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MX2013013104A - Composiciones y metodos para el tratamiento de cancer. - Google Patents

Composiciones y metodos para el tratamiento de cancer.

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MX2013013104A
MX2013013104A MX2013013104A MX2013013104A MX2013013104A MX 2013013104 A MX2013013104 A MX 2013013104A MX 2013013104 A MX2013013104 A MX 2013013104A MX 2013013104 A MX2013013104 A MX 2013013104A MX 2013013104 A MX2013013104 A MX 2013013104A
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MX
Mexico
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pro
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apoptotic
cancer
Prior art date
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MX2013013104A
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English (en)
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Richard J Santen
Sarah E Aiyar
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Univ Virginia Patent Found
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Abstract

La presente invención proporciona terapias de combinación útiles para el tratamiento del cáncer, particularmente de cáncer de seno. La presente invención proporciona métodos para el tratamiento del cáncer, que comprende la administración a un paciente que padece el mismo de una cantidad efectiva de un inmunoconjugado que comprende una porción de anticuerpo monoclonal y una primera porción de fármaco pro-apoptótico enlazado al mismo; y administrar al paciente una cantidad efectiva de un segundo fármaco pro-apoptótico. La porción de anticuerpo monoclonal del inmunoconjugado puede actuar para dirigir los receptores de células de cáncer de seno resistente a hormonas, tal como HER2. Los efectos sinergístico puede observarse cuando los dos fármacos pro-apoptóticos, actuando mediante un mecanismo molecular común (modulación vertical) o mecanismos moleculares diferentes (modulación horizontal) son administrados a pacientes afligidos con cáncer de seno, tal como cáncer de seno resistente a hormona.

Description

COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA EL TRATAMIENTO DE CÁNCER DECLARACIÓN CON RESPECTO A INVESTIGACIÓ O DESARROLLO PATROCINADO FEDERALMENTE La presente invención se realizó con apoyo del gobierno bajo las Concesiones Nos. GG 1284 otorgadas por el Departamento de Defensa. El gobierno tiene ciertos derechos sobre la presente invención.
REFERENCIA CRUZADA CON LAS SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reclama la prioridad del documento Norteamericano No. de Serie 61/483,821, presentado el 9 de mayo de 2011 cuya descripción está incorporada como referencia en la presente descripción en su totalidad.
Antecedentes de la Invención El índice de mortalidad pronosticado para el cáncer de seno en la Unión Europea para el año 2011 es un estimado de 75,688 muertes [1]. Para los Estados Unidos, las muertes por cáncer de seno para 2010 se pronostico de 39,840 [2]. En aproximadamente el 70% de los cánceres de seno, el receptor de estrógeno (ER) es el promotor clave de proliferaciones de tumor, y por consiguiente, una primera línea de tratamiento es la inhibición de la señalización ER a través del uso de tamoxifeno o inhibidores de aromatasa, los cuales bloquean la producción de estrógeno [3]. Sin embargo, la resistencia inicial (nueva) o subsiguiente (adquirida) de las células de cáncer al efecto de estos inhibidores, lo cual se considera que ocurre por el desarrollo de la sensibilidad incrementada al estrógeno por las células de cáncer a través de la reprogramación biológica, puede limitar los beneficios terapéuticos de los agentes que disminuyen el estrógeno para muchos pacientes.
Dos tercios de las mujeres con cáncer de seno positivo al receptor de estrógeno (ER) responden a la terapia hormonal, la cual puede lograrse mediante la remoción de los ovarios, mediante la administración de tamoxifeno o inhibidores de aromatasa (síntesis de estrógenos), y mediante el uso de compuestos denominados análogos súper agonistas de GnRH. Sin embargo, las observaciones clínicas han revelado que las células de cáncer de seno pueden adaptarse a condiciones de estradiol bajo desarrollando una sensibilidad mejorada al estradiol. De manera específica, se requieren 200 pg/ml de estradiol para estimular el crecimiento de tumor antes de la deprivación aguda de estradiol, mientras que los niveles de 10-15 pg/ml son suficientes para producir una proliferación de tumor después de la adaptación de 12 a 18 meses posteriores. Dichos cánceres resistentes a las hormonas son entonces indiferentes a la terapia de aromatasa continuada, y el cáncer que comprende estas células resistentes a hormonas puede volverse incontrolable.
Las investigaciones del crecimiento de células de seno en cultivo han mostrado que cuando las células MCF-7 tipo natural son cultivadas durante un período de tiempo prolongado en un medio libre de estrógeno, las células inicialmente dejan de crecer, pero entonces, meses después, las células se adaptan y crecen tan rápidamente como las células MCF-7 de tipo natural estimuladas al máximo con estradiol. Estas células cultivadas adaptadas, llamadas células LTED (privación de estrógeno a largo plazo), las cuales son modelos para células "resistentes a hormonas" o "refractarias por hormonas" que son responsables por la pérdida de sensibilidad de los cánceres de seno a los inhibidores de aromatasa, se han utilizado para estudiar los procesos que se relacionan con la adaptación de las hormonas. Cuando las mutaciones dan origen a dichas células en un paciente, existe un desarrollo negativo significativo en sus perspectivas de supervivencia.
La sobrerregulación de del receptor de estrógeno HER2 es observado después de la terapia hormonal. El conjugado trastuzumab-maitansinoide, T-DMI, es un conjugado de fármaco de anticuerpos que comprende el trastuzumab de anticuerpo humanizado específico de HER-2 enlazado de manera covalente con el agente DMI inhibidor de microtúbulo, un análogo de maitansina. Este conjugado ha demostrado estar dirigido a las células de cáncer de seno HER-2 positivas. Véanse, por ejemplo, las publicaciones de Lewis Phillips GD, Li G, Dugger DL, Crocker LM , Parsons KL, Mai E, Blattler WA, Lambert JM, Chari RV, Lutz RJ, Wong WL, Jacobson FS, Koeppen H, Schwall RH, Kenkare-Mitra SR, Spencer SD, Sliwkowski MX. "Seleccionar como objetivo el cáncer de seno HER-2 positivo con trastuzumab-DMI, un conjugado de fármaco citotóxico para anticuerpo" (Targeting HER2- positive breast cáncer with trastuzumab-DMI, an antibody-cytotoxic drug conjúgate), Cáncer Res 2008; 68: páginas 9280 a 9290; Junttila TT, Li G, Parsons K, Phillips GL, Sliwkowski MX. "Trastuzumab-DMI (T-DMI) retiene todos los mecanismos de acción de trastuzuimab e inhibe de manera eficiente el crecimiento del cáncer de seno insensible a lapatinib" (Trastuzumab-DMI (T -DMI) retains all the mechanisms of action of trastuzumab and efficiently inhibits growth of lapatinib insensitive breast cáncer), Breast Cáncer Res Treat (2010) 128(2): páginas 347-56; y la publicación de Liu C and Chari R, "El desarrollo de sistemas de administración de anticuerpos a cáncer objetivo con maitansinoides altamente potentes" (The development of antibody delivery systems to target cáncer with highly potent maytansinoids), Exp. Opin. Invest. drugs (1997) 6(2): páginas 169 a 172.
Las estrategias terapéuticas nuevas son necesarias de manera crítica para combatir la resistencia y lograr remisiones más duraderas.
Breve Descripción de la Invención La presente invención está dirigida, en sus diversas modalidades, a terapias de combinación para el tratamiento del cáncer, incluyendo sin limitar a cánceres de seno (refractarios a hormonas) resistentes a hormonas, tales como aquello que ya no son sensibles a tratamientos de primera línea, tal como la administración a los pacientes de inhibidores de aromatasa, tales como anastrazole, moduladores de receptor de estrógeno, tales como tamoxifeno, y los similares. La presente invención, en sus diversas modalidades, proporciona un método para el tratamiento del cáncer, que comprende la administración a un paciente que padece el mismo de una cantidad efectiva de un inmunoconjugado que comprende una porción de anticuerpo monoclonal y una primera porción de fármaco pro-apoptótico enlazado al mismo; y administrar al paciente una cantidad efectiva de un segundo fármaco pro-apoptótico. Por ejemplo, el cáncer puede ser un cáncer de seno, tal como un cáncer de seno resistente a aromatasa, un cáncer de seno resistente a tamoxifeno, un cáncer de seno refractario a hormona ER + , o un cáncer de seno que comprende células de cáncer en las cuales la expresión HER2 es sobre-regulada, o cualquier combinación de los mismos.
En ciertas modalidades, el inmunoconjugado comprende una porción de anticuerpo monoclonal acoplado por medio de un enlazador con una primera porción de fármaco pro-apoptótico. En las diversas modalidades, la primera porción de fármaco pro-apoptótico es un agente de despolimerización de microtúbulo, tal como maitansinoide o una auristatina. Por ejemplo, la primera porción de fármaco pro-apoptótico puede ser un análogo de maitansina (un maitansinoide), el cual está enlazado por medio de una porción de enlazador a la porción de anticuerpo monoclonal. Más específicamente, el inmunoconjugado puede ser un conjuntado de trastuzumab-maitansinoide, que comprende trastuzumab (Herceptin®) acoplado por medio de una porción de reticular que no se reduce a una porción de fármaco pro-apoptótico maitansinoide (por ejemplo, T-DMI). Los inventores de la presente seleccionaron una estrategia pro-apoptótica como preferible sobre una estrategia de inhibición de crecimiento para anular el proceso de reprogramación de adaptación eliminando las células resistentes en lugar de únicamente inhibir su crecimiento.
En las diversas modalidades, el segundo fármaco pro-apoptótico ejerce una citotoxicidad mediante un mecanismo molecular diferente del mecanismo molecular de la citotoxicidad ejercida por el primer fármaco pro-apoptótico.
Esto se denomina en la presente como "modulación horizontal", en donde dos trayectorias apoptóticas independientes son activadas o inducidas por el régimen terapéutico, en oposición a la "modulación vertical", en donde se dirigen dos o más pasos en una trayectoria pro-apoptótica única. Los inventores describen en la presente descripción que la modulación horizontal, que emplea, por ejemplo, combinaciones de T-DMI con un segundo fármaco pro-apoptótico, desplegaron efectos sinergísticos en la inducción de la apoptosis en células de cáncer de seno refractario a hormonas.
En algunas modalidades, el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria extrínseca. En otras modalidades, el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria intrínseca. Por ejemplo, el segundo fármaco anti cáncer pro-apoptótico puede ser ácido famesil-tiosalicilic (FTS), 4-(4-Cloro- 2-metilfenoxi)-N-hidroxibutanamido (CMH), estradiol (E2), tetrametoxistilbeno (TMS), o-tocatrienol, salinomicina, o curcumina.
En las diversas modalidades, la presente invención proporciona usos médicos para una combinación de un primer fármaco pro-apoptótico y un segundo fármaco pro-apoptótico, para el tratamiento del cáncer, tal como cáncer de seno, más específicamente para el tratamiento de un cáncer de seno resistente a hormonas como se describió anteriormente. Por ejemplo, el primer fármaco pro-apoptótico puede ser un inmunoconjugado tal como T-DMI, y el segundo fármaco pro-apoptótico puede ser un fármaco que induce la apoptosis en células de cáncer mediante un mecanismo molecular diferente del mecanismo molecular mediante el cual, el primer fármaco pro-apoptótico puede ejercer su efecto anti-cáncer.
En las diversas modalidades, la presente invención proporciona una composición terapéutica que comprende un inmunoconjugado que comprende una porción de anticuerpo monoclonal y una primera porción de fármaco pro-apoptótico y un segundo fármaco pro-apoptótico, para el tratamiento del cáncer, tal como cáncer de seno, más específicamente para el tratamiento de un cáncer de seno resistente a hormonas como se describió anteriormente.
La porción del anticuerpo monoclonal del inmunoconjugado puede proporcionar un mecanismo de dirección para el primer fármaco pro-apoptótico, tal como dirigir los receptores de HER-2 sobre regulado en las células de cáncer de seno resistentes a hormonas. Un componente de dirección para un fármaco anti-cáncer puede lograrse mediante el uso de conjugados, por ejemplo, porciones acopladas en forma covalente, una de las cuales proporciona el mecanismo de dirección, la otra que proporciona el efecto citotóxico o apoptótico. Uno de dichos agentes, T-DMI, es un conjugado covalente del anticuerpo monoclonal trastuzumab (Herceptin®) con un agente citotóxico pro-apoptótico macrocíclico maitansinoide. El T-DMI comprende una porción que dirige el anticuerpo humanizado específico de HER-2 de trastuzumab enlazado en forma covalente con el agente inhibidor de microtúbulo pro-apoptótico DMI. Véase, por ejemplo, la publicación de Oroudjev E, Lopus M, Wilson L, Audette C, Provenzano C, Erickson H, Kovtun Y, Chari R, Jordán MA (2010) Mol Cáncer Ther 9:2700-2713, "Los conjugados de anticuerpo maitansinoide inducen al arresto mitótico mediante la supresión de la polimerización del microtúbulo" (Maytansinoid-antibody conjugates induce mitotic arrest by suppressing micrótubule polymerization). Los inventores de la presente descripción, han descubierto de manera sorpresiva que el T-DMI, en combinación con otros fármacos anti-cáncer pro-apoptóticos, incluyendo ácido famesil-tiosalicílico (FTS, Salirasib, un inhibidor de Ras que dirige la trayectoria de muerte mitocondrial intrínseca dependiente de caspasa), estradiol (E2, trayectoria de muerte mitocondrial intrínseca dependiente de caspasa), tetrametoxistilbeno (TMS, trayectoria de muerte mitocondrial independiente de caspasa), 4-(4-cloro-2-metilfenoxi)-N-hid roxibutanamida (CMH, trayectoria apoptótica extrínseca), d-tocotrienol, salinomicina, o curcumina, o cualquier combinación de las mismas, puede actuar en forma sinergística para activar la apoptosis, no tóxica para eliminar a las células de cáncer de seno resistentes a hormonas (MCF-7; T47D) refractarias a hormonas (LTED; TamR) in vitro. Es bien conocido en la materia que dichas líneas celulares utilizadas en la evaluación de las terapias descritas y reclamadas en la presente descripción pueden predecir de manera poderosa el éxito para el uso in vivo de la terapia en pacientes que padecen de cáncer.
En las diversas modalidades, los presentes inventores describen los resultados de los experimentos que se realizaron para confirmar la hipótesis de que las combinaciones de ciertos agentes pro-apoptóticos pueden actuar en forma sinérgica para inducir la apoptosis, la muerte celular, en las células de cáncer de seno resistentes a hormonas (refractarias a hormonas). Por ejemplo, la presente invención, proporciona un método para el tratamiento de un cáncer, que comprende la administración a un paciente que padece el mismo de una cantidad efectiva de un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo monoclonal de dirección y una primera porción de fármaco pro-apoptótico; y administrar al paciente una cantidad efectiva de un segundo fármaco pro-apoptótico. Por sinergístico, se entiende que el efecto terapéutico es más que aditivo para los efectos terapéuticos individuales que podrían lograrse mediante la administración de cada fármaco por separado.
Breve Descripción de los Dibujos La figura 1A a 1F, muestran autoradiogramas de gel de electroforesis (1A, 1B, 1D, 1E) y gráficas de barras (1C, 1F), que resumen los resultados obtenidos de este modo sobre los niveles de las proteínas pro-apoptóticas indicadas cuando las células LTED fueron tratadas con FTS, con examinación de los cambios en los niveles de proteínas en las fracciones citosólica y mitocond rial .
Las figuras 2A a 2B, muestran una gráfica de barras de un transcurso de tiempo (2A) y una viabilidad celular contra la curva de concentración (2B) que despliegan (figura 2A) el efecto de FTS y curcumina en combinación con las células MCF-7 de tipo natural; y (figura 2B) el efecto del FTS solo o en combinación con curcumina en la viabilidad de la células MCF-7.
Las figuras 3A a 3B, muestran una gráfica de barras de transcurso de tiempo (3A) y una curva de viabilidad celular contra concentración (3B) que despliegan el efecto de salinomicina sobre las células MCF-7.
Las figuras 4A a 4F, muestran ilustraciones gráficas de gráficas de efecto de dosis de células no adoptadas: células MCF-7 (a-c; gráficas superiores) y T47D (d-f; gráficas inferiores) tratadas durante cinco días con la combinación indicada.
Las figuras 5A a 5J, muestran ilustraciones gráficas de gráficas de efecto de dosis de las líneas celulares adaptadas, LTED 029, tratadas durante cinco días con la combinación indicada.
Las figuras 6A a 6F, muestran ilustraciones gráficas del índice de combinación de células MCF-7 no adaptadas (a-e; tres gráficas superiores) y T47D (d-f; tres gráficas inferiores) tratadas en la forma indicada. Ordenadas - índice de combinación (Cl); Abscisa - Efecto de fracción.
Las figuras 7AA a 7BS, muestran ilustraciones gráficas del índice de combinación de las líneas celulares adaptadas, LTED D29 (a-i) y células TamR (j-s) tratadas en la forma indicada.
Las figuras 8A a 8E, muestran ilustraciones gráficas del análisis de isobolograma de células MCF-7 no adaptadas (a-e; tres gráficas superiores) y células T47D (d-f; tres gráficas inferiores) tratadas en la forma indicada. Ordenadas - Dosis A; Abscisa - Dosis B.
Las figuras 9A a 91, muestran ilustraciones gráficas del análisis de Isobolograma de las líneas celulares adaptadas, células LTED D29 (a-i) tratadas en la forma indicada. Ordenadas - Dosis A; Abscisa - Dosis B.
Descripción Detallada de la Invención Al describir y reclamar la presente invención, se utilizará la siguiente terminología de acuerdo con las definiciones establecidas más adelante. A menos que sea definido de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente descripción tienen el mismo significado que se entiende de manera común por los expertos en la materia a la cual pertenece la presente invención. Aunque cualesquiera métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos descritos en la presente descripción pueden utilizarse en la práctica o pruebas de la presente invención, los métodos y materiales preferidos son los descritos en la presente descripción. Como se utiliza en la presente descripción, cada uno de los siguientes términos tiene el significado asociado con éste en esta sección. Las válvulas específicas y preferidas relacionadas más adelante para los radicales, sustituyentes, y rangos son únicamente de ilustración; no excluyen otros valores definidos u otros valores dentro de los rangos definidos para los radicales y los sustituyentes.
Como se utiliza en la presente descripción, los artículos "un" y "una" se refieren a uno o a más de uno, es decir, a por lo menos uno, del objeto gramatical del artículo. A modo de ejemplo, "un elemento" significa un elemento o más de un elemento.
El término "aproximadamente" como se utiliza en la presente descripción, significa, aproximadamente, en la región de, a grandes rasgos o alrededor de. Cuando se utiliza el término "aproximadamente" en conjunto con un rango numérico, éste modifica ese rango extendiendo los límites por arriba y por debajo de los valores numéricos establecidos. En general, el término "aproximadamente" se utiliza en la presente descripción para modificar un valor numérico por encima y por debajo del valor establecido por una variación del 20%.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "célula afectada" se refiere a una célula de un sujeto que padece una enfermedad o padecimiento, cuya célula afectada tiene un fenotipo alterado en comparación con un sujeto que no padece una enfermedad, condición o padecimiento.
Las células o tejido son "afectados" por una enfermedad o padecimiento si las células o tejido tienen un fenotipo alterado en relación con las mismas células o tejido en un sujeto que no padece una enfermedad, condición o padecimiento.
Como se utiliza en la presente, un "agonista" es una composición de material que, cuando es administrada a un mamífero, tal como un humano, mejora o extiende la actividad biológica de interés. Dicho efecto puede ser directo o indirecto.
Un "antagonista" es una composición de material que cuando es administrado a un mamífero, tal como un humano, inhibe o impide una actividad biológica que se puede atribuir al nivel o presencia de un compuesto endógeno en el mamífero. Dicho efecto puede ser directo o indirecto.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "inhibidor de aromatasa" se refiere a una composición que bloquea la conversión de androstenodiona a estrona y/o testosterona a estradiol. Los inhibidores de aromatasa incluyen las clases de inhibidores tanto esteroidales como no esteroidales que incluyen, por ejemplo, exemestano, anastrozole y letrozole.
Como se utiliza en la presente descripción, un "análogo" de un compuesto químico es un compuesto que, a modo de ejemplo, se parece a otro en estructura, pero no es necesariamente un isómero (por ejemplo, 5-fluorouracilo es un análogo de timina).
El término "apoptosis" se refiere a la muerte celular programada mediada por las trayectorias bioquímicas que pueden ser inducidas de diversas formas. Un agente o fármaco "pro-apoptótico" es un agente bioactivo o un fármaco que produce un efecto bioquímico que tiene como resultado una muerte celular programada. Como se describe en la presente descripción, la apoptosis puede ser producida o inducida por las trayectorias o mecanismos intrínsecos o extrínsecos, como se describe adicionalmente más adelante. La trayectoria de apoptosis "extrínseca" involucra los receptores de muerte, y esta trayectoria es activada por los ligandos que enlazan a los receptores de muerte. La trayectoria de apoptosis "intrínseca" involucra las trayectorias mitocondriales que inician la apoptosis. "Horizontal" como en la modulación horizontal, se refiere a los estímulos que afectan más de una trayectoria específica, mientras que "vertical" como en modulación vertical, significa que están involucrados nuevamente varios pasos en la misma trayectoria.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "cáncer de seno" se refiere a cualquiera de los diferentes tipos y sub-tipos de carcinomas de seno o de tejido mamario.
El término "cáncer" como se utiliza en la presente descripción es definido como la proliferación de células, la cual pierde la característica única de los controles-resultados normales en el crecimiento no regulado, la falta de diferenciación, invasión de tejido local y metástasis. Los ejemplos incluyen, sin limitar a, cáncer de seno, cáncer de próstata, cáncer de ovarios, cáncer cervical, cáncer de piel, cáncer pancreático, cáncer colorectal, cáncer renal y cáncer de pulmón.
Un "compuesto" como se utiliza en la presente descripción, se refiere a cualquier tipo de sustancia o agente que normalmente se considera un fármaco, o un candidato para utilizar como un fármaco, así como también combinaciones y mezclas de los anteriores.
Un "conjugado" es una entidad molecular que combina por lo menos dos "porciones" o dominios, en asociación unos con los otros. Un conjugado "covalente" es un conjugado en donde las porciones están asociadas por medio de enlaces químicos covalentes, tales como aquellos bien conocidos en la materia. Por ejemplo, una proteína, tal como un anticuerpo monoclonal, puede hacer que se forme un conjugado con un compuesto orgánico, tal como un fármaco, tal como a través de un enlace covalente. Cuando la proteína es un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal, el conjugado resultante es denominado en la presente como un "inmunoconjugado". El enlace covalente entre una proteína (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal) y un compuesto orgánico (por ejemplo un fármaco) puede ocurrir a través de un "enlazador" o "porción de enlazador", el cual está enlazado en forma covalente tanto al compuesto orgánico como a la proteína. Los ejemplos se describen a más adelante.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "enlazador" o "porción de enlazador" se refiere a una porción molecular que une dos porciones moleculares deferentes, ya sea en forma covalente, o no covalente, por ejemplo, a través de enlaces iónicos o de hidrógeno o de interacciones de van der Waals Los ejemplos específicos se proporcionan más adelante. "Enlace" o "enlazador" se refiere a una conexión entre dos grupos.
