MX2012010066A - Tratamiento de artritis reumatoide con una combinacion de laquinimod y metotrexato. - Google Patents

Abstract

Esta invención proporciona un método para tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide que comprende administrar periódicamente al sujeto una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptabLe del mismo y una cantidad de metotrexato en donde las cantidades cuando se toman juntas son efectivas para tratar al sujeto. Esta invención también proporciona laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en combinación con metotrexato al tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide. Esta invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de metotrexato para uso al tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide.

Description

TRATAMIENTO DE ARTRITIS REUMATOIDE CON UNA COMBINACIÓN DE LAQUINIMOD Y METOTREXATO CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona composiciones y método para tratar un sujeto que padece de artritis reumatoidé que comprende administrar periódicamente al sujeto, una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de metotrexato en donde las cantidades cuando se toman juntas, son efectivas para tratar al sujeto.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Artritis reumatoidé La artritis reumatoidé (RA, . por sus siglas en inglés) es un síndrome crónico caracterizado usualmente por inflamación simétrica no específica de las articulaciones periféricas, potencialmente resultando en destrucción progresiva de estructuras articulares y periarticulares , con o sin manifestaciones generalizadas. Aunque su etiología precisa aún no . se ha determinado, se ha determinado la predisposición genética. Además, se cree que los factores ambientales desempeñan una función. (The Merck Manual, 7a Ed.) De acuerdo al American .College of Rheumatology (1987), al menos cuatro de los siguientes criterios tienen que cumplirse antes de que una condición se clasifique como artritis reumatoide (Arnett, 1988) : .1) rigidez matutina de >1 hora la mayoría de las mañanas por al menos 6 semanas; 2) artritis e hinchazón de tejido suave de >3 de . 14 articulaciones/grupos de articulación, presentes por al menos 6 semanas; 3) artritis de articulaciones de las manos, presentes por al menos 6 semanas; 4) artritis simétrica, presente por al menos 6 semanas, 5) nodulos subcutáneos en lugares específicos; 6) factor reumatoide en un nivel arriba del percentil 95; y 7) el sugestivo de cambios radiológicos de erosión de articulación.

No hay cura conocida para la artritis reumatoide., pero muchos diferentes tipos de tratamiento están disponibles para aliviar los síntomas' y/o modificar ..el proceso de la enfermedad. El tratamiento farmacológico de RA incluye fármacos antinflamatorios no esferoidales y salicilatos (NSAIDs) , fármacos de acción lenta, compuestos de oro, hidroxicloroquina , sul'fasalazina, combinaciones de fármacos de acción lenta,- corticosteroides, y fármacos citotóxicos o inmunosupresores . Otras . formas de tratamiento incluyen reposo, nutrición, . ejercicio, fisioterapia y cirugía, (The Merck Manual, 7a Ed.) ..

Laquinimod Laquinimod es un compuesto sintético novedoso con alta biodisponibilidad oral que se ha sugerido como una formulación oral para el tratamiento de Esclerosis múltiple ( S) (Polman, 2005; Sandberg-Wollheim, '2005) . Laquinimod y su forma de sal de sodio se describen, por ejemplo, en la Patente de E.U.A. No. 6, 077, 851. . No se han informado los efectos de laquinimod en combinación con metotrexato sobre artritis reumatoide.

Metotrexato Metotrexato (MTX) es un fármaco antimetabólico usado en el tratamiento de cáncer y enfermedades antiinmunitarias . Éste actúa inhibiendo el metabolismo de ácido fólico por medio de la inhibición de dihidrocolato reductasa y bloques de síntesis de ADN en una rápida proliferación de las células. Estas acciones inducen la inmunosupresion.

MTX. se vende, bajo los nombres de marca Rheumatrex® y Trexall™. Rheumatrex® y TrexallT?1 son indicados para tratar ciertos tipos de cáncer, s.oriasis y artritis reumatoide.

Los fármacos Citotóxico/ihmunosupresores incluyendo MTX están usándose en. gran medida para RA activa severa. Estos fármacos pueden suprimir la inflamación y pueden permitir la reducción de dosis de corticoesteroides . (The . Merck Manual, 7a Ed.) La dosificación recomendada para la artritis reumatoide severa en humanos (basada en consenso) es: inicial 10 a 15 mg oralmente una vez a la semana, incrementada por 5 mg/cada semana 2 a 3 semanas, hasta un máximo de 20 a 30 mg/semana. La dosificación recomendada por el fabricante para artritis reumatoide severa en humanos es: inicial 7.5 mg oralmente una vez semanalmente o 2.5 mg oralmente cada 12 horas por 3 dosis una vez semanalmente, hasta n máximo de 20 mg/semana. (Vademécum) Terapia de combinación La administración de dos' fármacos para tratar una afección dada, tal como artritis reumatoide, aumenta un número de problemas potenciales. Las interacciones in vivo entre dos fármacos son complejas. Los efectos de cualquier fármaco sencillo se relacionan con su absorción, distribución, y ... eliminación . Cuando dos fármacos se introducen en el cuerpo, cada fármaco puede afectar la absorción, distribución, y. eliminación del otro y por lo tanto, alterar los efectos del otro. Por ejemplo, un fármaco puede inhibir, activar o inducir la producción de enzimas involucradas en una ruta metabólica de eliminación del otro fármaco (Guidance for Industry, 1999). De esta manera, cuando dos1 fármacos se administran para tratar la misma afección, es impredecible si cada uno ' complementará , .no tendrá efecto en, o interferirá con, la actividad terapéutica del otro en un sujeto humano.

