MX2012011369A

MX2012011369A - Peptidos y su uso.

Info

Publication number: MX2012011369A
Application number: MX2012011369A
Authority: MX
Inventors: Deborah O'neil; Derry Mercer; Cedric Charrier
Original assignee: Novabiotics Ltd
Priority date: 2010-03-31
Filing date: 2011-03-30
Publication date: 2012-11-30
Also published as: EP3578193B1; ES2729313T3; AU2018202201A1; SI2552434T1; LT2552434T; PL2552434T3; BR112012024676A2; RU2590706C2; KR101922409B1; WO2011121289A3; UA118167C2; EP2552434B9; BR112012024676B1; RU2012145756A; JP5969457B2; CA2797437C; SG184138A1; TR201908150T4; US20130102524A1; IL222027A

Abstract

La presente invención relaciona a péptidos y su uso en el tratamiento de infecciones microbianas, en particular las infecciones bacterianas; en particular, la invención relaciona a péptidos en donde por lo menos 75% de los aminoácidos del péptido son aminoácidos de arginina y fenilalanina, por lo menos 50% de los aminoácidos son aminoácidos de arginina y por lo menos 15% de los aminoácidos son aminoácidos de fenilalanina.

Description

PÉPTIDOS Y SU USO CAMPO TÉCNICO La presente invención relaciona a péptidos y a su uso en el tratamiento de infecciones microbianas, en particular las infecciones bacterianas. También es proporcionado un método de tratamiento médico.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los péptidos antimicrobianos son moléculas efectoras clave del sistema inmunologico innato y componentes integrales de la primera línea de defensa contra infecciones microbianas de todos los organismos eucarióticos. Varios organismos procarióticos también utilizan los péptidos antimicrobianos como medios para competir contra el desafío de otros microorganismos. Muchos péptidos antimicrobianos son caracterizados por propiedades catiónicas que facilitan las interacciones con los fosfolípidos con carga negativa de la membrana microbiana que luego llevan a la lisis y muerte microbiana siguiente a la permeabilización de la membrana. Por ejemplo, ha sido mostrado que las moléculas peptídicas antimicrobianas pueden agregarse y pueden formar canales dependientes del voltaje en la bicapa lipídica que tiene como resultado la permeabilisation de ambas de la membrana interior y la exterior de los microorganismos (Lehrer, R. I., J. Clin.

Investigation, 84:553 (1989)). La naturaleza anfifílica de estas moléculas también puede facilitar la inserción del residuo hidrófobo en la bicapa lipídica por atracción electrostática mientras los residuos polares se proyectan dentro y arriba de la membrana.

Los microorganismos resistentes a fármacos, especialmente bacterias, se están volviendo cada vez más problemáticos a medida que las tasas de infección continúan aumento y los métodos efectivos de control llegan a ser cada vez más limitados. El uso prolífico de antibióticos durante los últimos 50 años o algo así, junto con la prescripción indiscriminada de antibióticos y el incumplimiento del paciente con los regímenes de tratamiento, ha actuado en los microorganismos que han desarrollado o han adquirido medios de superar los efectos de los antibióticos. La transmisión y el control de los organismos resistentes a fármacos llega a ser uno de los problemas más significativos dentro de la asistencia sanitaria.

Todos los géneros Gram positivos, incluyendo Staphylococcus spp., Enterococcus spp., üsteria spp., Clostridium spp., Corynebacterium spp., Nocardia spp., Bacillus spp. y Streptococcus spp., incluyendo esos que han desarrollado u obtenido niveles variables de resistencia a los antibióticos tales como meticilina (meticilina), son de particular interés como lo son el género Gram negativo Escherichia spp., Pseudomonas spp., Klebsiella spp. y Acetinobacter spp. Otros patógenos Gram negativos de interés incluyen la Enterobacteriaceae (especialmente esas que producen ya sea ß-lactamasa de espectro extendido (ESBL) o carbapenemasa). El Staphylococci, coagulase negativo, tal como S. epidermidis, también han surgido como patógenos de nosocomio resistentes a fármacos importantes. Las opciones de tratamiento para infecciones contribuidas o causadas por meticilina o bacterias resistentes a fármacos múltiples ahora son limitadas y hay una necesidad urgente de descubrir nuevas terapias que inhiban o maten tales organismos. Otros patógenos bacterianos de particular interés incluyen Mycobacterium spp., por ejemplo Mycobacterium tuberculosis; Enterobacter spp.; Campylobacter spp.; Salmonella spp.; Helicobacter spp., por ejemplo Helicobacter pylori; Neisseria spp., por ejemplo Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis; Borrelia burgdoríeri; Shigella spp., por ejemplo Shigella flexnerii; Haemophilus spp., por ejemplo Haemophilus influenzae; Chlamydia spp., por ejemplo Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci; Francisella tularensis; Yersinia spp., por ejemplo Yersinia pestis; Treponema spp.; Burkholderia spp.; por ejemplo Burkholderia mallei y B. pseudomallei.

La Pseudomonas aeruginosa es un patógeno oportunista que causa infecciones del tracto respiratorio, infecciones del tracto urinarios, dermatitis, infecciones del tejido suave, bacteremia y una variedad de infecciones sistémicas, particularmente en pacientes con quemaduras graves y en pacientes con cáncer y SIDA que están inmunosuprimidos. Las infecciones respiratorias causadas por Pseudomonas aeruginosa ocurren casi exclusivamente en individuos con un tracto respiratorio inferior comprometido o un mecanismo sistémico de defensa comprometido (por ejemplo en pacientes con fibrosis cística o la enfermedad pulmonar obstructiva crónica).

La neumonía primaria ocurre en pacientes con enfermedad pulmonar crónica y falla cardíaca congestiva. La neumonía bacteremica ocurre comúnmente en pacientes con cáncer neutropénico que se someten a quimioterapia. La colonización del tracto respiratorio inferior de pacientes con fibrosis quística por cepas mucoides de Pseudomonas aeruginosa es común y difícil de tratar. Hay una necesidad de desarrollar un medio efectivo para tratar las infecciones de Pseudomonas aeruginosa.

El Staphylococcus aureus es un patógeno oportunista que normalmente se encuentra en la piel y en la nariz de muchas personas saludables donde vive competamente sin causar daño. S. aureus puede, sin embargo, causar problemas cuando puede entrar al cuerpo, causando abscesos, furúnculos, granos, infecciones de impétigo y heridas, ya sea accidentales o quirúrgicas. Si la infección entra en el torrente sanguíneo y viaja a partes diferentes del cuerpo puede causar envenenamiento de la sangre (septicemia), infección de huesos (osteomielitis), infección de la válvula de corazón (endocarditis) e infección pulmonar (neumonía). El MRSA es un tipo de S. aureus que es resistente a muchos antibióticos comúnmente prescritos, incluyendo meticillina (-40% de infecciones de S. aureus en el RU son resistentes a la meticillina y a otros antibióticos), y es denominado comúnmente en la prensa popular como un "supermicrobio". El MRSA es uno de los microbios más predominantes implicados con infecciones asociadas a la asistencia sanitaria. Las infecciones son limitadas normalmente a los hospitales, y en particular a pacientes vulnerables y/o debilitados, incluyendo pacientes en unidades de cuidados intensivos, unidades de quemaduras y pabellones ortopédicos. El MRSA es más difícil de tratar porque muchos antibióticos son ineficaces, y ésos que son efectivos a menudo necesitan ser dados en dosis mucho más más, intravenosamente, sobre periodos de tiempo prolongados (varias semanas) con lo cual se destaca la necesidad de desarrollar terapias antimicrobianas alternativas.

Ya que los patógenos microbianos no adquieren fácilmente resistencia a péptidos catiónicos, a pesar de la presión evolutiva de millones de años de coexistencia, permanecen como dianas terapéuticas atractivas. En nuestras solicitudes co-pendientes, WO 2006/018652 y WO 2008/093058, describimos la identificación de los péptidos que pueden ser utilizados para tratar las infecciones microbianas, incluyendo infecciones bacterianas.

Una biopelícula microbiana es una comunidad de células microbianas incorporadas en una matriz extracelular de sustancias poliméricas y adherente a una superficie biológica o una no biótica. Un intervalo de microorganismos (bacterias, hongos, y/o protozoarios, con bacteriófagos asociados y otros virus) pueden ser encontrados en estas biopelículas. Las biopelículas son de naturaleza ubicua y son encontradas comúnmente en una gran variedad de ambientes. Las biopelículas son cada vez más reconocidas por la comunidad científica y médica como estando implicadas en muchas infecciones, y especialmente su contribución a la recalcitrancia del tratamiento de la infección.

La formación de biopelículas no es limitada únicamente a la capacidad de los microbios de unirse a una superficie. Los microbios que crecen en una biopelícula pueden interactuar más entre sí que con el substrato físico real en el que el biopelícula se desarrolló inicialmente. Por ejemplo, este fenómeno favorece la transferencia de genes conjugativa, que ocurre en una tasa más grande entre las células en las biopelículas que entre las células planctónicas. Esto representa una oportunidad aumentada para la transferencia horizontal de genes entre las bacterias, y es importante porque esto puede facilitar la transferencia de la resistencia a antibióticos o los genes determinantes de virulencia de los microbios resistentes a los susceptibles. Las bacterias pueden comunicarse entre sí mediante un sistema conocido como detección de quorum, a través del cual las moléculas de señalización son liberadas en el ambiente y su concentración puede ser detectada por los microbios circundantes. El quorum de detección permite a las bacterias coordinar su comportamiento, aumentando así su capacidad de sobrevivir. Las respuestas del quorum de detección incluyen la adaptación a la disponibilidad de nutrientes, la defensa contra otros microorganismos que pueden competir por los mismos nutrientes y el evitar compuestos tóxicos potencialmente peligrosos para las bacterias. Es muy importante para bacterias patógenas durante la infección de un anfitrión (por ejemplo humanos, otros animales o las plantas) coordinar su virulencia para escapar a la respuesta inmunitaria del anfitrión para poder establecer una infección exitosa.

La formación de la biopelícula es clave en muchas enfermedades contagiosas, como la fibrosis cística y periodontitis, en infecciones del torrente sanguíneo y del tracto urinario y como resultado de la presencia de dispositivos médicos permanentes. Los mecanismos sugeridos por los que los microorganismos asociados a biopeliculas producen las enfermedades en su anfitrión incluyen lo siguiente: (i) penetración demorada del agente antibacterial por la matriz de la biopelícula, (ii) separación de las células o agregados de células de las biopeliculas del dispositivo médico permanente, (iii) producción de endotoxinas, (iv) resistencia al sistema inmunológico del anfitrión, (v) provisión de un nicho para la generación de organismos resistentes por transferencia horizontal de genes de resistencia antibacterial y/o genes determinantes de virulencia, y (vi) tasa de crecimiento alterada (es decir letargo metabólico) (Donlan and Costerton, Clin Microbiol Rev 15: 167-193, 2002; Parsek and Singh, Annu Rev Microbiol 57: 677-701 , 2003; Costerton JW, Resistance of biofilms to stress. In The biofilm primer'. (Springer Berlín Heidelberg). pp. 56-64.2007).

