 x 300 mi) , solución acuosa de salmuera saturada (100 mi), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para producir un aceite dorado. La purificación por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 µp?, 0 a 0.75% de metanol en diclorometano) proporcionó el producto como espuma blanca. La espuma se disolvió en metanol (10 mi) y el producto se precipitó mediante la adición de solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (20 mi) mientras se agitaba. El sólido se recogió por filtración a vacío y se secó adicionalmente in vacuo para producir el producto deseado, N- {3- [ (1S, 2R, 7S, 8R) -3- (4-Fluoro-bencill) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1. O2.7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-benzo [1, 2 , 4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida (0.592 g, 1.06 mmol, 49%), como un polvo blanco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 1.15 - 1.22 (2H, m) , 1.39 - 1.61 (4H, m) , 2.49 - 2.55 (1H, m) , 2.62 - 2.63 (1H, m) , 3.02 (1H, d, J = 9.8 Hz), 3.05 (3H, s) , 3.52 (1H, d, J = 9.3 Hz), 4.41 (1H, d, J = 15.5 Hz) , 4.95 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.14 (2H, t, J = 8.7 Hz) , 7.32 (2H, dd, Jx = 8.2 Hz, J2 = 5.7 Hz) , 7.50 (1H, dd, Jx = 8.4 Hz, J2 = 2.4 Hz) , 7.55 - 7.57 (2H, m) , 10.17 (1H, s). LC-MS (ESI) calculado para C25H25FN406S2 560.12, encontrado 561.3 [M+H+] . ee = 96% [análisis por HPLC : Chiralpak AS-RH 2,1 x 150 mm, 5 mieras a temperatura ambiente, Solvente A - Solvente B (ver la tabla anterior para el gradiente) , 0.3 ml/min, 312 nm, t = 4.3 min, t2 = 6.0 minutos (principal)] .

El esquema de reacción 4a proporciona un procedimiento específico que se usó para preparar el intermediario amida del ácido 2-amino-4- (metanosulfonilamino-metil ) -tiofeno-3- sulfónico .

Esquema de reacción 4a El esquema de reacción 4b proporciona un procedimiento específico que se usó para preparar el compuesto 5,6-dihidro- LH-piridin- 2 -ona del Ejemplo 8.

Esquema de reacción 4b Ejemplo 8:. (IR, 2S, 7R, 8S) -N- {3- [3- (4-fluoro-bencil) -6-hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec-5-en-5-il] -1,1-dioxo-1, 4-dihidro-lA6-tieno [2,3-e] [1,2,4] tiadiazin-7-ilmetil } -metanosulfonamida a) Etil éster del ácido 4-bromo-tiofeno-3-carboxílico Cloruro de isopropilmagnesio (263 mi de una solución 2.0 M en tetrahidrofurano, 0.527 mol) se agregó mediante una cánula durante 35 minutos a una solución de 3,4-dibromo-tiofeno (102 g, 0.421 mol) en tetrahidrofurano (600 mi) a 0°C. La mezcla se dejó calentar a 25°C y se agitó a esa temperatura durante 18 horas. Se agregó agua (25 mi) , y la mezcla se agitó a 25°C durante 15 minutos, y después se concentró in vacuo a -200 mi de volumen. El concentrado se repartió entre una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (400 mi) y acetato de etilo (2 x 350 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo para producir el producto crudo, etil éster del ácido 4 -bromo-tiofeno-3 -carboxílico (91.9 g, 0.391 mol, 93%), como un aceite amarillo/marrón. XU NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.40 (3H, t, 7 = 7.5 Hz) , 4.36 (2H, q, J = 7.3 Hz) , 7.31 (1H, d, J = 3.9 Hz) , 8.10 (1H, d, J = 3.0 Hz) . b) Etil éster del ácido 4-bromo-5-nitro-tiofeno-3-carboxílico Etil éster del ácido 4-bromo-tiofeno-3-carboxílico (97.6 g, 0.415 mol) se agregó durante 10 min mediante una pipeta a ácido sulfúrico 18.0 M (660 mi) a 0°C. Después de agitar 5 minutos a 0°C, ácido nítrico fumante (18 mi) disuelto en ácido sulfúrico 18.0 M (130 mi) se agregó mediante un embudo de adición durante 30 minutos. Después de que se completó la adición, la mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos a 0°C, y después se vertió sobre hielo (3.5 kg) . El precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó secuencialmente con agua (300 mi), solución acuosa de bicarbonato de sodio al 10% (400 mi) y agua (300 mi) . El sólido marrón/amarillo así obtenido se secó en un horno de vacío durante la noche a 40°C para proporcionar el producto crudo, etil éster del ácido 4-bromo-5-nitro-tiofeno-3-carboxílico (97.9 g, 0.350 mol, 84%). Este material se purificó adicionalmente por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 µt?; 25% de hexanos en diclorometano) en porciones de 20 g antes de su uso en el siguiente paso (recuperación = 80-90%) . 1H NMR (400 MHz , DMSO-d6) d: 1.31 (3H, t, J = 7.0 Hz) , 4.30 (4H, q, J = 7.0 Hz) , 8.68 (1H, s) . c) Etil éster del ácido 4 -Bencilsulfanil-5-nitro-tiofeno-3 -carboxílico Una solución acuosa de carbonato de potasio (9.90 g, 71.6 mraol, disuelto en 40 mi de agua) se agregó a una suspensión de etil éster del ácido 4-bromo-5-nitro-tiofeno-3-carboxílico (20.06 g, 71.6 mmol ) en etanol a 25°C. Se agregó mercaptano de bencilo (8.41 mi, 71.6 mmol) mediante una pipeta, y la mezcla de reacción de color rojo oscuro se agitó a 25 °C durante 4 horas y después se concentró in vacuo a casi sequedad. El sólido naranja-marrón restante se trituró con agua (200 mi) y se recogió por filtración. Después de lavar con agua (200 mi) , el sólido resultante se secó al aire durante la noche para proporcionar el producto deseado, etil éster del ácido 4-Bencilsulfanil-5-nitro-tiofeno-3-carboxílico (22.63 g, 70.0 mmol, 98%), como un sólido amarillo/marrón. XH NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.41 (3H, t, J = 7.1 Hz), 4.25 (2H, s), 4.39 (2H, q, J = 7.0 Hz), 7.18 - 7.23 (5H, m) , 8.07 (1H, s) . d) (3-Í1-4 Bencilsulfan-5-nitro-tiofen- ) -metanol Se agregó hidruro de diisobutilaluminio (154 mi de una solución 1.0 M en diclorometano, 154 mmol) mediante una cánula durante 25 min a una solución de etil éster del ácido 4-bencilsulfanil-5-nitro-tiofeno-3-carboxílico (22.63 g, 70.0 mmol) a -50°C. La mezcla de reacción se agitó a -50°C durante 2 horas, después se calentó a 0°C y se mantuvo a esa temperatura durante 35 minutos. Se agregó agua (200 mi) mediante un embudo de adición durante 15 minutos y la suspensión resultante se calentó a 25 °C después de lo cual se agregaron agua adicional (200 mi) y ácido D/L-tartárico (20 g) . Después de agitar vigorosamente a 25 °C durante 30 minutos, la mezcla de reacción se repartió entre una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (300 mi) y diclorometano (2 x 400 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. La purificación del residuo por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 µt?; 10-50% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, (tiofen-4-bencilsulfanil-5-nitro-3-il) -metanol (10.52 g, 37.4 mmol, 53%) , como un aceite de color marrón oscuro, ""? NMR (400 MHz, CDC13) d: 4.21 (2H, s) , 4.40 (2H, s) , 7.09 - 7.12 (1H, m) , 7.21 - 7.24 (4H, m) , 7.39 (1H, s) . e) Boc-N- (tiofen-4-bencilsulfanil-5-nitro-3-ilmetil) -metanosulfonamida Trietilamina (22.0 ml , 158 mmol) , dicarbonato de di-ter-butilo (27.5 g, 126 mmol) , y 4 - (N, N-dimetilamino) iridina (1.28 g, 10.5 mmol) se agregaron secuencialmente a una solución de metanosulfonamida (10.0 g, 105 mmol) en diclorometano (300 ml) a 25°C. La mezcla se agitó a '25°C durante 2 horas, y después se concentró in vacuo a -40 ml de volumen. Se agregó acetato de etilo (350 ml) y la mezcla se lavó con solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (300 ml) . La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (250 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo para producir Boc-N-metanosulfonamida (17.1 g, 87.6 mmol, 83%) como un sólido blanco. ¾ NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.53 (9H, s) , 3.27 (3H, s).