No sólo puede la interacción entre dos. fármacos afectar la actividad terapéutica pretendida de cada fármaco, sino la interacción puede incrementar los niveles de metabolitos tóxicos (Guidance for Industry, 1999). La interacción también puede aumentar, o disminuir, los efectos colaterales de cada fármaco Por lo tanto, durante la administración de dos fármacos para tratar una enfermedad, es impredecible que cambio ocurrirá en el perfil del lado negativo de cada fármaco .

Adicionalmente, es difícil predecir . exactamente cuando los efectos, de la interacción entre los dos fármacos se pondrán de manifiesto. Po ejemplo, las interacciones metabólicas entre fármacos pueden volverse aparentes durante la administración inicial del segundo fármaco, después de que los dos han alcanzado una concentración de estado estable o durante la descontinuación de uno de los fármacos (Guidance for Industry, 1999) .

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona¦ un método para tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide que comprende administrar periódicamente al sujeto una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de. metotrexato, en donde las cantidades cuando se toman juntas son para tratar al sujeto.

Esta invención también proporciona laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en combinación con metotrexato tratando un sujeto que padece de artritis reumatoide .

Esta invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de metotrexato para uso al tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide.' BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. La Figura 1 es un gráfico de los Parámetros Histopatológicos Individuales (seis articulaciones) : un gráfico de barra que muestra los puntajes medios (de las seis articulaciones) para cada parámetro histopatológico en los grupos de Control y Tratamiento. ("LAQ" indica Laquinimod, "MTX" indica metotrexato) (*p=0.05 prueba t de Student para el vehículo, #p=0.05 prueba t de Student para el vehículo, n=10/grupo de tratamiento, n=4/control normal.) El eje y muestra parámetros de histopatología individuales media+SE (seis articulaciones) (puntaje: 0 normal, 1= mínimo, 2 = leve, 3 = moderado, 4 = marcado, y 5 = severo) La barra que está más a la izquierda en cada Grupo de Tratamiento (negro), representa inflamación. La segunda barra desde la izquierda en cada Grupo de Tratamiento (gris claro) representa pannus.. La tercera barra desde la. izquierda en cada Grupo de Tratamiento (blanco.) representa daño en el cartílago, y la cuarta .barra desde la izquierda en cada Grupo de Tratamiento (qris oscuro) representa daño en el hueso.

Figura 2: La Figura 2 es un gráfico del Puntaje Animal de Seis Articulaciones: un gráfico de barra que muestra el puntaje total . (suma de puntajes en parámetros histopatológicos individuales) de las seis articulaciones) en los Grupos de Control y Tratamiento. ("LAQ" indica Laquinimod, "MTX" indica metotrexato) (*p<0.05 prueba t de Student para el vehículo, #p=0.05 prueba t de Student para el vehículo, n=10/grupo de tratamiento, n=4/control normal.) El eje y muestra Puntaje Animal de Seis Articulaciones medio+SE (suma de los parámetros individuales).

Figura 3: La Figura 3' muestra la progresión de puntaje de artritis clínica en cada brazo de tratamiento (Puntajes 0-5). (*p=0.05 prueba t de Student para el vehículo, #p=0.05 prueba t de Student para MTX, n=10/grupo de tratamiento, n=4/control normal.) El eje y muestra Puntaje de Artritis Clínica medio+SE (puntaje 0-5) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención ' proporciona un método para tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide que comprende administrar periódicamente al sujeto una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de metotrexato, en donde las cantidades , cuando se toman juntas son efectivas para tratar el sujeto.

En una modalidad, la cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y la cantidad de metotrexato cuando se toman juntas son más efectivas tratar el sujeto que cuando cada agente se administra solo.

En una modalidad, la cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y la cantidad de metotrexato cuando se toman juntas son efectivas para reducir un síntoma clínico de artritis reumatoide en el sujeto. En otra modalidad, , la sal farmacéuticamente aceptable de laquinimod es laquinimod sodio.

En una modalidad, la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es oralmente efectuada. En otra modalidad, la cantidad de laquinimod ' administrada es 0.0005 - 10 mg/kg/día. Aún en otra modalidad, la cantidad de laquinimod administrada es 0.1-2.0 mg/día.

En una modalidad, la administración periódica . de metotrexato es oralmente efectuada. En otra modalidad, la cantidad de metotrexato administrada es 0.02 - 1.0 mg/kg/día. Aún en otra modalidad, la cantidad de metotrexato administrada es 1-3 mg/dia.

En una' modalidad, el método adicional comprende la administración de fármacos antinflamatorios no esferoidales (NSAIDs), salicilatos, fármacos .de acción lenta, compuestos de' oro, hidroxicloroquina, sulfasalazina, combinaciones de fármacos de acción . lenta, corticosteroides , fármacos citotóxicos, fármacos y/o anticuerpos inmunosupresores .

En una modalidad, la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente ' aceptable del mismo y metotrexato sustancialmente elimina un síntoma asociado con artritis reumatoide. En otra modalidad, la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y metotrexato reduce la severidad de un síntoma asociado con artritis reumatoide.. Aún en .' otra modalidad, la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y metotrexato reduce él número de articulaciones afectadas por un síntoma asociado con artritis reumatoide.