La evidencia experimental reciente ha indicado la existencia dentro de las biopeliculas de una pequeña sub-población de células especializadas persistentes que no metabolizan (células inactivas). Es pensado que estas células pueden ser responsables de la alta resistencia/tolerancia de la biopelícula a los agentes antimicrobianos. Las células persistentes tolerantes a múltiples fármacos están presentes en ambas de las poblaciones planctónicas como de biopelícula y parece que las levaduras y las bacterias han evolucionado estrategias análogas que asignan la función de supervivencia a esta sub-población. La protección ofrecida por la matriz polimérica permite a las células persistentes evadir la eliminación y servir como una fuente para la repoblación. Hay evidencia de que las persistentes pueden ser en gran parte responsables de la tolerancia a múltiples fármacos de las biopelículas microbianas (LaFleur et al,. Antimicrob Agents Chemother. 50: 3839-46, 2006; Lewis, Nature Reviews Microbiology 5, 48-56 2007).

Hay un requisito, por lo tanto, para agentes adicionales que puedan ser utilizados para tratar las infecciones microbianas. En particular, permanece una necesidad urgente para activos antimicrobianos adicionales que puedan ser utilizados en el tratamiento de infecciones bacterianas como esas causadas por Staphylococci, Streptococci, Acinetobacter spp., Klebsiella spp., E. coli y Pseudomonas spp. También permanece una necesidad urgente de mejores terapias para prevenir la formación de biopelícul y condiciones de tratamiento asociadas con las biopelículas microbianas.

Los inventores presentes han identificado péptidos que, sorprendentemente, han mejorado la actividad antimicrobiana sobre los péptidos antimicrobianos naturales, tales como las defensinas, catelicidinas, etc. Los compuestos reclamados tienen propiedades antibacteriales potentes, mientras exhiben baja toxicidad in vitro e in vivo a animales y humanos. g DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Según un primer aspecto de la presente invención es proporcionado un péptido en donde por lo menos 75% de los aminoácidos del péptido son aminoácidos de arginina y fenilalanina, por lo menos 50% de los aminoácidos son aminoácidos de arginina y por lo menos 15% de los aminoácidos son aminoácidos de fenilalanina.

Los péptidos de la invención son útiles, entre otras cosas, en el tratamiento o la prevención de infecciones microbianas, en particular las infecciones bacterianas tales como, pero no limitadas a, esas causadas por Staphylococcus spp. y Pseudomonas spp. Los péptidos de la presente invención también son útiles en la prevención y tratamiento de infecciones de biopelícula causadas por estas y otras bacterias.

Generalmente por lo menos 80% de los aminoácidos en el péptido son aminoácidos de arginina y fenilalanina, convenientemente por lo menos 90%, más convenientemente por lo menos 95%, típicamente alrededor de 99% de los aminoácidos en el péptido son aminoácidos de arginina y fenilalanina. Según una modalidad, todos los aminoácidos en el péptido son arginina y fenilalanina.

Generalmente por lo menos 55% de los aminoácidos en el péptido son aminoácidos de arginina, convenientemente por lo menos 60% (por ejemplo 61 %), más convenientemente por lo menos 65%, típicamente alrededor de 70% de los aminoácidos en el péptido son aminoácidos de arginina.

Generalmente por lo menos 20% de los aminoácidos en el péptido son aminoácidos de fenilalanina, convenientemente por lo menos 25%, más convenientemente por lo menos 30%, típicamente alrededor de 30 a 40% (por ejemplo 38%) de los aminoácidos en el péptido son aminoácidos de fenilalanina.

Los aminoácidos del péptido de la presente invención pueden ser D o L-aminoácidos. Los aminoácidos pueden ser isómeros ópticos de un aminoácido catiónico como es definido aquí por ejemplo, D o L-aminoácidos. Los aminoácidos pueden ser naturales o sintéticos. La invención también incluye isómeros conocidos (estructural, estéreo-, conformational y configuracional) y análogos estructurales de los aminoácidos antes mencionados, y esos modificados ya sea naturalmente (por ejemplo modificación post-tranduccional) o químicamente, incluyendo, pero no exclusivamente, fosforilación, glicosilación, sulfonilación y/o hidroxilación.

Según una modalidad de la presente invención, el péptido consiste en aminoácidos de arginina y fenilalanina opcionalmente con hasta cinco sustituciones no de arginina y no de fenilalanina. Generalmente el péptido consiste en aminoácidos de arginina y fenilalanina con cero, uno, dos o tres sustituciones no de arginina y no de fenilalanina, típicamente cero, una o dos sustituciones; ventajosamente cero o una sustitución.

Según una modalidad, el péptido consiste en aminoácidos de arginina y fenilalanina.

Típicamente el péptido de la presente invención puede comprender 1 a 5 sustituciones, convenientemente 1 a 3 sustituciones, generalmente una sustitución. Las sustituciones pueden ser terminales o no terminales.

Las sustituciones pueden consistir en aminoácidos o no aminoácidos. Las sustituciones pueden estar cargadas o no cargadas. Típicamente, una o más de las sustituciones son aminoácidos sin carga. Alternativamente o adicionalmente una o más de las sustituciones pueden ser aminoácidos cargados, en particular aminoácidos catiónicos. Una o más de las sustituciones de aminoácidos puede ser hidrófoba.

Dónde una o más de las sustituciones son sustituciones de aminoácido, ellos pueden ser aminoácidos cargados o no cargados. Las sustituciones del aminoácido pueden ser naturales, o no naturales, sustituciones sintetizadas de aminoácidos.

Generalmente las sustituciones consisten en uno o más aminoácido hidrófobos, y/o uno o más aminoácidos catiónicos.

Como es utilizado aquí, el término "hidrófobo" se refiere a un aminoácido que tiene una cadena lateral que no está cargada a pH fisiológico, que no es polar y que es repelida generalmente por solución acuosa.

Generalmente un residuo hidrófobo de amino tiene una hidrofobicidad más que o igual a -1.10 y una carga menor o igual que 0.

Como es utilizado aquí, el término "catiónico" se refiere a aminoácidos que tienen una carga neta que es más que o igual a 0.

Generalmente el término "catiónico" se refiere a aminoácidos que tienen una carga neta que es más que cero.

Las sustituciones hidrófobas típicas del aminoácido incluyen glicina, leucina, prolina, alanina, triptofano, valina, isoleucina, metionina, tirosina y treonina.

Las sustituciones catiónicas típicas del aminoácido incluyen ornitina, histidina y lisina.

Según una modalidad, el péptido comprende uno o más aminoácidos de cisteína, en particular uno o dos residuos terminales de cisteína.

Según una modalidad, el péptido comprende uno o más sustituciones seleccionadas del grupo de lisina, prolina, glicina e histidina.

Ventajosamente, el péptido consiste en arginina, en fenilalanina y en uno del grupo que consiste en lisina, prolina, glicina e histidina. Ventajosamente el grupo consiste en prolina y glicina.

Generalmente el péptido no comprende los aminoácidos de ácido aspártico, ácido glutámico, asparaginas, glutamina ni serína, pero ciertos péptidos de la invención pueden tener actividad aunque estos aminoácidos estén presentes.

Además, la secuencia de aminoácido de un péptido puede ser modificada para tener como resultado una variante peptídica que incluye la sustitución de por lo menos un residuo de aminoácido en el péptido por otro residuo de aminoácido, incluyendo sustituciones que utilizan la forma D más que la L.

Uno o más de los residuos del péptido pueden ser intercambiados por otro para alterar, aumentar o preservar la actividad biológica del péptido. Tal variante puede tener, por ejemplo, por lo menos aproximadamente 10% de la actividad biológica del correspondiente péptido no variante. Los aminoácidos conservadores a menudo son utilizados, es decir sustituciones de aminoácidos con propiedades químicas y físicas similares como fue descrito antes.

De ahí, por ejemplo, las sustituciones de aminoácidos conservadores pueden implicar intercambiar un aminoácido catiónico por otro, por ejemplo intercambiando arginina por lisina, ornitina o histidina. Alternativamente o adicionalmente, la fenilalanina puede ser intercambiado por glicina, leucina, prolina, alanina, triptofano, valina, isoleucina, metionina, tirosina o treonina. Después de que las sustituciones sean introducidas, las variantes son investigadas para la actividad biológica.

El péptido de la presente invención puede comprender de 2 a 200 aminoácidos, por ejemplo 3, 4, 5, 6, ó 7 hasta 100 aminoácidos, incluyendo 3, 4, 5, 6, ó 7 hasta 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ó 50 aminoácidos. Según una modalidad, el péptido antibacterial comprende 3 ó 4 a 50 aminoácidos.

El péptido puede comprender 100 a 200 aminoácidos, 20 a 100, 20 y 45 aminoácidos como 20, 25, 30, 35, 40, 42 ó 45 aminoácidos. El péptido puede comprender entre 3 y 15 aminoácidos, por ejemplo 5 a 15 aminoácidos por ejemplo 13 a 15 aminoácidos.

Típicamente, el péptido comprende 5 a 20 aminoácidos; convenientemente 5 a 15, más convenientemente 7 a 15, generalmente 10 a 15 aminoácidos, incluyendo 1 1 a 13 aminoácidos.

Según una modalidad, el péptido consiste en 10 a 15 aminoácidos, en particular 1 1 a 13 aminoácidos.

El péptido puede comprender típicamente 5 a 50 aminoácidos de arginina, convenientemente 5 a 30, más convenientemente 5 a 20, generalmente 7 a 10 aminoácidos de arginina.

El péptido puede comprender 1 a 20 aminoácidos de fenilalanina, típicamente 1 a 15, convenientemente 2 a 10, más convenientemente 2 a 5 aminoácidos de fenilalanina.

Generalmente el péptido comprende un elemento principal de arginina con sustituciones de fenilalanina en el mismo.

Generalmente el péptido comprende por lo menos una porción de 3 a 20 aminoácidos contiguos de arginina, típicamente por lo menos una porción de 3 a 10 aminoácidos contiguos de arginina, convenientemente por lo menos una porción de 3 a 5 aminoácidos contiguos de arginina. Alternativamente o adicionalmente el péptido puede comprender por lo menos una porción de 5 a 10 aminoácidos contiguos de arginina.

Generalmente el péptido comprende por lo menos una porción de 1 a 5 aminoácidos contiguos de fenilalanina, típicamente por lo menos una porción de 3 a 5 aminoácidos contiguos de fenilalanina, convenientemente el péptido comprende por lo menos una porción de 3 aminoácidos contiguos de fenilalanina.

Según una modalidad, el péptido comprende más de una porción de fenilalanina; donde cada porción de fenilalanina comprende uno o más aminoácidos de fenilalanina. Generalmente el péptido comprende dos o tres porciones de fenilalanina.

Según una modalidad el péptido no comprende aminoácidos terminales de fenilalanina.

Según una modalidad el péptido comprende un aminoácido terminal de fenilalanina sólo por ejemplo una fenilalanina N-terminal. Preferiblemente el péptido no comprende aminoácidos terminales de fenilalanina en ambos extremos del péptido.

Típicamente el péptido comprende porciones de aminoácido de arginina en uno o ambos extremos, convenientemente las porciones de aminoácido de arginina tienen 1 a 5 aminoácidos de arginina. Alternativamente, el péptido puede comprender una o dos sustituciones terminales no de arginina y no de fenilalanina. Las sustituciones terminales convenientes incluyen las sustituciones descritas antes, en particular histidina, cisteamina y lisina.