Una "porción" como el término que se utiliza en la presente descripción, se refiere a un dominio de una molécula más grande; por ejemplo, en el conjugado T-DMI, el fármaco maitansinoide es acoplado por medio de un enlazador al anticuerpo monoclonal, de manera que en el producto final una porción de fármaco de maitansinoide es enlazada por medio de una porción de enlace a una porción de anticuerpo monoclonal. Un ejemplo de un conjugado que comprende dichas porciones, se proporciona mediante la entidad molecular T-DMI, la cual es un conjugado covalente del anticuerpo monoclonal trastuzumab (Herceptin®) , y un compuesto citotóxico macrocíclico maitansinoide, la estructura del cual se muestra más adelante: DM, Enlazador Se considera que el acoplamiento del enlazador al trastuzumab es por medio del enlace de la porción de enlace al átomo de nitrógeno de un residuo de aminoácido de cadena lateral de la proteína trastuzumab, tal como un residuo de Usina. La estructura molecular del trastuzumab, siendo bien conocida en la materia, no se proporciona con detalle. Los inmunoconjugados, tales como de un anticuerpo y un fármaco pro-apoptótico, tales como un maitansinoide, pueden preparase y evaluarse mediante los métodos descritos en la presente descripción y en los documentos incorporados como referencia en la presente descripción Un inmunoconjugado comprende un anticuerpo conjugado con una o más moléculas bioactivas. El inmunoconjugado T-DMI, como el que se mostró anteriormente, comprende una porción maitansinoide acoplada a la porción del anticuerpo monoclonal. Los maitansinoide son inhibidores mitotóticos, los cuales actúan inhibiendo la polimerización de tubulina o induciendo la despolimerización del microtúbulo. Como es bien conocido en la materia, la polimerización y despolimerización de tubulina son eventos esenciales involucrados en la mitosis, división celular. La supresión prolongada de la división celular, se considera un estado que puede inducir a la apoptosis en las células con supresión de mitosis.
La maitansina se aisló primero a partir del arbusto dentado de África del este Maytenus (Patente Norteamericana No. 3896111). De manera subsiguiente, se descubrió que ciertos microbios también producen maitansinoide, tales como maitansinol y ésteres de maitansinol C-3 (patente Norteamericana No. 4,151,042). Se describe el maitansinol sintético y los derivados y análogos del mismo, por ejemplo, en las patentes Norteamericanas 4,137,230; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814; 4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,364,866; 4,424,219; 4,450,254; 4,362,663; y 4,371,533.
Las porciones de fármaco de maitansinoide son porciones de fármaco atractivas en los conjugados de anticuerpo-fármaco debido a que son: (i) relativamente accesibles para ser preparadas por fermentación o modificación química o derivación de productos de fermentación (ii) sensible a derivación con los grupos funcionales adecuados para la conjugación a través de enlazadores que no son de bisulfuro (no se pueden reducir), (iii) estable en plasma, y (iv) efectivos contra una variedad de líneas celulares de tumor.
Los compuestos de maitansina adecuados para utilizarse como porciones de fármaco maitansinoide son bien conocidos en la materia y pueden ser aislados a partir de fuentes naturales de acuerdo con los métodos conocidos o producidos utilizando técnicas de ingeniería genética (Véase la publicación de Yu, y asociados (2002) PNAS 99: páginas 7968 a 7973). El maitansinol y los análogos de maitansinol pueden prepararse también en forma sintética de acuerdo con los métodos conocidos.
Las porciones de fármaco maitansinoide incluyen aquellos que tienen una anillo aromático modificado, tal como: C-19-decloro (patente Norteamericana No. 4256746) (preparado mediante reducción de hidruro de litio-aluminio de ansamitocina P2)¡ C-20-hidroxi (o C-20-demetil) +/-C-19- decloro (patentes Norteamericanas Nos. 4361650 y 4307016) (preparados mediante la desmetilación utilizando estreptomices o Actinomices o descloración utilizan LAH); y C-20-demetoxi,C-20-aciloxi (-OCOR), +/-decloro (Patente Norteamericana No. 4,294,757) (preparado mediante acilación utilizando cloruros de acilo) y aquellos que tienen modificaciones en otras posiciones.
Las porciones de fármaco maitansinoide de ejemplo también incluye aquellos que tienen modificaciones tales como: C-9-SH (Patente Norteamericana No. 4424219) (preparada mediante la reacción d maitansinol con H2S o P2S5); C-14-alcoximetil(demetoxi/CH2 OR)(patente Norteamericana 4331598); C-14-hidroximetil o aciloximetil (CH2OH o CH2OAc) (Patente Norteamericana No. 4450254) (preparado a partir de Nocardia); C-15-hidroxi/aciloxi (patente Norteamericana 4364866) (preparada mediante la conversión de maitansinol mediante Estreptomices) ; C-15-metoxi (Patente Norteamericana Nos. 4313946 y 4315929) (aislado a partir de Trewia nudlflora); C-18-N-demetil (Patente Norteamericana Nos. 4362663 y 4322348) (preparado mediante la desmetilación de maitansinol mediante Estreptomices); y 4,5-deoxi (Patente Norteamericana 4371533) (preparado mediante el tricloruro de titanio/LAH reducción de maitansinol).
Una "auristatina", como se utiliza el término en la presente descripción, se refiere a fármacos anti-cáncer peptídicos, tales como dolastatinas y auristatinas que han mostrado interferir con la dinámica del microtúbulo, la hidrólisis GTP, y la división nuclear y celular (Woyke y asociados (2001) Antimicrob. Agents and Chemother 45(12): páginas 3580 a 3584) y tienen actividad anti cáncer (patente Norteamericana No.5663149) y actividad antifúngica (Pettit y asociados (1998) Antimicrob. Agents Chemother 42: páginas 2961-2965). Véanse, por ejemplo, las patentes Norteamericanas Nos. 5635483 y 5780588.
Un sujeto de "control" es un sujeto que tiene las mismas características de un sujeto de prueba, tal como un tipo similar de dependencia, etc. El sujeto de control puede ser, por ejemplo, examinado precisamente o casi en el mismo momento que el sujeto de prueba que está siendo tratado o examinado. Un sujeto de control, también puede ser, por ejemplo, examinado en un momento distante del momento en el cual es examinado el sujeto de prueba, y los resultados del examen del sujeto de control pueden ser registrados, de manera que los resultados registrados pueden compararse con los resultados obtenidos por el examen de un sujeto de prueba.
Un sujeto de "prueba" es un sujeto que está siendo tratado.
Como se utiliza en la presente descripción, un "derivado" de un compuesto se refiere a un compuesto químico que puede producirse a partir de otro compuesto de estructura similar en uno o más pasos, como en el reemplazo de H mediante un alquilo, acilo o grupo amino.
Una "enfermedad" es un estado de salud de un sujeto, en donde el sujeto no puede mantener la homeostasis, y en donde si la enfermedad no es mejorada, entonces la salud del sujeto continúa en deterioro. En contraste, un "padecimiento" en un sujeto es un estado de salud en el cual, el sujeto tiene la capacidad de mantener la homeostasis, pero en el cual, el estado de salud del sujeto es menos favorable del que podría ser en la ausencia del padecimiento.
Una enfermedad, condición o padecimiento es "aliviado2 si la severidad de un síntoma de la enfermedad o padecimiento, la frecuencia con la cual es experimentado dicho síntoma por un paciente, o ambos, se reducen.
Como se utiliza en la presente descripción, una "cantidad efectiva" significa una cantidad suficiente para producir un efecto seleccionado, tal como el alivio de los síntomas de una enfermedad o padecimiento. En el contexto de la administración de dos o más compuestos, la cantidad de cada compuesto, cuando es administrada en combinación con otros compuestos, puede ser diferente de cuando ese compuesto es administrado solo.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "estrógeno" se refiere a una clase de compuestos que incluyen las composiciones de ocurrencia natural y elaboradas en forma sintética que tienen una habilidad demostrada para inducir la proliferación celular y/o iniciar una síntesis de proteína nueva en las células sensibles al estrógeno. Los estrógenos que ocurren de manera natural incluyen estrona (E1), estradiol-17B (E2), y estriol (E3), y de estos, el estradiol es el más activo farmacológicamente Los estrógenos sintéticos son compuestos que no ocurren en la naturaleza y duplican o imitan la actividad de los estrógenos endógenos hasta cierto grado. Estos compuestos incluyen una variedad de composiciones esteroidales y no esteroidales ejemplificadas por dienestrol, bencestrol, hexestrol, metestrol, dietilstilbestrol (DES), quinestrol (Estrovis), clorotrianiseno Tace), y metalenostril (Vallestril).
Como se utiliza en la presente descripción, el término "antagonista de estrógeno" se refiere a un compuesto que tiene un efecto de neutralización o inhibidor sobre una actividad de estrógeno cuando es administrado en forma simultánea con ese estrógeno. Los ejemplos de inhibidores de estrógeno incluyen tamoxifeno y toremifeno.
Como se utiliza en la presente descripción, una molécula "funcional" es una molécula en una forma en la cual exhibe una propiedad o actividad mediante la cual se caracteriza. Una enzima funcional, por ejemplo, es una que exhibe la actividad catalítica característica, mediante la cual se caracteriza la enzima.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "terapia de privación de hormonas" se refiere a cualquier tratamiento de un paciente que bloquea la acción de, o remueve (ya sea evitando la síntesis o mejorando la destrucción de la hormona) la presencia de hormonas de un paciente. En el caso específico de un cáncer de seno, la terapia de privación de hormonas puede incluir la privación de estrógeno, mediante el bloque de la biosíntesis de estrógeno, o el bloqueo del efecto del estrógeno en un receptor de estrógeno tal como HER-2.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "células/tejido sensible a hormonas" se refiere a células o tejidos no cancerosos que son naturalmente sensibles a, por ejemplo, estrógenos o andrógenos, en donde las células o tejido proliferan y/o inician una síntesis nueva de proteína en la presencia de la hormona. Los tejidos sensibles a hormonas incluyen las glándulas mamarias, testículos, próstata, útero y cuello del útero Un tejido que normalmente es sensible a estrógenos y andrógenos puede perder su sensibilidad a la hormona. Por lo tanto, el "tejido sensible a hormonas" es un término amplio como el que se utiliza en la presente descripción y abarca tejidos tanto sensibles a hormonas como insensibles a las hormonas que normalmente responden a las hormonas. Una "célula/tejido sensible al estrógeno" es uno que es sensible al estrógeno.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "cánceres sensibles a hormonas" se refiere a células o tejidos que son derivados de las células/tejidos sensibles a hormonas y una "célula de cáncer sensible a hormona adaptada" es una célula de cáncer sensible a hormona que proliferará en respuesta a los niveles de hormonas que podrían no producir una respuesta en una célula sensible a hormona correspondiente.
A partir de la exposición a sustancias, tales como inhibidores de aromatasa que bloquea la producción de estrógeno como el que se describió anteriormente, o los antagonistas de estrógeno, tal como tamoxifeno, u otros agentes del efecto de bloqueo de estrógeno similar, las células de cáncer sensibles al estrógeno, tales como las que se encuentran en el cáncer de seno pueden desarrollar resistencia a la disminución de niveles de estrógeno en el tejido. En dichos casos, el uso de inhibidores de aromatasa ya no es efectivo al controlar el cáncer de seno. Las células involucradas en dichos cánceres en la presente descripción se denominan células "privadas de estrógeno a largo plazo", "resistentes a hormonas" o "refractarias a hormonas", y la enfermedad macroscópica es denominada, en forma intercambiable, cáncer de seno "resistente a hormonas" o "refractario de hormonas". Sin embargo, se debe comprender que las células "resistentes a hormonas" o "refractarias a hormonas" y los cánceres pueden surgir también por medio de otros mecanismos.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "respuesta de hormona adaptada" o "respuesta adaptada" se refiere al proceso mediante el cual las células o tejidos que son derivadas del tejido sensible a hormona tiene la capacidad de responder a (es decir, proliferar y/o iniciar síntesis de proteína nueva) los niveles de hormona que previamente no puede producir una respuesta en esas células.
El término "inhibir" como se utiliza en la presente descripción, se refiere a la capacidad de un compuesto o cualquier agente para reducir o impedir una función descrita, nivel, actividad, síntesis, liberación, enlace, etc., con base en el contexto en el cual se utiliza el término "inhibir". Preferentemente, la inhibición es mediante por lo menos el 10%, más preferentemente en por lo menos el 25%, incluso más preferentemente en por lo menos el 50%, y más preferentemente, la función es inhibida en por lo menos el 75%. El término "inhibir" se utiliza en forma intercambiable con "reducir" y "bloquear".
El término "inhibe una proteína", como se utiliza en la presente descripción, se refiere a cualquier método o técnica, la cual inhibe la síntesis de proteína, niveles, actividad o función, así como también a los métodos para inhibir la inducción o estimulación de la síntesis, niveles, actividad, o función de la proteína de interés. El término también se refiere a cualquier trayectoria metabólica o reguladora, la cual puede regular la síntesis, niveles, actividad o función de la proteína de interés. El término incluye el enlace con otras moléculas y formación de complejo. Por consiguiente, el término "inhibidor de proteína" se refiere a cualquier agente o compuesto, la aplicación del cual tiene como resultado la inhibición de la función de proteína o función de trayectoria de proteína. Sin embargo, el término no implica que todas y cada una de estas funciones deba inhibirse al mismo tiempo. Un "inhibidor" puede realizar cualquiera de estas funciones, por ejemplo, un inhibidor de aromatasa bloquea la actividad catalítica biosintética mediante la cual, la enzima de aromatasa (una proteína) convierte un precursor en un estrógeno.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "inhibición de actividad mTOR" se refiere a una disminución que se puede detectar en la habilidad de mTOR para fosforilar uno o más de estos sustratos que incluyen, por ejemplo, p70 S6K y PHAS-I. Un inhibidor mTOR es un compuesto que tiene un efecto inhibidor directo sobre la actividad mTOR (es decir, la inhibición de actividad mTOR no es mediada, sin embargo un efecto inhibidor sobre una enzima de trayectoria en corriente ascendente).
Como se utiliza en la presente descripción, un "material de instrucción" incluye una publicación, un registro, un diagrama, o cualquier otro medio de expresión, el cual se puede utilizar para comunicar la utilidad de un compuesto de la presente invención en el kit para efectuar el alivio de las diversas enfermedades o padecimientos citados en la presente descripción. Opcionalmente, o de manera alternativa, el material de instrucción puede describir uno o más métodos para aliviar la enfermedad o padecimientos en un sujeto. El material de instrucción del equipo de la presente invención puede, por ejemplo, fijarse a un contenedor, el cual contiene el compuesto identificado de la presente invención o ser transportado junto con un contenedor el cual contiene el compuesto identificado.
De manera alternativa, el material de instrucción puede ser transportado por separado del contenedor con la intención del material de instrucción y el compuesto será utilizado en forma cooperativa con el receptor Como se utiliza en la presente descripción, un "ligando" es un compuesto que se enlaza en forma específica a un compuesto o molécula objetivo. Un ligando se "enlaza en forma específica a" o "es reactivo en forma específica con" un compuesto cuando el ligando funciona en una reacción de enlace, el cual es determinante de la presencia del compuestos en una muestra de compuestos heterógenos.
Un "receptor" es un compuesto o molécula que se enlaza en forma específica a un ligando.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "ácido nucleico" abarca ARN, así como también, ADN y cADN de cadena sencilla y doble. Adicionalmente, los términos "ácido nucleico" "ADN", "ARN", y los términos similares también incluyen análogos de ácido nucleico, es decir, análogos que tienen otros diferentes de una columna de fosfodiéster.
El término "péptido" se refiere normalmente a polipéptidos cortos.
"Polipéptido" se refiere a un polímero compuesto de residuos de aminoácidos, variantes estructurales que ocurren naturalmente relacionados, y análogos que no ocurren naturalmente sintéticos de los mismos, enlazados por medio de enlaces de péptidos, las variantes estructurales que ocurren naturalmente relacionados, y los análogos que no ocurren naturalmente sintéticos de los mismos. Los polipéptidos sintéticos pueden ser sintetizados, por ejemplo, utilizando un sintetizador de polipéptido automatizado.
El término "proteína" se refiere normalmente a polipéptidos largos.
Un "polipéptido recombinante" es uno, el cual es producido a partir de la expresión de un polinucleótido recombinante.
El término "por aplicación" como el que se utiliza en la presente descripción se refiere a la administración de un fármaco o compuesto a un sujeto.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "portador farmacéuticamente aceptable" incluye a cualquiera de los portadores farmacéuticos estándar, tales como una solución salida amortiguada por fosfato, agua, emulsiones, tales como una emulsión de aceite/agua o agua/aceite, y diversos tipos de agentes de humectación. El término también abarca cualquiera de los agentes aprobados por una agencia reguladora del gobierno de los Estados Unidos o relacionado en la Farmacopea de E.U.A. para el uso en animales, que incluyen humanos. Una "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una entidad molecular, ya sea acida o básica, en la forma de una sal con un contraión que es farmacéuticamente aceptable en términos de aprobación por una agencia reguladora o listado en la Farmacopea de E.U.A.
Como se utiliza en la presente descripción, el término éster o sal "fisiológicamente aceptable" significa un éster o forma de sal del ingrediente activo, el cual es compatible con cualesquiera otros ingredientes de la composición farmacéuticamente, y la cual no es nociva para el sujeto al cual se administrará la composición.
El término "evita" como se utiliza en la presente descripción, significa detener algo que ocurre, o tener ventaja de las medidas contra algo posible o probable que ocurra. En el contexto de la medición, "prevención" se refiere generalmente a la acción tomada para disminuir la oportunidad de contraer una enfermedad o condición.
Como se utiliza en la presente descripción, "grupo de protección" con respecto a un grupo amino terminal se refiere a un grupo amino terminal de un péptido, cuyo grupo amino terminal es acoplado con cualquiera de los diversos grupos de protección amino-terminales empleados de manera tradicional en la síntesis de péptido. Dichos grupos de protección incluyen, por ejemplo, grupos de protección acilo, tales como formilo, acetilo, benzoilo, trifluoroacetilo, succinilo, y metoxisuccinilo; grupos de protección uretano aromáticos tales como benziloxicarbonilo; y grupos de protección uretano alifáticos, por ejemplo, ter-butoxicarbonilo o adamantiloxicarbonilo. Véase la publicación de Gross y Mienhofer, eds., The Peptides, vol. 3, páginas 3 a 88 (Academic Press, Nueva York, 1981) para los grupos de protección adecuados.
Como se utiliza en la presente descripción, "grupo de protección" con respecto a un grupo carboxilo terminal se refiere a un grupo carboxilo terminal de un péptido, cuyo grupo carboxilo terminal es acoplado con cualquiera de los diversos grupos de protección amino terminales carboxilo. Dichos grupos de protección incluyen, por ejemplo, ter-butilo, bencilo u otros grupos aceptables enlazados al grupo carboxilo terminal a través de un enlace éster o éter.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "purificado" y los términos similares se relacionan con un enriquecimiento de una molécula o compuesto en relación con otros componentes asociados normalmente con la molécula o compuesto en un ambiente nativo. El término "purificado" no indica necesariamente que se ha logrado la pureza completa de la molécula particular durante el proceso. Un compuesto "altamente purificado" como se utiliza en la presente descripción se refiere a un compuesto que es mayor que el 90% pu ro .
El término "regular" se refiere, ya sea a estimulación o inhibición de una función o actividad de interés.
Una "muestra", como se utiliza en la presente descripción, se refiere a una muestra biológica de un sujeto, que incluye, sin limitar a, muestras de tejido normal, muestras de tejido enfermo, biopsias, sangre, saliva, heces, semen, lágrimas u orina. Una muestra también puede ser cualquier otra fuente de material obtenida de un sujeto, el cual contiene células, tejidos o fluido de interés.
Por el término, "enlaza de manera específica", como se utiliza en la presente descripción, significa una molécula, la cual reconoce y enlaza una molécula específica, pero no reconoce o enlaza de manera sustancial a otras moléculas en una muestra, o significa que un enlace entre dos o más moléculas como gna porte de un proceso regulador celular, en donde dichas moléculas no reconocen o enlaza de manera sustancial a otras moléculas en la muestra.
El término "estándar" como se utiliza en la presente descripción, se refiere a algo utilizado para la comparación. Por ejemplo, puede ser un agente o compuesto estándar conocido el cual es administrado o agregado y utilizado para comparar los resultados cuando se agrega un compuesto de prueba, o puede ser un parámetro estándar o función, la cual es medida para obtener un valor de control cuando mide un efecto de un agente o compuesto sobre un parámetro o función. El estándar también puede referirse a un "estándar interno", tal como un agente o compuesto, el cual es agregado en cantidades conocidas a una muestra y es útil para determinar cosas tales como índices de purificación o recuperación cuando una muestra es procesada o sometida a procedimientos de purificación o extracción antes de que se mida un marcador de interés. Los estándares internos, con frecuencia son un marcador purificado de interés, el cual ha sido etiquetado, tal como con un isótopo radioactivo, lo que le permite ser distinguido de un marcador endógeno.
Un "sujeto" de diagnóstico o tratamiento es un mamífero, que incluye a un humano.
El término "síntoma" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier fenómeno mórbido o alejamiento normal en la estructura, función o sensación, experimentado por el paciente e indicativo de la enfermedad. En contraste, uh signo es la evidencia objetivo de la enfermedad. Por ejemplo, un sangrado nasal es una señal. Esto es evidente para el paciente, el doctor, la enfermera y otros observadores.
Como se utiliza en la presente descripción, el término "tratamiento" puede incluir la profilaxis de la enfermedad, padecimiento o condición específicos, o el alivio de los síntomas asociados con una enfermedad, padecimiento o condición específica y/o evita o elimina dichos síntomas. Un tratamiento "profiláctico" es un tratamiento administrado a un sujeto que no exhibe señales de una enfermedad o exhibe únicamente las señales tempranas de la enfermedad con el propósito de disminuir el riesgo de desarrollar la patología asociada con la enfermedad. "Tratar" se utiliza en forma intercambiable con "tratamiento" en la presente descripción. Por ejemplo, el tratamiento del cáncer incluye evitar o disminuir el crecimiento y/o división de las células de cáncer, así como también eliminar a las células de cáncer o reducir el tamaño de un tumor. Las señales adicionales de tratamiento exitoso del cáncer incluye la normalización de pruebas tales como conteo de glóbulos blancos, conteo de glóbulos rojos, conteo de plaquetas, índice de sedimentación de eritrocito, y varios niveles de enzimas, tales como transaminasas e hidrogenases . Adicionalmente, el médico puede observar una disminución en un marcador que se puede detectar, tal como el antígeno específico prostético (PSA).