En una modalidad, el síntoma es inflamación. En otra modalidad, el síntoma es la formación' de tejido pannus . En otra modalidad, el síntoma es daño en el cartílago. En otra modalidad, el síntoma es resorción ósea.

En . una modalidad, la administración ..periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y metotrexato reduce ¦ proteinuria en el sujeto. En otra modalidad, la reducción de proteinuria se mide por 24 horas de proteína en orina, 24 horas de relación de proteína a creatinina, relación de proteína in situ . a creatinina, 24 horas de albúmina en orina, 24 horas de relación de albúmina creatinina, relación de albúmina in„situ a creatinina, o por una varilla de nivel urinario. Aún en otra modalidad, la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y metotrexato elimina los sedimentos urinarios.

En una modalidad, cada una de las cantidades de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo cuando se toman solas, y la cantidad de metotrexato cuando se toma sola es efectiva para tratar el sujeto. En otra modalidad, ya sea la cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo cuando se toma sola, la cantidad de metotrexato cuando se toma sola, o cada una de tales cantidades cuando se toman solas ño son efectivas para tratar el sujeto.

En una modalidad, el sujeto recibe terapia de ¦>metotrexato previo a la terapia de laquinimod inicial. En otra modalidad, el sujeto inicia la administración periódica de metotrexato¦ . previo a la administración periódica de laquinimod inicial.

En una modalidad, la administración de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo sustancialmente precede la administración de metotrexato. En otra modalidad, la administración de metotrexato sustancialmente precede la administración de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad, el sujeto es un mamífero. En otra modalidad, el mamífero es humano.

Esta invención proporciona un método ' para tratar artritis reumatoide. en un sujeto que padece de eso que comprende administrar periódicamente al sujeto una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de metotrexato, en donde las cantidades cuando se toman juntas son efectivas para tratar, la artritis reumatoide en el sujeto.

Esta invención también' proporciona laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en combinación con metotrexato al tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide .

Esta invención también proporciona una- composición farmacéutica que. comprende una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de metotrexato para uso al tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide.

Para las modalidades anteriores, cada modalidad descrita en la presente se contempla como siendo aplicable la una a la otra de la modalidad descrita.

Se entiende que donde se proporciona un intervalo de parámetro, todos . los enteros dentro de ese intervalo, y décimas del mismo, también son proporcionados por la invención. Por ejemplo, "0.2-5 mg/kg/dia" incluye 0.2 mg/kg/dia, 0.3 mg/kg/dia, 0.4 mg/kg/dia, 0.5 mg/kg/dia, 0.6 mg/kg/dia etc. hasta 5.0 mg/kg/dia.

Sé describe, un método para tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide usando laquinimod con metotrexato que proporciona un tratamiento más eficaz que cada agente solo. De acuerdo con la invención sujeto, la administración de laquinimod con metotrexato es particularmente efectiva en combinación para tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide.

Términos Como se usa en la presente, y a menos que se especifique de otro modo, cada uno de los siguientes términos tendrá la definición establecida a continuación..

Como se usa en la presente, "laquinimod" se refiere a ácido laquinimod o; una sal farmacéuticamente aceptable del mismo .

Como se usa en la presente, "un sujeto que padece de artritis reumatoide" se refiere a un sujeto que ha sido afirmativamente diagnosticado que tiene artritis reumatoide.

Como se usa en la presente, una "cantidad" o "dosis" de laquinimod como se mide en miligramos se refiere a los miligramos de ácido laquinimod presentes en una preparación, sin tener en cuenta la forma de la preparación. .

Como se usa en la presente, "efectiva" cuando se refiere a una cantidad de laquinimod y/o metotrexato se refiere a la cantidad de laquinimod y/o metotrexato que es suficiente para producir una respuesta terapéutica deseada sin deberse a efectos colaterales adversos, (tal como toxicidad, irritación, o respuesta alérgica) adecuada con una relación razonable de beneficio/riesgo cuando se usa en la manera de esta invención.

Como se usa en la presente-, "elimina sustancialmente" un síntoma asociado con artritis reumatoide se refiere a disminuir la aparición de ese síntoma por al menos 96%.

Como se usa en la presente, "tratamiento" abarca, por ejemplo, inducir la inhibición, regresión, o estasis de un trastorno,. o disminuir, suprimir, inhibir, reducir la severidad de, eliminar, o aliviar un síntoma del trastorno.

Como se usa en la presente, "inhibición" de la progresión de la enfermedad o complicación de la enfermedad en un sujeto se refiere a prevenir o reducir la progresión de la enfermedad y/o complicación de la enfermedad en el sujeto.

Como se usa en la presente, un "síntoma" asociado con artritis reumatoide incluye cualquier manifestación clínica o de laboratorio asociada con artritis reumatoide y no se limita a lo que el sujeto pueda sentir u observar. La inflamación es un síntoma de artritis reumatoide.

Como se usa. en la' presente, un "evento adverso" o "AE" se refiere a cualquier aparición médica adversa, en un sujeto de ensayo clínico administrado con un producto medicinal y que no tiene una relación causal con el tratamiento. Un evento adverso puede por lo tanto ser cualquier signo no favorable y no intencional incluyendo un descubrimiento de laboratorio anormal, síntoma, o enfermedades temporalmente asociadas con el uso de un producto medicinal de investigación, se ' considere o no relacionada al producto medicinal de investigación.

