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MX2011011093A - Compuestos de heteroarilo y usos de los mismos. - Google Patents

Compuestos de heteroarilo y usos de los mismos.

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Publication number
MX2011011093A
MX2011011093A MX2011011093A MX2011011093A MX2011011093A MX 2011011093 A MX2011011093 A MX 2011011093A MX 2011011093 A MX2011011093 A MX 2011011093A MX 2011011093 A MX2011011093 A MX 2011011093A MX 2011011093 A MX2011011093 A MX 2011011093A
Authority
MX
Mexico
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ring
independently selected
nitrogen
sulfur
oxygen
Prior art date
Application number
MX2011011093A
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English (en)
Inventor
Juswinder Singh
Shomir Ghosh
Russell C Petter
Richland Wayne Tester
Arthur F Kluge
Original Assignee
Avila Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Avila Therapeutics Inc filed Critical Avila Therapeutics Inc
Publication of MX2011011093A publication Critical patent/MX2011011093A/es

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Abstract

La presente invención proporciona compuestos, composiciones farmacéuticamente aceptables de los mismos, y métodos para usar los mismos.

Description

COMPUESTOS DE HETEROARILO Y USOS DE LOS MISMOS Campo de la invención La presénte invención se refiere a compuestos útiles como inhibidores de proteína cinasas. La invención proporciona también composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden compuestos de la presente invención y métodos para usar esas composiciones en el tratamiento de varios trastornos.
Antecedentes de la Invención La búsqueda de nuevos agentes terapéuticos ha sido ampliamente auxiliada en años recientes por un mejor entendimiento de la estructura de las enzimas y otras biomoléculas asociadas con enfermedades. Una importante clase de enzimas que han sido el objeto del extenso estudio son las proteína cinasas.
Las proteína cinasas constituyen una gran familia de enzimas estructuralmente emparentadas que son responsables del control de una variedad de procesos de transducción de señales dentro de la célula. Se cree que las proteína cinasas han evolucionado de un gen ancestral común debido a la conservación de su estructura y función catalítica. Casi todas las cinasas contienen un dominio catalítico de 250-300 aminoácidos similar. Las cinasas pueden clasificarse en familias por los substratos que fosforilan (por ejemplo, proteína-tirosina , proteína-serina/treonina, lípidos, etc.).
REF. : 224757 En general, las proteína cinasas median la señalización intracelular al efectuar una transferencia de fosforilo de un trifosfato de nucleósido a un receptor de proteínas que esté implicado en una vía de señalización. Estos eventos de fosforilación actúan como apagadores/encendedores moleculares que pueden modular o regular la función biológica de las proteínas objetivo. Estos eventos de fosforilación son finalmente desencadenados en respuesta a una variedad de estímulos extracelulares y otros. Ejemplos de estos estímulos incluyen señales de estrés ambiental y químicas (por ejemplo, choque osmótico, choque término, radiación ultravioleta, endotoxinas bacterianas y H202) , citocinas (por ejemplo, interleucina-1 (IL-1) y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) ) , y factores de crecimiento (por ejemplo, factor estimulador de colonia de granulocitos-macrófagos (GM-CCSF) y factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) ) . Un estímulo extracelular puede afectar una o más respuestas celulares relacionadas con crecimiento celular, migración, diferenciación, secreción de hormonas, activación de factores de transcripción, contracción muscular, metabolismo de glucosa, control de síntesis de proteínas y regulación del ciclo celular.
Muchas enfermedades están asociadas con respuestas celulares anormales desencadenadas por eventos mediados por proteína cinasas como se describió arriba. Estas enfermedades incluyen, pero no están limitadas a, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades óseas, enfermedades metabólicas, enfermedades neurológicas y neurodegenerativas, cáncer, enfermedades cardiovasculares, alergia y asma, enfermedad de Alzheimer y enfermedades relacionadas con hormonas. En consecuencia, sigue habiendo la necesidad por encontrar inhibidores de proteína„cinasa útiles como agentes terapéuticos.
Breve Descripción de la Invención Se ha encontrado ahora que los compuestos de esta invención, y composiciones farmacéuticamente aceptables de los mismos, son efectivos como inhibidores de una o más proteína cinasas. Estos compuestos tienen la fórmula general W I o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde el anillo A, anillo B, m, Rx, RY, W y R1 son como se define en la presente .
Los compuestos de la presente invención, y composiciones farmacéuticamente aceptables de los mismos, son útiles para tratar una variedad de enfermedades, trastornos o afecciones, asociados con respuestas celulares anormales, desencadenadas por eventos mediados por proteína cinasa. Estas enfermedades, trastornos o afecciones incluyen aquellas descritas en la presente.
Los compuestos provistos por esta invención también son útiles para el estudio de cinasas en fenómenos biológicos y patológicos. El estudio de vías de transducción de señales intracelulares mediadas por estas cinasas y la evaluación comparativa de nuevos inhibidores de cinasa.
Breve Descripción de las Figuras La figura 1 ilustra la actividad inhibitoria de EGF del compuesto 1-1.
La figura 2 ilustra los resultados del compuesto I-1 en un experimento de "lavado" en comparación con el compuesto 1-93.
La figura 3 ilustra la inhibición de respuesta de dosis de la fosforilación de EGFR (gráfica superior) y p42/p44 Erk (gráfica inferior) con compuestos 1-16 e 1-17 en células A431.
La figura 4 ilustra la inhibición de respuesta de dosis de la fosforilación de EGFR (gráfica superior) y p42/p44 Erk (gráfica inferior) con compuesto 1-19 en células A431.
La figura 5 ilustra la inhibición de respuesta de dosis de la fosforilación de EGFR con compuesto 1-1 en células A431, en comparación con su compuesto de "control reversible" (IR-3) .
La figura 6 ilustra los resultados del compuesto I-1 en un experimento de "lavado" en comparación con su compuesto de "control reversible" (IR-3) .
La figura 7 ilustra el análisis MS que confirma la modificación covalente de ErbB4 por el compuesto 1-1.
La figura 8 ilustra el análisis MS que confirma la modificación covalente de ErbBl en Cys797 por el compuesto I-1.
La figura 9 ilustra la inhibición de la señalización' de BTK en células Ramos por el compuesto 1-13.
La figura 10 muestra los resultados del compuesto 1-13 en un experimento de "lavado" con BTK en células Ramos.
La figura 11 muestra el análisis MS de las digestiones trípticas, confirmando la modificación covalente de TEC cinasa por el compuesto 1-13.
La figura 12 ilustra el análisis MS que confirma la modificación covalente de BTK por el compuesto 1-63.
La figura 13 ilustra el análisis MS que confirma la modificación covalente de BTK por el compuesto 1-66.
La figura 14 ilustra una secuencia de aminoácidos para BTK (SEQ ID 1) .
La figura 15 ilustra una secuencia de aminoácidos para TEC (SEQ ID 2) .
La figura 16 ilustra una secuencia de aminoácidos para ITK (SEQ ID 3) .
La figura 17 ilustra una secuencia de aminoácidos para BMX (SEQ ID 4) .
La figura 18 ilustra una secuencia de aminoácidos para JAK3 (SEQ ID 5) .
La figura 19 ilustra una secuencia de aminoácidos para TX (SEQ ID 6) .
Descripción Detallada de la Invención 1. Descripción general de los compuestos de la invención En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula I: H (Rx I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: Anillo A es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de fenilo, un anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo bicíclico de 8-10 miembros que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; Anillo B es fenilo, un anillo heteroarilo de 5-6 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo bicíclico parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; R1 es un grupo de cabeza; Ry es hidrógeno, halógeno, CN, alquilo inferior o haloalquilo inferior; es una cadena alquileno de Ci-3 bivalente en donde una unidad metileno de W es reemplazada opcionalmente por -NR2-, -N(R2)C(0)-, C(0)N(R2)-, -N(R2)S02-, -S02N(R2)-, -O-, -C(0)-, -OC(O)-, -C(0)0-, -S-, -SO- o -S02-; R2 es hidrógeno o alifático de C1-6 opcionalmente sustituido, o: R2 y un sustituyente en el anillo A se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado de 4-6 miembros, o: R2 y Ry se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo carbocíclico de 4-7 miembros ; m es 0-4; cada Rx se selecciona independientemente de -R, halógeno, -OR, -CN, -N02/ -S02R, -SOR, -C(0)R, -C02R, C(0)N(R)2, -NRC(0)R, -NRC(0)NR2, -NRS02R, o -N(R)2, o: Rx y R1 se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con un grupo de cabeza y 0-3 grupos seleccionados independientemente de oxo, halógeno, -CN o alifático de Ci-6; o cada grupo R es independientemente hidrógeno o un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de alifático de Ci-6, fenilo, un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula II : w H (RX)m II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: Anillo A es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de fenilo, un anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo bicíclico de 8-10 miembros que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; R1 es un grupo de cabeza; Ry es hidrógeno, halógeno, CN, alquilo inferior o haloalquilo inferior; G es CH o N; W es -NR2-, -S-, o -0-; R2 es hidrógeno o alifático de Ci-6 opcionalmente sustituido, o: R2 y un sustituyente en el anillo A se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado de 4-6 miembros ; m es 0-4; cada Rx se selecciona independientemente de -R, halógeno, -0R, -CN, -N02/ -S02R, -SOR, -C(0)R, -C02R, C(0)N(R)2, -NRC(0)R, -NRC(0)NR2, -NRS02R, o -N(R)2, o: Rx y R1 se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con un grupo de cabeza y 0-3 grupos seleccionados independientemente de oxo, halógeno, -CN o alifático de Ci-6; y cada grupo R es independientemente hidrógeno o un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de alifático de Ci-6, fenilo, un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre . 2. Compuestos y definiciones Los compuestos de esta invención incluyen aquellos descritos generalmente arriba, y se ilustran más por las clases, subclases y especies descritas en la presente. Según se usa en la presente, las siguientes definiciones aplicarán a menos que se indique lo contrario. Para los motivos de esta invención, los elementos químicos se identifican de acuerdo con la tabla periódica de los elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75a edición. Además, los principios generales de química orgánica se describen en "Organic Chemistry". Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, y "March's Advanced Organic Chemistry", 5a edición., Ed. ; Smith, M.B. y March, J., John Wiley & Sons, Nueva York: 2001, los contenidos completos de las cuales se incorporan en la presente a manera de referencia.
El término "alifático" o "grupo alifático", según se usa en la presente, significa una cadena de hidrocarburos de cadena recta (es decir, no ramificada) o ramificada, sustituido o no sustituido que es completamente saturado o que contiene una o más unidades de insaturación, o un hidrocarburo monocíclico o hidrocarburo bicíclico que es completamente saturado o que contiene una o más unidades de insaturación, pero el cual no es aromático (conocido también aquí como "carbociclo" , "cicloalifático" o "cicloalquilo"), que tiene un solo punto de fijación al resto de la molécula. A menos que se especifique lo contrario, los grupos alifáticos contienen 1-6 átomos de carbono alifáticos. En algunas modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-5 átomos de carbono alif ticos. En otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-4 átomos de carbono alifáticos. En aún otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-3 átomos de carbono alifáticos, y en otras modalidades más, los grupos alifáticos contienen 1-2 átomos de carbono alifáticos. En algunas modalidades, "cicloali ático" (o "carbociclo" o "cicloalquilo") se refiere a un hidrocarburo de C3-C3 monocíclico que es completamente saturado o que contiene una o más unidades de insaturación, pero el cual no es aromático, que tiene un solo punto de fijación al resto de la molécula. Los grupos alifáticos adecuados incluyen, pero no están limitados a, grupos alquilo, alquenilo, alquinilo lineales o ramificados, sustituidos o no sustituidos e híbridos de los mismos tales como (cicloalquil) alquilo, (cicloalquenil) alquilo o (cicloalquil) alquenilo.
El término "alquilo inferior" se refiere a un grupo alquilo de Ci-4 recto o ramificado. Los grupos alquilo inferior ejemplares son metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo y tert-butilo .
El término "haloalquilo inferior" se refiere a un grupo alquilo de Ci-4 recto o ramificado que está sustituido con uno o más átomos de halógeno.
El término "heteroátomo" significa uno o más de oxígeno, azufre, nitrógeno, fósforo o silicio (incluyendo cualquier forma oxidada de nitrógeno, azufre, fósforo o silicio; la forma cuaternizada de cualquier nitrógeno básico o un nitrógeno sustituible de un anillo heterocíclico , por ejemplo N (como en 3 , 4 -dihidro-2H-pirrolilo) , NH) como en pirrolidinilo) o NR+ (como en pirrolidinilo N-sustituido) ) .
El término "insaturado" , según se usa en la presente, significa que una porción tiene una o más unidades de insaturación .
Según se usa en la presente, el término "cadena de hidrocarburos de Ci-8 (o Ci-6) bivalente, recta o ramificada, saturada o insaturada" , se refiere a cadenas alquileno, alquenileno y alquinileno bivalentes que son rectas o ramificadas según se define en la presente.
El término "alquileno" se refiere a un grupo alquilo bivalente. Una "cadena alquileno" es un grupo polimetileno, es decir, -(CH2)n-# en donde n es un entero positivo, de preferencia de 1 a 6, de 1 a 4, de 1 a 3, de 1 a 2 o de 2 a 3. Una cadena alquileno sustituida es un grupo polimetileno en el cual uno o más átomos de hidrógeno de metileno son reemplazados con un sustituyente . Los sustituyentes adecuados incluyen aquellos descritos abajo para un grupo alifático sustituido.
El término "alquenileno" se refiere a un grupo alquenilo bivalente. Una cadena alquenileno sustituida es un grupo polimetileno que contiene al menos un doble enlace en el cual uno o más átomos de hidrógeno son reemplazados con un sustituyente . Los sustituyentes adecuados incluyen aquellos descritos abajo para un grupo alifático sustituido.
Según se usa en la presente, el término "ciclopropilenilo" se refiere a un grupo ciclopropilo bivalente de la siguiente estructura: término "halógeno" significa F, Cl, Br o I . término "arilo" usado solo o como parte de una porción más grande como en "aralquilo", "aralcoxi" o "ariloxialquilo" , se refiere a sistemas de anillo monocíclicos y bicíclicos que tienen un total de cinco a catorce miembros de anillo, en donde por lo menos un anillo en el sistema es aromático y en donde cada anillo en el sistema contiene tres a siete miembros de anillo. El término "arilo" se puede usar indistintamente con el término "anillo arilo" . En ciertas modalidades de la presente invención, "arilo" se refiere a un sistema de anillo aromático que incluye, pero no está limitado a, fenilo, bifenilo, naftilo, antracilo y similares, el cual puede portar uno o más sustituyentes . También se incluye dentro del alcance del término "arilo", según se usa en la presente, un grupo en el cual un anillo aromático es fusionado a uno o más anillos no aromáticos, tales como indanilo, ftalimidilo, naftimidilo, fenantridinilo o tetrahidronaftilo, y similares.
Los términos "heteroarilo" y "heteroar-", usados solos o como parte de una porción más grande, por ejemplo, "heteroaralquilo" o "heteroaralcoxi" se refieren a grupos que tienen 5 a 10 átomos de anillo, de preferencia 5, 6 ó 9 átomos de anillo; que tienen 6, 10 ó 14 electrones p compartidos en una disposición cíclica; y que tienen, además de átomos de carbono, de uno a cinco heteroátomos . El término "heteroátomo" se refiere a nitrógeno, oxígeno o azufre, e incluye cualquier forma oxidada de nitrógeno o azufre, y cualquier forma cuaternizada de nitrógeno básico. Los grupos heteroarilo incluyen, sin limitación, tienilo, furanilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, isotiazolilo , tiadiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, indolizinilo , purinilo, naftiridinilo y pteridinilo. Los términos "heteroarilo" y "heteroar-", según se usan en la presente, también incluyen grupos en los cuales un anillo heteroaromático está fusionado a uno o más anillos arilo, cicloalifáticos o heterociclilo, en donde el radical o punto de fijación está en el anillo heteroaromático. Ejemplos no limitativos incluyen indolilo, isoindolilo, benzotienilo , benzofuranilo, dibenzofuranilo, indazolilo, bencimidazolilo , benztiazolilo, quinolilo, isoquinolilo, cinolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 4H-quinolizinilo, carbazolilo, acridinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo y pirido[2,3-b] -1 , 4-oxazin-3 (4H) -ona . Un grupo heteroarilo puede ser mono-o bicíclico. El término "heteroarilo" se puede usar indistintamente con los términos "anillo heteroarilo" , "grupo heteroarilo" o "heteroaromático" , cualquiera de los cuales términos incluye anillos que son sustituidos opcionalmente . El término "heteroaralquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido por un heteroarilo, en donde las porciones alquilo y heteroarilo son independientemente sustituidas en forma opcional .
Según se usa en la presente, los términos "heterociclo" , "heterociclilo" , "radical heterocíclico" y "anillo heterocíclico" se usan indistintamente y se refieren a una porción monocíclica de 5 a 7 miembros o heterocíclica bicíclica de 7-10 miembros estable que está ya sea saturada o parcialmente insaturada, y que tiene, además de átomos de carbono, uno o más, de preferencia uno a cuatro, heteroátomos, como se definió arriba. Cuando se usa en referencia a un átomo de anillo de un heterociclo, el término "nitrógeno" incluye un nitrógeno sustituido. Como un ejemplo, en un anillo saturado o parcialmente insaturado que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados de oxígeno, azufre o nitrógeno, el nitrógeno puede ser N (como en 3 , 4-dihidro-2íí-pirrolilo) , NH (como en pirrolidinilo) o +NR (como en pirrolidinilo N-sustituido) .
Un anillo heterocíclico puede ser fijado a su grupo colgante en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que dé como resultado una estructura estable y cualquiera de los átomos de anillo pueden ser sustituidos opcionalmente . Ejemplos de estos radicales heterocíclicos saturados o parcialmente insaturados incluyen, sin limitación, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenil pirrolidinilo, piperidinilo , pirrolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, decahidroquinolinilo , oxazolidinilo, piperazinilo, dioxanilo, dioxolanilo, diazepinilo, oxazepinilo, tiazepinilo, morfolinilo y quinuclidinilo . Los términos "heterociclo" , "heterociclilo", "anillo heterociclilo", grupo heterocíclico" , "porción heterocíclica" y "radical heterocíclico", se usan indistintamente en la presente, y también incluyen grupos en los cuales un anillo heterociclilo está fusionado a uno o más anillos arilo, heteroarilo o cicloalifático, tales como indolinilo, 3H- indolilo, cromanilo, fenantridinilo, o tetrahidroquinolinilo, en donde el radical o punto de fijación está en el anillo heterociclilo. Un grupo heterociclilo puede ser mono- o bicíclico. El término "heterociclilalquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido por un heterociclilo, en donde las porciones alquilo y heterociclilo son sustituidas independientemente en forma opcional.
Según se usa en la presente, el término "parcialmente insaturado" se refiere a una porción de anillo que incluye por lo menos un doble enlace o un triple enlace. El término "parcialmente insaturado" intenta abarcar anillos que tienen varios sitios de insaturación, pero no intenta incluir porciones arilo o heteroarilo, como las definidas en la presente .
Según se describe en la presente, los compuestos de la presente invención pueden contener porciones "sustituidas opcionalmente" . En general, el término "sustituido", ya sea precedido por el término "opcionalmente" o no, significa que uno o más hidrógenos de la porción designada son reemplazados con un sustituyente adecuado. A menos que se indique lo contrario, un grupo "sustituido opcionalmente" puede tener un sustituyente adecuado en cada posición sustituible del grupo, y cuando más de una posición en cualquier estructura dada puede ser sustituida con más de un sustituyente seleccionado de un grupo especificado, el sustituyente puede ser ya sea el mismo o diferente en cada posición. Combinaciones de sustituyentes contempladas por esta invención son de preferencia aquellas que dan como resultado la formación de compuestos estables o químicamente viables. El término "estable", según se usa en la presente, se refiere a compuestos que no son alterados sustancialmente cuando se les somete a condiciones para permitir su producción, detección y, en ciertas modalidades, su recuperación, purificación y uso para uno o más de los propósitos descritos en la presente .
Los sustituyentes monovalentes adecuados en un átomo de carbono sustituible de un grupo "sustituido opcionalmente" son independientemente halógeno; -(CH2)0-4R°, - (CH2)o-40R°, -0(CH2) 0-4Ro , -0- (CH2)o-4C(0)OR0; - (CH2) 0-4CH (0R° ) 2 ; - (CH2)o-4SR°; -(CH2)0-4Ph, los cuales pueden ser sustituidos con R° ; - (CH2) 0-4O (CH2) 0-1-pi^id lo el cual puede ser sustituido con R°; -N02; -CN-N3; - (CH2) 0-4N (R° ) 2 ; - (CH2 ) 0-4N (R° ) C (O) R° ; N(R°)C(S)R°; - (CH2)0-4N(Ro)C(O)NR°; -N (R° ) C (S) NR°2 ; -(CH2)0-4N(Ro)C(0)0R°; -N (R° ) N (R° ) C (0) R° ; -N(R°)N(R°)C(0) NR° ; N(R°)N(R°)C(0)0R°; - (CH2) 0-4C (0) R° ; -C(S)R°; - (CH2) 0-4C (0) 0R° ; - (CH2)o.4C(0)SR°; - (CH2) 0-4C (O) 0SiR°3 ; - (CH2) 0-4OC (O) R° ; OC(O) (CH2) 0-4SR0 , SC(S)SR°; - (CH2) 0-4OC (0) NR° ; -C (0) N (0R° ) R° ; -C(0)C(0)R°; -C(0)CH2C(0)R°; -C(N0R°)R°; - (CH2) 0-4SSRo ; -(CH2)0. 4S(0)2R°; - (CH2) 0-4S (O) 20R° ; - (CH2) 0-4OS (0) 2R° ; -S(0)2NR°2; (CH2)o-4S (0)R° ; -N(R°) S (0)2NR°2; -N (R° ) S (O) 2R° ; -N(0R°)R°; -C(NH)NR°2; -P(0)2R°; -P(0)R°2; -OP(0)R°; -0P (0) (0R° ) 2 ; SiR°3; - (alquileno de Ci-4 recto o ramificado) 0-N (R° ) 2 ; o - (alquileno recto o ramificado de C1-4) C (O) 0-N (R° ) 2, en donde cada R° puede ser sustituido como se define abajo y es independientemente hidrógeno, alifático de C1-6, -CH2Ph, O(CH2)0-1Ph, -CH2- (anillo heteroarilo de 5-6 miembros) , o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o, no obstante la definición anterior, dos ocurrencias independientes de R°, tomados juntos con sus átomos interventores, forman un anillo mono- o bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arilo de 3-12 miembros que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, el cual puede ser sustituido como se define aba o .
Los sustituyentes monovalentes adecuados en R° (o el anillo formado al tomar dos ocurrencias independientes de R° juntos con sus átomos interventores) , son independientemente halógeno, -(CH2)0-2R*, - (haloR*) , -(CH2)o-20H, - (CH2) 0-2OR\ - (CH2) o-2CH(OR*) ; -0(haloR*); -CN, -N3, -(CH2)0- 2C(0)R*, - (CH2)0-2C(O)'OH, - (CH2)0-2C(O)OR\ - (CH2) 0-2SR*) , -(CH2)0-2SH, - (CH2) 0-2NH2/ - (CH2) 0-2NHR\ - (CH2) 0-2NR*2 , -N02, -SÍR*3, -OSiR*2, -C(0)SR*, - (alquileno de C1-4 recto o ramificado) C (O) OR", O -SSR* en donde cada R* es no sustituido o cuando sea precedido por "halo" es sustituido sólo con uno o más halógenos, y se selecciona independientemente de alifático de C1-4, -CH2Ph, -0 (CH2) 0-iPh, o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre. Los sustituyentes divalentes adecuados en un átomo de carbono saturado de R° incluyen =0 y =S.
Los sustituyentes divalentes adecuados en un átomo de carbono saturado de un grupo "sustituido opcionalmente" incluyen los siguientes: =0, =S, =N R*2, =NNHC(0)R*, =NNHC(0)0R\ =NNHS(0)2R*, =NR*, =N0R\ -0(C(R*2) )2-30-, o -S (C (R*2) ) 2-2.S- , en donde cada ocurrencia independiente de R* se selecciona de hidrógeno, alifático de C1-6 el cual puede ser sustituido como se define abajo, o un anillo saturado, parcialmente saturado o arilo de 5-6 miembros no sustituido que tenga 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre. Los sustituyentes divalentes adecuados que están unidos a carbonos sustituibles vecinales de un grupo "sustituido opcionalmente" incluyen: -0 (CR*2) 2-3O- , en donde cada ocurrencia independientemente de R* se selecciona de hidrógeno, alifático de Ci-6 que puede ser sustituido como se define abajo, o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros no sustituido que tenga 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre.
Los sustituyentes adecuados en el grupo alifático de R* incluyen halógeno, -R*, - (haloR*) , -OH, -0R*, 0(haloR\) , -CN, -C(0)0H, -C(0)0R*, -NH2, -NHR*, -NR*2, O -N02, en donde cada R* es no sustituido o cuando es precedido por "halo" es sustituido sólo con uno o más halógenos, y es independientemente alifático de Ci-4, -CH2Ph, -0 (CH2) 0-iPh, o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre.
Los sustituyentes adecuados en un nitrógeno sustituible de un grupo "sustituido opcionalmente" incluyen -Rf, -NR†2, -C(0)R†, -C(0)0R\ -C(0)C(0)R†, -C (0) CH2C (O) R† , -S(0)2 f, -S(0)2NRf2, -C(S)NR12, -C (NH) NRf2 , o -N ( R1 ) S (O) 2Rf ; en donde cada Rf es independientemente hidrógeno, alifático de Ci-6 que puede ser sustituido como se define abajo, -OPh no sustituido, o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros no sustituido que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o, no obstante la definición anterior, dos ocurrencias independientes de Rf , tomadas juntos con sus átomos interventores forman un anillo saturado, parcialmente saturado o arilo mono- o bicíclico de 3-12 miembros no sustituido que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre.
Los sustituyentes adecuados en el grupo alifático de Rf son independientemente halógeno, -R*, - (haloR*) , -OH, -OR*, -O(haloR'), -CN, -C(0)0H, -C(0)0R*, -NH2, -NHR*, -NR*2, O -N02, en donde cada R* es no sustituido o cuando es precedido por "halo" es sustituido sólo con uno o más halógenos; y es independientemente alifático de Ci-4, -CH2Ph, -O (CH2) 0-iPh, o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros que tienen 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre.