El péptido puede comprender un aminoácido de fenilalanina en el C- o N- terminal y un aminoácido de arginina en el respectivo N o C-terminal.

Según una modalidad el péptido comprende un aminoácidos de arginina C-terminal y un aminoácido de fenilalanina N-terminal.

Según una modalidad el péptido no comprende una secuencia (por ejemplo 2 o más) aminoácidos de fenilalanina en el extremo N.

El péptido de la presente invención puede ser simétrico o no simétrico.

Preferiblemente el péptido es acíclico. El péptido puede ser de cadena recta es decir lineal o ramificado. El término "peptide" como es utilizado aquí significa, en términos generales, una pluralidad de residuos de aminoácido unidos juntos por enlaces peptídicos. Es utilizado intercambiablemente y significa lo mismo que polipéptido y proteína.

Según una modalidad de la presente invención, el péptido comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo RRRFRFFFRFRRR, HHHFRFFFRFRRR, KKFPWRLRLRYGRR, RRRRRFFFRFRRR, RRRFRFRFRFRRR, RRRFRFPFRFRRR, RRFRRFFFRRFRR, RRRRFFFRRRR, RRRRFRFRRRR, RRRRFPFRRRR, RRFRRRFRRFR, RRFRRRFRRFG, RRFGRRFRRFG, RRFRRFRRRFG, RRFRRFRRRFR, FRRRRFFFRFRRR, RRRRRFFFRRRRF, FFFFRRRRRFRRR, RRRRFFFFFRRRR, FRRRRFFFRRRRF, RRRYRYYYRYRRR, RRRARAAARARRR, RRRFRRRRRFFFF, RRRFFFFFFFRRR y RRRFRFFFRFRRR-cisteamina. Los péptidos pueden consistir en esencia de estas secuencias de aminoácidos.

Según una modalidad de la presente invención, el péptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo RRRFRFFFRFRRR (NP432), FRRRRFFFRFRRR (NP490), RRRRFFFFFRRRR (NP493) y RRRFRRRRRFFFF (NP497).

Según un segundo aspecto de la presente invención, el péptido comprende una mezcla de aminoácidos hidrófobos y catiónicos. En particular, los aminoácidos hidrófobos son seleccionados del grupo que consiste en glicina, leucina, fenilalanina, prolina, alanina, triptofano, valina, isoleucina, metionina, tirosina y treonina.

El péptido de esta modalidad comprende generalmente aminoácidos de arginina pero no necesariamente comprende aminoácidos de fenilalanina.

Típicamente los aminoácidos hidrófobos son seleccionados del grupo que consiste en fenilalanina, triptofano, tirosina y glicina.

En particular, los aminoácidos catiónicos son seleccionados del grupo que consiste en ornitina, histidina, arginina y lisina. Típicamente los aminoácidos catiónicos son seleccionados del grupo que consiste en arginina y lisina.

Según una modalidad, el péptido comprende aminoácidos de lisina, fenilalanina y arginina.

Según una modalidad adicional, el péptido comprende aminoácidos de lisina, arginina, fenilalanina, prolina, triptofano, tirosina y glicina. Aunque los péptidos de la presente invención no incluyan aminoácidos generalmente de glutamina, algunos de tales péptidos pueden exhibir actividad. Este péptido puede incluir uno o dos aminoácidos de glutamina.

Según una modalidad, los péptidos descritos antes pueden consistir en los aminoácidos especificados con cero, una o dos sustituciones. Generalmente los péptidos de la presente invención consisten de los aminoácidos especificados. Alternativamente, los péptidos de esta modalidad de la presente invención pueden comprender sustituciones como fue detallado antes.

Los péptidos de la segunda modalidad pueden comprender una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en KKPRRKPRRPKRKK (NP449) y KKFPWRLRLRYGRR (NP445).

Los péptidos de la invención son péptidos generalmente sintéticos. Los péptidos pueden ser aislados, péptidos purificados o variantes de los mismos, que pueden ser sintetizados in vitro, por ejemplo, por un método de síntesis de péptido de fase sólida, por síntesis de péptido catalizado por enzima o con ayuda de la tecnología de ADN recombinante.

Para identificar péptidos activos que tienen poca o ninguna toxicidad indeseable para las células mamíferas, para péptidos individuales, o para las bibliotecas de péptidos, pueden ser formadas y los péptidos individuales o los péptidos de esas bibliotecas pueden ser investigados para la actividad y la toxicidad antimicrobiana, incluyendo, pero no limitado a, antimicótica, antibacteriana, antiviral, antiprotozoal, actividad anti-parasitaria y toxicidad.

Los péptidos de la invención pueden existir en formas diferentes, tales como ácidos libres, bases libres, ésteres y otros profármacos, sales y tautómeros, por ejemplo, y la invención incluye todas las formas variantes de los compuestos.

Así, la invención abarca la sal o pro-fármaco de un péptido o variante peptídica de la invención.

Composición Según un aspecto adicional de la presente invención, es proporcionada una composición que comprende uno o más de los péptidos como fue descrito antes, junto con uno o más adyuvantes o excipientes.

Según una modalidad, la composición puede comprender dos o más péptidos de la presente invención. Ventajosamente, la composición comprende uno, dos o tres péptidos de la presente invención.

Los agentes de la invención pueden ser administrados en forma de sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden ser sintetizadas del compuesto de padre que contiene una mitad básica o ácida por métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales pueden ser preparadas reaccionando las formas de ácido o bases libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o el ácido apropiados en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de dos; generalmente, son preferidos medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo. Listass de sales convenientes se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., US, 1985, p. 1418, cuya descripción se incorporan en la presente como referencia; vea también StahI et al, Eds, "Handbook of Pharmaceutical Salts Properties Selection and Use", Verlag Helvética Chimica Acta and Wiley-VCH, 2002. La frase "farmacéuticamente aceptable" se emplea aquí para referirse a esos compuestos, materiales, composiciones, y/o formas de dosis que están, dentro del alcance del juicio médico general, conveniente para uso en contacto con los tejidos de seres humanos o, según sea el caso, un animal sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, conmesurada con una proporción de beneficio/riesgo razonable.

La invención así incluye sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos revelados en donde el compuesto de padre es modificado haciendo sales de ácido o de base del mismo por ejemplo las sales no tóxicas convencionales o las sales cuaternarias de amonio que son formadas, por ejemplo, de ácidos o bases inorgánicos u orgánicos. Ejemplos de tales sales acidas de adición incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, citrato, alcanforato, alcanforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalensulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropíonato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, y undecanoato. Sales básicas incluyen sales amónicas, sales de metal alcalino, tales como sales de sodio y potasio, sales de metal alcalinotérreo tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina, etcétera. También, los grupos básicos que contienen nitrógeno pueden ser cuaternizados con tales agentes como haluros de alquilo inferior, tales como cloruro, bromuro y yoduro de metilo, etilo, propilo, y butilo; sulfatos de dialquilo como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo como bromuros de bencilo y fenetilo y otros.

Las sales de grupos carboxilo de un péptido o variante peptídica de la invención pueden ser preparadas en la manera usual contactando el péptido con uno o más equivalentes de una base deseada tal como, por ejemplo, una base metálica de hidróxido, por ejemplo hidróxido de sodio; un carbonato o bicarbonato metálicos tal como, por ejemplo, carbonato o bicarbonato de sodio; o una base de amina tal como, por ejemplo, trietilamina, trietanolamina y similares.

Los derivados de N-acilo de un grupo amino del péptido o variantes peptídicas de la invención pueden ser preparados utilizando un aminoácido N-acilo protegido para la condensación final, o por acilación de un aminoácido protegido o sin protección. Los derivados de O-acilo pueden ser preparados, por ejemplo, por acilación de un péptido libre de hidroxi o resina peptídica. Cualquier acilación puede ser llevada a cabo utilizando reactivos estándar de acilación tales como haluros de acilo, anhídridos, imidazoles de acilo y similares.

La invención incluye profármacos para la especie farmacéutica activa de los péptidos descritos, por ejemplo, en el que uno o más grupos funcionales son protegidos o derivatizados pero pueden ser convertidos in vivo al grupo funcional, como en el caso de ésteres de ácidos carboxílicos que se convierten in vivo al ácido libre, o en el caso de aminas protegidas, al grupo amino libre. El término "profármaco," como es utilizado aquí, representa estructuras particulares que son transformadas rápidamente in vivo a la estructura padre, por ejemplo, por hidrólisis en la sangre. Una discusión completa es proporcionada en T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987; H Bundgaard, ed, Design of Prodrugs, Elsevier, 1985; and Judkins, et al. Synthetic Communications, 26(23), 4351-4367 (1996), cada uno de los cuales es incorporado a la presente como referencia.

Los profármacos por lo tanto incluyen fármacos que tienen un grupo funcional que ha sido transformado en un derivado reversible del mismo. Típicamente, tales profármacos son transformados al fármaco activo por hidrólisis. Los profármacos también incluyen compuestos convertibles al fármaco activo por una reacción oxidativa o reductiva. Como ejemplos pueden ser mencionados los siguientes: activación oxidativa, desalqulación - N- y O-, desaminación oxidativa, N-oxidación, epoxidación, activación reductiva, reducción azo, reducción de sulfóxido, reducción de bisulfuro, alquilación Bioreductiva y reducción - Nitro.

También a ser mencionado como activaciones metabólicas de profármacos son las activaciones de nucleótidos, activación de fosforilación y activación de descarboxilación.

El uso de grupos protectores es descrito completamente en 'Protective Groups in Organic Chemistry", edited by J W F McOmie, Plenum Press (1973), y "Protective Groups in Organic Synthesis", 2nd edition, T W Greene & P G M Wutz, Wiley-lnterscience (1991).

Así, será apreciado por los expertos en la técnica que, aunque los derivados protegidos de los péptidos descritos pueden no poseer actividad farmacológica como tal, ellos pueden ser administrados, por ejemplo parenteralmente u oralmente, y después metabolizados en el cuerpo para formar compuestos que son farmacológicamente activos. Tales derivados son por lo tanto ejemplos de "profármacos". Los profármacos de AU de los compuestos descritos están incluidos dentro del alcance de la invención.

La composición de la presente invención también incluye uno o más portadores, excipientes, adyuvantes o diluyentes farmacéuticamente aceptables. La frase "farmacéuticamente aceptable" es empleada en la presente para referirse a esos compuestos, materiales, composiciones, y/o formas de dosis que son, dentro del alcance de juicio médico, adecuadas para uso en contacto con los tejidos de seres humanos, o según sea el caso, un animal sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica, o sin otro problema o complicación, conmesurado con una proporción razonable de beneficio/riesgo.

Cuando los péptidos terapéuticos de la invención son preparados para administración oral, ellos son combinados generalmente con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para formar una formulación farmacéutica, o forma de dosis unitaria. Para la administración oral, los péptidos pueden estar presentes como un polvo, una formación granular, una solución, una suspensión, una emulsión o en un polímero o resina naturales o sintéticos para la ingestión de los ingredientes activos de un chicle. Los péptidos activos también pueden ser presentados como un bolo alimenticio, electuario o pasta. Los péptidos terapéuticos oralmente administrados de la invención también pueden ser formulados para la liberación sostenida, por ejemplo, los péptidos pueden ser revestidos, micro-encapsulados, o de otro modo colocados dentro de un dispositivo de liberación sostenida. Los ingredientes activos totales en tales formulaciones comprenden de 0.1 a 99.9% en peso de la formulación.