Como se usa en la' presente, "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un portador o excipiente que es idóneo para uso con humanos y/o animales sin efectos colaterales adversos indebidos (tales, como toxicidad, irritación, y respuesta alérgica) adecuados con una relación razonable de riesgo/beneficio. Puede ser un solvente farmacéuticamente aceptable, agente de suspensión o vehículo, para entregar los compuestos instantáneos al sujeto.

Cuando se refiere a la dosificación, la designación "BID" indica que la dosis se¦ administra dos veces al día. La designación "QD" indica que la dosis se administra una vez al día .

El uso de laquinimod para artritis reumatoide ha sido previamente sugerido en, por ejemplo, patente de E.U.A. No. 6,077,851. Sin embargo, los inventores han encontrado sorprendentemente que la combinación de laquinimod y metotrexato (MTX) es significantemente más efectiva para el tratamiento de artritis reumatoide como se compara a cada agente solo.

Una sal farmacéuticamente aceptable de laquinimod como se usa en esta aplicación incluye litio, sodio, ·. potasio, magnesio, calcio, manganeso, cobre, zinc, aluminio y hierro. Las formulaciones de sal de laquinimod y el proceso para preparar las mismas se describen, por ejemplo, en la Publicación de la Solicitud de la Patente de E.U.A. No. 2005/0192315 y la Publicación de la Solicitud de la Patente Internacional PCT No. WO 2005/074899, que se incorporan en la presente como referencia en esta solicitud.

Una unidad de dosificación puede comprender un compuesto sencillo o mezcla, de compuestos del mismo. Una unidad de dosificación puede . prepararse para, formas de dosificación orales, tales como comprimidos, cápsulas, pildoras, polvos, y granulados .

El laquinimod puede administrarse en mezcla con diluyentes farmacéuticos idóneos, extensores, excipientes, o portadores (colectivamente referidos en la presente como un portador farmacéuticamente aceptable) seleccionado idóneamente con respecto a la forma pretendida de administración y' como consistente con prácticas farmacéuticas comerciales. La unidad está preferiblemente en una forma idónea para administración oral. El laquinimod puede administrarse soló pero es generalmente mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable, y co-administrado en la forma de comprimido o fórmula,' liposoma, o como un polvo aglomerado. Los ejemplos de portadores sólidos idóneos incluyen lactosa, sacarosa, gelatina y agar. Pueden formularse fácilmente cápsulas o comprimidos, y pueden ser fáciles de tragar o masticar; otras¦ formas sólidas incluyen gránulos, y polvos a granel. Los comprimidos pueden contener enlazadores idóneos, lubricantes, agentes desintegradores, agentes de coloración, agentes saborizantes, agentes, de inducción de flujo, y · agentes de fusión. Por ejemplo, para administración oral en la forma de unidad de dosificación de un comprimido o- cápsula, el componente del fármaco activo puede combinarse . un portador oral, no tóxico, farmacéuticamente aceptable, inerte tal como lactosa, gelatina, agar, almidón, sacarosa, glucosa, celulosa metil, fosfato dicálcico,. sulfato de calcio, manitol, sorbitol, celulosa microcristálina y similares. Los. aglutinantes idóneos incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tal como glucosa o beta-lactosa, almidón de maíz, gomas naturales y sintéticas tal como acacia, . tragacanto, o alginato de sodio, povidona, carboximetilcelulosa, glicol polietileno, ceras, y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificación incluyen oleato de sódio, estearato de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, ácido esteárico, estearil fumarato dé sodio, talco y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitación, almidón, celulosa metil, agar, bentonita, goma de xantano, croscarmelosa sódica, glicolato sódico de almidón y similares.

Los ejemplos específicos de las técnicas, portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables que pueden usarse para formular formas orales de dosificación de la presente invención se describen, por ejemplo, en la Publicación de la Solicitud de la Patente E.U.A. No. 2005/0192315, Publicaciones de las Solicitudes Internacionales PCT Nos. WO 2005/074899, WO 2007/047863, y WO 2007/146248.

Las técnicas y composiciones' generales para hacer formas de dosificación útiles en · la presente invención, se describen en las siguientes referencias: 7 Modern Pharmaceutics, Capítulos 9 y 10 (Banker & Rhodes, Editors, 1979); Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (Lieberman et al., 1981) ; Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2a Edición ( 1976) ; Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed. (Mack Publishing Company, Easton, Pa . , 1985) ; Advances in Pharmaceutical Sciences (David Ganderton, Trevor Jones, Eds . , 1992); Advances in Pharmaceutical Sciences Vol 7. (David Ganderton, Trevor Jones, James McGinity, Eds., 1995); Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms (Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Serie 36 (James McGinity, Ed., 1989); Pharmaceutical Particulate Carriers: Therapeutic Aplications: Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol 61 (Alain . Holland, Ed.-, 1993); Drug Delivery to , the Gastrointestinal Tract (Ellis Horwood Books in the Biological Sciences. Series in Pharmaceutical Technology; J. G. Hardy, S. S. Davis, Clive G. Wilson, Eds.); Modern Pharmaceutics Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol. 40 (Gilbert S. Banker, Christopher T. Rhodes, Eds.). Estas referencias en sus totalidades se incorporan aquí como referencia en esta solicitud.