Boc-N-metanosulfonamida (11.0 g, 56.3 mmol), trimetilfosfina (56.1 ml de una solución 1.0 M en tetrahidrofurano , 56.1 mmol), y una solución de 40 % en peso de azodicarboxilato de dietilo en tolueno (25.6 ml , 56.0 mmol) se agregaron secuencialmente a una solución de (tiofen- 4-bencilsulfanil-5-nitro-3-il) -metanol (10.52 g, 37.4 mmol) en tetrahidrofurano (300 mi) a 25°C. La mezcla se agitó durante 3.5 horas a 25°C, y después se concentró in vacuo. La purificación del residuo por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 pm; 20% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, Boc-N- (tiofen-4-bencilsulfanil-5-nitro-3-ilmetil) -metanosulfonamida (9.79 g, 21.3 mmol, 57%), como un aceite de color marrón oscuro. ? NMR (400 Hz, CDCI3) d: 1.50 (9H, s) , 3.29 (3H, s), 4.19 (2H, s) , 4.68 (2H, s) , 7.15 - 7.18 (2H, m) , 7.22 - 7.25 (3H, m) , 7.40 (1H, s) . f ) Amida de ácido Boc-4- (metanosulfonilamino-metil ) -2-nitro-tiofeno-3-sulfónico Boc-N- (tiofen-4 -bencilsulfanil -5-nitro-tiofen-3 -ilmetil) -metanosulfonamida (4.90 g, 10.7 mmol) se disolvió en diclorometano (65 mi) y la solución de color marrón oscuro se enfrió a 0°C. Después se agregó una mezcla de ácido acético glacial (15 mi) y agua (20 mi) lentamente, produciendo una mezcla bifásica. Se burbujeó gas cloro a través de esta mezcla a 0°C durante 5 minutos usando una pipeta. La mezcla bifásica de color amarillo resultante se agitó a 0°C durante 35 minutos adicionales, después se vertió en un embudo de separación y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (1 x 50 mi) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (1 x 50 mi) , se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo a -25 mi de volumen. Heptano (80 mi) después se agregó a esta solución mediante un embudo de adición durante 30 min. El precipitado de color naranja resultante se recogió por filtración, se lavó con heptano (2 x 20 mi) , y se secó al aire para dar Boc-4 - (metanosulfonilamino-metil ) -2 -nitro-tiofeno-3-sulfonilo (2.45 g, 5.63 mmol , 53%) .

Solución acuosa de hidróxido de amonio concentrado (3 mi) se agregó a una solución de Boc-4 - (metanosulfonilamino-metil) -2-nitro-tiofeno-3-sulfonilo (3.30 g, 7.59 mmol) en acetonitrilo (90 mi) a 0°C. La mezcla se agitó a 0°C durante 45 minutos, y después se repartió entre una solución semi-saturada de bicarbonato de sodio acuoso (150 mi) y acetato de etilo (2 x 150 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. La purificación del residuo por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco ediSep; 20-90% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, amida del ácido Boc-4- (metanosulfonilamino-metil ) -2-nitro-tiofeno-3 -sulfónico (2.64 g, 6.35 mmol, 84%), como un sólido amarillo. 1?? NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.54 (9H, s) , 3.35 (3H, s) , 5.12 (2H, s) , 5.81 (2H, bs) , 7.61 (1H, s). g) Amida del ácido 4- (metanosulfonilamino-metil) -2-nitro-tiofeno-3-sulfónico Cloruro de hidrógeno (20 mi de una solución 4.0 M en 1,4-dioxano) se agregó a una solución de amida del ácido Boc-4- (metanosulfonilamino-metil ) -2-nitro-tiofeno-3-sulfónico (0.600 g, 1.44 mmol) en 1,4-dioxano (10 mi) a 25°C. La mezcla se agitó a 25°C durante 18 horas, y después se repartió entre una solución semi -saturada de bicarbonato de sodio acuoso (150 mi) y acetato de etilo (2 x 150 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. La purificación del residuo por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 60-100% acetato de etilo en hexanos) proporcionó un aceite de color amarillo. Este material se trituró con diclorometano para dar un sólido amarillo que se recogió por filtración para proporcionar el producto deseado, amida del ácido 4- (metanosulfonilamino-metil) -2-nitro-tiofeno-3-sulfónico (0.400 g, 1.27 mmol, 88%) XH NMR (400 MHz, DMSO-d6 d: 2.96 (3H, s) , 3.31 (2H, s) , 4.35 (1H, d, J = 5.4 Hz) , 7.61 (1H, t, J = 6.2 Hz) , 7.85 (1H, s) , 7.87 (2H, bs) . h) Amida del ácido 2-amino-4- (metanosulf onilamino-metil) - tiof eno-3 -sulf ónico Paladio sobre carbono (10%, 0.150 g, en seco) se agregó a una solución de amida del ácido 4- (metanosulf onilamino-metil) -2-nitro-tiofeno-3-sulfónico (0.156 g, 0.495 mmol) en tetrahidrof urano (12 mi) a 25° C. El matraz se desgasificó y se rellenó con gas hidrógeno a través de globo y la mezcla se agitó bajo una presión positiva de hidrógeno (2 globos) durante 17 horas. Después, la mezcla se filtró a través de celita y la celita se lavó con tetrahidrofurano (3 x 20 mi) . El filtrado combinado y los lavados se concentraron in vacuo para proporcionar el producto crudo, amida del ácido 2-amino-4-(metanosulfonilamino-metil) -tiofeno-3-sulfónico, como un aceite amarillo. Este material se utilizó en las transformaciones sintéticas posteriores sin purificación adicional.

Etil éster del ácido (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4-Fluoro-bencil) hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1.02.7] undec-5-eno-5-carboxílico agregó trietilamina (4.22 mi, 30.3 mmol) y cloruro de etil malonilo (1.91 ml( 15.2 mmol) se agregaron secuencialmente a una solución de etil éster del ácido (1S, 2R, 3S,4R) -3- (4 - fluorobencilamino) -biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxílico (preparado como se describió en el Ejemplo 21, 4.21 .g, 14.4 mmol) en diclorometano a 25°C. La mezcla se agitó a 25°C durante 1 hora, y después se repartió entre solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (150 mi) y acetato de etilo (2 x 150 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo para proporcionar un aceite de color amarillo/naranja .