Un tratamiento "terapéutico" es un tratamiento administrado a un sujeto que exhibe señales de patología para el propósito de disminuir o eliminar dichas señales.
Una "cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto es aquella cantidad del compuesto, que es suficiente para proporcionar un efecto benéfico al sujeto al cual es administrado el compuesto.
En las diversas modalidades de un método de la presente invención, el inmunoconjugado puede ser cualquiera de los inmunoconjugados planteados anteriormente. La estructura de T-DMI es la provista anteriormente.
Los fármacos pro-apoptóticos mencionados en la presente descripción incluyen: FTS (Salirasib®) CMH (droxinostat) Modalidades La presente invención está dirigida, en las diversas modalidades, al desarrollo de terapias anti-cáncer adecuadas para los estados de enfermedad en donde el desarrollo de resistencia de las células de cáncer ha ocurrido o tiene una probabilidad alta de ocurrencia, utilizando un aditivo o combinación sinergística de agentes que inducen la muerte celular (apoptosis), como se describe y reclama en la presente descripción. Mediante el uso de estos métodos, el desarrollo de resistencia a los fármacos por las células de cáncer puede disminuirse en relación con la frecuencia de desarrollo de resistencia utilizando un fármaco anti cáncer, o resistencia puede superarse en las células de cáncer que ya han experimentado la mutación de adaptación a una terapia. En las diversas modalidades, los métodos inventivos pueden ser efectivos para el tratamiento del cáncer de seno resistente a hormonas, en donde el cáncer ya no es sensible a los tratamientos de primera línea tal como el uso de inhibidores de aromatasa, tales como anastrazole y los similares, o el uso de moduladores de receptor de estrógeno o antagonistas, tales como tamoxifeno y los similares.
Por ejemplo, el cáncer resistente a la terapia puede ser un cáncer de seno, tal como un cáncer de seno resistente a aromatasa, un cáncer de seno resistente a tamoxifeno, un cáncer de seno refractario a hormona ER + , o un cáncer de seno que comprende células de cáncer en las cuales la expresión HER2 es sobre-regulada (cáncer de seno HER-2 positivo), o cualquier combinación de los mismos.
Como se planteó anteriormente, las células privadas de estrógeno a largo plazo, tales como células de cáncer de seno sensibles a estrógeno en pacientes que han recibido el inhibidor de aromatasa o terapia de antagonista de estrógeno, puede desarrollar un grado incrementado de sensibilidad a los niveles de estrógeno muy por debajo aquellos encontrados normalmente en tejido de seno. Este efecto puede ocurrir como un resultado de sobre-regulación y sobre-expresión de los genes que codifican a los receptores HER, tales como los genes que codifican HER2. En un paciente de cáncer de seno que ha sido tratado con agentes de primera línea, tales como inhibidores de aromatasa o antagonistas de estrógeno, dichas células pueden proliferar en la ausencia de niveles de estrógeno normales, dando como resultado cáncer de seno que ha desarrollado resistencia a estas terapias de primera línea, es decir, se han vuelto cáncer de seno resistente a las hormonas o cáncer de seno refractario a las hormonas. En dichos estados de enfermedad, el uso de terapia de segunda línea se vuelve vital para la supervivencia del paciente. En las diversas modalidades, la presente invención proporciona una terapia de segunda línea para el tratamiento de cánceres de seno resistentes a hormonas, tales como aquellos cánceres que han desarrollado resistencia mediante dicho mecanismo.
Los inventores eligieron una estrategia pro-apoptótica en la presente descripción como preferible antes una estrategia de inhibición del crecimiento para reducir la frecuencia de mutaciones de adaptación en las células objetivo, mediante la eliminación de células de cáncer resistentes, en lugar de únicamente inhibir su crecimiento. Los inventores de la presente invención, también describen el uso de por lo menos dos agentes pro-apoptóticos que actúan horizontalmente, es decir, sobre dos trayectorias diferentes ("modulación horizontal"), cada una de las cuales puede dar como resultado una inducción de apoptosis y muerte celular, se ha descubierto que proporciona un efecto aditivo o sinergístico en la inducción de apoptosis, en donde la frecuencia del desarrollo de resistencia se disminuye. En las terapias de segunda línea que involucran el tratamiento de células de cáncer de seno resistentes a las hormonas, la estrategia pro-apoptótica puede reducir la probabilidad de mutaciones de adaptación adicionales, induciendo la muerte celular. El uso adicional de modulación horizontal puede servir para reducir adicionalmente la probabilidad de células que evitan la apoptosis mediante mutaciones de adaptación, en la medida que más de un mecanismo de inducción de apoptosis único puede ser invocado, y las probabilidades de dos mecanismos de desarrollo de resistencia en una célula única antes de su muerte es menor que la probabilidad de un mecanismo único de desarrollo de resistencia.
La apoptosis puede ocurrir, ya sea a través de las trayectorias de receptor de muerte (trayectorias extrínsecas) o mediante las trayectorias mediadas por la mitocondria (trayectorias intrínsecas). Los inventores de la presente invención han descubierto de manera inesperada los aditivos y combinaciones sinergísticas de agentes anti-cáncer pro-apoptóticos, tales como un par de agentes pro-apoptóticos que actúan para inducir la apoptosis por medio de mecanismos moleculares diferentes, que son efectivos para eliminar células de cáncer adaptadas a hormonas en las líneas celulares bien caracterizadas, tales como resistentes a Tamoxifeno (TamR) y líneas celulares privadas de estrógeno a largo plazo (LTED) para modelos de cáncer de seno refractario de hormona, y para su comparación, líneas celulares de tipo natural MCF-7 y T47D. Se considera que los efectos sinergísticos más probablemente ocurrirán cuando dos agentes anti-cáncer pro-apoptóticos inducen la apoptosis por mecanismos diferentes.
En las diversas modalidades, un método para el tratamiento de la presente invención proporciona efectos terapéuticos sinergísticos en el tratamiento del cáncer, especialmente cáncer de seno. La presente solicitud describe los resultados sorpresivos que ciertas combinaciones de fármacos proporcionan un efecto sinergístico cuando se tratan células de cáncer de seno. En una modalidad, un tratamiento de combinación que utiliza FTS y CMH se descubrió que proporcionan efectos sinergísticos. En una modalidad, un tratamiento de combinación que utiliza TMS y CMH proporciona efectos sinergísticos. Por lo tanto, la presente invención abarca adicionalmente las terapias de combinación utilizando no únicamente FTS, TMS y CMH, aunque también los fármacos con actividades similares, administración de dos o más de dichos fármacos en conjunto pueden proporcionar efectos terapéuticos sinergísticos, tales como en el tratamiento de cáncer de seno, por ejemplo, cánceres de seno refractarios de hormonas y resistentes a hormonas. Por ejemplo, las combinaciones que utilizan FTS y ES proporcionan de manera sorpresiva los efectos sinergísticos altos.
En algunas modalidades, la combinación de T-DMI con cualquiera de E2, FTS y CMS proporciona efectos sinergísticos, con la combinación de T-DMI con, ya sea FTS o CMH que muestra la sinergia más fuerte, véase la tabla 1, más adelante.
Los inventores en la presente descripción describen métodos de tratamiento que comprenden la administración a un paciente afligido con cáncer, tal como cáncer de seno, dos o más agentes anti-cáncer pro-apoptótico que afectan a las células a través de la modulación horizontal, en donde los dos agentes actúan sobre trayectorias apoptóticas diferentes, en lugar de sobre los pasos secuenciales en una trayectoria apoptótica única (modulación vertical). La trayectoria de apoptosis "extrínseca" involucra los receptores de muerte, y esta trayectoria es activada por los ligandos que enlazan a los receptores de muerte. La trayectoria intrínseca involucra las trayectorias mitocondriales que inician la apoptosis. Horizontal se refiere a los estímulos que afectan más de una trayectoria específica, mientras que la modulación vertical, significa que están involucrados nuevamente varios pasos en la misma trayectoria. En las diversas modalidades, los por lo menos dos fármacos logran la modulación horizontal. En las diversas modalidades, la modulación horizontal proporciona efectos sinergísticos de los por lo menos dos fármacos. En las diversas modalidades, la terapia de combinación de la presente invención que utiliza por lo menos dos fármacos, produce efectos sinergísticos sobre las células de cáncer de seno no adaptadas.
Un método de la presente invención, en sus diversas modalidades, proporciona un método para el tratamiento del cáncer, que comprende la administración a un paciente que padece el mismo de una cantidad efectiva de un inmunoconjugado que comprende una porción de anticuerpo monoclonal y una primera porción de fármaco pro-apoptótico enlazado al mismo por medio de una porción de enlace; y administrar al paciente una cantidad efectiva de un segundo fármaco pro-apoptótico. Por ejemplo, el inmunoconjugado puede comprender una primera porción de fármaco pro-apoptótico enlazado de manera covalente, como se planteó con mayor detalle más adelante.
Por ejemplo, el cáncer a ser tratado puede ser un cáncer de seno. Más específicamente, el cáncer de seno puede ser un cáncer de seno resistente a hormonas (refractario por hormonas), tal como resulta de la proliferación de las células privadas de estrógeno a largo plazo que han experimentado mutación de adaptación. En algunas mutaciones de adaptación que confieren resistencia a hormonas, el cáncer de seno es denominado como un cáncer de seno resistente a HER2. Por un cáncer de seno resistente a HER2 se entiende un cáncer de seno en donde las células han experimentado mutación de adaptación que proporciona resistencia a tratamientos de primera línea que se dirigen a entidades moleculares y sus interacciones con el receptor HER2. En algunas mutaciones de adaptación que confieren resistencia a hormonas, el cáncer de seno es denominado como cáncer de seno resistente a aromatasa. Por cáncer de seno resistente a aromatasa se entiende un cáncer de seno que se ha vuelto resistente a terapia de aromatasa. Como se describió anteriormente, la aromatasa es una enzima involucrada en un paso clave de biosíntesis de estrógeno.
En las diversas modalidades, la porción de dirección del inmunoconjugado se enlaza el receptor HER2. En células de cáncer que se han vuelto resistentes a aromatasa o la terapia de antagonista de estrógeno, la sobre-expresión del receptor del HER2 puede ser una causa. Cuando la sobre-expresión ha ocurrido, el receptor se vuelve en forma selectiva más abundancia por célula en la células de cáncer resistentes, y en la presencia de una porción de dirección de un anticuerpo monoclonal específico, puede enlazar más moléculas por células del conjugado de anticuerpo-fármaco. Con el inmunoconjugado localizado sobre la célula de tumor, una concentración local superior de la primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico puede lograrse. Véase la publicación de Liu C y Chari R, "El desarrollo de los sistemas de administración de anticuerpo para cáncer objetivo con maitansinoides altamente potentes" (The development of antibody delivery systems to target cáncer with highly potent maytansinoids), Exp. Opin. Invest. Drugs (1997) 6(2): páginas 169-172.
Por consiguiente, en las diversas modalidades, el método inventivo puede utilizarse en el tratamiento de un cáncer, en donde el cáncer es cáncer de seno. Más específicamente, el cáncer de seno puede ser un cáncer de seno resistente a aromatasa; o el cáncer de seno puede ser ER + cáncer de seno refractario de hormona; o el cáncer de seno puede ser cáncer de seno HER2 positivo; o el cáncer de seno comprende células de cáncer en las cuales la expresión HER2 es sobre-regulado. En diversas modalidades, el inmunoconjugado como el que se describió anteriormente enlaza al receptor HER2 como es expresado en las células de cáncer de seno, tal como en las células de cáncer de seno resistente a hormona. Por ejemplo, el anticuerpo monoclonal del inmunoconjugado puede ser trastuzumab, el cual se conoce por ser específico para el receptor HER2.
En las diversas modalidades, la primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico puede ser un agente de despolimerización de microtúbulo, tal como maitansinoide o una auristatina. Por ejemplo, el conjugado covalente puede consistir esencialmente de trastuzumab de manera covalente acoplado por medio de un enlazador con una porción de fármaco anticáncer pro-apoptótico maitansinoide.
Las modalidades de ejemplo de las porciones de fármaco de maitansinoide que puede ser conjugado con una porción objetivo de anticuerpo monoclonal incluye: DM1; DM3; y DM4, que tiene las estructuras: en donde la línea ondulada indica la unión covalente del átomo de azufre del fármaco a un enlazador (L) de un conjugado de anticuerpo-fármaco. HERCEPTIN® (trastuzumab) enlazado por SMCC a DMI se ha reportado (WO 2005/037992; US 2005/0276812 A1).
En las diversas modalidades el inmunoconjugado covaiente es T-DMI (la estructura mostrada anteriormente), es decir, DMI como se mostró anteriormente, acoplado en forma covaiente con trastuzumab. En otras modalidades, el inmunoconjugado covaiente puede ser otro maitansinoide, tal como DM3 o DM4 acoplado a trastuzumab. Por ejemplo, los conjugados de anticuerpo-fármaco maitansinoide utilizados en la práctica del método inventivo pueden tener las siguientes estructuras y abreviaturas, (en donde Ab es anticuerpo y p es 1 hasta aproximadamente 8): Ab-SMCC-DMl Los conjugados de fármaco de anticuerpo de ejemplo en donde DM1 está enlazado a través de un enlazador BMPEO a un grupo tiol del anticuerpo produjeron la estructura y abreviatura: en donde Ab es anticuerpo; n es 0, 1 o 2; y p es 1, 2, 3, o Los inmunoconjugados que contienen maitansinoides, los métodos para elaborar los mismos, y su uso terapéutico se describen por ejemplo, en las publicaciones de patente Norteamericanas Nos. 5,208,020, 5,416,064, el documento Norteamericano 2005/0276812 Al, y la patente Europea EP 0 425235 B1, las descripciones de los cuales están incorporadas en la presente en forma expresa como referencia. La publicación de Liu, y asociados Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93 :8618-8623 (1996) describe inmunoconjugados que comprenden un maitansinoide designado como DMI enlazado al anticuerpo monoclonal C242 dirigido contra el cáncer colorectal. El conjugado se descubrió ser altamente citotóxico hacia las células de cáncer de colon cultivadas, y mostró actividad antitumor en un ensayo de crecimiento de tumor in vivo. La publicación de Chari y asociados Cáncer Research 52: páginas 127 a 131 (1992) describe inmunoconjugados en los cuales, un maitansinoide se conjugó por medio de un reticulador bisulfuro a un anticuerpo A7 murine enlazando un antígeno en líneas celulares de cáncer de colon humano, o a otro anticuerpo monoclonal TA.1 murine que enlaza el oncógeno HER2/neu. La citotoxicidad del conjugado TA. -maitansinoide se probó in vitro sobre la línea celular de cáncer de seno humano SK-BR-3, el cual expresa 3x 105 de antígenos de superficie HER2 por célula. El conjugado de fármaco logró un grado de citotoxicidad similar al fármaco de maitansinoide libre, lo cual podría incrementarse por el número creciente de moléculas de maitansinoide por molécula de anticuerpo. El conjugado A7-maitansinoide mostró baja citotoxicidad sistémica en ratones.
Los conjugados anticuerpo-maitansinoide son preparados mediante el enlace químico de un anticuerpo a una molécula de maitansinoide sin disminuir de manera significativa la actividad biológica ya sea del anticuerpo o la molécula de maitansinoide. Véase, por ejemplo, la patente Norteamericana 5,208,020 (la descripción de la cual está incorporada en la presente descripción como referencia). Un promedio de moléculas 3-4 maitansinoide conjugadas por molécula de anticuerpo ha mostrado eficacia para mejorar la citotoxicidad de las células objetivo sin afectar de manera negativa la función o solubilidad del anticuerpo, aunque incluso una molécula de toxina/anticuerpo podría esperarse que mejore la citotoxicidad con el uso del anticuerpo sin protección. Los maitansinoides son bien conocidos en la materia y pueden ser sintetizados mediante las técnicas conocidas o aislados a partir de fuentes naturales. Los maitansinoides adecuados están descritos, por ejemplo, en la patente Norteamericana No. 5,208,020 y en otras publicaciones de patente y que no son de patente a las que se hizo referencia en la presente descripción. Los maitansinoides preferidos son maitansinol y análogos de maitansinol modificados en el anillo aromático o en otras posiciones de la molécula de maitansinol, tales como diversos ésteres de maitansinol.
Existes muchos grupos de enlace conocidos en la materia para elaborar conjugados anticuerpo-maitansinoide, que incluyen, por ejemplo, aquellos descritos en la patente Norteamericana No. 5208020 o la patente EP 0 425 235 B1; Chari y asociados Cáncer Research 52: páginas 127 a 131 (1992); y el documento Norteamericano 2005/016993 Al, la descripción de los cuales está incorporado de manera expresa en la presente descripción como referencia. Los conjugados de anticuerpo-maitansinoide comprenden el componente enlazador SMCC que puede ser preparado como se describió en el documento Norteamericano US 2005/0276812 Al, "Conjugados de anticuerpo-fármaco y métodos" (Antibody-drug conjugates and Methods). Los enlazadores comprenden grupos disulfuro, grupos tioéter, grupos de ácido lábil, grupos fotolábiles, grupos de peptidasa lábil, o grupos de esterasa lábil, como los que se describen en las patentes identificadas anteriormente. Los enlazadores adicionales son descritos y ejemplificados en la presente descripción.
En las diversas modalidades, el conjugado covalente comprende una porción de enlazador que es seleccionada de manera que después de la entrada en el cuerpo, el enlace se rompe, tal como mediante la acción enzimática, hidrólisis ácida, hidrólisis de base, o los similares, y entonces se forman los dos compuestos separados. En otras modalidades, la porción de enlazador se selecciona para estabilidad bajo condiciones biológicas, en donde la porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico puede ejercer un efecto citotóxico mientras que todavía es atado a una porción objetivo, tal como un anticuerpo monoclonal, como trastuzumab.
Los datos de los estudios de relación de estructura-actividad anteriores (SAR) dentro de la materia pueden utilizarse como una guía para determinar cuáles compuestos utilizar y la posición u oposiciones óptimas en las moléculas para unir la atadura, de manera que la potencia y selectividad de los compuestos se mantendrá alta. La porción de atado o enlazadora se elige de entre aquellas de utilidad demostrada para enlazar las moléculas bioactivas juntas. En la presente se describen compuestos representativos que pueden unirse juntos en combinaciones diferentes para formar moléculas terapéuticas heterobivalentes.
Los conjugados del anticuerpo y maitansinoide pueden ser elaborados utilizando una variedad de agentes de acoplamiento de proteína bifuncionales, tales como propionato de N-succinimidil-3-(2-piridilditio) (SPDP), succinimidil-4-(N-maleimidometil) ciclohexano-1 -carboxilato (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como dimetil adipimidato HCI), esteres activos (tales como disuccinimidil suberato), aldehidos (tales como glutaraldehído), compuestos bis-azido (tales como bis (pazidobenzoil)-hexanodiamina), derivados bis-diazonio (tales como bis-(p- d¡azon¡umbenzoil)-etilenediamina), diisocianatos (tales como tolueno 2,6- düsocianato), y compuestos bis-fluoroactivos (tales como 1 ,5-difluoro-2,4- dinitrobenceno). En ciertas modalidades, el agente de acoplamiento es N-succinimidil-3- (2-piridilditio)propionato (SPDP) (Carlsson, y asociados, Biochem. J. 173: páginas 723-737 (1978)) o N-succinimidil-4-(2-piridiltio)pentanoato (SPP) para proporcionar para un enlace de bisulfuro.
El enlazador puede estar unido a la molécula de maitansinoide en diversas posiciones, dependiendo del tipo de enlace. Por ejemplo, un enlace de éster puede formarse mediante la reacción con un grupo hidroxilo utilizando las técnicas de acoplamiento convencionales. La reacción puede ocurrir en la posición C-3 que tiene un grupo hidroxilo, en la posición C-14 modificado con hidroximetilo, la posición C-15 modificada con un grupo hidroxilo, y la posición C-20 que tiene un grupo hidroxilo. En una modalidad, el enlace se forma en la posición C-3 de maitansinol o un análogo de maitansinol.
Un inmunoconjugado, como tal, puede utilizarse en las diversas modalidades de los métodos de tratamiento y usos de la presente invención, puede comprender un conjugado de anticuerpo monoclonal objetivo para un agente de despolimerización de microtúbulo, tal como un maitansinoide, como el que se describió anteriormente o puede comprender una primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico, una dolastarina o un análogo o derivado peptídico de dolastatina, por ejemplo, una auristatina (véanse las patentes Norteamericanas Nos. 5635483; 5780588). Las dolastatinas y auristatinas ha mostrado interferir con las dinámicas del microtúbulo, la hidrólisis GTP, y la división nuclear y celular (Woyke y asociados (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12): páginas 3580-3584) y tienen actividad anti cáncer (patente Norteamericana No. 5663149) y actividad antifúngica (Pettit y asociados (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42: páginas 2961-2965. L porción de fármaco de dolastatina o auristatina puede unirse al anticuerpo a través del término N (amino) o el término C (carboxilo) de la porción de fármaco peptídico (WO 02/088172).
Las modalidades de auristatina de ejemplo incluyen las porciones de fármaco monometilaurastatina enlazadas al término N DE y DF, descritas en el documento de Senter y asociados, "Procedimientos de la Asociación Americana para la Investigación del Cáncer" (Proceedings of the American Association for Cáncer Research), Volumen 45, Resumen Número 623, presentado el 28 de marzo de 2004, la descripción de la cual está incorporada en forma expresa como referencia en su totalidad. Los ejemplos se muestran más adelante.