Según se usa en la presente, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales las cuales son, dentro del alcance de juicio médico correcto, adecuados para usarse en contacto con los tej idos de humanos y animales inferiores sin toxicidad indebida, irritación, respuesta alérgica y similares, y son conmensuradas con una relación beneficio/riesgo razonable. Las sales farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, S. M. Berge et al., describen sales farmacéuticamente aceptables en detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, incorporada en la presente a manera de referencia. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen aquellas derivadas de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos adecuados. Ejemplos de sales de adición con ácidos farmacéuticamente aceptables y no tóxicas son las sales de un grupo amino formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico, o usando otros métodos usados en la técnica tales como intercambio iónico. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencensulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato , digluconato, dodecilsulfato, etansulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yodhidrato, 2-hidroxi-etansulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metansulfonato, 2 -naftalensulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3 -fenilpropionato, fosfato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluensulfonato, undecanoato, valerato y similares.
Las sales derivadas de bases adecuadas incluyen las sales de metal alcalino, metal alcalinotérreo, amonio y N+ (alquilo de Ci_4)4. Las sales alcalinas o de metal alcalinotérreo representativas incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares. Sales farmacéuticamente aceptables adicionales incluyen, cuando sea adecuado, los cationes de amonio no tóxicos, de amonio cuaternario y de amina formados usando contraiones tales como halogenuro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquilsulfonato inferior y arilsulfonato .
A menos que se indique lo contrario, las estructuras ilustradas en la presente también intentan incluir todas las formas isoméricas (por ejemplo, enantioméricas , diastereoméricas y geométricas (o de conformación) ) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, isómeros de doble enlace Z y E e isómeros de conformación Z y E. Por lo tanto, los isómeros estereoquímicos individuales así como las mezclas enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales) de los presentes compuestos están dentro del alcance de la invención. A menos que se indique lo contrario, todas las formas tautoméricas de los compuestos de la invención están dentro del alcance de la invención. Además, a menos que se indique lo contrario, las estructuras ilustradas en la presente también intentan incluir compuestos que difieren sólo en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras que incluyen el remplazo de hidrógeno por deuterio o tritio, o el reemplazo de un carbono por un carbono enriquecido con 13C o 14C están dentro del alcance de esta invención. Estos compuestos son útiles, por ejemplo, como herramientas analíticas, como sondas en ensayos biológicos o como agentes terapéuticos de acuerdo con la presente invención. En algunas modalidades, el grupo R1 de la fórmula I-a o I-b comprenden uno o más átomos de deuterio.
Según se usa en la presente, el término "irreversible" o "inhibidor irreversible" se refiere a un inhibidor (es decir, un compuesto) que es capaz de ser unido covalentemente a una proteína cinasa objetivo de una manera sustancialmente irreversible. Es decir, mientras que un inhibidor reversible es capaz de unirse a (pero generalmente es incapaz de formar un enlace covalente) la proteína cinasa objetivo, y por lo tanto puede volverse disociado de la proteína cinasa objetivo, un inhibidor irreversible permanecerá unido sustancialmente a la proteína cinasa objetivo una vez que haya ocurrido la formación del enlace covalente. Los inhibidores irreversibles normalmente despliegan dependencia de tiempo, con lo cual el grado de inhibición se incrementa con el tiempo con el cual el inhibidor está en contacto con la enzima. Los métodos para identificar si un compuesto actúa como un inhibidor irreversible se conocen por alguien de capacidad ordinaria en la técnica. Estos métodos incluyen, pero no están limitados a, análisis cinético enzimático del perfil de inhibición del compuesto con el objetivo de proteína cinasa, el uso de espectrometría de masas del objetivo de fármaco de proteína modificado en presencia del compuesto inhibidor, exposición discontinua, también conocidos como experimentos de "lavado", y el uso de marcado, tal como inhibidor marcado radioactivamente, para mostrar la modificación covalente de la enzima, así como otros métodos conocidos por alguien experto en la técnica.
Alguien de capacidad ordinaria en la técnica reconocerá que ciertos grupos funcionales reactivos pueden actuar como "cabezas". Según se usa en la presente, el término "cabeza" o "grupo de cabeza" se refiere a un grupo funcional presente en un compuesto de la presente invención en donde ese grupo funcional es capaz de unirse covalentemente a un residuo de aminoácido (tal como cisteína, lisina, histidina u otros residuos capaces de ser modificados covalentemente) presente en la cavidad de unión de la proteína objetivo, inhibiendo de esta manera irreversiblemente la proteína. Se apreciará que el grupo -L-Y, como se define y se describe en la presente, proporciona estos grupos de cabeza para inhibir de manera covalente, e irreversible, la proteína.
Según se usa en la presente, el término "inhibidor" se define como un compuesto que se une a y/o inhibe la proteína cinasa objetivo con afinidad mesurable. En ciertas modalidades, un inhibidor tiene una IC50 y/o constante de unión de menos de aproximadamente 50 µ?, menos de alrededor de 1 µ?, menos de aproximadamente 500 nM, menos de alrededor de 100 nM, o menos de aproximadamente 10 nM.
Los términos "afinidad mesurable" y "inhiben de manera mesurable", según se usan en la presente, significan un cambio mesurable en por lo menos uno de actividad ErbBl, ErbB2, ErbB3, ErbB4 , una TEC-cinasa, y/o JAK3 entre una muestra que comprende un compuesto de la presente invención, o composición del mismo, y al menos uno de ErbBl, ErbB2, ErbB3, ErbB4, una TEC-cinasa, y/o JAK3 , y una muestra equivalente que comprenda al menos uno de ErbBl, ErbB2, ErbB3 , ErbB4 , una TEC-cinasa, y/o JA 3 , en ausencia del compuesto, o composición del mismo. 3. Descripción de compuestos ejemplares De acuerdo con un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula I, i o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: el anillo A es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de fenilo, un anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo bicíclico de 8-10 miembros que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; el anillo B es fenilo, un anillo heteroarilo de 5-6 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene' 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo bicíclico parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; R1 es -L-Y, en donde: L es un enlace covalente o una cadena de hidrocarburos saturada o insaturada, recta o ramificada de Ci-8 y bivalente, en donde una, dos o tres unidades metileno de L son reemplazadas de manera opcional e independiente por ciclopropileno, -NR- , -N(R)C(0)-, -C(0)N(R)-, -N(R)S02-, -S02N(R)-, -0-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -S-, -SO-, -S02-, -C(=S)-, -C(=NR)-, -N=N- , o -C(=N2)-; Y es hidrógeno, alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN, o un anillo monocíclico o bicíclico de 3-10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, y en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re; y cada Re se selecciona independientemente de -Q-Z, oxo, N02, halógeno, CN, un grupo saliente adecuado, o un alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN, en donde: Q es un enlace covalente o una cadena de hidrocarburos saturada o insaturada de Ci_6, recta o ramificada y bivalente, en donde una o dos unidades metileno de Q son opcional e independientemente reemplazadas por -NR-, -S-, -0-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -SO- o -S02-, -N(R)C(0)-, -C(0)N(R)-; -N(R)S02- o -S02N(R)-; y Z es hidrógeno o alifático de Ci-s sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; Ry es hidrógeno, halógeno, CN, alquilo inferior o haloalquilo inferior; W es una cadena alquileno de Ci-3 bivalente en donde una unidad metileno de W es reemplazada opcionalmente por -NR2-, - (R2)C(0)-, C(0)N(R2) -, -N(R2)S02-, -S02N(R2) -, -0-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -S-, -SO- o -S02-; R2 es hidrógeno o alifático de Ci_6 opcionalmente sustituido, o: R2 y un sustituyente en el anillo A se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado de 4-6 miembros, o: R2 y Ry se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo carbocíclico de 4-7 miembros; m es 0 -4 ; cada R se selecciona independientemente de -R, halógeno, -0R, -CN, -N02, -S02R, -SOR, -C(0)R, -C02R, C(0)N(R)2, -NRC(0)R, -NRC(0)NR2, -NRS02R, o -N(R)2; o: Rx y R1. se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con un grupo de cabeza y 0-3 grupos seleccionados independientemente de oxo, halógeno, -CN o alifático de Ci-6; y cada grupo R es independientemente hidrógeno o un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de alifático de Ci-6, fenilo, un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula II: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: el anillo A es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de fenilo, un anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo bicíclico de 8-10 miembros que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; R1 es -L-Y, en donde: L es un enlace covalente o una cadena de hidrocarburos saturada o insaturada, recta o ramificada de Ci-8 y bivalente, en donde una, dos o tres unidades metileno de L son reemplazadas de manera opcional e independiente por ciclopropileno, -NR- , -N(R)C(0)-, -C(0)N(R)-, -N(R)S02-, -S02N(R)-, -0-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -S-, -SO-, -S02-, -C(=S)-, -C(=NR)-, -N=N-, O -C(=N2)-; Y es hidrógeno, alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02, o CN, o un anillo monocíclico o bicíclico de 3-10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, y en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re; y cada Re se selecciona independientemente de -Q-Z, oxo, N02, halógeno, CN, un grupo saliente adecuado, o un alifático de C1-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN, en donde: Q es un enlace covalente o una cadena de hidrocarburos saturada o insaturada de Ci-6, recta o ramificada y bivalente, en donde una o dos unidades metileno de Q son opcional e independientemente reemplazadas por -NR- , -S-, -0-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -SO- o -S02-, -N(R)C(0)-, -C(0)N(R)-, -N(R)S02- o -S02N(R)-; y Z es hidrógeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; Ry es hidrógeno, halógeno, CN, alquilo inferior o haloalquilo inferior; G es CH o N; W es -NR2-, -S-, o -0-; R2 es hidrógeno o alifático de Ci-6 opcionalmente sustituido, O : R2 y un sustituyente en el anillo A se' toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado de 4-6 miembros,- m es 0-4; cada R se selecciona independientemente de -R, halógeno, -0R, -CN, -N02/ -S02R, -SOR, -C(0)R, -C02R, C(0)N(R)2, -NRC(0)R, -NRC(0)NR2/ -NRS02R, o -N(R)2; o: Rx y R1 se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con un grupo de cabeza y 0-3 grupos seleccionados independientemente de oxo, halógeno, -CN o alifático de Ci-6; y cada grupo R es independientemente hidrógeno o un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de alifático de C1-6, fenilo, un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre .
De acuerdo con un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula Il-a o Il-b: ?-a Il-b o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, W, R1 , G, Ry, Rx y m son como se definió arriba para la fórmula II y como se describe en la presente.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula ??-b en donde el compuesto no es N6 -m - 1 ol i 1 -N4 - p - t ol i l i r imidin - 4 , 6 -diamina .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula Il-a en donde el compuesto no es N4 - ( 3 - aminof eni 1 ) -N6 - ( 3 -b omo f en i 1 )pirimidin-4,6-diamina, N- (3- (6- (3-( tr i f luoromet i 1 ) fenilamino) pirimidin-4 -ilamino) fenil) c i c lopropano - c arboxamida , N- (3- (6- (3-bromof en i lamino) pirimidin-4- ilamino) fenil) prop ionami da , N4 - ( 3 - aminofeni 1 ) -N-m-tolilpirimidin-4 , 6 -diamina, o N4 - ( 3 - aminof eni 1 ) -N6 -metil-N6-fenil-pirimidin-4,6-diamina.
Según se definió generalmente arriba, el grupo Anillo A de las fórmulas I y II es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de fenilo, un anillo bicíclico parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, un anillo heterarilo bicíclico de 8-10 miembros que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre. En ciertas modalidades, el Anillo A es un grupo fenilo sustituido opcionalmente. En algunas modalidades, el Anillo A es un anillo naftilo sustituido opcionalmente o un anillo heteroarilo de 8-10 miembros bicíclico que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre. En algunas modalidades, el Anillo A es un éter difenílico sustituido opcionalmente. En algunas modalidades, el Anillo A es un éter f enilbencí lico sustituido opcionalmen e. En otras modalidades, el Anillo A es un grupo piridina metoxifenilo sustituido opcionalmente.
En ciertas modalidades, el grupo Anillo A de las fórmulas I y II es sustituido como se define en la presente. En algunas modalidades, el Anillo A es sustituido con uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente de halógeno, R° o - (CH2) 0-4OR0 , o -O (CH2) 0- R0 , en donde cada R° es como se define en la presente. Los sustituyentes ejemplares en el Anillo A incluyen Br, I, Cl , metilo, -CF3, -C=CH, -OCH2f enilo, -OCH2 ( f luorof enilo) o - OCH2 i r i di 1 o .
Los grupos Anillo A ejemplares de las fórmulas I y II se muestran en la tabla 1.
Tabla 1 Grupos Anillo A ejemplares ?? ?? lv Ivi Como se definió generalmente arriba, el grupo Anillo B de la fórmula I es fenilo, un anillo heteroarilo de 5-6 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados, independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo de 8-10 miembros parcialmente insaturado o arilo que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre.
En algunas modalidades, el grupo Anillo B de la fórmula I es fenilo. En algunas modalidades, Anillo B es un anillo heteroarilo de 6 miembros que tiene 1-3 nitrógenos. En algunas modalidades, Anillo B es un anillo heteroarilo de 5 miembros que tiene 1 ó 2 ó 3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre.
En algunas modalidades, el grupo Anillo B de la fórmula I es un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1 nitrógeno. En algunas modalidades, Anillo B es un anillo bicíclico parcialmente saturado y heteroarilo de 9-10 miembros que tiene 1-3 nitrógenos. En algunas modalidades, Anillo B es un anillo heteroarilo bicíclico parcialmente saturado de 9-10 miembros que tiene 1 nitrógeno.
Los grupos Anillo B ejemplares se muestran en la tabla 2.
Tabla 2 Grupos Anillo B xiii xiv En algunas modalidades, la porción m de la fórmula I, II, lia o Ilb es 1, 2, 3 ó 4. En algunas modalidades, m es 1. En otras modalidades, m es 0.
Como se definió generalmente arriba, cada grupo Rx de la fórmula I o II se selecciona independientemente de -R, halógeno, -0R, -CN, -N02, -S02R, -SOR, -C(0)R, -C02R, C(0)N(R)2, -NRC(0)R, -NRC(0)NR2, -NRS02R o -N(R)2, o Rx y R1 se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con un grupo de cabeza, en donde el grupo de cabeza es -Q-Z-, y el anillo es sustituido además con 0-3 grupos seleccionados independientemente de oxo, halógeno, -CN o alifático de Ci-e.
En algunas modalidades, cada instancia de Rx se selecciona independientemente de -R, -OR o halógeno. En ciertas modalidades, R* es alquilo inferior, alcoxi inferior, alcoxialcoxi inferior o halógeno. Los grupos Rx ejemplares incluyen metilo, metoxi y cloro. En algunas modalidades, R* es hidrógeno.
En algunas modalidades, el grupo G de cualquiera de las fórmulas II, Il-a o ??-b es CH. En otras modalidades, el grupo G de cualquiera de las fórmulas II, Il-a o ??-b es N.
Como se definió generalmente arriba, el grupo W de la fórmula I es una cadena alquileno de Ci-3 bivalente en donde una unidad metileno de W es reemplazada opcionalmente por -NR2-, -N(R2)C(0)-, -C(0)N(R2)-, -N(R2)S02-, -S02N(R2)-, - O-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -S-, -SO- o -S02-.
En ciertas modalidades, el grupo W de la fórmula I es -NH- , -S- o -O- . En algunas modalidades, el grupo W de la fórmula I es -CH20-, -CH2S-, o -CH2NH- . En algunos aspectos, es -OCH2-, -SCH2-, -NHCH2- o -CH2CH2-.
En algunas modalidades, el grupo de la fórmula I es -0-, formando entonces un compuesto de la fórmula I-i: R N N H (RX), I-Í o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, R1, Rx, Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente .
En algunas modalidades, W es -NR2-, formando entonces un compuesto de la fórmula I-ii: N— R2 JL RY R1 H ( )m .
I-ii o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, R1 , R2 Rx, Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente .
En algunas modalidades, W es -S-, formando entonces un compuesto de la fórmula I-iii: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, R1, Rx, Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente .
En algunas modalidades, el grupo W de la fórmula II es -0-, formando entonces un compuesto de la fórmula Il-i: t) ( x)m II-/ o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, R1, Rx, Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente .
En algunas modalidades, el grupo W de la fórmula II es -NR2-, formando entonces un compuesto de la fórmula II-ii: II-ii o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, R1, R2, R , Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente.
En ciertas modalidades, R2 es hidrógeno. En algunas modalidades, R2 es metilo. En aún otras modalidades, R2 es alquilo inferior.
En algunas modalidades, el grupo W de la fórmula II es -S-, formando entonces un compuesto de la fórmula Il-iii: N N /R \ „ ... , M-iii o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, R1, Rx, Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente .
En ciertas modalidades, el grupo G de la fórmula II es CH, formando entonces un compuesto de la fórmula III: W ra o una sal f rmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, W, R1, Rx, Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente.
En ciertas modalidades, el compuesto de la fórmula III tiene la fórmula Ill-a-i, Ill-b-i, III-a-ii, III-b-ii, III-a-iii o III-b-iii: III-a-/H III-b-/ii o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, Rl , Rx , Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente.
En ciertas modalidades, el grupo G de la fórmula II es N, formando entonces un compuesto de la fórmula IV : o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, , R1 , Rx , Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente.
En ciertas modalidades, el compuesto de la fórmula IV tiene la fórmula IV-a-i, IV-b-i, IV-a-ii, IV-b-íí , IV-a-iii o IV-b-iii: IV-a-t/? IV-b-üt o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, R1, R2, R , Ry y m son como se definió arriba y se describe en las clases y subclases arriba y en la presente .
De acuerdo con algunos aspectos, R2 y un sustituyente en Anillo A se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado o parcialmente insaturado de 4-7 miembros, formando entonces un compuesto de la fórmula II-a-iv o II-b-iv: II-a-v ??-b-i'v o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno del Anillo A, R1, Rx y m son como se definió arriba y se describe en clases y subclases arriba y en la presente.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula II-a-v o II-b-v en donde Anillo A es fenilo y el compuesto es de la fórmula II-a-v o II-b-v: II-a-v II-b-v o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde la porción fenilo del Anillo A es sustituida opcionalmente , y cada uno R1, Rx, Ry y m son como se definió arriba y se describe en clases y subclases arriba y en la presente.
En algunas modalidades, R2 es hidrógeno. En otras modalidades, R2 y Ry se toman juntos formando así un compuesto de la fórmula II-a-vi o II-b-vi: II-a-vi II-b-ví Como se definió generalmente arriba, el grupo R1 de las fórmulas I y II es -L-Y, en donde: L es un enlace covalente o una cadena hidrocarburo bivalente de C1-8 saturada o insaturada, recta o ramificada, en donde una, dos o tres unidades metileno de L son reemplazadas de manera opcional e independiente por ciclopropileno, -NR-, -N(R)C(0)-, -C(0)N(R)-, -N(R)S02-, -S02N(R)-, -O-, -C(O)-, -0C(0), -C(0)0-, -S-, -SO-, -S02-, -C(=S)-, -C(=NR)-, -N=N- , o -C(=N2)-; Y es hidrógeno, alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN, o un anillo de 3-10 miembros monocíclico o bicíclico, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, y en donde el anillo es sustituido por 1-4 grupos Re; y cada Re se selecciona independientemente de -Q-Z, oxo, N02 , halógeno, CN, un grupo saliente adecuado, o un alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN, en donde: Q es un enlace covalente o una cadena de hidrocarburo bivalente de C1-6 saturada o insaturada, recta o ramificada, en donde una o dos unidades metileno de Q son reemplazadas de manera opcional e independiente por -N(R)-, -S-, -0-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -SO- o -SO2-, -N( )C(0)-, -C(0)N(R)-, -N(R)S02-, o -S02N(R)-; y Z es hidrogeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN.
En ciertas modalidades, L es un enlace covalente. En ciertas modalidades, L es una cadena de hidrocarburo bivalente de C1-8 saturada o insaturada, recta o ramificada. En ciertas modalidades, L es -CH2- .
En ciertas modalidades, L es un enlace covalente, -CH2-, -NH-, -CH2NH- , -NHCH2-, -NHC (0) - , -NHC (0) CH20C (0) - , -CH2NHC(0)-, -NHS02-, -NHS02CH2-, -NHC (0) CH20C (0) - , 0 -S02NH- .
En algunas modalidades, L es una cadena de hidrocarburo bivalente de C2-s recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace y una o dos unidades metileno adicionales de L son reemplazadas en forma opcional e independiente por -NRC(O)-, -C(0)NR-, -N(R)S02-, -S02N(R)-, -S-, -S(0)-, -SO2-,- -0C(0)-, -C(0)0-, ciclopropileno, -O-, -N(R) -, o -C(0) - .
En ciertas modalidades, L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en la que L tiene al menos un doble enlace y por lo menos una unidad metileno de L es reemplazada por -C(0)-, -NRC(O)-, -C(0)NR-, -N(R)S02-, -S02N(R)-, -S-, -S(0)-, -S02-, -OC (O) - o -C(0)0-, y una o dos unidades metileno adicionales de L son reemplazadas en forma opcional e independiente por ciclopropileno, -0-, -N (R) - , o -C(0) - .
En algunas modalidades, L es una cadena de hidrocarburos bivalente de C2-8 recta o ramificada, en donde L tiene por lo menos un doble enlace y al menos una unidad metileno de L es reemplazada por -C(0)-, y una o dos unidades metileno adicionales de L son reemplazadas de manera opcional e independiente por ciclopropileno, -0-, -N(R)-, o -C(0)-.
Como se describió arriba, en ciertas modalidades, L es una cadena de hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene al menos un doble enlace. Alguien de capacidad ordinaria en la técnica reconocerá que este doble enlace puede existir dentro del esqueleto de la cadena de hidrocarburos o puede ser "exo" a la cadena del esqueleto y formar entonces un grupo alquilideno. A manera de ejemplo, este grupo L que tiene una cadena ramificada alquilideno incluye -CH2C ( =CH2) CH2- . Así, en algunas modalidades, L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-s recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace alquilidenilo . Los grupos L ejemplares incluyen -NHC (O) C (=CH2) CH2- .
En ciertas modalidades, L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace y al menos una unidad metileno de L es reemplazada por -C(0)-. En ciertas modalidades, L es -C (0) CH=CH (CH3) - , -C (0) CH=CHCH2NH (CH3) - , -C(0)CH=CH(CH3) -, -C(0)CH=CH-, -CH2C (0) CH=CH- , CH2C (0) CH=CH (CH3) -, -CH2CH2C (0) CH=CH- , -CH2CH2C (0) CH=CHCH2- , -CH2CH2C(0) CH=CHCH2NH(CH3) -, o -CH2CH2C (O) CH=CH (CH3) - o CH(CH3) OC (0) CH=CH- .
En ciertas modalidades, L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace y al menos una unidad metileno de L es reemplazada por -0C(0)-.
En algunas modalidades, L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace y al menos una unidad metileno de L es reemplazada por -NRC(0)-, -C(0)NR-, N(R)S02-, -S02N(R)-, -S-, -S(0)-, -S02-, -0C(0)- o -C(0)0-, y una o dos unidades metileno adicionales de L son reemplazadas opcional e independientemente por ciclopropileno, -0-, -N(R)-, o -C(0)-. En algunas modalidades, L es -CH20C (0) CH=CHCH2- , -CH2-0C(0)CH=CH-, o -CH(CH=CH2)0C(0)CH=CH-.
En ciertas modalidades, L es -NRC (O) CH=CH- , NRC (0) CH=CHCH2N(CH3) - , -NRC (0) CH=CHCH20- , -CH2NRC (0) CH=CH- , -NRS02CH=CH-, -NRS02CH=CHCH2- , -NRC (0) (C=N2) C (0) - , NRC (0) CH=CHCH2N(CH3) - , -NRS02CH=CH- , -NRS02CH=CHCH2- , NRC (O) CH=CHCH20- , -NRC (O) C (=CH2) CH2- , -CH2NRC (O) - , CH2NRC (0) CH=CH- , -CH2CH2NRC (O) - , o -CH2NRC (0) ciclopropileno, en donde cada R es independientemente hidrógeno o alifático de Ci-s sustituido opcionalmente.
En ciertas modalidades, L es -NHC (0) CH=CH- , NHC(O) CH=CHCH2N(CH3) -, -NHC (0) CH=CHCH20- , -CH2NHC (0) CH=CH- , -NHS02CH=CH-, -NHS02CH=CHCH2-, -NHC (0) (C=N2) C (0) - , NHC (0) CH=CHCH2N (CH3) - , -NHS02CH=CH- , -NHS02CH=CHCH2- , NHC (O) CH=CHCH20- , -NHC (O) C (=CH2) CH2- , -CH2NHC (O) - , CH2NHC (0) CH=CH-, -CH2CH2NHC (0) - o -CH2NHC (0) ciclopropileno- .
En algunas modalidades, L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene al menos un triple enlace. En ciertas modalidades, L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada, en donde L tiene por lo menos un triple enlace y una o dos unidades metileno adicionales de L son reemplazadas opcional e independientemente por -NRC(0)-, -C(0)NR-, -S-, -S(0)-, -S02-, C(=S)-, -C(=NR)-, -0-, - (R) - , o -C(0)-. En algunas modalidades, L tiene por lo menos un triple enlace y al menos una unidad metileno de L es reemplazada por -N (R) - , N(R)C(0)-, -C(0)-, -C(0)0-, o -0C(0)- o -O- .
Los grupos L ejemplares incluyen -C=C-, C=CCH2n(isopropilo) -NHC (0) C=CCH2CH2- , -CH2-C=C-CCH2- , C=CCH20-, -CH2C (0) C=C- , -C(0)C=C- o -CH20C (=0) C=C .
En ciertas modalidades, L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde una unidad metileno de L es reemplazada por ciclopropileno y una o dos unidades raetileno adicionales de L son reemplazadas independientemente por -C(0)-, -NRC(O)-, -C(0)NR-, -N(R)S02-, o -S02N(R)-. Los grupos L ejemplares incluyen -NHC(O)-ciclopropileno-S02- y -NHC (0) -ciclopropileno- .
Como se definió generalmente arriba, Y es hidrógeno, alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN, o un anillo de 3-10 miembros monocíclico o bicíclico, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, y en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, cada Re es seleccionado independientemente de -Q-Z, oxo, N02, halógeno, CN, un grupo saliente adecuado o alifático de Ci-6, en donde Q es un enlace covalente o una cadena hidrocarburo bivalente de Ci-6 saturada o insaturada, recta o ramificada, en donde una o dos unidades metileno de Q son reemplazadas opcional e independientemente por -N (R) - , -S-, -O-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -SO- o -S02-, -N(R)C(0)-, -C(0)N(R)-, ^N(R)S02-, o -S02N(R)-; y Z es hidrógeno o alifático de Cx.6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN.