Este material se disolvió en etanol absoluto (80 mi) a 25 °C y se agregó una solución de 21 % en peso de etóxido de sodio en etanol (14.0 mi, 43.2 mmol) . La mezcla se calentó a 60°C durante 45 minutos, y después se dejó enfriar a 25°C. Después, la mezcla se concentró in vacuo y el sólido naranja/marrón resultante se repartió entre solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (150 mi) y acetato de etilo (2 x 150 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. La purificación del residuo por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 10-80% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, etil éster del ácido (IR, 2S,7R,8S)-3- (4-fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-eno-5-carboxílico, como un aceite de color amarillo pálido. Este material se usó directamente en el siguiente paso sintético. q) (lR,2S,7R,8S)-3- (4 -fluoro-bencil ) -6 -hidroxi -3 -aza-triciclo[6.2.1.02.7] undec-5-en-4-ona Etil éster del ácido (1R,2S,7R,8S) -3 - (4-Fluoro-bencil) - 6 - hi droxi - 4 - oxo - 3 - aza -t ri c i c lo [ 6.2.1. O2 ' 7 ] undec -5-eno-5-carboxílico se suspendió en una mezcla l/l de 1,4-dioxano y solución acuosa de ácido sulfúrico 1.0 M (200 mi). La mezcla se calentó a 110°C durante 40 min, y después se dejó enfriar a 25°C. La mezcla enfriada se vertió en un embudo de separación y se extrajo con acetato de etilo (2 x 150 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo para proporcionar un sólido de color blanco. Este material se trituró con hexanos y se recogió por filtración, se lavó con hexanos (2 x 15 mi) y se secó al aire para dar el producto deseado, (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4-fluoro-bencil) -6 -hidroxi-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2.7] undec-5-en-4 -ona (2.24 g, 7.80 mmol, 54% en tres pasos), como un sólido blanco. 1H NMR (tautómero principal, 400 MHz , CDC13) d: 1.11 -1.16 (1H, m) , 1.20 - 1.39 (3H, m) , 1.57 - 1.69 (2H, m) , 2.53 (1H, d, J = 8.4 Hz) , 2.63 (1H, bs) , 2.73 (1H, bs) , 3.39 (1H, d, J = 4.1 Hz), 3.51 (1H, d, J = 9.5 Hz) , 4.29 (1H, d, J = 14.9 Hz) , 5.20 (1H, d, J = 14.9 Hz) , 6.98 - 7.04 (2H, m) , 7.19 - 7.24 (2H, m) . r) ( IR, 2S , 7R, 8S) -N-{3- [3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-tieno [2,3-e] [1,2,4] tiadiazin-7-ilmetil } -metanosulfonamida N, N-diisopropiletilamina (0.974 mi, 5.59 mi) y sal de tetrafluoro de borato (bis-metilsulfanil-metilen) -metil-sulfonio (preparada como se describe en WO 2008/011337, 0.466 g, 1.94 mmol) se agregaron secuencialmente a una solución de (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4 - fluoro-bencil ) -6-hidroxi-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec-5-en-4-ona (0.197 g, 0.686 mmol) en 1,4-dioxano (50 mi) a 25°C. La mezcla de color naranja se agitó a 25°C durante 2 horas, y después se repartió entre agua (100 mi) y acetato de etilo (2 x 100 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo para producir un aceite naranja.

Este material se disolvió en acetonitrilo (8 mi) y se agregó a una solución de amida del ácido 2-amino-4-(metanosulfonilamino-metil) -tiofeno-3-sulfónico (descrito anteriormente; Ejemplo 8h, 0.495 mmol) en acetonitrilo (4 mi) a 85°C. La mezcla se mantuvo a 85°C durante 4 días, después se dejó enfriar a 25°C y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparatoria [columna Thomson ODS-A 100Á 5µ, 150 x 21.2 mm, 30% -100% en 11.5 minutos @ 22 ml/min caudal, ácido trifluoroacético al 0.05% en acetonitrilo/ácido trifluoroacético al 0.05% en agua] para producir el producto crudo. La purificación de este material por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 50-100% acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado (IR, 2S, 7R, 8S) -N- {3- [3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-trieicio [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-tieno [2 , 3-e] [1 , 2 , 4] tiadiazin-7-ilmetil} -metanosulfonamida (0.060 g, 0.103 mmol, 21%), como un sólido de color blanco mate XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 0.84 - 0.90 (1H, m) , 1.08 - 1.60 (5H, m) , 1.99 (1H, s) , 2.61 (1H, bs) , 2.96 (3H, s), 3.50 (1H, d, J = 9.4 Hz) , 3.96 - 3.99 (1H, m) , 4.24 (1H, d, J = 5.7 Hz) , 4.38 (1H, d, J = 14.8 Hz) , 4.93 (1H, d, J = 15.7 Hz) , 7.11 - 7.16 (2H, m) , 7.27 (1H, s) , 7.29 - 7.33 (2H, m) , 7.65 (1H, t, J = 5.9 Hz). LC-MS (ESI) calculado para C24H25FN406S3 580.09, encontrado 581.1 [M+H+] .

Ejemplo 9: N- {3- [ (2S, 7R) -3- (4-fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3 -aza- triciclo [6.2.1. O2'7] dodec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida a) 4-oxa-triciclo [5.2.2.2 6] undecano-3 , 5-diona 4-oxa-triciclo [5.2.2.2 6] undec-8-eno-3 , 5-diona (4.00 g, 22.45 mmol) se disolvió en acetato de etilo (100 mi) . Se agregó paladio al 10% sobre carbono (400 mg) . El matraz se desgasificó y se rellenó con gas hidrógeno vía globo. La mezcla se agitó a 25°C durante 16 horas. La mezcla se pasó a través de un tapón de celita y el filtrado se concentró a vacío para proporcionar un aceite transparente espeso. La purificación por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 0 a 30% acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, 4-oxa-triciclo [5.2.2.2 6] undecano-3 , 5-diona (2.92 g, 16.20 mmol, 72%) , como un polvo blanco. ? NMR (400 MHz, DMS0-d6) d: 1.55 - 1.64 (6H, m) , 1.76 (2H, d, J = 9.2 Hz) , 2.25 (2H, s) , 3.11 (2H, s) . LC-MS (ESI) calculado para Ci0H12O3 180.20, encontrado 181.0 [M+H+] . b) Monometil éster del ácido (2S, 3R) - Biciclo [2.2.2] octano-2 , 3 -dicarboxílico 4-oxa-triciclo [5.2.2.2 6] undec-3 , 5-diona (0.90 g, 4.99 mmol) se disolvió en tolueno (50 mi) y tetracloruro de carbono (50 mi) . Se agregó quinina (1.78 g, 5.49 mmol) y la mezcla se enfrió a -55°C. Se agregó metanol (0.61 mi, 14.97 mmol) gota a gota a la mezcla anterior. La reacción se agitó a -55°C durante 18 horas. La reacción se calentó a 25°C y se concentró in vacuo. El material crudo se disolvió en acetato de etilo (50 mi) y se lavó con solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (2 x 40 mi). La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución acuosa de salmuera saturada (20 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para producir un aceite claro. La purificación por cromatografía de columna flash (columna de f Teledyne Isco RediSep; 0 a 50% de acetato de etilo en hexanos produjo el producto deseado monometil éster del ácido (2S, 3R) -Biciclo [2.2.2] octano-2 , 3 -dicarboxílico (1.10 g, 5.18 mmol, 92%), como un aceite claro XH NMR (400 Hz, DMSO-d6) d: 1.31 (2H, dd, Ji = 20.0 Hz, J2 = 12.4 Hz) , 1.52 - 1.54 (4H, m) , 1.63 (1H, t, J = 10.4 Hz) , 1.75 (1H, t, J = 9.6 Hz) , 1.87 (2H, bs) , 2.84 (2H, dd, Ji = 29.6 Hz , J2 = 10.8 Hz), 3.52 (3H, s) , 12.01 (1H, s) . LC-MS (ESI) calculado para CuH1604 212.24, encontrado 213.1 [M+H+] . c) Metil éster del ácido (2R,3S)-3-benciloxicarbonilamino-biciclo [2.2.2] octano-2 -carboxílico (Monometil éster del ácido 2R, 3S) -biciclo [2.2.2] octano-2 , 3 -dicarboxilico (1.01 g, 4.76 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano anhidro (20 ml) . El matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno y la mezcla se enfrió a 0°C. Se agregó trietilamina (1.99 ml, 14.28 mmol) seguida por la adición gota a gota de cloroformiato de etilo (0.91 ml, 9.52 mmol) con agitación vigorosa. La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora. La azida de sodio (0.93 g, 14.28 mmol) se disolvió en agua (5 ml) y se agregó a la mezcla de reacción a 0°C. La mezcla se agitó a 0°C durante 5 minutos. Se retiró el baño de hielo. La mezcla se calentó a 25°C y se agitó durante 2 horas. La mezcla se vertió en agua (50 ml) y el producto se extrajo en acetato de etilo (50 ml) . La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución acuosa de bicarbonato de sodio saturada a la mitad (2 x 20 ml) , solución acuosa de salmuera saturada (20 ml), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para dar un aceite claro. El aceite se disolvió en benceno anhidro (10 ml) y se calentó a reflujo mientras se agita bajo nitrógeno durante 2 horas. Después de enfriar a 25 °C, la solución se concentró in vacuo para producir un aceite ligeramente amarillo. El aceite se disolvió en diclorometano (10 mi) y alcohol bencílico (0.54 mi, 5.24 mmol) seguido de trietilamina (1.33 mi, 9.52 mmol) . La mezcla se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante 16 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se concentró in vacuo para producir un aceite dorado.

