MX2013000334A

MX2013000334A - Forma cristalina de un compuesto 3-fenoximetilpirrolidina.

Info

Publication number: MX2013000334A
Application number: MX2013000334A
Authority: MX
Inventors: Daisuke Roland Saito; Miroslav Rapta
Original assignee: Theravance Inc
Priority date: 2010-07-09
Filing date: 2011-06-30
Publication date: 2013-02-26
Also published as: IL223584A0; US8791151B2; CN103038211B; CN103038211A; JP5823512B2; AU2011276416B2; US20150080450A1; KR20130041916A; WO2012006205A1; CL2013000085A1; BR112013000602A2; US20120010265A1; EP2590941A1; US9120746B2; US20120178790A1; US20140018407A1; PH12013500051A1; JP2015120752A; CO6680604A2; US8163794B2

Abstract

La invención provee una sal clorhidrato cristalina de (S)-3-[(S)-1-(4-clorofenoxi)-2-metilpropilpirrolidina. Esta invención también provee composiciones farmacéuticas que comprenden la sal cristalina, los procesos e intermediarios para preparar la sal cristalina, y los métodos de uso de la sal cristalina para tratar enfermedades.

Description

FORMA CRISTALINA DE UN COMPUESTO 3 -PENOXIMETILPIRROLIDINA ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una forma cristalina novedosa de un compuesto 3 - fenoximetilpirrolidina, que tiene actividad como inhibidor de la recaptación de la serotonina (5-HT) y la norepinefriña (NE) . Esta invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto cristalino o preparadas a partir de dicho compuesto, a procesos e intermediarios para preparar el compuesto cristalino, y a métodos para usar dicho compuesto para tratar un trastorno de dolor, tal como dolor neuropático, y otras dolencias.

ESTADO DEL ARTE El dolor es una experiencia sensorial y emocional desagradable, asociada con un daño real o potencial a los tejidos, o descrito en términos de dicho daño (de acuerdo con la terminología del dolor de la Asociación Internacional para el Estudio del Dolor [IASP, del inglés International Association for the Study of Pain] ) . El dolor crónico persiste más allá del dolor agudo o más allá del tiempo esperado para que una herida se cure (American Pain Society. "Pain Control in the Primary Care Setting." 2006:15). El dolor neuropático es un dolor iniciado o causado por una lesión o disfunción primaria en el sistema nervioso. El dolor neuropático periférico ocurre cuando la lesión o disfunción afecta el sistema nervioso periférico; el dolor neuropático central, cuando la lesión o disfunción afecta el sistema nervioso central (IASP) .

Varios tipos de agentes terapéuticos se usan en la actualidad para tratar el dolor neuropático con inclusión de, por ejemplo: antidepresivos tricíclicos (TCA, del inglés Tricyclic Antidepressants) , inhibidores de la recaptación de serotonina y norepinefriña, ligandos de los canales de calcio (por ej . , gabapentina y pregabalina) , lidocaína tópica, y agonistas opioides (por ej . , morfina, oxicodona, metadona, levorfanol y tramadol) .

La (S) -3- [ (S) -1- (4-Clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina, descrita en la Solicitud de Patente Estadounidense No. 12/834.128 cedida al mismo solicitante, presentada el 12 de julio de 2010 a nombre de Stangeland y colaboradores, inhibe la recaptación tanto de la serotonina como de la norepinefriña al unirse a los transportadores de serotonina y norepinefriña . Cuando se preparan compuestos para almacenamiento a largo plazo, y cuando se preparan composiciones y formulaciones f rmacéuticas, con frecuencia es deseable tener una forma cristalina del agente terapéutico que no sea higroscópica ni delicuescente. También es ventajoso tener una forma cristalina que tenga un punto de fusión relativamente alto (es decir, aproximadamente 128 °C) , lo que permite que el material sea procesado -por ejemplo, micronizado- sin descomposición significativa. Por consiguiente, existe la necesidad de obtener una forma estable, no delicuescente de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina que tenga un nivel aceptable de higroscopicidad y un punto de fusión relativamente alto.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina. En una forma de realización, la invención se refiere a una sal cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2 -metilpropilpirrolidina y ácido clorhídrico en una relación molar 1:1.

Un aspecto de la invención se refiere a procesos para preparar una sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -i- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina. En una forma de realización, un proceso para preparar una sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina comprende los siguientes pasos: (a) tratar una sal clorhidrato de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina con un solvente polar para formar una primera composición o desproteger t-butil éster del ácido (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina-l-carboxílico con ácido clorhídrico en un diluyente inerte para formar una primera composición; y (b) agregar un solvente no polar para formar una segunda composición a partir de la cual se forma la sal clorhidrato cristalina de la invención. En una forma de realización particular, el paso (b) comprende: (i) agregar un solvente no polar para formar una segunda composición; (ii) enfriar opcionalmente para efectuar la cristalización; y (iii) aislar los sólidos resultantes para obtener la sal clorhidrato cristalina de la invención.

Otro aspecto de la invención se refiere a un proceso para purificar (S) -3- [ (S) -1- ( -clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina. En una forma de realización, este proceso comprende formar una sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina . La invención también se refiere a productos preparados mediante los procesos descritos en la presente.

Un aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina. Dichas composiciones pueden contener, opcionalmente, otros agentes activos tales como agentes anti-Alzheimer, anticonvulsivos, antidepresivos, agentes anti-Parkinson, inhibidores de la recaptación de serotonina-norepinefriña duales, agentes antiinflamatorios no esteroideos, inhibidores de la recaptación de la norepinefriña, agonistas opioides, antagonistas opioides, inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina, bloqueadores de los canales de sodio, simpaticolíticos , y combinaciones de los mismos. Por consiguiente, en otro aspecto más de la invención, una composición farmacéutica comprende la sal cristalina de la invención, un segundo agente activo, y un portador farmacéuticamente aceptable. Otro aspecto de la invención se refiere a una combinación de agentes activos, que comprende la sal cristalina de la invención y un segundo agente activo. La sal cristalina de la invención se puede formular junto con el (los) agente (s) adicional (es) , o por separado. Cuando se formula por separado, se puede incluir un portador farmacéuticamente aceptable con el (los) agente (s) adicional (es) . Por ende, otro aspecto más de la invención se refiere a una combinación de composiciones farmacéuticas, en donde la combinación comprende: una primera composición farmacéutica que comprende la sal cristalina de la invención y un primer portador farmacéuticamente aceptable; y una segunda composición farmacéutica que comprende un segundo agente activo y un segundo portador farmacéuticamente aceptable. La invención también se refiere a un kit que contiene dichas composiciones farmacéuticas; por ejemplo, donde la primera y la segunda composiciones farmacéuticas son composiciones farmacéuticas separadas.

La (S) -3- t (S) -1- (4 -clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina posee actividad inhibitoria de la recaptación de la serotonina y actividad inhibitoria de la recaptación de la norepinefriñ . Se espera que la sal clorhidrato cristalina de este compuesto tenga la misma actividad y, por ende, la misma utilidad Como agente terapéutico para tratar pacientes que padecen una enfermedad o un trastorno que se trata mediante la inhibición del transportador de serotonina y/o norepinefriña . Por lo tanto, un aspecto de la invención se refiere a un método para tratar: un trastorno de dolor tal como dolor neuropático o fibromialgia; un trastorno depresivo tal como depresión mayor; un trastorno afectivo tal como un trastorno de ansiedad; trastorno de déficit de atención con hiperactividad; un trastorno cognitivo tal como demencia; incontinencia urinaria por estrés; síndrome de fatiga crónica; obesidad; o síntomas vasomotores asociados con la menopausia, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención.

Otro aspecto más de la invención se refiere al uso del compuesto cristalino de la invención para la fabricación de medicamentos; en especial, para la fabricación de medicamentos útiles para tratar trastornos de dolor, trastornos depresivos, trastornos afectivos, trastorno de déficit de atención con hiperactividad, trastornos cognitivos, incontinencia urinaria por estrés, para inhibir la recaptación de la serotonina en un mamífero, o para inhibir la recaptación de la norepinefriña en un mamífero. Otros aspectos y formas de realización de la invención se revelan en la presente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Varios aspectos de la presente invención se ilustran por referencia a los dibujos adjuntos.

La Figura 1 ilustra un patrón de difracción de rayos X en polvos (PXRD, del inglés Powder X-Ray Dlff action) de la sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina. La Figura 2 ilustra un termograma de calorimetría diferencial de barrido (DSC, del inglés Differential Scanning Calorimetry) . La Figura 3 ilustra el trazo del análisis termogravimétrico (TGA, del inglés Thermal Gravimetric Analysis) . La Figura 4 ilustra el perfil de sorción de humedad dinámica (DMS, del inglés Dyna ic Moisture Sorption) . La Figura 5 es una imagen micrográfica.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención provee una sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina. En forma sorprendente, se ha encontrado que este compuesto cristalino no es delicuescente, aún cuando se expone a humedad atmosférica. Asimismo, este compuesto cristalino tiene un nivel aceptable de higroscopicidad y un punto de fusión alto.

DEFINICIONES Cuando se describen los compuestos, las composiciones, los métodos y los procesos de la invención, los siguientes términos tienen los siguientes significados, a menos que se indique lo contrario. Asimismo, tal como se usan en la presente, las formas singulares "un", "una", "el" y "la" incluyen las correspondientes formas en plural, a menos que el contexto de uso claramente dicte lo contrario. Los términos "comprender", "incluir" y "tener" están destinados a ser inclusivos y hacen referencia a que pueden existir elementos adicionales distintos a los elementos listados. Ha de entenderse que todos los números que expresan cantidades de ingredientes, propiedades tales como peso molecular, condiciones de reacción y otros, usados en la presente, están modificados en todos los casos por el término "aproximadamente", a menos que se indique lo contrario. Por consiguiente, los números establecidos en la presente son aproximaciones que pueden variar según las propiedades deseadas que se buscan obtener mediante la presente invención. Al menos -y no como un intento de limitar la aplicación de la doctrina de los equivalentes al alcance de las reivindicaciones- cada número debería al menos ser considerado a la luz de los dígitos significativos informados y aplicando técnicas comunes de redondeo.

Tal como se usa en la presente, la frase "de la fórmula" , "que tiene la fórmula" , o "que tiene la estructura" , no está destinada a ser limitativa y se usa de la manera en que el término "comprender" es comúnmente usado.

El término "punto de fusión" , tal como se usa en la presente, hace referencia a la temperatura a la cual se observa el flujo de calor endotérmico máximo mediante calorimetría diferencial de barrido, para la transición térmica que corresponde al cambio de fase sólida a líquida.

El término "farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material que no es inaceptable a nivel biológico o de alguna otra manera inaceptable cuando se usa en la invención. Por ejemplo, el término "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material que puede ser incorporado en una composición y administrado a un paciente sin causar efectos biológicos inaceptables o interactuar de manera inaceptable con otros componentes de la composición. Dichos materiales farmacéuticamente aceptables típicamente han cumplido con las normas de evaluación de toxicología y fabricación requeridas, e incluyen aquellos materiales identificados como ingredientes inactivos adecuados por la U.S. Food and Drug Administration .' El término "cantidad terapéuticamente efectiva" hace referencia a una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento cuando se administra a un paciente que lo necesita; es decir, la cantidad de droga necesaria para obtener el efecto terapéutico deseado. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente efectiva para tratar dolor neuropático es una cantidad de compuesto necesaria para, por ejemplo, reducir, suprimir, eliminar o prevenir los síntomas del dolor neuropático o para tratar la causa subyacente del dolor neuropático. Por otro lado, el término "cantidad efectiva" hace referencia a una cantidad suficiente para obtener un resultado deseado, que puede no necesariamente ser un resultado terapéutico. Por ejemplo, cuando se estudia un sistema que comprende un transportador de la norepinefriña, una "cantidad efectiva" puede ser la cantidad necesaria para inhibir la recaptación de la norepinefriña.

El término "tratar" o "tratamiento", tal como se usa en la presente, hace referencia a tratar o brindar tratamiento para una enfermedad o condición médica (tal como dolor neuropático) en un paciente, tal como un mamífero (particularmente un humano) , que incluye una o más de las siguientes acciones: a) evitar que ocurra la enfermedad o condición médica; es decir, tratamiento profiláctico de un paciente; (b) mejorar la enfermedad o condición médica; es decir, eliminar o causar la regresión de la enfermedad o condición médica en un paciente; (c) suprimir la enfermedad o condición médica; es decir, ralentizar o contrarrestar el desarrollo de la enfermedad o condición médica en un paciente; o (d) aliviar los síntomas de la enfermedad o condición médica en un paciente. Por ejemplo, el término "tratar dolor neuropático" incluiría evitar que el dolor neuropático ocurra, mejorar el dolor neuropático, suprimir el dolor neuropático, y aliviar los síntomas de dolor neuropático. El término "paciente" está destinado a incluir aquellos mamíferos, tales como humanos, que necesitan de tratamiento o prevención de la enfermedad, que en el presente están siendo tratados para la prevención de la enfermedad o tratamiento de una enfermedad o condición médica específicas, así como también examinar a los sujetos en los cuales los compuestos de la invención están siendo evaluados o están siendo usados en un ensayo, por ejemplo un modelo animal.

Todos los otros términos usados en la presente están destinados a tener su significado común como lo entienden las personas con experiencia en el arte al cual pertenecen.