En ciertas modalidades, Y es hidrógeno.
En ciertas modalidades, Y es alifático de C1-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN. En algunas modalidades, Y es alquenilo de C2-6 sustituido opcionalmente con con oxo, halógeno, N02 o CN. En otras modalidades, Y es alquinilo de C2-5 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN. En algunás modalidades, Y es alquenilo de C2-s. En otras modalidades, Y es alquinilo de C2- 4 · En otras modalidades, Y es alquilo de d-6 sustituido con con oxo, halógeno, N02 o CN. Estos grupos Y incluyen -CH2F, -CH2C1, -CH2CN y -CH2N02.
En ciertas modalidades, Y es un anillo monocíclico saturado de 3-6 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde Y es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente .
En algunas modalidades, Y es un anillo heterocíclico saturado de 3-4 miembros que tiene 1 heteroátomo seleccionado de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-2 grupos Re, en donde cada Re es como se definió- arriba y se describe en la presente. Ejemplos de estos anillos son anillos epóxido y oxoetano, en donde cada anillo es sustituido con 1-2 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
En otras modalidades, Y es un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente. Estos anillos incluyen piperidina y pirrolidina, en donde cada anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En ciertas modalidades, Y es (Re)l-2 ( e)l-2 en donde cada R, Q, Z y Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
En algunas modalidades, Y es un anillo carbocíclico saturado de 3-6 miembros, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En ciertas modalidades, Y es ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, en donde cada anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En ciertas modalidades, Y es ^ ? er\ donde Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En ciertas modalidades, Y es ciclopropilo sustituido opcionalmente con halógeno, CN o N02.
En ciertas modalidades, Y es un anillo monocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
En algunas modalidades, Y es un anillo carbocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En algunas modalidades, Y es ciclopropenilo , ciclobutenilo, ciclopentenilo o ciclohexenilo, en donde cada anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En ciertas modalidades, Y es -(Re) 1-2 en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
En ciertas modalidades, Y es un anillo heterocíclico parcialmente insaturado de 4-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En ciertas modalidades, Y se selecciona de: o 0 0 Ó' (Re)l-2 ( S)l-2 en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
En ciertas modalidades, Y es un anillo aromático de 6 miembros que tiene 0-2 nitrógenos, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En ciertas modalidades, Y es fenilo, piridilo o pirimidinilo, en donde cada -anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
En algunas modalidades, Y se selecciona de: en donde-cadaoRe es c-omo se defini·ó arriba-y se describe en la presente.
En otras modalidades, Y es un anillo heteroarilo de 5 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-3 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En algunas modalidades, Y es un anillo parcialmente insaturado o arilo de 5 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente. Ejemplos de estos anillos son isoxazolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, pirrolilo, furanilo, tienilo, triazol, tiadiazol y oxadiazol, en donde cada anillo es sustituido conl-3 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente. En ciertas modalidades, Y se selecciona de: R R R en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
En ciertas modalidades, Y es un anillo de 8-10 miembros bicíclico, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente. De acuerdo con otro aspecto, Y es un anillo de 9-10 miembros bicíclico, parcialmente insaturado o arilo que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde Re es como se definió arriba y se describe en la presente. Ejemplos de estos anillos bicíclicos incluyen 2,3-dihidrobenzo [d] isotiazol , en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
Como se definió generalmente arriba, cada grupo Re se selecciona independientemente de -Q-Z, oxo, N02, halógeno, CN, un grupo saliente adecuado o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN, en donde Q es un enlace covalente o una cadena hidrocarburo bivalente de C1-6 saturada o insaturada, recta o ramificada, en donde una o dos unidades metileno de Q son reemplazadas de manera opcional e independiente por -N (R) - , -S-, -0-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -SO- o -S02-, -N(R)C(0)-, -C(0)N(R)-, -N(R)S02-, o -S02N(R)-; y Z es hidrógeno o alifático de C1-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN.
En ciertas modalidades, Re es alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN. En otras modalidades, Re es oxo, N02, halógeno o CN.
En algunas modalidades, Re es -Q-Z, en donde Q es un enlace covalente y Z es hidrógeno (es decir, Re es hidrógeno). En otras modalidades, Re es -Q-Z, en donde Q es una cadena hidrocarburo bivalente de Ci-6 saturada o insaturada, recta o ramificada, en donde una o dos unidades metileno de Q son reemplazadas opcional e independientemente por -NR-, -NRC(O)-, -C(0)NR-, -S-, -0-, -C(0)-, -SO-, o -S02-. En otras modalidades, Q es una cadena hidrocarburo de C2-6 recta o ramificada bivalente que tiene al menos un doble enlace, en donde una o dos unidades metileno de Q son reemplazadas opcional e independientemente por -NR- , -NRC(O)- -C(0)NR-, -S-, -0-, -C(0)-, -SO-, -S02-. En ciertas modalidades, la porción Z del grupo Re es hidrógeno. En algunas modalidades, -Q-Z es -NHC (0) CH=CH2 o -C(0)CH=CH2.
En ciertas modalidades, cada Re se selecciona independientemente de oxo, N02 , CN, fluoro, cloro, NHC(0)CH=CH2, -C(0)CH=CH2, -CH2CH=CH2, -C=CH, -C(0)0CH2C1, -C(0)0CH2F, -C(0)OCH2CN, -C(0)CH2C1, -C(0)CH2F, -C(0)CH2CN o -CH2C(0)CH3.
En ciertas modalidades, Re es un grupo saliente adecuado, es decir, un grupo que es sujeto a desplazamiento nucleofílico . Un "grupo saliente" es un grupo químico que es fácilmente desplazado por una porción química de entrada deseada tal como la porción tiol de una cisteína de interés. Los grupos salientes adecuados se conocen en la técnica, por ejemplo, véase "Advanced Organic Chemistry" , Jerry March, 5a edición, p g. 351-357, John Wiley and Sons, N.Y. Estos grupos salientes incluyen, pero no están limitados a, porciones halógeno, alcoxi, sulfoniloxi, alquilsulfoniloxi sustituido opcionalmente , alquenilsulfoniloxi sustituido opcionalmente , arilsulfoniloxi sustituido opcionalmente, acilo y diazonio. Ejemplos de grupos salientes adecuados incluyen cloro, yodo, bromo, fluoro, acetoxi, metansulfoniloxi (mesiloxi) , tosiloxi, trifliloxi, nitro- fenilsulfoniloxi (nosiloxi) , y bromo-fenilsulfoniloxi (brosiloxi) .
En ciertas modalidades, aplican las siguientes modalidades y combinaciones de -L-Y: (a) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace y una o dos unidades metileno de L son opcional e independientemente reemplazadas por -NRC(O)-, -C(0)NR-, N(R)S02-, -S02N(R)-, -S-, -S(O)-, -S02-, -0C(0)-, -C(0)0-, ciclopropileno, -0-, -N (R) - , o -C(0)-; y Y es hidrógeno o alifático de C1-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (b) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace y al menos una unidad metileno de L es reemplazada por -C(O)-, -NRC(O)-, -C(0)NR-, -N(R)S02-, -S02N(R)-, -S-, -S(O)-, -S02-, -0C(0)-, o -C(0)0-, y una o dos unidades metileno adicionales de L son reemplazadas opcional e independientemente por ciclopropileno, -O-, -N(R)-, o -C(0)-; y Y es hidrógeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (c) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene al menos un doble enlace y al menos una unidad metileno de L es reemplazada por -C(0)-, y una o más unidades metileno adicionales de L son reemplazadas en forma opcional e independiente por ciclopropileno, -0-, -N(R)-, o -C(0)-; y Y es hidrógeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (d) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace y al menos una unidad metileno de L es reemplazada por -C(0)-; y Y es hidrógeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (e) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene al menos un doble enlace y por lo menos una unidad metileno de L es reemplazada por -0C(0)-; y Y es hidrógeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (f) L es -NRC (0) CH=CH- , -NRC (0) CH=CHCH2N (CH3) - , -NRC (0) CH=CHCH20- , -CH2NRC (0) CH=CH- , -NRS02CH=CH- , NRS02CH=CHCH2- , -NRC (O) (C=N2) - , -NRC (O) (C=N2) C (O) - , NRC (0) CH=CHCH2N (CH3) - , -NRS02CH=CH- , -NRS02CH=CHCH2- , NRC(0)CH=CHCH20-, -NRC (0) C (=CH2) CH2- , -CH2NRC(0)-, CH2NRC (0) CH=CH- , -CH2CH2NRC (0) - , o -CH2NRC (O) ciclopropileno- ; en donde R es H o alifático de Ci_6 sustituido opcionalmente y Y es hidrógeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (g) L es -NHC(O) CH=CH- , -NHC (O) CH=CHCH2N (CH3) - , -NHC(0)CH=CHCH20-, -CH2NHC (0) CH=CH- , -NHS02CH=CH- , NHS02CH=CHCH2- , ¦ -NHC (0) (C=N2) - , -NHC (0) (C=N2 ) C (0) - , NHC(O) CH=CHCH2N(CH3) -, -NHS02CH=CH- , -NHS02CH=CHCH2 - , NHC(0)CH=CHCH20-, -NHC (0) C (=CH2) CH2- , -CH2NHC(0)-; CH2NHC(0) CH=CH-, -CH2CH2NHC (0) - , o -CH2NHC (0) ciclopropileno- ; y Y es hidrógeno o alifático de Ci_6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (h) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un doble enlace alquilidenilo y por lo menos una unidad metileno de L es reemplazada por -C(0)-, -NRC(O) -, -C(0)NR-, -N(R)S02-, -S02N(R) -, -S-, -S(0)-, -S02-, -0C(0)- o -C(0)0-, y una o dos unidades metileno adicionales de L son reemplazadas en forma opcional e independiente por ciclopropileno, -O-, -N (R) - , o -C(0)-; y Y es hidrógeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente . con oxo, halógeno, N02 o CN; o (i) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-8 recta o ramificada en donde L tiene por lo menos un triple enla&e. y una o dos unidades metileno adicionales de L son opcional e independientemente reemplazadas por -NRC(0)-, C(0)NR-, -N(R)S02-, -S02N(R) -, -S-, -S(0)-, -S02-, -0C(0)-, o -C(0)0-, y Y es hidrógeno o alifático de C1-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (j) L es -C=C-, -C=CCH2N (isopropilo) - , NHC(O) C=CCH2CH2-, -CH2-C=C-CH2- , -C=CCH20-, -CH2C (0) C=C- , C(0)C=C-, o -CH20C (=0) C=C- ; y Y es hidrógeno o alifático de Ci-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (k) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C2-a, recta o ramificada en donde una unidad metileno de L es reemplazada por ciclopropileno y una o dos unidades metileno adicionales de L son reemplazadas independientemente por -NRC(O) -, -C(0)NR-f -N(R)S02-, -S02N(R) -, -S-, -S(0)-, -S02-, -0C(0)-, o -C(0)0-; y Y es hidrógeno o alifático de Ci-S sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (1) L es un enlace covalente y Y se selecciona de: (i) alquilo de Ci_6 sustituido con oxo, halógeno, N02 o CN; (ii) alquenilo de C2-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iii) alquinilo de C2-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iv) un anillo heterocíclico saturado de 3-4 miembros que tiene 1 heteroátomo seleccionado de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-2 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (v) un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o ( i) en donde cada R, Q, Z y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o {vii) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros saturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (viii) un anillo monocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (ix) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (?) ) 7 en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xi) un anillo heterocíclico de 4-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xii) O Q o O (Re)!-2 (R )l-2 en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xiii) un anillo aromático de 6 miembros que tiene 0-2 nitrógenos en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xi ) en donde c-ada ROe es c- - omo se definió arriba-y se descr"ibe en la presente; o (xv) un anillo heteroarilo de 5 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-3 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xvi) R R R R N N .N < ?><^_!1 (aR» )i- <>-<\L_X7f (Re)i-2 ^_j"TN( e)i-2 < ?>~N-X^Re J-¿- T vV\ ^ -(Re)i-3 i-"r(Re)1-2 Q^),, ^rRe ,< > ? ? ?O"(Re)l.3 ?"£_ r<Re)l ?~V_jT(Re)l-2 I R en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xvii) un anillo de 8-10 miembros bicíclico, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1 - 4 grupos Re , en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; (m) L es -C (O) - y Y se selecciona de: (i) alquilo de Ci-6 sustituido con oxo, halógeno, N02 o ; o (ii) alquenilo de C2-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iii) alquinilo de C2-e sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iv) un anillo heterocíclico saturado de 3-4 miembros que tiene 1 heteroátomo seleccionado de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-2 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (v) un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (Re)i-2 (Re)i-2 en donde cada R, Q, Z y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (vii) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros saturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (viii) un anillo monocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (ix) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (x) —y ¿n ^donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xi) un anillo heterocíclico de 4-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xii) O (Re)l (R8)l o (?ß)? en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xiií) un anillo aromático de 6 miembros que tiene 0-2 nitrógenos en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xiv) 0m. -o = R=, " en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xv) un anillo heteroarilo de 5 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-3 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xvi) en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xvii) un anillo de 8-10 miembros bicíclico, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; (n) L es -N(R)C(0)- y Y se selecciona de: (i) alquilo de Ci-6 sustituido con oxo, halógeno, N02 o CN; (ii) alquenilo de C2-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iii) alquinilo de C2-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iv) un anillo heterocíclico saturado de 3-4 miembros que tiene 1 heteroátomo seleccionado de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-2 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (v) un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (Re)^ (RB)^ (V ) ^>1-2 G'?-2 n ~'l-2 en donde cada R, Q, Z y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (vii) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros saturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re , en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (viii) un anillo monocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re , en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (ix) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re , en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; (x) cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xi) un anillo het eroc íc 1 i co de 4-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 1-2 he ero omos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re , en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o o o o O (Re)i-2 (Re)i-2 o (R8)i-2 en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xiíi) un anillo aromático de 6 miembros que tiene 0-2 nitrógenos en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xiv) ,^ (R,„ Ur ™ i£ n*,. S 3 ^í^,,-.í^/N' en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xv) un anillo heteroarilo de 5 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-3 grupos Re , en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o ( v ) v Wi JV\, i M .N. ÍÍ K2 ¾(R,,, (^ ?"¾_J (Re)i-3 s?^^_iT(Re)l-2 ¾?^?-JT(Re)i-2 >I?,-Jr Re en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xvii) un anillo de 8-10 miembros bicíclico, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; (o) L es una cadena hidrocarburo bivalente de C1-8 saturada o insaturada, recta o ramificada; y Y se selecciona de: (i) alquilo de Ci-6 sustituido con oxo, halógeno, N02 o CN; (ii) alquenilo de C2-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iii) alquinilo de C2-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iv) un anillo heterocíclico saturado de 3-4 miembros que tiene 1 heteroátomo seleccionado de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-2 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (v) un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (Re)^ ^ \v h \XJ) (Vi) ~'l-2 ~'l-2 n Vl ~Á'l-2 en donde cada R, Q, Z y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (vii) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros saturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (viii) un anillo monocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (ix) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en. donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (x) en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xi) un anillo heterocíclico de 4-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o ( ii O 0 O )- Ó 2 *(Rye)l-2,M ¾(R6)l-2>,2 o (RV6)l-2)1-2 en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xiii) un anillo aromático de 6 miembros que tiene 0-2 nitrógenos en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xiv) R,)- -,r'"-< ?&^ " en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xv) un anillo heteroarilo de 5 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-3 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o {xvi) R R -(Re)i- ^??. i\fj » \ ~(Re)l-3 - T(Re)1-2 )l-2 N ^R6 ? JT(Re)i-3 ? \^-p(Re)i-2 ?"¾_T(Re)i-2 R $~¾_j ( e)i.3 r£_r(R )-2 ?" T( e)i-2 ? N-Í' R en donde cada y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xvii) un anillo de 8-10 miembros bicíclico, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; (p) L es un enlace covalente, -CH2-, -NH- , -C(0)-, -CH2NH- , -NHCH2-, -NHC(O)-, -NHC (O) CH20C (0) - , -CH2NHC(0)-, - NHS02-, -NHS02CH2-, -NHC (O) CH2OC (O) - , o -S02NH-; y Y se selecciona de: (i) alquilo de C1-6 sustituido con oxo, halógeno, N02 o CN; o (ü) alquenilo de C2-6 sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, O2 o CN; o (iii) alquinilo de C2-s sustituido opcionalmente con oxo, halógeno, N02 o CN; o (iv) un anillo heterocíclico saturado de 3-4 miembros que tiene 1 heteroátomo seleccionado de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-2 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (v) un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados de oxígeno o nitrógeno, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (Re)i-2 (Re)i-: 2 (vi) Y-pj,, en donde cada R, Q, Z y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (vii) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros saturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (viii) un anillo monocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (ix) un anillo carbocíclico de 3-6 miembros parcialmente insaturado, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o Jq-3 (x) 7 e (Rne)id-j ;n deonde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xí) un anillo heterocíclico de 4-6 miembros parcialmente insaturado que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o 0 (xii) 0 0 O O (R6)l-2 (Re)l-2 o (R8)l-2 en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente,- o (xiii) un anillo aromático de 6 miembros que tiene 0-2 nitrógenos en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o xiv) II i \K h-4 -3 en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xv) un anillo heteroarilo de 5 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-3 grupos Re, en donde cada grupo Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o (xvi ) R R R R / N N N v (Re)i-3 ^"«_p(Re)i-2 ? j^(Re) -2 ¾_jTR \J\fi ??? ^??, G N Re -(Re)l-3 Í-^(R6)l-2 (R8)l-2 \-3 .O. .O 0 > ^(Re)i-3 \l_"^(Re)i-2 ^-¾_^( e)i-2 £ ^"^_ZT( e)i-3 *_? (R8)"2 ?"^r(R9)i-2 ? N-» RE en donde cada R y Re es como se definió arriba y se describe en la presente; o {xvii) un anillo de 8-10 miembros bicíclico, saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con 1-4 grupos Re, en donde cada Re es como se definió arriba y se describe en la presente.
En ciertas modalidades, el grupo Y de la fórmula I se selecciona de aquellos mostrados en la siguiente tabla 3, en donde cada línea ondulada indica el punto de fijación al resto de la molécula.
Tabla 3 Grupos Y ejemplares: a b c d e f m ii o p q r 83 84 jjjj kkkk llll mmmm nnnn oooo PPPP IWI rrrr ssss tttt uuuu vwv wwww xxxx 0 0 0 Me y y zzzz aaaaa bbbbb ccccc en donde cada Re se selecciona independientemente de un grupo saliente adecuado, N02 o CN u oxo.
En ciertas modalidades, R1 es -C=C-, C=CCH2N (isopropilo) -, -NHC (0) C=CCH2CH3 , -CH2-C=C-CH3 , C=CCH20H, -CH2C (O) C=CH, -C(0)C=CH, o -CH20C ( =0) C=CH . En alguna modalidades, R1 se selecciona de -NHC (0) CH=CH2 , NHC(0)CH=CHCH2N(CH3)2 O -CH2NHC (O) CH=CH2.
En ciertas modalidades, R1 se selecciona de aquellos mostrados en la siguiente tabla 4, en donde cada línea ondulada indica el punto de fijación al resto de la molécula. 86 87 88 lll N cecee ddddd eeeee fffff ggggg hhhh mu O CH3 O CH3 O CH3 X N N CH, X i CH3 A^N' ¿H3 CH2CH3 CH2CH— CH2 JJJJJ kkkkk mu o PPPPP MWi rrrrr sssss ttttt uuuuu X o o I vwvv wwwww xxxxx yyyyy zzzzz aaaaaa bbbbbb cccccc eeeeee ffffff gggggg hhhhhh e OH iiüü jjjjjj kkkkkk ////// mmmmmm nnnnnn O F 000000 PPPPPP qqqqqq rrrrrr ssssss O O F O O O i s UUUUUU WWW WWWWWW o xxco en donde cada Re es independientemente un grupo saliente adecuado, N02, CN u oxo .
Como se definió generalmente arriba, R1 es un grupo de cabeza, o, cuando R1 y Rx forman un anillo, entonces -Q-Z es un grupo de cabeza. Sin desear ser limitados por ninguna teoría particular, se cree que estos grupos R1, es decir, grupos de cabeza, son particularmente adecuados para unirse covalentemente a un residuo de cisteína clave en el dominio de unión de ciertas proteína cinasas. Las proteínas cinasas que tienen un residuo de cisteína en el dominio de unión se conocen por alguien de capacidad ordinaria en la técnica e incluyen ErbBl, ErbB2 y ErbB4 , o un mutante de las mismas. En ciertas modalidades, los compuestos de la presente invención tienen un grupo de cabeza caracterizado además porque los compuestos de la invención se dirigen a uno o más de los siguientes residuos de cisteína: ERBB1 ITQLMPFGCLLDYVREH ERBB2 VTQLMPYGCLLDHVREN ERBB4 VTQLMPHGCLLEYVHEH Así, en algunas modalidades, R1 se caracteriza además porque la porción -L-Y es capaz de unirse covalentemente a un residuo de cisteína de esta manera inhibiendo irreversiblemente la enzima. En ciertas modalidades, el residuo de cisteína es Cys797 de ErbBl, Cys805 de ErbB2 y Cys803 de ErbB4 , o un mutante de las mismas, en donde la numeración de residuo proporcionada está de acuerdo con Uniprot (código P00533 para ErbBl; código P04626 para ErbB2 y código Q15303 para ErbB4) . Se entenderá que el Cys de ErbBl (EGFR) es llamado variablemente 773 ó 797 dependiendo de si la secuencia de origen contiene el péptido de señal o no. así, de acuerdo con la presente invención, el residuo de cisteína relevante de ErbBl puede ser descrito como Cys 773 o Cys 797 y estos términos se usan indistintamente .
Alguien de capacidad ordinaria en la técnica reconocerá que una variedad de grupos de cabeza, como los definidos en la presente, son adecuados para está unión covalente . Estos grupos R1 incluyen, pero no están limitados a, aquellos descritos en la presente e ilustrados en la tabla 4 abajo. Alguien de capacidad ordinaria en la técnica reconocerá que ErbB3 no tiene residuo correspondiente y, como se reconoce en la técnica relevante, no es catalíticamente activo .
Como se ilustra en la fórmula I arriba, el grupo de cabeza R1 puede estar en una posición orto, meta o para. En ciertas modalidades el grupo - de cabeza R1 está en una posición meta del anillo de fenilo con relación al resto de la molécula. Sin desear ser limitados por ninguna teoría particular, se cree que cuando R1 está en tal posición meta, el grupo de cabeza está mejor colocado para la modificación covalente del residuo de cisteína efectuando así inhibición irreversible de la enzima. De hecho, se ha encontrado sorprendentemente que un compuesto que tiene un grupo de cabeza en una posición meta (compuesto 1-1) se une irreversiblemente a ErbBl, mientras que un compuesto que tiene un grupo de cabeza en una posición para (compuesto I-93) se une reversiblemente a ErbBl. Estos compuestos tienen las siguientes estructuras: 1-1 1-93 Este fenómeno se determinó al llevar a cabo un experimento de lavado usando el protocolo descrito en detalle en el ejemplo 42, abajo. Los resultados de este experimento se ilustran en la Figura 2, en donde se muestra que el compuesto 1-1 mantiene inhibición enzimática después del "lavado" mientras que el compuesto 1-93 fue enjuagado en el experimento dando entonces como resultado actividad enzimática reactivada.
. En ciertas modalidades, R1 se caracteriza además porque la porción -L-Y es capaz de unirse covalentemente a un residuo de cisteína de TEC, de esta manera inhibiendo irreversiblemente la enzima. En algunas modalidades, el residuo de cisteína -es Cys 449.
En ciertas modalidades, R1 se caracteriza además porque la porción -L-Y es capaz de unirse covalentemente a un residuo de cisteína de BTK, de esta manera inhibiendo irreversiblemente la enzima. En algunas modalidades, el residuo de cisteína es Cys 481.
En ciertas modalidades, R1 se caracteriza además porque la porción -L-Y es capaz de unirse covalentemente a un residuo de cisteína de ITK, de esta manera inhibiendo irreversiblemente la enzima. En algunas modalidades, el residuo de cisteína es Cys 442.
En ciertas modalidades, R1 se caracteriza además porque la porción -L-Y es capaz de unirse covalentemente a un residuo de cisteína de BMX, de esta manera inhibiendo irreversiblemente la enzima. En algunas modalidades, el residuo de cisteína es Cys 496.
En ciertas modalidades, R1 se caracteriza además porque la porción -L-Y es capaz de unirse covalentemente a un residuo de cisteína de JAK3, de esta manera inhibiendo irreversiblemente la enzima. En algunas modalidades, el residuo de cisteína es Cys 909.
En ciertas modalidades, R1 se caracteriza además porque la porción -L-Y es capaz de unirse covalentemente a un residuo de cisteína de TXK, de ' esta manera inhibiendo irreversiblemente la enzima. En algunas modalidades, el residuo de cisteína es Cys 350.
Alguien de capacidad ordinaria en la técnica reconocerá que una variedad de grupos de cabeza, como los definidos en la presente, son adecuados para está unión covalente. Estos grupos R1 incluyen, pero no están limitados a, aquellos descritos en la presente e ilustrados en la tabla 3 abajo.