Así, una o más formas convenientes de la dosis unitaria que comprenden los péptidos terapéuticos de la invención pueden ser administrados por una variedad de rutas incluyendo oral, parenteral (incluyendo rutas subcutánea, intravenosa, intramuscular e intraperitoneal), rectal, dérmico, transdermal, intratorácica, intrapulmonary, mucosal, infraocular e intranasal (respiratoria). Los péptidos terapéuticos también pueden ser formulados en una formulación de lípidos o para liberación sostenida (por ejemplo, utilizando microencapsulación, vea WO 94/07529, y la Patente de EEUU No. 4,962,091 incorporada a la presente como referencia). Las formulaciones pueden, cuando sea apropiado, ser presentadas convenientemente en formas discretas de dosis unitaria y pueden ser preparadas por cualquiera de los métodos bien conocidos a las técnicas farmacéuticas. Tales métodos pueden incluir el paso de mezclar el agente terapéutico con portadores líquidos, matrices sólidas, portadores semisólidos, portadores sólidos finamente divididos o combinaciones de los mismos, y entonces, si es necesario, introducir o moldear el producto en el sistema deseado de suministro.

Las formulaciones farmacéuticas que contienen los péptidos terapéuticos de la invención pueden ser preparadas por procedimientos conocidos en la técnica utilizando ingredientes muy conocidos y fácilmente disponibles. Por ejemplo, el péptido puede ser formulado con excipientes comunes, con diluyentes, o con portadores, y ser formado en tabletas, cápsulas, soluciones, suspensiones, polvos, aerosoles y similares. Ejemplos de excipientes, diluyentes, y de portadores que son propios de tales formulaciones incluyen amortiguadores, así como rellenos y extensores tales como almidón, como la celulosa, como los azúcares, como manitol, y como derivados silícicos. Los agentes de unión también pueden ser incluidos tales como carboximetil celulosa, como hidroximetilcelulosa, como hidroxipropilmetilcelulosa y otros derivados de celulosa, como alginatos, como la gelatina, y como polivinilpirrolidona. Los agentes humectantes pueden ser incluidos tales como glicerol, agentes desintegrantes tales como carbonato de calcio y bicarbonato de sodio. Los agentes para retardar la disolución también pueden ser incluidos tales como parafina. Los aceleradores de la resorción tales como compuestos cuaternarios de amonio también pueden ser incluidos. Los agentes de superficie activa tales como alcohol cetílico y monostearato de glicerol pueden ser incluidos. Los portadores adsorbedores tales como caolín y bentonita pueden ser agregados. Los lubricantes tales como talco, como estearato de calcio y magnesio, y como polietilenglicoles sólidos también pueden ser incluidos. Los conservantes también pueden ser agregados. Las composiciones de la invención también pueden contener agentes que espesamiento tales como celulosa y/o derivados de celulosa. Ellos también pueden contener gomas tales como xantano, goma guar o goma carbo o goma arábiga, o alternativamente polietilen glicoles, bentonas y montmorilonitas, y similares.

Por ejemplo, las tabletas o pastillas que contienen los péptidos de la invención pueden incluir agentes amortiguadores tales como carbonato de calcio, óxido de magnesio y carbonato de magnesio. Los agentes amortiguadores conveniente también pueden incluir ácido acético en una sal, ácido cítrico en una sal, ácido bórico en una sal y ácido fosfórico en una sal. La pastillas y tabletas también pueden incluir ingredientes inactivos tales como celulosa, almidón pregelatinizado, bióxido de silicio, hidroxipropil metilcelulosa, estearato de magnesio, celulosa microcristalina, almidón, talco, bióxido de titanio, ácido benzoico, ácido cítrico, almidón de maíz, aceite mineral, polipropilenglicol, fosfato de sodio, estearato de zinc, y similares. Las cápsulas duras o suaves de gelatina que contienen por lo menos un péptido de la invención pueden contener ingredientes inactivos tales como gelatina, como celulosa microcristalina, como lauril sulfato de sodio, como el almidón, como el talco, y como bióxido de titanio, y similares, así como vehículos líquidos tales como polietilen glicoles (PEGS) y el aceite vegetal. Además, las pastillas o tabletas de revestimiento entérico que contienen uno o más péptidos de la invención son diseñadas para resistir la desintegración en el estómago y disolverse en el ambiente más neutral a alcalino del duodeno.

Los péptidos terapéuticos de la invención también pueden ser formulados como elixires o soluciones para la administración oral conveniente o como soluciones apropiadas para la administración parenteral, por ejemplo por rutas intramuscular, subcutánea, intraperitoneal o intravenosa. Las formulaciones farmacéuticas de los péptidos terapéuticos de la invención también pueden tomar la forma de una solución o dispersión acuosas o anhidra, o alternativamente la forma de una emulsión o suspensión o ungüento.

Así, los péptidos terapéuticos pueden ser formulados para la administración parenteral (por ejemplo por inyección, por ejemplo, inyección de bolo alimenticio o infusión continua) y pueden ser presentados en la forma de dosis unitaria en ampolletas, jeringas pre-llenadas, pequeños contenedores de infusión de volumen o en contenedores de multi-dosis. Como fue notado antes, los conservantes pueden ser agregados para ayudar a mantener la vida de anaquel de la forma de dosis. Los péptidos activos y otros ingredientes pueden formar suspensiones, las soluciones, o las emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener a agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, los péptidos activos y otros ingredientes pueden estar en la forma de polvo, obtenido por aislamiento aséptico de sólido estéril o por liofilización de la solución para la constitución con un vehículo conveniente, por ejemplo, agua estéril y libre de pirógenos antes del uso.

Es posible agregar, si es necesario, un adyuvante escogido de antioxidantes, surfactantes, otros conservantes, formadores de película, agentes de queratolíticos o comedolíticos, los perfumes, los saborizantes y colorantes. Los antioxidantes tales como t-butilhidroquinona, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado y [alfa]-tocoferol y sus derivados pueden ser agregados.

Estas formulaciones pueden contener portadores farmacéuticamente aceptables, vehículos y adyuvantes que son muy conocidos en la técnica. Es posible, por ejemplo, para preparar soluciones utilizanndo uno o más solventes orgánicos que es/son aceptables desde el punto de vista fisiológico, escogido además de agua, de solventes tales como acetona, acético ácido, el etanol, alcohol isopropílico, sulfóxido de dimetilo, éteres de glicol tales como los productos vendidos bajo el nombre de "Dowanol", y poliglicoles y polietilenglicoles, alquil ésteres de C1-C4 de ácidos de cadena corta, el etilo o isopropil lactato, triglicéridos de ácido graso tales como los productos vendidos bajo el nombre de "Miglyoí", isopropil miristrato, aceites animales, minerales y vegetales y polisiloxanos.

Preferiblemente, la composición que está en forma de una formulación farmacéutica de los péptidos terapéuticos de la invención también puede tomar la forma de un solvente o diluyente que comprende el péptido. Los solventes o los diluyentes pueden incluir soluciones ácidas, dimetilsulfona, N-(2- mercaptopropionil) glicina, 2-n-nonil-l,3-dioxolan y alcohol etílico. Preferiblemente el solvente/diluyente es un solvente ácido, por ejemplo, ácido acético, ácido cítrico, ácido bórico, ácido láctico, ácido propionico, ácido fosfórico, ácido benzoico, ácido butírico, ácido malico, ácido malónico, ácido oxálico, ácido succínico o ácido tartárico.

Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención pueden incluir, como ingredientes opcionales, portadores, diluyentes, agentes solubilizantes o emulsionantes farmacéuticamente aceptables, y las sales del tipo que están disponibles en la técnica. Ejemplos de tales sustancias incluyen soluciones salinas normales tales como soluciones salinas fisiológicamente amortiguadas y agua. Ejemplos específicos no limitativos de los portadores y/o los diluyentes que son útiles en las formulaciones farmacéuticas de la presente invención incluyen agua y soluciones salinas amortiguadas fisiológicamente aceptables tales como soluciones salinas amortiguadas con fosfato de pH 7.0-8.0.

Más preferiblemente, el solvente es una solución de ácido acético. El solvente, por ejemplo solución de ácido acético, puede estar presente en la composición a una concentración de menos de 1 %, 0.5%, 0.25%, 0.1 %, 0.05% ó 0.01 % de ácido, por ejemplo ácido acético.

La composición de la presente invención puede comprender uno o más agentes antimicrobianos adicionales. En particular, la composición de la presente invención puede comprender uno o más agentes antibacterianos adicionales.

También está contemplado la combinación de productos que incluyen uno o más péptidos de la presente invención y uno o más de otros antibacteriales, en particular uno o más de otros agentes antibacterianos. La composición de la presente invención puede comprender uno o más de cisteamina (NM001), poliarginina y polilisina, tal como bromhidrato de poli-L-lisina de 10 a 20 kDa (NP108), clorhidrato de poli-L-lisina de 15 a 30 kDa(NP101 ) y clorhidrato de poli-L-arginina de 5 a 15 kDa (NP121).

Adicionalmente, los péptidos son muy convenientes para la formulación como formas de dosis de liberación sostenida y similares. Las formulaciones pueden constituirse de manera que liberan el péptido activo, por ejemplo, en una parte particular del tracto intestinal o respiratorio, posiblemente sobre un periodo de tiempo. Los revestimientos, envolventes, y matrices protectoras pueden hacerse, por ejemplo, de sustancias poliméricas, tales como poliláctido-glicolatos, como liposomas, como microemulsiones, como micropartículas, como nanopartículas, o como las ceras. Estos revestimientos, envolventes, y matrices protectoras son útiles para revestir dispositivos permanentes, por ejemplo stents, catéteres, tubería de diálisis peritoneal, dispositivos de drenado y similares.

Para la administración tópica, los agentes activos pueden ser formulados como es sabido en la técnica para la aplicación directa a un área diana. Las formas acondicionadas principalmente para la aplicación tópica toman la forma, por ejemplo, de cremas, leches, los geles, los polvos, la dispersión o microemulsiones, las lociones espesadas a una extensión mayor o menor, almohadillas impregnadas, los ungüentos o las barras, formulaciones de aerosol (por ejemplo rocíos o espumas), los jabones, los detergentes, las lociones o las barras de jabón. Otras formas convencionales para este fin incluyen vendajes de heridas, vendas revestidas u otras cubiertas de polímero, los ungüentos, las cremas, las lociones, las pastas, las jaleas, los rocíos, y los aerosoles. Así, los péptidos terapéuticos de la invención pueden ser entregados a través de parches o vendas para la administración dérmica. Alternativamente, el péptido puede ser formulado para formar parte de un polímero adhesivo, tal como poliacrilato o copolímero de acrilato/acetato de vinilo. Para aplicaciones a largo plazo quizás sea deseable utilizar microporos y/o laminados de apoyo respirables, de manera que la hidratación o maceración de la piel puedan ser minimizadas. La capa de apoyo puede ser de cualquier espesor apropiado que proporcionará las funciones deseadas de protección y apoyo. Un espesor conveniente será generalmente de aproximadamente 10 a aproximadamente 200 mieras.