El compuesto cristalino de la invención se puede sintetizar a partir de materiales de inicio fácilmente disponibles según se describen a continuación y en los Ejemplos. Ha de advertirse que, cuando se brindan condiciones de proceso típicas o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, relaciones molares de reactivos, solventes, presiones, etc.), también se pueden usar otras condiciones de proceso, a menos que se establezca lo contrario. Ha de advertirse que, si bien se brindan condiciones de proceso específicas (es decir temperaturas de cristalización, tiempos, relaciones molares de los reactivos, solventes, presiones, etc.), también se pueden usar otras condiciones de proceso, a menos que se indique lo contrario. En algunos casos, las reacciones o cristalizaciones se realizaron a temperatura ambiente y no se tomó ninguna medición de la temperatura real. Ha de entenderse que la temperatura ambiente puede representar una temperatura dentro del rango comúnmente asociado con la temperatura ambiente en un contexto de laboratorio, y típicamente se encontrará en el rango de aproximadamente 25 °C hasta aproximadamente 50 °C. En otros casos, las reacciones o cristalizaciones se realizan a temperatura ambiente, y la temperatura efectivamente se midió y registró.

Por lo general, la cristalización se realiza en un solvente adecuado. Al completar la cristalización, el compuesto cristalino se puede aislar de la mezcla de reacción a través de medios convencionales, tales como precipitación, concentración, centrifugación, y similares. Las relaciones molares descritas en los métodos de la invención se pueden determinar fácilmente mediante varios métodos disponibles para las personas versadas en el arte. Por ejemplo, . dichas relaciones molares se pueden determinar fácilmente mediante 1H RMN. En forma alternativa, el análisis elemental y los métodos de HPLC se pueden usar para determinar la relación molar .

El material de inicio se puede preparar fácilmente a partir de materiales de inicio y reactivos disponibles a nivel comercial usando procedimientos que son ampliamente conocidos en el arte, cuyos ejemplos se proveen en los Ejemplos en la presente. En una forma de realización, el material de inicio es una sal clorhidrato de (S) -3- [ (S) -l- (4-clorofenoxi) -2 -metilpropilpirrolidina, que se prepara mediante una reacción de sustitución nucleófila aromática (SNAr) , seguido de desprotección con ácido clorhídrico. Por ejemplo, la sal clorhidrato se puede preparar al disolver t-butil éster del ácido (S) -3- ( (S) -l-hidroxi-2-metilpropil) irrolidina-l-carboxílico (1.0 eq.) y l-cloro-4-fluorobenceno (3.0 eq.) en un solvente adecuado, seguido de la adición de hidruro de sodio (NaH, 1.5 eq.) . Esto forma un intermediario protegido con BOC que luego puede ser desprotegido con HC1 1.20 M en EtOH, para formar la sal clorhidrato deseada. En otra forma de realización, el material de inicio es t-butil éster del ácido (S) -3 - [ (S) - 1-(4 -clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina-l-carboxílico, que se prepara mediante una reacción de copulación de Mitsunobu. Por ejemplo, el éster se puede preparar al disolver t-butil éster del ácido (S) -3- ( (R) -l-hidroxi-2-metilpropil) pirrolidina-l-carboxílico (1.0 eq.) , p-clorofenol (2.0 eq. ) , y un catalizador de fosfina tal como trifenilfosfina (1.1 eq.) en un solvente adecuado, seguido de la adición de un azodicarboxilato tal como diisopropil azodicarboxilato o dietil azodicarboxilato.

En una forma de realización, la sal clorhidrato cristalina de la invención se puede preparar al a) tratar una sal clorhidrato de (S) -3- [ (S) -1- (4 -clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina con un solvente polar para completar la disolución y formar una primera composición, y b) agregar un solvente no polar para formar úna segunda composición a partir de la cual se forma la sal clorhidrato cristalina. El solvente polar es típicamente un solvente prótico tal como metanol, etanol, propanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, etilenglicol , agua, ácido acético, ácido fórmico, y similares. En una forma de realización particular, el solvente polar es isopropanol. Por lo general, la disolución se realiza a una temperatura elevada que oscila entre 30 °C y 70 °C; por ejemplo, a una temperatura que oscila entre aproximadamente 50 °C y 60 °C. En una forma de realización, la solución se calienta a una temperatura de. aproximadamente 55 °C.

En otra forma de realización, la sal clorhidrato cristalina de la invención se puede preparar al a) desproteger t-butil éster del ácido (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina-l-carboxílico con ácido clorhídrico en un diluyente inerte para completar la disolución y formar una primera composición, y b) agregar un solvente no polar para formar una segunda composición a partir de la cual se forma la sal clorhidrato cristalina. En una forma de realización, la desprotección se realiza con HCl 3 y el diluyente inerte es ciclopentil metil éter. Por lo general, la disolución se realiza a temperatura ambiente .

Los solventes no polares adecuados para uso en el paso (b) del proceso de la invención incluyen, a modo de ilustración mas no de limitación: pentano, ciclopentano, hexano, ciclohexano, benceno, tolueno, 1,4-dioxano, cloroformo, tetracloruro de carbono, dietil éter, . diisopropil éter y dibutil éter, y similares. En una forma de realización, el solvente no polar es diisopropil éter. La solución se enfría entonces opcionalmente para formar el compuesto cristalino de la invención. En una forma de realización particular, la solución se enfría hasta aproximadamente 15-30 °C y, en otra forma de realización, a una temperatura aproximada a la temperatura ambiente. Después de un lapso adecuado de tiempo, se observarán los cristales. En una forma de realización, los cristales se observan después de un período de varias horas y, en una forma de realización, después de un período de aproximadamente 1-3 horas. Una vez que se observan los cristales, es posible reducir el volumen del licor madre, así como aislar y secar los cristales, por ejemplo, aislarlos mediante filtración y secarlos bajo vacío. En una forma de realización, una vez que se observan los cristales, los cristales se dejan desarrollar durante un período de aproximadamente 0.5-3 horas antes del aislamiento .

En otra forma de realización, durante el paso de enfriamiento, la solución se siembra con cristales de sal clorhidrato previamente formados. Dichos cristales semilla se pueden producir al calentar la sal clorhidrato en un solvente polar, luego enfriar la solución en presencia de un solvente no polar, tal como se describió con anterioridad.

PROPIEDADES CRISTALINAS Entre otras ventajas, se ha descubierto que la formación de una sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina es útil para purificar el compuesto en sí mismo. Por ejemplo, la sal clorhidrato cristalina de la invención tiene una pureza de aproximadamente 99%.

Tal como es ampliamente conocido en el campo de la difracción de rayos X en polvos, las alturas de los picos relativas de los espectros de la PXRD dependen de un número de factores que se relacionan con la preparación de las muestras y la geometría de los instrumentos, mientras que las posiciones de los picos son relativamente insensibles a los detalles experimentales. Un patrón de PXRD se obtuvo tal como se establece en el Ejemplo 2. Por lo tanto, en una forma de realización, el compuesto cristalino de la invención se caracteriza por un patrón de PXRD que tiene ciertas posiciones de los picos.

El compuesto cristalino se caracteriza por un patrón de PXRD en el cual las posiciones de los picos concuerdan sustancialmente con las ilustradas en la Figura 1. Esos picos se listan a continuación, en el orden de intensidad relativa descendiente. Todas las intensidades de los picos de PXRD se corrigieron al sustraer la correspondiente intensidad fondo para cada pico.

Por ende, en una forma de realización, el compuesto cristalino se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvos (PXRD) que comprende picos de difracción a valores 2T de 8.7810.20, 15.26+0.20, 19.0810.20, 20.3610.20, 21.50±0.20, y 25.46±0.20; y además se caracteriza por tener uno o más picos de difracción adicionales a valores 2T seleccionados entre 26.42+0.20, 30.65±0.20, 28.91±0.20, 24.77±0.20, 14.42±0.20, 16.74±0.20, y 5.20±0.20.

Una traza de calorimetría diferencial de barrido (DSC) se obtuvo tal como se establece en el Ejemplo 3. Por ende, en una forma de realización, el compuesto cristalino se caracteriza por su termograma de DSC. En una forma de realización, el compuesto cristalino se caracteriza por un termograma de DSC que muestra un punto de fusión de aproximadamente 128 °C, sin una descomposición térmica significativa debajo de aproximadamente 200 °C, tal como se observa en la Figura 2.

El análisis termogravimétrico (TGA) se realizó sobre el compuesto cristalino según se describe en el Ejemplo 3. De esta manera, en una forma de realización, el compuesto cristalino se caracteriza por su traza de TGA. En una forma de realización, el compuesto cristalino se caracteriza por una traza de TGA que no muestra ninguna cantidad significativa de pérdida de peso (que es consistente con la pérdida de humedad residual o solvente) a temperaturas inferiores a aproximadamente 200 °C, tal como se observa en la Figura 3.

Se ha demostrado que el compuesto cristalino de la invención tiene un perfil de sorción/desorción reversible con niveles aceptables de higroscopicidad . Por ejemplo, el compuesto cristalino tiene higroscopicidad insignificante, y ha exhibido menos de aproximadamente 1.0% de ganancia de peso cuando se expuso a un valor de hasta 85% de humedad relativa, tal como se observa en la Figura 4.

Estas propiedades del compuesto cristalino de la invención se ilustran en mayor detalle en los Ejemplos que siguen.

UTILIDAD La (S) -3- [ (S) -1- (4 -clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina posee actividad inhibitoria de la recaptación de la serotonina y la norepinefriña . Por esta razón, se espera que este compuesto, así como también el compuesto cristalino de la invención, tenga utilidad terapéutica como inhibidor de la recaptación de la serotonina y la norepinefriña (SNRI, del inglés Serotonin And Norepinephrine Reuptake Inhibí tor) en forma combinada.

La constante de inhibición (? ) de un compuesto es la concentración de ligando en un ensayo de inhibición de unión de radioligandos que ocuparía el 50% de los transportadores, si ningún radioligando estuviera presente. Los valores Ki se pueden determinar a partir de estudios de unión de radioligandos con 3H-nisoxetina (para el transportador de la norepinefriña, NET) y 3H-citalopram (para el transportador de la serotonina, SERT) , según se describe en el Ensayo 1. Estos valores ¾ derivan de valores IC50 en el ensayo de unión usando la ecuación de Cheng-Prusoff y del radioligando (Cheng & Prusoff (1973) Biochem. Pharmacol. 22(23) :3099-3108) . Los valores IC50 funcionales se pueden determinar en los ensayos de inhibición de la recaptación funcionales descritos en el Ensayo 2. Estos valores IC50 se pueden convertir en valores Ki usando la ecuación de Cheng-Prusoff y Km del transmisor para el transportador. Se advierte, no obstante, que las condiciones de los ensayos de recaptación descritos en el Ensayo 2 son tales que los valores IC50 están muy próximos a los valores Ki -si se deseara una conversación matemática- ya que la concentración de neurotransmisor (5-HT, NE, o DA) usada en el ensayo está bien por debajo de su m para el respectivo transportador.

Los ensayos de ejemplo para determinar la actividad inhibitoria de la recaptación de la serotonina y/o la norepinefriña de los compuestos de la invención incluyen, a modo de ilustración mas no de limitación, ensayos que miden la unión de SERT y NET, por ejemplo, según se describe en el Ensayo 1 y en Tsuruda y colaboradores (2010), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods 61 (2) : 192-20 . Asimismo, es útil entender el nivel de unión y recaptación de DAT en un ensayo tal como el descrito en el Ensayo 1. Los ensayos secundarios útiles incluyen ensayos de recaptación de neurotransmisores para medir la inhibición de la recaptación de la serotonina y la norepinefriña en células que expresan el respectivo transportador recombinante de humano o rata (hSERT, hNET, o hDAT) según se describe en el Ensayo 2, y los ensayos de recaptación de neurotransmisores y unión de radioligandos ex vivo que se usan para determinar la ocupación in vivo de SERT, NET y DAT en el tejido, tal como se describe en el Ensayo 3. Otros ensayos que son útiles para evaluar las propiedades f rmacológicas de los compuestos de evaluación incluyen los listados en el Ensayo 4. Los ensayos in vivo de ejemplo incluyen la prueba de inyección intraplantar de formol descrita en el Ensayo 5, que es un indicador confiable de la eficacia clínica para el tratamiento de dolor neuropático, y el modelo de ligadura de los nervios espinales descrito en el Ensayo 6. Los ensayos mencionados con anterioridad sirven para determinar la utilidad terapéutica -por ejemplo, la actividad de alivio del dolor neuropático- de los compuestos de la invención. Otras propiedades y utilidades de los compuestos de la invención se pueden demostrar usando varios ensayos in vitro e in vivo ampliamente conocidos para las personas versadas en el arte.

Se espera que el compuesto cristalino de la invención sea útil para el tratamiento y/o la prevención de condiciones médicas en las cuales participa la regulación de la función de los transportadores de monoaminas; en particular, aquellas condiciones mediadas por, o que responden a, la inhibición de la recaptación de la serotonina y la norepinefriña . Por ende, se espera que los pacientes que padecen una enfermedad o un trastorno que se trata mediante la inhibición del transportador de la serotonina y/o la norepinefriña se puedan tratar por medio de la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención. Dichas condiciones médicas incluyen, a modo de ejemplo, trastornos de dolor tales como dolor neuropático, fibromialgia y dolor crónico, trastornos depresivos tales como depresión mayor, trastornos afectivos tales como un trastorno de ansiedad, trastorno de déficit de atención con hiperactividad, trastornos cognitivos tales como demencia, e incontinencia urinaria por estrés.