Una porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico análogo de auristatina puede seleccionarse de las fórmulas DE y DF a continuación: en donde, la línea ondulada de DE y DF indica el sitio de unión covalente para un anticuerpo o componente enlazador de anticuerpo, y de manera independiente en cada ubicación: R2 se selecciona de H y Ci-Ca alquilo; R3 se selecciona de H, C -Ca alquilo, C3-C8 carbociclo, arilo, CT-CS alquil-arilo, C^-Cs alquilo-(C3-C8 carbociclo), C3-C8 heterociclo y C^Cs alquilo-(C3-C8 heterociclo) ; R4 se selecciona de H, d-C8 alquilo, C3-C8 carbociclo, arilo, Ci-C8 alquilo-arilo, C -Ca alquilo-(C3-C8 carbociclo), C3-C8 heterociclo y C^-Ce alquilo-(C3-C8 heterociclo); R5 se selecciona de H y metilo; o R4 y R5 en conjunto forman un anillo carbocíclico y tienen la fórmula -(CRaRb)n- en donde Ra y Rb son seleccionados independientemente de H, Ci-Cs alquilo y C3-C8 carbociclo y n se selecciona de 2, 3, 4, 5 y 6; R6 se selecciona de H y Ci-C8 alquilo; R7 se selecciona de H, C^-Ca alquilo, C3-C8 carbociclo, arilo, Ci-Ce alquilo-arilo, Ci-C8 alquilo-(C3-C8 carbociclo), C3-C8 heterociclo y d-Ce alquilo-(C3-C8 heterociclo); cada R8 se selecciona en forma independiente de H, OH, Ci-C8 alquilo, C3-C8 carbociclo y O-íC^-Ce alquilo); R9 se selecciona de H y CT-CS alquilo; R10 se selecciona de arilo o C3-C8 heterociclo; Z es O, S, NH, o NR12, en donde R12 es C1-C8 alquilo; R11 se selecciona de H, C1-C20 alquilo, arilo, C3-C8 heterociclo, _(R130)M-R14, o -(R130)m-CH(R15)2; m es un entero que varía de 1 a 1000; R13 es C2-C8 alquilo; R14 se selecciona de H o C- -CS alquilo; cada ocurrencia de R15 es independientemente H, COOH, -(CH2)N-N(RL6)2, -(CH2)n-S03H, o -(CH2)n-S03-Ci-Ce alquilo; cada ocurrencia de R16 es independientemente H, C^Cs alquilo, o-(CHz)n-COOH; R 8 es seleccionado de -C(R8)2-C(R8)2-arilo, -C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8 heterociclo), y -C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8 carbociclo); y n es un entero que varía de 0 a 6.
En una modalidad, R3, R4 y R7 son de manera independiente isopropilo o seg-butilo y R5 es -H o metilo. En una modalidad de ejemplo , R3 y R4 son cada una isopropilo, R5 es -H, y R7 es seg-butilo.
En todavía otra modalidad, R2 y R6 son cada una metilo, y R9 es -H.
En todavía otra modalidad, cada ocurrencia de R8 es - OCH3.
En una modalidad de ejemplo, R3 y R4 son cada una isopropilo, R2 y R6 son cada una metilo, R5 es -H, R7 es seg-butilo, cada ocurrencia de R8 es -OCH3, y R9 es -H.
En una modalidad, Z es -O- o -NH-.
En una modalidad, R10 es arilo.
En una modalidad de ejemplo, R10 es -fenilo.
En una modalidad de ejemplo, cuando Z es -O-, R11 es -H, metilo o t-butilo.
En una modalidad, cuando Z es - H , R" es -CH(R15)2, en donde R15 es -(CH2)N(RI6), y R16 es -C,-C8 alquilo o -(CH2)nCOOH.
En otra modalidad, cuando Z es -NH, R11 es -CH(RI5)2, en donde R15 es-(CH2)nS03H .
Una modalidad de auristatina de ejemplo de la fórmula DE es MMAE, en donde la línea ondulada indica la unión covalente a un enlazador (L) de un conjugado de anticuerpo-fármaco: Una modalidad de auristatina de ejemplo de la fórmula DF es MMAE, en donde la línea ondulada indica la unión covalente a un enlazador (L) de un conjugado de anticuerpo-fármaco (véase la patente Norteamericana US 2005/0238649 y la publicación de Doronina y asociados. (2006) Bioconjugate Chem. 17: páginas 114 a 124).
Otras porciones de fármaco incluyen los siguientes derivados de MMAF, en donde la línea ondulada indica la unión covalente a un enlazador (L) de un conjugado de anticuerpo-fármaco: En un aspecto, los grupos hidrófilos incluyen sin limitar a ésteres de trietilénglicol (TEG), como los que se mostraron anteriormente, que pueden ser unidos a la porción de fármaco en R11 , sin estar atados a teoría alguna en particular, los grupos hidrófilos ayudan a la internalización y la no aglomeración de la porción de fármaco.
Las modalidades de ejemplo de ADCs de la Fórmula I comprenden una aurastatina/dolastatina o derivado de las midas que están descritas en la patente Norteamericana 2005-0238649 Al y el documento de Doronina y asociados (2006) Bioconjugate Chem. 17: páginas 114-124, la cual está incorporada de manera expresa en la presente descripción como referencia. Las modalidades de ejemplos de ADCs de la Fórmula 1 que comprenden MMAE o MMAF y los diversos componentes de enlazador tienen las siguientes estructuras y abreviaturas, (en donde "Ab" es un anticuerpo, por ejemplo, trastuzumab; p es desde 1 hasta aproximadamente 8, "Val-Cit" es un dipéptido de valina-citrulina; y "S" es un átomo de azufre.
Ab-MC-M AF Las modalidades de ejemplo de ADCs de la Fórmula I que comprende MMAF y los diversos componentes de enlazador incluyen adicionalmente Ab-MC-PAB-M MAF y Ab-PAB-MMAF. De manera interesante, los inmunoconjugados que comprenden MMAF unidos a un anticuerpo mediante un enlazador que no se puede partir proteolíticamente, se ha mostrado que posee actividad que se puede comparar con los inmunoconjugados que comprenden MMAF unidos a un anticuerpo mediante un enlazador que se puede separar proteolíticamente. Véase la publicación de Doronina y asociados (2006) Bioconjugate Chem. 17: páginas 114-124. En dichos casos, la liberación de fármaco se considera ser realizada por la degradación de anticuerpos en la célula. Id.
Típicamente, las porciones de fármaco basadas en péptidos pueden prepararse formando un enlace péptido entre dos o más aminoácidos y/o fragmentos de péptidos. Dichos enlaces de péptido pueden ser preparados, por ejemplo, de acuerdo con el método de síntesis de fase líquida (véase la publicación de E. Schroder y K. Lübke, "Los péptidos" (The Peptides), volumen 1, páginas 76-136,1965, Academic Press) que es bien conocido en el campo de la química de péptidos. Las porciones de auristatina/dolastatina pueden prepararse de acuerdo con los métodos de: La patente Norteamericana 2005-0238649 Al; la patente Norteamericana No. 5635483; la patente Norteamericana No.5780588; la publicación de Pettit y asociados (1989) J. Am. Chem. Soc. 111: páginas 5463 a 5465; Pettit y asociados (1998) "Diseño de fármacos anti-cáncer" (Anti-Cancer Drug Design) 13: páginas 243 a 277; Pettit, G.R., y asociados. "Síntesis" (Synthesis), 1996, páginas 719 a 725; Pettit y asociados (1996)J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 5: páginas 859-863; y la publicación de Doronina (2003) Nat. Biotechnol. 21(7): páginas 778-784.
En particular, las porciones de fármaco de auristatina/dolastatina de la fórmula D, tales como MMAF y los derivados de las mismas, pueden prepararse utilizando los métodos descritos en la publicación Norteamericana 2005-0238649 Al y la publicación de Doronina y asociados (2006) Bioconjugate Chem. 17: páginas 114-124. Las porciones de fármaco de auristatina/dolastatina de la fórmula DE, tales como MMAE y los derivados de las mismas, pueden prepararse utilizando los métodos descritos en la publicación de Doronina y asociados (2003) Nat. Biotech. 21: páginas 778-784. Las porciones de enlazador de fármaco MC-MMAF, MC-MMAE, MC-vc-PAB-MMAF, y MC-vc-PAB-M MAE pueden sintetizarse de manera conveniente mediante los métodos de rutina, por ejemplo, como los descritos en la publicación de Doronina y asociados (2003) Nat. Biotech. 21: páginas 778 a 784, y la publicación de solicitud de Patente No. US 2005/0238649 Al, y posteriormente conjugar con un anticuerpo de interés.
Los ejemplos de enlazadores reportados en la literatura científica incluyen a los enlazadores de metileno (CH2)n (Hussey y asociados, J. Am. Chem. Soc, 2003, 125:3692-3693; Tamiz y asociados, Med. Chem., 2001, 44:1615-1622), unidades de oligo etilenoxi 0(-CH2CH20-)n utilizadas para enlazar naltrexamina a otros opioides, oligómeros de glicina de la fórmula -NH(COCH2 H)nCOCH2CH2CO--(NHCH2CO)nNH-utilizados para enlazar un antagonista de opioide y agonistas juntos ((a) Portoghese y asociados, Life Sci., 1982,31: páginas 1283-1286. (b) Portoghese y asociados, J. Med. Chem., 1986,29: páginas 1855 a 1861), las diaminas h id rófilas utilizadas para enlazar los péptidos opioides juntos (Stepinski y asociados, Internat. J. of Peptide & Protein Res., 1991,38: páginas 588-92), los separadores de ADN de cadena doble rígidos (Paar y asociados, J. Immunol., 2002, 169: páginas 856-864) y el enlazador biodegradable poli(ácido L-láctico) (KIok y asociados, Macromolecules, 2002, 35: páginas 746 a 759). La unión de la atadura a un compuesto puede tener como resultado lograr en el compuesto una orientación de enlace favorable. El enlazador mismo puede o no ser biodegradable. El enlazador puede tomar la forma de un profármaco y puede afinarse para la cinética de liberación óptima de los fármacos enlazados. El enlazador puede ser, ya sea flexible en su conformación en toda su longitud o cualquier segmento de la atadura puede estar diseñado para ser restringido de manera conformacional (Portoghese y asociados, J. Med. Chem., 1986,29: 1650-1653). Enlazadores de Ejemplo Un enlazador puede comprender uno o más componentes de enlazador. Los componentes de enlazador de ejemplo incluyen 6-maleimidocaproilo ("MC"), maleimidopropanoilo ("MP"), valina- citrulina ("val-cit" o "ve"), alanina-fenilalanina ("ala-phe"), aminobenciloxicarbonilo (un "PAB"), N-Succinimidilo 4-(2-piridiltio) pentanoato ("SPP"), N-succinimidil 4-(N-maleimidometil) ciclohexano-1 -carboxilato ("SMCC"), y N- Succinimidil (4-yodo-acet¡l)aminobenzoato ("SIAB"). Se conocen diversos componentes de enlazador, algunos de los cuales se describen más adelante.
Un enlazador puede ser un "enlazador que se puede separar", que facilita la liberación de un fármaco en la célula. Por ejemplo, un enlazador de separación de ácido (por ejemplo, hidrazona), enlazador sensible a proteasa (por ejemplo, sensible a peptidasa), enlazador foto separable, enlazador de dimetilo o enlazador que contiene bisulfuro (Chari y asociados, Cáncer Research 52: páginas 127 a 131 (1992); patente Norteamericana No. 5,208,020) se puede utilizar.
En algunas modalidades, un componente enlazador puede comprender una "unidad de estiramiento" que enlaza un anticuerpo a otro componente enlazador a una porción de fármaco. Las unidades de estiramiento se muestran más adelante (en donde la línea ondulada indica los sitios de unión covalente para un anticuerpo): En algunas modalidades, un componente de enlace puede comprender una unidad de aminoácido. En dicha modalidad, la unidad de aminoácido permite la separación del enlazador mediante una proteasa, facilitando de esta manera la liberación del fármaco del inmunoconjugado a partir de la exposición a proteasas ¡ntracelulares, tal como las enzimas isosomales. Véase, por ejemplo, la publicación de Doronina y asociados (2003) Nat. Biotechnol. 21: páginas 778 a 784. Las unidades de aminoácido de ejemplo incluyen, sin limitar a, un dipéptido, un tripéptido, un tetrapéptido, y un pentapéptido. Los dipéptidos de ejemplo, incluyen: valina-citrulina (ve o val-cit), alanina-fenilalanina (af o ala-phe); fenilalanina-lisina (fk o phe-lys); o N-metil-valina-citrulina (Me-val-cit). Los tripéptidos de ejemplo incluyen: glicina-valina-citrulina (gly-val-cit) y glicina-glicina-glicina (gly-gly-gly). Una unidad de aminoácido puede comprender los residuos de aminoácidos que ocurren en forma natural, así como también, aminoácidos menores y análogos de aminoácido que ocurren de manera no natural, tal como citrulina. Las unidades de aminoácidos pueden diseñares y optimizarse en su selectividad para la separación enzimática mediante una enzima particular, por ejemplo, una proteasa asociada con tumor, catepsina B, C y D, o una proteasa de plasmina.
En algunas modalidades, un componente de enlazador puede comprender una unidad de "separación" que enlaza el anticuerpo con una porción de fármaco, ya sea directamente o por medio de una unidad de estiramiento y/o una unidad de aminoácido. Una unidad de separación puede ser "de inmolación automática" o de "no inmolación automática". Una unidad de separación "de no inmolación automática" es una en la cual parte o toda la unidad de separación permanece enlazada a la porción de fármaco a partir de la separación enzimática (por ejemplo, proteol ¡tica) del ADC. Los ejemplos unidades de separador que no es de inmolación automática, pero sin limitar a, una unidad de separación de glicina y una unidad de separación de glicina-glicina. Otras combinaciones de separadores peptídicos susceptibles a separación enzimática específica de secuencia, también están contempladas. Por ejemplo, la separación enzimática de un ADC que contiene una unidad de separación glicina-glicina mediante una proteasa asociada con célula de tumor podría tener como resultado la liberación de una porción de glicina-glicina-fármaco del resto del ADC. En dicha modalidad, la porción de glicina-glicina- fármaco entonces es sometida a un paso de hidrólisis separado en la célula de tumor, separando de esta manera la unidad de separación de glicina-glicina de la porción de fármaco.
Una unidad de separación "de inmolación automática" permite la liberación de la porción de fármaco sin un paso de hidrólisis separado. En ciertas modalidades, una unidad de separación de un enlazador comprende una unidad de p-aminobencilo. En dicha modalidad, un alcohol de p-aminobencilo está unida a una unidad de aminoácido por medio de un enlace de amida, y un carbamato, metilcarbamato, o carbonato se realiza entre el alcohol bencílico y un agente citotóxico. Véase, por ejemplo, la publicación de Hamann y asociados (2005) Expert Opin. Ther. Patentes (2005) 15: páginas 1087 a 1103. En una modalidad, una unidad de separación es p-aminobenciloxicarbonilo (PAB). En ciertas modalidades, la porción de fenileno de una unidad de p-amino bencilo es sustituida con Qm, en donde Q es C^-CQ alquilo, -O-C-i-C8 alquilo), -halógeno, -nitro o -ciano; y m es un entero que varía de 0 a 4. Los ejemplos de unidades separadoras de inmolación automática incluyen adicionalmente, sin limitar a, compuestos aromáticos que son electrónicamente similares a alcohol p-aminobencílico (véase, por ejemplo, el documento Norteamericano US 2005/0256030 Al), tal como derivados de 2-aminoimidazol-5-metanol (Hay y asociados (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9: página 2237) y orto o para-aminobencilacetales.
Se pueden utilizar separadores que experimentan la ciclación a partir de la hidrólisis de enlaces de amida, tales como amidas de ácido 4-aminobutírico sustituidos o insustituidos (Rodrigues y asociados, "Biología química" (Chemistry Biology), 1995, 2, 223); sistemas de anillo biciclo[2.2.1 ] y biciclo[2.2.2] sustituidos en forma adecuada (Storm, y asociados, J. Amer. Chem. Soc, 1972, 94, 5815); y amidas de ácido 2-aminofenilpropiónico (Amsberry, y asociados, J. Org. Chem., 1990, 55, 5867). La eliminación de fármacos que contienen amida que son sustituidos en la posición a de glicina (Kingsbury, y asociados, J. Med. Chem., 1984,27, 1447) también son ejemplos de separadores de inmolación automática útiles en ADCs.
En una modalidad, una unidad de separación es una unidad bis(hidroximetil)estireno ramificado (BHMS) cómo se representa más adelante, el cual puede utilizarse para incorporar y liberar diversos fármacos. 2 fármacos en donde Q es -d-C8 alquilo, -0-(d-C8 alquilo), -halógeno, -nitro o -ciano; m es un entero que varía de 0-4; n es 0 o 1; y p varía de 1 hasta aproximadamente 20.
Un enlazador puede comprender uno o más de los componentes de enlazador anteriores. En ciertas modalidades, un enlazador es como se muestra en los paréntesis en la siguiente fórmula ADC II Ab ([Aa-Ww-Yy]-D)p II en donde A es una unidad de estiramiento, y a es un entero de 0 a 1; W es una unidad de aminoácido, y w es un enero de 0 a 12; Y es una unidad de separación, y, y es 0, 1 o 2; y Ab, D so p definidos como anteriormente para la fórmula I.
Las modalidades de ejemplo de dichos enlazadores son descritas en el documento Norteamericano 2005-0238649 A1, el cual está incorporado en la presente descripción de manera expresa como referencia.
Los componentes de enlazador de ejemplo y las combinaciones de los mismos se muestran más adelante en el contexto de los ADCs de la fórmula II: or VC cit cit-PAB Los componentes enlazadores, que incluyen las unidades de estiramiento, de separación y de aminoácido, pueden ser sintetizadas mediante los métodos conocidos en la materia, tales como aquellos descritos en el documento Norteamericano 2005-0238649 A1.
El método inventivo del tratamiento proporciona, en diversas modalidades, un método terapéutico que proporciona una modulación horizontal, como se describió anteriormente, en donde el segundo fármaco pro-apoptótico ejerce citotoxicidad , que induce apoptosis, mediante un mecanismo molecular diferente del mecanismo molecular de la citotoxicidad ejercida por la primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótica .
La modulación horizontal se logra cuando la primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótica y el segundo fármaco anticáncer pro-apoptótico actúa sobre diferentes cascadas o procesos bioquímicos diferentes que pueden conducir cada uno a la apoptosis. Por ejemplo, como se muestra en la Tabla 2, a continuación, la primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico, tal como un maitansinoide o una auristatina, puede operar por medio de un mecanismo apoptótico intrínseco, tal como una despolimerización de microtúbulo, y el segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico puede ser un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria extrínseca, tal como una trayectoria Fas o una trayectoria c-FLIP, que son bien conocidas en la materia. De manera alternativa, si la primera porción anti-cáncer pro-apoptótica ejerce su efecto por medio de una trayectoria extrínseca, el segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico puede ser un fármaco que induce apoptosis por medio de una trayectoria intrínseca, tal como una trayectoria independiente de caspasa, o por medio de una trayectoria dependiente de caspasa.
Por consiguiente, en las diversas modalidades, el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria extrínseca; por ejemplo, el segundo fármaco pro-apoptótico induce la apoptosis por medio de una trayectoria Fas, o el segundo fármaco pro-apoptótico induce la apoptosis por medio de una trayectoria c- FLIP. Más específicamente, el segundo fármaco pro-apoptótico puede ser CMH, E2 o d-tocotrienol .
En otras modalidades, el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria intrínseca; por ejemplo, el segundo fármaco pro-apoptótico puede inducir la apoptosis por medio de una trayectoria independiente de caspasa, o alternativamente, el segundo fármaco pro-apoptótico puede inducir la apoptosis por medio de una trayectoria dependiente de caspasa. Más específicamente, el segundo fármaco pro-apoptótico puede ser E2, FTS, d-tocotrienol, salinomicina o curcumina.
Por consiguiente, en las diversas modalidades, el segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico es FTS, CMH, E2, TMS o d-tocotrienol, salinomicina, o curcumina. En las diversas modalidades, el inmunoconjugado es T-DMI y el segundo fármaco pro-apoptótico es FTS, CMH, E2, TMS, d-tocotrienol o curcumina. Cuando el inmunoconjugado es T-DMI, el segundo fármaco pro-apoptótico puede ser E2, FTS, d-tocotrienol , o TMS; o más específicamente, el inmunoconjugado es T-DMI y el segundo fármaco pro-apoptótico es FTS.
La presente invención proporciona métodos, en donde la administración del inmunoconjugado y el segundo fármaco pro-apoptótico puede tener un efecto sinerg ístico. En algunas modalidades, la sinergia se logra mediante el uso de modulación horizontal.
Sin embargo, incluso cuando los dos agentes anti-cáncer por-apoptóticos actúan con modulación vertical, los efectos sinergísticos o aditivos pueden lograrse. Adicionalmente, para que se logre la modulación, todavía puede ser posible que los dos agentes anti-cáncer operen, tanto por medio de una trayectoria extrínseca como una trayectoria intrínseca, siempre que no operen ambas en el mismo proceso dentro de la trayectoria, en donde la mutación de adaptación proporciona una resistencia de fármaco, podría ser necesario que ocurra por medio de dos mutaciones simultáneas para conferir la resistencia.
En las diversas modalidades, la presente invención proporciona un método para el tratamiento del cáncer, que comprende la administración a un paciente con cáncer de trastuzumab-DM I (T-DMI), una modalidad del conjugado covalente descrito anteriormente de un anticuerpo monoclonal de dirección, el trastuzumab (Herceptin®) enlazado por medio de una porción de eniazador a una primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico, un macrólido ansa maitansinolde. Este conjugado, T-DMI, es descrito por los presentes inventores para proporcionar en la presente, en un régimen de terapia de combinación utilizando como un segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico farnesil-tiosalicilato FTS se ha descubierto que proporciona un efecto sorpresivamente sinergístico alto. En todavía otro aspecto, una terapia de combinación de E2 y T- DMI, proporciona un efecto sinergístico sorpresivamente alto. En todavía otro aspecto, una terapia de combinación de CMH y T- D M I , proporciona un efecto sinergístico sorpresivamente alto.
En el ejemplo anterior de T-DMI, la primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico, un análogo cercano de maitansina, es acoplado por medio de una porción de enlazador a trastuzumab (Heceptin). El enlazador no incorpora un enlace de bisulfuro, por lo tanto se considera ser una porción de enlazador que no se puede reducir de acuerdo con el significado de la presente, es decir, que el bisulfuro que se puede reducir fácilmente no está presente. Por consiguiente, en las diversas modalidades, la presente invención proporciona un conjugado covalente que consiste esencialmente en una porción de anticuerpo monoclonal acoplado de manera covalente por medio de un enlazador que no se puede reducir con la primera porción de fármaco anticáncer pro-apoptótico, en donde que no se puede reducir se refiere a la ausencia de un enlace de bisulfuro u otro grupo en donde la reducción bajo condiciones biológicas se considera probable de ocurrir.
En la Tabla I, a continuación, se muestran los resultados de diversas combinaciones que muestran los efectos aditivo y sinergístico.