Compuestos ejemplares de la presente invención se muestran en la siguiente tabla 5. »· Tabla 5 Compuestos de la fórmula I ejemplares 1-7 1-8 1-9 95 96 ?? 98 ?? 100 101 ?? 103 ?? 105 1-120 1-121 En ciertas modalidades, la presente invención proporciona cualquier compuesto ilustrado en la tabla 5, arriba, o una sal farmacéuticamente aceptable del mi smo .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un compuesto seleccionado de: 107 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Como se describe en la presente, los compuestos de la presente invención son inhibidores irreversibles de por lo menos uno de ErbBl , ErbB2 , ErbB3 y ErbB4 , o un mutante de los mismos. En algunas modalidades, los compuestos proporcionados son inhibidores irreversibles de una TEC-cinasa (por ejemplo, BTK) y JAK3. Alguien de capacidad ordinaria en la técnica reconocerá que ciertos compuestos de la presente invención son inhibidores reversibles. En ciertas modalidades, estos compuestos son útiles como compuestos comparadores de ensayo. En otras modalidades, estos compuestos reversibles son útiles como inhibidores de ErbBl, ErbB2, ErbB3 y ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 , o un mutante de las mismas, y por lo tanto útiles para tratar uno o más trastornos como los descritos en la presente. Compuestos reversibles ejemplares de la presente ?? H H IR-16 IR-17 IR-18 una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos 4. Usos, formulación y administración Composiciones farmacéuticamente aceptables De acuerdo con otra modalidad, la invención proporciona una composición que comprenda un compuesto de esta invención o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. La cantidad de compuesto en las composiciones de esta invención es tal que es efectiva para inhibir mesurablemente una proteína cinasa, particularmente al menos una de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 y ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 , o un mutante de las mismas, en una muestra biológica o en un paciente. En ciertas modalidades, la cantidad 'de compuesto en las composiciones de esta invención es tal que es efectiva para inhibir mesurablemente al menos una de ErbBl, ErbB2, ErbB3 y ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 o un mutante de las mismas, en una muestra biológica o en un paciente. En ciertas modalidades, una composición de esta invención se formula para su administración a un paciente que requiera de esta composición. En algunas modalidades, una composición de esta invención se formula para administración oral a un paciente.
El término "paciente", según se usa en la presente, significa un animal, de preferencia un mamífero, y muy preferiblemente un humano.
El término "portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un portador, adyuvante o vehículo no tóxico que no destruye la actividad farmacológica del compuesto con el cual se formula. Los portadores, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones de esta invención incluyen, pero no están limitados a, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas de suero, tales como albúmina sérica humana, sustancias reguladoras de pH tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato ácido disódico, fosfato ácido de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol , carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos , ceras, polímeros de bloques de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y grasa de lana.
Un "derivado farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sal, éster, sal de un éster no tóxico u otro derivado de un compuesto de esta invención que, después de su administración a un receptor, sea capaz de proporcionar, ya sea directa o indirectamente, un compuesto de esta invención o un metabolito o residuo inhibitoriamente activo del mismo.
Según se usa en la presente, el término "metabolito o residuo inhibitoriamente activo del mismo" significa que un metabolito o residuo del mismo también es un inhibidor de por lo menos una de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 y ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 o un mutante de la misma.
Las composiciones de la presente invención pueden administrarse oralmente, parenteralmente , mediante spray de inhalación, tópicamente, rectalmente, nasalmente, bucalmente, vaginalmente o mediante un depósito implantado. El término "parenteral" según se usa en la presente incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial , intraesternal , intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal. De preferencia, las composiciones se administran oralmente, intraperitonealmente o intravenosamente. Las formas inyectables estériles de las composiciones de esta invención pueden ser una suspensión acuosa u oleaginosa. Estas suspensiones pueden formularse de acuerdo con técnicas conocidas en la técnica usando agentes de dispersión o humectación adecuados y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1 , 3 -butanodiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse están agua, solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónica. Además, aceites estériles y fijos se emplea convencionalmente como un solvente o medio de suspensión.
Para este propósito, cualquier aceite fijo blando puede emplearse incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados de glicéridos son útiles en la preparación de inyectables, toda vez que son aceites naturales farmacéuticamente aceptables, tales como aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente suspensiones polioxietiladas . Estas soluciones o suspensiones de aceite también pueden contener un diluyente o dispersante de alcohol de cadena larga, tal como carboximetilcelulosa o agentes de dispersión similares que se usan comúnmente en la formulación de formas de dosificación farmacéuticamente aceptables incluyendo emulsiones y suspensiones. Otros agentes tensioactivos comúnmente usados, tales como Tweens, Spans y otros agentes emulsionantes o potenciadores de biodisponibilidad que se usen comúnmente en la elaboración de formas de dosificación sólidas líquidas u otras farmacéuticamente aceptables también se pueden usar para los propósitos de formulación.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención pueden administrarse oralmente en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable incluyendo, pero no limitada a, cápsulas, tabletas, suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de tabletas para uso oral, los portadores usados comúnmente incluyen lactosa y almidón de maíz . Agentes lubricantes , ¾ tales como estearato de magnesio, también se añaden- típicamente. Para administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se requieren suspensiones acuosas para uso oral, el ingrediente activo es combinado con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, ciertos agentes edulcorantes, saborizantes o colorantes también pueden ser añadidos .
Como alternativa, las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención pueden administrarse en forma de supositorios para administración rectal . Estos se pueden preparar al mezclar el agente con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperatura ambiente pero líquido a la temperatura rectal y por lo tanto se derretirá en el recto para liberar el fármaco. Estos materiales incluyen manteca de cacao, cera de abeja y polietilenglicoles .
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención también se pueden administrar tópicamente, especialmente cuando el objetivo de tratamiento incluye áreas u órganos fácilmente accesibles para aplicación tópica, incluyendo enfermedades del ojo, la piel o el tracto intestinal inferior. Las formulaciones tópicas adecuadas se preparan fácilmente para cada una de estas áreas u órganos.
La aplicación tópica para el tracto gastrointestinal inferior puede llevarse a cabo en una formulación de supositorio rectal (véase arriba) o en una formulación de enema adecuada. Parches transdérmicos tópicamente también pueden usarse.
Para aplicaciones tópicas, las composiciones farmacéuticamente aceptables proporcionadas pueden formularse en una pomada adecuada que contenga el componente activo suspendido o disuelto en uno o más portadores. Los portadores para administración tópica de los compuestos de esta invención incluyen, pero no están limitados a, aceite mineral, petrolato líquido, petrolato blanco, propilenglicol , polietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Como alternativa, las composiciones farmacéuticamente aceptables proporcionadas pueden formularse en una loción o crema adecuada que contenga los componentes activos suspendidos o disueltos en uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Los portadores adecuados incluyen, pero no están limitados a, aceite mineral, monoestearato de sorbitan, polisorbato 60, cera de ésteres etílicos, alcohol cetearílico, 2 -octildodecanol , alcohol bencílico y agua.
Para uso oftálmico, las composiciones farmacéuticamente aceptables proporcionadas pueden formularse como suspensiones micronizadas en solución salina estéril isotónica de pH ajustado, o, de preferencia, como soluciones en solución salina estéril de pH ajustado isotónica, ya sea con o sin un conservador tal como cloruro de bencilalconio . Como alternativa, para usos oftálmicos, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden formularse en una pomada tal como petrolato.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención también se pueden administrar mediante aerosol nasal o inhalación. Estas composiciones se preparan de acuerdo con técnicas bien conocidas en la técnica de formulación farmacéutica y pueden prepararse como soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservadores adecuados, promotores de absorción para incrementar la biodisponibilidad, fluorocarburos y/u otros agentes de solubilización o dispersión convencionales.
Muy preferiblemente, las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención se formulan para administración oral.
La cantidad de compuestos de la presente invención que se puede combinar con los materiales portadores para producir una composición en una forma de dosis única variará ,dependiendo del anfitrión tratado, el modo de administración particular. De preferencia, las composiciones proporcionadas deben formularse de tal manera que una dosis de entre 0.01- 100 mg/kg de peso corporal/día del inhibidor pueda ser administrada a un paciente que reciba estas composiciones.
También se debe entender que un régimen de dosificación y tratamiento específico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, momento de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos y el juicio del médico tratante y la severidad de la enfermedad particular que esté siendo tratada. La cantidad de un compuesto de la presente invención y la composición también dependerá de un compuesto particular en la composición .
Usos- de compuestos y composiciones farmacéuticamente aceptables Los compuestos y composiciones descritos en la presente son generalmente útiles para la inhibición de la actividad proteína cinasa de una o más enzimas.
La resistencia a fármacos está emergiendo como un reto significativo para las terapias dirigidas. Por ejemplo, la resistencia a fármacos ha sido reportada para Gleevece e ® Iressa , asi como varios otros inhibidores de cmasas en desarrollo. Además, la resistencia a fármacos ha sido reportada para los receptores cKit y PDGFR. Se ha reportado que inhibidores irreversibles pueden ser efectivos contra formas resistentes a fármacos de proteína cinasas (Kwak, E. L., R. Sordella, et al. (2005). "Irreversible inhibitors of the EGF receptor may circumvent acquired resistance to gefitinib" . PNAS 102(21): 7665-7670). Sin desear ser limitados por ninguna teoría particular, se cree que los compuestos de la presente invención pueden ser inhibidores efectivos de formas resistentes a fármaco de proteína cinasas .
Según se usa en la presente, el término "resistencia a fármacos clínicos" se refiere a la pérdida de susceptibilidad de un fármaco objetivo al tratamiento con fármacos como una consecuencia de mutaciones en el fármaco objetivo .
Según se usa en la presente, el término "resistencia" se refiere a cambios en la secuencia de ácido nucleico tipo silvestre que codifica para una proteína objetivo, y/o la secuencia de proteínas del objetivo, cambios que reducen o detienen el efecto inhibidor del inhibidor de la proteína objetivo.
Ejemplos de cinasas que son inhibidas por los compuestos y composiciones descritos en la presente y contra los cuales los métodos descritos en la presente son útiles incluyen ErbBl, ErbB2 , ErbB3 , ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 , o un mutante de las mismas.
La actividad de un compuesto utilizado en esta invención como un inhibidor de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 y ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 , o un mutante de la misma, se puede ensayar in vifcro, in vivo o en una línea de células. Los ensayos in vi ro incluyen ensayos que determinan la inhibición ya sea de la actividad de fosforilación y/o las consecuencias funcionales subsecuentes, o actividad ATPasa de ErbBl, ErbB2, ErbB3 , ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 activadas o un mutante de las mismas. Como alternativa los ensayos in vitro cuantifican la capacidad del inhibidor para unirse a ErbBl, ErbB2, ErbB3 , ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3. La unión del inhibidor puede medirse mediante marcación radioactiva del inhibidor antes de la unión, aislando el complejo inhibidor/ErbBl, inhibidor/ErbB2 , inhibidor/ErbB3 , inhibidor/ErbB4 , inhibidor/TEC-cinasa, o inhibidor/JAK3 y determinando la cantidad de radiomarcador unido. Como alternativa, la unión del inhibidor puede terminarse al ejecutar un experimento de competencia en donde se incuben nuevos inhibidores con ErbBl, ErbB2 , ErbB3 , ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 unidas a radioligandos conocidos. Las condiciones detalladas para ensayar un compuesto utilizado en esta invención como un inhibidor de ErbBl, ErbB2, ErbB3, ErbB4, una TEC-cinasa y/o JAK3 , o un mutante de las mismas, se muestran en los siguientes ejemplos.
Las proteína tirosina cinasas son una clase de enzimas que catalizan la transferencia de un grupo fosfato de ATP o GTP a un residuo de tirosina ubicado en un substrato de proteína. Las tirosina cinasas receptoras actúan para transmitir señales desde el exterior de una célula hasta el interior al activar efectores de mensajería secundarios por medio de un evento de fosforilación. Una variedad de procesos celulares son promovidos por estas señales, incluyendo proliferación, utilización de carbohidratos, síntesis de proteínas, angiogénesis , crecimiento celular y supervivencia celular .
Los receptores de ErbB, una familia principal de tirosina cinasas receptoras, están compuestos de un dominio de unión a ligando extracelular , un solo dominio de transmembrana y un dominio intracelular con actividad tirosina cinasa. La familia ErbB comprende ErbBl (conocido comúnmente como EGF ) , ErbB2 (conocido comúnmente como HER2 o neu) , ErbB3 (conocido comúnmente como HER3) , y ErbB4 (conocido comúnmente como HER4) . Más de 10 ligandos (incluyendo EGF, TGFOC, AR, BTC, EPR, HB-EGF , NRG- 1 , NRG- 2, NRG-3, NRG-4) han sido identificados para los diferentes miembros de las familias de receptores. Después de la unión a ligando el dominio extracelular sufre un cambio en conformación, permitiendo la formación de homodímeros o heterodímeros con otros miembros de la familia ErbB. La dimerización induce la fosforilación de tirosina de residuos específicos en el dominio intracelular que sirven como sitios de acoplamiento para proteínas adaptadoras y efectores corriente abajo. En algunos contextos, ocurre la activación de las vías de fosfatidil - inositol 3-cinasa (PI3K) y proteína cinasa activada por mitógeno, llevando a la proliferación y supervivencia de células (Lin, N. U. ; Winer, E. P., Breast Cáncer Res 6: 204-210,2004).
La interacción entre miembros de la familia se requiere por deficiencias en ErbB2 , la cual no tiene ligando conocido, y ErbB3, la cual es cinasa muerta. EGFR, ErbB3 y ErbB4 se unen al ligando para inducir la homodimerización o heterodimerización del receptor ErbB, mientras que ErbB2 funciona como el socio de dimerización preferido. La composición de las combinaciones por pares es importante para la diversificación de señales, toda vez que la identidad del dímero determina qué días corriente abajo son activadas. Los productos génicos corriente abajo representativos en la vía de transducción de señales ErbB incluyen She,, Grb2 , S0S1, Ras, Rafl, Mek, ERK1, ERK2 , EROC, Akt , mTOR, FKHR, p27, Cyclin DI, FasL, GSK-3, Bad y STAT3.
Existe un fuerte precedente para la implicación del EGFR y otros miembros de la familia de ErbB en cáncer humano debido a que más del 60% de todos los tumores sólidos sobre-expresan por lo menos una de estas proteínas o sus ligandos. EGFR vIII tumorigénico constitutivamente activo, un mutante que posee un dominio extracelular truncado, se ha reportado que está presente en hasta 78% de carcinomas de seno y también se ha encontrado en glioblastomas. La sobre-expresión de EGFR se encuentra comúnmente en tumores de seno, pulmón, cabeza y cuello, vejiga, mientras que la expresión de ErbB2 se eleva frecuentemente en tumores humanos de origen epitelial. Las mutaciones de activación en el' dominio de tirosina cinasa han sido identificadas en pacientes con cáncer pulmonar no microcítico (Lin, N. U. ; iner, E. P., Breast Cáncer Res 6: 204-210, 2004) . La amplificación de ErbBl y/o ErbB2 también ha estado implicada en carcinomas de células escamosas, carcinomas de glándulas salivales, carcinomas ováricos y cánceres pancreáticos (Cooper, G.C. Oncogenes. 2a edición, Sudbury: Jones and Barlett, 1995; Zhang, Y., et al., Cáncer Res 6_6: 1025-32, 2006). La sobre-expresión de ErbB2 tiene una potente actividad de transformación, tal vez debido a su capacidad para cooperar con otros receptores de ErbB (Sherman, L., et al., Oncogene 18 : 6692-99, 1999). De hecho, algunos cánceres humanos que sobre-expresan tanto EGFR como ErbB2 tienen un pronóstico más deficiente que los cánceres que sobre-expresan cualquier receptor solo.
La red de señalización de ErbB es comúnmente un componente clave en la patogénesis de cáncer de seno. La amplificación de ErbB2 está asociada con un fenotipo de tumor agresivo que se caracteriza por crecimiento de tumor relativamente rápido, dispersión metastásica a sitios viscerales y resistencia a fármaco. ErbB2 ha mostrado ser amplificado en 20% de los casos de cáncer de mama negativos a nodos axilares ( "ANN" , por sus siglas en Ingles), y esta amplificación ha sido identificada como un factor de pronóstico independiente para el riesgo de recurrencia en cáncer de mama ANN. (Andrulis, I.L., et al . , J Clin Oncol 16 : 1340-9, 1998) .
El bloqueo dirigido de la señalización de ErbB con trastuzumab (Herceptin) , un anticuerpo monoclonal dirigido a ErbB2 , ha mostrado mejorar la supervivencia en mujeres con cáncer de mama avanzado positivo a ErbB2. Otros anticuerpos monoclonales dirigidos contra receptores de ErbB incluyen cetuximab (Erbitux) y panitumumab (Vectibix) .
Varios inhibidores de tirosina cinasa de molécula pequeña (TKIs) se ha encontrado que actúan selectivamente en los miembros de la familia de ErbB. Ejemplos notables incluyen gefitinib (Iressa) y erlotinib (Tarceva) , ambos de los cuales se dirigen al EGFR. Estas moléculas pequeñas compiten con ATP para la unión al dominio de cinasa del receptor. En comparación con anticuerpos monoclonales, las TKIs tienen varias ventajas toda vez que son oralmente biodisponibles , bien toleradas y parecen ser activas contra formas truncadas de receptores de ErbB2 y EGFR (por ejemplo, EGFR vIII) in vitro. Además, el tamaño pequeño de TKIs de molécula pequeña les podría permitir penetrar sitios santuarios tales como el sistema nervioso central. Finalmente, la homología entre los dominios de cinasa de los receptores de ErbB permite el desarrollo de TKIs que se dirigen a más de un miembro de la familia de ErbB simultáneamente, las ventajas de las cuales se describen¦ en la presente .
Aunque ciertas malignidades han estado ligadas a la sobre-expresión de receptores individuales, una transducción de señales eficiente se basa en la co-expresión de los miembros de la familia del receptor de ErbB. Esta cooperación de los miembros de la familia del receptor de ErbB en transducción de señales y transformación maligna puede limitar el éxito de agentes que se dirijan a receptores individuales en el tratamiento de cáncer; un mecanismo potencial de resistencia a agentes que se dirijan a un solo receptor de ErbB en la sobrerregulacion de otros miembros de la familia del receptor (Britten, C. D., Mol Cáncer Ther 3_: 1335-42, 2004) .
Agentes que se dirigen a dos o más receptores de ErbB son llamados reguladores pan-ErbB. ERRP es un regulador negativo a pan-ErbB que es expresado en la mayoría de las células de epitelio ductal pancreático y de las isletas benignas. Los tumores han sido encontrados que experimentan una pérdida progresiva en la expresión de ERRP. Que Erbitux y Herceptin muestren éxito en una base de pacientes limitada (tumores que tengan la expresión incrementada de EGFR o ErbB2) podría deberse parcialmente a la co-expresión de varios miembros de la familia de ErbB.
En modelos tanto in vitro como in vivo, las estrategias que emplean un enfoque de ErbB doble parecen tener mayor actividad antitumor que los agentes que se dirigen a un solo receptor de ErbB. Así, los agentes que se dirigen a varios miembros de la familia de ErbB es probable que proporcionen beneficio terapéutico a una población de pacientes más amplia (Zhang, Y., et al., Cáncer Res 6_6: 1025-32, 2006) . En ciertas modalidades, los compuestos proporcionados inhiben uno o más de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 y ErbB4. En algunas modalidades, los compuestos proporcionados inhiben dos o más de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 y ErbB4 o un mutante de las mismas, y son por lo tanto inhibidores de pan-ErbB.
Claramente, existe una evidencia creciente para apoyar la inhibición concurrente de dos o más receptores de ErbB (es decir, pan-ErbB) en terapia contra el cáncer. Los posibles enfoques de pan-ErbB con pequeñas moléculas incluyen el uso de combinaciones de agentes que se dirigen a receptores de ErbB individuales, el uso de agentes individuales que se dirigen a varios receptores de ErbB, o el uso de agentes que interfieren con las interacciones del receptor de ErbB (por ejemplo, dimerización) . Las estrategias adicionales incluyen terapias que utilizan una molécula pequeña en combinación con anticuerpos, o terapias de quimioprevención (Lin, N. U. ; Winer, e. P., Breast Cáncer Res 6: 204-210, 2004) .
Un ejemplo de una inhibición de pan-ErbB de molécula pequeña es CI-1033, un inhibidor de pan-ErbB irreversible que se une covalentemente al sitio de unión a ATP del dominio de cinasa intracelular . Otro inhibidor de tirosina cinasa receptora de pan-Erbb irreversible es HKI-272, el cual inhibe el crecimiento de células tumorales que expresan ErbB-1 (EGFR) y ErbB-2 (HER-2) en cultivo y xenoinj ertos , y tiene actividad antitumor en cáncer de mama positivo HER-2 (Andrulis, I.L., et al., J Clin Oncol 16 : 1340-9, 1998) . Los inhibidores irreversibles han demostrado superior actividad antitumor en comparación con los inhibidores reversibles.
La neurofibromatosis tipo I (NF1) es una enfermedad humana principalmente heredada que afecta a uno de entre 2500-3500 individuos. Varios sistemas orgánicos son afectados, incluyendo huesos, piel, iris y el sistema nervioso central, como se manifiesta en incapacidades de aprendizaje y gliomas. Una característica de NF1 es el desarrollo de tumores benignos del sistema nervioso periférico (neurofibromas) , los cuales varían ampliamente tanto en número como en tamaño entre pacientes. Los neurofibromas son tumores hetereogéneos compuestos de células Schwann, neuronas, fibroblastos y otras células, las células Schwann siendo el principal tipo de células (60-80%) .
La expresión aberrante del EGFR está asociada con desarrollo de tumor en NF1 y en modelos animales de NF1, sugiriendo un papel en patogénesis y representando un enfoque terapéutico potencial novedoso. La expresión de EGFR afecta el crecimiento de líneas de células tumorales derivadas de pacientes de NF1 bajo condiciones en las que EGF no es el factor principal que conduce al crecimiento de estas células. Estos datos sugieren que EGFR puede jugar un papel importante en la tumorigénesis de NF1 y transformación de células Schwann (DeClue, J. E., et al., J Clin Inves.t 105 : 1233-41, 2000) .
Los pacientes con NF1 desarrollan neoplasmas de células Schwann agresivas conocidos como tumores de funda de nervio periférico maligno (MPNSTs) . Las células Schwann son la principal población celular de soporte en el sistema nervioso periférico. Células Schwann neoplásicas dentro de estos neoplasmas expresan variablemente las tirosina cinasas ErbB mediando las respuestas a NRG- 1 (ErbB2, ErbB3 , ErbB4). Las proteínas de neuregulina- 1 (NRG- 1 ) promueven la diferenciación, supervivencia y/o proliferación de muchos tipos de células en el sistema nervioso en desarrollo, y la sobre-expresión de NRG-1 en células Schwann mielinizantes induce la formación de tumores de funda de nervio periférico malignos (MPNSTs) (Fallón, K. B., et al., J Neuro Oncol 66: 273-84, 2004) .
La desregulación del crecimiento de células Schwann es un defecto principal que conduce al desarrollo de neurofibromas tanto benignos como de MPNST en pacientes de neurofibromatosis tipo 1 (NF1) . El crecimiento de MPNSTs y células Schwann de ratón transformadas in vitro es altamente dependiente de EGF y puede ser bloqueado por inhibidores de EGFR bajo condiciones en las que EGF sea el factor de crecimiento primario. Algunas líneas de células MPNST humanas se ha encontrado que demuestran una fosforilación de ErbB constitutiva. Aunque el tratamiento con inhibidores de ErbB detiene la fosforilación de ErbB y reduce la síntesis de ADN en estas líneas, regímenes quimioterapéuticos efectivos para MPNST siguen elusivos (Stonecypher, M. S., et al., Oncogene 24: 5589-5605, 2005) .
Los Schwannomas son tumores de nervio periférico que comprenden casi en su totalidad células tipo Schwann, y típicamente tienen mutaciones en el gen supresor de tumor de neurofibromatosis tipo II (NF2) . Noventa por ciento de los pacientes con NF2 desarrollan schwannomas vestibulares bilaterales y/o schwannomas espirales. Los schwannomas cada vez más grandes pueden comprender estructuras adyacentes, dando como resultado sordera y otros problemas neurológicos . La remoción quirúrgica de estos tumores es difícil, comúnmente resultando en morbidez de paciente incrementada.
Tanto las células Schwann humanas normales como las células Schwannoma expresan receptores de neuregulina (es decir, receptor de ErbB) y las células Schwannoma proliferan en la respuesta a neuregulina. Es posible que una producción aberrante de neuregulina o respuesta contribuya a una proliferación aberrante de células Schwannoma (Pelton, P. D., et al., Oncogene 17: 2195-2209, 1998).
El supresor del tumor NF2 , Merlin, es una proteína asociada a membrana/citoesqueleto implicada en la regulación de la actividad tirosina cinasa. Las interacciones genéticas entre una mutación Merlin y las mutaciones en la vía de EGFR han sido documentadas en Drosophila (LaJeunesse, D. R. , et al., Genetics 158 : 667-79, 2001). Otra evidencia sugiere que Merlin puede inhibir la internalización de EGFR y la señalización después del contacto de célula a célula al restringir al EGFR dentro de un compartimiento de membrana del cual no puede ni señalizar ni ser internalizado (McClatehey, A. I., et al., Genes and Development 19_: 2265-77, 2005; Curto, M . C., et al., J Cell Biol 177: 893-903, 2007) .
Según se usa en la presente, los términos "tratamiento", "tratar" y "tratando" se refieren a revertir, aliviar, retrasar el inicio de, o inhibir el progreso de una enfermedad o trastorno, o uno o más síntomas de los mismos, como se describe en la presente. En algunas modalidades, el tratamiento puede administrarse después de que se hayan desarrollado uno o más síntomas. En otras modalidades, el tratamiento puede administrarse en ausencia de síntomas. Por ejemplo, el tratamiento puede administrarse a un individuo susceptible antes del inicio de síntomas (por ejemplo, en vista de un historial de síntomas y/o en vista de factores genéticos o de susceptibilidad diferentes) . El tratamiento también puede ser continuado después de que se hayan resuelto los síntomas, por ejemplo para prevenir o retrasar su recurrencia .
Los compuestos proporcionados son inhibidores de uno o más de ErbBl , ErbB2 , ErbB3 y ErbB4 y son por lo tanto útiles para tratar uno o más trastornos asociados con la actividad de uno o más de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 y ErbB . De esta manera, en ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno mediado por ErbBl, mediado por ErbB2 , mediado por ErbB3 y/o mediado por ErbB4 , que comprende la etapa de administrar a un paciente que lo requiera un compuesto de la presente invención, o una composición farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según se usa en la presente, los términos trastornos o afecciones "mediadas por ErbBl", "mediadas por ErbB2" , "mediadas por ErbB3" y/o "mediadas por ^ErbB4" según se usa en la presente significa cualquier enfermedad u otra afección dañina en la cual uno o más de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 y ErbB4 , o un mutante de las mismas, se conozca que juega un papel. En consecuencia, otra modalidad de la presente invención se refiere a tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades en las cuales una o más de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 y ErbB4 o un mutante de las mismas se conozca que jueguen un papel. Específicamente, la presente invención se refiere a un método para tratar o reducir la severidad de una enfermedad ' o afección seleccionada de un trastorno proliferativo, en donde el método comprende administrar a un paciente que lo requiera un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de uno o más trastornos seleccionados de un cáncer. En algunas modalidades, el cáncer está asociado con un tumor sólido. En ciertas modalidades, el cáncer es cáncer de mama, glioblastoma, cáncer de pulmón, cáncer de la cabeza y cuello, cáncer colorrectal, cáncer de vejiga o cáncer pulmonar no microcítico. En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de uno o más trastornos seleccionados de carcinoma de células escamosas, carcinoma de glándulas salivales, carcinoma ovárico o cáncer pancreático.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de neurofibromatosis tipo 1 (NF1) , neurofibromatosis tipo II (NF2) , neoplasmas de células Schwann (por ejemplo, MPSNST's), o Schwannomas .