La purificación por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 0 a 20% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, metil éster del ácido (2R, 3S) -3 -benciloxicarbonilamino-biciclo [2.2.2] octano-2-carboxílico (0.58 g, 1.83 mmol, 38%), como un aceite claro. 1H NMR (400 MHz , CDC13) d: 1.18 - 1.28 (2H, m) , 1.42 - 1.50 (5H, m) , 1.73 - 1.96 (3H, m) , 2.88 (1H, d, Jj = 5.6 Hz) , 3.27 (1H, s) , 3.42 (3H, s) , 4.00 - 4.04 (1H, m) , 4.97 (2H, dd, Ji = 46.4 Hz, J2 = 12.8 Hz), 7.06 (1H, d, J = 9.6 Hz) , 7.24 - 7.34 (4H, m) . LC-MS (ESI) calculado para Ci8H23N04 317.38, encontrado 317.9 [M+H+] . d) Hidrocloruro metil éster del ácido (2R, 3S) -3 -amino-biciclo[2.2.2] octano- 2 -carboxíl ico Metil éster del ácido (2R, 3S) -3-Benciloxicarbonilamino- biciclo [2.2.2] octano-2 -carboxílico (0.57 g, 1.79 mmol) se disolvió en acetato de etilo (20 mi) . Se agregó paladio al 10% sobre carbono (60 mg) . El matraz se desgasificó y se rellenó con gas hidrógeno vía globo. La mezcla se agitó a 25°C durante 16 horas. La mezcla se pasó a través de un tapón de celita y el filtrado se concentró in vacuo para producir un aceite transparente espeso. El aceite se disolvió en dietil éter (6 mi) y se agregó gota a gota con agitación vigorosa a una mezcla de solución de ácido clorhídrico 4.0 M en 1,4-dioxano (1.02 mi) y dietil éter (10 mi) . El producto deseado comenzó a precipitar como un sólido blanco. La mezcla se agitó durante 20 minutos. El precipitado se recogió por filtración en vacío y se lavó con dietil éter adicional (5 mi) . El sólido se secó adicionalmente en vacío durante 1 hora para proporcionar el producto deseado, hidrocloruro metil ester del ácido (2R, 3S) -3-amino-biciclo [2.2.2] octano-2-carboxílico (0.33 g, 1.50 mmol, 84%) , como un polvo blanco. 2H NMR (400 MHZ , DMS0-d6) d: 1.38 (2H, dd, Ji = 21.2 Hz , J2 = 13.6 Hz) , 1.55 - 1.63 (5H, m) , 1.76 - 1.89 (3H, ra), 3.02 (1H, dd, Ji = 10.0 Hz, J2 = 2.4 Hz) , 3.47 (1H, bs) , 3.65 (3H, s), 7.97 (3H, s) . LC-MS (ESI) calculado para C10Hi7N02 (amina libre) 183.25, encontrado 184.2 [M+H+] . e) Metil éster del ácido (2R, 3S) -3- (4-fluoro-bencilamino) -biciclo [2.2.2] octano-2-carboxílico Hidrocloruro metil ester del ácido (2R, 3S) -3 -amino-biciclo [2 , 2 , 2] octano-2-carboxílico (0.34 g, 1.54 mmol) se disolvió en metanol (10 mi) . Se agregó acetato de sodio (0.25 g, 3.08 mmol) seguido por tamices moleculares en polvo de 4Á (0.34 g) y 4 -fluoro-benzaldehído (0.16 mi, 1.54 mmol). Se agregó cianoborohidruro de sodio (0.19 g, 3.08 mmol) y la mezcla se agitó a 25°C durante 16 horas. La mezcla se vertió en una mezcla de solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (20 mi) y acetato de etilo (30 mi) . Después de agitar, ambas capas se pasaron a través de un tapón de Celita. La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (10 mi), solución acuosa de salmuera saturada (10 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar el producto crudo, metil éster del ácido (2R, 3S) -3- (4 -fluoro-bencilamino) -biciclo [2.2.2] octano-2 -carboxílico (0.32 g, 1.11 mmol, 72%), como un aceite claro. LC-MS (ESI) calculado para Ci7H22FN02 291.36, encontrado 292.2 [M+H+] . f ) N-{3- [ (2S, 7R) -3- (4-Fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.2. O2-7] dodec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7 - il } -metanosulfonamida Se agregó metil éster del ácido (2R, 3S) -3- (4-fluoro-bencilamino) -biciclo [2.2.2] octano-2 -carboxilico (93 mg, 0.32 mmol) se disolvió en , N-dimetilformamida anhidra (4 ml) . Ácido (7-metanosulfonilamino-1, 1-dioxo-l, 4 -dihidro- 1?6-benzo [1, 2 , 4] tiadiazin-3 - il ) -acético (preparado como se describe en US 7,939,524 B2 , 107 mg, 0.32 mmol) seguido de N-metilmorfolina (74 µ?, 0.67 mmol). La mezcla se agitó hasta que se disolvió toda, aproximadamente 5 minutos, se agregó hidrocloruro de 1- ( 3 -dimetilaminopropil ) -3 -etilcarbodiimida (65 mg, 0.34 mmol) y la mezcla se agitó a 25°C durante 16 horas. La reacción se inactivo mediante la adición de solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (20 ml) . La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa de salmuera saturada (20 ml) , se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, y se concentraron in vacuo para producir un aceite dorado. El aceite se disolvió en etanol (5 ml) . Se agregó una solución de 21 % en peso de etóxido de sodio en etanol (0.36 mi, 0.96 mmol) . La reacción se calentó a reflujo durante 16 horas. La reacción se inactivo mediante la adición de solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (10 mi) . La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mi) . La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución de bicarbonato de sodio saturado (2 x 20 mi) , solución acuosa de salmuera saturada (20 mi), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para producir un aceite claro. La purificación por cromatografía en columna flash (columna de Teledyne Isco RediSep; 0 a 20% de acetato de etilo en diclorometano) proporcionó el producto deseado, N-{3- [ (2S, 7R) -3- (4-Fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.2. O2'7] dodec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo- 1 , 4 -dihidro-lA6-benzo [1 , 2 , 4] tiadiazin-7-il } -metanosulfonamida (0.11 g, 0.19 mmol, 59%), como un polvo blanco ??. NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 1.39 (2H, d, J = 8.0 Hz) , 1.54 - 1.59 (8H, m) , 1.91 (1H, s) , 2.14 (1H, s) , 3.06 (3H, s) , 3.75 (1H, d, J = 11.6 Hz), 4.28 (1H, d, J = 15.2 Hz), 5.03 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.13 - 7.17 (2H, m) , 7.34 - 7.37 (2H, m) , 7.50 - 7.60 (3H, m) , 10.18 (1H, s) . LC-MS (ESI) calculado para C26H27FN4O6S2 574.64, encontrado 575.1 [ +H+] pf : 203.8-205.7°C. ee = 94.4% [análisis por HPLC : Chiralpak AS-RH 4.6 x 250 mm, 5 mieras, 0.8 ml/min, 310 nm] .