J O Tabla 1 Parámetros de efecto de dosis Valores de índice de combinación Linea Agente celular apoplético Proporción Dm m r ED50 ED75 ED 90 ED95 Interacción MCF-7 TMS? FTS TMSrFTS (1 µ?:1µ?) 4.806 1.74598 í 0.07883 0.9939 0.988 0.939 0.898 0.865 Aditivo TMS * C H TMSrCMH (1µ?:10µ ) 5.839 1.17019 ± 0.07844 0.9933 0.321 0.343 0.368 0.386 Sinergia FTS + CMH FTS:CMH (1 µ?:1µ?) 17.402 1.39405 + 0.10368 0.9891 0.351 0.399 0.454 0.495 Sinergia T47D TMS + FTS TMS:FTS (1µ?:1µ?) 16. 046 1.552969 + 0.13846 0.9888 2,408 1. ,839 1.443 1.246 Antagonistico TMS + CMH TMS:CMH (1µ?:10µ?) 4. 885 1.02624 ± 0.15858 0.9769 0242 0. 328 0.452 0.566 Sinergia FTS? CMH FTS:CMH (1µ?:1µ?) 16. 447 1.3291 ± 0.11190 0.9895 0.730 0. 658 0.602 0.571 Sinergia moderada TMS:FTS (1µ?:1µ?) 5. 891 0.76939 ± 0.01125 0.9995 0.9 1 0. 889 0.869 0858 Sinergia moderada TMS:CMH (1µ?:10µ?) 0. .088 0.55289 ± 0.04221 0.9942 0.391 0. 223 0.177 0.206 Sinergia TMS:E2 (1µ?:10µ?) 1. 025 .74308 ± 0.0681 0.9836 0.322 0. 566 1.009 1.498 Aditivo TMS: T-DM1 ( M:1ng) 7 .337 0.134089 ± 0.16995 0.9843 1.034 1. 024 1.015 1.010 Aditivo FTS:CMH (1µ?:1µ?) 20 .964 1 0938 ± 0.10418 0.9855 0.811 0. 763 0.719 0.692 Sinergia moderada FTS:E2 (10µ?:1µ?) 14 .082 0.78722 ± 0.12684 0.9408 0.784 0. ,609 0.491 0.429 Sinergia FTS:T-OM1 ( 1µ?: 10 ng) 63 .540 1.01308 + 0.05397 0.9944 0.400 0. ,266 0.178 0.135 Sinergia fuerte E2:CMH (1µ?:10µ?) 21 759 1.27183 ± 0.05093 0.9976 1.002 0. 753 0.684 0.663 Aditivo E2:T-OM1 (1µ?:10 ng) 1 ,349 0.64658 ± 0.00913 0.9996 0.421 0. 329 0.299 0.295 Sinergia CMH:T-DM1 (1µ?: 10 ng) 33, 937 1.22358 ± 0.02137 0.9995 0.144 0. 123 0.115 0.113 Sinergia fuerte La sinergia alta se observa en combinaciones de T-DMI con FTS y CMH. Los métodos utilizados para determinar el grado de sinergia, y los resultados de los estudios diversos, se describen a continuación y son desplegados en forma gráfica en las figuras.
En otras modalidades, una primera porción de fármaco pro-apoptótico puede ser acoplada en forma covalente por medio de un enlazador que se puede reducir con la primera porción de fármaco pro-apoptótica. Por un enlace "que se puede reducir" se entiende que se considera o espera que dicho enlazador probablemente sea separado mediante un proceso reductivo que es posible que ocurra bajo condiciones biológicas, por ejemplo, reducción de un enlace de bisulfuro. En dichos conjugados, se contempla que la porción de dirección, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal, transporta la primera porción de fármaco pro-apoptótico al objetivo deseado, por ejemplo, el HER12 o receptor relacionado en el caso de cáncer de seno resistente a hormona, a partir de lo cual puede ocurrir la separación del fármaco de la porción objetivo, liberando el fármaco de tal manera que puede esparcirse fácilmente a través del tejido, pasar las membranas celulares, y los similares.
En las diversas modalidades, el método de tratamiento de un cáncer puede utilizarse cuando el cáncer es cáncer de seno. Por un cáncer de seno se entiende a cualquiera de los tipos numerosos de cánceres que pueden afectar el tejido mamario.
En otras modalidades, otros tipos de cáncer pueden tratarse de manera similar, es decir, mediante el uso de una porción de dirección específica para un epítope característico de ese tipo de cáncer, tal como un receptor sobre-expresado, en donde el anticuerpo monoclonal u otra porción de dirección elegida, es acoplada en forma covalente a un primer fármaco pro-apoptótico, el conjugado resultante siendo administrado en conjunto con un segundo fármaco pro-apoptótico. En estas modalidades también, se considera que un método de modulación horizontal proporciona una menor probabilidad de desarrollo de resistencia por las células de cáncer seleccionadas como objetivo.
Mecanismos pro-apoptóticos en células de cáncer Los fármacos pro-apoptóticos específicos que pueden utilizarse en un método terapéutico de la presente invención se describen con mayor detalle más adelante.
FTS Los inventores de la presente invención examinaron inicialmente la clase de proteínas que influencian la formación MOMP (poro de membrana exterior de la mitocondría) , un componente clave de la trayectoria intrínseca de la apoptosis. Los elementos pro-apoptóticos, tales como Bax, Bim y Bak, promueven la liberación del citocromo c desde la mitocondria, mientras que los elementos anti-apoptóticos, tales como Bcl-2 y Mcl-1, evitan la liberación. El equilibrio de las proteínas pro- apoptóticas y anti-apoptóticas Bcl-2, por consiguiente, iínfluyen en el destino de la célula. Las células LTED fueron tratadas con 75 µ? de FTS durante 0, 4, 8, 16, 24 y 48 horas con examen de las fracciones citosólicas (Figura IA). La señalización apoptótica tuvo como resultado una disminución en Mc a las 24 h, y un incremento en Bim, pero Bcl-2 no presentó cambios. El fosfo JNK se incrementó durante 48 horas y p21 mostró una disminución fija empezando a las 4 horas y durando hasta el punto de tiempo de 48 h (Figura 4A). Survivin disminuyó empezando de 8 a 16 horas y alcanzó niveles que no se pueden detectar a las 24 y 48 horas, pero XIAP no cambió (Figura 1A).
Para determinar si Bax se activó en las células LTED tratada por FTS, Bcl-2 fue inmunoprecipitado y posteriormente probado para Bim y Bax (Véase la figura 1B). Los extractos celulares probados fueron probados con el uso de un anticuerpo que reconoce únicamente la proteína Bax alterada en su conformación. Como se muestra en la figura 1B, Bax experimentó un cambio de conformación en las células tratadas con FTS, lo cual podría facilitar el MOMP. El efecto pro-apoptótico de Bim es predominantemente a través de su enlace a Bcl-2 que extirpa la función pro-survival de Bcl-2 [16, 17]. Como se muestra en la figura 1B, se descubrió que la interacción entre Bim y Bcl-2 se incrementó, mientras que la interacción entre Bax y Bcl-2 se redujo. Como evidencia del éxodo de proteínas a través de los poros de la membrana de la mitocondria, el citocromo c y los niveles Smac en el citosol se incrementaron a las 24 y 48 horas, momentos en que Mcl-I disminuyó y Bim se incrementó (Figura 1A). El factor de inducción de apoptosis (AIF), otro componente de muerte celular importante, apareció únicamente en citosol a las 48 horas. Después de mostrar estos efectos sobre MOMP, se examinaron otros factores clave involucrados en la apoptosis.
El FTS se ha reportado para invocar la muerte celular a través de la activación de caspasa en tejidos que no son de seno [18. 20] Para determinar si el FTS promovía la muerte de las células de cáncer de seno mediante la activación de las células LTED de caspasas, fueron tratadas con un vehículo, ya sea FTS o FTS en la presencia de concentraciones crecientes del inhibidor de pan-caspasa z-VAD-frnk (Véase la figura 1C, panel superior). Se descubrió que z-VAD-fnlk bloqueó la apoptosis inducida por FTS. Antes los reportes habían sugerido que en otros cánceres, el FTS induce la apoptosis a través del receptor de muerte, como se evidencia mediante los incrementos en caspasa-8 [18-20]. En las células de cáncer de seno, la trayectoria de receptor de muerte no pareció estar involucrada debido a que no ocurrieron cambios sustanciales en caspasa-8 (véase la figura 1C, panel inferior). La actividad de Caspasa-8 no paree incrementar; sin embargo esta no fue inhibida por Z-IETD-FMK. Véase la figura 2, que muestra una gráfica de barras de un transcurso de tiempo (2A) y una viabilidad celular contra la curva de concentración (2B) que despliegan (figura 2A) el efecto de FTS y curcumina en combinación con las células MCF-7 de tipo natural; y (figura 2B) el efecto del FTS solo o en combinación con curcumina en la viabilidad de la células MCF-7.
Estradiol Se examinaron los factores pro-apoptóticos fueron críticos para la apoptosis inducida por estradiol en las células LTED. Las células fueron tratadas con estradiol durante 0, 2, 4, 8, 24 y 48 horas y se prepararon las fracciones citosólicas. BimEL y BimL se incrementaron en puntos de tiempo tempranos (Figura 1D, comparado a las 4, 8 horas con el control) pero Bax no. Las fracciones mitocondriales (Figura 1D, panel derecho), confirmaron el incremento en las isoformas Bim. Para el punto de tiempo de 48 horas, el citocromo a y Smac/Diablo se liberaron en el citosol, demostrando que un componente de apoptosis de estradiol es mediado por medio de la trayectoria mitocondrial. Debido a que Bim pareció ser crítico para la apoptosis mediada por estradiol, se llevó a cabo la titulación de E2, probada para Bim y se descubrió incrementada con el tiempo (Véase la figura 1E). La destrucción de Bim también bloqueó la apoptosis (figura 1F). Los moduladores en corriente ascendente de apoptosis se examinaron, y se descubrió que la forma fosforilada de JNK se incrementó (Véase la figura 1E). Bok, una proteína pro-apoptótica también se incrementó en una forma dependiente de la concentración (Véase la Figura 1E). También se descubrió que el factor anti-apoptótico Mcl-1, disminuyó por la adición de estrógeno, pero no de XIAP o survivin .
Los datos publicados previamente implican indirectamente la trayectoria de receptor de muerte extrínseca en la apoptosis inducida por estradiol. Estos datos anteriores demostraron que el estradiol incrementó los niveles de FAS-ligando en las células LTED, que FAS estaba presente y que la trayectoria podría ser activada mediante el anticuerpo monoclonal contra FAS, el cual estimuló la apoptosis. En la presente descripción, se proporciona evidencia directa del ligando FAS/FAS fue involucrado demostrando que un siARN contra el ligando Fas invalida parcialmente la apoptosis inducida por estradiol (Figura 1F). Por consiguiente, el estradiol inicia la apoptosis tanto mediante la activación de trayectoria extrínseca e intrínseca.
Con base en los resultados pasados y presentes y la revisión de la literatura, las acciones de cada uno de los agentes en la apoptosis con mediación de mitocondria y las acciones de la trayectoria apoptótica mediada por receptor de muerte extrínseco, se resumen en la Tabla 2 a continuación. Salinomicina La salinomicina actúa en diferentes membranas biológicas, incluyendo membranas citoplásmicas y mitocondriales, como un yonóforo con selectividad estricta para iones alcalinos y una preferencia fuerte para potasio, promoviendo de esta manera el flujo mitocondrial y de potasio celular e inhibiendo la fosforilación oxidativa mitocondrial. Un estudio reciente reveló que la salinomicina induce la apoptosis y supera la resistencia a la apoptosis en células de cáncer humanas de diferentes orígenes. En primer lugar, se demostró que la salinomicina a dosis menores que las utilizadas por Gupta y asociados, induce la apoptosis masiva en las células de leucemia CD4 + T asiladas de pacientes con leucemia de célula T aguda. Véase la publicación en http://www.scitopics.comlNew mission for salinomycin in canc er.html.ltis que considera que la salinomicina actúa mediante una trayectoria intrínseca, independiente de caspasa para inducir la apoptosis. La salinomicina activa una trayectoria diferente y no convencional de la apoptosis en las células de cáncer que no está acompañada por el arresto del ciclo celular, y que es dependiente de la proteína supresora de tumor p53, la activación de caspasas, el sistema de ligando CD95/DC95 y la proteasoma 26S. Esta puede ser una razón por la cual la salinomicina puede superar mecanismos múltiples de resistencia de fármaco y apoptosis en las células de cáncer en humanos. Muchas células de cáncer hospedan o adquieren mecanismos múltiples de resistencia a la apoptosis mediada por la pérdida de p53 y la sobre-expresión de Bcl-2, p-glicoproteína o proteasomas 26S con actividad proteolítica mejorada. Sin embargo, la salinomicina, parece tener la capacidad para superar estos mecanismos de resistencia a fármacos y apoptosis. Véase la figura 3, que muestra una gráfica de barras de transcurso de tiempo (3A) y una curva de viabilidad celular contra concentración (3B) que despliega el efecto de salinomicina en células MCF-7.
Tabla 2: Mecanismos moleculares de Acción de Fármacos Pro-Apoptóticos Seleccionados En las diversas modalidades, la presente invención proporciona un método para el tratamiento como se describió anteriormente, en donde el segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico es FTS, CMH, E2, TMS o d-tocotrienol, curcumina o salinomicina. Las estructuras de estos compuestos, la razón fundamental para la selección, de lo cual se describió anteriormente, se proporcionan más adelante. Se considera que algunos de estos fármacos, tales como salinomicina y curcumina, pueden actuar sobre las células madre.
Curcumina La curcumina, el ingrediente activo de cúrcuma de especie (Cúrcuma longa linn), es un antioxidante poderoso y es un agente anti-inflamatorio. Recientemente, se ha demostrado que posee actividades quimiopreventivas independientes. Sin embargo, los mecanismos moleculares subyacentes, dichas propiedades anti-cáncer de la curcumina todavía no se han alcanzado, aunque se ha postulado que la inducción de apoptosis en las células de cáncer puede tener una explicación probable. En el estudio actual, la curcumina se descubrió disminuye el número de células de carcinoma de ascitis de Ehrlich (EAC) mediante la inducción de apoptosis en las células de tumor como es evidente a partir del análisis de flujo citométrico de la distribución de fase de ciclo celular del ADN y la fragmentación oligonucleosomal. Las pruebas adicionales en las señales moleculares que conducen a la apoptosis de las células EAC, se observó que la curcumina está produciendo la muerte de células de tumor mediante la sobre-regulación de la protooncoproteína Bax, liberada del citocromo e desde la mitocondria, y la activación de caspasa-3. El estado de BcJ-2, permanece sin cambios en EAC, lo cual podría significar que la curcumina está desviando el punto de inspección BcJ-2 e invalida su efecto protector en la apoptosis. Por lo tanto, se considera que la curcumina puede inducir la apoptosis, mediante la trayectoria dependiente de caspasa, intrínseca. Véase la publicación http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmedlM 676493.
Razón fundamental para la elección de los partícipes de combinación Los agentes que fueron elegidos podrían invocar formas múltiples de muerte celular, de manera que la modulación horizontal podría lograrse con los métodos terapéuticos de combinación de la presente invención. FTS (Salisrasib) invoca la muerte dependiente de caspasa en células de cáncer a través de la trayectoria de muerte celular mitocondrial [11, 12]. FTS promueve la apoptosis en las células MCF-7 y los xenoinjertos de tumor [13]. CMH es un inhibidor de molécula pequeña de la proteína de inhibición por FLICE celular (enzima de conversión IL-1 beta similar a FADD) (cFLIP) y CMH puede activar la caspasa-8 y, -10 inhibiendo c-FLIP [14, 15]. Parte del mecanismo de la capacidad de CMH para sensibilizar las células a los ligandos de muerte es a través de su capacidad para inhibir HDAC3, HDAC6 y HDAC8 [15]. TMS es un agente que invoca una muerte independiente de caspasa de manera predominante a través de la trayectoria de muerte mitocondrial por medio de la inhibición de microtúbulo [16, 17]. TMS es efectivo para reducir el crecimiento de xenoinjertos de tumor de cáncer de seno resistente a TamR [17]. El estradiol mostró inducir la apoptosis de células privadas de estrógeno a largo plazo a través de la trayectoria de muerte celular mitocondrial [18, 19] y también la trayectoria de receptor de muerte Fas [19]. Trabajos anteriores habían demostrado que el estradiol promueve la apoptosis de células privadas de estrógeno a largo plazo en vitro [18-24], en los modelos de xenoinjerto [23-23] así como también en pacientes [25]. Se ha mostrado que los conjugados de maita nsinoide-anticuerpo inhiben ía proliferación celular arrestando las células de cáncer de seno en prometafase/metafase a través de la despolimerización de microtúbulo [26}.
Cuando las células son arrestadas en el ciclo celular durante un período prolongado, esto puede conducir a la apoptosis [27, 28]. T-DMI, un conjugado de anticuerpo de fármaco de Trastuzumab-DM I (un derivado de maitansina), mostró ser efectivo para reducir los xenoinjertos de expresión HER2 [29] como muy efectivo en pacientes con cáncer de seno HER2 avanzado [30]. Las líneas de células de cáncer de seno que han sido privadas de estrógeno in vivo en modelos de xenoinjerto mediante la administración de letrazole de inhibidor de aromatasa han conducido a la sobre-regulación de la señalización HER2 [31, 32]. Ad icionalmente, HER2 ha mostrado ser sobre-regulado en pacientes con cáncer de seno durante el tratamiento con los inhibidores de aromatasa [33].
Por lo tanto, las células de cáncer de seno que han experimentado la privación de estrógeno a largo plazo, tienen niveles incrementados de HER2, lo que las hace sensibles a T-DMI.
Análisis de Sinergia El análisis de los efectos sinerg ísticos en la terapia de combinación se ha enfocado en tres líneas celulares, MCF-7, T47D y LTED. Las líneas celulares MCF-7 y T47D representan los modelos de cáncer de mama no adaptadas. La línea celular LTED (privadas de estrógeno a largo plazo) representa la resistencia endocrina después de la privación de estrógeno a largo plazo. Se utilizaron los siguientes agentes de fármaco en las líneas de células no adaptadas: Ácido famesM thiosalicílico (FTS, Salirasib), 4-(4-Cloro-2-metilfenoxi)-N-hidroxibutanamida (CMH), y 2, 4, 3', 5'-tetrametoxistilbeno (TMS). Para las líneas celulares adaptadas, Estradiol (E2) y Trastuzumab-DM I (T-DMI) también están incluidas.
Con la emergencia de la población de células madre como un componente importante de crecimiento de tumor, los efectos de la curcumina fueron examinados también en los sistemas in vitro. La curcumina induce una inhibición dependiente de dosis y tiempo de la formación de colonia y la formación de esfera de células madre en los estudios de cáncer diferente al de seno. Por esta razón, se empezaron los estudios preliminares del efecto de este agente en las células privadas de estrógeno a largo plazo (LTED) de cáncer de seno. Se examinaron los efectos de la curcumina en una forma sensible a la dosis. Este agente fue altamente potente en la reducción del número de células con un efecto inicial observado en 250 nM. Los estudios posteriores mostraron el efecto a 125 niM. Se examinó entonces la curcumina en combinación con FTS. Las dosis de FTW incluyeron el vehículo en 25, 50, 75 y 100 µ?. El FTS solo redujo el número de célula al 14% del control. La curcumina sola a 125 nM redujo el número de células hasta un alcance similar. Debido al grado alto de eficacia de la curcumina, no fue posible determinas si el FTS produjo los efectos aditivos o de sinergia en estos experimentos.
La salinomicina es otro agente mostrado por ser efectivo para eliminar las células madre. Este agente es menos poderoso que la curcumina y exhibió un efecto inhibidor del 50% a 2 µ? en células MCF-7. véase la Figura 3. Las células MCF-7-5C que previamente habían mostrado experimentar la apoptosis in vivo, se utilizaron para realizar estudios para examinar los efectos de E2, T-DMI solo y en combinación con estas células. Tanto E2 como T-DMI indujeron apoptosis. En las dosis intermedias, la combinación de E2 más T-DMI, parecieron ser más efectivas que cualquiera de las dos solas.
Se examinaron algunos de estos agentes, tanto en líneas celulares no adaptadas (Véanse las figuras 4, 6, 8) como en líneas celulares adaptadas (véanse las figuras 5, 7, 9). Se trataron células de cáncer de seno con concentraciones crecientes de los fármacos individuales seguidos por pruebas con sus combinaciones. Se determinó el número de células que fueron eliminadas (fracción afectada, Fa) y el número de células que no resultaron afectadas por el fármaco (fracción no afectada, Fu) (véase la figura 4). Entonces, las curvas de efecto de dosis son transformadas en sus formas lineales correspondientes mediante la gráfica de efecto de mediana en donde y = log (fa/fu) vs x= log (D)[8,34], A partir de la gráfica de efecto de mediana, puede determinarse el índice de combinación (Cl). Se utilizó la opción Monte Cario para graficar las gráficas Cl, ya que este método calcula los valores de desviación media y estándar así como también despliega intervalos de confianza (véanse las figuras 6, 7).
Cuando el índice de combinación es equivalente a uno (Cl = 1), esto significa que los dos fármacos trabajan juntos en una forma aditiva. Cuando el índice de combinación es menor que uno (Cl < 1), los fármacos son más efectivos que su suma individual y despliegan sinergia. Cuando el índice de combinación es menor que uno (Cl < 1), entonces los dos fármacos juntos son menos efectivos que cuando fueron administrados individualmente y por lo tanto despliegan antagonismo. La dosis efectiva uno (D1) es entonces graficada sobre el eje x y las dosis efectiva dos (2D) fue graficada en el eje y. Se puede graficar la dosis efectiva (ED) en Fa que iguala a 0.5, 0.75, 0.9 y 0.95. Esto genera el isobolograma. Se utilizaron estos dos métodos, el índice de combinación (figuras 6, 7) y el isobolograma (Figuras 8, 9) para determinar si existe sinergia cuando se utilizan diferentes combinaciones de agentes. Un resumen de los resultados se proporciona en la Tabla 1 , anterior.
Resultados de línea celular no adaptada Cuando se examinaron las células no adaptadas (Figuras 4, 6, 8) se descubrió que el índice de combinación de TMS y FTS fue aditivo en la línea celular MCF -7 (Figuras 6A, 25 Figura 8A) y antagónica en las células T47D (Figura 6D, Figura 8D). La combinación de FTS y CMH desplegó sinergia para esta combinación en la línea celular MCF-7 (figura 6B, 8B), pero únicamente sinergia moderada en la línea celular T47D (Figura 6E, 8E). La combinación de TMS y CMH mostró sinergismo tanto en la MCF-7 (figura 6C, 8C) y T47D (Figura 6F, 8F).
Resultados de línea celular adaptada Combinaciones con los TMS variados. Cuando TMS se combinó con CMH existió sinergia con la línea celular LTED y sinergia media con la línea celular resistente a tamoxifeno. Cuando TMS se combinó ya sea con FTS, E2 o T-DMI, las combinaciones fueron de naturaleza aditiva para las células tanto LTED como TamR (Figura 7A, cd, j, 1-m). La combinación de FTS con CMH mostró sinergia moderada en las células tanto LTED como TamR (figura 7E, n). Sin embargo, las combinaciones de FTS y T-DMI y FTS y E2, mostraron una sinergia más fuerte en las células LTED (figura 7F, G) en comparación con la línea celular resistente a tamoxifeno (Figura 70, P) en combinaciones de E2 con CMH fueron aditivas en ambas líneas celulares (Figura 7E, Q). La combinación más eficaz fue la combinación de CMH y T-DMI (figura /I) en la línea celular LTED. Se observó una sinergia moderada con esta combinación en la línea celular resistente a tamoxifeno (Figura 7S). Esto puede deberse al hecho de que las células resistentes a tamoxifeno se han cultivado hasta un menor alcance en un ambiente bajo en estrógeno, y por lo tanto expresan un nivel menor de HER2.