Esta invención se entenderá mejor como referencia, a los detalles experimentales que siguen, pero aquellos expertos en la técnica fácilmente apreciarán que los experimentos específicos detallados son sólo ilustrativos de la invención como se describe más .completamente en las reivindicaciones que siguen después.

Detalles experimentales EJEMPLO 1: Evaluación de los efectos de Agentes antiinflamatorios administrados oralmente (PO) y diariamente (QD) en Artritis por Colágeno Tipo II Semi-establecida de 35 Días en ratones DBA/101ahsd (MTTC/TV-9) Introducción Los ratones (DBA/lacJ, 1J o B10R111) desarrollan de manera confiable poliartritis^ cuando se inmunizan contra colágeno tipo II bovino (Trentham, 1977) usando una variedad de metodologías incluyendo inmunizaciones del día 0, día 15, 16 o 21 con o sin impulso concurrente con endotoxina o IL-1 recombinante (Bendele, 2001) . La enfermedad que ocurre no es usualmente simétrica y puede afectar cualquier combinación de patas/articulaciones. Ya que el calibre de medición de los tobillos de- ratones pequeños es. un reto, los sistemas subjetivos de puntaje clínico . se usan frecuentemente en conjunto con métodos de puntaje histológico. Los tratamientos pueden ser profilácticos (generalmente empezando los días 16-21) o terapéuticos (después de la observación de lesiones) y dependiendo del protocolo de inmunización utilizado y la extensión de la destrucción deseada, puede extenderse de 10 días a varias, semanas.. Las lesiones en las articulaciones afectadas se parecen a aquellas que ocurrieron en agentes biológicos de artritis de colágeno de rata tal como antagonista receptor Interleukin-1 (IL-lra) y los receptores TNF solubles ( ooley, 1993; Bakker, 1997; Joosten, 1994; Joosten, 19-96; Geiger, ?993) . El potenciamiento de incidencia de enfermedad y severidad se ha demostrado en los ratones inmunizados con colágeno tipo II y concurrentemente dando citoquinas tal como IL-l (Horn, 1991; Horn, 1988).

Este estudio está diseñado para determinar la eficacia de agentes antiinflamatorios potenciales (Laquinimod 0.2, 1, o 5 mg/kg) administrados (po, qd) ya sea solos o en combinación con metotrexato ' (MTX) como agentes antiinflamatorios potenciales inhibiendo la inflamación, la destrucción del cartílago y la resorción ósea asociada con la artritis de colágeno tipo II semi-establecida en ratones. Los ratones de la artritis de colágeno . Tipo II en un modelo animal reconocido en la técnica para artritis reumatoide en humanos (Bendele, 2001) .

Aquí, los ratones macho DBA/101aHsd con artritis de colágeno tipo II semi-establecida se (dosificaron oralmente (PO) diariamente (QD) sobre estudio, los días 18-33 con vehículo, Laquinimod (0.2/ 1, o 5 mg/kg) , metotrexato (0.5 mg/kg, MTX) , o Laquinimod (0.2 o 1 mg/kg) en combinación con MTX (0.5 mg/kg). Los ratones.se finalizaron sobre el día 34. La eficacia evaluable se basó sobre ' los pesos corporales de animales, puntajes diarios de artritis clínica, puntajes de artritis expresados como área bajo la curva (AUC) , . e hisatología (sólo grupos 1-3, 5 y 8) en las patas delanteras, patas traseras, y rodillas de los ratones. Los resultados histopatológicos se expresaron, como 4 patas, sólo rodillas, o 6 articulaciones (rodillas incluidas) . La evaluación de los niveles de anticuerpo de colágeno de suero anti tipo II también se realizaron (sólo grupos 1-3, 6 y 8). Todos los animales sobrevivieron a la finalización del estudio.

Animales Se obtuvieron 74 machos DBA/101aHsd (Harían Inc.) que fueron de 5-7 semanas de edad a su arribo . y pesaron aproximadamente 17-22 gramos el día 18 del estudio. Los ratones fueron de al menos 6 semanas en el tiempo de su primera inmunización.

Materiales: Agentes o fármacos . en vehículo, colágeno Tipo II (Elastin Products) , adyuvante completo de Freund (conM. Tuberculosis de suplemento, 4 mg/ml) (Difco) .

Diseño del estudio, general 1. Los. animales (10/grupo para artritis, 4/grupo para normal, almacenados 5/jaula) , se climatizaron por 8 días después de su arribo, que todos los animales tienen al menos de 7 semanas de edad. 2.. Los ratones se anestesiaron con Isoflurano y se les dió 150µ1 de colágeno Tipo II bovino en inyecciones de adyuvante completo de Freund (Sigma) que contienen colágeno tipo II bovino (Elastin Products, Owensville, O) (2 mg/ml) en la base de la cola (DO y día 21).. 3. Los ratones se aleatorizaron por peso corporal en grupos de tratamiento el día 18 del estudio. 4. MTX fue proporcionado por Bolder BioPATH, Inc. Como una solución madre de 1 mg/ml adquirida de MWI y se preparó como 0.05 mg/ml de solución en 1% CMC para dosificación en 10 ml/kg. 5. Todas las soluciones de dosis se prepararon para entregar en 10 ml/kg (0.3ml/30g) de ratón.' 6. El tratamiento se inició el día 18 del estudio y continuó una vez diariamente, cada día (po, qd) de acuerdo a la Tabla 1.