La cantidad de agente activo administrada por dosis, o la cantidad total administrada por día puede ser predeterminada o puede ser determinada basándose en un paciente individual teniendo en consideración numerosos factores, con inclusión de la naturaleza y severidad de la condición del paciente, la condición que se trata, la edad, el peso, y la salud general del paciente, la tolerancia del paciente al agente activo, la vía de administración, las consideraciones farmacológicas tales como la actividad, la eficacia, la farmacocinética y los perfiles toxicológicos del agente activo y cualesquiera agentes secundarios que se están administrando, y similares. El tratamiento de un paciente que padece una enfermedad o condición médica (tal como dolor neuropático) puede comenzar con un régimen de dosificación predeterminado o un régimen de dosificación determinado por el médico a cargo, y continuará durante un período de tiempo necesario para prevenir, mejorar, suprimir o aliviar los síntomas de la enfermedad o condición médica. Los pacientes que se someten a dicho tratamiento típicamente serán monitoreados de manera rutinaria para determinar la efectividad de la terapia. Por ejemplo, al tratar el dolor neuropático, una medida de la efectividad del tratamiento puede implicar la evaluación de la calidad de vida del paciente; por ej . , mejoras en los patrones del sueño del paciente, asistencia al trabajo, habilidad para hacer ejercicio y desplazarse en forma ambulatoria, etc. Las escalas del dolor, que operan sobre una base puntual, también se pueden usar para ayudar a evaluar el nivel de dolor de un paciente. Los indicadores de otras enfermedades y condiciones descritas en la presente son ampliamente conocidos por las personas versadas en el arte, y se encuentran fácilmente disponibles para el médico a cargo. El monitoreo continuo por parte del médico asegurará que se administre la cantidad de agente activo óptima en cualquier momento determinado, como así también facilitará la determinación de la duración del tratamiento. Esto tiene particular valor cuando también se están administrando agentes secundarios, ya que su selección, dosificación y duración de terapia también pueden necesitar un ajuste. De esta manera, el régimen de tratamiento y el plan de dosificación se pueden ajustar en el transcurso de la terapia de tal manera que se administre la menor cantidad de agente activo que exhiba la efectividad deseada y, además, que la administración continúe solamente el tiempo necesario para tratar con éxito la enfermedad o condición médica.

Trastornos de dolor Se ha demostrado que los SNRIs tienen un efecto beneficioso sobre el dolor tal como neuropatía diabética dolorosa (duloxetina, Goldstein y colaboradores (2005) Pain 116:109-118; venlafaxina, Rowbotham y colaboradores (2004) Pain 110:697-706), fibromialgia (duloxetina, Russell y colaboradores (2008) Pain 136 (3) :432-44 ; milnaciprán, Vitton. y colaboradores (2004) Human Psychopharmacology 19:S27-S35), y migraña (venlafaxina, Ozyalcin y colaboradores (2005) Headache 45 (2) : 144-152) . Por ende, una forma de realización de la invención se refiere a un método para tratar un trastorno de dolor, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención. Típicamente, la cantidad terapéuticamente efectiva es la cantidad que es suficiente para aliviar el dolor. Los trastornos de dolor de ejemplo incluyen, a modo de ilustración: dolor agudo, dolor persistente, dolor crónico, dolor inflamatorio y dolor neuropático. Más específicamente, estos incluyen dolor asociado con, o causado por: artritis; dolor de espalda, con inclusión de lumbalgia crónica; cáncer, con inclusión de dolor relacionado con tumores (por ej . , dolor de huesos, dolor de cabeza, dolor facial o dolor visceral) y dolor asociado con la terapia contra el cáncer (por ej . , síndrome post-quimioterapia, síndrome de dolor post-quirúrgico crónico y síndrome post-radiación) ; síndrome del túnel carpiano; fibromialgia; dolores de cabeza, con inclusión de dolor de cabeza por tensión crónica; inflamación asociada con polimialgia, artritis reumatoidea y osteoartritis ; migraña; dolor neuropático, con inclusión de síndrome de dolor regional complejo; dolor generalizado; dolor post-operatorio; dolor de hombros; síndromes de dolores centrales, con inclusión de dolor post-infarto, y dolor asociado con lesiones del cordón espinal y esclerosis múltiple; dolor de miembro fantasma; dolor asociado con enfermedad de Parkinson; y dolor visceral (por ej . , síndrome del colon irritable) . Es de particular interés el tratamiento del dolor neuropático, que incluye neuropatía diabética periférica (DPN, del inglés Diabetic Peripheral Neuropathy) , neuropatía relacionada con VIH, neuralgia post-herpética (PHN, del inglés Post-Herpetic Neuralgia) , y neuropatía periférica inducida por quimioterapia. Cuando se usan para tratar trastornos de dolor -tales como dolor neuropático- los compuestos de la invención se pueden administrar en combinación con otros agentes terapéuticos, con inclusión de anticonvulsivos, antidepresivos, relajantes musculares, agentes antiinflamatorios no esteroideos (NSAID, del inglés non-Steroidal Anti-Inflammatory Agents) , agonistas opioides, antagonistas opioides, inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina, bloqueadores de los canales de sodio, y simpaticolíticos . Los compuestos de ejemplo dentro de estas clases están descritos en la presente.

Trastornos depresivos Otra forma de realización de la invención se refiere a un método para tratar un trastorno depresivo, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención. Típicamente, la cantidad terapéuticamente efectiva será la cantidad que es suficiente para aliviar la depresión y proveer una sensación de bienestar general. Los trastornos depresivos de ejemplo incluyen, a modo de ilustración mas no de limitación: depresión asociada con enfermedad de Alzheimer, trastorno bipolar, cáncer, abuso infantil, infertilidad, enfermedad de Parkinson, depresión post- infarto del miocardio, y psicosis; distimia; síndrome del hombre anciano irritable o quejoso; depresión inducida; depresión mayor; depresión pediátrica; depresión post-menopáusica; depresión post -parto; depresión recurrente; depresión con episodio único; y depresión sintomática subsindromal . Es de particular interés el tratamiento de la depresión mayor. Cuando se usan para tratar trastornos depresivos, los compuestos de la invención se pueden administrar en combinación con otros agentes terapéuticos, con inclusión de antidepresivos e inhibidores de la recaptación de serotonina-norepinefriña duales. Los compuestos de ejemplo dentro de estas clases están descritos en la presente.

Trastornos afectivos Otra forma de realización de la invención se refiere a un método para tratar un trastorno afectivo, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención. Los trastornos afectivos de ejemplo incluyen, a modo de ilustración mas no de limitación: trastornos de la ansiedad tal como trastorno de la ansiedad general; trastorno de la personalidad evasiva; trastornos de la alimentación tales como anorexia nerviosa, bulimia nerviosa y obesidad; trastorno obsesivo compulsivo; trastorno de pánico; trastornos de la personalidad tales como trastorno de la personalidad evasiva y trastorno por déficit de atención con hiperactividad (ADHD, del inglés Attention Déficit Hyperactivity Disorder) ; síndrome de estrés post-traumático; fobias tales como agorafobia, así como también fobias simples y otras fobias específicas, y fobia social; síndrome premenstrual; trastornos sicóticos, tales como esquizofrenia y manía; trastorno afectivo estacional; disfunción sexual, con inclusión de eyaculación precoz, impotencia masculina, y disfunción sexual femenina tal como trastorno de excitación sexual femenina; trastorno de la ansiedad social; y trastornos por abuso de sustancias, con inclusión de dependencias químicas tales como adicciones al alcohol, benzodiazepinas, cocaína, heroína, nicotina y fenobarbitúricos , así como también los síndromes por abstinencia que pueden desprenderse de estas dependencias. Cuando se usan para tratar trastornos afectivos, los compuestos de la invención se pueden administrar en combinación con otros agentes terapéuticos, inclusive antidepresivos. Los compuestos de ejemplo dentro de estas clases están descritos en la presente.

La atomoxetina -que es selectiva de NET con una superioridad de diez veces- está aprobada para la terapia para el trastorno por déficit de atención con hiperactividad (ADHD) , y los estudios clínicos han demostrado que el SNRI, venlafaxina, también tiene un efecto beneficioso para tratar ADHD (Mukaddes y colaboradores (2002) Eur. Neuropsych.opha.rm. 12 (Sup 3) :421) . Por ende, también se espera que el compuesto cristalino de la invención sea útil en los métodos para tratar el trastorno por déficit de atención con hiperactividad al administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención. Cuando se usa para tratar depresión, el compuesto cristalino de la invención se puede administrar' en combinación con otros agentes terapéuticos, inclusive antidepresivos. Los compuestos de ejemplo dentro de estas clases se describen en la presente.

Trastornos cognitivos Otra forma de realización de la invención se refiere a un método para tratar un trastorno cognitivo, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención. Los trastornos cognitivos de ejemplo incluyen, a modo de ilustración mas no de limitación: demencia, que incluye demencia degenerativa (por ej . , enfermedad de Alzheimer, enfermedad Creutzfeldt-Jakob, corea de Huntingdon, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Pick, y demencia senil) , demencia vascular (por ej . , demencia multi-infarto) , y demencia asociada con lesiones que ocupan los espacios intracraneales, trauma, infecciones y condiciones relacionadas (con inclusión de infección por VIH), deficiencia metabólica, por toxinas, anoxia y deficiencia de vitaminas; e insuficiencia cognitiva leve asociada con la vejez, pérdida de la memoria asociada con la edad, trastorno amnésico y reducción cognitiva asociada con la edad. Cuando se usa para tratar trastornos cognitivos, el compuesto cristalino de la invención se puede administrar en combinación con otros agentes terapéuticos, con inclusión de agentes anti-AÍzheimer y agentes anti-Parkinson. Los compuestos de ejemplo dentro de estas clases se describen en la presente.

Otros Trastornos También se ha demostrado que los SNRI son efectivos para el tratamiento de incontinencia urinaria por estrés (Dmochowski (2003) Journal of Urology 170(4): 1259-1263). Por ende, otra forma de realización de la invención se refiere a un método para tratar incontinencia urinaria por estrés, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención. Cuando se usan para tratar incontinencia urinaria por estrés, los compuestos de la invención se pueden administrar en combinación con otros agentes terapéuticos, inclusive anticonvulsivos. Los compuestos de ejemplo dentro de estas clases se describen en la presente.

La duloxetina, un SNRI, está siendo sometida a ensayos clínicos para evaluar su eficacia para tratar síndrome de fatiga crónica, y recientemente se ha demostrado que es efectiva para tratar fibromialgia (Russell y colaboradores (2008) Pain 136 ( 3 ) : 432 -444 ) . También se espera que el compuesto cristalino de la invención tenga esta utilidad, debido a su habilidad esperada de inhibir SERT y NET, y otra forma de realización de la invención se refiere a un método para tratar síndrome de fatiga crónica, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención.

Se ha demostrado que la sibutramina, un inhibidor de la recaptación de la norepinefriña y la dopamina, es útil para tratar obesidad (Wirth y colaboradores (2001) JAMA 286 (11) : 1331-1339) . También se espera que el compuesto cristalino de la invención tenga esta utilidad, debido a su habilidad esperada de inhibir NET, y otra forma de realización de la invención se refiere a un método para tratar obesidad, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención.

Se ha demostrado que la desvenlafaxina, un SNRI , mejora los síntomas vasomotores asociados con menopausia (Deecher y colaboradores (2007) Endocrinology 148 (3 ): 1376 -1383 ) . También se espera que el compuesto cristalino de la invención tenga esta utilidad, debido a su habilidad esperada de inhibir SERT y NET, y otra forma de realización de la invención se refiere a un método para tratar síntomas vasomotores asociados con la menopausia, que comprende administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención.

Herramientas de investigación Ya que se espera que el compuesto cristalino de la invención posea tanto actividad de inhibición de la recaptación de la serotonina como actividad de inhibición de la recaptación de la norepinefriña, también se espera que este compuesto encuentre utilidad como una herramienta de investigación para estudiar o investigar muestras o sistemas biológicos que tienen transportadores de serotonina o norepinefriña . Cualquier muestra o sistema biológico adecuado que tiene transportadores de serotonina y/o norepinefriña puede ser empleado en dichos estudios, lo cuales pueden llevarse a cabo ya sea in vitro o bien in vivo. Las muestras o sistemas biológicos representativos adecuados para dichos estudios incluyen, mas no se limitan a: células, extractos celulares, membranas plasmáticas, muestras de tejidos, órganos aislados, mamíferos (tales como ratones, ratas, cobayos, conejos, perros, cerdos, humanos y demás), y similares, en donde los mamíferos son de particular interés. En una forma de realización particular de la invención, la recaptación de la serotonina en un mamífero es inhibida al administrar una cantidad que inhibe la recaptación de la serotonina del compuesto cristalino de la invención. En otra forma de realización particular, la recaptación de la norepinefriña en un mamífero es inhibida al administrar una cantidad que inhibe la recaptación de la norepinefriña del compuesto cristalino de la invención. El compuesto cristalino de la invención también se puede usar como herramienta de investigación al realizar ensayos biológicos usando dicho compuesto.

Cuando se usa como herramienta de investigación, típicamente se pone en contacto una muestra o sistema biológico que comprende un transportador de serotonina y/o un transportador de norepinefriña con una cantidad que inhibe la recaptación de la serotonina o una cantidad que inhibe la recaptación de la norepinefriña del compuesto cristalino de la invención. Una vez que la muestra o sistema biológico se expone al compuesto, los efectos de inhibir la recaptación de la serotonina y/o la recaptación de la norepinefriña se determinan usando procedimientos y equipos convencionales. La exposición conlleva poner en contacto las células o el tejido con el compuesto, administrar el compuesto a un mamífero, por ejemplo mediante administración i.p. o i.v., y así sucesivamente. Este paso de determinación puede comprender medir una respuesta, es decir, un análisis cuantitativo, o puede comprender una observación, es decir, un análisis cualitativo. La medición de una respuesta implica, por ejemplo, determinar los efectos del compuesto sobre la muestra o sistema biológico usando procedimientos y equipos convencionales, tales como ensayos de la recaptación de serotonina y norepinefriña . Los resultados de los ensayos se pueden usar para determinar el nivel de actividad así como también la cantidad de compuesto necesaria para alcanzar el resultado deseado, es decir, una cantidad que inhibe la recaptación de la serotonina y una cantidad que inhibe la recaptación de la norepinefriña .