Las formulaciones farmacéuticas para la administración tópica pueden comprender, por ejemplo, una solución salina amortiguada fisiológicamente aceptable que contiene entre aproximadamente 0.001 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml, por ejemplo entre 0.1 mg/ml y 10 mg/ml, de uno o de más de los péptidos de la presente invención específicos para la indicación o la enfermedad a ser tratada.

Los ungüentos y cremas pueden, por ejemplo, formularse con una base acuosa u oleosa con la adición de agentes espesantes y/o de gelificación adecuados. Las lociones pueden formularse con una base acuosa u oleosa y generalmente tendrán uno o más agentes emulsificantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes o agentes de color. Los péptidos activos también pueden ser suministrados a través de iontoforesis, por ejemplo, como es revelado en la Patente de EEUU No. 4,140,122; 4,383,529; o 4,051 ,842 que son incorporadas aquí como referencia. El porcentaje en peso de un agente terapéutico del presente de invención en una formulación tópica dependerá de varios factores, pero será generalmente de 0.01 % a 95% del peso total de la formulación, y típicamente 0.1-85% en peso.

Las gotas, tales como gotas para los ojos o gotas para la nariz, pueden ser formuladas con uno o con más de los péptidos terapéuticos en una base acuosa o no acuosa también comprendiendo uno o más agentes de dispersión, agentes de solubilización o agentes de suspensión. Los rocíos líquidos pueden ser bombeados, o son entregados convenientemente de paquetes presurizados. Las gotas pueden ser entregadas a través de una botella cuentagotas tapada sencilla, a través de una botella plástica que está adaptada para entregar contenido líquido por gote, o a través de un cierre especialmente formado.

El péptido terapéutico puede ser formulado además para la administración tópica en la boca o la garganta. Por ejemplo, los ingredientes activos pueden ser formulados como una pastilla comprendiendo además una base saborizada, generalmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden la composición en una base inerte como gelatina y glicerina o como la sacarosa y la acacia; y los enjuagues bucales que comprenden la composición de la presente invención en un portador líquido conveniente. Los péptidos de la invención también pueden ser administrados al tracto respiratorio. Así, la presente invención también proporciona formulaciones farmacéuticas en aerosol y formas de dosis para el uso en los métodos de la invención. En general, tales formas de dosis comprenden una cantidad de por lo menos uno de los agentes de la invención efectiva tratar o prevenir los síntomas clínicos de una infección específica, la indicación o la enfermedad. Cualquier atenuación estadísticamente significativa de uno o más síntomas de una infección, la indicación o la enfermedad que ha sido tratada según el método de la presente invención es considerado siendo un tratamiento de tal infección, de la indicación o de la enfermedad dentro del alcance de la invención.

Alternativamente, para la administración por aspiración o insuflación, la composición puede tomar la forma de un polvo seco, por ejemplo, una combinación de polvo del agente terapéutico y un polvo conveniente de basa tal como la lactosa o el almidón. La composición de polvo puede ser presentada en la forma de dosis unitaria en, por ejemplo, las cápsulas o los cartuchos, o, por ejemplo gelatina o envases en lámina al vacío de los cuales el polvo puede ser administrado con ayuda de un inhalador, con ayuda de insuflador, o con ayuda de un inhalador de dosis medida (vea por ejemplo, el inhalador de dosis presurizada (MDI) y el inhalador de polvo seco revelado en in Aerosols and the Lung, Clarke, S. W. and Davia, D. eds., pp. 197-224, Butterworths, Londres, Inglaterra, 1984).

Los péptidos terapéuticos de la presente invención también pueden ser administrados en una solución acuosa cuando son administrados en un aerosol o forma inhalada. Así, otras formulaciones farmacéuticas en aerosol pueden comprender, por ejemplo, una solución salina amortiguada fisiológicamente aceptable que contiene entre aproximadamente 0.001 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml de uno o de más de los péptidos de la presente invención específica para la indicación o la enfermedad a ser tratada. El aerosol seco en la forma de péptido sólido finamente dividido o partículas de ácido nucleico que no son disueltas o suspendidas en un líquido son también útiles en la práctica de la presente invención. Los péptidos de la presente invención pueden ser formulados como polvos pulverizados y comprenden partículas finamente divididas que tienen un tamaño promedio de partícula de entre aproximadamente 1 y 5 µ?tp, alternativamente entre 2 y 3 pm. Las partículas finamente divididas pueden ser preparadas por pulverización y filtración en tamiz utilizando técnicas muy conocidas en la técnica. Las partículas pueden ser administradas inhalando una cantidad predeterminada del material finamente dividido, que puede estar en forma de un polvo. Será apreciado que el contenido unitario de ingrediente o ingredientes activos contenidos en una dosis individual de aerosol de cada forma de dosis no requiere en sí misma constituir una cantidad efectiva para tratar la infección particular, la indicación o la enfermedad ya que la cantidad efectiva necesaria puede ser alcanzada por la administración de una pluralidad de unidades de dosis. Además, la cantidad efectiva puede ser lograda utilizando menos que la dosis en la forma de la dosis, ya sea individualmente, o en una serie de administraciones.

Para la administración al tracto respiratorio superior (nasal) o inferior por inhalación, los péptidos terapéuticos de la invención son entregados convenientemente de un nebulizador o un paquete presurizado o de otros medios convenientes para entregar un rocío de aerosol. Los paquetes presurizados pueden comprender un propulsor adecuado tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosis puede ser determinada proporcionando una válvula para entregar una cantidad medida. Los nebulizadores incluyen, pero no son limitados a, esos descritos en la Patente de EEUU No. 4,624,251 ; 3,703,173; 3.561 ,444; y 4,635,627 que son incorporadas aquí como referencia. Los sistemas de entrega del aerosol del tipo revelado aquí están disponibles de numerosas fuentes comerciales incluyendo Fisons Corporation (Bedford, Mass.), Schering Corp. (Kenilworth, NJ) and American Pharmoseal Co. (Valencia, CA). Para la administración intra-nasal, el agente terapéutico también puede ser administrado a través de gotas para la nariz, un rocío líquido, tal como a través de un atomizador plástico de botella o inhalador de dosis medida. Atomizadores típicos son los Mistometer (Wintrop) y el Medihaler (Riker).

Además, los ingredientes activos también pueden ser utilizados en la combinación con otros agentes terapéuticos, por ejemplo, aliviadores de dolor, agentes antiinflamatorios, los antihistamínicos, los broncodilatadores y similares, ya sea para las condiciones descritas o para alguna otra condición.

Uso antimicrobiano Según un aspecto adicional de la presente invención es proporcionado un péptido como fue descrito antes para uso en terapia o profilaxis.

Según un aspecto adicional de la presente invención es proporcionado un péptido como fue descrito antes para uso en tratamiento o prevención de una infección o condición antimicrobiana. Generalmente el péptido de la presente invención es embalado y es presentado para el uso en el tratamiento o prevención de una infección o condición antimicrobiana.

Según un aspecto adicional de la presente invención, es proporcionado un método para el tratamiento o prevención de una infección o condición antimicrobiana que comprende el paso de administrar un péptido de la presente invención a un paciente necesitado del mismo.

Los péptidos de la invención son útiles, entre otras cosas, como péptidos antimicrobianos, por ejemplo, contra bacterias, hongos, levaduras, parásitos, protozoarios y virus. El término, "péptido antimicrobiano" puede ser utilizado aquí para definir cualquier péptido que tiene actividad microbicida y/o microbistática y abarca, no exclusivamente, cualquier péptido descrito como teniendo propiedades anti-bacterianas, anti-fúngicas, anti-micóticas, antiparasitarias, anti-protozoarias, anti-víricas, anti-infecciosas, anti-infección y/o germicidas, algicidas, amibicidas, microbicidas, bactericidas, fungicidas, parasiticidas, protozoacidas, protozoicidas.

Por "infección microbiana" se entiende una infección causada por un patógeno bacteriano, parasitario, protozoario, vírico o micótico. Un "patógeno" es definido generalmente como cualquier organismo que causa enfermedad. En particular, los péptidos de la presente invención son útiles como péptidos antibacterianos.

Así, la invención proporciona además un péptido según la invención para el uso como un medicamento. Los péptidos de la invención pueden tener aplicación como agentes antimicobianos in vivo, in vitro y ex vivo.

Un patógeno bacteriano puede ser derivado de una especie bacteriana seleccionada del grupo que consiste en: Staphylococcus spp., por ejemplo Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis; Enterococcus spp., por ejemplo Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium; Streptococcus pyogenes; Listeria spp.; Pseudomonas spp. por ejemplo Pseudomonas aeruginosa; Mycobacterium spp., por ejemplo Mycobacterium tuberculosis; Enterobacter spp.; Klebsiella spp., por ejemplo Klebsiella pneumonía; Campylobacter spp.; Salmonella spp.; Streptococcus spp., por ejemplo Streptococcus Grupo A o B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia; Helicobacter spp., por ejemplo Helicobacter pylori; Neisseria spp., por ejemplo Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis; Borrelia burgdorferi; Shigella spp., por ejemplo Shigella flexneri; Escherichia coli; Haemophilus spp., por ejemplo Haemophilus influenzae; Chlamydia spp., por ejemplo Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci; Francisella fularensis; Bacillus spp., por ejemplo Bacillus anthracis; Clostridia spp., por ejemplo Clostridium botulinum, Clostridium períringens, Clostridium difficile; Yersinia spp., por ejemplo Yersinia pestis; Treponema spp.; Burkholderia spp.; por ejemplo Burkholderia mallei, B. cepacia, B. cepacia compleja y B. pseudomallei, Acinetobacter spp. por ejemplo A. baumanii y A. calcoaceticus; Achromobacter spp. , Achromobacter xylosoxidans.

El patógeno bacteriano puede ser bacteria Gram-Negativa o una bacteria Gram-Positiva. Las bacterias Gram negativas pueden ser seleccionadas del grupo que consiste de Pseudomonas spp. (en particular Pseudomonas aeruginosa); Burkholderia spp (en particular Burkholderia cepacia); Acinetobacter spp. por ejemplo A. baumanii y A. calcoaceticus; Streptococcus spp., por ejemplo Streptococcus Grupo A o B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia y Achromobacter spp., por ejemplo Achromobacter xylosoxidans.

Las bacterias Gram positivas pueden ser seleccionadas del grupo que consiste en Staphylococcus spp. (en particular Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis), Escherichia coli; Clostridia spp., por ejemplo Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; y Enterococcus spp., por ejemplo Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium.

El patógeno bacteriano puede ser seleccionado del grupo que consiste de Staphylococcus spp. (en particular Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis); Pseudomonas spp. (en particular Pseudomonas aeruginosa); Burkholderia spp (en particular Burkholderia cepacia), Escherichia coli; Acinetobacter spp. por ejemplo A. baumanii y A. calcoaceticus; Clostridia spp., por ejemplo Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; Enterococcus spp., por ejemplo Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium; Streptococcus spp., por ejemplo Streptococcus Grupo A o B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia y Achromobacter spp., Achromobacter xylosoxidans.

El patógeno bacteriano puede ser seleccionado del grupo que consiste en Staphylococcus spp. (en particular Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis) y Pseudomonas spp. (en particular Pseudomonas aeruginosa).