Tabla 1: Horario de dosificación del tratamiento *Para todos los grupos de prueba: n=10, BW=30g, vol. de dosis=10 ml/kg, dosis para 17 días 7. Durante el periodo de tratamiento, se dieron los puntajes clínicos para cada una de las patas (delantera derecha, delantera izquierda, trasera derecha, trasera izquierda) de acuerdo a la Tabla 2.

Tabla 2: Criterios de puntaje clínico para las. patas traseras y delanteras , 8. En los días 21-35, ocurrió el comienzo de la artritis. Los ratones se pesaron- en los días de artritis 18, 20, 22, 24,' 26, 28, 30, .32, y previo a la recolección de tejido el día 34. (día final) . 9. En la necropsia, los animales de todos los . grupos se sangraron por medio de punción cardiaca' para suero y se terminaron por .medio de dislocación cervical. Las patas delanteras, patas traseras y rodillas se removieron y se colocaron en 10% NBF. Toda la sangre se dejó coagular a temperatura ambiente por aproximadamente 2 horas antes de ponerse a girar a 13,000 rpm por 8 minutos. . 10. Procesamiento de articulaciones: Después de .1-2 días en fijador y después de . 4-5 días en descalcificador , las articulaciones se procesaron, incrustaron, seccionaron y tiñeron con azul de toluidina y H&E (2 portaobjetos por animal) . Sólo las patas delanteras y traseras y rodillas se procesaron inicialmente (6 articulaciones/ratón). 11. Métodos dé Patología Morfológica: La histopatología se realizó sólo sobre los grupos 1-3, 5 y 8. Después de 1-2 días en fijador y 4-5 días en 5% de ácido fórmico para descalcificación, los tejidos se recortaron, se procesaron para incrustación de parafina, se seccionaron en 8 pm y se lavaron con azul de toluidina (azul T) . Las patas traseras, patas delanteras, '. y rodillas se incrustaron y se seccionaron en el plano frontal. Se procesaron seis articulaciones de cada animal para elevación de histopatología. 12. Procesamiento del tejido y evaluación: a. colocar las articulaciones en descalcif.icador, b. recortar, las articulaciones, . lavado, procesar tejidos, c. incrustar articulaciones, d. seccionar tejidos, teñir tejidos, e. evaluación hispatologica, y f. procesamiento de datos, CC, preparación, de gráficos e informe.

Métodos de Puntaje Histopatológico . para Articulaciones de ratón con Artritis de colágeno Tipo II Cuando se califican las patas o tobillos de ratones con lesiones de artritis de colágeno tipo II, debe considerarse la severidad de los cambios asi como el número de articulaciones individuales afectadas. Cuando sólo se afectaron 1-3 articulaciones de las patas o tobillos de una posibilidad de numerosas articulaciones metacarpiana/metatarsiana/digital o tarsal/tibiotarsal, se dio una asignación arbitraria de un puntaje máximo de 1, 2 o 3 para los parámetros a continuación (Tablas 3-6) dependiendo de la severidad de. los cambios. Si estaban implicadas más de 3 articulaciones, se aplicaron los . criterios a continuación (Tablas 3-6) a las más severamente afectada/mayoría de las articulaciones.

Tabla 3: Inflamación Tabla 4: Pannus Tabla 6: Resorción ósea Para . cada animal, los puntajes de la inflamación, pannus, daño ai cartílago y daño al hueso se determinaron para cada una de 6 articulaciones presentadas. Se determinó una suma total (todas las 6 articulaciones) del puntaje animal y un puntaje animal medio de seis articulaciones así como las sumas y los medios para cada uno de los parámetros individuales. Los datos también se expresaron como medios para patas (4 articulaciones) o rodillas (2 articulaciones). Los parámetros para los. varios grupos entonces se comparan a los animales de control de la enfermedad.

Análisis estadístico Los datos clínicos para los puntajes de patas (medios para animal) se analizaron determinando el área bajo la curva de dosificación (AUC) para los días de estudio 18-34.- Para el cálculo de AUC, se computarizaron los puntajes medios diarios para cada ratón que se hicieron en Microsoft Excel y el área entre los días de tratamiento después del comienzo de la enfermedad al día final. Se determinaron las medias para cada grupo y se calculó el porcentaje de inhibición de los controles de artritis comparando, los valores para animales tratados y normales. El análisis estadístico de ..los. datos histopatológicos y clínicos se realizó usando un estudio t de Student con un conjunto importante en p=0.05.

La inhibición de porcentaje de parámetros clínicos y AUC se calcula usando la siguiente fórmula: % Inhibición = B/A X 100, donde A = Control de enfermedad media - normal media B = Tratado media - Normal media Resultados Este estudio , evalúa los efectos de agentes antiinflamatorios administrados po, qd en un modelo animal para artritis reumatoide humana. Los resultados- indican que el efecto de la combinación de- laquinimod y metotrexato sobre síntomas de artritis reumatoide es significativamente más que el efecto aditivo de cada agente solo.