Ejemplo 10: N- [3 - (1S,2S,7R,8R) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4 -oxo- 3 -aza-triciclo [6.2.1. O2"7] undec-5-en-5-il) -1, 1-dioxo-1, 4-dihidro-lA6-benzo [1, 2, 4] tiadiazin-7- il } -metanosulfonamida a) Acido (IR, 2S, 3R,4S) -3- (metoxicarbonil) biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxílico El material de partida (a) se preparó como se describe en J. Org. Chem. 2000, 65, 6984-6991. Anhídrido cis-5-norborneno-endo-2 , 3 -dicarboxílico (4.104 g, 25 mmol) se suspendió en una mezcla de tolueno y tetracloruro de carbono 1:1 (500 mi) . La mezcla se agitó durante 20 minutos. Se agregó quinina (8.92 g, 27,5 mmol) y el matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno. La solución se enfrió a -55°C. Mientras se agitaba, se agregó metanol (3.04 mi, 75 mmol) . La mezcla se agitó a -55°C durante 20 horas. Después de calentar a 25°C, la mezcla se concentró in vacuo hasta un aceite espeso. El aceite se disolvió en acetato de etilo (400 mi), se lavó con solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (2 x 400 mi) , solución acuosa de salmuera saturada (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar el producto deseado, ácido (IR, 2S, 3R,4S) -3-(metoxicarbonil)biciclo[2.2.1]hept-5-eno-2-carboxílico (4.8 g, 24.5 mmol, 98%), como un sólido claro ceroso. ¾ N R (400 MHz, DMSO-de) d: 1.26 (1H, d, J = 8.5 Hz) , 1.33 (1H, d, J = 8.8 Hz) , 3.00 (1H, s) , 3.03 (1H, s) , 3.21 - 3.30 (2H, m) , 3.45 (3H, s) , 6.02 - 6.04 (1H, m) , 6.14 -6.16 (1H, m) , 11.86 (1H, s) . b) (1S,2R,3S,4R) -3-{ [ (benciloxi) carbonil] aminojbiciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxilato de metilo (IR, 2S, 3R, 4S) -3- (metoxicarbonil ) biciclo [2.2.1] hept-5 -eno-2-carboxílico (4.61 g, 23.5 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano anhidro (40 mi) . El matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno y la mezcla se enfrió a 0°C. Se agregó trietilamina (9.9 mi, 70.5 mmol) seguida por la adición gota a gota de cloroformiato de etilo (4.48 mi, 47 mmol) con agitación vigorosa. Se observó la precipitación inmediata. Se agregó tetrahidrofurano adicional (60 mi) . La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora. La azida de sodio (4.58 g, 70.5 mmol) se disolvió en agua (30 mi) y se agregó a la mezcla de reacción a 0°C. La mezcla se agitó a 0°C durante 5 minutos. Se retiró el baño de hielo. La mezcla se calentó a 25 °C y se agitó durante 2 horas. La mezcla se vertió en agua (300 mi) y el producto se extrajo en acetato de etilo (300 mi) . La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado a la mitad (2 x 100 mi) , solución saturada de salmuera acuosa (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para producir un aceite claro. El aceite se disolvió en benceno anhidro (50 mi) y se calentó a reflujo mientras se agita bajo nitrógeno durante 2 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se concentró in vacuo para producir un aceite ligeramente amarillo. El aceite se disolvió en diclorometano (30 mi) y alcohol bencílico (2.68 mi, 25.9 mmol) seguido de trietilamina (6.61 mi, 47 mmol) . La mezcla se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante 16 horas. Después de enfriar a 25 °C, la solución se concentró in vacuo para producir un aceite dorado. La purificación por cromatografía de columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 um, 15% acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, (1S, 2R, 3S,4R) -3- { [ (benciloxi) carbonil] amino} biciclo [2.2.1]hept-5-eno-2-carboxilato de metilo (5.51 g, 18.31 mmol, 78%), como un aceite claro. ¾ NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.38 (1H, d, J = 9.1 Hz) , 1.50 (1H, d, J = 9.4 Hz) , 3.10 (2H, s) , 3.21 (1H, dd, Ji = 9.2 Hz, J2 = 2.3 Hz) , 3.53 (3H, s) , 4.62 (1H, dt , J2 = 9.4 Hz , J2 = 2.9 Hz) , 5.07 (2H, q, J = 13.0 Hz), 5.29 (1H, d, J = 8.6 Hz) , 6.15 - 6.17 (1H, m) , 6.37 - 6.38 (1H, m) , 7.29 - 7.35 (5H, m) . LC-MS (ESI ) calculado para Ci7Hi9N04 301.13, encontrado 258.1 (100%) , 302.2 [M+H+] (70%) , 603.5 [2M+H+] (20%) . c) Hidrocloruro (IR, 2R, 3S, 4S) -3 -aminobiciclo [2.2.1 ] heptano-clorhidrato de 2-carboxilato de metilo (lS,2R,3S,4R)-3-{[ (benciloxi) carbonil] amino}biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxilato de metilo (5.5 g, 18.27 mmol) se disolvió en acetato de etilo (75 mi) . Se agregó paladio sobre carbono al 5% (650 mg) . El matraz se desgasificó y se rellenó con gas hidrógeno vía globo. La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 horas. La mezcla se pasó a través de un tapón de Celita y el filtrado se concentró in vacuo para proporcionar un aceite transparente espeso. El aceite se disolvió en acetato de etilo (15 mi) y se agregó gota a gota, con agitación vigorosa, a una mezcla de una solución 4.0 M de ácido clorhídrico en 1,4-dioxano (10 mi, 40 mmol) en dietil éter (90 mi) . El producto deseado comenzó a precipitar como un sólido blanco. La mezcla se agitó durante 20 min. El precipitado se recogió por filtración al vacío, y se lavó con dietil éter adicional (15 mi) . El sólido se secó adicionalmente in vacuo durante 1 hora para proporcionar el producto deseado, hidrocloruro de (IR, 2R, 3S, 4S) -3-aminobiciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo (2.61 g, 12.69 mmol, 69% ), como un polvo blanco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 1.34 - 1.43 (4H, m) , 1.54 (1H, d, J = 9.5 Hz), 1.68 (1H, d, J = 11.4 Hz), 2.47 - 2.48 (2H, m) , 3.03 (1H, dd, J7 = 11.0 Hz, J2 = 4.0 Hz) , 3.49 - 3.53 (1H, m) , 3.62 (3H, s) , 8.07 (3H, bs) . LC-MS (ESI) calculado para C9Hi5N02 (amina libre) 169.11, encontrado 170.1 [M+H+] (100%), 339.2 [2M+H+] (50%) . d) (IR, 2R, 3S, 4S) -3- [ (4-fluorobencil) amino] biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo Hidrocloruro (IR, 2S, 3S, 4S) -3-aminobiciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxilato de metilo (1 g, 4.86 mmol) se disolvió en metanol (23 mi) . Se agregó acetato de sodio (0.755 g, 9.2 mmol) seguido de tamices moleculares en polvo de 4Á (1 g) y 4-fluoro-benzaldehído (0.571 g, 4.6 mmol). Se agregó cianoborohidruro de sodio (0.578 g, 9.2 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 horas. La mezcla se vertió en una mezcla de solución acuosa de bicarbonato de sodio saturada (200 mi) y acetato de etilo (300 mi) . Después de agitar, ambas capas se pasaron a través de un tapón de Celita. La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (100 mi) , solución acuosa de salmuera saturada (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar el producto crudo, (IR, 2R, 3S, 4S) -3- [ (4-fluorobencil) amino] biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo (1.172 g, 4.23 mmol , 92%), como un aceite claro. LC-MS (ESI) calculado para C16H20FNO2 277.15, encontrado 278.2 [M+H+1. e) N- [3- (1S,2S, 7R,8R) -3- (4-Fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5 -en-5- il ) - 1 , 1-dioxo- 1 , 4 -dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida (IR, 2R, 3S,4S) -3- [ (4-fluorobencil) amino] biciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo (0.087 g, 0.3 mmol) se disolvió en N,N-dimetilformamida anhidra (2.8 mi) . Acido (7-metanosulfonilamino-1 , 1-dioxo-l, 4 -dihidro- 1?6-benzo [1, 2 , 4] tiadiazin-3-il) -acético (preparado como se describe en US 7,939,524 B2 , 0.1 g, 0.3 mmol) se agregó seguido de N-metilmorfolina (0.07 mi, 0.63 mmol). La mezcla se agitó hasta que se disolvió todo, aproximadamente 5 minutos. Se agregó hidrocloruro de 1- (3-dimetilaminopropil) -3 -etilcarbodiimida (0.061 g, 0.315 mmol) y la mezcla se agitó a 25°C durante 4 horas. Se agregó trietilamina (0.126 mi, 0.9 mmol) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se diluyó con acetato de etilo (25 mi) y se lavó con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (2 x 25 mi), solución acuosa de salmuera saturada (10 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para producir un aceite dorado. El aceite se disolvió en metanol (4 mi) y el producto se precipitó mediante la adición de solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 (4 mi) mientras se agitaba. El sólido se recogió por filtración al vacío y se secó adicionalmente in vacuo para proporcionar el producto deseado, N- [3- (1S, 2S, 7R, 8R) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il) -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lX6-benzo [1 , 2 , 4 ] tiadiazin-7 -il } -metanosulfonamida (0.0805 g, 0.144 mmol, 48%), como un polvo blanco. ? NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 1.23 - 1.48 (6H, m) , 2.67 - 2.68 (2H, m) , 3.06 (3H, s) , 3.24 (1H, d, J = 15.0 Hz), 3.72 (1H, d, J = 11.9 Hz) , 4.07 (1H, d, J = 15.6 Hz), 5.12 (1H, d, J = 15.7 Hz) , 7.14 (2H, t, J = 8.4 Hz) , 7.39 (2H, dd, Ji = 8.2 Hz , J2 = 5.8 Hz) , 7.51 (1H, dd, Jx = 8.4 Hz, J2 = 2.3 Hz) , 7.57 - 7.60 (2H, m) , 10.18 (1H, s) . LC-MS (ESI) calculado para C25H25F 406S2 560.12, encontrado 561.3 [M+H+] . ee = 99% [análisis por HPLC : Chiralpak AS-RH 4.6 x 250 mm, 5 mieras a temperatura ambiente, Solvente A - Solvente B (ver la tabla de gradiente), 0.8 ml/min, 310 nm, i = 7.58 minutos (principal), t2 = 10.08 min] .