Además, el compuesto cristalino de la invención se puede usar como herramienta de investigación para evaluar otros compuestos químicos, y por ende también es útil en ensayos de detección para descubrir, por ejemplo, nuevos compuestos que tienen tanto actividad inhibitoria de la recaptación de la serotonina como actividad inhibitoria de la recaptación de la norepinefriña . De esta manera, el compuesto cristalino de la invención se usa como estándar en un ensayo para permitir la comparación de los resultados obtenidos con un compuesto de evaluación y con el compuesto cristalino de la invención para identificar aquellos compuestos de evaluación que tienen actividad inhibitoria de la recaptación aproximadamente igual o superior, si es que la tienen. Por ejemplo, los datos de la recaptación para un compuesto de evaluación o un grupo de compuestos de evaluación se comparan con los datos de recaptación para el compuesto cristalino de la invención a fin de identificar aquellos compuestos de evaluación que tienen las propiedades deseadas, por ej . , los compuestos de evaluación que tienen actividad inhibitoria de la recaptación aproximadamente igual o superior al compuesto cristalino de la invención, si es que la tienen. Este aspecto de la invención incluye, como formas de realización separadas, tanto la generación de los datos de comparación (usando los ensayos apropiados) como el análisis de los datos de evaluación para identificar compuestos de evaluación de interés. Por ende, un compuesto de evaluación puede ser evaluado en un ensayo biológico, mediante un método que comprende los pasos de: (a) llevar a cabo un ensayo biológico con un compuesto de evaluación a fin de proveer un primer valor de ensayo; (b) efectuar el ensayo biológico con el compuesto cristalino de la invención a fin de brindar un segundo valor de ensayo; en donde el paso (a) se realiza ya sea antes, después o junto con el paso (b) ; y (c) comparar el primer valor de ensayo del paso (a) con el segundo valor de ensayo del paso (b) . Los ensayos biológicos de ejemplo incluyen ensayos de recaptación de la serotonina y la norepinefriña .

COMPOSICIONES Y FORMULACIONES FARMACÉUTICAS El compuesto cristalino de la invención se administra típicamente a un paciente en forma de ' composición o formulación farmacéutica. Dichas composiciones farmacéuticas se pueden administrar al paciente mediante cualquier vía de administración aceptable que incluye, mas no se limita a: modo de administración oral, rectal, vaginal, nasal, inhalada, tópica (con inclusión de transdérmica) y parenteral . No obstante, las personas versadas en el arte han de entender que, una vez que el compuesto cristalino de la invención haya sido formulado, puede ya no estar en forma cristalina; es decir, puede disolverse en un portador adecuado. Asimismo, el compuesto cristalino de la invención se puede administrar, por ejemplo oralmente, en múltiples dosis al día (por ej . , dos veces, tres veces o cuatro veces al día) , en una única dosis diaria, en una dosis dos veces por día, en una única dosis semanal, y así sucesivamente.

Por consiguiente, en una forma de realización, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y el compuesto cristalino de la invención. Las composiciones pueden contener otros agentes terapéuticos y/o agentes de formulación, si se desea. Cuando se mencionan las composiciones, el "compuesto cristalino de la invención" también puede aludirse en la presente como el "agente activo" , para distinguirlo de los otros componentes de la formulación, tal como el portador.

Las composiciones farmacéuticas de la invención típicamente contienen una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto cristalino de la invención. Las personas versadas en el arte reconocerán, no obstante, que una composición farmacéutica puede contener más que una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir, composiciones volumétricas, o menos que una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir, dosis unitarias individuales diseñadas para administración múltiple a fin de alcanzar una cantidad terapéuticamente efectiva. Típicamente, la composición contiene desde aproximadamente 0.01 hasta 95% en peso del agente activo; inclusive, desde aproximadamente 0.01 hasta 30% en peso, tal como desde aproximadamente 0.01 hasta 10% en peso, en donde la cantidad real depende de la formulación propiamente dicha, la vía de administración, la frecuencia de dosificación, etc. En una forma de realización, una composición adecuada para una forma de dosis oral, por ejemplo, puede contener entre aproximadamente 5 y 70% en peso, o entre aproximadamente 10 y 60% en peso de agente activo. En una forma de realización de ejemplo, una composición farmacéutica contiene desde aproximadamente 1 hasta 20 mg de agente activo, inclusive desde aproximadamente 1 hasta 15 mg de agente activo, y desde aproximadamente 1 hasta 10 mg de agente activo. En otra forma de realización de ejemplo, una' composición farmacéutica contiene desde aproximadamente 5 hasta 20 mg de agente activo, inclusive desde aproximadamente 7.5 hasta 15 mg de agente activo. Por ejemplo, el agente activo puede ser formulado en dosis unitarias de 1 mg y 10 mg.

Es posible utilizar cualquier portador o excipiente convencional en las composiciones farmacéuticas de la invención. La elección de un portador o excipiente particular, o las combinaciones de portadores o excipientes, dependerá del modo de administración que se está usando para tratar un paciente particular o tipo de condición médica o estado de enfermedad. Al respecto, la preparación de una composición adecuada para un modo de administración particular se encuentra en gran medida dentro del alcance de las personas versadas en las artes farmacéuticas. Asimismo, los portadores o excipientes usados en dichas composiciones se encuentran disponibles a nivel comercial. A modo de ilustración adicional, las técnicas de formulación convencionales se describen en Remington: The Science and Practice de Pharmacy, 20ma Edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); y H. C. Ansel y colaboradores, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7ma Edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999) .

Los ejemplos representativos de los materiales que pueden servir como portadores farmacéuticamente aceptables incluyen, mas no se limitan a, los siguientes: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón . de papa; celulosa, tal como celulosa microcristalina, y sus derivados, tales como carboximetil celulosa de sodio, etil celulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras de supositorios; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja glicoles, tales como propilenglicol ; polioles, tales como glicerina, sorbítol, manitol y polietilenglicol ; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tampón o buffer, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógeno; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones tampón de fosfato; gases propelentes comprimidos, tales como clorofluorocarbonos e hidrofluorocarbonos ; y otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en composiciones farmacéuticas .

Las composiciones farmacéuticas se preparan típicamente al mezclar o combinar completa e íntimamente el agente activo con un portador farmacéuticamente aceptable y uno o más ingredientes opcionales. La mezcla combinada en forma uniforme resultante puede luego ser modelada o cargada en comprimidos, cápsulas, pildoras, cartuchos, tubos, dispensadores y similares, usando procedimientos y equipos convencionales .

En una forma de realización, las composiciones farmacéuticas son adecuadas para administración oral. Un régimen de dosificación de ejemplo sería una forma de dosis oral administrada una o dos veces por día. Las composiciones para administración oral pueden estar en forma de cápsulas, comprimidos, pildoras, pastillas, obleas, grageas, polvos, granulos; soluciones o suspensiones en un líquido acuoso o no acuoso; emulsiones líquidas agua en aceite o aceite en agua; elíxires o jarabes; y similares; cada uno con una cantidad predeterminada del agente activo.

Cuando se destina a administración oral en forma de dosis sólidas (es decir, como cápsulas, comprimidos, pildoras, y similares) , la composición típicamente comprende el agente activo y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, tales como citrato sódico o fosfato dicálcico.

Las formas de dosis sólidas también pueden comprender también pueden comprender: rellenos o agentes de extensión, tales como almidones, celulosa microcristalina, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; agentes aglutinantes, tales como carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarosa y/o acacia; humectantes, tales como glicerol; agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de papa o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos y/o carbonato de sodio; agentes retardadores de solución, tales como parafina; aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes de humedecimiento, tales como alcohol cetílico y/o monoestearato de glicerol; agentes absorbentes, tales como caolín y/o arcilla bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio, y/o mezclas de los mismos; agentes colorantes; y agentes tampón.

Los agentes de liberación, agentes de humedecimiento, agentes de revestimiento, edulcorantes, saborizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes también pueden estar presentes en las composiciones farmacéuticas. Los agentes de revestimiento de ejemplo para comprimidos, cápsulas, pildoras y similares, incluyen los usados para revestimientos entéricos, tales como acetato ftalato de celulosa, acetato ftalato de polivinilo, ftalato de hidroxipropil metilcelulosa, copolímeros de ácido metacrílico y éster del ácido metacrílico, acetato trimelitato de celulosa, carboximetil etil celulosa, acetato succinato de hidroxipropil metil celulosa, y similares. Los ejemplos de los antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfato de sodio, sulfito de sodio, y similares; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol , y similares; y agentes quelantes de metal, tales como ácido cítrico, ácido etilenediaminotetraacético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, y similares.

Las composiciones también pueden formularse para proveer la liberación lenta o controlada del agente activo usando, a modo de ejemplo, hidroxipropil metil celulosa en diversas proporciones u otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas . Además, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden contener agentes opacificantes y pueden estar formuladas de tal manera que liberan solamente el agente activo, o preferentemente, en una cierta porción del tracto gastrointestinal, opcionalmente , de manera retardada.

Los ejemplos de composiciones de incorporación que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. El agente activo también puede estar en forma microencapsulada, de ser apropiado, con uno o más de los excipientes descritos con anterioridad.

Las formas de dosis líquidas adecuadas para administración oral incluyen, a modo de ilustración, emulsiones, microemulsiones , soluciones, suspensiones, jarabes y elíxires farmacéuticamente aceptables. Las formas de dosis líquidas típicamente comprenden el agente activo y un diluyente inerte, tal como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol , 1 , 3 -butilenglicol , aceites (por ej . , aceite de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen de trigo, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurilo, polietilenglicoles y ésteres de ácido graso de sorbitán, y mezclas de los mismos. Las suspensiones pueden contener agentes de suspensión tales como, por ejemplo, alcoholes isoestearílieos etoxilados, polioxietilén sorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos .

Cuando se destinan a administración oral, las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden envasar en una forma de dosis unitaria. El término "forma de dosis unitaria" se refiere a una unidad físicamente discreta adecuada para la dosificación a un paciente es decir, cada unidad contiene una cantidad predeterminada del agente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado ya sea en forma individual o en combinación con una o más unidades adicionales. Por ejemplo, dichas formas de dosis unitarias pueden ser cápsulas, comprimidos, pildoras, y similares.

En otra forma de realización., las composiciones de la invención son adecuadas para administración por inhalación, y típicamente se encuentran en forma de aerosol o polvo. Dichas composiciones por lo general se administran usando dispositivos de suministro ampliamente conocidos, tales como un nebulizador, inhalador de polvo seco o inhalador de dosis medidas. Los dispositivos nebulizadores producen una corriente de aire de alta velocidad que causa que la composición se pulverice como una bruma que es llevada a las vías respiratorias de un paciente. Una formulación para nebulizar de ejemplo comprende el agente activo disuelto en un portador para formar una solución, o micronizado y combinado con un portador para formar una suspensión de partículas micronizadas de tamaño respirable. Los inhaladores de polvo seco administran el agente activo como polvo de flujo libre que se dispersa en el torrente de aire del paciente durante la inspiración. Una formulación en polvo seco de ejemplo comprende el agente activo combinado en seco con un excipiente tal como lactosa, almidón, manitol, dextrosa, ácido poliláctico, poliláctido-co-glicólido, y combinaciones de los mismos. Los inhaladores de dosis medidas descargan una cantidad medida del agente activo usando gas propelente comprimido. Una formulación de dosis medidas de ejemplo comprende una solución o suspensión del agente activo en un propelente licuado, tal como un clorofluorocarbono o hidrof luoroalcano . Los componentes opcionales de dichas formulaciones incluyen co- solventes , tales como etanol o pentano, y agentes tensoactivos , tales como trioleato de sorbitán, ácido oleico, lecitina y glicerina. Dichas composiciones son preparadas típicamente al agregar hidrof luoroalcano helado o presurizado a un recipiente adecuado que contiene el agente activo, etanol (de estar presente) y el agente tensoactivo (de estar presente) . Para preparar una suspensión, el agente activo es micronizado y luego combinado con el propelente. En forma alternativa, una formulación en suspensión se puede preparar al secar por aspersión un revestimiento de agente tensoactivo sobre las partículas micronizadas del agente activo. La formulación luego se carga en un cartucho de aerosol, que forma una porción del inhalador.

El compuesto cristalino de la invención también se puede administrar en forma parenteral (por ej . , mediante inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular o intraperitoneal ) . Para dicha administración, el agente activo se provee en una solución, suspensión o emulsión estéril. Los solventes de ejemplo para preparar dichas formulaciones incluyen agua, solución salina, alcoholes de bajo peso molecular tales como propilenglicol , polietilenglicol, aceites, gelatina, esteres de ácidos grasos tales como oleato de etilo, y similares. Una típica formulación parenteral es una solución acuosa estéril con un pH de 4 a 7 del agente activo. Las formulaciones parenterales también pueden contener uno o más agentes solubilizantes , estabilizadores, conservantes, agentes de humedecimiento, emulsionantes y agentes dispersantes. Estas formulaciones se pueden tornar estériles mediante el uso de un medio inyectable estéril, un agente de esterilización, filtración, irradiación, o calor.