La pérdida de peso corporal debido a la artritis se inhibió de forma significati a por tratamiento con 1 mg/kg Laquinimod + MTX (62% inhibición) comparado con los controles de enfermedad de tratados con vehículo. La pérdida de peso corporal para este grupo también fue importantemente (69%) inhibida comparada con los ratones tratados MTX. La pérdida de peso corporal para todos los .otros grupos de tratamiento no difirió significativamente de los controles de vehículo.

Los ratones . de control de enfermedad tratada con vehículo tuvieron 100% de incidencia de enfermedad por el día de estudio 27. .Los ratones que se trataron con 0.2 mg/kg Laquinimod tuvieron 100% de incidencia de enfermedad " por el día de estudio 28. Los animales que se trataron, con MTX, 1 mg/kg Laquinimod,. o 0.2 mg/kg Laquinimod + MTX tuvieron incidencia de enfermedad reducida de 90% en la finalización del estudio. La incidencia de enfermedad' reducida también se dio en los ratones tratados con .5 mg/kg Laquinimod (70% de incidencia) o I rng/kg Laquinimod + MTX (60%).

Los puntajes diarios de artritis clínica se redujeron de manera . importante . para los ratones tratados con MTX (*días importantes 27-34), 0.2 mg/kg Laquinimod (M28-34), ¦ 1 mg/kg Laquinimod (*d25-34), 5 mg/kg Laquinimod (M24-34) , 0.2 mg/kg Laquinimod + MTX ( *d24-34 ) o 1 mg/kg Laquinimod + MTX ( *d24-34) comparado con los controles de vehículo. Los puntajes clínicos diarios tambié se redujeron de manera importante por tratamiento con 0.2 mg/kg Laquinimod + MTX (*d29-34) o 1 mg/kg Laquinimod + .MTX (*d26-34) comparado con los ratones tratados sólo por MTX. Previo a la aparición de la enfermedad en el grupo de control de vehículo, los puntajes diarios de artritis clínica fueron elevados de manera importante en ratones tratados con 0.2 'mg/kg Laquinimod (*d23), 1 mg/kg Laquinimod (*d22-24), o 5 mg/kg Laquinimod (*d22-23.).. (Figura 3).

Los puntajes- de artritis clínica expresados como área bajo la curva (AUG) se redujeron de manera importante para ratones tratados con, MTX (50% reducción), 0.2. mg/kg Laquinimod (32%),. 1 ' mg/kg Laquinimod (52%), 5 mg/kg Laquinimod (69%), 0.2 mg/kg Laquinimod + MTX (82%), o 1 mg/kg Laquinimod + MTX (95%) comparado a los controles de vehículo. Los puntajes de artritis clínica AUC también se redujeron de manera importante , or tratamiento con 0.2. mg/kg Laquinimod + MTX (65%) o 1· mg/kg Laquinimod + MTX (90%) comparado a los ratones tratados MTX.

El análisis de suero para los niveles anti-TTC se realizó sobre ratones de sólo los grupos 1-3, 6, y 8. El análisis de suero reveló que los ratones de control de vehículo tuvieron niveles anti-TTC de 27,062.50 unidades/ml. El nivel Anti-TTC no fue afectado de manera importante por el tratamiento con 5 mg/kg Laquinimod, 1 mg/kg Laquinimod + MTX, o MTX comparado con los controles de vehículo.

Los animales de control de enfermedad tuvieron cambios. histopatológicos , consistentes con aquellos vistos én la artritis inducida de colágeno ti o II, en la mayoría . de las articulaciones, con puntajes en un. intervalo de mínimo a severo. La alteración microscópica incluyó infiltración sinovial y tejido periarticular con neutrofilos y células inflamatorias neuronucleales (inflamación), pannus de zona marginal y resorción ósea y daño al cartílago (la pérdida de proteoglicanos, la muerte de condrocitos y destrucción, de la matriz de colágeno) .

Todos los parámetros de histopatología de las patas se redujeron de manera importante hacia la normalidad con, los ratones tratados con 1 mg/kg Laquinimod (61% reducción de puntajes sumados) , .1 mg/kg Laquinimod + MTX (96%), o MTX (46%) comparado a los controles de vehículo. El tratamiento con 1 mg/kg Laquinimod + MTX' también redujo de manera importante (93%) todos, los parámetros de histopatología de las patas comparado a los ratones tratados con MTX.

Todos los parámetros de la histopatología de las rodillas se redujeron de forma importante hacia la normalidad para los ratones tratados con 1 mg/kg Laquinimod + MTX (97% reducción de puntajes sumados) comparados a los controles de vehículo. El tratamiento de este grupo también redujo de manera importante . (95%) todos los parámetros de la histopatología de las rodillas comparados a los ratones tratados con MTX. El tratamiento con 1 mg/kg Laquinimod redujo¦ de manera .importante la inflamación de las rodillas (51% reducción), p nnus (59?) , daño al cartílago (62%), y puntajes de rodilla sumados (57%) comparado a los controles de vehículo.

Todos los parámetros de histopatología medios de seis articulaciones se redujeron de manera importante hacia la normalidad para los ratones tratados con 1 mg/kg Laquinimod (60% reducción de, puntajes sumados), 1 mg/kg Laquinimod + MTX (96%), o MTX (43%) comparados a los controles de vehículo. El tratamiento con 1 mg/kg .Laquinimod + MTX también redujo de manera importante (93%) todos . los parámetros de histopatologia de seis articulaciones comparado a los ratones tratados con MTX. (Figuras 1 y 2).