La familia TEC de tirosina cinasas no receptoras, referida en la presente como "TEC-cinasas", juega un papel central en la señalización a través de receptores de antígenos tales como los receptores TCR, BCR y Fe (revisado en Miller A, et al. Current Opinión in Immunology 14; 331-340 (2002) . Las TEC-cinasas son esenciales para la activación de células T. Tres miembros de la familia, Itk, Rlk y, son activados corriente debajo del acoplamiento de receptor' a antígeno en células T y transmiten señales a los efectores corriente abajo, incluyendo PLC-g. La supresión combinada de Itk y Rlk en ratones lleva a una profunda inhibición de las respuestas a TCR incluyendo proliferación, producción de citocinas y respuestas inmunes a un parásito intracelular (Toxoplasma gondii) (Schaeffer et al., Science 284; 638-641 (1999) ) . La señalización intracelular después del acoplamiento a TCR se lleva a cabo en células T deficientes en ITK/RLK; producción de trifosfato de inositol, movilización de calcio y activación de MAP cinasa son todas reducidas. Las Tec-cinasas también son esenciales para el desarrollo y activación de células B.
Las TEC-cinasas incluyen cinco miembros de familia, los cuales son expresados principalmente en células hematopoyéticas : TEC, BTK, ITK (también conocidas como TSK y EMT) , RLK (también conocida como TXK) , y BMX (también conocida como ETK) . Las TEC-cinasas relacionadas adicionales se han encontrado en Drosophila melanogaster, pez cebra (Danio rerió) , raya {Raja eglanteria) y erizo de mar {Anthocidaris crassispina) .
Los compuestos proporcionados son inhibidores de una o más TEC-cinasas y son por lo tanto útiles para tratar uno o más trastornos asociados con actividad de una o más TEC-cinasas. Así, en ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno mediado por TEC que comprende la etapa de administrar a un paciente que lo requiera un compuesto de la presente invención, o una composición farmacéuticamente aceptable del mismo .
El término "afección mediada por TEC" , según se usa en la presente significa cualquier enfermedad u otra afección dañina en la cual se conozca que las TEC-cinasas jueguen un papel. Estas afecciones incluyen aquellas descritas en la presente y en elcher, M et al., "The Role of TEC Family Kinases in Inflammatory Processes", Anti-Inflammatory & Anti-Allergy Agents in Medicinal Chemistry, vol . 6, No. 1, pág. 61-69 (febrero del 2007) . En consecuencia, otra modalidad de la presente invención se refiere a tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades en las cuales se conozca que las TEC-cinasas jueguen un papel. Específicamente, la presente invención se refiere a un método para tratar o reducir la severidad de una enfermedad o afección seleccionada de enfermedades autoinmunes, inflamatorias, proliferativas e hiperproliferativas y trastornos mediados inmunológicamente incluyendo el rechazo de órganos o tejidos transplantados y síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) (también conocido como VIH) , en donde el método comprende administrar a un paciente que lo requiera una composición de la presente invención.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con TEC-cinasas, incluyendo enfermedades del tracto respiratorio que incluye, sin limitación, enfermedades de las vías aéreas obstructivas reversibles incluyendo asma, tales como asma bronquial, alérgica, intrínseca, extrínseca y por polvo, particularmente asma crónica o inveterada (por ejemplo, hiperresponsividad de vías aéreas por asma tardío) y bronquitis. En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con TEC-cinasas, incluyendo aquellas afecciones caracterizadas por inflamación de la membrana mucosa nasal, incluyendo rinitis aguda, rinitis alérgica, atrófica, y rinitis crónica incluyendo rinitis caseosa, rinitis hipertrófica, rinitis purulenta, rinitis seca y rinitis medicamentosa; rinitis membranosa incluyendo rinitis cuprosa, fibrinosa y pseudomembranosa y rinitis escrofulosa, rinitis estacional incluyendo rinitis nerviosa (fiebre del heno) y rinitis vasomotora, sarcoidosis, pulmón del granjero y enfermedades relacionadas, pulmón fibroide y neumonía intersticial idiopática.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con TEC-cinasas incluyendo enfermedades del hueso y articulaciones que incluyen, sin limitación, artritis reumatoide, espondiloartropatías seronegativas (incluyendo espondilitis anquilosante, artritis psoriásica y enfermedad de Reiter) , enfermedad de Beh et, síndrome de Sjógren, esclerosis sistémica, osteoporosis , cáncer de hueso y metástasis de hueso .
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con TEC-cinasas que incluyen enfermedades y trastornos de la piel, incluyendo, sin limitación, psoriasis, esclerosis sistémica, dermatitis atópica, dermatitis por contacto y otras dermatitis eczematosas, dermatitis seborreica, Liquen plano, pénfigo, pénfigo ampollar, epidermólisis hullosa, urticaria, angiodermas, vasculítides , eritemas, eosinofilias cutáneas, uveítis, alopecia areata y conjuntivitis vernácula.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con TEC-cinasas incluyendo enfermedades y trastornos del tracto gastrointestinal, que incluye, sin limitación, enfermedad celiaca, proctitis, gastroenteritis eosinofílica , mastocitosis , pancreatitis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, alergias relacionadas con alimentos que tengan efectos más allá del intestino, por ejemplo, migraña, rinitis y eczema.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con TEC-cinasas incluyendo aquellas enfermedades y trastornos de otros tejidos y enfermedad sistémica, incluyendo, sin limitación, esclerosis múltiple, aterosclerosis , lupus eritematoso, lupus eritematoso sistémico, tiroiditis de Hashimoto, miastenia grave, diabetes tipo I, síndrome nefrótico, fascitis eosinofílica, síndrome hiper IgE, lepra lepromatosa, síndrome de Sézary y púrpura trombocitopénica idiopática, restenosis después de angioplastia, tumores (por ejemplo leucemia, linfomas y cánceres de próstata), y arterosclerosis .
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con TEC-cinasas incluyendo rechazo a aloinjertos que incluye, sin limitación, rechazo de aloinjertos agudo y crónico después de por ejemplo transplante de riñon, corazón, hígado, pulmón, médula ósea, piel y córnea; y enfermedad de injerto contra anfitrión crónica .
En algunas modalidades, la presente invención se refiere a un método para tratar o reducir la severidad de una o más de las enfermedades o afecciones asociadas con TEC-cinasas, como las descritas arriba, en donde el método comprende administrar a un paciente que lo requiere un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención.
La tirosina cinasa de Bruton ("BTK", por sus siglas en Inglés) , un miembro de las TEC-cinasas, es una enzima de señalización clave expresada en todos los tipos de células hematopoyéticas excepto linfocitos T y células asesinas naturales. BTK juega un papel importante en la vía de señalización de células B enlazando la estimulación del receptor de células B de superficie celular (BCR) a respuestas intracelulares corriente abajo.
BTK es un regulador clave del desarrollo, activación, señalización y supervivencia de células B (Kurosaki, Curr Op Imm, 2000, 276-281; Shaeffer and Schwartzberg, Curr Op Imm 2000, 282-288) . Además, BTK juega un papel en un número de otras vías de señalización de células hematopoyéticas , por ejemplo, receptor tipo Toll (TLR) y producción de TNF- mediada por receptor de citocinas en macrófagos, es decir, señalización del receptor IgE (Fc_épsilon_RI) en células cebadas, inhibición de Fas/APO-1 señalización apoptósica en células linfoides de linaje B, y agregación plaquetaria estimulada por colágeno. Véase, por ejemplo, C. A. Jeffríes, et al., (2003), Journal of Biological Chemistry 278:26258-26264; N. J. Horwwod, et al . , (2003), The Journal of Experimental Medicine 197:1603-1611; Iwaki et al . (2005), Journal of Biological Chemistry 280 (48) :40261-40270; Vassilev et al. (1999), Journal of Biological Chemistry 274(3): 1646-1656 y Quek et al. (1998), Current Biology 8 (20) : 1137-1140.
Los pacientes con mutaciones en BTK tienen un profundo bloque en el desarrollo de células B, dando como resultado la ausencia casi completa de linfocitos B maduros y células plasmáticas, niveles de Ig severamente reducidos y una profunda inhibición de respuesta humoral para recordar antígenos (revisada en Vihinen et al Frontiers in Bioscience 5:d917-928) . Los ratones eficientes en BTK también tienen un número reducido de células B periféricas y niveles séricos ampliamente reducidos de IgM e IgG3. La supresión de BTK en ratones tiene un profundo efecto en la proliferación de células B inducido por anti-IgM, e inhibe respuestas inmunes a antígenos tipo II independientes de timo (Ellmeier et al, J Exp Med 192: 1611-1623 (2000)). BTK también juega un papel crucial en la activación de células cebadas a través del receptor de IgE de alta afinidad (Fc_épsilon_RI ) . Células cebadas de murino deficientes en BTK tienen desgranulación reducida y producción reducida de citocinas proinflamatorias después del entrelazamiento a Fc_épsilon_RI (Kawakami et al. Journal of Leukocyte Biology 65:286-290).
Los compuestos proporcionados son inhibidores de BTK y son por lo tanto útiles para tratar uno o más trastornos asociados con actividad de BTK. Así, en algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno mediado por BTK que comprende la etapa de administrar a un paciente que lo requiera un compuesto de la presente invención, o como una composición farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según se usa en la presente, el término trastornos o afecciones "mediadas por BTK" según se usa en la presente significa cualquier enfermedad u otra afección dañina en la cual se sepa que BTK, o un mutante de la misma, juegue un papel. En consecuencia, otra modalidad de la presente invención se refiere a tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades en las cuales se sepa que BTK, o un mutante de la misma, juegue un papel. Específicamente, la presente invención se refiere a un método para tratar o reducir la severidad de una enfermedad o afección seleccionada de un trastorno proliferativo o un trastorno autoinmune, en donde el método comprende administrar a un paciente que lo requiera un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención .
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con BTK. En algunas modalidades, la enfermedad o afección es una enfermedad autoinmune, por ejemplo, enfermedad inflamatoria del intestino, artritis, lupus, artritis reumatoide, artritis psoriásica, osteoartritis , enfermedad de Still, artritis juvenil, diabetes, miastenia grave, tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis de Ord, enfermedad de Grave, síndrome de Sjógren, esclerosis múltiple, síndrome de Guillain-Barré, encefalomielitis diseminada aguda, enfermedad de Addison, síndrome de opsoclono-mioclono, espondilitis alquilosante , síndrome anticuerpos antifosfolípidos , anemia aplásica, hepatitis autoinmune, enfermedad celiaca, síndrome del Goodpasture, púrpura trombocitopénica idiopática, neuritis óptica, escleroderma, cirrosis biliar primaria, síndrome de Reiter, arteritis de Takayasu, arteritis temporal, anemia hemolítica autoinmune tibia, granulomatosis de egener, psoriasis, alopecia universal, enfermedad de Behget, fatiga crónica, disautonomía, endometriosis , cistitis intersticial, neuromiotonía, escleroderma o vulvodinia. En algunas modalidades, la enfermedad o afección es una enfermedad hiperprol iterativa o enfermedades mediadas inmunológicamente incluyendo rechazo de órganos o tejidos transplantados y síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA, también conocido como VIH) .
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con BTK, en donde la enfermedad o afección se selecciona de afecciones o enfermedades heteroinmunes , las cuales incluyen, pero no están limitadas a enfermedad de injerto contra anfitrión, transplante, transfusión, anafilaxis, alergias (por ejemplo, alergias a pólenes de plantas, látex, fármacos, alimentos, venenos de insecto, pelo de animales, caspa de animales, ácaros de polvo o cucarachas), hipersensibilidad tipo I, conjuntivitis alérgica, rinitis alérgica y dermatitis atópica . algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con BTK, en donde la enfermedad o afección se selecciona de una enfermedad inflamatoria , por ejemplo, asma, apendicitis, blefaritis , bronquiolitis , bronquitis, bursitis, cervicitis, colangitis , colecistitis , colitis, conjuntivitis, cistitis, dacrioadenitis, dermatitis, dermatomiositis, encefalitis, endocarditis, endometritis , enteritis, enterocolitis, epicondilitis, epididimitis , fasciitis, fibrositis, gastritis , gastroenteritis, hepatitis, hidradenitis supurativa, laringitis , mastitis, meningitis, mielitis miocarditis , miositis, nefritis, ooforitis, orquitis, osteítis , otitis, pancreatitis, parotitis, pericarditis, peritonitis , faringitis, pleuritis, flebitis, neumonitis, neumonía, proctitis, prostatitis, pielonefritis , rinitis, salpingitis, sinusitis, estomatitis, sinovitis, tendonitis, tonsilitis, uveítis, vaginitis, vasculitis o vulvitis.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con BTK, en donde la enfermedad o afección se selecciona de un cáncer. En una modalidad, el cáncer es un trastorno proliferativo de células B, por ejemplo, linfoma de células B grandes difuso, linfoma folicular, linfoma linfocítico crónico, leucemia linfocítica crónica, leucemia linfocítica aguda, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico/macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma de zona marginal esplénica, mieloma múltiple (conocido también como mieloma de células plasmáticas) , linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, plasmacitoma , linfoma de células B de zona marginal extranodal, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma de células de manto, linfoma de células B grandes mediastinal (tímico) , linfoma de células B grandes intravascular , linfoma de efusión primaria, linfoma de Burkitt/leucemia o granulomatosis linfomatoide . En algunas modalidades, el cáncer es cáncer de seno, cáncer de próstata o cáncer de las células cebadas (por ejemplo, mastocitoma, leucemia de células cebadas, sarcoma de células cebadas, mastocitosis sistémica) . En una modalidad, el cáncer es cáncer de hueso. En otra modalidad, el cáncer es de otro origen primario y se metastatiza al hueso.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades o afecciones asociadas con BTK, incluyendo enfermedades del hueso y articulaciones que incluyen, sin limitación, artritis reumatoide, espondiloartropatías seronegativas (incluyendo espondilitis anquilosante, artritis psoriásica y enfermedad de Reiter) , enfermedad de Behcet, síndrome de Sjogren, esclerosis sistémica, osteoporosis , cáncer de hueso y metástasis de hueso .
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con BTK, en donde la enfermedad o afección se selecciona de un trastorno tromboembólico, por ejemplo, infarto de miocardio, angina de pecho, reoclusión después de angioplastia, restenosis después de angioplastia, reoclusión después de derivación aortocoronaria, restenosis después de derivación aortocoronaria, apoplejía, isquemia transitoria, un trastorno oclusivo arterial periférico, embolia pulmonar o trombosis venosa profunda .
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con BTK, incluyendo eventos inflamatorios infecciosos y no infecciosos y enfermedades autoinmunes y otras inflamatorias. Estas en ermedades, trastornos y síndromes autoinmunes inflamatorias incluyen enfermedad pélvica in lamatoria, uretritis, quemadura solar de piel, sinusitis, neumonitis, encefalitis, meningitis, miocarditis, nefritis, osteomielitis, miositis, hepatitis, gastritis, enteritis, dermatitis, gingivitis, apendicitis, pancreatitis, colocistitis , agamaglobulinemia, psoriasis, alergia, enfermedad de Crohn, síndrome del intestino irritable, colitis ulcerativa, enfermedad de Sjogren, rechazo de tejidos e injertos, rechazo hiperagudo de órganos transplantados, asma, rinitis alérgica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) , enfermedad poliglandular autoinmune (conocida también como síndrome poliglandular autoinmune) , alopecia autoinmune, anemia perniciosa, glomerulonefritis , dermatomiositis , esclerosis múltiple, escleroderma, vasculitis, estados hemolíticos y trombocitopénicos autoinmunes, síndrome de Goodpasture, aterosclerosis, enfermedad de Addison, mal de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, diabetes tipo I, choque séptico, lupus eritematoso sistémico (LES) , artritis reumatoide, artritis psoriásica, artritis juvenil, osteoartritis , púrpura trombocitopénica idiopática crónica, macroglobulinemia de Waldenstrom, miastenia grave, tiroiditis de Hashimoto, dermatitis atópica, enfermedad de articulaciones degenerativa, vitíligo, hipopituitarismo autoinmune, síndrome de Guillain-Barré , enfermedad de Beh et, escleraderma , micosis fungoide, respuestas inflamatorias agudas (tales como síndrome de distensión respiratoria aguda y lesión de isquemia/reperfusión) y enfermedad de Graves.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con BTK, seleccionadas de artritis reumatoide, esclerosis múltiple, leucemia linfocítica crónica de células B, leucemia linfocítica aguda,/ leucemia de células pilosas, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, mieloma múltiple, cáncer de hueso, metástasis ósea, osteoporosis , síndrome del intestino irritable, enfermedad de Crohn, lupus y transplante renal.
La cinasa de células T inducible por interleucina-2 ("ITK", por sus siglas en Inglés) es expresada en células T, células cebadas y células asesinas naturales. Es activada en células T después de la estimulación del receptor de células T (TCR) , y en células cebadas después de la activación del receptor de IgE de alta afinidad. Después de la estimulación del receptor en células T, Lck, un miembro de la familia de tirosina cinasa Src, fosforila Y511 en el asa de activación de dominio de cinasa de ITK (S.. D. Heyeck et al.., 1997, J.
Biol . Chem, 272, 25401-25408). ITK activada, junto con Zap-70 se requiere para la fosforilación y activación de PLC-gamma (S. C. Bunnell et al., 2000, J. Biol. Chem., 275, 2219-2230). PLC-gamma cataiza la formación de 1 , 4 , 5 -trifosfato de inositol y diacilglicerol , llevando a movilización de calcio y activación de PKC, respectivamente. Estos eventos activan numerosas vías corriente abajo y llevan finalmente a desgranulación (células cebadas) y expresión de genes de citocina (células T) (Y. Kawakami et al., 1999, J. Leukocyte Biol. , 65, 286.-290) .
El papel de ITK en la activación de células T ha sido confirmado en ratones suprimidos en ITK. Células T CD4+ de ratones suprimidos en ITK tienen una respuesta proliferativa reducida en una reacción linfocítica mixta o después de la estimulación con Con A o anti-CD3. (X. C. Liao y D. R. Littman, 1995, Immunity, 3, 757-769). Asimismo, células T de ratones suprimidos en ITK produjeron poca IL-2 después de la estimulación con TCR dando como resultado proliferación reducida de estas células. En otro estudio, células T CD4+ deficientes en ITK produjeron niveles reducidos de citocinas incluyendo IL-4, IL-5 e IL-13 después de la estimulación de TCR, incluso después del cebado con condiciones inductoras (D. J. Fowell, 1999, Immunity, 11, 399-409) .
El papel de ITK en la activación de PLC-gamma y en la movilización de calcio también fue confirmado en las células T de estos ratones suprimidos, los cuales tuvieron una generación de IP3 severamente deteriorada y ningún influjo de calcio extracelular después de la estimulación con TCR (K. Liu et al., 1998, J. Ex . Med. 187, 1721-1727) Estos estudios soportan un papel clave para ITK en la activación de células T y células cebadas. De esta manera, un inhibidor de ITK sería de beneficio terapéutico en enfermedades mediadas por activación inadecuada de estas células.
Ha sido bien establecido que las células T juegan un papel importante en la regulación de la respuesta inmune (Powrie y Coffman, 1993, Immunology Today, 14, 270-274). De hecho, la activación de células T comúnmente es el evento iniciador en trastornos inmunológicos . Después de la activación de la TCR, existe un influjo de calcio que se requiere para la activación de células T. Después de la activación, las células T producen citocinas, incluyendo IL-2, 4, 5, 9, 10 y 13 llevando a proliferación de células T, diferenciación y función efectora. Estudios clínicos con inhibidores de IL-2 han mostrado que la interferencia con la activación y proliferación de células T suprime de manera efectiva la respuesta inmune in vivo. En consecuencia, agentes que inhiban la activación de linfocitos T y la subsecuente producción de citocinas, son terapéuticamente útiles para suprimir selectivamente la respuesta inmune en un paciente en necesidad de esta inmunosupresión .
Las células cebadas juegan un papel crítico en asma y trastornos alérgicos al liberar mediadores proinflamatorios y citocinas. La agregación mediada por antígenos de Fe . épsilon . RI , el receptor de alta afinidad para IgE, se traduce en la activación de células cebadas (D. B. Corry et al., 1999, Nature, 402, B18-23). Esto desencadena una serie de eventos de señalización que dan como resultado la liberación de mediadores, incluyendo histamina, proteasas, leucotrienos y citocinas (J. R. Gordon et al., 1990, Immunology Today, 11, 458-464) . Estos mediadores causan permeabilidad vascular incrementada, producción de moco, broncoconstricción, degradación tisular e inflamación jugando entonces papeles clave en la etiología y síntomas de asma y trastornos alérgicos.
Datos publicados usando ratones suprimidos en IT sugieren que en ausencia de la función de ITK, números incrementados de células T de memoria son generados. Una estrategia para mejorar los métodos de vacunación es la de incrementar el número de células T de memoria generadas (S. M. Kaech et al., Nature Reviews Immunology, 2, 251-262). Además, la supresión de ITK en ratones se traduce en una proliferación y secreción inducida por (TCR) receptor de células T reducida de las citocinas IL-2, IL-4, IL-5, IL-10 e IFN-y (Schaeffer et al., Science 284; 638-641 (1999)), Fowell et al, Immunity 11,· 399-409 (1999) , Shaeffer et al, Nature Immunology 2 (12): 1183-1188 (2001))). Los síntomas inmunológicos de asma alérgica son atenuados en ratones ITK-/-. Inflamación pulmonar, infiltración eosi ofílica y producción de moco se reducen drásticamente en ratones ITK-/-en respuesta al ataque con el alérgeno OVA (Mueller et al, Journal of Immunology 170:5056-5063 (2003)). ITK también ha estado implicada en dermatitis atópica. Este gen se ha reportado que es más altamente expresado en células T de sangre periférica de pacientes con dermatitis atópica moderada y/o severa . que en controles o pacientes con dermatitis atópica leve (Matsumoto et al., International Archives of Allergy and Immunology 129: 327-340 (2002)).
Esplenocitos de ratones RLK-/- secretan la mitad de la IL-2 producida por animales tipo silvestre en respuesta al acoplamiento de TCR (Schaeffer et al, Science 284:638-641 (1999) ) , mientras que la supresión combinada de ITK y RLK en ratones lleva a una profunda inhibición de respuestas inducidas por TCR incluyendo proliferación y producción de las citocinas IL-2, IL-4, IL-5 e IFN-y (Schaeffer et al, Nature Immunology 2 (12): 1183-1188 (2001), Schaeffer et al, Science 284:638-641 (1999)-}-. La señalización intracelular después del acoplamiento de TCR es efectuada en células T deficientes en ITK/RLK; producción de trifosfato de inositol, movilización de calcio, activación de cinasa MAP y activación de los factores de transcripción NFAT y AP-1 son todas reducidas (Schaeffer et al, Science 284:638-641 (1999), Schaeffer et al, Nature Immunology 2 (12) : 1183-1188 (2001)).
Los compuestos proporcionados son inhibidores de ITK y son por lo tanto útiles para tratar uno o más trastornos asociados con actividad de ITK. Así, en algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno mediado por ITK que comprende la etapa de administrar a un paciente que lo requiera un compuesto de la presente invención, o composición farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según se usa en la presente, el término trastornos o afecciones "mediados por ITK" según se usa en la presente significa cualquier enfermedad u otra afección dañina en la cual ITK, o un mutante de la misma, se sepa que juegue un papel. En consecuencia, otra modalidad en la presente invención se refiere a tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades en las cuales ITK, o un mutante de la misma, se sepa que juegue un papel. Específicamente, la presente invención se refiere a un método para tratar o reducir la severidad de una enfermedad o afección seleccionada de una afección mediada por células cebadas, un trastorno mediado por basófilos, un trastorno inmunológico o alérgico, en donde el método comprende administrar a un paciente que lo requiera un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención .
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con ITK, en donde la enfermedad o afección es un trastorno inmune, incluyendo enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, rechazo de transplante de órganos y médula ósea y otros trastornos asociados con respuesta inmune mediada por células T o respuesta inmune mediada por células cebadas.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con ITK, en donde la enfermedad o afección es inflamación aguda o crónica, una alergia, dermatitis por contacto, psoriasis, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes tipo I, enfermedad inflamatoria del intestino, síndrome de Guillain-Barré, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, cáncer, enfermedad de injerto contra anfitrión (y otras formas de rechazo de transplantes de órganos o médula ósea) o lupus eritematoso .
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades y afecciones asociadas con ITK, en donde la enfermedad o afección es una condición conducida por células cebadas, un trastorno mediado por basófilos, enfermedad de vía aérea obstructiva reversible, asma, rinitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) , linfoma de células T periféricos o VIH [también conocido como Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) ] . Estas afecciones incluyen aquellas descritas en Readinger, et al., PNAS 105:6684-6689 (2008).
Las cinasas Janus (JAK, por sus siglas en ingles) son una familia de tirosina cinasas que consisten en JAK1, JAK2 , JAK3 y TYK2. Las JAKs juegan un papel crítico en la señalización de citocinas. Los substratos corriente debajo de la familia JAK de cinasas incluyen las proteínas transductoras de señales y activadoras de transcripción (STAT, por sus siglas en Inglés) . La señalización de JAK/STAT ha estado implicada en la mediación de muchas respuestas inmunes anormales tales como alergias, asma, enfermedades autoinmunes tales como rechazo de transplantes, artritis reumatoide, esclerosis lateral amiotrófica y esclerosis múltiple así como en malignidades sólidas y hematológicas tales como leucemias y linfornas. La intervención farmacéutica en la vía JAK/STAT ha sido revisada [Frank, Mol. Med. 5: 432-456 (1999) & Seidel, et al, Oncogene 19:2645-2656 (2000)].
JAK1, JAK2 y JYK2 son expresadas ubicuamente, en tanto que JAK3 es expresada predominantemente en células hematopoyéticas . JAK3 se une exclusivamente a la cadena gama del receptor de citocina común (ye) y es activada por IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 e IL-15.