El compuesto cristalino de la invención también se puede administrar por vía transdérmica usando excipientes y sistemas de suministro transdérmico conocidos. Por ejemplo, el compuesto se puede mezclar con agentes potenciadores de la permeación, tales como propilenglicol, polietilenglicol monolaurato, azacicloalcan-2 -onas , y similares, e incorporarse en un parche o sistema de suministro similar. Los excipientes adicionales que incluyen agentes gelificantes , emulsionantes y tampones, se pueden usar en dichas composiciones transdérmicas , si se desea.

De ser deseado, el compuesto cristalino de la invención se puede administrar en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales. Por ende, en una forma de realización, las composiciones de la invención pueden contener, opcionalmente, otras drogas que son coadministradas con el compuesto cristalino de la invención. Por ejemplo, la composición puede comprender, además, una o más drogas (también conocidas como "agente/s secundario/s" ) seleccionadas del grupo de agentes anti-Alzheimer, anticonvulsivos (antiepilépticos), antidepresivos, agentes anti-Parkinson, inhibidores de la recaptación de la serotonina-norepinefriña (SNRI) duales, agentes antiinflamatorios no esteroideos (NSAID) , inhibidores de la recaptación de la norepinefriña, agonistas opioides (analgésicos opioides) , antagonistas opioides, inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina, bloqueadores de los canales de sodio, simpaticolíticos , y combinaciones de los mismos. En el arte se conocen numerosos ejemplos de dichos agentes terapéuticos; ejemplos que son descritos en la presente. Al combinar el compuesto cristalino de la invención con un agente secundario, se puede alcanzar la terapia triple; es decir, la actividad inhibitoria de la recaptación de la serotonina, la actividad inhibitoria de la recaptación de la norepinefriña, y la actividad asociada con el agente secundario (por ej . , actividad antidepresiva) , usando solamente dos componentes activos. Como las composiciones farmacéuticas que contienen dos componentes activos son típicamente más fáciles de formular que las composiciones que contienen tres componentes activos, dichas composiciones con dos componentes proveen una ventaja significativa por sobre las composiciones que contienen tres componentes activos. Por consiguiente, en otro aspecto más de la invención, una composición farmacéutica comprende el compuesto cristalino de la invención, un segundo agente activo, y un portador farmacéuticamente aceptable. También se puede incluir en la composición un tercer, un cuarto, etc., agente activo. En la terapia de combinación, la cantidad del compuesto de la invención que es administrada, así como también la cantidad de agentes secundarios, puede ser menor que la cantidad típicamente administrada en monoterapia.

El compuesto cristalino de la invención se puede mezclar ya sea físicamente con el segundo agente activo para formar una composición que contiene ambos agentes; o bien cada agente puede estar presente en composiciones distintas y separadas que son administradas al paciente en forma simultánea o secuencial. Por ejemplo, el compuesto cristalino de la invención se puede combinar con un segundo agente activo usando equipos y procedimientos convencionales para formar una combinación de agentes activos que comprenden el compuesto cristalino de la invención y un segundo agente activo. Asimismo, los agentes activos se pueden combinar con un portador farmacéuticamente aceptable para formar una composición farmacéutica que comprende el compuesto cristalino de la invención, un segundo agente activo y un portador farmacéuticamente aceptable. En esta forma de realización, los componentes de la composición se mezclan o combinan típicamente para crear una mezcla física. La mezcla física luego se administra en una cantidad terapéuticamente efectiva usando cualesquiera de las vías descritas en la presente.

En forma alternativa, los agentes activos pueden permanecer separados y distintos antes de la administración al paciente. En esta forma de realización, los agentes no se mezclan juntos físicamente antes de la administración sino que se administran en forma simultánea o en momentos separados como composiciones separadas. Dichas composiciones se pueden envasar por separado o se pueden envasar juntas en un kit. Cuando se administran en momentos separados, el agente secundario típicamente se administra menos de 24 horas después de la administración del compuesto de la invención, en un momento cualquiera dentro de un período que oscila entre la administración concurrente con la administración del compuesto de la invención y aproximadamente 24 horas después de la dosis. Esto también se denomina "administración secuencial" . Por ende, el compuesto cristalino de la invención se puede administrar por vía oral en forma simultánea o secuencial con otro agente activo usando dos comprimidos -un comprimido por cada agente activo- donde "secuencial" puede significar que es administrado inmediatamente después de la administración del compuesto de la invención o en algún momento posterior predeterminado (por ej . , una hora después o tres horas después) . En forma alternativa, la combinación se puede administrar mediante diferentes vías de administración; es decir, por vía oral y por inhalación.

En una forma de realización, el kit comprende una primera forma de dosis que comprende el compuesto cristalino de la invención y al menos una forma de dosis adicional que comprende uno o más de los agentes secundarios establecidos en la presente, en cantidades suficientes para llevar a cabo los métodos de la invención. La primera forma de dosis y la segunda (o tercera, etc.) forma de dosis juntas comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de agentes activos para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o condición médica en un paciente.

El o los agentes secundarios, cuando se incluyen, están presentes en una cantidad terapéuticamente efectiva; es decir, se administran típicamente en una cantidad que produce un efecto terapéuticamente beneficioso cuando se coadministra con el compuesto cristalino de la invención. El agente secundario puede estar en forma de sal, solvato, estereoisómero ópticamente puro, f rmacéuticamente aceptables, etc. Por ende, los agentes secundarios que se listan a continuación están destinados a incluir todas estas formas, y se encuentran disponibles a nivel comercial o se pueden preparar usando reactivos y procedimientos convencionales .

Los agentes anti-Alzheimer representativos incluyen, mas no se limitan a: donepezilo, galantamina, memantina, rivastigmina, selegilina, tacrina, y combinaciones de los mismos.

Los anticonvulsivos (antiepilépticos) representativos incluyen, mas no se limitan a: acetazolamida, albutoína, ácido 4-amino-3-hidroxibutírico, beclamida, carbamazepina, cinromida, clometiazol, clonazepam, diazepam, dimetadiona, eterobarb, etadiona, etosuxiraida, etotoina, felbaraato, fosfenitoina, gabapentina, lacosamida, lamotrigina, lorazepam, bromuro de magnesio, sulfato de magnesio, mefenitoína, mefobarbital , metsuximida, midazolam, nitrazepam, oxazepam, oxcarbazepina, parametadiona, fenacemida, feneturida, fenobarbital , fensuximida, fenitoína, bromuro de potasio, pregabalina, primidona, progabida, bromuro de sodio, valproato de sodio, sultiamo, tiagabina, topiramato, trimetadiona, ácido valproico, valpromida, vigabatrina, zonisamida, y combinaciones de los mismos. En una forma de realización particular, el anticonvulsivo se selecciona entre carbamazepina, gabapentina, pregabalina, y sus combinaciones.

Los antidepresivos representativos incluyen, mas no se limitan a: adinazolam, amitriptilina, clomipramina, desipramina, dotiepina (por ej . , clorhidrato de dotiepina) , doxepina, imipramina, lofepramina, mirtazapina, nortriptilina, protriptilina, trimipramina, venlafaxina, zimelidina, y combinaciones de los mismos.

Los agentes anti-Parkinson representativos incluyen, mas no se limitan a: amantadina, apomorfina, benztropina, bromocriptina, carbidopa, difenhidramina, entacapona, levodopa, pergólido, pramipexol, ropinirol, selegilina, tolcapona, trihexifenidilo, y combinaciones de los mismos.

Los inhibidores de la recaptación de serotonina y norepinefriña (SNRI) duales representativos incluyen, mas no se limitan a: bicifadina, desvenlafaxina, duloxetina, milnaciprán, nefazodona, venlafaxina, y combinaciones de los mismos.

Los agentes antiinflamatorios no esteroideos (NSAID) representativos incluyen, mas no se limitan a¡ acemetacina, acetaminofeno, ácido acetilsalicílico, alclofenac, alminoprofeno, amfenac, amiprilosa, amoxiprina, anirolac, apazona, azapropazona, benorilato, benoxaprofeno, bezpiperilona, broperamol, ácido buclóxico, carprofeno, clidanac, diclofenac, diflunisal, diftalona, enolicam, etodolac, etoricoxib, fenbufeno, fenclofenac, ácido fenclózico, fenoprofeno, fentiazac, feprazona, ácido flufenámico, flufenisal, fluprofeno, flurbiprofeno, furofenac, ibufenac, ibuprofeno, indometacina, indoprofeno, isoxepac, isoxicam, quetoprofeno, quetorolac, lofemizol, lornoxicam, meclofenamato, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, mesalamina, miroprofeno, mofebutazona, nabumetona, naproxeno, ácido niflúmico, nimesulide, nitroflurbiprofeno, olsalazina, oxaprozina, oxpinac, oxifenbutazona, fenilbutazona, piroxicam, pirprofeno, pranoprofeno, salsalato, sudoxicam, sulfasalazina, sulindac, suprofeno, tenoxicam, tiopinac, ácido tiaprofénico, tioxaprofeno, ácido tolfenámico, tolmetina, triflumidato, zidometacina, zomepirac, y combinaciones de los mismos. En una forma de realización particular, el NSAID se selecciona entre etodolac, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, quetoprofeno, quetorolac, meloxicam, naproxeno, oxaprozina, piroxicam, y combinaciones de los mismos. En una forma de realización particular, el NSAID se selecciona entre ibuprofeno, indometacina, nabumetona, naproxeno (por ejemplo, naproxeno sódico), y combinaciones de los mismos.

Los relajantes musculares representativos incluyen, mas no se limitan a: carisoprodol , clorzoxazona, ciclobenzaprina, diflunisal, metaxalona, metocarbamol , y combinaciones de los mismos.

Los inhibidores de la recaptación de la norepinefriña representativos incluyen, mas no se limitan a: atomoxetina, bupropriona y el metabolito de bupropriona hidroxibupropriona, maprotilina, reboxetina (por ejemplo, (S, S) -reboxetina) , viloxaziha, y combinaciones de los mismos. En una forma de realización particular, el inhibidor de la recaptación de la norepinef iña se selecciona entre atomoxetina, reboxetina, y combinaciones de los mismos.

Los agonistas opioides (analgésicos opioides) y antagonistas opioides representativos incluyen, mas no se limitan a: buprenorfina, butorfanol, codeína, dihidrocodeína, fentanilo, hidrocodona, hidromorfona, levalorfán, levorfanol, meperidina, metadona, morfina, nalbufina, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, nalorfina, oxicodona, oximorfona, pentazocina, propoxifeno, tramadol, y combinaciones de los mismos. En ciertas formas de realización, el agonista opioide se selecciona entre codeína, dihidrocodeína, hidrocodona, hidromorfona, morfina, oxicodona, oximorfona, tramadol, y combinaciones de los mismos .

Los inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina (SSRI, del inglés Selective Serotonin Reuptake Inhibitors) representativos incluyen, mas no se limitan a: citalopram y el metabolito de citalopram e desmetilcitalopram, dapoxetina, escitalopram (por ej . , oxalato de escitalopram) , fluoxetina y el metabolito de desmetil fluoxetina norfluoxetina, fluvoxamina (por ej . , maleato de fluvoxamina) , paroxetina, sertralina y el metabolito de sertralina demetilsertralina, y combinaciones de los mismos. En ciertas formas de realización, el SSRI se selecciona entre citalopram, paroxetina, sertralina, y combinaciones de los mismos.

Los bloqueadores de los canales de sodio representativos incluyen, mas no se limitan a: carbamazepina, fosfenitoína, lamotrignina, lidocaína, mexiletina, oxcarbazepina, fenitoína, y combinaciones de los mismos.

Los simpaticolíticos representativos incluyen, mas no se limitan a: atenolol, clonidina, doxazosina, guanetidina, guanfacina, modafinilo, fentolamina, prazosina, reserpina, tolazolina (por ej . , clorhidrato de tolazolina) , tamsulosina, y combinaciones de los mismos.

Las siguientes formulaciones ilustran las composiciones farmacéuticas representativas de la presente invención: Cápsulas de gelatina dura de ejemplo para administración oral Se combinan completamente el compuesto cristalino de la invención (50 g) , lactosa secada por aspersión (440 g) y estearato de magnesio (10 g) . La composición resultante se carga luego en cápsulas de gelatina dura (500 mg de composición por cápsula) .

A modo alternativo, el compuesto cristalino (20 mg) es completamente combinado con almidón (89 mg) , celulosa microcristalina (89 mg) y estearato de magnesio (2 mg) . La mezcla es luego filtrada a través de un tamiz U.S. malla No. 45 y cargada en una cápsula de gelatina dura (200 mg de composición por cápsula) .

Formulación en cápsula de gelatina de ejemplo para administración oral El compuesto cristalino de la invención (100 mg) es completamente mezclado con monooleato de polioxietilén sorbitán (50 mg) y almidón en polvo (250 mg) . La mezcla se carga luego en una cápsula de gelatina (400 mg de composición por cápsula) .

En forma alternativa, el compuesto cristalino (40 mg) es completamente mezclado con celulosa microcristalina (Avicel PH 103; 259.2 mg) y estearato de magnesio (0.8 mg) . La mezcla luego se carga en una cápsula de gelatina (tamaño #1, blanca, opaca) (300 mg de composición por cápsula) .