"Como se muestra en las Figuras 1 y 2, la administración de laquinimod en combinación con metotrexato redujo de manera importante la severidad de varios síntomas asociados con artritis reumatoide, incluyendo inflamación, pannus, daño en el cartílago y resorción ósea sobre las seis articulaciones del ratón DBA/1 OlaHsd (cuatro patas y dos rodillas) comparado al grupo de control, el grupo de tratamiento sólo . con metotrexato, y el grupo de tratamiento sólo con laquinimod.

La Figura 1. muestra que la administración de laquinimod en combinación con metotrexato eliminó sustancialmente el pannus y el daño en el hueso en las seis articulaciones de los sujetos de prueba, reduciendo sus puntajes medios a casi cero. La Figura 2 muestra que la administración de laquinimod en combinación con metotrexato eliminó sustancialmente los síntomas totales asociados con artritis reumatoide en los sujetos prueba, reduciendo su punto acumulativo por 96%.

De esta manera, estos resultados muestran que la administración de¦ laquinimod en combinación con metotrexato es sustancialmente más eficaz tratando un sujeto que padece de artritis reumatoide activa que cada agente cuando se administra solo. Los inventores sorprendentemente han encontrado que laquinimod y metotrexato trabajan en sinergia en el tratamiento de artritis reumatoide activa.

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Claims (28)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito la presente invención,- se considera como novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide que comprende administrar periódicamente al sujeto una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de metotrexato, caracterizado porque las cantidades cuando se toman juntas son efectivas para tratar el sujeto:

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable' del mismo y la. cantidad de metotrexato cuando se toman juntas es más efectiva paira tratar el sujeto que cuando cada agente se administra solo.

3. El método de conformidad con las reivindicaciones l o 2, caracterizado porque- la cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la cantidad de metotrexato cuando se toman juntas es efectiva para reducir un síntoma clínico de artritis reumatoide en el sujeto..

4. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones i-3, caracterizado porque la . sal farmacéuticamente aceptable de laquinimod es laquinimod sodio

5. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo se efectúa oralmente.

6. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, . caracterizado porque la cantidad de laquinimod administrada es 0.0005 - 10 mg/.kg/día.

7. El método de conformidad con . cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque la cantidad de laquinimod administrada es 0.1^2.0 mg/día.

.8. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque la administración periódica de metotrexato se efectúa oralmente.

9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque la cantidad de metotrexato administrada es 0.02 - 1.0 mg/kg/día.

10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque la cantidad de-metotrexato administrada es 1-3 mg/día.

11. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 , caracterizado porque además comprende Ta administración de fármacos antiinflamatorios no esferoidales (NSAIDs) , . saliciíatos, fármacos de acción lenta, compuestos de oro, hidroxicloroquina, sulf.asalazina, combinaciones de fármacos de acción lenta, corticosteroides, fármacos citotóxico's , fármacos y/o anticuerpos inmunpsupresores . ¦

12. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, caracterizado porque la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y metotrexato elimina sustancialmente un síntoma asociado con artritis reumatoide.

13. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, caracterizado porque la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y metotrexato 'reduce la severidad de un síntoma asociado con artritis reumatoide.

14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, caracterizado porque la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y- metotrexato reduce el número de articulaciones afectadas por un síntoma asociado con artritis reumatoide.

15. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12-14, caracterizado porque el síntoma es inflamación.

16. El método dé conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-2-14, caracterizado porque el síntoma es formación del tejido pannus.

17. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12-14, caracterizado, porque el síntoma es daño al cartílago.

18. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12-14, caracterizado porque el síntoma es resorción ósea.

19. ' El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-18, caracterizado porque la administración periódica de . laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y metotrexato reduce proteinuria en el sujeto.

20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la' reducción de proteinuria se mide por 24 horas de proteína en orina, 24 horas de relación de proteína a creatinina,- relación de protéína i'n situ a creatinina, 24 horas de albúmina en orina, 24 horas de relación de albúmina a creatinina, relación de albúmina in situ a creatinina, o por tira reactiva urinaria.

21. El método de conformidad- con cualquiera de las reivindicaciones 1-20, caracterizado porque la administración periódica de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y metotrexato elimina los sedimentos urinarios.

22. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-21, caracterizado porque cada una de las cantidades de laqúinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo cuando se toman solas, y la cantidad de metotrexato cuando se toma sola es efectiva para tratar el su eto .

23. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1—21, caracterizado porque., ya sea la cantidad de laqúinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo- cuando se toma sola, la cantidad de metotrexato cuando se toma sola, o cada cantidad tal cuando se toma sola no es efectiva para tratar al. sujeto.

24. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones, 1-23,. caracterizado porque el sujeto recibe terapia de metotrexato . previo a iniciar la terapia de laqúinimod.

25. El método de conformidad con cualquiera de- las reivindicaciones 1-24, caracterizado porque el . sujeto es un mamífero.

26. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el mamífero es un humano. .

27. Laqúinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso. en combinación con metotrexato al tratar a un sujeto que padec de artritis reumatoide.

28. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende una cantidad de laquinimod o sal farmacéuticamente aceptable del mismo y una cantidad de metotrexato para uso al tratar un sujeto que padece de artritis reumatoide.