La enfermedad o la condición/infección antimicrobiana puede ser seleccionada del grupo que consiste en diviesos, furúnculos, celulitis, ¡mpétigo, infecciones de nosocomio, bacteremia, neumonía, osteomielitis, endocarditis, meningitis, abscesos, fibrosis cística (en particular infecciones pulmonares en pacientes con fibrosis quística), infecciones gastrointestinales, infecciones genitourinarias, septicemia, faringitis, fasciitis necrotizante, glomerulonefritis aguda, otitis media, heridas, ántrax, encefalitis, difteria, gangrena de gas, botulismo y tétanos.

Alternativamente, los péptidos de la presente invención pueden ser utilizados para tratar o aliviar una enfermedad o condición seleccionada del grupo que consiste en gonorrea, meningitis, neumonía, otitis media, osteomielitis, fibrosis quística (en particular infecciones pulmonares en pacientes con fibrosis quística), infecciones genitourinarias, peritonitis, conjuntivitis, septicemia, enfermedad venérea, bacteremia, infecciones de nosocomio, disentería, infecciones gastrointestinales, fiebre tifoidea, peste neumónica, heridas, cólera, infecciones de riñon, meliodiosis, conjuntivitis, pertussis, tularemia, brucelosis, enfermedad de Legionario, enfermedad de úlcera péptica, tifus, faringitis.

La enfermedad o la condición a ser tratada puede ser contribuida o causada por una infección bacteriana oportunista, incluyendo enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste en infecciones del tracto urinario, infecciones del tracto respiratorio, dermatitis, infecciones del tejido suave, bacteremia, infecciones de huesos y articulaciones, infecciones gastrointestinales e infecciones bacterianas sistémicas en pacientes con quemaduras severas, cáncer, fibrosis quística o SIDA.

Los péptidos de la presente invención pueden tener una concentración inhibitoria mínima (MIC) de 32 g/ml o menos contra los patógenos microbianos Gram positivos, en particular patógenos bacterianos. Generalmente los péptidos tienen un MIC de 20 Mg/ml o menos, típicamente 16 pg/ml o menos, convenientemente 10 pg/ml o menos contra los patógenos microbianos Gram positivos. Ventajosamente, los péptidos de la presente invención tienen un MIC de alrededor de 8 pg/ml contra patógenos microbianos Gram positivos, en particular patógenos bacterianos Gram positivos.

Los péptidos de la presente invención pueden tener una concentración inhibitoria mínima (MIC) de 70 pg/ml o menos contra patógenos microbianos Gram negativos, en particular patógenos bacterianos. Generalmente los péptidos tienen un MIC de 50 g/ml o menos, típicamente 40 pg/ml o menos, convenientemente 30 pg/ml o menos contra los patógenos microbianos Gram negativos. Ventajosamente, los péptidos de la presente invención tienen un MIC de menos de 30 pg/ml contra los patógenos microbianos Gram negativos, en particular patógenos bacterianos Gram negativos.

El MIC es medido generalmente a un pH de alrededor de 7.

Los péptidos de la presente invención pueden tener una concentración bactericida mínima (MBC) de 250 Mg/ml o menos contra los patógenos bacterianos Gram negativos y Gram positivos. Generalmente los péptidos tienen un MIC de 125 g/ml o menos, típicamente 100 g/ml o menos, convenientemente 60 g/ml o menos contra patógenos bacterianos Gram negativos y Gram positivos. Ventajosamente, los péptidos de la presente invención tienen un MIC de menos de 40 pg/ml contra los patógenos bacterianos Gram negativos y Gram positivos.

Un patógeno vírico puede ser derivado de un virus seleccionado del grupo que consiste en: El Virus de la Inmunodeficiencia Humana (HTVI & 2); Virus de Leucemia de Células T Humanas (HTLV 1 & 2); Virus del Ebola; Virus del Papiloma Humano (por ejemplo HPV-2, HPV-5, HPV-8 HPV-16, HPV-18, HPV-31 , HPV-33, HPV-52, HPV-54 y HPV-56); papovavirus; rinovirus; poliovirus; herpesvirus; adenovirus; virus Epstein Barr; Virus de la Influenza, virus de la hepatitis B y C, virus de Varióla, rotavirus o coronavirus de SARS.

Un patógeno parasítico puede ser derivado de un patógeno parasítico seleccionado del grupo que consiste en Trypanosoma spp. (Trypanosoma cruzi, Trypansosoma brucei), Leishmania spp., Giardia spp., Trichomonas spp., Entamoeba spp., Naegleria spp., Acanthamoeba spp., Schistosoma spp., Plasmodium spp., Crytosporidium spp., Isospora spp., Balantidium spp., Loa Loa, Ascaris lumbrícoides, Dirofilaria immitis, Toxoplasma ssp., por ejemplo Toxoplasma gondü. Un patógeno micótico puede ser derivado de un patógeno micótico que es del género Candida spp., (por ejemplo C. albicans), Epidermophyton spp., Exophiala spp., Microsporum spp., Trichophyton spp., (por ejemplo T. rubrum y T. interdigitale), linea spp., Aspergillus spp., Blastomyces spp., Blastoschizomyces spp., Coccidioides spp., Cryptococcus spp., Histoplasma spp., Paracoccidiomyces spp., Sporothrix spp., Absidia spp., Cladophialophora spp., Fonsecaea spp., Phialophora spp., Lacazia spp., Arthrographis spp., Acremonium spp., Actinomadura spp., Apophysomyces spp., Emmonsia spp., Basidiobolus spp., Beauveria spp., Chrysosporium spp., Conidiobolus spp., Cunninghamella spp., Fusarium spp., Geotrichum spp., Graphium spp., Leptosphaeria spp., Malassezia spp., /Wwcor spp., Neotestudina spp., Nocardia spp., Nocardiopsis spp., Paecilomyces spp., Phoma spp., Piedraia spp., Pneumocystis spp., Pseudallescheria spp., Pyrenochaeta spp., Rhizomucor spp., Rhizopus spp., Rhodotorula spp., Saccharomyces spp., Scedosporium spp., Scopulariopsis spp., Sporobolomyces spp., Syncephalastrum spp., Trichoderma spp., Trichosporon spp., Ulocladium spp., Ustilago spp., Verticillium spp., Wangiella spp..

La infección microbiana puede ser una infección sistémica, tópica, subcutánea, cutánea o mucosal micótica.

Las infecciones micóticas pueden ser clasificadas como sistémicas, significando que la infección es profunda y afecta órganos internos o sangre soportada o tópica (dermatofítica), significando que la infección es superficial y ocurre en la piel. Adicionalmente, las infecciones de levadura pueden afectar las membranas mucosas del cuerpo. Las infecciones de levaduras también pueden ser sistémicas (por ejemplo candidemia y otras condiciones con frecuencia fatales). Las infecciones micóticas en la piel son tratadas generalmente con cremas o ungüentos (fármacos antimicóticos tópicos). Sin embargo, las infecciones sistémicas, las infecciones de levaduras o infecciones tópicas que no se eliminan después del tratamiento con cremas o ungüentos pueden necesitar ser tratadas con fármacos antimicóticos sistémicos (oral o IV). Estos fármacos son utilizados, por ejemplo, para tratar las infecciones micóticas comunes como tinea (tiña), que ocurre en la piel o candidiasis (una infección de levadura, también conocida como afta), que puede ocurrir en la garganta, en la vagina, o en otras partes del cuerpo. Los fármacos antimicóticos sistémicos también son utilizados para tratar otras infecciones micóticas profundas tales como histoplasmosis, como blastomicosis, y como aspergilosis, que puede afectar los pulmones y otros órganos. Son utilizados a veces para prevenir o tratar las infecciones micóticas en personas cuyos sistemas inmunológicos están debilitados, tales como en pacientes con trasplantes de médula ósea u órganos y como las personas con VIH-SIDA.

Las infecciones micóticas tópicas o dermatofíticas, aunque no son típicamente causantes de la muerte o de enfermedades grave, son predominantes y son económicamente importantes porque pueden ser caras de tratar. Las infecciones micóticas tópicas o superficiales pueden incluir ésas de la piel, la lámina, la estrato córneo, las uñas y el pelo. Las infecciones cutáneas son infecciones de la piel, uñas de las manos y uñas de los pies.

En un aspecto preferido de la invención, la infección micótica es onicomicosis. La onicomicosis puede ser causada por un hongo de, pero no limitado a, el género Trichophyton spp., por ejemplo, el hongo puede ser Trichophyton interdigitale o Trichophyton rubrum.

El término "onicomicosis" incluye, pero no es limitado a, los tipos de onicomicosis subungueal lateral próximo, blanco superficial, subungueal próximo blanco, distrófico secundario, distrófico primario, endonix, candidal (por ejemplo onicolisis y la enfermedad crónica mucocutánea). Se ha demostrado que la onicomicosis es un factor significativo de riesgo para complicaciones clínicas más graves, tales como celulitis bacteriana aguda del brazo/pierna y otras infecciones bacterianas secundarias, así la presente invención abarca el tratamiento de estas infecciones.

El término "tratamiento" se relaciona a los efectos de los péptidos descritos aquí que imparten un beneficio a pacientes afligidos con una enfermedad (contagiosa), incluyendo una mejora en la condición del paciente o la demora en la progresión de la enfermedad.

Los péptidos de la invención, incluyendo sus sales, son administrados para lograr una reducción en por lo menos un síntoma asociado con una infección, indicación o enfermedad, o con una disminución en la cantidad de anticuerpos asociados con la indicación o la enfermedad.

Los péptidos de la invención también pueden ser útiles en el tratamiento o la prevención de, entre otras, heridas, úlceras y lesiones por ejemplo, heridas cutáneas tales como cortes o quemaduras, y las condiciones asociadas con las mismas.

Como es utilizado aquí "tratamiento de una herida" puede incluir la curación de heridas y condiciones y terapia asociadas que promueven, aumentan, o aceleran la curación de tejidos e incluye cicatrices postoperatorias, quemaduras, soriasis, aceleración de remodelación de tejido, por ejemplo, post-cirugía estética y trasplante de órgano.

Así, en un aspecto adicional de la invención es proporcionado un sustrato al que un péptido de la invención es aplicado o es unido. Preferiblemente, el sustrato es propio para aplicación a heridas o entrega a sitios heridos. Preferiblemente, el sustrato permite la transferencia de los péptidos de la invención del sustrato a una cama de herida para lograr su efecto antibiótico. El sustrato puede ser un vendaje, por ejemplo, vendaje de herida. El vendaje puede comprender un material de tela o puede ser un material similar a colágeno.

Los péptidos de la invención también pueden encontrar aplicación como/en un desinfectante, en este contexto, el péptido o las composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser aplicadas, ya sea solas o en combinación con otros agentes desinfectantes, a una superficie a ser tratada. Como es utilizado aquí una "superficie a ser tratada" puede ser un sustrato como es definido aquí o un dispositivo médico. En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para tratar o prevenir una infección microbiana en un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido según la invención.

Los mamíferos, los pájaros y otros animales pueden ser tratados por los péptidos, las composiciones o los métodos descritos aquí. Tales mamíferos y pájaros incluyen a humanos, perros, gatos y ganado, tales como caballos, ganado, ovejas, cabras, pollos y pavos y similares. Además, las plantas también pueden ser tratadas por los péptidos, las composiciones o los métodos de la invención.