Ejemplo 11: N- {3- (1R,2R,7S,8S) -3- ( -Fluoro-bencil) - 6-hidroxi -4 -oxo- 3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec-5-en-5-il] -1, l-dioxo-1 , 4 -dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il jmetanosulfonamida a) Ácido (1S,2R,3S,4R) -3- (metoxicarbonil)biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxí1ico El material de partida (a) se preparó como se describe en J. Org. Chem. 2000, 65, 6984-6991. Anhídrido cis-5-norborneno-endo-2 , 3 -dicarboxílico (8.21 g, 50 mmol) se suspendió en una mezcla de tolueno y tetracloruro de carbono 1:1 (250 mi) . La mezcla se agitó durante 10 minutos. Se agregó quinidina (17.84 g, 55 mmol) y el matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno. La solución se enfrió a -55°C. Mientras se agitaba, se agregó metanol (6.08 mi, 150 mmol) . La mezcla se agitó a 55 °C durante 18 horas. Después de calentar a 25°C, la mezcla se concentró in vacuo hasta un aceite espeso. El aceite se disolvió en una mezcla de acetato de etilo (400 mi) y la solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (300 mi). Después de agitar, las capas se separaron y la capa orgánica se lavó adicionalmente con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (2 x 100 mi), solución acuosa de salmuera saturada (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtraron, y se concentraron in vacuo para proporcionar el producto deseado, Ácido ( 1S , 2R, 3S , 4R) -3 -(metoxicarbonil) biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxílico (9.15 g, 46.6 mmol, 94%), como un aceite claro. ¾ NMR (400 MHz, DMSO-de) d: 1.26 (1H, d, J = 8.4 Hz) , 1.33 (1H, d, J = 8.4 Hz) , 3.00 (1H, s) , 3.03 (1H, s), 3.21 - 3.29 (2H, m) , 3.45 (3H, s) , 6.02 - 6.04 (1H, m) , 6.14 -6.16 (1H, m) , 11.86 (1H, s) . b) (1R,2S,3R,4S) -3-{ [ (benciloxi) carbonil] amino}biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxilati de metilo Este intermediario se preparó como se describe en Synthesis 2001, 11, 1719-1730. Ácido (1S, 2R, 3S, 4R) -3-(metoxicarbonil) biciclo [2.2.1] -hept-5-eno 2 -carboxílico (8.94 g, 45.57 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano anhidro (200 mi) . El matraz se desgasificó y se rellenó con nitrógeno y la mezcla se enfrió a 0°C. Se agregó trietilamina (19.2 mi, 136.7 mmol) se agregó seguido por la adición gota a gota de cloroformiato de etilo (8.69 mi, 91.1 mmol) con agitación vigorosa. Se observó la precipitación inmediata. La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora. La azida de sodio (8.89 g, 136.7 mmol) se disolvió en agua (60 mi) y se agregó a la mezcla de reacción a 0°C. La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora. Se retiró el baño de hielo. La mezcla se calentó a 25°C y se continuó agitando durante 2 horas. La mezcla se vertió en agua (400 mi) y el producto se extrajo en acetato de etilo (400 mi) . La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado a la mitad (2 x 200 mi) , solución acuosa de salmuera saturada (2 x 200 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para dar un aceite ligeramente marrón. El aceite se disolvió en benceno anhidro (100 mi) y se calentó a reflujo mientras se agita bajo nitrógeno durante 2 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se concentró in vacuo para producir un aceite ligeramente marrón. El aceite se disolvió en diclorometano (60 mi) y alcohol bencílico (5.19 mi, 50.13 mmol) seguido de trietilamina (12.81 mi, 91.14 mmol) . La mezcla se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante 16 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se concentró in vacuo para producir un aceite dorado. La purificación por cromatografía en columna flash (gel de sílice Merck 60, 40-63 un, 10% acetato de etilo en hexanos) proporcionó el producto deseado, (IR, 2S,3R,4S) -3-{ [ (benciloxi ) carbonil] amino}biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2 - carboxilati de metilo (10.1 g, 33.55 mmol, 74%), como un aceite claro. ?? NMR (400 MHz, CDC13) d: 1.38 (1H, d, J = 8.7 Hz) , 1.50 (1H, d, J = 8.4 Hz) , 3.10 (2H, s) , 3.21 (1H, d, J = 8.8 Hz), 3.53 (3H, s) , 4.59 -4.64 (1H, m) , 5.07 (2H, q, J = 13.0 Hz) , 5.29 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.15 - 6.17 (1H, m) , 6.37 - 6.38 (1H, m) , 7.27 - 7.36 (5H, m) . LC-MS (ESI) calculado para C17H19N04 301.13, encontrado 258.1 (100%), 302.2 [M+H+] (70%) , 603.5 [2M+H+] (20%) . c) Hidrocloruro ( 1S , 2S , 3R, 4R) -3 -aminobiciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo (lR,2S,3R,4S)-3-{ [ (benciloxi) carbonil] amino}biciclo [2.2.1] hept-5-eno-2-carboxilato de metilo (10 g, 33.22 mmol) se disolvió en acetato de etilo (150 mi) . Se agregó paladio sobre carbono al 5% (1.5 mg) . El matraz se desgasificó y se rellenó con gas