También véase la figura 9, la cual muestra ilustraciones gráficas de un análisis de isobolograma de las líneas celulares adaptadas.
Resumen de los Resultados La Tabla 1 , anterior, muestra un resumen de los resultados, y las combinaciones que tuvieron como resultado una sinergia están destacados. La sinergia más fuerte que se observó proviene de la combinación de T-DMI y CMH aplicado a la línea celular LTED adaptada. Esto probablemente se debe a que esta combinación se dirige tanto a la trayectoria de muerte mitocondrial intrínseca, como también a la trayectoria de receptor de muerte extrínseca, es decir, se ha logrado la modulación horizontal. T-DMI permite dirigir el HER2 sobreexpresado sobre la superficie de las células LTED y el agente DMI invoca la muerte celular a través de la trayectoria mitocondrial intrínseca. CMH modula c-FLIP para activar la trayectoria de receptor de muerte extrínseco [14, 15]. Tanto la potencia como la dirección de T-DMI a HER2, probablemente es crucial para la sinergia observada. Todas las combinaciones con TMS que se probaron fueron de naturaleza aditiva (Véanse las Figuras 6-9). Las combinaciones FTS fueron más débiles en las líneas celulares adaptadas en comparación con la línea celular LTED no adaptada (Compárese la figura 6B, D, E con la figura 7E, F, G y también la figura 8B, D, E con la figura 9E, F, G).
Administración y Composiciones La presente invención proporciona adicionalmente terapias complementarias que pueden utilizarse en conjunto con las terapias de fármaco de combinación. En las diversas modalidades, las combinaciones de fármacos anti-cáncer pro-apoptóticos, tales como las combinaciones en donde ocurren los diferentes mecanismos moleculares de inducción de apoptosis, pueden utilizarse en combinación con otros métodos terapéuticos, que son bien conocidos en la materia, que incluyen terapia de radiación, tal como rayos X, rayos Gamma, emisión de radionúclido, y exposición a partículas subatómicas, braquioterapia, y el uso de agentes anti-cáncer adicionales que son, ya sea pro-apoptóticos por sí mismos o inhiben el crecimiento celular o agentes que inhiben la reproducción celular. Los métodos para evaluar estas combinaciones y analizar los resultados se conocen en la materia.
La combinación de las medicaciones efectivas para las trayectorias objetivo múltiples abre áreas nuevas para el desarrollo de farmacoterapias para el tratamiento del cáncer. Como se describe en la presente descripción, las terapias de combinación de la presente invención se basan en dirigir las trayectorias diferentes/múltiples que incluyen, sin limitar a, inducir la muerte de las células dependientes de caspasa, inhibir el FLICE celular, activar las caspasas, incluir la activación indirecta de caspasas, inhibir HDAC3, HDAC6 y HDAC8, inducir la muerte independiente de caspasa, modular la muerte mitocondrial y las trayectorias de receptor de muerte Fas, y desestabilizar la estructura de microtúbulo.
La presente invención proporciona diversas modalidades de métodos para la administración de un primer agente anticáncer pro-apoptótico "en conjunto con" un segundo agente anti-cáncer pro-apoptótico. Un experto en la materia apreciará que los dos o más agentes siendo administrados en conjunto uno con el otro, no necesariamente tienen que ser administrados al mismo tiempo o en dosis iguales. En un aspecto, los compuestos que están siendo administrados como parte de la terapia de combinación de fármacos son administrados por separado. En otro aspecto, un primer compuesto es administrado antes de que sea administrado un segundo compuesto. En todavía otro aspecto, un primer compuesto y un segundo compuestos son administrados casi en forma simultánea. En gn aspecto adicional, el primer compuesto es administrado subsiguiente a la administración del segundo compuesto. Cada uno de los agentes puede ser administrado en ocasiones múltiples, en dosis, a frecuencias de administración y durante períodos de tiempo que pueden seleccionarse con base en el conocimiento y habilidad del médico practicante.
La presente invención proporciona adicionalmente composiciones farmacéuticas que comprenden a los compuestos de la presente invención. La composición farmacéutica puede comprender uno o más compuestos de la presente invención, y análogos, homólogos, derivados, modificaciones biológicamente activas y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y un portador farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, los compuestos son administrados en la forma de una composición farmacéutica.
La ruta de administración puede variar dependiendo del tipo de compuesto que está siendo administrado. En un aspecto, los compuestos son administrados por medio de rutas tales como oral, tópica, rectal, intramuscular, intramucosa, ¡ntranasal, inhalación, oftálmica e intravenosa.
La presente invención proporciona adicionalmente la administración de un compuesto de la presente invención en la forma de una formulación de liberación controlada.
En una modalidad, los resultados del tratamiento a un sujeto con una combinación de dos o más compuestos son comparados aditivos con los efectos del uso de cualquiera de los compuestos solos. En un aspecto, los efectos observados cuando se utilizan dos o más compuestos son mayores que cuando se utiliza cualquiera de los compuestos solos.
Las composiciones presentes pueden comprender opcionalmente una cantidad adecuada de un vehículo farmacéuticamente aceptable, de manera que proporcione la forma para la administración adecuada al paciente.
Las composiciones presentes también pueden administrarse a un sujeto en combinación con terapia o interacción conductual.
Dentro del alcance de la presente invención están incluidos los anómeros, d ¡astereómeros y enantiómeros individuales, así como también mezclas de los mismos. Además, los compuestos de la presente invención también incluyen cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables: por ejemplo: sales de metal alcalino, tales como sodio y potasio; sales de amonio; sales de monoalquilamonio; sales de dialquilamonio; sales de trialquilamonio; sales de tetraalquilamonio; y sales de trometamina. Los hidratos y otros solvatos de los compuestos están incluidos dentro del alcance de la presente invención.
Si la dosificación inicial no es efectiva, entonces puede incrementarse la dosificación de uno o más compuestos de la terapia de combinación. Si la dosificación inicial tiene como resultado en una pérdida de peso más rápida que el índica anterior, la dosificación de uno o más de los por lo menos dos compuestos, puede reducirse.
Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables pueden prepararse a partir de las bases inorgánicas y orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen, únicamente a modo de ejemplo, sales de potasio, litio, amonio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, sin limitar a, sales de aminas primaria, secundaria y terciaria, tales como alquilaminas, dialquilaminas, trialquilaminas, alquilaminas sustituidas, trialquilaminas sustituidas, alquilaminas sustituidas, diaminas d i ( a I q u i I sustituidas), aminas t r i ( a I q u i I sustituidas), alquenilaminas, dialquenilaminas, trialquenilaminas, alquenilaminas sustitudias, aminas di(alquenil sustituidas), aminas tri(alquenil sustituidas), cicloalquilaminas, aminas di(cicloalquilo, aminas tri(cicloalquilo, cicloalquilaminas disustituidas, cicloalquilaminas trisustituidas, cicloalquenilaminas, aminas di(cicloalquemnilo), aminas tri(cicloalquenilo), cicloalquenilaminas sustituidas, ciclalquenilaminas disustituidas, cicloalquenilaminas trisustituidas, arilaminas, diarilaminas, trairilaminas, heteroarilaminas, diheteroarilaminas, triheteroarilaminas, aminas heterocíclicas, aminas diheterocíclicas, aminas triheteroxíclias, di y tri aminas mezcladas en donde por lo menos de los sustituyentes en la amina son diferentes y son seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alquilo sustituidos, alquenilo, alquenilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, arilo, eteroarilo, heterocíclico y los similares. También están incluidas las aminas, en donde dos o tres sustituyentes, junto con el nitrógeno amino, forman un grupo heterocíclico o heteroarilo. Los ejemplos de aminas adecuadas incluyen, únicamente a modo de ejemplo isopropilamina, trimetil amina, dietilamina, tri(iso-propil) amina, tri(n-propil) amina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, glucosamina, N-alquilglucaminas, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, morfolina, N-etilpiperidina y los similares. También se debe comprender que otros derivados de ácido carboxílico podrían ser útiles en la práctica de la presente invención, por ejemplo, amidas de ácido carboxílico, que incluyen carboxamidas, carboxamidas de alquilo inferior, carboxamidas de dialquilo, y los similares.
Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables pueden prepararse a partir de ácidos inorgánicos y orgánicos. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y los similares. Las sales derivadas de ácidos orgánicos incluyen ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maléico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-tolueno-sulfónico, ácido salicílico y los similares.
En una modalidad, una composición de la presente invención puede comprender un compuesto de la presente invención. En otra modalidad, una composición de la presente invención puede comprender más de un compuesto de la presente invención. En una modalidad, los fármacos o compuestos adicionales útiles para el tratamiento de otros padecimientos pueden ser parte de la composición. En una modalidad, una composición que comprende únicamente un compuesto de la presente invención puede ser administrado al mismo tiempo que otra composición que comprende por lo menos el otro compuesto de la presente invención. En una modalidad, las composiciones diferentes pueden ser administradas en momentos diferentes una de la otra. Cuando una composición de la presente invención comprende únicamente un compuesto de la presente invención, también debe utilizarse una composición adicional comprende por lo menos un compuesto adicional.
Las composiciones farmacéuticas útiles para practicar la presente invención pueden ser, por ejemplo, administradas para suministrar una dosis de entre 1 ng/kg/día y 100 mg/kg/día.
Las composiciones farmacéuticas que son útiles en los métodos de la presente invención pueden ser administradas, por ejemplo, en forma sistemática en formulaciones orales sólidas, o en forma oftálmica, de supositorio, aerosol, tópica u otras formulaciones similares. Además de los compuestos adecuados, dichas composiciones farmacéuticas pueden contener portadores farmacéuticamente aceptables y otros ingredientes conocidos para mejorar y facilitar la administración de fármacos. Otras formulaciones posibles, tales como nanopartículas, liposomas, eritrocitos liberados y sistemas de base inmunológica, también pueden utilizarse para administrar un compuesto adecuado, o un análogo, modificación o derivado del mismo de acuerdo con los métodos de la presente invención .
Los compuestos que son identificados utilizando cualquiera de los métodos descritos en la presente descripción pueden formularse y ser administrados a un sujeto para el tratamiento de la enfermedad descrita en la presente descripción. Un experto en la materia reconocerá que estos métodos serán útiles también para otras enfermedades, padecimientos y condiciones.
Un "profármaco" se refiere a un agente que es convertido en el fármaco de origen in vivo. Los profármacos, con frecuencia son útiles porque, en algunas situaciones, pueden ser más fáciles de administrar que un fármaco de origen. Estos pueden, por ejemplo, ser biodisponibles a través de administración oral, mientras que la base no lo es. El profármaco también puede tener una solubilidad mejorada en composiciones farmacéuticas sobre el fármaco de origen, o pueden demostrar un buen sabor incrementado o ser más fáciles de formular. Un ejemplo, sin limitar, de un profármaco podría ser un compuesto de la presente invención, el cual es administrado como un éster (el "profármaco") para facilitar la transmisión a través de una membrana celular en donde la solubilidad en agua es perjudicial para la movilidad, pero el cual entonces es hidrolizado en forma metabólica al ácido carboxílico, la entidad activa, una vez que está dentro de la célula en donde es benéfica lo solubilidad en agua. Un ejemplo adicional de un profármaco podría ser un péptido corto (poliaminoácido) enlazado a un grupo ácido, en donde el péptido es metabolizado para proporcionar la porción activa.
La presente invención abarca la preparación y uso de composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto útil para el tratamiento de las enfermedades descritas en la presente como un ingrediente activo. Dicha composición farmacéutica puede consistir del ingrediente activo solo, en una forma adecuada para la administración a un sujeto, o la composición farmacéutica puede comprender el ingrediente activo y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, uno o más ingredientes adicionales, o alguna combinación de éstos. El ingrediente activo puede estar presente en la composición farmacéutica en la forma de un éster o sal fisiológicamente aceptable, tal como en combinación con un catión o anión fisiológicamente aceptable, como es bien conocido en la materia.
Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente descripción pueden preparase mediante cualquier método conocido o desarrollado en lo sucesivo en la materia de farmacología En general, dichos métodos de preparación incluyen el paso de llevar al ingrediente activo en asociación con un portador o uno o más de otros ingredientes accesorios, y posteriormente, si es necesario o deseable, conformar o empacar el producto en una unidad de dosificación única o múltiple deseada.
Aunque las descripciones de composiciones farmacéuticas provistas en la presente son dirigidas principalmente a composiciones farmacéuticas las cuales son adecuadas para la administración ética a humanos, los expertos en la materia comprenderán que dichas composiciones son generalmente adecuadas para la administración a animales de todas las clases. La modificación de composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración en humanos con el objeto de hacer adecuadas las composiciones para la administración a diversos animales se bien comprendida y los veterinarios den farmacólogos expertos pueden diseñar y realizar dichas modificaciones únicamente con experimentación ordinaria, si existe. Los sujetos a los cuales la administración de las composiciones farmacéuticas de la presente invención contempla que incluyen, sin limitar a, humanos y otros primates, mamíferos, incluyendo los mamíferos comercialmente relevantes tales como ganado, cerdos, caballos, ovejas, gatos y perros, y aves, incluyendo las aves comercialmente relevantes, tales como pollos, patos, gansos y pavos.
Un tipo de administración que abarca los métodos de la presente invención es la administración parenteral, la cual incluye, sin limitar a, administración de una composición farmacéutica por inyección de la composición, mediante la aplicación de la composición a través de una incisión quirúrgica, mediante la aplicación de la composición a través de una herida no quirúrgica de penetración de tejido y los similares. En particular, la administración parenteral está contemplada por incluir, sin limitar a, inyección subcutánea, intraperitoneal, intramuscular e intrasternal y por técnicas de infusión de diálisis de riñon.
Las composiciones farmacéuticas que son útiles en los métodos de la presente invención pueden ser preparadas, empacadas o vendidas en formulaciones adecuadas para la administración oral, rectal, vaginal, parenteral, tópica, pulmonar, intranasal, inhalación, bucal, oftálmica, intratecal u otra ruta de administración. Otras formulaciones contempladas incluyen las nanopartículas proyectadas, preparaciones liposomales, que contienen eritrocitos liberados que contienen el ingrediente activo, y formulaciones de base inmunológica.
Una composición farmacéutica de la presente invención puede ser preparada, empacada; o vendida por volumen, como una dosis unitaria única o como una pluralidad de dosis unitarias únicas. Como se utiliza en la presente descripción, una "dosis unitaria" es una cantidad independiente de la composición farmacéutica que comprende una cantidad previamente determinada del ingrediente activo. La cantidad del ingrediente activo generalmente es igual a la dosificación del ingrediente activo, el cual podría ser administrado al sujeto, o una fracción conveniente de dicha dosificación tal como, por ejemplo, la mitad o un tercio de dicha dosificación.
Las cantidades relativas del ingrediente activo, el portador farmacéuticamente aceptable y cualesquiera ingredientes adicionales en una composición farmacéutica de la presente invención variarán, dependiendo de la identidad, tamaño y condición del sujeto tratado, y dependiendo adicionalmente de la ruta mediante la cual será administrada la composición. A modo de ejemplo, la composición puede comprender entre el 0.1% y el 100% (p/p) del ingrediente activo.
Además del ingrediente activo, una composición farmacéutica de la presente invención puede comprender adicionalmente uno o más agentes farmacéuticamente activos.
Los agentes adicionales contemplados particularmente incluyen los anti-eméticos y barredores, tales como, cianuro y barredores de cianato.
Las formulaciones de liberación controlada o sostenida de una composición farmacéutica de la presente invención pueden elaborarse utilizando la tecnología convencional.
Una formulación de una composición farmacéutica de la presente invención adecuada para la administración oral puede ser preparada, empacada o vendida en la forma de una dosis unitaria sólida independiente, que incluye, sin limitar a, una tableta, una cápsula dura o suave, una cápsula, un trocisco, o una pastilla, cada una conteniendo una cantidad previamente determinada del ingrediente activo. Otras formulaciones adecuadas para administración oral incluyen, sin limitar a, una formulación en polvo o granular, una suspensión acuosa u oleosa, una solución acuosa u oleosa, o una emulsión.
Como se utiliza en la presente descripción, un líquido "oleoso" es uno que comprende una molécula de líquido que contiene carbón y la cual exhibe un carácter menos polar que el agua.
Una tableta que comprende el ingrediente activo puede, por ejemplo, ser elaborada comprimiendo o moldeando el ingrediente activo, opcionalmente con uno o m's ingredientes adicionales. Las tabletas comprimidas pueden ser preparadas por compresión en un dispositivo adecuado, el ingrediente activo en una forma de flujo libre, tal como una preparación granular, mezclada opcionalmente con uno o más de un enlazador, un lubricante, un excipiente, un agente de superficie activa y un agente de dispersión. Las tabletas moldeadas pueden elaborarse moldeando, en un dispositivo adecuado, una mezcla del ingrediente activo, un portador farmacéuticamente aceptable, y por lo menos líquido suficiente para humectar la mezcla. Los excipientes farmacéuticamente aceptables utilizados en la fabricación de las tabletas incluyen, sin limitar a, diluyentes inertes, agentes de granulación y desintegración, agentes de enlace y agentes lubricantes Los agentes de dispersión conocidos incluyen, sin limitar a, almidón de papa, glicolato de almidón de sodio. Los agentes activos de superficie conocidos incluyen, sin limitar a, lauril sulfato de sodio. Los diluyentes conocidos incluyen, sin limitar a, carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, celulosa microcristalina, fosfato de calcio, fosfato de hidrógeno de calcio y fosfato de sodio. Los agentes de granulación y desintegración conocidos incluyen, sin limitar a, almidón de maíz, y ácido algínico. Los agentes de enlace incluyen, sin limitar a, gelatina, acacia, almidón de maíz previamente gelatinizado, polivinilpirrolidona e hidroxipropilmetilcelulosa. Los agentes de lubricación incluyen, sin limitar a, estearato de magnesio, ácido esteárico, sílice y talco.
Las tabletas pueden ser no recubiertas o pueden ser cubiertas utilizando los métodos conocidos para lograr la desintegración demorada en el tracto gastrointestinal de un sujeto, proporcionando de esta manera liberación sostenida y absorción del ingrediente activo. A modo de ejemplo, un material tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo puede utilizarse para recubrir las tabletas. Además, a modo de ejemplo, las tabletas pueden ser recubiertas utilizando los métodos descritos en las patentes Norteamericanas números 4,256,108; 4,160,452; y 4,265,874 para formar las tabletas de liberación controlada en forma osmótica. Las tabletas pueden comprender adicionalmente un agente edulcorante, un agente de adición de sabor, un agente colorante, un conservador o alguna combinación de éstos con el objeto de proporcionar una preparación farmacéuticamente elegante y de buen sabor.
Las cápsulas duras que comprenden el ingrediente activo pueden ser elaboradas utilizando una composición fisiológicamente degradable, tal como gelatina. Dichas cápsulas duras comprenden el ingrediente activo, y pueden comprender adicionalmente los ingredientes adicionales que incluyen, por ejemplo, un diluyente sólido inerte, tal como carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolina.
Las cápsulas de gelatina suave que comprenden el ingrediente activo pueden ser elaboradas utilizando una composición fisiológicamente degradable, tal como gelatina. Dichas cápsulas suaves comprenden el ingrediente activo, el cual puede mezclarse con agua y un medio oleoso tal como aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de oliva.
También puede utilizarse lactulosa como un material de relleno que se puede erosionar libremente y es útil cuando los compuestos de la presente invención son preparados en forma de cápsula.
Las formulaciones líquidas de una composición farmacéutica de la presente invención, las cuales son adecuadas para administración oral pueden prepararse, empacarse y venderse, ya sea en forma de líquido o en la forma de un producto seco que se pretende sea reconstituido con agua u otro vehículo adecuado antes del uso.
Las suspensiones líquidas pueden ser preparadas utilizando los métodos convencionales para lograr la suspensión del ingrediente activo en un vehículo acuoso u oleoso. Los vehículos acuosos incluyen, por ejemplo, agua y solución salina isotónica. Los vehículos oleosos incluyen, por ejemplo, aceite de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico, aceites vegetales tales como aceite de maní, olivo, ajonjolí o coco, aceites vegetales fraccionados, y aceites minerales, tales como parafina líquida. Las suspensiones líquidas pueden comprender adicionalmente uno o más ingredientes adicionales que incluyen, sin limitar a, agentes de suspensión, agentes de dispersión o humectación, agentes emulsificadores, emolientes, conservadores, amortiguadores, sales, saborizantes, agentes colorantes y agentes edulcorantes. Las suspensiones oleosas pueden comprender adicionalmente un agente espesante. Los agentes de suspensión conocidos incluyen, sin limitar a, jarabe de sorbitol, grasas comestibles hidrogenadas, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto, coma acacia y derivados de celulosa tales como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa. Los agentes de dispersión o humectación conocidos incluyen, sin limitar a, fosfatidos de ocurrencia natural, tales como lecitina, productos de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso, con un alcohol alifático de cadena larga con un éster parcial derivado de un ácido graso y un hexitol o con un éster parcial derivado de un ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, estearato de polioxietileno, heptadecaetilenooxicetanol, monooleato de sorbitol polioxietileno y monooleato de sorbitán polioxietileno, respectivamente). Los agentes de emulsificación conocidos incluyen, sin limitar a, lecitina y acacia. Los conservadores conocidos incluyen, sin limitar a, metilo, etilo o n-propilo para hidroxibenzoatos, ácido ascórbico y ácido sórbico. Los agentes edulcorantes conocidos incluyen, por ejemplo, glicerol, propilénglicol, sorbitol, sucrosa y sacarina. Los agentes espesantes conocidos para suspensiones oleosas incluyen, por ejemplo, cera de abeja, parafina dura y alcohol cetílico.
En un aspecto, una preparación en la forma de un jarabe o elixir o para la administración en la forma de gotas, puede comprender ingredientes activos, junto con un edulcorante, el cual preferentemente es libre de calorías, y el cual puede incluir adicionalmente metilpa rabeno o propilparabeno como antisépticos, un agente de adición de sabor y un color adecuados.