Cuando el sujeto es un animal, los péptidos de la invención pueden ser administrados tópicamente o sistémicamente. En particular, los péptidos pueden ser aplicados a la carne del animal o a características similares a uñas, incluyendo, pero no exclusivo a, pezuña, garras y trotones.

Los péptidos de la presente invención son generalmente no tóxicos, y generalmente son tolerados bien por mamíferos, pájaros, animales y plantas. Típicamente los péptidos de la presente invención son tolerados bien en dosis de 2 a 10 mg/kg o más, convenientemente 2 a 6 mg/kg. Por ejemplo el péptido NP432 fue encontrado siendo no letal a ratones en una dosis de alrededor de 5 mg/kg.

Para lograr los efectos deseados, el péptido, una variante del mismo o una combinación del mismo, puede ser administrada como dosis únicas o divididas, por ejemplo, de por lo menos aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 500 a 750 mg/kg, de por lo menos aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 300 a 500 mg/kg, por lo menos aproximadamente 0.1 mg/kg a aproximadamente 100 a 300 mg/kg o por lo menos aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 50 a 100 mg/kg de peso corporal o por lo menos aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal, aunque otras dosis puedan proporcionar resultados beneficiosos. La cantidad administrada variará dependiendo de varios factores incluyendo, pero no limitados a, el péptido escogido y sus efectos clínicos, la enfermedad, el peso, la condición física, la salud, la edad del mamífero, si prevención o tratamiento será logrado, y si el péptido es modificado químicamente. Tales factores pueden ser determinados fácilmente por el clínico que examina los datos empíricos de las pruebas clínicas y examina los resultados del modelo animal preclínico u otros sistemas de prueba que están disponibles en la técnica.

La administración de los agentes terapéuticos de acuerdo con la presente invención puede estar en una dosis única, en múltiples dosis, en una manera continua o intermitente, dependiendo, por ejemplo, en la condición fisiológica del recipiente, si el propósito de la administración es terapéutico o profiláctico, y otros factores conocidos a los practicantes expertos. La administración de los péptidos de la invención puede ser en esencia continua sobre un periodo de tiempo preseleccionado o puede estar en una serie de dosis espaciadas. Ambas de la administración local y sistémica son contempladas.

Para preparar la composición, los péptidos son sintetizados o de otro modo son obtenidos, purificados como sea necesario o deseado, y entonces generalmente liofilizados y estabilizados. El péptido entonces puede ser ajustado a la concentración apropiada y opcionalmente combinado con otros agentes. El peso absoluto de un péptido dado incluido en una dosis unitaria puede variar extensamente. Por ejemplo, aproximadamente 0.01 a aproximadamente 2 g o aproximadamente 0.01 a aproximadamente 500 mg, de por lo menos un péptido de la invención, o de una pluralidad de péptidos específicos para un particular tipo de célula puede ser administrado. Alternativamente, la dosis unitaria puede variar de aproximadamente 0.01 g a aproximadamente 50 g, de aproximadamente 0.01 g a aproximadamente 35 g, de aproximadamente 0.1 g a aproximadamente 25 g, de aproximadamente 0.5 g a aproximadamente 12 g, de aproximadamente 0.5 g a aproximadamente 8 g, de aproximadamente 0.5 g a aproximadamente 4 g, o de aproximadamente 0.5 g a aproximadamente 2 g.

Las dosis diarias de los péptidos de la invención pueden variar también. Tales dosis diarias pueden variar, por ejemplo, de aproximadamente 0.001 g/día a aproximadamente 100 o 50 g/día, de aproximadamente 0.1 g/día aacerca de 25g/día, de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 12 g/día, de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 5 g/día, de aproximadamente 0.1 g/día a cerca de 2.5g/día de aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 2 g/día, de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 8 g/día, de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 4 g/día, de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 2 g/día, y de aproximadamente 0.5 g/día a aproximadamente 1 g/día.

Efecto sinérgico Preferiblemente la composición incluye uno o más agentes antimicrobianos que actúan sinérgicamente con los péptidos de la presente invención. Típicamente, el efecto sinérgico tiene como resultado un efecto antimicrobiano aumentado. Generalmente los agentes combinados son asociados con propiedades antimicrobianas por lo menos 10% mayor que las propiedades antimicrobianas aditivas de los dos o más agentes; típicamente por lo menos 20% mayor; convenientemente por lo menos 30% mayor; ventajosamente por lo menos 50% mayor que las propiedades antímicrobíanas aditivas de los dos o más agentes.

Generalmente el agente antimicrobiano es un agente antibacteriano y la composición exhibe un efecto sinérgicamente alto antibacteríano.

El efecto antibacteriano sinérgicamente alto puede ser evidente con respecto a y uno del grupo que consiste en: Staphylococcus spp., por ejemplo Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis; Enterococcus spp., por ejemplo Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium; Streptococcus pyogenes; Listería spp.; Pseudomonas spp. por ejemplo Pseudomonas aeruginosa; Mycobacterium spp., por ejemplo Mycobacterium tuberculosis; Enterobacter spp.; Klebsiella spp., por ejemplo Klebsiella pneumonía; Campylobacter spp.; Salmonella spp.; Streptococcus spp., por ejemplo Streptococcus Grupo A o B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia; Helicobacter spp., por ejemplo Helicobacter pylori; Neisseria spp., por ejemplo Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis; Borrelia burgdor eri; Shigella spp., por ejemplo Shigella flexneri; Escherichia coli; Haemophilus spp., por ejemplo Haemophilus influenzae; Chlamydia spp., por ejemplo Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci; Francisella fularensis; Bacillus spp., por ejemplo Bacillus anthracis; Clostridia spp., por ejemplo Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; Yersinia spp., por ejemplo Yersinia pestis; Treponema spp.; Burkholderia spp.; por ejemplo Burkholderia mallei, B. cepacia, B. cepacia compleja y B. pseudomallei, Acinetobacter spp. por ejemplo A. baumanii y A. calcoaceticus; Achromobacter spp. , Achromobacter xylosoxidans.

El efecto sinérgico puede ser especialmente evidente con respecto a bacterias P. aeruginosa, S. epidermidis y S. aureus; incluyendo contra biopelículas bacterianas que comprenden tales patógenos bacterianos.

Alternativamente, el efecto sinérgico puede ser evidente debido a una toxicidad sorprendentemente baja asociada con los agentes combinados. Generalmente los agentes combinados son asociados con una toxicidad de por lo menos 10% menor que la toxicidad asociada aditiva de los dos o más agentes; típicamente por lo menos 20% menor; convenientemente por lo menos 30% menor; ventajosamente por lo menos 50% menor que la toxicidad asociada aditiva de los dos o más agentes.

Un efecto sinérgico puede ser exhibido por una combinación de uno o de más de los péptidos de la presente invención y de uno o más otros péptidos antibacterianos.

Según una modalidad, los péptidos antibacterianos pueden estar según la Fórmula siguiente: ((X)l(Y)m)n en donde 1 y m son enteros de 1 a 10, por ejemplo 0 a 5; n es un entero de 1 a 10; X y Y, que pueden ser el mismo o diferente, es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en aminoácidos hidrófobos y/o aminoácidos catiónicos. En un aspecto preferido de la invención, el péptido antibacteriano comprende de 3 a 200 aminoácidos, por ejemplo 3, 4, 5, 6 ó 7 hasta 100 aminoácidos, incluyendo 3, 4, 5, 6, ó 7 hasta 20, 25, 30, 35, 40 ó 42 aminoácidos. El péptido antibacteriano puede comprender 100 a 200 aminoácidos, 27 a 100 aminoácidos, 28 a 86 aminoácidos, 7 a 27 aminoácidos o 3 a 14 aminoácidos. Típicamente el péptido antibacteriano comprende 3 a 15 aminoácidos (por ejemplo 13 a 15), por ejemplo 3 a 7 aminoácidos. X y Y pueden ser seleccionados de fenilalanina y arginina. X puede ser un aminoácido de fenilalanina y Y puede ser un aminoácido de arginina.

Según una modalidad, se proporciona una composición sinérgica que incluye un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo RRRFRFFFRFRRR, HHHFRFFFRFRRR, KKFPWRLRLRYGRR, RRRRRFFFRFRRR, RRRFRFRFRFRRR, RRRFRFPFRFRRR, RRFRRFFFRRFRR, RRRRFFFRRRR, RRRRFRFRRRR, RRRRFPFRRRR, RRFRRRFRRFR, RRFRRRFRRFG, RRFGRRFRRFG, RRFRRFRRRFG, RRFRRFRRRFR, FRRRRFFFRFRRR, RRRRRFFFRRRRF, FFFFRRRRRFRRR, RRRRFFFFFRRRR, FRRRRFFFRRRRF, RRRYRYYYRYRRR, RRRARAAARARRR, RRRFRRRRRFFFF, RRRFFFFFFFRRR y RRRFRFFFRFRRR-cisteamina junto con uno o más de cisteamina (NM001), poliarginina y polilisina, tal como bromhidrato de poli-L-lisina de10 a 20 kDa (NP108).

Según una modalidad, la composición comprende uno de RRRFRFFFRFRRR (NP432), RRRRRFFFRFRRR (NP 465), RRRFRFRFRFRRR (NP 466) y RRRFRFPFRFRRR (NP 467) y uno de cisteamina y polilisina, tal como bromhidrato de poli-L-lisina de 10 a 20 kDa (NP108).

Según una modalidad, la composición comprende uno de RRRFRFFFRFRRR (NP432), FRRRRFFFRFRRR (NP490), RRRRFFFFFRRRR (NP493) y RRRFRRRRRFFFF (NP497) y uno de cisteamina y polilisina, tal como bromhidrato de poli-L-lisina de 10 a 20 kDa (NP108).

A través de la descripción y reivindicaciones de esta especificación, las palabras "comprende" y "contiene" y las variaciones de las palabras, por ejemplo "que comprende" y "comprende", significa "incluyendo pero no limitado a", y no es pensado para (y no lo hace) excluir otras mitades, aditivos, componentes, enteros o pasos.

A través de la descripción y reivindicaciones de esta especificación, el singular abarca el plural a menos que el contexto de otro modo lo requiera. En particular, cuando se utiliza el artículo indefinido, debe entenderse que la especificación contempla el plural y el singular, a menos que el contexto dicte lo contrario.

Los rasgos, enteros, características, compuestos, porciones químicas o grupos descritos en conjunto con un aspecto, modalidad o ejemplo en particular de la invención deben entenderse como que se aplican a cualquier otro aspecto, modalidad o ejemplo descrito aquí a menos que sean incompatibles con los mismos.