hidrógeno vía globo. La mezcla se agitó a 25°C durante 2 horas. La mezcla se pasó a través de un tapón de Celita y el filtrado se concentró in vacuo hasta un volumen de 50 mi. La solución se agregó gota a gota, con agitación vigorosa, a una mezcla de solución de ácido clorhídrico 4.0 M en 1,4-dioxano (20 mi) en dietil éter (200 mi) . El producto deseado comenzó a precipitar como un sólido blanco. La mezcla se agitó durante 10 minutos. El precipitado se recogió por filtración al vacío, se lavó con dietil éter adicional (15 mi) . El sólido se secó adicionalmente in vacuo durante 1 hora para proporcionar el producto deseado, hidrocloruo (1S, 2S, 3R, 4R) -3 -aminobiciclo [2.2.1] heptano-2-carboxilato de metilo (5.21 g, 25.33 mmol, 76.3%), como un polvo blanco. ¾ NMR (400 MHz, DMSO-ds) d: 1.33 -1.42 (4H, m) , 1.54 (1H, d, J = 10.3 Hz) , 1.69 (1H, d, J = 11.5 Hz) , 2.46 - 2.48 (2H, m) , 3.03 (1H, dd, Ji = 10.8 Hz, J2 = 4.1 Hz) , 3.46 - 3.55 (1H, m) , 3.62 (3H, s) , 8.09 (3H, bs). LC-MS (ESI) calculado para C9H1502 (amina libre) 169.11, encontrado 170.1 [?+?*] (100%), 339.2 [2M+H*] (50%). d) (1S,2S,3R,4R) -3- [ (4-fluorobencil) amino]biciclo [2.2.1]heptano-2-carboxilato de metilo Hidrocloruro (1S, 2S, 3R, 4R) -3 -aminobiciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxilato de metilo (1 g, 4.86 mmol) se disolvió en metanol (23 mi) . Se agregó acetato de sodio (0.755 g, 9.2 mmol) seguido de tamices moleculares en polvo de 4Á (1 g) y 4 - fluoro-benzaldehído (0.571 g, 4.6 mmol). Se agregó cianoborohidruro de sodio (0.578 g, 9.2 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 horas. La mezcla se vertió en una mezcla de solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (200 mi) y acetato de etilo (300 mi) . Después de agitar, ambas capas se pasaron a través de un tapón de Celita. La capa orgánica se lavó adicionalmente con solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (100 mi) , solución acuosa de salmuera saturada (100 mi) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para proporcionar el producto crudo, de metilo (1S, 2S, 3R, 4R) -3- [ (4 -fluorobencil ) amino] biciclo[2.2.1] heptano-2 -carboxilato de metilo (1.11 g, 4.0 mmol, 87%), como un aceite claro. LC-MS (ESI) calculado para Ci6H2oFN02 277.15, encontrado 278.2 [M+H+] . e) N-{3- (1R,2R,7S,8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2"7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin- 7 - il }metanosulfonamida (1S, 2S, 3R, 4R) -3- [ (4-fluorobencil) amino] biciclo [2.2.1] heptano-2 -carboxilato de metilo (0.087 g, 0.3 mmol) se disolvió en N,N-dimetilformamida anhidra (2.8 mi) . Se agregó ácido (7-metanosulfonilamino-1 , 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-benzo [1 , 2 , 4] tiadiazin-3 - il ) -acético (preparado como se describe en US 7,939,524 B2 , 0.1 g, 0.3 mmol) seguido de N- metilmorfolina (0.07 ml, 0.63 mmol) . La mezcla se agitó hasta que todo se disolvió, aproximadamente 5 minutos. Se agregó 1-(3-dimetilaminopropil) -3 -etilcarbodiimida (0.061 g, 0.315 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 4 horas. Se agregó trietilamina (0.126 ml, 0.9 mmol) y la mezcla se agitó a 50°C durante 16 horas. Después de enfriar a 25°C, la solución se diluyó con acetato de etilo (25 ml) y se lavó con una solución de acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (2 x 25 ml) , solución acuosa de salmuera saturada (10 ml) , se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró in vacuo para dar un aceite dorado. El aceite se disolvió en metanol (4 ml) y el producto se precipitó mediante la adición de solución acuosa de ácido clorhídrico 1.0 M (4 ml) mientras se agitaba. El sólido se recogió por filtración al vacío y se secó adicionalmente in vacuo para proporcionar el producto deseado, N-{3 - (IR, 2R, 7S, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo- 3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec - 5 -en- 5 - il] -1 , 1-dioxo- 1 , 4 -dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin- 7 - il }metanosulfonamida (0.0781 g, 0.139 mmol, 46%), como un polvo blanco. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 1.23 - 1.48 (6H, m) , 2.67 - 2.68 (2H, m) , 3.06 (3H, s) , 3.24 (1H, d, J = 15.0 Hz) , 3.72 (1H, d, J = 11.9 Hz) , 4.07 (1H, d, J = 15.6 Hz), 5.12 (1H, d, J = 15.7 Hz) , 7.14 (2H, t, J = 8.4 Hz) , 7.39 (2H, dd, Jx = 8.2 Hz, J2 = 5.8 Hz) , 7.51 (1H, dd, Ji = 8.4 Hz , J2 = 2.3 Hz), 7.57 - 7.60 (2H, m) , 10.18 (1H, s). LC-MS (ESI) calculado para C25H25F 406S2 560.12, encontrado 561.3 [M+H+] . ee = 99% [análisis por HPLC : Chiralpak AS-RH 4.6 x 250 mm, 5 mieras a temperatura ambiente, Solvente A - Solvente B (ver la tabla para gradiente), 0.8 ml/min, 310 nm, ti = 7.58 min, t2 = 10.08 minutos (principal)] .