La proliferación y supervivencia de células cebadas de murino inducida por IL-4 e IL-9 han, de hecho, mostrado ser dependientes de la señalización de JAK3 y ye [Suzuki et al, Blood 96:2172-2180 (2000)].
El entrelazamiento de los receptores de inmunoglobulina (Ig) E de alta afinidad de células cebadas, sensibilizadas lleva a una liberación de mediadores proinflamatorios , incluyendo un número de citocinas vasoactivas que se traduce en reacciones de hipersensibilidad alérgicas agudas o inmediatas (tipo I) [Gordon et al, Nature 346:274-276 (1990) & Galli, N. Engl . J. Med., 328:257-265 (1993)] . Un papel crucial para JAK3 en las respuestas de células cebadas mediadas por receptor de IgE in vitro e in vivo ha sido establecido [Malaviya, et al, biochem. Biophys. Res. Commun. 257:807-813 (1999)]. Además, la prevención de reacciones de hipersensibilidad tipo I, incluyendo anafilaxis, mediada por la activación de células cebadas a través de la inhibición de JAK3 también ha sido reportada [Malaviya et al, J. Biol . Chem. 274:27028-27038 (1999)]. La dirección de células cebadas con inhibidores de JAK3 moduló la desgranulación de células cebadas in vitro y previno las reacciones anafilácticas mediadas por receptor de IgE/antígenos in vivo.
Un estudio reciente describió la exitosa dirección de JAK3 para supresión inmune y de aceptación de aloinjertos. El estudio demostró una supervivencia dependiente de dosis de aloinjerto de corazón de búfalo en receptores Wistar Furth después de la administración de inhibidores de JAK3 indicando la posibilidad de regular respuestas inmunes no deseadas en enfermedad de injerto contra anfitrión [Kirken, Transpl . Proc. 33:3268-3270 82001)].
La fosforilación de STAT mediada por IL-4 ha estado implicada como el mecanismo implicado en etapas tempranas y tardías de artritis reumatoide (RA) . LA sobrerregulación de citocinas proinflamatorias en sinovios de RA y fluido sinovial es una característica de la enfermedad. Se ha demostrado que la activación mediada por IL-4 de la vía IL-4/STAT es mediada a través de las cinasas Janus (JAK 1 y 3) y que las cinasas JAK asociadas con IL-4 son expresadas en el sinovio de RA [Muller-Ladner, et al, J. Immunol . 164:3894-3901 (2000) ] .
La esclerosis lateral amiotrófica familiar (FALS, por sus siglas en Inglés) es un trastorno neurodegenerativo fatal que afecta a aproximadamente 10% de los pacientes de ALS . Las tasas de supervivencia de ratones con FALS se incrementaron después del tratamiento con un inhibidor específico de JAK3. Esto confirmó que JAK3 juega un papel en FALS [Trieu, et al, Biochem. Biophys . Res. Commun. 267:22-25 (2000) ] .
Las proteínas transductoras de señales y activadoras de transcripción (STAT) son activadas por, entre otros, las cinasas de la familia JAK. Los resultados de un estudio reciente sugirió la posibilidad de la intervención en la vía de señalización de JAK/STAT al dirigir cinasas de la familia JAK con inhibidores específicos para el tratamiento de leucemia [Sudbeck, et al., Clin. Cáncer Res. 5:1569-1582 (1999)] . Los compuestos específicos de JAK3 mostraron inhibir el crecimiento clonogénico de líneas de células que expresaban JAK3 DAUDI , RAMOS, LCl; 19, NALM-6, MOLT-3 y HL-60. La inhibición de la fosforilación de tirosina abrogada por JAK3 y TYK 2 de STAT3 , e inhibió el crecimiento celular de micosis fungoides, una forma de linfoma de células T cutánea .
De acuerdo con otra modalidad, la invención proporciona un método para tratar o reducir la severidad de una enfermedad o afección mediada por JAK3 en un paciente, que comprende la etapa de administrar al paciente una composición de acuerdo con la presente invención.
El término "enfermedad mediada por JAK3", según se usa en la presente significa cualquier enfermedad u otra afección dañina en la cual se conozca que JAK3 cinasa juega un papel. En consecuencia, otra modalidad de la presente invención se refiere a tratar o reducir la severidad de una o más enfermedades en las cuales se sepa que la JAK3 juega un papel. Específicamente, la presente invención se refiere a un método de tratamiento o reducción de la severidad de una enfermedad o afección seleccionada de respuestas inmunes tales como reacciones alérgicas o de hipersensibilidad tipo I, asma, enfermedades autoinmunes tales como rechazo de transplantes, enfermedad de injerto contra anfitrión, artritis reumatoide, esclerosis lateral amiotrófica y esclerosis múltiples, trastornos neurodegenerativos tales como esclerosis lateral amiotrófica familiar (FALS) , así como en malignidades sólidas y hematologicas tales como leucemias y linfornas, en donde el método comprende administrar a un paciente que lo requiera una composición de acuerdo con la presente invención.
Los compuestos y composiciones, de acuerdo con el método de la presente invención, se pueden administrar usando cualquier cantidad y cualquier ruta de administración efectiva para tratar o reducir la severidad de cáncer, una enfermedad autoinmune, un trastorno neurodegenerativo neurológico, esquizofrenia, un trastorno relacionado con hueso, enfermedad de hígado o un trastorno cardiaco. La cantidad exacta requerida variará de sujeto en sujeto, dependiendo de la especie, edad y condición general del sujeto, la severidad de la infección, el agente particular, su modo de administración y similares. Los compuestos de la invención se formulan de preferencia en forma de dosis única para facilidad de administración y uniformidad de dosificación. La expresión "forma de dosis única" según se usa en la presente, se refiere a una unidad físicamente discreta de agente adecuado para que el paciente sea tratado. Sin embargo, se entenderá que el uso diario total de los compuestos y composiciones de la presente invención será decidido por el médico que atienda dentro del alcance de juicio médico correcto. El nivel de dosis efectivo específico para cualquier paciente u organismo particular dependerá de una variedad de factores incluyendo el trastorno que esté siendo tratado y la .severidad del trastorno. La actividad del compuesto específico empleado; la composición específica empleada; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración, ruta de administración y velocidad de excreción del compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; fármacos usados en combinación o coincidentemente con el compuesto específico empleado, y factores similares bien conocidos en la técnica médica. El término "paciente", según se usa en la presente, significa un animal, de preferencia un mamífero, y muy preferiblemente un humano.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención pueden administrarse a humanos u otros animales oralmente, rectalmente, parenteralmente , intracisternalmente , intravaginalmente , intraperitonealmente , tópicamente (como mediante polvos, pomadas o gotas) , bucalmente, como un spray oral o nasal o similares, dependiendo de la severidad de la infección que esté siendo tratada. En ciertas modalidades, los compuestos de la invención pueden administrarse oralmente o parenteralmente a niveles de dosificación de alrededor de 0.01 mg/kg o aproximadamente 50 mg/kg y de preferencia de alrededor de 1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg, de peso corporal del sujeto al día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico deseado.
Las formas de dosificación líquidas para administración oral incluyen, pero no están limitadas a, emulsiones, microemulsiones , soluciones, suspensiones, jarabes y elíxires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica tales como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes de solubilización y emulsionantes tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol , 1 , 3-butilenglicol , dimetilformamida , aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, nuez, maíz, germen, oliva, ricino y ajonjolí), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácido graso de sorbitan, y mezclas de los mismos. Aparte de diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes y aromatizantes.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles pueden formularse de acuerdo con la técnica conocida usando agentes de dispersión o humectación y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución, suspensión o emulsión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1 , 3 -butanodiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse están agua, solución de Ringer, solución de cloruro de sodio U.S.P. e isotónica. Además, aceites estériles fijos se emplean convencionalmente como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito cualquier aceite fijo blando puede emplearse incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Además, ácidos grasos tales como ácido oleico se usan en la preparación de inyectables.
Las formulaciones inyectables pueden ser esterilizadas, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias, o al incorporar agentes esterilizadores en forma de composiciones sólidas estériles que puedan ser disueltas o dispersas en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de usar.
Para poder prolongar el efecto de un compuesto de la presente invención, comúnmente es deseable hacer más lenta la absorción del compuesto a partir de inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede lograr mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con deficiente solubilidad en agua. La velocidad de absorción del compuesto depende entonces de su velocidad de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y forma cristalina. Como alternativa, la absorción retrasada de un compuesto administrado parenteralmente se logra al disolver o suspender el compuesto en un vehículo de aceite. Las formas de depósito inyectable se elaboran al formar matrices de microcápsula del compuesto en polímeros biodegradables tales como polilacturo-poliglicólido . Dependiendo de la relación de compuesto a polímero y de la naturaleza del polímero particular empleado, la velocidad de liberación del compuesto puede ser controlada. Ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli (ortoésteres) y poli (anhídridos ) . Las formulaciones inyectables de depósito también se preparan al atrapar el compuesto en liposomas o microemulsiones que son compatibles con tejidos corporales.
Las composiciones para administración rectal o vaginal son de preferencia supositorios que pueden prepararse al mezclar los compuestos de esta invención con excipientes o portadores no irritantes adecuados tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera para supositorios que son sólidos a temperatura ambiente pero líquidos a temperatura corporal y por lo tanto se derriten en el recto o cavidad vaginal y liberan el compuesto activo.
Las formas de dosis sólidas para administración oral incluyen cápsulas, tabletas, pildoras, polvos y gránulos . En estas formas de dosis sólidas, el compuesto activo se mezcla con por lo menos un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable e inerte tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico y/o a) cargas o extensores tales como almidones, lactosa, sucrosa, glucosa, manitol y ácido silícico, b) aglutinantes tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa , alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sucrosa y acacia, c) humectantes tales como glicerol, d) agentes desintegrantes tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de papa o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos y carbonato de sodio, e) agentes de retraso de solución tales como parafina, f) aceleradores de absorción tales como compuestos de amonio cuaternario, g) agentes humectantes tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, h) absorbentes tales como caolín y arcilla bentonita, e i) lubricantes tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio y mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, tabletas y pildoras, la forma de dosis también puede comprender agentes reguladores de pH.
Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como cargas en cápsulas de gelatina rellenas suaves y duras usando excipientes tales como lactosa o azúcar de leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. Las formas de dosis sólidas de tabletas, grageas, cápsulas, pildoras y gránulos pueden prepararse con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. Pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y también pueden ser de una composición que liberen los ingredientes activos únicamente, o de preferencia, en cierta parte del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de una manera retrasada. Ejemplos de composiciones de incrustación que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como cargas en cápsulas de gelatinas rellenas blandas y duras usando excipientes tales como lactosa o azúcar de leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.
Los compuestos activos también pueden estar en forma microencapsulada con uno o más excipientes como se indicó arriba. Las formas de dosis sólidas de tabletas, grageas, cápsulas, pildoras y gránulos pueden prepararse con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos, recubrimientos de control de liberación y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. En estas formas de dosis sólidas, el compuesto activo puede ser mezclado con al menos un diluyente inerte tal como sucrosa, lactosa o almidón. Estas formas de dosis también pueden comprender, como es práctica normal, sustancias adicionales que no sean diluyentes inertes, por ejemplo, lubricantes de tableteo y otros auxiliares de tableteo tales como estearato de magnesio y celulosa microcristalina . En el caso de cápsulas, tabletas y pildoras, las formas de dosis también pueden comprender agentes de regulación de pH . Pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y también pueden ser de una composición que liberen los ingredientes activos únicamente, o de preferencia, en cierta parte del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de una manera retrasada. Ejemplos de composiciones de incrustación que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras.
Las formas de dosis para administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, sprays, inhalantes o parches. El componente activo se mezcla bajo condiciones estériles con un portador farmacéuticamente aceptable y cualquier conservador o regulador de pH que se requiera según se requiera. Formulaciones oftálmicas, gotas para ojos y gotas para oídos también se contempla como estando dentro del alcance de esta invención. Además, la presente invención contempla el uso de parches transdérmicos , los cuales tienen la ventaja agregada de proporcionar suministro controlado de un compuesto al cuerpo. Estas formas de dosis pueden elaborarse al disolver o dispensar el compuesto en el medio adecuado. Los potenciadores de absorción también se pueden usar para incrementar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad puede ser controlada ya sea al proporcionar una membrana de control de velocidad o al dispersar el compuesto en una matriz o gel polimérico .
De acuerdo con una modalidad, la invención se refiere a un método para inhibir la actividad de proteína cinasa en una muestra biológica, que comprende la etapa de poner en contacto la muestra biológica con un compuesto de esta invención, o una composición que comprende el compuesto.
De acuerdo con otra modalidad, la invención se refiere a un método para inhibir la actividad de ErbBl, ErbB2, ErbB3, ErbB , una TEC-cinasa y/o JAK3 , o un mutante de las mismas, en una muestra biológica, que comprende la etapa de poner en contacto la muestra biológica con un compuesto de esta invención, o una composición que comprenda el compuesto.
En ciertas modalidades, la invención se refiere a un método para inhibir irreversiblemente la actividad de ErbBl, ErbB2, ErbB3 , ErbB4, una TEC-cinasa y/o JAK3 o un mutante de las mismas en una muestra biológica, que comprende la etapa de poner en contacto la muestra biológica con un compuesto de esta invención, o una composición que comprenda el compuesto.
El término "muestra biológica", según se usa en la presente, incluye, sin limitación, cultivos de células o extractos de los mismos; material biopsiado obtenido de un mamífero o extractos del mismo y sangre, saliva, orina, heces, semen, lágrimas u otros fluidos corporales o extractos de los mismos.
La inhibición de proteína cinasa, o una actividad de proteína cinasa seleccionada de ErbBl, ErbB2 , ErbB3, ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 o un mutante de las mismas en una muestra biológica es útil para una variedad de propósitos que se conocen por alguien de capacidad en la técnica. Ejemplos de estos propósitos incluyen, pero no están limitados a, transfusión de sangre, transplante de órganos, almacenamiento de especímenes biológicos y ensayos biológicos .
Otra modalidad de la presente invención se refiere a un método para inhibir la actividad proteína cinasa en un paciente, que comprende la etapa de administrar al paciente un compuesto de la presente invención, o una composición que comprenda el compuesto.
De acuerdo con otra modalidad, la invención se refiere a un método para inhibir una o más de la actividad de ErbBl, ErbB2, ErbB3, ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 , o un-mutante de las mismas en un paciente, que comprende la etapa de administrar al paciente un compuesto de la presente invención, o una composición que comprenda el compuesto. De acuerdo con ciertas modalidades, la invención se refiere a un método para inhibir irreversiblemente una o más de las actividades de ErbBl, ErbB2, ErbB3 , ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 , un mutante de las mismas en un paciente, que comprende la etapa de administrar al paciente un compuesto de la presente invención, o una composición que comprenda el compuesto. En otras modalidades, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno mediado por una o más de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 , ErbB4 , una TEC-cinasa y/o JAK3 , o un mutante de las mismas, en un paciente que lo requiera, que comprende la etapa de administrar al paciente un compuesto de acuerdo con la presente invención o una composición farmacéuticamente aceptable del mismo. Estos trastornos se describen en detalle en la presente.
Dependiendo de la afección particular, o enfermedad, que será tratada, agentes terapéuticos adicionales, los cuales se administran normalmente para tratar esa afección, también pueden estar presentes en las composiciones de esta invención. Según se usa en la presente, los agentes terapéuticos adicionales que se administran normalmente para tratar una enfermedad o afección particular se conocen como "adecuados para la enfermedad o afección que esté siendo tratada" .
Por ejemplo, los compuestos de la presente invención, o una composición farmacéuticamente aceptable de los mismos, se administran en combinación con agentes quimioterapéuticos para tratar enfermedades proliferativas y cáncer. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos conocidos incluyen, pero no están limitados a, adriamicina, dexametasona, vincristina, ciclofosfamida , fluorouracilo, topotecano, taxol, interferones , derivados de platino, taxano (por ejemplo, paclitaxel) , vinca alcaloides (por ejemplo, vinblastina) , antraciclinas (por ejemplo, doxorrubicina) , epipodofilotoxinas (por ejemplo, etopósido) , cisplatino, un inhibidor de mTOR (por ejemplo, una rapamicina) , metotrexato, actinomicina D, dolastatina 10, colchicina, emetina, trimetrexato, metroprina, ciclosporina, daunorrubicina, tenipósido, anfotericina, agentes alquilantes (por ejemplo, clorambucilo) , 5-fluorouracilo, canfotecina, cisplatino, metronidazol y Gleevec™ entre otros. En otras modalidades, un compuesto de la presente invención se administra en combinación con un agente biológico, tal como Avastin o VECTIBIX.
En ciertas modalidades, los compuestos de la presente invención, o una composición farmacéuticamente aceptable de los mismos, se administran en combinación con un agente antiproliferativo o quimioterapéutico seleccionado de cualquiera uno o más de abarelix, aldesleucin, alemtuzumab, alitretinoin, alopurinol, altretamina, amifostina, anastrozol, trióxido arsénico, asparaginasa, azacitidina, BCG vivo, bevacuzimab, fluorouracilo, bexaroteno, bleomicina, bortezomib, busulfan, calusterona, capecitabina, canftotecina, carboplatino, carmustina, celecoxib, cetuximab, clorambucilo, cladribina, clofarabina, ciclofosfamida , citarabina, dactinomicina, darbepoyetina alfa, daunorrubicina , denileucina, dexrazoxano, docetaxel, doxorrubicina (neutra) , clorhidrato de doxorrubicina , propionato de dromostanolona, epirrubicina , epoyetina alfa, erlotinib, estramustina, etopósido fosfato, etopósido, exemestano, filgrastim, floxuridina, fludarabina, fulvestrant, gefitinib, gemcitabina, gemtuzumab, acetato de goserelina, acetato de histrelina, hidroxiurea, ibritumomab, idarrubicina , ifosfamida, mesilato de imatinib, interferón alfa-2a, interferón alfa-2b, irinotecan, lenalidomida, letrozol, leucovorin, acetato de leuprolida, levamisol, lomustina, acetat de megestrol, melfalan, mercaptopurina, 6-MP, mesna, metotrexato, metoxsalen, mitomicina C, mitotano, mitoxantrona, nandrolona, nelarabina, nofetumomab, oprelvekin, oxaliplatino, paclitaxel, palifermin, pamidronato, pegademasa, peigaspargasa, pegfilgastrim, pemetrexed disódico, pentostatina , pipobroman, plicamicina, porfímero sódico, procarbazina, quinacrina, rasburicasa, rituximab, sargramostira, sorafenib, estreptozocina , maleato de sunitinib, talco, tamoxifen, temozolomida, tenipósido, VM-26, testolactona, tioguanina, 6-TG, tiotepa, topotecan, toreraifeno, tositumomab, trastuzumab , tretinoína, ATRA, mostaza de uracilo, valrubicina, vinblastina, vincristina, vinorelbina, zoledronato, o ácido zoledrónico.
Otros ejemplos de agentes con los que los inhibidores de esta invención también se pueden combinar incluyen, sin limitación: tratamientos para enfermedad de ® Alzheimer tal como clorhidrato de donepezil (A icept ) y rivastxgmina (Exelon ) ; tratamientos para mal de Parkinson tales como L-DOPA/carbidopa, entacapona, ropinrol, pramipexol, bromocriptina , pergolida, trihexefendil y amantadina; agentes para tratar Esclerosis Múltiple (MS) tales como interferón beta (por ejemplo, Avonex" y Rebif*) , acetato de glatirámero (Copaxone ) , y mitoxantrona ; tratamientos para asma tales como albuterol y montelukast (Singulair ) ; agentes para tratar esquizofrenia tales como ziprexa, risperdal, seroquel y haloperidol ; agentes antiinflamatorios tales como corticosteroides, bloqueadores de TNF, IL-1 RA, azatioprina, ciclofosfamida y sulfasalazina ; agentes inmunomoduladores e inmunosupresores tales como ciclosporina , tacrolimus, rapamicina, micofenolato mofetil, interferones , corticosteroides , ciclofosfamida, azatioprina y sulfasalazina; factores neurotróficos tales como inhibidores de acetilcolinesterasa, inhibidores de MAO, interferones, anticonvulsivos , bloqueadores de canales iónicos, riluzol y agentes anti-Parkinsonianos ; agentes para tratar enfermedad cardiovascular tales como beta-bloqueadores , inhibidores de ACE, diuréticos, nitratos, bloqueadores de canales de calcio y estatinas; agentes para tratar enfermedad de hígado tales como corticosteroides, coliestiramina , interferones y agentes antivirales; agentes para tratar trastornos hematológicos tales como corticosteroides, agentes anti-leucémicos y factores de crecimiento; y agentes para tratar trastornos de inmunodeficiencia tales como gama globulina.
En ciertas modalidades, los compuestos de la presente invención, o una composición farmacéuticamente aceptable de los mismos, se administran en combinación con un anticuerpo monoclonal o un terapéutico de siARN.
Esos agentes adicionales pueden ser administrados por separado a partir de una composición que contenga compuesto de la invención, como parte de un régimen de dosificaciones múltiples. Como alternativa, esos agentes pueden ser parte de una sola forma de dosificación, mezclarse junto con un compuesto de esta invención en una sola composición. Si se administra como parte de un régimen de dosificaciones múltiples, los dos agentes activos pueden ser sometidos simultáneamente, secuencialmente o dentro de un periodo de tiempo uno del otro normalmente dentro de cinco horas uno del otro.
Según se usa en la presente, el término "combinación", "combinado" y términos relacionados, se refiere a la administración simultánea o secuencial de agentes terapéuticos de acuerdo con esta invención. Por ejemplo, un compuesto de la presente invención puede administrarse con otro agente terapéutico simultáneamente o secuencialmente en formas de dosis únicas separadas o juntas en una forma de dosis única individual. En consecuencia, la presente invención proporciona una sola forma de dosis única que comprende un compuesto de la fórmula I, un agente terapéutico adicional y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.
La cantidad de ambos, un compuesto de la invención y agente terapéutico adicional (en estas composiciones que comprenden un agente terapéutico adicional como el descrito arriba) ) que puede combinarse con los materiales portadores para producir una sola forma de dosis variará dependiendo del anfitrión tratado y del modo de administración particular. De preferencia, las composiciones de esta invención deben formularse de tal manera que se pueda administrar una dosis de entre 0.01-100 mg/kg de peso corporal/día de un compuesto de la invención.
En aquellas composiciones que comprendan un agente terapéutico adicional, ese agente terapéutico adicional y el compuesto de esta invención pueden actuar sinérgicamente . Por lo tanto, la cantidad de agente terapéutico adicional en estas composiciones será menor que aquella requerida en una monoterapia utilizando sólo ese agente terapéutico. En esas composiciones una dosis de entre 0.01-1,000 ug/kg de peso corporal/día del agente terapéutico adicional pueden ser administrados .
La cantidad de agente terapéutico adicional presente en las composiciones de esta invención será no mayor que la cantidad que normalmente se administraría en una composición que comprenda el agente terapéutico como el único agente activo. De preferencia, la cantidad de agente terapéutico adicional en las composiciones actualmente descritas variará de aproximadamente 50% a 100% de la cantidad normalmente presente en una composición que comprende ese agente como el único agente terapéuticamente activo .
Las composiciones de esta invención, o composiciones farmacéuticas de las mismas, también pueden ser incorporadas en composiciones para recubrimiento de un dispositivo médico implantable, tales como prótesis, válvulas artificiales, injertos vasculares, stents y catéteres. Los stents vasculares, por ejemplo, se han usado para superar restenosis (reangostamiento de las. paredes de los vasos después de lesión) . Sin embargo, los pacientes que usan stents y otros dispositivos implantables están en riesgo de formación de coágulos o activación plaquetaria. Estos efectos no deseados pueden ser prevenidos o mitigados para prerrecubrir el dispositivo con una composición farmacéuticamente aceptable que comprenda un inhibidor de cinasa. Los dispositivos implantables recubiertos con un compuesto de esta invención son otra modalidad de la presente invención . 5. Compuestos de sonda En ciertos aspectos, un compuesto de la presente invención puede ser unido a una porción detectable para formar un compuesto de sonda. En un aspecto, un compuesto de sonda de la invención comprende un inhibidor de proteína cinasa irreversible de la fórmula I, como el descrito en la presente, una porción detectable y una porción de unión que fija el inhibidor a la porción detectable.
En algunas modalidades, estos compuestos de sonda de la presente invención comprenden un compuesto de la fórmula I proporcionado unido á una porción detectable, R1, puede ser una porción de unión bivalente, -T- . La porción de unión puede ser fijada a un compuesto de la fórmula I por medio del Anillo A, Anillo B o R1. Alguien de capacidad ordinaria en la técnica apreciará que cuando se une una porción de unión a R1, R1 es un grupo de cabeza bivalente indicado como R1' . En ciertas modalidades, un compuesto de sonda proporcionado se selecciona de cualquiera de las fórmulas V, VI o VII V R1 N II N N H VI N ^-^ H VII, en donde cada uno del Anillo A, Anillo B, R1, m, p, Rx, Ry, Rv, W1, y W2 es como se definió arriba con respecto a la fórmula I, y se describen en clases y subclases en la presente, R1' es un grupo de cabeza bivalente, T es una porción de unión bivalente y Rb es una porción detectable.
En algunas modalidades, R*1 es una porción detectable seleccionada de un marcador primario o un marcador secundario. En ciertas modalidades, Rfc es una porción detectable seleccionada de un marcador fluorescente (por ejemplo, un colorante fluorescente o un fluoróforo) , una etiqueta de masa, un grupo quimioluminispente , un cromóforo, un grupo denso en electrones o un agente de transferencia de energía.
Según se usa en la presente, el término "porción detectable" se usa indistintamente con el término "marcador" y "reportero" y se refiere a cualquier porción capaz de ser detectada, por ejemplo, marcadores primarios y marcadores secundarios . Una presencia de una porción detectable puede medirse usando métodos para cuantificar (en términos absolutos, aproximados o relativos) la porción detectable en un sistema bajo estudio. En algunas modalidades, estos métodos se conocen bien por alguien de capacidad ordinaria en la técnica e incluyen cualquier método que cuantifique una porción reportera (por ejemplo, un marcador, un colorante, un fotoentrelazador, un compuesto citotóxico, un fármaco, un marcador de afinidad, un marcador de fotoafinidad, un compuesto reactivo, un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, un biomaterial, una nanopartícula , un marcador centrífugo, un fluoróforo, una porción que contenga metal, una porción radioactiva, puntos cuánticos, un grupo funcional novedoso, un grupo que interactúa covalente o no covalentemente con otras moléculas, una porción fotoenj aulada, una porción excitable por radiación actínica, un ligando, una porción fotoisomerizable , biotina, un análogo de biotina (por ejemplo, sulfóxido de biotina) , una porción que incorpore un átomo pesado, un grupo químicamente cortable, un grupo fotocortable , un agente activo en redox, una porción marcada isotópicamente, una sonda biofísica, un grupo fosforescente, un grupo quimioluminiscente , un grupo denso en electrones, un grupo magnético, un grupo intercalador , un cromóforo, un agente de transferencia de energía, un agente biológicamente activo, un marcador detectable y cualquier combinación de los anteriores) .