Formulación en comprimido de ejemplo para administración oral Se filtran el compuesto cristalino de la invención (10 mg) , almidón (45 mg) y celulosa microcristalina (35 mg) en un tamiz U.S. malla No. 20 y se mezclan completamente. Los granulos producidos de esta manera se secan a una temperatura que oscila entre 50 y 60 °C y se filtran en un tamiz U.S. malla No. 16. Se mezcla una solución de polivinilpirrolidona (4 mg como una solución al 10 % en agua estéril) con carboximetil almidón sódico (4.5 mg) , estearato de magnesio (0.5 mg) , y talco (1 mg) , y esta mezcla luego se filtra en un tamiz U.S. malla No. 16. Luego el carboximetil almidón sódico, el estearato de magnesio y el talco se agregan a los gránulos . Después de mezclar, la mezcla es comprimida en una máquina para formar comprimidos para obtener un comprimido que pesa 100 mg.

En forma alternativa, el compuesto cristalino (250 mg) es completamente mezclado con celulosa microcristalina (400 mg) , dióxido de silicio pirogénico (10 mg) , y ácido esteárico (5 mg) . La mezcla luego se comprime para formar comprimidos (665 mg de composición por comprimido) En forma alternativa, el compuesto cristalino (400 mg) es completamente mezclado con almidón de maíz (50 mg) , croscarmelosa sódica (25 mg) , lactosa (120 mg) , y estearato de magnesio (5 mg) . La mezcla luego se comprime para formar un comprimido de ranura única (600 mg de composición por comprimido) .

Formulación en suspensión de ejemplo para administración oral Se mezclan los siguientes ingredientes para formar una suspensión que contiene 100 mg de agente activo por 10 mL de suspensión: Ingredientes Cantidad Compuesto cristalino de la 1.0 g invención Ácido fumárico 0.5 g Cloruro de sodio 2.0 g Metil parabeno 0.15 g Propil parabeno 0.05 g Azúcar granulada 25.5 g Sorbitol (solución al 70%) 12.85 g Ingredientes Cantidad Veegum K (silicato de magnesio 1.0 g y aluminio) Saborizante 0.035 mL Colorantes 0.5 mg Agua destilada c.s. hasta 100 mL Formulación inyectable de ejemplo para administración por inyección El compuesto cristalino de la invención (0.2 g) se mezcla con solución tampón (buffer) de acetato de sodio 0.4 M (2.0 mL) . El pH de la solución resultante es ajustado a pH 4 usando ácido clorhídrico acuoso 0.5 o hidróxido de sodio acuoso 0.5 N, según sea necesario, y luego se agrega suficiente agua para inyección a fin de brindar un volumen total de 20 mL. La mezcla luego se filtra a través de un filtro estéril (0,22 micrones) para proveer una solución estéril adecuada para administración por inyección.

Composiciones de ejemplo para administración por inhalación El compuesto cristalino de la invención (0.2 mg) es micronizado y luego combinado con lactosa (25 mg) . Esta mezcla combinada se carga luego en un cartucho de inhalación de gelatina. Los contenidos del cartucho son administrados usando un inhalador de polvo seco, por ejemplo.

En forma alternativa, se dispersa un compuesto micronizado de la invención (10 g) en una solución preparada al disolver lecitina (0.2 g) en agua desmineralizada (200 mL) . La suspensión resultante se seca por aspersión y luego se microniza para formar una composición micronizada que comprende partículas que tienen un diámetro medio inferior a aproximadamente 1.5 pm. La composición micronizada luego se carga en cartuchos para inhaladores de dosis medidas que contienen l, i, l, 2-tetrafluoroetano presurizado en una cantidad suficiente para proveer desde aproximadamente 10 g hasta aproximadamente 500 µg del compuesto de la invención por dosis cuando se administra mediante el inhalador.

En forma alternativa, el compuesto cristalino (25 mg) se disuelve en solución salina isotónica (125 mL) tamponada en citrato (pH 5) . La mezcla se agita y se somete a sonicación hasta que el compuesto se disuelve. El pH de la solución se chequea y ajusta, de ser necesario, a pH 5 al agregar lentamente hidróxido de sodio 1N acuoso. La solución se administra usando un dispositivo nebulizador que provee desde aproximadamente 10 µg hasta aproximadamente 500 µg del compuesto cristalino por dosis.

EJEMPLOS Las siguientes Preparaciones y Ejemplos se proveen para ilustrar formas de realización específicas de la invención. Estas formas de realización específicas, no obstante, no pretenden limitar el alcance de la invención de manera alguna, a menos que se lo indique específicamente.

Las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados, a menos que se indique lo contrario, y cualesquiera otras abreviaturas usadas en la presente y no definidas tienen su significado estándar: BOC t-butoxicarbonilo BSA albúmina de suero bovino DMEM medio de Eagle modificado por Dulbecco DMF N, iV-dimetilformamida D SO dimetilsulfóxido EDTA ácido etilenediaminotetraacético EtOAc acetato de etilo EtOH etanol FBS suero bovino fetal HEPES ácido 4- (2-hidroxietil) -1- piperazinetanosulfónico PBS solución salina tamponada en fosfato THF tetrahidrofurano Cualesquiera otras abreviaturas usadas en la presente pero no definidas tienen su significado estándar generalmente aceptado. A menos que se indique lo contrario, todos los materiales, tales como reactivos, materiales de inicio y solventes, se adquieren de proveedores comerciales (tales como Sigma-Aldrich, Fluka Riedel-de Haén, y similares) y se usaron sin purificación adicional.

En los compuestos descritos a continuación, los dos centros quirales están identificados por los símbolos * y **. Nótese que el centro quiral * es conocido; sin embargo, el centro quiral ** no se conoce de manera precisa, sin ambigüedades, y se basa en el primer pico de elución mediante HPLC de fase reversa a partir de la mezcla de intermediarios diastereoméricos (los alcoholes protegidos) .

Preparación 1 t-Butil éster del ácido (S) -3- ( (S) -l-hidroxi-2- metilpropil) pirrolidina-l-carboxílico Se combinaron t-butil éster del ácido (S)-3-formilpirrolidina-l-carboxílico (10.0 g, 50.2 mmol) y THF (100 mL, 1000 mmol) bajo nitrógeno, y la mezcla resultante se enfrió a -78 °C. Luego se agregó a gotas cloruro de isopropilmagnesio 2.0 M en THF (30.1 mL, 60.2 ramol) en un lapso de 10 minutos. La mezcla se dejó entibiar a temperatura ambiente lentamente toda la noche . Luego se agregó a gotas NH4C1 acuoso saturado (100 mL) para neutralizar la reacción. El THF se retiró bajo vacío y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (2 x 100 mL) , y las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado (1 x 100 mL) , luego se secaron con Na2S04 anhidro, se filtraron y se concentraron in vacuo. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía de fase normal (300 g Si02/ 12 g en bruto, 50-60% dietil éter en hexanos) para obtener los siguientes compuestos como aceites transparentes: t-butil éster del ácido (S) -3- ( (3) -l-hidroxi-2-metilpropil) pirrolidina-l-carboxílico (3.8 g; primer pico de elución). XH RMN (400 MHz, DMSO) d 4.60 - 4.38 (brs, 1H) , 3.40 - 3.22 (m, 2H) , 3.28 - 3.02 (m, 2H) , 2.94 - 2.82 (m, 1H) , 2.28 - 2.12 (m, 1H) , 1.92 - 1.82 (m, 1H) , 1.70 - 1.56 (m, 1H) , 1.52 - 1.44 (m, 1H) , 1.38 (s, 9H) , 0.87 (d, J = 6.8 ??, 3H) , 0.83 (d, J = 6.8 Hz , 3H) . t-butil éster del ácido (S) -3- ( (R) -l-hidroxi-2-metilpropil) pirrolidina-l-carboxílico (2.8 g; segundo pico de elución) . XH RMN (400 MHz, DMSO) d 4.50 - 4.40, (brs, 1H) 3.42 - 3.28 (m, 2H) , 3.18 - 3.06 (m, 2H) , 3.04 - 2.92 (m, 1H) , 2.26 - 2.12 (m, 1H) , 1.78 - 1.68 (m, 1H) , 1.62 - 1.46 (m, 2H) , 1.38 (s, 9H) , 0.88 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 0.82 (d, J = 6.7 Hz, 3H) .

La asignación de la estereoquímica del compuesto del título fue realizada mediante el análisis de los ásteres de Mosher (Dale y Mosher (1969) J. Org. Chem. 34 (9) : 2543-2549) sobre el material eluido en segundo lugar. Usando este análisis, se determinó que el material con el segundo pico de elución era (S,R): ND: no determinable Nótese que la primeras dos letras corresponden al material con el segundo pico de elución y la tercera letra del diastereómero se refiere al centro quiral de los ésteres de Mosher.

Diastereómero SRS: 1H, CDC13, d ppm 7. 60-7.51 (m, 2H) ; 7.43 - 7.37 (m, 3H) ; 5.04 (dd, J = 8.0, 4.0, 1H) ; 3.52 (s, 3H) ; 3.51 - 3.45 (m, 1H) ; 3.36 (t, J = 8.4, 1H) ; 3.28 - 3.12 (m, 1H) ; 3.07 - 2.90 (m, 1H) ; 2.59 - 2.39 (m, 1H) ; 1.97 -1.80 (m, 2H) ; 1.59 - 1.45 (m, 1H) ; 1.43 (s, 9H) ; 0.93 (d, J = 6.8, 3H) ; 0.90 (d, J = 6.8, 3H) .

Diastereómero SRR: 1H, CDC13, d ppm 7. 62 - 7.52 (m, 2H) ; 7.44 - 7.36 (m, 3H) ; 5.06-4.98 (m, 1H) ; 3.52 (s, 3H) ; 3.52- 3.45 (m, 1H) ; 3.39 (t, J = 8.8, 1H) ; 3.30-3.14 (m, 1H) ; 3.10 - 2.96 (m, 1H) ; 2.60 - 2.40 (m, 1H) ; 1.96 - 1.80 (m, 2H) ; 1.58 - 1.45 (m, 1H) ; 1.43 (s, 9H) ; 0.96 (m, 6H) .

EJEMPLO 1 Sal clorhidrato cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-Clorofenoxi) -2 -metilpropilpirrolidina cristalina Se disolvieron t-butil éster del ácido (S) -3- ( (S) -1-hidroxi-2-metilpropil) pirrolidina-l-carboxílico (2.6 g, 10.7 mmol, 1.0 eq.) y 1-cloro-4 - fluorobenceno (3.4 mL, 32.0 mmol, 3.0 eq.) en DMF (12 mL, 150 mmol) . Se agregó NaH (385 mg, 16.0 mmol, 1.5 eq. ) lentamente en tres porciones, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos bajo nitrógeno. La mezcla se calentó a 90 °C durante 3 horas, luego se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se extrajo con hexanos (50 mL) y se lavó con agua (50 mL) . La capa acuosa se reextrajo con hexanos (50 mL) . Las capas orgánicas se combinaron, se secaron con Na2S04, se filtraron, y se concentraron. El intermediario en bruto protegido con BOC se purificó luego mediante en cromatografía en columna (elución con hexanos y éter, 0-100%, cromatografía flash) . La desprotección se llevó a cabo usando HC1 1.2 M en EtOH (150 mL, 180 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. La solución se concentró hasta secarse para formar el producto en bruto como una sal mono-HCl. La sal mono-HCl en bruto se disolvió en isopropanol (5 mL) para producir un aceite, que se calentó a 55 °C. Se agregó lentamente diisopropil éter (25 mL) bajo agitación constante para formar una solución homogénea, que se enfrió a temperatura ambiente. El recipiente de reacción se raspó y se agregaron los cristales semilla (a partir del calentamiento y lento enfriamiento de 100 mg de sal HC1 en bruto usando condiciones similares) durante el proceso de enfriamiento. Los sólidos formados y la solución se dejaron reposar a temperatura ambiente durante 1 hora. Los sólidos se filtraron y se lavaron con diisopropil éter (10 mL) para formar un sólido blanco (1.4 g) . El filtrado se concentró y la cristalización se repitió dos veces para formar un total de 2.4 g (a partir de 3 precipitaciones) . El precipitado se disolvió en agua y se liofilizó para formar el compuesto del título como un sólido cristalino blancuzco (2.4 g, 99% de pureza) .

Preparación alternativa de la sal clorhidrato cristalina del título combinaron t-butil éster del ácido (S) -3 - ( (R) hidroxi-2-metilpropil) irrolidina-l-carboxílico (35.0 g, 144 mmol, 1.0 eq. ) , trifenilfosfina (41.5 g, 158 mmol, 1.1 eq. ) , p-clorofenol (37.0 g, 288 mmol, 2.0 eq.) y 2-metil-tetrahidrofurano (300 mL) y el recipiente se purgó con nitrógeno. Se agregó lentamente diisopropil azodicarboxilato (31.2 mL, 1.1 eq.) a temperatura ambiente en el lapso de 2 horas. La mezcla luego se agitó a temperatura ambiente toda la noche. Se agregaron los hexanos (600 mL) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Las fases se separaron y la capa orgánica se lavó con NaOH 1.0 en agua (600 mL) , se lavó con NaCl acuoso saturado diluido (20 mL) , y luego se secó con Na2S04 para formar el intermediario en bruto protegido con BOC. Se agregaron hexanos adicionales (50 mL) y la mezcla resultante se agitó durante 30 minutos. Los sólidos se filtraron para formar el intermediario en bruto protegido con BOC como aceite espeso, que luego se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (0-10-20% EtOAc en hexanos) para formar t-butil éster ácido del (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina-l-carboxílico (5.5 g) .