Las soluciones líquidas del ingrediente activo en los solventes acuosos u oleosos puede prepararse substancialmente en la misma forma que las suspensiones líquidas, la diferencia primaria siendo que el ingrediente activo es disuelto en lugar de suspendido en el solvente. Las soluciones líquidas de la composición farmacéutica de la presente invención pueden comprender cada uno de los componentes descritos con respecto a las suspensiones líquidas, comprendiéndose que los agentes de suspensión no necesariamente ayudarán a la disolución del ingrediente activo en el solvente. Los solventes acuosos incluyen, por ejemplo, agua y solución salina ¡sotónica. Los solventes oleosos incluyen, por ejemplo, aceite de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico, aceites vegetales tales como aceite de maní, olivo, ajonjolí o coco, aceites vegetales fraccionados, y aceites minerales, tales como parafina líquida.
Las formulaciones en polvo y granulares de una composición farmacéutica de la presente invención puede elaborarse utilizando los métodos conocidos. dichas formulaciones pueden ser administradas directamente a un sujeto, utilizadas, por ejemplo, para formar tabletas, para rellenar cápsulas o para preparar una suspensión acuosa u oleosa o una solución mediante la adición de un vehículo acuoso u oleoso.
Cada una de estas formulaciones puede comprender adicionalmente uno o más de un agente de dispersión o humectación, un agente de suspensión, y un conservador. Los excipientes adicionales, tales como materiales de relleno y agentes edulcorantes, de sabor o colorantes también pueden estar incluidos en estas formulaciones.
Una composición farmacéutica de la presente invención también puede ser preparada, empacada o vendida en la forma de emulsión de aceite en agua o una emulsión de agua en aceite. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, tal como aceite de oliva o maní, o un aceite mineral tal como parafina líquida o una combinación de los mismos. Dichas composiciones pueden comprender adicionalmente uno o más agentes de emulsificación, incluyendo gomas de ocurrencia natural, tales como goma acacia o goma tragacanto, fosfatido de ocurrencia naturales, tales como frijol de soya o fosfatido de lecitina, ásteres o ésteres parciales derivados de las combinaciones de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como monooleato de sorbitán y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, tales como monooleato de sorbitán de polioxietileno. Estas emulsiones, también pueden contener ingredientes adicionales que incluyen, por ejemplo, agentes edulcorantes o de adición de sabor.
Una composición farmacéutica de la presente invención puede ser preparada, empacada o vendida en una formulación adecuada para administración rectal. Dicha composición puede estar en la forma de, por ejemplo, un supositorio, una preparación de enema de retención, y una solución para irrigación rectal o colónica.
Las formulaciones de supositorio pueden ser elaboradas combinando el ingrediente activo con un excipiente farmacéuticamente aceptable no irritante, el cual es vendido a temperatura ambiente ordinaria (es decir, aproximadamente 20°C) y el cual es líquido a la temperatura rectal del sujeto (es decir, aproximadamente 37°C en un humano saludable). Los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, sin limitar a, mantequilla de cocoa, polietilénglicoles y varios glicéridos. Las formulaciones de supositorio pueden comprender adicionalmente, varios ingredientes que incluyen, sin limitación a, antioxidantes y conservadores.
Las preparaciones de enema de retención o soluciones para irrigación rectal o colónica pueden ser elaboradas combinando el ingrediente activo con un portador liquido farmacéuticamente aceptable. Como es bien conocido en la materia, las preparaciones de enema pueden ser administradas utilizando, y pueden ser empacadas dentro, de un dispositivo de administración adaptado a la anatomía rectal del sujeto. Las preparaciones de enema de supositorio pueden comprender adicionalmente, varios ingredientes que incluyen, sin limitación a, antioxidantes y conservadores.
Una composición farmacéutica de la presente invención puede ser preparada, empacada o vendida en una formulación adecuada para administración vaginal. Dicha composición puede tener la forma de, por ejemplo, un supositorio, un material que se puede insertar vaginalmente impregnado o recubierto, tal como un tampón, una preparación de ducha o gel o crema o una solución para irrigación vaginal.
Los métodos para impregnar o recubrir un material con una composición química son conocidos en la materia, e incluyen, sin limitar a, los métodos de depósito o enlace de una composición química sobre una superficie, los métodos para incorporar una composición química en la estructura de un material durante la síntesis del material (es decir, tal como con un material fisiológicamente degradable), y los métodos para absorber una solución acuosa u oleosa o* suspensión en un material absorbente, con o sin secado subsiguiente.
Las preparaciones de ducha o soluciones para irrigación vaginal pueden ser elaboradas combinando el ingrediente activo con un portador líquido farmacéuticamente aceptable. Como es bien conocido en la materia, las preparaciones de ducha pueden ser administradas utilizando, y pueden ser empacadas dentro, de un dispositivo de administración adaptado a la anatomía vaginal del sujeto. Las preparaciones de ducha pueden comprender adicíonalmente, varios ingredientes que incluyen, sin limitación a, antioxidantes, antibióticos, agentes antifúngicos y conservadores.
Como se utiliza en la presente descripción, "administración parenteral" de una composición farmacéutica incluye cualquier ruta de administración caracterizada por el traspaso físico de un tejido de un sujeto y la administración de la composición farmacéutica a través de la brecha en el tejido. La administración parenteral, por consiguiente, incluye, sin limitar a, administración de una composición farmacéutica por inyección de la composición, mediante la aplicación de la composición a través de una incisión quirúrgica, mediante la aplicación de la composición a través de una herida no quirúrgica de penetración de tejido y los similares. En particular, la administración parenteral está contemplada por incluir, sin limitar a, inyección subcutánea, intraperitoneal, intramuscular e intrasternal y por técnicas de infusión de diálisis de riñon.
Las formulaciones de una composición farmacéutica adecuada para administración parenteral comprende el ingrediente activo combinado con un portador farmacéuticamente aceptable, tal como agua esterilizada o solución isotónica esterilizada. Dichas formulaciones pueden ser preparadas, empacadas, o vendidas en una forma adecuada para la administración de bolo o para la administración continua. Las formulaciones que se pueden inyectar pueden ser preparadas, empacadas o vendidas en forma de dosis unitaria, tales como ampolletas o en contenedores de dosis múltiples que contienen un conservador. Las formulaciones para administración parenteral incluyen, sin limita a, suspensiones, soluciones, emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, pastas y formulaciones de liberación sostenida o biodegradable que se pueden implantar. Dichas formulaciones pueden comprender adicionalmente uno o más ingredientes adicionales que incluyen, sin limitar a, agentes de suspensión, estabilización o dispersión. En una modalidad de una formulación para la administración parenteral, el ingrediente activo es provisto en forma seca (es decir, en polvo o gránulos) para reconstitución con un vehículo adecuado (por ejemplo, agua libre de pirogeno esterilizada) antes de la administración parenteral de la composición reconstituida.
Las composiciones farmacéuticas pueden ser preparadas, empacadas o vendidas en la forma de una suspensión o solución inyectable esterilizada . Esta suspensión o solución puede ser formulada de acuerdo con la técnica conocida, y puede comprender, además del ingrediente activo, ingredientes adicionales, tales como los agentes de dispersión, los agentes de humectación o los agentes de suspensión descritos en la presente descripción. Dichas formulaciones estériles inyectables pueden ser preparadas utilizando un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, tal como agua o 1 ,3-butanodiol, por ejemplo. Otros diluyentes y solventes aceptables incluyen, sin limitar a, solución de Ringer, solución de cloruro de sodio isotónica y aceite fijos tales como mono o diglicéridos sintéticos. Otras formulaciones que se pueden administrar parenteralmente que son útiles incluyen a aquellas que comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina, en una preparación liposomal, o como un componente de un sistema polimérico biodegradable. Las composiciones para liberación sostenida o implantación pueden comprender un material polimérico o hidrófobo farmacéuticamente aceptable tal como una emulsión, una resina de intercambio de iones, un polímero moderadamente soluble o una sal moderadamente soluble.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica incluyen, sin limitar a, preparaciones líquidas o semi-líquidas tales como cremas, lociones, emulsiones de aceite en agua o agua en aceite, tales como cremas, ungüentos, o pastas, y soluciones o suspensiones. Las formulaciones que pueden administrase en forma tópica pueden, por ejemplo, comprender desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 10% (p/p) del ingrediente activo, aunque la concentración del ingrediente activo puede ser tan alta que limite la solubilidad del ingrediente activo en el solvente. Las formulaciones para administración tópica pueden comprender adicionalmente uno o más de los ingredientes adicionales descritos en la presente descripción.
Una composición farmacéutica de la presente invención puede ser preparada, empacada o vendida en una formulación adecuada para administración pulmonar por medio de la cavidad bucal. Dicha formulación puede comprender partículas secas, las cuales comprenden el ingrediente activo y las cuales tienen un diámetro en el rango desde aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 7 nanómetros, y preferentemente desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 6 nanómetros. Dichas composiciones convenientemente tienen la forma de polvos secos para la administración utilizando un dispositivo que comprende un depósito de polvo seco al cual se puede dirigir una corriente de propulsor para dispersar el polvo o utilizando un contenedor distribución de solvente/polvo autopropulsado, tal como un dispositivo que comprende el ingrediente activo disuelto o suspendido en un propulsor de ebullición baja en un contenedor sellado. Preferentemente, dichos polvos comprenden partículas en donde por lo menos el 98% de las partículas por peso tienen un diámetro mayor que 0.5 nanómetros y por lo menos el 95% de las partículas por número tienen un diámetro menor que 7 nanómetros. Más preferentemente, por lo menos el 95% de las partículas por peso tienen un diámetro mayor que 1 nanómetro y por lo menos el 90% de las partículas por número tienen un diámetro menor que 6 nanómetros. Las composiciones en polvo seco preferentemente incluyen un diluyente de polvo fino tal como azúcar y son provistas de manera conveniente en una forma de dosis unitaria.
Los propulsores de ebullición, generalmente incluyen propulsores líquidos que tienen un punto de ebullición por debajo de 18°C por debajo de la presión atmosférica. De manera general, el propulsor puede constituir desde aproximadamente el 50% hasta aproximadamente el 99.9% (p/p) de la composición, y el ingrediente activo puede constituir desde aproximadamente el 0.1% hasta aproximadamente el 20% (p/p) de la composición. El propulsor puede comprender adicionalmente ingredientes adicionales, tales como un tensoactivo no iónico o aniónico sólido o un diluyente sólido (preferentemente que tiene un tamaño de partícula del mismo orden que las partículas que comprenden el ingrediente activo).
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención formuladas para administración pulmonar también pueden proporcionar el ingrediente activo en la forma de gotas de una solución o suspensión. Dichas formulaciones pueden ser preparadas, empacadas o vendidas en la forma de soluciones o suspensiones acuosas o alcohólicas diluidas, opcionalmente esterilizadas, que comprenden el ingrediente activo, y pueden ser administradas de manera conveniente utilizando cualquier dispositivo de nebulización o atomización. Dichas formulaciones pueden comprender adicionalmente uno o más ingredientes adicionales que incluyen, sin limitar a, agentes de adición de sabor, tales como sodio de sacarina, un aceite volátil, un agente amortiguador, un agente activo de superficie o un conservador tal como metilhidroxibenzoato. Las gotas provistas por esta ruta de administración preferentemente tienen un diámetro promedio en el rango desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 200 nanómetros.
Las formulaciones descritas en la presente descripción, como útiles para la administración pulmonar, también son útiles para la administración intranasal de una composición farmacéutica de la presente invención.
Otras formulaciones adecuadas para administración intranasal son un polvo rústico que comprende el ingrediente activo y que tiene una partícula promedio desde aproximadamente el 0.2 hasta aproximadamente 500 micrómetros. Dicha formulación es administrada en la forma en la cual se toma una inhalación, es decir, mediante la inhalación rápida a través del pasaje nasal desde un contenedor del polvo mantenido cerca de la nariz.
Las formulaciones adecuadas para administración nasal pueden, por ejemplo, comprender desde aproximadamente tan poco como aproximadamente el 0.1% (p/p) y tanto como aproximadamente el 100% (p/p( del ingrediente activo, y puede comprender adicionalmente uno o más de los ingredientes adicionales descritos en la presente descripción.
Una composición farmacéutica de la presente invención puede ser preparada, empacada o vendida en una formulación adecuada para administración bucal. Dicha formulación puede, por ejemplo, estar en la forma de tabletas o pastillas elaboradas utilizando los métodos convencionales y puede, por ejemplo comprender desde aproximadamente el 0.1% hasta aproximadamente el 20% (p/p) del ingrediente activo, el resto comprendiendo una composición que se puede disolver o degradar oralmente, y opcionalmente, uno o más de los ingredientes adicionales descritos en la presente descripción. De manera alternativa, las formulaciones adecuadas para la administración bucal pueden comprender un polvo o una solución o suspensión en aerosol o atomizada que comprende el ingrediente activo. Dichas formulaciones en polvo, aerosol o atomizador, cuando se dispersan, preferentemente tienen una partícula promedio o tamaño de gota dentro del rango desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 200 nanómetros, y puede comprender adicionalmente uno o más de los ingredientes adicionales descritos en la presente descripción.
Una composición farmacéutica de la presente invención puede ser preparada, empacada o vendida en una formulación adecuada para administración oftálmica. Dichas formulaciones pueden, por ejemplo, tener la forma de gotas para los ojos que incluyen, por ejemplo, una solución o solución desde el 0.1% hasta el 1.0% (p/P) del ingrediente activo en un portador líquido acuoso u oleoso. Dichas gotas pueden comprender adicionalmente agentes amortiguadores, sales o uno o más de otros de los ingredientes adicionales descritos en la presente descripción. Otras formulaciones que pueden ser administradas en forma oftálmica, las cuales son útiles, incluyen aquellas que comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina o en una preparación liposomal.
Una composición farmacéutica de la presente invención puede ser preparada, empacada o vendida en una formulación adecuada para administración intramucosa. La presente invención proporciona la administración intramucosa de los compuestos para permitir el paso o la absorción de los compuestos a través de la mucosa. Dicho tipo de administración es útil para la absorción en forma oral (gingival, sublingual, bucal, etc.) rectal, vaginal, pulmonar, nasal, etc.
En algunos aspectos, la administración sublingual tiene una ventaja para los ingredientes activos, que en algunos casos, cuando son administrados oralmente, están sujetos a un primer paso de metabolismo sustancial y la degradación enzimática a través del hígado, lo que tiene como resultado la metabolización rápida y una pérdida de la actividad terapéutica relacionada con la actividad de las enzimas del hígado que convierten la molécula en metabolitos activos, o la actividad de la cual es disminuido debido a su bioconversión.
En algunos casos, la ruta de administración sublingual, tiene la capacidad de producir un inicio rápido de la acción debido a la permeabilidad considerable y la vascularización de la mucosa bucal. Además, la administración sublingual puede también permitir la administración de ingredientes activos, los cuales normalmente no son absorbidos a nivel de la mucosa del estómago o la mucosa digestiva después de la administración oral o alternativamente, las cuales son degradadas parcial o completamente en el medio ácido después de la ingestión de, por ejemplo, una tableta.
Las técnicas de preparación de tabletas sublinguales conocidas de la técnica anterior, normalmente son preparadas mediante la compresión directa de una mezcla de polvos que comprenden el ingrediente activo y excipientes para su compresión, tales como diluyentes, enlazadores, agentes de desintegración y adyuvantes. En un método de preparación alternativo, el ingrediente activo y los excipientes de compresión pueden ser granulados en seco o granulados en húmedo de antemano. En un aspecto, el ingrediente activo es distribuido a través de la masa de la tableta. El documento WO 00/16750 describe una tableta para uso sublingual que se desintegra rápidamente y comprende una mezla ordenada en la cual, el ingrediente activo está en la forma de micropartículas las cuales se adhieren a la superficie de las partículas solubles en agua que son de tamaño substancialmente mayor, que constituyen un soporte para las micropartículas activas, la composición también comprende un agente mucoadhesivo. El documento WO 00/57858 describe una tableta para uso sublingual, que comprende un ingrediente activo combinado con un sistema efervescente que pretende promover la absorción y también un modificador de pH.
Los compuestos de la presente invención pueden ser preparados en una formulación o composición farmacéutica adecuada para la administración que permite o mejora la absorción a través de la mucosa. Los agentes de mejoramiento de absorción de mucosa incluyen, sin limitar a, una sal biliar, un ácido graso, tensoactivo, o alcohol. En las modalidades específicas, el agente de mejoramiento de la permeación puede ser colato de sodio, dodecil sulfato de sodio, deoxicolato de sodio, taurodeoxicolato, glicocolato de sodio, dimetilsulfóxido o etanol. En una modalidad adicional, un compuesto de la presente invención puede ser formulado con un agente de mejoramiento de penetración de mucosa para facilitar la administración del compuesto. La formulación también puede ser preparada con pH optimizado par ala solubilidad, estabilidad de fármaco, y absorción a través de la mucosa, tal como la mucosa nasal, mucosa oral, mucosa vaginal, respiratoria y la mucosa intestinal.
Para mejorar adicionalmente la administración de la mucosa de los agentes farmacéuticos dentro de la presente invención, las formulaciones que comprenden el agenté activo también pueden contener un compuesto de peso molecular bajo hidrófilo como una base o excipiente. Dichos compuestos de peso molecular bajo hidrófilos proporcionan un medio* de pasaje a través del cual, un agente activo soluble en agua, tal como un péptido o proteína fisiológicamente activos, pueden dispersarse a través de la base a la superficie del cuerpo, en donde es absorbido el agente activo. El compuesto de peso molecular bajo hidrófilo, absorbe opcionalmente la humedad de la mucosa o la atmósfera de administración y disuelve el péptido activo soluble en agua. El peso molecular del compuesto de peso molecular bajo hidrófilo, generalmente no es mayor que 10000, y preferentemente no mayor que 3000. Los compuestos de peso molecular bajo hidrófilo incluyen compuestos de poliol, tales como oligo, di y monosacáridos , tales como sucrosa, manitil, lactosa, L-arabinosa, D-eritrosa, D-ribosa, D-xilosa, D-manosea D-galactosa, lactulosa, celobiosa, gentibiosa, glicerina, y polietilénglicol. Otros ejemplos de compuestos de peso molecular bajo hidrófilos útiles como portadores dentro de la presente invención incluyen N-metilpirrolidona, y alcoholes (por ejemplo, alcohol oligovin ílico, etanol, etilénglicol, propilénglicol, etc.). Estos compuestos de peso molecular bajo hidrófilos pueden utilizarse solos o en combinación con uno más o con otros componentes activos o inactivos de la formulación intranasal.
Cuando una preparación farmacéutica de liberación controlada de la presente invención contiene adicionalmente una base hidrófila, están disponibles muchas opciones para inclusión. Los polímeros hidrófilos, tales como polietilénglicol, y polivinilpirrolidona, alcoholes de azúcar, tales como D-sorbitol y silitol, sacáridos tales como sucrosa, maltosa, lactulosa, D-fructosa, dextrano y glucosa, tensoactivos tales como aceite de castor hidrogenado por polioxietileno, polioxietileno polioxipropilénglicol, y ésteres de ácido graso superiores de polioxietileno de sorbitán, sales tales como cloruro de sodio y cloruro de magnesio, ácidos orgánicos tales como ácido cítrico y ácido tartárico, aminoácidos tales como glicina, beta-alanina y clorhidrato de lisian, y aminosacáridos, tales como meglumina se proporcionan como ejemplos de la base hidrófila. Polietilénglicol, sucrosa y polivinilpirrolidona son los preferidos y el polietilénglicol son preferidos adicionalmente. Uno o una combinación de dos o más bases hidrófilas, se pueden utilizar en la presente invención.
La presente invención contempla la administración pulmonar, nasal u oral a través de un inhalador. En una modalidad, la administración desde un inhalador puede ser una dosis medida.
Un inhalador es un dispositivo para la autoadministración del paciente de por lo menso un compuesto de la presente invención que comprende un inhalador en rocío (por ejemplo, un inhalador de rocío nasal, oral o pulmonar) que contiene una formulación de rocío en aerosol de por lo menos un compuestos de la presente invención y un agente de dispersión farmacéuticamente aceptable. En un aspecto, el dispositivo es medido para dispersar una cantidad de la formulación en aerosol, formando un rocío que contiene una dosis de por lo menos un compuesto de la presente invención efectivo para tratar una enfermedad o padecimiento abarcado por la presente invención. El agente de dispersión puede ser un tensoactivo, tal como, sin limitar a, ésteres de ácido graso de polioxietileno, alcoholes de ácido graso de polioxietileno, y ésteres de ácido graso de sorbitán de polioxietileno. Los tensoactivos basados en fosfolípido también pueden utilizarse.
En otras modalidades, la formulación en aerosol es provista en la forma de una formulación en aerosol de polvo seco, en la cual, un compuesto de la presente invención está presente como un polvo dividido finamente. La formulación en polvo seca puede comprender adicionalmente un agente de adición de volumen, tal como, sin limitar a, lactosa, sorbitol, sucrosa y manitil. En otra modalidad específica, la formulación en aerosol es una formulación en aerosol líquida que comprende un diluyente farmacéuticamente aceptable, tal como, sin limitar a, agua esterilizada, solución salina, solución salina amortiguada y solución de dextrosa.
En las modalidades adicionales, la formulación en aerosol comprende por lo menos un compuesto adicional de la presente invención en una concentración, de manera que la cantidad medida de la formulación de aerosol dispersa por el dispositivo contiene una dosis del compuesto adicional en una cantidad medida que es efectiva para mejorar los síntomas de la enfermedad o padecimiento descrito en la presente descripción cuando es utilizada en combinación con por lo menos un primer o segundo compuestos de la presente invención.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un método de administración automático para el tratamiento de un paciente no hospitalizado de una padecimiento relacionado con adicciones o un padecimiento tal como un padecimiento o enfermedad relacionados con alcohol. Dicha administración puede utilizarse en un hospital, en un consultorio médico, o fuera de un hospital o consultorio médico por personal que no es médico para la autoadministración.
Los compuestos de la presente invención serán preparados en una formulación o composición farmacéutica adecuada para administración nasal. En una modalidad adicional, los compuestos de la presente invención pueden ser formulado con un agente de mejoramiento de penetración de mucosa para facilitar la administración del fármaco. La formulación también puede ser preparada con pH optimizado par su solubilidad, estabilidad de fármaco, absorción a través de la mucosa nasal y otras consideraciones.
Las cápsulas, blísters y cartuchos para utilizar en un inhalador o insuflador, pueden formularse para contener una mezcla de polvo de las composiciones farmacéuticas provistas en la presente descripción; una base de polvo adecuada, tal como lactosa o almidón; y un modificador de desempeño, tal como l-leucina, manitol o estearato de magnesio. La lactosa puede ser anhidra o en la forma del monohidrato. Otros excipientes adecuados incluyen dextrano, glucosa, maltosa, sorbitol, xilitol, fructosa, sucrosa y trehalosa. Las composiciones farmacéuticas provistas en la presente invención para administración por inhalación intranasal pueden comprender adicionalmente un sabor adecuado, tal como mentol y levomentol, o edulcorantes, tales como sacarina o sodio de sacarina.