Los marcadores primarios, tales como radioisótopos (por ejemplo, tritio, 32P, 33P, 35S, 14C, 123I, 124I, 125I, o 131I) , marcadores de masa incluyendo, pero no limitados a, isótopos estables (por ejemplo, 13C, 2H, 170, 180, 15N, 19F, y 127I) , isótopos emisores de positrones (por ejemplo, X1C, 18F, 13N, 124I y 150) , y marcadores fluorescentes son grupos reporteros generadores de señales que pueden ser detectados sin modificaciones adicionales. Las porciones detectables pueden ser analizadas mediante métodos que incluyen, pero no están limitados a fluorescencia, tomografía de emisión de positrones, y formación de imágenes médicas SPECT, quimioluminiscencia, resonancia por centrifugación de electrones, espectroscopia de absorbancia ultravioleta/visible, espectrometría de masas, resonancia magnética nuclear, resonancia magnética, citometría de flujo, autorradiografía , conteo por centelleo, fosfoformación de imágenes y métodos electroquímicos.
. - El término "marcador secundario" según se usa en la presente se refiere a porciones tales como biotina y varios antígenos de proteína que requieren la presencia de un segundo intermediario para la producción de una señal detectable. Para biotina, el intermediario secundario puede incluir conjugados de estreptavidina-enzima . Para marcadores antigénicos, los intermediarios secundarios pueden incluir conjugados anticuerpo-enzima. Algunos grupos fluorescentes actúan como marcadores secundarios debido a que transfieren la energía a otro grupo en el proceso de transferencia de energía por resonancia fluorescente no radioactiva (F ET, por sus siglas en Inglés) , y el segundo grupo produce la señal detectada .
Los términos "marcador fluorescente" , "colorante fluorescente" y "fluoróforo" según se usan en la presente se refieren a porciones que absorben energía de luz a una longitud de onda de excitación definida y emiten energía de luz a una longitud de onda diferente. Ejemplos de marcadores fluorescentes incluyen, pero no están limitados a: colorantes Alexa Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660 y Alexa Fluor 680), AMCA, AMCA-S, colorantes BODIPY (BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BODIPY TR, BODIPY 493/503, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665) , Carboxirrodamina 6G, carboxi-X-rodamina (ROX) , Azul Cascada, Amarillo Cascada, Cumarina 343, colorantes de cianina (Cy3, Cy5 , Cy3.5 , Cy5.5), Dansilo, Dapoxilo, Dialquilaminocumarina, 4 ' , 5 ' -dicloro-2 ' , 7 ' -dimetoxi-fluoresceína . DM-NERF, eosina, eritrosina, fluoresceína, FAM, hidroxicumarina, colorantes IR (IRD40, IRD 700, IRD 800) , JOE, lisamina rodamina B, Azul Marina, metoxicumarina, naf ofluoresceína, Verde Oregon 488, Verde Oregon 500, Verde Oregon 514, Azul Pacífico, PyMPO, pireno, rodamina B, rodamina 6G, verde rodamina, rojo rodamina, verde Rhodol , 2', 4', 5', 7' -te ra-bromosulfon- fluoresceína, tetrametil- rodamina (TMR) , carboxitetrametilrodamina (TAMRA) , Rojo Texas, Rojo Texas-X, 5 ( 6 ) -carboxifluoresceína , 2,7-diclorofluoresceína, N, N-bis (2 , 4 , 6 -trimetilfenil) - 3 , 4 : 9 , 10-perilenbis (dicarboximida, HPTS, etil eosina, DY-490XL MegaStokes, DY-485XL MegaStokes, Verde Adirondack 520, ATTO 465, ATTO 488, ATTO 495, YOYO- 1 , 5 -FAM, BCECF, diclorofluoresceína , rodamina 110, rodamina 123, YO-PRO-1, verde SYTOX, verde de sodio, verde SYBR 1, Alexa Fluor 500, FITC, Fluo-3, fluo-4, fluoro-esmeralda, YoYo-1 ssADN, YoYo-1 dsADN, YoYo-1, SYTO, RNASelect, verde Diversa-FP, verde Dragón, EvaGreen, Verde Surf EX, verde Espectrum, NuroTrace 500525, NBD-X, verde MitoTracker FM, verde LysoTracker DND-26, CBQCA, PA-GFP (post-activación) , WEGFP (post-activación) , FIASH-CCXXCC, verde Azami monomérico, verde Azami, proteína verde fluorescente (GFP) , EGFP (Campbell Tsien 2003) , EGFP (Patterson 2001), verde Kaede, 7-bencilamino-4-nitrobenz-2-oxa- 1 , 3 -diazol , Bexl , doxorrubicina, verde Lumio y SuperGlo GFP.
El término "marcador de masa" según se usa en la presente se refiere a cualquier porción que sea capaz de ser detectada únicamente en virtud de su masa usando técnicas de detección por espectrometría de masas (MS, por sus siglas en Inglés) . Ejemplos de marcadores de masa incluyen marcadores de liberación de electróforos tales como ácido N- [3 - [4 ' - [ (p-metoxitetrafluorobencil ) oxi] fenil] -3 -metilgliceronil] isonipecótico, acetofenona de 4'- [2, 3,5,6-tetrafluoro-4 - (pentafluorofenoxil )] metilo y sus derivados . La síntesis y utilidad de estos marcadores de masa se describe en las patentes de Estados Unidos 4,650,750, 4,709,016, 5,360,8191, 5,516,931, 5,602,273, 5,604,104, 5,610,020 y 5,650,270. Otros ejemplos de marcadores de masa incluyen, pero no están limitados a, nucleótidos, didesoxinucleó idos , oligonucleótidos de composición y longitud y base variable, oligopépt idos , oligosacáridos y otros polímeros sintéticos de longitud variable y composición monomérica. Una gran variedad de moléculas orgánicas, tanto neutras como cargadas (biomoléculas o compuestos sintéticos) de un intervalo de masa adecuado (100-2,000 Daltons) también se pueden usar como marcadores de masa. Isótopos estables (por ejemplo, 13C, 2H, 110, 180 y 15N) también se pueden usar como marcadores de masa.
El término "grupo quimioluminiscente" , según se usa en la presente, se refiere a un grupo que emite luz como resultado de una reacción química sin la adición de calor. A manera de ejemplo, luminol ( 5 -amino-2 , 3 -dihidro-1 , 4 -ftalazinodiona) reacciona con oxidantes tales como peróxido de hidrógeno (H202) en presencia de una base y un catalizador de metal para producir un producto en estado excitado (3-aminoftalato, 3 -APA) .
El término "cromóforo" , según se usa en la presente, se refiere a una molécula que absorbe luz de longitudes de onda visibles, longitudes de onda UV o longitudes de onda IR.
El término "colorante" , según se usa en la presente, se refiere a una sustancia colorante soluble que contiene un cromóforo.
El término "grupo denso en electrones" , según se usa en la presente, se refiere a un grupo que dispersa electrones cuando es irradiado con un haz de electrones.
Estos grupos incluyen, pero no están limitados a, molibdato de amonio, subnitrato de bismuto, yoduro de cadmio, carbohidrazida , cloruro férrico hexahidratado, hexametilenfeetramina, tricloruro de indio anhidro, nitrato de lantano, acetato de plomo trihidratado, citrato de plomo trihidratado, nitrato de plomo, ácido peryódico, ácido fosfomolíbdico, ácido fosfotúngstico, ferricianuro de potasio, ferrocianuro de potasio, rojo de rutenio, nitrato de plata, proteinato de plata (ensayo Ag: 8.0-8.5%) "fuerte", tetrafenilporfina de plata (S-TPPS) , cloroaurato de sodio, tungstato de sodio, nitrato de talio, tiosemicarbazida (TSC) , acetato de uranilo, nitrato de uranilo y sulfato de vanadilo.
El término "agente de transferencia de energía" , según se usa en la presente, se refiere a una molécula que ya sea dona o acepta energía de otra molécula. A manera de ejemplo únicamente, la transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) es un proceso de acoplamiento dipolo-diplo mediante el cual energía en estado excitado de una molécula donadora de fluorescencia se transfiere no radioactivamente a una molécula receptora no excitada que después emite fluorescentemente la energía donada a una longitud de onda más larga.
El término "porción que incorpora un átomo pesado" , según se usa en la presente, se refiere a un grupo que incorpora unión de átomo que normalmente es más pesado que el carbono. En algunas modalidades, estos iones o átomos incluyen, pero no están limitados a, silicio, tungsteno, oro, plomo y uranio.
El término "marcador de fotoafinidad" , según se usa en la presente, se refiere a un marcador con un grupo, el cual, después de la exposición a luz, forma un enlace con una molécula para la cual el marcador tiene una afinidad.
El término "porción fotoenjaulada" , según se usa en la presente, se refiere a un grupo que, después de la iluminación a ciertas longitudes de onda, se une de manera covalente o no covalente a otros iones o moléculas .
El término "porción fotoisomerizable" , según se usa en la presente, se refiere a un grupo en el que después de la iluminación con luz cambia de una forma isomérica a otra.
El término "porción radioactiva", según se usa en la presente, se refiere a un grupo cuyos núcleos dan origen espontáneamente a radiación nuclear, tal como partículas alfa, beta o gama; en donde las partículas alfa son núcleos de helio, las partículas beta son electrones y las partículas gama son fotones de alta energía.
El término "marcador centrífugo", según se usa en la presente, se refiere a moléculas que contienen un átomo o grupo de átomos de exhiben una centrifugación electrónica no apareada (es decir, un grupo paramagnético estable) que en algunas modalidades son detectadas por espectroscopia de resonancia de centrifugación de electrones y en otras modalidades son unidas a otra molécula. Estas moléculas marcadoras centrífugas incluyen, pero no están limitadas a, radicales nitrilo y nitróxidos y en algunas modalidades son marcadores centrífugos individuales o marcadores centrífugos dobles.
El término "puntos cuánticos" , según se usa en la presente, se refiere a nanocristales semiconductores coloidales que en algunas modalidades son detectados en la escala casi infrarroja y tienen campos cuánticos extremadamente altos (es decir, muy brillantes después de una modesta iluminación) .
Alguien de capacidad ordinaria en la técnica reconocerá que una porción detectable puede ser unida a un compuesto proporcionado mediante un sustituyente adecuado. Según se usa en la presente, el término "sustituyente adecuado" se refiere a una porción que es capaz de la fijación covalente a una porción detectable. Estas porciones se conocen bien por alguien de capacidad ordinaria en la técnica e incluyen grupos que contienen, por ejemplo, una porción carboxilato, una porción amino, una porción tiol o una porción hidroxilo, por citar sólo unos cuantos. Se apreciará que estas porciones pueden ser unidas directamente a un compuesto proporcionado o mediante una porción de unión, tal como una cadena de hidrocarburos saturada o insaturada.
En algunas modalidades, las porciones detectables son unidas a un compuesto proporcionado mediante química simplificada (click chemistry) . En algunas modalidades, estas porciones son unidas mediante una 1, 3-cicloadición de una azida con un alquino, opcionalmente en presencia de un catalizador de cobre. Los métodos para usar química simplificada se conocen en la técnica e incluyen aquellos descritos por Rostovtsev et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 2596-99 y Sun et al., Bioconjugate Chem. , 2006, 17, 52-57. En algunas modalidades, una porción inhibidora lista para química simplificada ("click ready") es provista y hecha reaccionar con una porción -T-Rfc lista para química simplificada. Según se usa en la presente, "lista para química simplificada" {click ready) se refiere a una porción que contiene una azida o alquino para usarse en una reacción de química simplificada. En algunas modalidades, la porción inhibidora lista para química simplificada comprende una azida. En ciertas modalidades, la porción -T-Rfc lista para química simplificada comprende un ciclooctino restringido para usarse en una reacción de química simplificada libre de cobre (por ejemplo, usando métodos descritos en Baskin et al., Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 2007, 104, 16793-16797).
En ciertas modalidades, la porción inhibidora lista para química simplificada tiene la fórmula: en donde Anillo A, Anillo B, W, Ry, Rx y m son como se definió arriba con respecto a la fórmula I y se describe en la presente .
En otras modalidades, la porción inhibidora lista para química simplificada tiene la fórmula: en donde Anillo A, Anillo B, W, Ry, Rx, ra y R1 son como se definió arriba con respecto a la fórmula I y se describe en la presente.
Los inhibidores listos para química simplificada ejemplares incluyen: En algunas modalidades, la porción -T-Rfc lista para química simplificada Una reacción ejemplar en la cual una porción inhibidora lista para química simplificada y una porción -T-Rfc lista para química simplificada se unen a través de una [2+3] -cicloadición es la siguiente: NH YO En algunas modalidades, la porción detectable, Rc, se selecciona de un marcador, un colorante, un fotoentrelazador, un compuesto citotóxico, un fármaco, un marcador de afinidad, un marcador de fotoafinidad, un compuesto reactivo, un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, un biomaterial, una nanopartícula , un marcador centrífugo, un fluoróforo, una porción que contiene metal, una porción radioactiva, puntos cuánticos, un grupo funcional novedoso, un grupo que interactúa covalente o no covalentemente con otras moléculas, una porción fotoenj aulada , una porción excitable por radiación actínica, un ligando, una porción fotoisomerizable , biotina, un análogo de biotina (por ejemplo, sulfóxido de biotina) , una porción que incorpora un átomo pesado, un grupo químicamente cortable, un grupo fotocortable , un agente redox-activo, una porción marcada isotópicamente, una sonda biofísica, un grupo fosforescente, un grupo quimioluminiscente , un grupo denso en electrones, uh grupo magnético, un grupo intercalador, un cromóforo, un agente de transferencia de energía, un agente biológicamente activo, un marcador detectable, o una combinación de los mismos.
En algunas modalidades, Rfc es biotina o un análogo de la misma. En ciertas modalidades, Rfc es biotina. En ciertas otras modalidades, Rfc es sulfóxido de biotina.
En otra modalidad, Rfc es un fluoróforo. En una modalidad más, el fluoróforo se selecciona de colorantes Alexa Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660 y Alexa Fluor 680), AMCA, AMCA-S, colorantes BODIPY (BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BODIPY TR, BODIPY 493/503, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665), Carboxirrodamina 6G, carboxi-X-rodamina (ROX) , Azul Cascada, Amarillo Cascada, Cumarina 343, colorantes de cianina (Cy3, Cy5 , Cy3.5 , Cy5.5), Dansilo, Dapoxilo, Dialquilaminocumarina, 4 ' , 5 ' -dicloro-2 ' , 7 ' -dimetoxi - fluoresceína . DM-NERF, eosina, eritrosina, fluoresceína, FAM, hidroxicumarina , colorantes IR (IRD40, IRD 700, IRD 800) , JOE, lisamina rodamina B, Azul Marino, me oxicumarina, naftofluoresceína, Verde Oregon 488, Verde Oregon 500, Verde Oregon 514, Azul Pacífico, PyMPO, pireno, rodamina B, rodamina 6G, verde rodamina, rojo rodamina, verde Rhodol , 2', 4', 5', 7' -tetra-bromosulfon-fluoresceína, tetrametil-rodamina (TMR) , carboxitetrametilrodamina (TAMRA) , Rojo Texas, Rojo Texas-X, 5 (6) -carboxifluoresceína, 2,7-diclorofluoresceína, N,N-bis (2 , 4 , 6-trimetilfenil) -3 , 4 : 9 , 10-perilenbis (dicarboximida, HPTS, etil eosina, DY-490XL MegaStokes, DY-485XL MegaStokes, Verde Adirondack 520, ATTO 465, ATTO 488, ATTO 495, YOYO-1,5-FAM, BCECF, diclorofluoresceína , rodamina 110, rodamina 123, YO-PRO-1, verde SYTOX, verde de sodio, verde SYBR 1, Alexa Fluor 500, FITC, Fluo-3, fluo-4, fluoro-esmeralda , YoYo-1 ssADN, YoYo-1 dsADN, YoYo-1, SYTO, RNASelect, verde Diversa-FP, verde Dragón, EvaGreen, Verde Surf EX, verde Espectrum, NuroTrace 500525, NBD-X, verde MitoTracker FM, verde LysoTracker DND-26, CBQCA, PA-GFP (post-activación) , WEGFP (post-activación) , FIASH-CCXXCC, verde Azami monomérico, verde Azami , proteína verde fluorescente (GFP) , EGFP (Campbell Tsien 2003), EGFP (Patterson 2001) , verde Kaede, 7-bencilamino-4-nitrobenz-2-oxa- 1 , 3 -diazol , Bexl , doxorrubicina, verde Lumio y SuperGlo GFP.
Como se describió generalmente arriba, un compuesto de sonda proporcionado comprende una porción de unión, -T-, que fije el inhibidor irreversible a la porción detectable. Según se usa en la presente, el término "unión" o "porción de unión" sé refiere a cualquier separador químico bivalente incluyendo, pero no limitado a, un enlace covalente, un polímero, un polímero hidrosoluble , alquilo sustituido opcionalmente , heteroalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterociclilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilalquenilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, heteroarilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilalquenilalquilo sustituido opcionalmente, una porción de amida sustituida opcionalmente, una porción de éter, una porción de cetona, una porción de éster, una porción de carbamato sustituido opcionalmente, una porción hidrazona sustituida opcionalmente, una porción de hidrazina sustituida opcionalmente, una porción de oxima sustituida opcionalmente, una porción de disulfuro, una porción de imina sustituida opcionalmente, una porción de sulfonamida sustituida opcionalmente, una porción de sulfona, una porción de sulfóxido, una porción de tioéter o cualquier combinación de las mismas.
En algunas modalidades, la porción de unión, -T- se selecciona de un enlace covalente, un polímero, un polímero hidrosoluble , alquilo sustituido opcionalmente , heteroalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilalquilo sustituido opcionalmente, heterocicloalquilalquenilo sustituido opcionalmente, arilo sustituido opcionalmente, heteroarilo sustituido opcionalmente y heterocicloalquilalquenilalquilo sustituido opcionalmente. En algunas modalidades, la porción de unión es un heterociclo sustituido opcionalmente. En otras modalidades, el heterociclo se selecciona de aziridina, oxirano, episulfuro, azetidina, oxetano, pirrolina, tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, pirrolidina, pirazol, pirrol, imidazol, triazol, tetrazol, oxazol, isoxazol, oxireno, tiazol, isotiazol, ditiolano, furano, tiofeno, piperidina, tetrahidropirano, tiano, piridina, pirano, tiapirano, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, oxazina, tiazina, ditiano y dioxano . En algunas modalidades, el heterociclo es piperazina. En modalidades adicionales, la porción de unión es sustituida opcionalmente con halógeno, CN, -OH, -N02, alquilo, S (O) y S(0)2- En otras modalidades, el polímero hidrosoluble es un grupo PEG.
En otras modalidades, la porción de unión proporciona suficiente separación espacial entre la porción detectable y la porción inhibidora de proteína cinasa. En modalidades adicionales, la porción de unión es estable. En una modalidad más, la porción de unión no afecta sustancialmente la respuesta de la porción detectable. En otras' modalidades, la porción de unión proporciona estabilidad química al compuesto de sonda. En modalidades adicionales, la porción de unión proporciona suficiente solubilidad al compuesto de sonda.
En algunas modalidades, una porción de unión, -T-, tal como un polímero hidrosoluble se acopla en un extremo a un inhibidor irreversible proporcionado y a una porción detectable, Rfc, en el otro extremo. En otras modalidades, un polímero hidrosoluble es acoplado por medio de un grupo funcional o sustituyente del inhibidor irreversible proporcionado. En modalidades adicionales, un polímero hidrosoluble se acopla mediante un grupo o sustituyente funcional de la porción reportera.
En algunas modalidades, ejemplos de polímeros hidrófilos, para usarse en la porción de unión -T- , incluyen pero no están limitados a: éteres polialquílicos y análogos bloqueados en los extremos con alcoxi de los mismos (por ejemplo, polioxietilenglicol , polioxietilen/proppilenglicol, y metoxi o análogos etoxi -bloqueados de los mismos, polioxietilenglicol, éste último se conoce también como polietilenglicol o PEG) ; polivinilpirrolidonas ; éteres polivinilalquílicos ; polioxazolinas , polialquil oxazolinas y polihidroxialquil oxazolinas; poliacrilamidas , polialquil acrilamidas y polihidroxialquil acrilamidas (por ejemplo, polihidroxipropilmetacrilamida y derivados de los mismos) ; acrilatos de polihidroxialquilo ,- ácidos polisiálicos y análogos de los mismos, secuencias péptidas hidrófilas; polisacáridos y sus derivados, incluyendo dextrano y derivados de dextrano, por ejemplo, carboximetildextrano, sulfatos de dextrano, aminodextrano; celulosa y sus derivados, por ejemplo, carboximetilcelulosa ; hidroxialquilcelulosas ; quitina y sus derivados, por ejemplo, quitosan, quitosan succinilo, carboximetilquitina , carboximetilquitosan; ácido hialurónico y sus derivados; almidones; alginatos; sulfato de condroitina ; albúmina; pululano y carboximetil pululano; poliaminoácidos y derivados de los mismos, por ejemplo, ácidos poliglutámicos , polilisinas, . ácidos poliaspárticos , poliaspartamidas ; copolímeros de anhídrido maleico tales como: copolímero de anhídrido maleico de estireno, copolímero de anhídrido maleico de éter diviniletílico; alcoholes polivinílieos ; copolímeros de los mismos; terpolímeros de los mismos; mezclas de los mismos, y derivados de los anteriores. En otras modalidades, un polímero hidrosoluble es cualquier forma estructural incluyendo pero no limitada a lineal, de horquilla o ramificada. En modalidades adicionales, los derivados de polímeros multi -funcionales incluyen, pero no están limitados a, polímeros lineales que tienen dos términos, cada término siendo unido a un grupo funcional que es igual o diferente.
En algunas modalidades, un polímero hidrosoluble comprende una porción de poli (etilenglicol ) . En modalidades adicionales, el peso molecular del polímero es de una amplia gama, incluyendo pero no limitado a, entre alrededor de 100 Da y aproximadamente 100,000 Da o más. En modalidades adicionales, el peso molecular del polímero es de entre aproximadamente 100 Da y alrededor de 100,000 Da, incluyendo pero no limitado a, alrededor de 100,000 Da, aproximadamente 95,000 Da, alrededor de 90,000 Da, aproximadamente 85,000 Da, alrededor de 80,000 Da, aproximadamente 75,000 Da, alrededor de 70,000 Da, aproximadamente 65,000 Da,, alrededor de 60,000 Da, aproximadamente 55, 000 Da, alrededor de 50, 000 Da, aproximadamente 45, 000 Da, alrededor de 40, 000 Da, aproximadamente 35,000 Da , 30,000 Da, alrededor de 25,000 Da, aproximadamente 20, 000 Da, alrededor de 15, 000 Da, aproximadamente 10, 000 Da, alrededor de 9, 000 Da, aproximadamente 8 , 000 Da, alrededor de 7, 000 Da, aproximadamente 6 , 000 Da, . alrededor de 5, 000 Da, aproximadamente 4 , 000 Da, alrededor de 3, 000 Da, aproximadamente 2 , 000 Da, alrededor de 1, 000 Da, aproximadamente 900 da, alrededor de 800 Da, aproximadamente 700 Da, alrededor de 600 Da, aproximadamente 500 Da, alrededor de 400 Da, aproximadamente 30 Da, alrededor de 200 Da, y aproximadamente 100 Da. En algunas modalidades, el peso molecular del polímero es de entre alrededor de 100 Da y 50,000 Da. En algunas modalidades, el peso molecular del polímero es de entre alrededor de 100 Da y 40,000 Da. En algunas modalidades, el peso molecular del polímero es de entre alrededor de 1,000 Da y 40,000 Da. En algunas modalidades, el peso molecular del polímero es de entre alrededor de 5,000 Da y 40,000 Da. En algunas modalidades, el peso molecular del polímero es de entre alrededor de 10,000 y 40,000 Da. En algunas modalidades, la molécula de poli (etilenglicol ) es un polímero ramificado. En modalidades adicionales, el peso molecular del PEG de cadena ramificada es de entre aproximadamente 1,000 Da y alrededor de 100,000 Da, incluyendo pero no limitados a, aproximadamente 100,000 Da, alrededor de 95,000 Da, aproximadamente 90,000 Da, alrededor de 85,000 Da, aproximadamente 80,000 Da, alrededor de 75,000 Da, aproximadamente 70,000 Da, alrededor de 65,000 Da, aproximadamente 60, 000 Da , alrededor de 55, 000 Da, aproximadamente 50, 000 Da, alrededor de 45, 000 Da, aproximadamente 40, 000 Da, alrededor de 35, 000 Da, aproximadamente 30,000 Da, alrededor de 25,000 Da, aproximadamente 20, 000 Da, alrededor de 15,000 Da, aproximadamente 10 , 000 Da, alrededor de 9, 000 Da, aproximadamente 8,000 Da, alrededor de 7,000 Da, aproximadamente 6, 000 Da, alrededor de 5,000 Da, aproximadamente 4, 000 Da, alrededor de 3 , 000 Da, aproximadamente 2,000 Da y alrededor de 1, 000 Da. . En algunas modalidades, el peso molecular de un PEG de cadena ramificada es de entre alrededor de 1,000 Da y aproximadamente 50,000 Da. En algunas modalidades, el peso molecular de un PEG de cadena ramificada es de entre aproximadamente 1,000 Da y alrededor de 40,000 Da. En algunas modalidades, el peso molecular de un PEG de cadena ramificada es de entre alrededor de 5,000 Da y aproximadamente 40,000 Da. En algunas modalidades, el peso molecular de un PEG de cadena ramificada es de entre aproximadamente 5,000 Da y alrededor de 20,000 Da. La anterior lista para estructuras de base sustancialmente solubles en agua por ningún motivo es exhaustiva y simplemente es ilustrativa, y en algunas modalidades,, materiales poliméricos que tengan las cualidades descritas arriba son adecuados para usarse en los métodos y composiciones descritos en la presente.