PRUEBA BIOLÓGICA La capacidad de los compuestos de la Fórmula I para reducir los niveles de ácido úrico en suero en un paciente se demostró en un estudio de Fase I de sujetos sanos. A seis pacientes se les administró una sola dosis oral de 800 mg de N- {3- (IR, 2R, 7S, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6-hidroxi-4-oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1 , 1 -dioxo- 1 , 4 -dihidro-1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il jmetanosulfonamida (El compuesto del Ejemplo 2) , mientras que dos pacientes recibieron un placebo. Disminuciones significativas inesperadas (24-40%) en ácido úrico de la línea base al final de la prueba se encuentran en todos los pacientes que recibieron el compuesto (ver Tabla 1) .

Tabla 1 Ácido úrico (mg/dl) P = Placebo Inhibición de la captación de ácido úrico El ácido úrico (UA, por sus siglas en inglés) es el producto final del metabolismo de purinas en los seres humanos. Es secretada en la orina y el 90% de esta se reabsorbe en el torrente sanguíneo. La evaluación de compuestos líderes para la inhibición de URAT1 evalúa su potencial para disminuir la reabsorción UA disminuyendo así los niveles en sangre de UA lo que podría ser beneficioso para ciertas poblaciones de pacientes.

Se midieron los valores EC50 de la inhibición de la absorción de ácido úrico. Células de riñon embrionario humano (HEK293) que expresan URAT1 (células HEK293 transfectadas con vectores que contienen ADNc URATl humano) y células de control Se utilizaron (células transfectadas HEK293 con vectores solamente) . Antes de los experimentos, las células fueron cultivadas en matraces de fondo de 75 cm2 y se sometieron a pasar cada 3 o 4 días. Las células de control y células que expresan URATl se sembraron en placas de 24 pozos recubiertas con colágeno I a una densidad de 1 hasta 4xl05 células/pozo, y se incubaron en una incubadora de C02 (37°C y 5% de C02) durante 1 a 3 días para preparar monocapas de células para la determinación de la actividad de transporte celular (volumen despejado) .

Los valores CE50 de la inhibición de la captación de UA en células HEK293 facilitadas por URATl expresadas en las células varían desde -0.5 µ? hasta 14.8 µ? para los compuestos de los Ejemplos 1-11 probados. Bajo las mismas condiciones, la EC50 de benzbromarona, el control positivo del inhibidor de URATl, es <0.1 µ .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (21)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. El uso de un compuesto de la Fórmula I en donde el Anillo B es A es Z es - (CRnR12)n- , Y es - (CR13R14) n es 1 o 2, m es 2 o 3, R1 es H, -NH2, o - (CH2) q-NH-S (O) 2CH3 , en donde q es 0 o 1, R2 es alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C6, arilo o - (CH2) -R en donde R15 es en donde R16, R17, R18, R19 y R20 son independientemente H, alquilo Ci-C6, hidroxi, o halo, R3, R , R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12 , R13, y R14 son independientemente H o alquilo Ci-C6, en donde cada alquilo, cicloalquilo , o arilo están opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes alquilo, hidroxilo, o halo, o una sal, hidrato, solvato, tautómero o estereoisómero farmacéuticamente aceptable de los mismos, para preparar un medicamento para disminuir ácido úrico en suero en un paciente.

2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el anillo B es

3. El uso de conformidad con reivindicación 1, en donde q es 1 y el anillo B es

4. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde A es

5. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde R1 es H.

6. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde R2 es - (CH2) -R15 y R15 se selecciona de

7. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde q es 0.

8. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde n es 1.

9. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde q es O y n es l.

10. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde R3 , R , R5, R6 , R7, R8 , R9, R10 , R11, R12, R13, y R14 son H.

11. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde R16, R17, R18, R19, y R20 son independientemente H, metilo, o halo.

12. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde R16, R17, R18; R19 , y R20 son independientemente H o halo.

13. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde R18 es fluoro y R16, R17, R19, y R20 son H.

14. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde q es 0 y n es 1,

R3, R4, R5, R6 , R7, R8, R9, R10 , R11, R12, R13 , y R14 son H, y R16, R17, R18, R19 y R20 son independientemente H o halo. 15. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el paciente es un humano.

16. El uso de conformidad con la reivindicación 1, que además comprende administrar un agente terapéutico adicional al paciente.

17. El uso de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo seleccionado de N-{3- [ (1R,2S,7R,8S) -3- (4 -Fluoro-bencil) -6 -hidroxi -4 -oxo-3-aza-triciclo[6.2.1.02-7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-ilmetil} -metanosulfonamida, N- {3- [ (IR, 2S, 7R, 8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6 -hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2 7] undec-5-en-5-il] -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida, (IR, 2S, 7R, 8S) -5- ( 1 , 1-dioxo- 1 , 4-dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3 - il) -3 - (4 -fluoro-bencil) -6 -hidroxi-3 - aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-4-ona, (4aR, 7aS) -N- {3- [1- (4-fluoro-bencil) -4-hidroxi-2-oxo-2,4a, 5,6,7, 7a-hexahidro-1H- [1] piridin-3 -il] -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7 - il } -metanosulfonamida, N-[3-(lR,2S,7R,8S) -3 -ciclopentil -6-hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2-7] undec-5-en-5-il) -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7 -il] -metanosulfonamida , (IR, 2S, 7R, 8S) -5- ( 7 -amino-1 , 1-dioxo- 1 , 4 -dihidro- 1?6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il) -3- (4-fluoro-bencil) -6 -hidroxi -3-aza-triciclo[6.2.1:02'7] undec-5-en-4-ona, N- [3- (1S, 2R, 7S, 8R) -3- (4-Fluoro-bencil) -6 -hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il) -1 , 1-dioxo-l , 4-dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin- 7 - il } -metanosulfonamida, (IR, 2S, 7R, 8S) -N- { 3 - [3- (4-fluoro-bencil) -6-hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lA6-tieno [2,3-e] [1,2,4] tiadiazin-7-ilmetil} -metanosulfonamida, N- { 3 - [ (2S , 7R) -3- (4-fluoro-bencil) -6 -hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo[6.2.1.02'7] dodec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4 -dihidro-lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il } -metanosulfonamida, N- [3- (1S, 2S, 7R, 8R) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6 -hidroxi-4 -oxo-3-aza-triciclo[6.2.1.02'7] undec-5-en-5-il) -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro- lX6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida, y N- [3- (1R,2R,7S,8S) -3- (4 -Fluoro-bencil ) -6 -hidroxi-4 -oxo-3-aza-triciclo[6.2.1.02'7] undec- 5 -en-5 - il) -1 , 1-dioxo-l , 4 - dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il} -metanosulfonamida para preparar un medicamento para disminuir ácido úrico en suero en un paciente.

18. El uso de conformidad con la reivindicación 17, en donde el compuesto es N- { 3 - ( IR, 2R,7S,8S)-3-(4-Fluoro-bencil) - 6-hidroxi-4 -oxo-3 -aza-triciclo [6.2.1. O2,7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4 -dihidro- lA6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-iljmetanosulfonamida .

19. El uso de un compuesto de conformidad con la fórmula I de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para preparar un medicamento para tratar o prevenir hiperuricemia, gota, enfermedad por inflamación, urolitiasis urinaria, enfermedad por reperfusión, disfunción renal, tal como síndrome de lisis tumoral, hipertensión y enfermedad cardiovascular en un paciente .

20. El uso de conformidad con la reivindicación 19, en donde el medicamento es para tratar o prevenir gota o enfermedad por inflamación.

21. El uso de conformidad con la reivindicación 19, en donde el compuesto es N-{3- (1R,2R,7S,8S) -3- (4 -Fluoro-bencil) -6-hidroxi-4-oxo-3-aza-triciclo [6.2.1. O2'7] undec-5-en-5-il] -1, 1-dioxo-l, 4-dihidro-lAe-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il}metanosulfonamida .