Para administración por inhalación, los compuestos para utilizar de acuerdo con los métodos de la presente invención son administrados en forma conveniente en la forma de una presentación rocío en aerosol desde paquetes presurizados o un nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede ser determinada proporcionando una válvula para suministrar una cantidad medida. Las cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para utilizarse en un inhalador o insuflador pueden formularse conteniendo una mezcla de polvo de los fármacos y una base de polvo adecuado tal como lactosa o almidón.
Como se utiliza en la presente descripción, los "ingredientes adicionales" incluyen, sin limita a, uno o más de los siguientes: excipientes, agentes activos de superficie; agentes de dispersión; diluyentes inertes; agentes de granulación y desintegración; agentes enlazadores; agentes lubricantes; agentes edulcorantes; agentes de adición de sabor; agentes colorantes; conservadores; composiciones fisiológicamente degradables tales como gelatina; vehículos acuosos y solventes; vehículos oleosos y solventes; agentes de suspensión; agentes de dispersión o humectación; agentes emulsificadores; demulcentes; amortiguadores; sales; agentes de espesamiento; materiales de relleno; agentes emulsificadores; antioxidantes; antibióticos; agentes antifúngicos; agentes de estabilización; y materiales poliméricos e hidrófobos farmacéuticamente aceptables. Otros "ingredientes adicionales" los cuales pueden estar incluidos en las composiciones farmacéuticas de la presente invención son conocidos en la materia y descritos, por ejemplo, en la publicación de Genaro, ed., 1985, "Ciencias farmacéuticas de Remington" (Remington's Pharmaceutical Sciences), Mack Publishing Co., Easton, PA, la cual está incorporada en la presente descripción como referencia en su totalidad.
Normalmente, las dosificaciones de los compuestos de la presente invención, las cuales pueden ser administradas a un animal, preferentemente un humano, varían en una cantidad desde aproximadamente 1.0 pg hasta aproximadamente 100 g por kilogramo de peso corporal del animal. La dosificación precisa administrada variará dependiendo de cualquier número de factores, incluyendo sin limitar a, el tipo de animal y el tipo de estado de enfermedad que está siendo tratado, la edad del animal y la ruta de administración. Preferentemente, la dosificación del compuesto variará desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 10 g por kilogramo de peso corporal del animal. Más preferentemente, la dosificación variará desde aproximadamente 10 mg hasta aproximadamente 1 g por kilogramo de peso corporal del animal.
Los compuestos pueden ser administrados a un sujeto, tan frecuentemente como varias veces al día, o puede ser administrado menos frecuentemente, tal como una vez al día, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez al mes, o incluso con menos frecuencia, tal como una vez cada varios meses o incluso una vez al año o menos. La frecuencia de la dosis será fácilmente evidente para aquellos expertos en la materia y dependerán de cualquier número de factores, tales como, sin limitar a, el tipo de severidad de la enfermedad que está siendo tratada, el tipo y edad del animal, etc.
La presente invención también incluye un equipo que comprende los compuestos de la presente invención y un material de instrucción que describe la administración de ios compuestos. En otra modalidad, este equipo comprende un solvente (preferentemente esterilizado) adecuado para disolver o suspender la composición de la presente invención para administrar el compuesto al mamífero.
Como se utiliza en la presente descripción, un "material de instrucción" incluye una publicación, un registro, un diagrama, o cualquier otro medio de expresión, que se puede utilizar para comunicar la utilidad de los compuestos de la presente invención en el kit para efectuar el alivio de las diversas enfermedades o padecimientos citados en la presente descripción. Opcionalmente, o de manera alternativa, el material de instrucción puede describir uno o más métodos para aliviar la enfermedad o padecimientos. El material de instrucción del equipo de la presente invención puede, por ejemplo, fijarse a un contenedor, que contiene un compuesto de la presente invención o ser transportado junto con un contenedor que contiene los compuestos. De manera alternativa, el material de instrucción puede ser transportado por separado del contenedor con la intención del material de ¡nstrucción y el compuesto será utilizado en forma cooperativa con el receptor Sin una descripción adicional, se considera que un experto en la materia puede, utilizando la descripción anterior y los siguientes ejemplos ilustrativos, elabora y utiliza los compuestos de la presente invención y practica los métodos reclamados. Los siguientes ejemplos de trabajo, por lo tanto, señalan de manera específica las modalidades preferidas de la presente invención, y no serán interpretados como limitantes en sentido alguno de la presente invención.
EJEMPLOS Materiales y Métodos Fármacos y químicos El ácido S-trans, ácido trans-famesiltiosalicílico (FTS, Salirasib), un inhibidor Ras conocido, se obtuvo de Concordia Pharmaceuticals, Inc. Ft. Lauderdale, FL. 4-(4-Cloro-2-metilfenoxi)-N-hidroxibutanamido (CMH) (5809354) y este en análogo activo 4-(4-cloro-2-metilfenoxi)-N-(3-etoxipropil)butanam¡do (CMB) (6094911) se adquirieron de ChemBridge Corporation (San Diego, CA). TMS se sintetizó como se describió anteriormente (Kim S, Ko H, Park JE, Jung S, Lee SK, Chun YJ: "Diseño, síntesis y descubrimiento de análogos de trans-estilbeno novedosos como inhibidores 1B1 P450 de citocromo humano potentes y selectivos" (Design, synthesis, and discovery of novel trans-stilbene analogues as potent and selective human cytochrome P450 1 B 1 inhibitors). J Med Chem 2002, 45: 160-164). Se adquirió 17 -Estradiol de Steraloids, Inc. (Newport, Rl). T-DMI fue regalado por Genentech, San Francisco, CA. Tamoxifeno y d-Tocotrienol fueron adquiridos de Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO).
Condiciones de cultivo Celular Se hizo crecer MDF-7 parental en IMEM con el 5% de FBS. Las células T47D en RPMI160 con el 10% de FBS. Las células postmenopáusicas resistentes a tamoxifeno se hicieron crecer en IMEM libre de fenol con el 5% de DCC y tratados con tamoxifeno (10-7 M) durante más de una año [5]. Las células privadas de estrógeno a largo plazo se hicieron crecer en IMEM libre de fenol con el 5% de DCC [6]. Las células LTEDaro, las cuales sobre expresan la aromatasa, estuvieron en una clase de injerto de Dr. Chen [7] y se hicieron crecer en MEM libre de fenol rojo, complementado con el 10% de DCC, 100 mg/l de piruvato de sodio, 2 mM de L-glutamina y 200 200 mg/L de G418.
Ensayos de inhibición de crecimiento e interacción de fármacos Las células fueron colocadas en placas de seis depósitos en una densidad de 60,000 células por depósito. Dos días después, las células fueron tratadas por triplicado como se describió en las descripciones de las figuras. Al final del tratamiento, las células fueron enjuagadas dos veces con solución salina. El nuclei fue preparado mediante la adición secuencial de 1 mL de solución de HEPES-MgCI2 (0.01 mol/L de HEPES y 1.5 mol/L MgCI2) y 0.1 mL de solución de ZAP [0.13 mol/L de bromuro de etilhexadecildimetilamonio en 3% de ácido acético glacial (v/v)] y fueron contados utilizando un contador Coulter (BeckmanCoulter, Inc., Fullerton, CA). Las curvas de respuesta de dosis se obtuvieron a partir de muestras por triplicado de la dosis mediana efectiva, Dm, se calculó utilizando el software Compusyn [8, 9]. El índice de combinación y los valores con una desviación media y estándar se calcularon utilizando la simulación Monte Cario utilizando el software CalcuSyn de Biosoft (Cambridge, U.K.) [10].
Inmunoprecipitación La células crecieron en platos de 100 mm se lavaron con PBS frío y extraído con amortiguador de lisis de 1 mi (50 mM de Tris-HCI, 150 mM de NaCI, 5 mM de EDTA, 25 mM de NaF, 2 mM de NaV04, 5% de glicerol, 1% Tritón de X-I00, 10 pg/ml de leupeptina, aprotinina, y pepstatina). Las muestras fueron incubadas en hielo durante 30 minutos, fueron sonicadas, y centrifugadas a 14,000 rpm durante 10 minutos a una temperatura de 4°C. Los sobrenadantes que contienen 0.5 mg totales de proteína fueron incubadas con anticuerpos contra la proteína objetivo a una temperatura de 4°C durante la noche antes de la adición de 40 µ? de lechos de proteína G (Invitrogen) y se continuó la incubación a una temperatura de 4°C durante 2 horas. Los lechos de proteína G con el inmunocomplejo fueron centrifugados a 14,000 rpm durante 20 segundos. El sobrenadante fue removido cuidadosamente. Los lechos fueron lavados dos veces con 1 mi de amortiguador II (20 mM e MOPS, 2 mM de EGTA, 5 mM de EDTA, 25 mM de NaF, 40 mM de 13- glicerofosfato, 10 mM de pirofosfato de sodio, 2 mM de NaV04, 0.5% de Tritón X-100, 1 mM de PMSF, 10 pg/ml de leupeptina, aprotinina, y pepstatina) y posteriormente fueron hervidos en 50 µ? 2x de amortiguador de Laemmli. Las muestras se sometieron a electroforesis en 10% de poliacrilamida SDS seguidos por inmunomanchado. índice de combinación y Análisis de Isobolograma La naturaleza de la interacción entre los agentes se evaluó mediante el método del índice de combinación de Chou y Talalay [8, 9]. El método se basa en el principio de efecto de mediana: fa/fu (D/Dm)m (1) en donde D es la dosis y Dm es la dosis que produce el 50% de inhibición de crecimiento, fa, es la fracción celular afectada por la dosis D, y fu es la fracción no afectada, y m es el coeficiente que define la sigmoidicidad de la curva de efecto de dosis. Esta relación y la ley de acción de masa conducen a una ecuación generalizada para la interacción de inhibidores múltiples. (fa)A.B/(fu)A,B= (fa)A/(fu)B + (fa)B/(fu)B + C ( f a ) A (f a) B/( f u ) A (f U ) B (2) En donde (fA)A, (ÍU)B y (fA)A,B son la fracción afectada por los agentes A y B solos y en combinación. A partir de las ecuaciones 1 y 2, el índice de combinación (Cl) puede ser derivado como CI = (D)A/(DX)A + (D)B + a (D)A(D)B/(DX)A(DX)B (3) en donde D es la dosis que produce el x% de inhibición de crecimiento y a = .0 para fármacos mutuamente exclusivos y a = 1 para fármacos mutuamente no exclusivos. La sinergia es calculada y definida por el software CalcuSyn como un Cl < 1; en forma aditiva es Cl = 1 y el antagonismo es Cl > 1 [10].
Análisis estadístico Los valores de desviación media y estándar del índice de combinación fueron calculadas utilizando el algoritmo de Monte Cario dentro del programa CalcuSyn [10].
Modalidades de la Invención 1. Un método para el tratamiento de un cáncer, que compren la administración a un paciente afligido con el mismo de una cantidad efectiva de un inmunoconjugado que comprende una porción de anticuerpo monoclonal y una primera porción de fármaco pro-apoptótico enlazado al mismo; y administrar al paciente una cantidad efectiva de un segundo fármaco pro-apoptótico. 2. El método de la modalidad 1, en donde la primera porción de fármaco pro-apoptótica es enlazada de manera covalente con la porción de anticuerpo monoclonal. 3. El método de la modalidad 1 o 2, en donde el cáncer es cáncer de seno. 4. El método de la modalidad 3, en donde el cáncer de seno es cáncer de seno resistente a la aromatasa. 5. El método de la modalidad 3, en donde el cáncer de seno es cáncer de seno resistente a tamoxifeno. 6. El método de la modalidad 3, en donde el cáncer de seno es cáncer de seno refractario a hormona ER + . 7. El método de la modalidad 3, en donde el cáncer de seno es cáncer de seno positivo a HER2. 8. El método de la modalidad 5, en donde el cáncer de seno es cáncer de seno positivo a HER2. 9. El método de la modalidad 3, en donde el cáncer de seno comprende células de cáncer en las cuales, el ion que expresa HER2 es sobre-regulado. 10. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde el inmunoconjugado enlaza a HER2. 11. El método de la modalidad 9, en donde la porción del anticuerpo monoclonal es trastuzumab. 12. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 11, en donde la primera porción de fármaco pro-apoptótico es un agente de despolimerización de microtúbulo. 13. El método de la modalidad 12, en donde la primera porción de fármaco pro-apoptótica es un maitansinoide o una aurastatina. 14. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 12, en donde el inmunoconjugado es trastuzumab acoplado en forma covalente por medio de un enlazador con una porción de fármaco pro-apoptótico maitansinoide. 15. El método de la modalidad 14, en donde el inmunoconjugado es T-DMI. 16. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 15, en donde el segundo fármaco pro-apoptótico ejerce una citotoxicidad mediante un mecanismo molecular diferente del mecanismo molecular de la citotoxicidad ejercida por la primera porción de fármaco pro-apoptótico. 17. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 16, en donde la administración del inmunoconjugado y el segundo fármaco pro-apoptótico tiene un efecto sinergístico. 18. El método de la modalidad 16, en donde el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria extrínseca. 19. El método de la modalidad 18, en donde el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria Fas. 20. El método de la modalidad 18, en donde el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria c-FLIP. 21. El método de la modalidad 18, en donde el segundo fármaco pro-apoptótica es CMH, E2 o d-tocotrienol . 22. El método de la modalidad 16, en donde el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria intrínseca. 23. El método de la modalidad 22, en donde el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria independiente de caspasa. 24. El método de la modalidad 22, en donde el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria dependiente de caspasa. 25. El método de la modalidad 22, en donde el segundo fármaco pro-apoptótica es E2, FTS o d-tocotrienol. 26. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 25, en donde el segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico es FTS, CMH, E2, TMS o d-tocotrienol o curcumina. 27. En las diversas modalidades, el inmunoconjugado es T-DMI y el segundo fármaco pro-apoptótico es FTS, CMH, E2, TMS, d-tocotrienol o curcumina. 28. El método de la modalidad 27, en donde el segundo fármaco pro-apoptótica es E2, FTS, d-tocotrienol o TMS. 29. El método de la modalidad 27, en donde el segundo fármaco pro-apoptótica es FTS. 30. El método de la modalidad 27, en donde la administración del inmunoconjugado y el segundo fármaco pro-apoptótico tiene un efecto sinergístico. 31. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 30, en donde el porción de reticulador es adherirse in vivo dentro de una célula de cáncer de seno resistente a HER-2 después de la administración del inmunoconjugado. 32. El método de la modalidad 1, que comprende el tratamiento de un cáncer de seno resistente a la aromatasa en un paciente afligido con el mismo, que comprende la administración al paciente de una cantidad efectiva de T-DMI en conjunto con una cantidad efectiva de FTS, CMH, E2 TMS o d-tocotrienol, o curcumina, o cualquier combinación de los mismos. 33. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 32, en donde el método es una terapia adyuvante. 34. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 32, en donde el método es una terapia de primera línea. 35. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 32, en donde el método es una terapia de segunda línea. 36. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 35, en donde el inmunoconjugado y el segundo fármaco pro-apoptótico son administrados como una formulación combinada o por alternación. 37. El método de cualquiera de las modalidades 1 a 36, que comprende adicionalmente la administración al paciente de un fármaco anti-cáncer adicional, en donde el fármaco anti cáncer adicional ejerce un efecto por medio de un mecanismo molecular diferente del mecanismo molecular de la primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico y es diferente del mecanismos molecular del segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico; o la administración al paciente de radiación por ionización que comprende rayos X, rayos gamma, emisiones de radionúclidos o partículas subatómicas; o cualquier combinación de los mismos. 38. Una composición terapéutica que comprende (a) un inmunoconjugado que comprende una porción de anticuerpo monoclonal enlazada a una primera porción de fármaco pro-apoptótico, y (b) un segundo fármaco pro-apoptótico. 39. La composición de la modalidad 38, en donde el inmunoconjugado covalente es T-DMI. 40. La composición de la modalidad 38, en donde el segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico es FTS, CMH, E2, TMS d-tocotrienol o curcumina.
Las descripciones de todas y cada una de las patentes, solicitudes de patente y publicaciones citadas en la presente son incorporadas en la misma como referencia en su totalidad.
Los encabezados incluidos son incluidos en la presente como referencia y para ayudar a localizar ciertas secciones. Estos encabezados no pretenden limitar el alcance de los conceptos descritos en la presente descripción, y estos conceptos pueden tener una aplicación en otras secciones a través de la especificación entera.
Aunque la presente invención ha sido descrita haciendo referencia a las modalidades específicas, es evidente que otras modalidades y variaciones de la presente invención pueden ser consideradas por otros expertos en la materia sin alejarse del verdadero espíritu y alcance de la presente invención.
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Claims (42)

REIVINDICACIONES
1. Un método para el tratamiento de un cáncer, que compren la administración a un paciente afligido con el mismo de una cantidad efectiva de un inmunoconjugado que comprende una porción de anticuerpo monoclonal y una primera porción de fármaco pro-apoptótico enlazado al mismo; y administrar al paciente una cantidad efectiva de un segundo fármaco pro-apoptótico.
2. El método tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado además porque la primera porción de fármaco pro-apoptótica es enlazada de manera covalente con la porción de anticuerpo monoclonal.
3. El método tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado además porque el cáncer es cáncer de seno.
4. El método tal y como se describe en la reivindicación 3, caracterizado además porque el cáncer de seno es cáncer de seno resistente a la aromatasa.
5. El método tal y como se describe en la reivindicación 3, caracterizado además porque el cáncer de seno es cáncer de seno resistente a tamoxifeno.
6. El método tal y como se describe en la reivindicación 3, caracterizado además porque el cáncer de seno es cáncer de seno refractario a hormona ER + .
7. El método tal y como se describe en la reivindicación 3, caracterizado además porque el cáncer de seno es cáncer de seno positivo a HER2.
8. El método tal y como se describe en la reivindicación 5, caracterizado además porque el cáncer de seno es cáncer de seno positivo a HER2.
9. El método tal y como se describe en la reivindicación 7, caracterizado además porque la porción del anticuerpo monoclonal enlaza HER2.
10. El método tal y como se describe en la reivindicación 9, caracterizado además porque la porción del anticuerpo monoclonal es trastuzumab.
11. El método tal y como se describe en la reivindicación I, caracterizado además porque la primera porción de fármaco pro-apoptótico es un agente de despolimerización de microtúbulo.
12. El método tal y como se describe en la reivindicación I I, caracterizada además porque la primera porción de fármaco pro-apoptótica es un maitansinoide o una aurastatina.
13. El método tal y como se describe en la reivindicación 11, caracterizado además porque la porción del anticuerpo monoclonal enlaza HER2.
14. El método tal y como se describe en la reivindicación 12, caracterizado además porque el inmunoconjugado es T-DMI.
15. El método tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico ejerce una citotoxicidad mediante un mecanismo molecular diferente del mecanismo molecular de la citotoxicidad ejercida por la primera porción de fármaco pro-apoptótico.
16. El método tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado además porque la administración del inmunoconjugado y el segundo fármaco pro-apoptótico tiene un efecto sinergístico.
17. El método tal y como se describe en la reivindicación 15, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria extrínseca.
18. El método tal y como se describe en la reivindicación 17, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria Fas.
19. El método tal y como se describe en la reivindicación 17, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria c-FLIP.
20. El método tal y como se describe en la reivindicación 17, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótica es CMH, E2 o d-tocotrienol .
21. El método tal y como se describe en la reivindicación 15, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria intrínseca.
22. El método tal y como se describe en la reivindicación 21, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria independiente de caspasa.
23. El método tal y como se describe en la reivindicación 21, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico es un fármaco que induce la apoptosis por medio de una trayectoria dependiente de caspasa.
24. El método tal y como se describe en la reivindicación 21 , caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótica es E2, FTS, d-tocotrienol , salinomicina o curcumina.
25. La composición tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizada además porque el segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico es FTS, CMH, E2, TMS d-tocotrienol, salinomicina o curcumina.
26. El método tal y como se describe en la reivindicación 13, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico induce la apoptosis por medio de una trayectoria extrínseca.
27. El método tal y como se describe en la reivindicación 26, caracterizado además porque la administración del inmunoconjugado y el segundo fármaco pro-apoptótico tiene un efecto sinergístico.
28. El método tal y como se describe en la reivindicación 26, caracterizado además porque el segundo fármaco pro- apoptótica es CMH, E2 o d-tocotrienol .
29. El método tal y como se describe en la reivindicación 26, caracterizado además porque el inmunoconjugado es T-DMI.
30. El método tal y como se describe en la reivindicación 13, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico induce la apoptosis por medio de una trayectoria intrínseca .
31. El método tal y como se describe en la reivindicación 30, caracterizado además porque la administración del inmunoconjugado y el segundo fármaco pro-apoptótico tiene un efecto sinerg ístico.
32. El método tal y como se describe en la reivindicación 30, caracterizado además porque el segundo fármaco pro-apoptótico es FTS.
33. El método tal y como se describe en la reivindicación 30, caracterizado además porque el inmunoconjugado es T-DMI.
34. El método tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado además porque comprende el tratamiento de un cáncer de seno resistente a aromatasa, resistente a tamoxifeno, o refractorio de hormona ER+ en un paciente afligido con el mismo, que comprende la administración al paciente de una cantidad efectiva de T-DMI y una cantidad efectiva de FTS, CMH, E2 TMS o d-tocotrienol, o curcumina, o cualquier combinación de los mismos.
35. El método tal y como se describe en la reivindicación en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 34, caracterizado además porque el método es una terapia adyuvante.
36. El método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 34, caracterizado además porque el método es una terapia de primera línea.
37. El método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 34, caracterizado además porque el método es una terapia de segunda línea.
38. El método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35, caracterizado además porque el inmunoconjugado y el segundo fármaco pro-apoptótico son administrados como una formulación combinada o por alternación.
39. El método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 34, caracterizado además porque comprende adicionalmente la administración al paciente de un fármaco anti-cáncer adicional, en donde el fármaco anticáncer adicional ejerce un efecto por medio de un mecanismo molecular diferente del mecanismo molecular de la primera porción de fármaco anti-cáncer pro-apoptótico y es diferente del mecanismo molecular del segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico; o la administración al paciente de radiación por ionización que comprende rayos X, rayos gamma, emisiones de radionúclidos o partículas subatómicas; o cualquier combinación de los mismos.
40. Una composición terapéutica que comprende (a) un inmunoconjugado que comprende una porción de anticuerpo monoclonal enlazada a una primera porción de fármaco pro-apoptótico, y (b) un segundo fármaco pro-apoptótico.
41. La composición tal y como se describe en la reivindicación 40, caracterizada además porque el inmunoconjugado covalente es T-DMI.
42. La composición tal y como se describe en la reivindicación 40, caracterizada además porque el segundo fármaco anti-cáncer pro-apoptótico es FTS, CMH, E2, TMS d-tocotrienol o curcumina.
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