Se combinó t-butil éster del ácido (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina-l-carboxílico (24.7 g, 69.8 mmol, 1.0 eq.) con HC1 3 M en ciclopentil metil éter (200 mL, 8.0 eq. ) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mayor parte del solvente se extrajo mediante evaporación rotatoria para formar un aceite espeso. Se agregó diisopropil éter (300 mL) y el volumen luego se redujo lentamente a -200 mL mediante evaporación rotatoria para formar una suspensión. La suspensión luego se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se filtró, y la torta filtrada se lavó con diisopropil éter (50 mL) y se secó para formar el compuesto del título (18.1 g, 98.5% de pureza) . El producto se resuspendió en 5 volúmenes de EtOAc (temperatura ambiente, calentamiento a 50 °C, luego enfriamiento a temperatura ambiente) para formar el compuesto del título como sólido cristalino (18.0 g, >99% de pureza) .

EJEMPLO 2 Difracción de rayos X en polvos Se obtuvo un patrón de difracción de rayos X en polvo (PXRD) con un difractómetro PXRD Rigaku iniflex usando radiación Cu Ka (30.0 kV, 15.0 mA) . El análisis se realizó con el goniómetro funcionando en modo de barrido continuo de 2° (2T) por minuto con un tamaño de paso de 0.03° en un rango de 2 a 40° en ángulo dos theta. Las muestras se prepararon sobre porta-muestras de cuarzo como una capa fina de material en polvo. El instrumento se calibró con un estándar de metal de silicio, dentro de ±0.20° ángulo dos theta. En la Figura 1 se ilustra un patrón de PXRD representativo para la sal clorhidrato cristalina de la invención. Las muestras se trituraron a mano antes se su evaluación, a fin de reducir las interferencias del tamaño de partícula con las intensidades relativas.

Los numerosos picos de difracción intensos en los polvos y la línea de base relativamente plana ilustrados en la Figura 1 indican de gran manera que la sal clorhidrato cristalina poseía buena cristalinidad .

EJEMPLO 3 Análisis térmico Se realizó calorimetría diferencial de barrido (DSC) usando un módulo Modelo Q-100 de TA Instruments con un controlador para análisis térmico. Se recabaron los datos y se analizaron usando el programa informático Thermal Solutions de TA Instruments. Se pesó exactamente alrededor de 1.22 mg de una muestra de la sal clorhidrato cristalina de la invención en una cápsula de aluminio cubierta. Después de un período de 5 minutos de equilibrio isotérmico a 22 °C, la muestra se calentó usando una rampa de calentamiento lineal de 10°C/min desde 22 °C hasta 250 °C. En la Figura 2 se ilustra un termograma de DSC representativo.

El termograma de DSC demuestra que la sal clorhidrato cristalina tiene una excelente estabilidad térmica con un punto de fusión a aproximadamente 128 °C y no se observa descomposición térmica significativa por debajo de aproximadamente 200 °C.

En la Figura 3 se ilustra una traza de TGA representativa, que indica que una muestra de la sal clorhidrato cristalina no perdió una cantidad significativa en el rango que abarca desde la temperatura ambiente hasta 200 °C, lo que es consistente con la pérdida de humedad residual o solvente.

EJEMPLO 4 Evaluación de sorción de humedad dinámica Se realizó una evaluación de sorción de humedad dinámica (DMS, del inglés Dyna ic Moisture Sorption, también conocida como "perfil de sorción-desorción de humedad") para la sal clorhidrato cristalina de la invención usando una microbalanza atmosférica VTI, sistema SGA-100 (VTI Corp., Hialeah, FL 33016) . Se usó un tamaño de muestra de aproximadamente 2.73 mg y la humedad se fijó al valor ambiente al inicio del análisis. El análisis de DMS comprendió una velocidad de escaneo de 5% de humedad relativa/el paso en todo el rango de humedad total de 2% de humedad relativa a 90% de humedad relativa. La operación de DMS se realizó a nivel isotérmico a 25 °C. En la Figura 4 se ilustra un perfil de DMS representativo.

El perfil de DMS demuestra que la sal clorhidrato cristalina tiene un perfil de sorción/desorción reversible con higroscopicidad insignificante. La sal clorhidrato cristalina tiene una pequeña ganancia de peso cuando se expone a un rango de humedad amplio que abarca desde 2% de humedad relativa hasta 90% de humedad relativa, y una ganancia de peso de menos de aproximadamente 1.0% cuando se expone a una humedad relativa de hasta 85%, lo que indica que la sal clorhidrato cristalina posee solamente un riesgo mínimo de higroscopicidad por debajo de una humedad relativa del 85%.

EJEMPLO 5 Solubilidad y estabilidad La sal clorhidrato cristalina de la invención tiene muy buena solubilidad acuosa en un amplio rango de pH: La sal clorhidrato cristalina de la invención (concentración de 10 pg/mL) también tiene buena estabilidad sin pérdida de pureza después de un almacenamiento de 3 días a 40 °C: La sal clorhidrato cristalina de la invención también tiene buena estabilidad a temperatura ambiente sin degradación a los 30 días a concentraciones de 1 mg/mL y 10 mg/mL .

ENSAYO 1 Ensayos de unión de hSERT, hNET y hDAT Los ensayos de unión de radioligandos a membranas se usaron para medir la inhibición de la unión del ligando marcado (3H-citalopram o 3H-nisoxetina o 3H-WIN35428) a las membranas que se prepararon a partir de células que expresan el respectivo transportador recombinante humano (hSERT o hNET o hDAT) a fin de determinar los valores pKi de los compuestos de ensayo en los transportadores .

Preparación de membranas a partir de células que expresan hSERT, hNET o hDAT Se cultivaron líneas celulares derivadas de riñon embrionario humano (HEK-293) recombinante establemente transfectadas con hSERT o hNET, respectivamente, en medio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM, Eagle's Modified Eagle's Médium) suplementado con FBS dializado al 10% (para hSERT) o FBS (para hNET) , 100 pg/ml de penicilina, 100 pg/ml de estreptomicina, 2 mM de L-glutamina y 250 g/ml del antibiótico aminoglicósido G418, en una incubadora húmeda de C02 al 5% a 37 °C. Cuando los cultivos alcanzaron el 80% de confluencia, las células se lavaron completamente en PBS (sin Ca2+ y Mg2+) y se levantaron con 5 mM de EDTA en PBS. Las células se sedimentaron mediante centrifugación, se resuspendieron en tampón de lisis (10 mM de Tris-HCl, pH 7.5 que contenía 1 mM de EDTA) , se homogeneizaron, se sedimentaron mediante centrifugación, luego se resuspendieron en 50 mM de Tris-HCl, pH 7.5, y sacarosa al 10% a 4 °C. La concentración de proteínas de la suspensión de membrana se determinó usando un kit de ensayo de proteínas Bio-Rad Bradford. Las membranas se congelaron rápidamente y se almacenaron a -80 °C. Se compraron membranas de ovario de hámster chino que expresaban hDAT (CHO-DAT) al proveedor PerkinElmer y se almacenaron a -80°C.

Ensayos de unión Se realizaron ensayos de unión en una placa de ensayo de 96 cavidades en un volumen total de 200 µ? de tampón de ensayo (50 mM de Tris-HCl, 120 mM de NaCl, 5 mM de KC1, pH 7.4) con 0.5, 1 y 3 g de proteína de membrana, para SERT, NET y DAT, respectivamente. Se realizaron estudios de unión por saturación, para determinar los valores ¾ del radioligando para 3H-citalopram, 3H-nisoxetina, o 3H-WIN35428, respectivamente, usando 12 diferentes concentraciones de radioligando que oscilaban entre 0.005-10 nM (3H-citalopram) ; 0.01-20 nM (3H-nisoxetina) y 0.2-50 nM (3H-wiN35428) . Los ensayos de inhibición para la determinación de los valores pKi de los compuestos de ensayo se realizaron con 1.0 nM 3H-citalopram, 1.0 nM 3H-nisoxetina o 3.0 nM 3H-WIN35428, a 11 concentraciones diferentes del compuesto de ensayo que oscilaban entre 10 pM y 100 µ?.

Se prepararon soluciones madre (10 mM en DMSO) del compuesto de ensayo y se realizaron diluciones seriales usando tampón de dilución (50 mM de Tris-HCl, 120 mM de NaCl, 5 mM de KC1, pH 7.4, 0.1% BSA, 400 µ? de ácido ascórbico) . La unión no específica del radioligando se determinó en presencia de 1 uM de duloxetina, 1 µ? de desipramina o 10 µ? de GBR12909 (cada uno en tampón de dilución) para los ensayos de hSERT, h ET o hDAT, respectivamente.

Después de un período de incubación de 60 minutos a 22 °C (o un período suficiente para alcanzar el equilibrio) , las membranas se cosecharon mediante filtración rápida sobre una placa de 96 cavidades UniFilter GF/B, pretratada con 0.3% de polietilenimina, y se lavaron 6 veces con 300 µ? de tampón de lavado (50 mM de Tris-HCl, 0.9% NaCl, pH 7.5 a 4 °C) . La placa se secó toda la noche a temperatura ambiente, se agregaron aproximadamente 45 µ? de MicroScint™-20 (Perkin Elmer) y se cuantificó la radioactividad unida mediante espectroscopia de centelleo líquido. Las curvas de inhibición e isotermas de saturación se analizaron usando un programa informático GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) . Los valores IC50 se generaron a partir de las curvas de concentración-respuesta usando el algoritmo de dosis-respuesta sigmoidea (pendiente variable) en Prism GraphPad. Los valores Kd y Bmax para el radioligando se generaron a partir de los isotermas de saturación usando el algoritmo de optimización global de unión por saturación en Prism GraphPad. Los valores pKi (logaritmo decádico negativo de Ki) para los compuestos de ensayo se calcularon a partir de los valores IC50 optimizados (best-fit) , y el valor ¾ del radioligando, usando la ecuación de Cheng-Prusoff (Cheng & Prusoff (1973) Biochem. Pharmacol. 22 (23 ) : 3099-3108 ) : Ki = IC50/ (1+ [L] /¾) , donde [L] = concentración de radioligando.

En este ensayo se evaluó el compuesto del Ejemplo 1 (sal TFA) y se encontró que exhibía un valor Ki para SERT = 8.0 y un valor pKi para NET 8.0.

ENSAYO 2 Ensayos de captación de neurotransmisores hSERT, hNET y hDAT Los ensayos de captación de neurotransmisores se usaron para medir la inhibición de la captación de 3H-serotonina (3H-5-HT) , 3H-norepinef iña (3H-NE) , y 3H-dopamina (3H-DA) en células que expresan el respectivo transportador (hSERT, hNET o hDAT) a fin de determinar los valores pIC50 de los compuestos de ensayo en los transportadores.

Ensayos de captación de 3H-5-HT, 3H-NE y 3H-DA Se cultivaron líneas celulares derivadas de HEK-293 transfectadas en forma estable con hSERT, hNET o hDAT, respectivamente, en medio DMEM suplementado con FBS dializado al 10% (para hSERT) o FBS (para hNET y hDAT) , 100 g/ml de penicilina, 100 µg/ml de estreptomicina, 2 mM de L-glutamina y 250 g/ml del antibiótico aminoglicósido G418 (para hSERT y hNET) o 800 vq/ml (para hDAT) , en una incubadora húmeda de C02 al 5% a 37 °C. Cuando los cultivos alcanzaron el 80% de confluencia, las células se lavaron completamente en PBS (sin Ca2+ y Mg2+) y se levantaron con 5 mM de EDTA en PBS. Las células se cosecharon mediante centrifugación a 1100 rpm durante 5 minutos, se lavaron una vez mediante resuspensión en PBS, y luego se centrifugaron. El sobrenadante se descartó y se .resuspendió el sedimento celular, mediante suave trituración, en tampón de bicarbonato Krebs-Ringer a temperatura ambiente que contenía HEPES (10 mM) , CaCl2 (2.2 mM) , ácido ascórbico (200 µ?) y pargilina (200 µ?) , pH 7.4. La concentración final de las células en la suspensión celular fue de .7.5 x 104 células/ml, 1.25 x 105 células/ml, y 5.0 x 104 células/ml para las líneas celulares de SERT, NET y DAT, respectivamente.

Los ensayos de captación de neurotransmisores se realizaron en una placa de ensayo de 96 cavidades en un tampón de ensayo con un volumen total de 400 µL (tampón de bicarbonato Krebs-Ringer que contenía HEPES (10 mM) , CaCl2 (2.2 mM) , ácido ascórbico (200 µ?) y pargilina (200 µ?) , pH 7.4) con 1.5 x 104 y 2.5 x 104 células, para SERT, NET y DAT, respectivamente. Los ensayos de inhibición para la determinación de los valores pIC50 de los compuestos de ensayo se realizaron con 11 concentraciones diferentes, que abarcaban desde 10 pM hasta 100 µ?. Se prepararon soluciones madre (10 mM en DMSO) del compuesto de ensayo y diluciones seriales usando 50 mM de Tris-HCl, 120 mM de NaCl, 5 mM de KC1, pH 7.4, 0.1% BSA, 400 µ? de ácido ascórbico. Los compuestos de ensayo se incubaron durante 30 minutos a 37 °C con las células respectivas, antes de la adición del neurotransmisor radiomarcado, 3H-5-HT (concentración final de 20 nM) , 3H-NE (concentración final de 50 nM) o 3H-DA (concentración final de 100 nM) . La captación no específica del neurotransmisor se determinó en presencia de 2.5 µ? de duloxetina, 2.5 µ? de desipramina o lOuM de GBR-12909 (cada uno en tampón de dilución) para los ensayos de hSERT, h ET o hDAT, respectivamente.