La presente invención ahora será descrita sólo con referencia a los dibujos que la acompañan en los cuales: CUADRO A Concentración inhibitoria mínima (MIC) y concentración bactericida mínima (MBC) de los péptidos contra varias especies bacterianas Gram positivas CUADRO A (CONTINUACIÓN) CUADRO A1 Concentración inhibitoria mínima (MIC) y concentración bactericida mínima (MBC) de los péptidos contra varias especies bacterianas Gram positivas y especies bacterianas Gram negativas CUADRO A1 (CONTINUACIÓN CUADRO A2 Concentración inhibitoria mínima (MIC) y concentración bactericida mínima (MBC) de los péptidos contra varias especies bacterianas Gram positivas y especies bacterianas Gram negativas CUADRO A2 (CONTINUACIÓN) CUADRO A3 Concentración inhibitoria mínima (MIC) y concentración bactericida mínima (MBC) de los péptidos contra varias especies bacterianas Gram positivas y especies bacterianas Gram negativas CUADRO A3 (CONTINUACIÓN) CUADRO B Concentración inhibitoria mínima promedio (MIC) de los péptidos contra CUADRO C Concentración inhibitoria mínima (MIC) y concentración bactericida mínima (MBC) de péptidos contra varias especies antimicrobianas Leyenda Efectos tóxicos actividad <100pg/ml actividad a 100-500pg/ml NP más prometedores Exp#1-2 MIC (pg/ml a pH 7 Citotoxicidad de Hemotoxicida NP Secuencia A549 d a 1 mg/ml S. epidermidis S. aureus S. aureus P. aeruginosa P. aeruginosa P. aeruginosa CUADRO C1 Concentración inhibitoria mínima (MIC) y concentración bactericida mínima (MBC) de péptidos contra varias especies antimicrobianas CUADRO C1 (CONTINUACIÓN) BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 detalla el MIC de NP432, de NP432 y NM001 y de NP432 y NP108 al variar las concentraciones contra biopelícula de P. aeruginosa; La figura 2 detalla el MIC de NP445, de NP445 y NM001 y de NP445 y NP108 al variar las concentraciones contra la biopélicula de P aeruginosa; La figura 3 detalla el MIC de NP432 y NM001 y de NP432 y NP108 al variar las concentraciones contra la biopelícula de S. aureus; La figura 4 detalla el MIC de NP445, de NP445 y NM001 y de NP445 y NP108 al variar las concentraciones contra la biopelícula de S. aureus; La figura 5 detalla el MBEC de colistina, NP 08 y NP432 en concentraciones de 0 a 2500 pg/ml contra la biopelícula bacteriana de P. aeruginosa; La figura 6 detalla el MBEC de combinaciones de NP108 -NM001 , NP432 - NM001 y NP432-NP108 contra la biopelícula de P. aeruginosa a concentraciones de 0 a 600 pg/ml; La figura 7 detalla el MBEC de colistina, NP108 y NP432 a concentraciones de 0 a 2500 pg/ml contra la biopelícula bacteriana de S. aureus; La figura 8 detallas el MBEC de combinaciones de NP108 - NM001 , NP432 - NM001 y NP432-NP108 contra la biopelícula de S. aureus a concentraciones de 0 a 600 g/ml.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Las biopelículas bacterianas de P. Aeruginosa y S. Aureus fueron cultivadas en agar de Mueller-Hinton en placas separadas de 96 pozos de microvaloracion durante 21 horas a 37 grados centígrados. Las células planctónicas y medio entonces fueron removidos y las biopelículas bacterianas fueron lavadas tres veces con solución amortiguadora de fosfato a un pH de alrededor de 7. Las diluciones de dos veces de tres agentes antimicrobianos diferentes en el caldo de Mueller Hinton entonces fueron añadidas a las biopelículas bacterianas. Las placas de microvaloracion fueron incubadas a 37 grados centígrados durante 24 horas. El medio entonces fue transferido a una placa fresca de microvaloracion y la densidad óptica de la biopelícula bacteriana fue medida a 625 nm en un lector de placa de microvaloracion (BioTek Powerwave, XS, Winooski, EEUU.

Los agentes antimicrobianos probados fueron Colistina, NP108 y NP432. En primer lugar, la actividad de los agentes antimicrobianos a concentraciones de 0 a 2500 pg/ml fue probada, entonces la actividad de los agentes antimicrobianos a concentraciones de 0 a 600 g/ml fue probada. Los resultados son resumidos en las figuras 5 a 8. Estas figuras evidencian el efecto antimicrobiano de un péptido de la presente invención (NP432) contra las biopelículas bacterianas de P. Aeruginosa y contra la biopelícula bacteriana de S. Aureus. El efecto antibacterial es comparativo a agentes antibacteriales conocidos.

EJEMPLO 2 Biopelículas bacterianas de P. Aeruginosa y S. aureus fueron cultivadas en agar de Mueller-Hinton en placas separadas de 96 pozos de microvaloración durante 18 horas a 37 grados centígrados. Las células planctónicas y medio entonces fueron removidos y las biopelículas bacterianas fueron lavadas tres veces con solución amortiguadora de fosfato a un pH de alrededor de 7. Las diluciones de dos veces de tres agentes antimicrobianos diferentes en el caldo de Mueller Hinton entonces fueron añadidas a las biopelículas bacterianas. Las placas de microvaloración fueron incubadas a 37 grados centígrados durante 24 horas. El medio entonces fue transferido a una placa fresca de microvaloración y la densidad óptica de la biopelícula bacteriana fue medida a 625 nm en un lector de placa de microvaloración (BioTek Powerwave, XS, Winooski, EEUU.

Los agentes antimicrobianos probados fueron NP432 solo, una combinación de NP432 y NM001 a igual concentración, una combinación de NP432 y NP108 a igual concentración, NP445 solo, una combinación de NP445 y ????? a igual concentración, una combinación de NP445 y NP108 a igual concentración. Los agentes antibacteriales fueron probados en concentraciones de 0 a 1 mg/ml contra biopelículas bacterianas de P. aeruginosa y biopelículas bacterianas de S. aureus. Los resultados son resumidos en las figuras 1 a 4. Estas figuras evidencian el efecto antimicrobiano de un péptido de la presente invención (NP432 y NP445) contra las biopelículas bacterianas de P. aeruginosa y contra la biopelícula bacteriana de S. aureus, solo y en combinación con NM001 y NP108.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Un péptido en donde por lo menos 75% de los aminoácidos del péptido son aminoácidos de arginina y fenilalanina, por lo menos 50% de los aminoácidos son aminoácidos de arginina y por lo menos 15% de los aminoácidos son aminoácidos de fenilalanina.

2. El péptido de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque consiste en aminoácidos de arginina y fenilalanina y cero a cinco sustituciones no de arginina y no de fenilalanina.

3. El péptido de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque comprende una o más sustituciones seleccionadas del grupo que consiste en lisina, prolina, glicina e histidina.

4. El péptido de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque consiste en arginina, en fenilalanina y en uno del grupo que consiste en lisina, prolina, glicina e histidina.

5. El péptido de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque consiste en aminoácidos de arginina y fenilalanina.

6. El péptido de conformidad con cualquier reivindicación precedente, caracterizado además porque comprende 3 a 200 aminoácidos, preferiblemente 5 a 50 aminoácidos, más preferiblemente 5 a 15 aminoácidos.

7. El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque consiste en 3 a 200 aminoácidos, preferiblemente 5 a 60 aminoácidos, más preferiblemente 5 a 15 aminoácidos.

8. El péptido de conformidad con la cualquier reivindicación precedente, caracterizado además porque comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo RRRFRFFFRFRRR, HHHFRFFFRFRRR, KKFPWRLRLRYGRR, RRRRRFFFRFRRR, RRRFRFRFRFRRR, RRRFRFPFRFRRR, RRFRRFFFRRFRR, RRRRFFFRRRR, RRRRFRFRRRR, RRRRFPFRRRR, RRFRRRFRRFR, RRFRRRFRRFG, RRFGRRFRRFG, RRFRRFRRRFG, RRFRRFRRRFR, FRRRRFFFRFRRR, RRRRRFFFRRRRF, FFFFRRRRRFRRR, RRRRFFFFFRRRR, FRRRRFFFRRRRF, RRRYRYYYRYRRR, RRRARAAARARRR, RRRFRRRRRFFFF, RRRFFFFFFFRRR.

9. Un péptido que comprende aminoácidos de lisina, fenilalanina arginina.

10. Un péptido que comprende aminoácidos de lisina, arginina, fenilalanina, prolina, triptofano, tirosina y glicina

1 1. El péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 9 y 10, caracterizado además porque comprende una secuencia de aminoácidos KKPRRKPRRPKRKK o KKFPWRLRLRYGRR.

12. El péptido de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, o una variante peptídica del mismo, para usarse como un medicamento.

13. El péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 , o una variante peptídica o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usarse en el tratamiento o el alivio de una infección o condición antimicrobiana.

14. El péptido de conformidad con la reivindicación 3, en donde la infección o condición antimicrobiana es contribuida o causada por un patógeno bacteriano, parasitario, protozoal, vírico o micótico.

15. El péptido de conformidad con la reivindicación 14, en donde la infección o condición antimicrobiana es contribuida o causada por un patógeno bacteriano.

16. El péptido de conformidad con la reivindicación 15, en donde el patógeno bacteriano es una bacteria Gram negativa.

17. El péptido de conformidad con la reivindicación 16, en donde la bacteria Gram negativa es seleccionada del grupo que consiste en Pseudomonas spp. (en particular Pseudomonas aeruginosa); Burkholderia spp (en particular Burkholderia cepacia); Acinetobacter spp. por ejemplo A. baumanii y A. calcoaceticus; Streptococcus spp., por ejemplo Streptococcus Grupo A o B, Streptoccocus pneumoniae; Stenotrophomonas spp., Stenotrophomonas maltophilia y Achromobacter spp., por ejemplo Achromobacter xylosoxidans.

18. El péptido de conformidad con la reivindicación 15, en donde el patógeno bacteriano es una bacteria Gram positiva.

19. El péptido de conformidad con la reivindicación 18, en donde el patógeno antibacteriano es una bacteria Gram positiva seleccionada del grupo que consiste en Staphylococcus spp. (en particular Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis); Escherichia coli; Clostridia spp., por ejemplo Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile; y Enterococcus spp., por ejemplo Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium.

20. El péptido de conformidad con la reivindicación 15, en donde el patógeno bacteriano es del género Staphylococcus spp o Pseudomonas spp.

21. El péptido de conformidad con la reivindicación 14, en donde la infección o condición antimicrobiana es seleccionada del grupo que consiste en diviesos, furúnculos, celulitis, impétigo, infecciones de nosocomio, bacteremia, neumonía, osteomielitis, endocarditis, meningitis, abscesos, fibrosis quística, infecciones gastrointestinales, infecciones genitourinarias, septicemia, faringitis, fasciitis necrotizante, glomerulonefritis aguda, otitis media, heridas, ántrax, encefalitis, difteria, gangrena de gas, botulismo y tétanos.

22. El uso de un péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento para el tratamiento, la prevención o la demora de la progresión de una infección antimicrobiana en un paciente.

23. El uso como se reclama en la reivindicación 22, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable vía rutas tópica, oral, parenteral (incluyendo subcutánea, intravenosa, intramuscular e intraperitoneal), rectal, dérmica, transdermal, intratoracica, intrapulmonar, mucosal e ¡ntranasal (respiratoria).

24. Una composición que comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de por lo menos un péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 y un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

25. La composición de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada además porque la composición comprende por lo menos dos péptidos de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 en donde los péptidos son diferentes.

26. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 y 25, caracterizada además porque comprende cisteamina y/o polilisina.

27. Un sustrato al que es unido o es aplicado un péptido o variante peptídica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o una composición de cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26.