Después de un período de 10 minutos de incubación, a 37 °C, con radioligando, las células se cosecharon mediante filtración rápida sobre una placa de 96 cavidades UniFilter GF/B, pretratada con BSA al 1%, y se lavaron 6 veces con 650 µ? de tampón de lavado (PBS helado) . La placa se secó toda la noche a 37 °C, se agregaron ~ 45 µ? de MicroScint™-20 (Perkin Elmer) y se cuantificó la radioactividad incorporada mediante espectroscopia de centelleo líquido. Las curvas de inhibición se analizaron usando el paquete de programas informáticos GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) . Los valores IC50 se generaron a partir de las curvas concentración-respuesta usando el algoritmo dosis-respuesta sigmoidea (pendiente variable) en Prism GraphPad.

En este ensayo se evaluó el compuesto del Ejemplo 1 (sal TFA) y se encontró que exhibía un valor pIC50 de inhibición de la recaptación de la serotonina de = 8.0 y un valor pIC50 de inhibición de la recaptación de la norepinefriña de = 8.0.

ENSAYO 3 Estudios de ocupación de los transportadores de SERT y NET ex vivo Se usaron ensayos de captación de neurotransmisores y unión de radioligandos ex vivo para determinar la ocupación in vivo de SERT y NET, en regiones seleccionadas del cerebro, después de la administración in vivo (aguda o crónica) de los compuestos de ensayo. Después de la administración del compuesto de ensayo (mediante vía intravenosa, intraperitoneal , oral, subcutánea u otra) en la dosis apropiada (0.0001 a 100 mg/kg) , se sacrificaron las ratas {> n=4 por grupo) en momentos específicos (10 minutos a 48 horas) mediante decapitación, y el cerebro se disecó en hielo. Las regiones cerebrales relevantes fueron disecadas, congeladas y almacenadas a -80 °C hasta su uso.

Ensayos de unión de radioligandos para SERT y NET ex vivo Para los ensayos de unión de radioligandos ex vivo, se monitorizaron las tasas iniciales de asociación de los radioligandos selectivos para SERT (3H-citalopram) , y NET (3H-nisoxetina) con productos homogeneizados en bruto de cerebro de rata, preparados a partir de animales tratados con el compuesto de ensayo y vehículo. Véase Hess y colaboradores (2004) J. Pharmacol. Exp. Ther. 310 (2) : 488-497. Los productos homogeneizados de tejido cerebral en bruto se prepararon al homogeneizar pedazos de tejido congelados en tampón a 0.15 mi (por mg de peso húmedo) de 50 mM de Tris-HCl, 120 mM de NaCl, 5 mM de KC1, pH 7.4. Los ensayos de asociación de radioligandos se realizaron en una placa de ensayo de 96 cavidades en un tampón de ensayo con un volumen total de 200 µ? (50 mM de Tris-HCl, 120 mM de NaCl, 5 mM de KC1, 0.025% BSA, pH 7.4) con tejido de peso en húmedo de 650 u'g (equivalente a proteína de 25 µ?) . Los productos homogeneizados se incubaron durante un período de hasta 5 minutos con 3H-citalopram (3 nM) y 3H-nisoxetina (5 M) , respectivamente, antes de terminar el ensayo mediante filtración rápida sobre una placa de 96 cavidades UniFilter GF/B, pretratada con polietilenimina al 0.3%. Los filtros luego se lavaron 6 veces con 300 µ? de tampón de lavado (50 mM de Tris-HCl, 0.9% NaCl, pH 7.4 a 4°C). La unión no específica del radioligando se determinó en presenci de 1 µ? de duloxetina, ó 1 µ? de despiramina, para 3H-citalopram o 3H-nisoxetina, respectivamente. La placa se secó toda la noche a temperatura ambiente, se agregaron ~ 45 µ? de icroScint™-20 (Perkin Elmer) y se cuantificó la radioactividad unida mediante espectroscopia de centelleo líquido. Las tasas iniciales de asociación de 3H-citalopram y 3H-nisoxetina se determinaron mediante regresión lineal usando un paquete de programas informáticos GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) . Se determinó la tasa promedio de asociación de radioligandos a los productos homogeneizados de tejido cerebral obtenidos de animales tratados con vehículo. El % de ocupación de los compuestos de ensayo se determinó luego usando la siguiente ecuación: % de ocupación = 100 x (1 - (asociación de tasa inicial para el tejido tratado con el compuesto de ensayo / asociación de tasa media para el tejido tratado con el vehículo) ) Los valores ED50 se determinaron al trazar el log 10 de la dosis del compuesto de evaluación frente al % de ocupación. Los valores ED50 se generaron a partir de las curvas de concentración-respuesta usando el algoritmo dosis-respuesta sigmoidea (pendiente variable) en GraphPad Prism.

Ensayos de captación de SERT y NET ex vivo Los ensayos de captación de neurotransmisores ex vivo, en los cuales se evalúa la captación de 3H-5-HT o 3H-NE en productos homogeneizados en bruto de cerebro de rata, preparados a partir de animales tratados con el compuesto de evaluación y vehículo, se usaron para medir la ocupación de los transportadores de SERT y NET in vivo. Véase Wong y colaboradores (1993) Neuropsychopharmacology 8(1).-23-33. Los productos homogeneizados de tejido cerebral en bruto se prepararon al homogeneizar pedazos de tejido congelados en 0.5 mi (por mg en peso húmedo) de 10 mM de tampón HEPES, pH 7.4, que contenía sacarosa 0.32 M, 200 µ? de ácido ascórbico y 200 µ? de pargilina, a 22 °C. Los ensayos de captación de neurotransmisores se realizaron en una placa Axygen de 96 cavidades en un volumen total de 350 µ? de tampón de ensayo (tampón de bicarbonato Krebs-Ringer con 10 mM de HEPES, 2.2 mM de CaCl2, 200 µ? de ácido ascórbico y 200 µ? de pargilina, pH 7.4) con 50 µg de proteína. Los productos homogeneizados se incubaron durante 5 minutos a 37 °C con 3H-5-HT (20 nM) y 3H-NE (50 nM) , respectivamente, antes de terminar el ensayo mediante filtración rápida sobre una placa UniFilter GF/B de 96 cavidades, pretratada con BSA al 1%. La placa se lavó 6 veces con 650 µ? de tampón de lavado (PBS helado) y se secó toda la noche a 37 °C, antes de la adición de ~ 45 µ? de MicroScint™-20 (Perkin Elmer) . Se cuantificó la radioactividad incorporada mediante espectroscopia de centelleo líquido. Se determinó la captación no específica de neurotransmisores en ensayos paralelos en los cuales los productos homogeneizados de tejidos se incubaron con 3H-5-HT (20 nM) o 3H-NE (50 nM) durante 5 minutos a 4 °C.

ENSAYO 4 Otros Ensayos Otros ensayos que se usan para evaluar las propiedades farmacológicas de los compuestos de ensayo incluyen, mas no se limitan a: ensayos de cinética de unión de ligandos en frío (Motulsky y Ma an (1984) Molecular Pharmacol. 25(1) :l-9) con membranas preparadas a partir de células que expresan hSERT o hNET; ensayos de unión de radioligandos a membranas convencionales usando compuesto de ensayo radiomarcado, por ejemplo, titulado; ensayos de unión de radioligandos usando tejido nativo de, por ejemplo, cerebro de roedor o de humano; ensayos de captación de neurotransmisores usando plaquetas de roedor o de humano; ensayos de captación de neurotransmisores usando preparaciones de sinaptosomas en bruto o puras del cerebro de ratón.

ENSAYO 5 Prueba de inyección intraplantar de formol Se evalúan los compuestos en cuanto a su habilidad para inhibir la respuesta conductual evocada por una inyección de 50 µ? de formol (5%) . Se fija una banda metálica a la extremidad inferior izquierda de ratas macho Sprague-Dawley (200-250 g) y cada rata se acostumbra a la banda durante 60 minutos dentro de un cilindro plástico (15 cm de diámetro) . Los compuestos se preparan en vehículos farmacéuticamente aceptables y se administran a nivel sistémico (i.p., p.o.) en momentos predesignados antes de la prueba con formol . Los comportamientos nociceptivos espontáneos que consisten en el estremecimiento- de la pata trasera inyectada (con la banda) se cuentan de manera continua durante 60 minutos usando un analizador de nocicepción automatizado (UCSD Anesthesiology Research, San Diego, CA) . Las propiedades antinociceptivas de los artículos de ensayo se' determinan al comparar el número de estremecimientos en las ratas tratadas con vehículo y compuesto (Yaksh y colaboradores, "An automated flinch detecting system for use in the formalin nociceptive bioassay" (2001) J. Appl. Physiol. 90 (6) : 2386-2402) .

ENSAYO 6 Modelo de ligadura de los nervios espinales Se evalúan los compuestos en cuanto a su habilidad de revertir alodinia táctil (sensibilidad incrementada a estímulos .mecánicos inocuos) inducida por lesión del nervio. Las ratas macho Sprague-Dawley se preparan quirúrgicamente tal como se describe en Kim y Chung An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat (1992) Pain 50 (3) : 355-363. La sensibilidad mecánica se determina como una ausencia de respuesta del 50% a los estímulos mecánicos inocuos (Chaplan y colaboradores, Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw (1994) J. Neurosci. Methods 53(l):55-63) antes y después de la lesión del nervio. Entre una y cuatro semanas posteriores a la cirugía, los compuestos se preparan en vehículos farmacéuticamente aceptables y se administran a nivel sistémico (i.p., p.o.). El grado de sensibilidad mecánica inducida por lesión del nervio antes y después del tratamiento sirve como un índice de las propiedades antinociceptivas de los compuestos.

Si bien la presente invención ha sido descrita con referencia a los aspectos o formas de realización específicos de la misma, las personas versados en el arte entenderán que es posible realizar varios cambios o sustituir los equivalentes sustituidos sin alejarse del verdadero espíritu y alcance de la invención. Asimismo, siempre que sea permitido por las normas y reglamentaciones aplicables en materia de patentes, todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patentes citadas en la presente se incorporan por referencia en su totalidad al mismo grado como si cada documento hubiera sido individualmente incorporado por referencia en la presente.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como prioridad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Una sal cristalina de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2 -metilpropilpirrolidina y ácido clorhídrico en una relación molar 1:1, caracterizada porque tiene un patrón de difracción de rayos X en polvos que comprende picos de difracción a valores 2T de 8.78±0.20, 15.26±0.20, 19.08±0.20, 20.36±0.20, 21.50±0.20, y 25.46±0.20.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene uno o más picos .de difracción adicionales a valores 2T seleccionados entre 26.42±0.20, 30.65±0.20, 28.91±0.20, 24.77±0.20 , 14.42±0.20 , 16.74+0.20, y 5.20±0.20.

3. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque tiene un patrón de difracción de rayos X en polvos en el cual las posiciones del pico concuerdan sustancialmente con las posiciones del pico del patrón ilustrado en la Figura 1.

4. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque tiene una traza de calorimetría diferencial de barrido que tiene un punto de fusión de aproximadamente 128 °C.

5. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque tiene una traza de calorimetría diferencial de barrido que concuerda sustancialmente con la ilustrada en la Figura 2.

6. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un portador farmacéuticamente aceptable y el compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

7. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizada porque además comprende un agente terapéutico secundario seleccionado entre: agentes anti-Alzheimer , anticonvulsivos, antidepresivos, agentes anti-Parkinson, inhibidores de la recaptación de la serotonina-norepinefriña duales, agentes antiinflamatorios no esteroideos, inhibidores de la recaptación de la norepinefriña, agonistas opioides, antagonistas opioides, inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina, bloqueadores de los canales de sodio, simpaticolíticos , y combinaciones de los mismos.

8. Un proceso para preparar el compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque comprende el paso de: (a) tratar una sal clorhidrato de (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina con un solvente polar para formar una primera composición o desproteger t-butil éster del ácido (S) -3- Í(S) -1- (4 -clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina-l-carboxílico con ácido clorhídrico en un diluyente inerte para formar una primera composición; y (b) agregar un solvente no polar para formar una segunda composición a partir de la cual se forma el compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

9. El proceso de acuerdo con la reivindicación 8, CARACTERIZADO porque el paso (b) comprende: (i) agregar un solvente no polar para formar una segunda composición; (ii) enfriar opcionalmente para efectuar la cristalización; y (iii) aislar los sólidos resultantes para obtener el compuesto.

10. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9, caracterizado porque el solvente polar es isopropanol.

11. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9, caracterizado porque la desprotección se realiza con HC1 3 M y el diluyente inerte es ciclopentil metil éter.

12. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9, caracterizado porque el solvente no polar es diisopropil éter.

13. Un proceso para purificar (S) -3- [ (S) -1- (4-clorofenoxi) -2-metilpropilpirrolidina, caracterizado porque comprende preparar el compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

14. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque es para uso en terapia.

15. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 14, caracterizado porque es para tratar un trastorno de dolor, un trastorno depresivo, un trastorno afectivo, trastorno de déficit de atención con hiperactividad, un trastorno cognitivo, incontinencia urinaria por estrés, síndrome de fatiga crónica, obesidad, o síntomas vasomotores asociados con la menopausia.

16. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 15, caracterizado porque el trastorno de dolor se selecciona entre dolor neuropático, fibromialgia, lumbalgia crónica, y osteoartritis .

17. Medicamento caracterizado porque contiene un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

18. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque es para la fabricación de un medicamento.

19. El uso de acuerdo con la reivindicación 18, caracterizado porque el medicamento es para el tratamiento de un trastorno de dolor, un trastorno depresivo, un trastorno afectivo, trastorno de déficit de atención con hiperactividad, un trastorno cognitivo, incontinencia urinaria por estrés, síndrome de fatiga crónica, obesidad, o síntomas vasomotores asociados con la menopausia.