Alguien de capacidad ordinaria en la técnica apreciará que cuando -T-R* está unido a un compuesto de la fórmula I-a o I-b por medio del grupo de cabeza R1, entonces la porción de unión resultante comprende el grupo de cabeza R1. Según se usa en la presente, la frase "comprende un grupo de cabeza" significa que la porción de unión formada por - R1 ' -T- de la fórmula V-a o V-b es ya sea sustituida con un grupo de cabeza o tiene a este grupo de cabeza incorporado dentro de la porción de unión. Por ejemplo, la porción de unión formada por -R1'-T- puede ser sustituida con un grupo de cabeza -L-Y, en donde estos grupos son como se describe en la presente. Como alternativa, la porción de unión formada por -R1' -T- tiene las características adecuadas de un grupo de cabeza incorporado dentro de la porción de unión. Por ejemplo, la porción de unión formada por -R1' -T- puede incluir una o más unidades de insaturación y sustituyentes y/o heteroátomos opcionales los cuales, en combinación, se traduzcan en una porción que sea capaz de modificar covalentemente una proteína cinasa de acuerdo con la presente invención. Esta porción de unión -R1-T- se ilustra abajo.
En algunas modalidades, una unidad metileno de una porción de unión -R1' -T- es reemplazada por una porción -L- Y' - bivalente para proporcionar un compuesto de la fórmula V- c : V-c en donde cada uno de anillo A, anillo B, m, p, Rx, Ry, Rv, W1, W2, T, L, Y' y Rc es como se definió arriba y se describe en clases y subclases en la presente y Y' es una versión bivalente del grupo Y definido arriba y descrito en clases y subclases en la presente.
En algunas modalidades, una unidad metileno de una porción de unión -R1'-T- es reemplazada por una porción -L (Y) - para proporcionar un compuesto de la fórmula V-d: V-d en donde cada uno de Anillo A, Anillo B, m, p, Rx, Ry, Rv, W1, W2 , T, L, Y y Rfc es como se definió arriba y se describe en clases y subclases en la presente.
En algunas modalidades, una porción de unión es sustituida con una porción L-Y para proporcionar un compuesto de la fórmula V-e: Ry X £B)-(RX)™ H V-e en donde cada uno de Anillo A, Anillo B, m, p, R , Ry, Rv, W1 , W2, T, L, Y y R1 es como se definió arriba y descrito en clases y subclases en la presente.
En ciertas modalidades, la porción de unión, -T-, tiene una de las siguientes estructuras O O H H En algunas modalidades, la porción de unión, -T-, tiene la siguiente estructura: I 0 o X v \/ N' ^ ^ N' v "?' ^ ^ O' H H H En otras modalidades, la porción de unión, ¦T-, tiene la siguiente estructura: ¦¦o- En ciertas otras modalidades, la porción de unión, -T-, tiene la siguiente estructura: HOOC En otras modalidades más, la porción de unión, -T-, tiene la siguiente estructura: H En algunas modalidades, la porción de unión, tiene la siguiente estructura: O En algunas modalidades, -T-R' tiene la siguiente estructura ,N.
En ciertas modalidades, -T-Rt tiene la siguiente estructura: _N OMe ~0 HN ?O En algunas modalidades, un compuesto de sonda de la fórmula V, VI o VII se deriva de cualquier compuesto de la tabla 5.
En ciertas modalidades, el compuesto de sonda es una de las siguientes estructuras: 1-99 202 203 disponibles comercialmente . Por ejemplo, numerosos reactivos de biotinilación están disponibles, por ejemplo, de Thermo Scientific con longitudes de unión variables. Estos reactivos incluyen NHS-PEG4-Biotina y NHS-PEG12-Biotina .
En algunas modalidades, estructuras de sonda análogas a las ejemplificadas arriba se preparan usando porciones inhibidoras listas para química simplificada y porciones -T-R*1 listas para química simplificada, como se describe en la presente.
En algunas modalidades, un compuesto de sonda proporcionado modifica covalentemente una conformación fosforilada de una proteína cinasa. En un aspecto, la conformación fosforilada de la proteína cinasa es ya sea una forma activa o inactiva de la proteína cinasa. En ciertas modalidades, la conformación fosforilada de la proteína cinasa es una forma activa de la cinasa. En ciertas modalidades, el compuesto de sonda es permeable a células.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para determinar la ocupación de una proteína cinasa por un inhibidor irreversible proporcionado (es decir, un compuesto de la fórmula I) en un paciente, que comprende proporcionar uno o más tejidos, tipos de células o un lisado de los mismos, obtenido de un paciente a quien se le administró por lo menos una dosis de un compuesto del inhibidor irreversible, poner en contacto la célula, tipo de célula o lisado del mismo con un compuesto de sonda (es decir, un compuesto de la fórmula V, VI o VII) para modificar de manera covalente al menos una proteína cinasa presente en el lisado y medir la cantidad de la proteína cinasa modificada covalentemente por el compuesto de sonda para determinar la ocupación de la proteína cinasa por el compuesto de la fórmula I en comparación con la ocupación de la proteína cinasa por el compuesto de sonda. En ciertas modalidades, el método comprende además la etapa de ajustar la dosis del compuesto de la fórmula I para incrementar la ocupación de la proteína cinasa. En ciertas otras modalidades, el método comprende además la etapa de ajustar la dosis del compuesto de la fórmula I para reducir la ocupación de la proteína cinasa.
Según se usa en la presente, los términos "ocupación" u "ocupar" se refieren al grado al cual una proteína cinasa es modificada por un compuesto inhibidor covalente proporcionado. Alguien de capacidad ordinaria en la técnica apreciaría que es deseable administrar la dosis más baja posible para lograr la ocupación eficaz deseada de la proteína cinasa.
En algunas modalidades, la proteína cinasa que será modificada es BTK. En otras modalidades, la proteína cinasa que será modificada es EGFR. En ciertas modalidades, la proteína cinasa es JAK. En ciertas otras modalidades, la proteína cinasa es una o más de ErbBl, ErbB2 o ErbB4. En otras modalidades más, la proteína cinasa es TEC, ITK o BMX .
En algunas modalidades, el compuesto de sonda comprende el inhibidor irreversible para el cual se está determinando la ocupación.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para evaluar la eficacia de un inhibidor irreversible proporcionado en un mamífero, que comprende administrar un inhibidor irreversible proporcionado al mamífero, administrar un compuesto de sonda proporcionado a tejidos o células aisladas del mamífero, o un lisado de los mismos, medir la actividad de la porción detectable del compuesto de sonda y comparar la actividad de la porción detectable con una norma.
En otras modalidades, la presente invención proporciona un método para evaluar la farmacodinámica de un inhibidor irreversible proporcionado en un mamífero, que comprende administrar un inhibidor irreversible proporcionado al mamífero, administrar un compuesto de sonda presentado en la presente a uno o más tipos de células, o un lisado de los mismos, aisladas del mamífero, y medir la actividad de la porción detectable del compuesto de sonda en diferentes puntos de tiempo después de la administración del inhibidor.
En otras modalidades más, la presente invención proporciona un método para la marcación in vi tro de una proteína cinasa, que comprende poner en contacto la proteína cinasa con un compuesto de sonda descrito en la presente. En una modalidad, la etapa de poner en contacto comprende incubar la proteína cinasa con un compuesto de sonda presentado en la presente.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para la marcación in vitro de una proteína cinasa, que comprende poner en contacto una o más células o tejidos, o un lisado de los mismos, que expresan la proteína cinasa con un compuesto de sonda descrito en la presente.
En ciertas otras modalidades, la presente invención proporciona un método para detectar una proteína cinasa marcada, que comprende separar proteínas, las proteínas comprenden una proteína cinasa marcada por compuesto de sonda descrito en la presente, mediante electroforesis y detectar el compuesto de sonda por fluorescencia.
En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para evaluar la farmacodinámica de un inhibidor irreversible proporcionado in vitro, que comprende incubar el inhibidor irreversible proporcionado con la proteína cinasa objetivo, añadir el compuesto de sonda presentado en la presente a la proteína cinasa objetivo y determinar la cantidad de objetivo modificado por el compuesto de sonda.
En ciertas modalidades, el compuesto de sonda se detecta por unión a avidina, estreptavidina , neutravidina o captavidina.
En algunas modalidades, la sonda se detecta por Western blot . En otras modalidades, la sonda se detecta por ELISA. En ciertas modalidades, la sonda se detecta por citometría de flujo.
En otras modalidades, la presente invención proporciona un método para sondear el cinoma de inhibidores irreversibles, que comprende incubar uno o más tipos de células, o un lisado de las mismas, con un compuesto de sonda biotinilado para generar proteínas modificadas con una porción de biotina, digerir las proteínas, capturar con avidina o un análogo de la misma, y llevar a cabo LC-MS-MS multidimensional para identificar proteína cinasas modificadas por el compuesto de sonda y los sitios de aducción de las cinasas.
En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para medir la síntesis de proteínas en células, que comprende incubar células con un inhibidor irreversible de la proteína objetivo, formar lisados de las células en puntos de tiempo específicos, e incubar los lisados de células con un compuesto de sonda de la invención para medir la aparición de la proteína libre durante un periodo de tiempo extendido.
En otras modalidades, la presente invención proporciona un método para determinar un programa de dosificación en un mamífero para maximizar la ocupación de una proteína cinasa objetivo, que comprende ensayar uno o más tipos de células, o un lisado de los mismos, aislado del mamífero (derivado de, por ejemplo, esplenocitos , células B periféricas, sangre entera, nodulos linfáticos, tejido intestinal u otros tejidos) de un mamífero a quien se le administró un inhibidor irreversible proporcionado de la fórmula I, en donde la etapa de ensayo comprende poner en contacto el uno o más tejidos, tipos de células o un lisado de los mismos, con un compuesto de sonda proporcionado y medir la cantidad de proteína cinasa modificada covalentemente por el compuesto de sonda.
E emplificación Como se ilustra en los ejemplos a continuación, en ciertas modalidades ejemplares, los compuestos se preparan de acuerdo con los siguientes procedimientos generales. Se apreciará que, aunque los métodos generales ilustran la síntesis de ciertos compuestos de la presente invención, los siguientes métodos generales, y otros métodos conocidos por alguien de capacidad ordinaria en la técnica, pueden aplicarse a todos los compuestos y subclases y especies de cada uno de estos compuestos, como se describe en la presente .
Ejemplo 1 Esquema de reacción la Síntesis de Compuestos de Formula II -a Anillo A-NH2 , DIEA N Cl EtOH o n-BuOH, 60-80 °C ^Cl n-BuOH, 120-150 °C Síntesis de ( 6 -cloro-pirimidin- 4 - il) - (3 -bromo-fenil) -amina : Una solución de 4 , 6 -dicloropirimidina (5 g, 33.6 mmoles) , 3 -bromoanilina (5.8 g, 33.7 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (DIEA) (5.2 g, 40.2 mmoles) en etanol (40 mL) se calentó a 80°C durante 16 hr. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, éter dietílico (35 mL) se le añadió mientras la mezcla se estaba agitando. El producto se precipitó, filtró, lavó con agua y secó para dar 5.9 g (62% rendimiento) de un sólido color claro. MS (m/z) : MH+ = 284, 286, 288.
Síntesis de 3- [6- (3 -bromofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] - fenilamina : Una mezcla de ( 6 - cloro-pirimidin-4 - il ) - (3 -bromo-fenil) -amina (300 mg, 1.1 mmoles) y bencen-1,3-diamina (300mg, 2.75 mmoles) en 3 mL de n-BuOH se calentó en un tubo sellado a 150 °C durante 16 hr . El solvente se removió mediante evaporación al vacío y el producto crudo se purificó mediante cromatografía por vaporización sobre gel de sílice con sistema de solvente EtOAc/DCM para dar 255 mg (65% rendimiento) del compuesto del título como un sólido amarillo. MS (m/z): MH = 356, 358.
Los siguientes compuestos se prepararon en una forma sustancialmente similar a la descrita en el Esquema de reacción la y los Ejemplos anteriores: (a) 3 -Bromoanilina y bencen-1 , 4-diamina dio 4- [6- ( 3 -bromofenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenilamina : MS (m/z) : MH+ = 356, 358. (b) 3 -Cloro-4-fluoroanilina y bencen- 1 , 3 -diamina dio 3- [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina (IR-4) . MS ( m/z) :MH+ = 330, 332. (c) 3 -Metilanilina y bencen- 1 , 3 -diamina dio 3- [6-(3-metilfenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenilamina (IR-5) . MS (m/z) : MH+ = 292. (d) 3-Cloro-4- (3-fluorofenil ) metoxianilina y bencen-1, 3-diamina dio 3 - { 6 - [3 -cloro-4 - ( 3 -fluorofenil ) metoxifenilamino] -pirimidin-4 - ilamino } fenilamina (IR-6) . MS (m/z) : MH÷ = 436, 438.
(E) 3 -Bromoanilina y 3 -etinilanilina dio ??-(3-Bromofenil ) -N6- (3 - e inilfenil ) pirimidin-4 , 6 -diamina (1-12) . MS (M + H+) 365, 367; XH RMN (400 MHz , d6-DMS0) d 9.73 (s, 1H) , 9.60 (s, 1H) , 8.67 (£3, 1H) , 7.95 (t, 1H) , 7.76 (s, 1H) , 7.50 (d, 1H) , 7.46 (d, 1H) , 7.55 (t, 1H) , 7.40 (t, 1H) , 7.20 (d, 1H) , 7.10 (d, 1H) , 6.30 (s, 1H) , 4.25 (s, 1H) ppm. (f) 3-Etinilanilina dio iV4 , i^-bis ( 3 -etinilfenil) pirimidin-4 , 6-diamina (1-11) . MS (M + H+) 311, 312; 1H RMN (400 MHz, d6-DMS0) d 9.24 (s, 2H) , 8.32 (s, 1H) , 7.78 (s, 2H) , 7.52 (d, 2H) , 7.25 (t, 2H) , 7.02 (d, 2H) , 6.13 (s, 1H) , 4.12 (s, 2H) ppm. (g) 4-Fenoxianilina y 2 , 6-diaminopiridina dio 2- [6- (4-fenoxifenil) -aminopirimidin-4 - il] amino-6-aminopiridina (IR-11) MS (m/z) : MH+ = 372, 371. (h) 4-Fenoxianilina y 1 , 4 -diaminobenceno dio 4- [6- (4-fenoxifenil) amino-pirimidin-4 - il] amino-aminobenceno (IR-14) MS (m/z) : H+ = 370 Ejemplo 2 squema de reacción 2a Secuencia A para Síntesis de 3- (6-mono- o disus ituido-amino) pirimidin-4-ilamino) - fenilaminas Boc NRZ H A- H(R2) 120°C N N' H G ^-^XR2 NH2 , X A H Aunque un grupo protector BOC se muestra en el Esquema de reacción 2a anterior y los esquemas siguientes abajo, un experto en la materia reconoce que otros grupos protectores de amina son susceptibles para uso en la preparación de compuestos de la presente invención. En consecuencia, se contempla una variedad de grupos protectores de amina .
Síntesis de 3 - ( 6 -cloropirimidin-4 -i lamino) fenilcarbamato de tert-butilo. 4 , 6 -Dicloropirimidina (1.5 g, 10 mmoles) , 3 -aminofenilcarbamato de tert-butilo (2.1 g, 10 mmoles) y trietilamina (2.2 g, 20 mmoles) se mezclaron en etanol (20 mL) , se calentaron a 80°C durante 16 hr. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y solvente se removió al vacío. El producto crudo gomoso se mezcló con 20 mL de DCM y se agitó a temperatura ambiente para dar un sólido blanquecino, que se filtró y se secó al vacío (1.6 g, 5 mmoles) . MS (m/z) : MH+ = 321, 323.
Síntesis de 3 - ( 6 - [if-me ti 1 -N-f eni lamino ] irimidin - - i lamino ) f eni 1 - carbamato de tert-butilo. Una mezcla de 3 - ( 6 - c lorop i r imidin- 4 -i lamino ) f eni le arbamat o de tert-butilo (1.6g, 5 mmoles) y N-metilanilina (1.07 g, 10 mmoles) se calentó a 120°C en un tubo sellado durante 2 hr . La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se mezcló con 1 mL de NaOH 1N y 5 mL de DCM, se agitó durante 30 min, el producto se filtró y se secó al vacío para dar un producto sólido. MS (m/z) : MH+ = 392.
Síntesis de 3- [6- (N-metil-N-fenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] feni lamina (IR-8) . Una mezcla de 3- (6- [N-metil-iV-fenilamino] pirimidin-4-ilamino) fenilcarbamato de tert-butilo (1.17 g, 3 mmoles) y TFA (50% en DCM, 10 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 4 hr . El solvente de reacción se removió al vacío. El producto crudo se mezcló con 1 mL de NaOH 2N y 5 mL de EtOAc, se agitó durante 30 min, se filtró, y se secó al vacío para dar 0.65g (75%) del compuesto del título, un sólido blanquecino. (IR-8) MS (m/z) : MH+ = 292.
Los siguientes compuestos se prepararon en una forma similar a la descrita en el Esquema de reacción 2a: (a) 4 - Fenoxi f eni 1 amina dio 3- [6- (4-f enoxi f eni 1 amino ) - i rimidin - 4 - i 1 amino] feni lamina . (IR- 7 ) MS ( m/z) : MH+ = 370. (b) 3 - Cloro - 4 - ( 2 - i r i di 1 ) me t oxiani 1 ina dio 3-{ [6- (3-cloro-4- (2-piridil) metoxi fenilamino) -pirimidin- 4 - ilamino] f enilamina . (IR-9) MS (m/z) : MH+ = 419 , 421. (c) 3 - Cloro - 4 - ( ^ - f luorobenc i loxi ) ani 1 ina dio 3- [6- ( 3 - c 1 oro - 4 - { 3 - f luorobenc i loxi } f eni 1 amino ) -pirimidin- 4 - ilamino] - fenil amina. (IR-6) MS (m/z) : M+ = 436 , 438. (d) Anilina dio 3- [6- (fenilamino) -pirimidin- 4 - il] aminof enilamina . (IR-15) MS (m/z) : MH+ = 278.
Esquema de reacción 2b Secuencia B para Síntesis de 3-(6-mono- o disust ituida-aminopirimidin-4 -il ) amino- fenilaminas H corte ácido Síntesis de 3- [6- (4-bromo-2-fluorofenilami.no) -pirimidin-4-il-amino] -fenilamina (IR-17) . Una solución de 4-bromo-2 -fluoroanilina (701 mg, 3.69 mmoles) , diisopropiletilamina (0.70 mL, 4.03 mmoles), y 4,6-dicloropirimidina (500 mg, 3.36 mmoles) en EtOH (10 mL) se calentó en un baño de aceite a 85°C durante 5 d. Cromatografía por vaporización (2% MeOH / CHC13) del residuo dio 380 mg (37%) de N- (4-bromo-2-fluorofenil) -6-cloropirimidin-4 -amina como un sólido amarillo pálido. MS (m/z) : 304, 302.. Una suspensión de N- (4-bromo-2-fluorofenil) -6-cloropirimidin-4-amina (0.37 g, 1.22 mmoles) y 3 -aminofenilcarbamato de tert-butilo (0.28 g, 1.35 mmoles) en n-BuOH (4 mL) se calentó en un baño de aceite a 120-130°C durante 6 h. La mezcla de reacción se enfrió y se concentró para dar 0.68 g de una espuma café. Cromatografía por vaporización dio 0.16 g (28%) 3- (6- [4-bromo-2-fluorofenil] aminopirimidin-4 - il ) aminofenilcarbamato de tert-butilo como un sólido blanco. MS (m/z): (M + H) 476, 474. Se puso 3- (6- [4-bromo-2-fluorofenil] aminopirimidin-4 -il) aminofenilcarbamato de tert-butilo (0.15 g, 0.32 mmoles) en HCl 4M en dioxano (5 mL) . Después de varios minutos se empezó a precipitar un sólido. La mezcla se dejó reposar durante 3 h y se concentró mediante evaporación giratoria. Bicarbonato de sodio acuoso saturado (5 mL) se le añadió y la mezcla se sometió a ultrasonido durante varios minutos. El sólido se recolectó mediante filtración, se lavó con agua (5 mL) , y se secó durante la noche al vacío para dar 0.12 g (100%) de 3- [6- (4-bromo-2-fluorofenilamino) -pirimidin-4-il-amino] -fenilamina (IR-17) como un polvo blanco. S (m/z) : (M + H) 376, 374.
Esquema de reacción 2c Síntesis de fenilaminas 3-(6-mono o disustituida-aminopirimidin-4 - il) amino-N- sustituidas Síntesis de N-3- (6-cloropirimidin-4-ilamino) fenil-N-metilcarbamato de tert-butilo. A una solución en agitación de 3 - ( 6 -cloropirimidin-4 - ilamino) fenilcarbamato de tert-butilo (2.000 g, 6.235 mmoles) en 10 mL de THF a 0°C bajo N2 se le añadió por goteo una solución de bis (trimetilsilil) amida de litio 1.0 M en éter metílico de tert-butilo (6.23 mL, 6.23 mmoles) . La solución amarillo claro se agitó a 0°C durante 30 min después se le añadió yodometano (0.43 mL, 6.892 mmoles, 1.1 eq) . La solución se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante la noche, se concentró, y después se dividió entre EtOAc y solución KH2P04 saturada. El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS0 ) , se filtró, se concentró al vacío y se sometió a cromatografía (gel de sílice, 2% MeOH en CH2C12) para dar 0.904 g de N-3- (6-cloropirimidin-4-ilamino) fenil-N-metilcarbamato de tert-butilo como un sólido blanquecino. MS (m/z) M+l = 335/337 (100/44%), ¾ RMN (CDC13) d 8.48 (s, 1H) , 7.49 (bs, 1H), 7.38 (m, 1H) , 7.24 (m, 1H) , 6.91 (m, 1H) , 6.71 (bs, 1H) , 6.30 (s, 1H) , 3.48 (s, 3H) , 1.53 (s, 9H) .
Síntesis de N-3- [6- (3-Cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenil-N-metilamina (Int-C) . Una solución de N-3- (6-cloropirimidin-4-ilamino) fenil-N-metilcarbamato de tert-butilo (0.486 g, 1.095 mrnoles) en 25 mL de CH2C12 se trató con ácido trifluoroacé ico (5 mL) . La solución se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 2 h, se concentró y se dividió entre CHC13 y solución NH4OH acuosa al 10% . El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró para dar 0.630 g de N-3- [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenil-N-metilamina (Int-C) como un aceite amarillo. MS (m/z) : 344/346 (M+l, 100/68%) . TLC (SÍ02, 10% MeOH en CHC13) : Rf 0.44.
Ejemplo 3 Esquema de reacción 3a Secuencia B para Síntesis de 3 - ( 6 -mono- o disustituida-amino irimidin-4 - il ) amino- fenilaminas H en donde L' es un subconjunto de L, como se definió en la presente, de forma que Y-L'C(0)C1 resulte en formación de los compuestos provistos en donde R1 es -L-Y en donde una unidad de metileno terminal de L se reemplaza con -NHC(O)-.
Síntesis de N- {3 - [6- (3 -bromofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] - fenil} -2 -propenamida (1-1) . Una solución de 3- [6- (3 -bromofenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenilamina (250 mg, 0.7 mmoles) y trietilamina (180 mg, 1.75 mmoles) en 5 mL de THF se agitó a temperatura ambiente. Cloruro de acriloilo (80 mg, 0.9 mmoles) se le añadió en la mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante lh. El solvente se removió mediante evaporación al vacío y el producto crudo se purificó mediante cromatografía por vaporización sobre gel de sílice con sistema de solvente EtOAc/DCM para dar 115mg (40% rendimiento) del compuesto del título como un sólido color claro. MS (m/z) : MH+ = 410, 412. XK RMN (DMSO) : 10.15 (s, 1H) , 9.36 (s, 1H) , 9.28 (s, 1H) , 8.34 (s, 1H) , 8.02 (s, 1H) , 8.00 (s, 1H) , 7.51-7.11 (m, 5H) , 6.47 (dd, 1H, Ji = 10.1 Hz, J2 = 17.0 Hz) , 6.27 (dd, 1H, Jx = 1.9 Hz, J2 = 17.0 Hz), 6.20 (s, 1H) , 5.76 (dd, 1H, J1 = 10.1 Hz5 J2 = 1.9 Hz) ppm .
Los siguientes compuestos fueron preparados en una manera sustancialmente similar a los descritos en el Esquema de reacción 3a: (a) 4- [6- (3 -Bromofenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina y cloruro de acriollo dio W-{4-[6-(3-bromofenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenil } -2 -propenamida (I-93) . S (m/z) : MH+ = 410, 412. XH RMN (D SO) : 10.10 (s, 1H) , 9.33 (s, 1H) , 9.17 (s, 1H) , 8.30 (s, 1H) , 8.02 (s, 1H) , 7.62 (m, 2H) , 7.46 (m, 3H) , 7.22 (t, 1H, J = 8.0 Hz) , 7.10 (d, 1H, J = 8.0 Hz) , 6.43 (dd, 1H, Jx = 10.0 Hz, J2 = 17.0 Hz) , 6.24 (d, 1H, J = 17.0 Hz) , 6.13 (s, 1H) , 5.73 (d, 1H, J = 10.0 Hz) ppm. (b) 3- [6- ( 3 -Bromofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenilamina y cloruro de propionilo dio N- {3- [6- (3-bromofenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenil } -propionamida (IR-3) . MS (m/z) : MH+ = 412, 414. XH RMN (DMSO) : 9.78 (s, 1H) , 9.28 (s, 1H) , 9.16 (s, 1H) , 8.26 (s, 1H) , 7.96 (s, 1H) , 7.76 (s, 1H) , 7.43 (d, 1H, J = 8.2 Hz) , 7.20 (m, 2H) , 7.05 (m, 3H) , 6.12 (s, 1H) , 2.27 (q, 2H, J = 7.6 Hz) , 1.03 (t, 3H, J = 7.6 Hz) ppm. (c) 3- [6- ( 3 -Bromofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenilamina y cloruro de (E) -2 -butenoilo dio (E)-N-{3- [6- (3 -bromofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] -fenil} -2-butenamida (1-8) . MS (m/z) : M+H+ = 424, 426. ¾ RMN (DMSO) : 9.87 (s, 1H) , 9.29 (s, 1H) , 9.18 (s, 1H ) , 8.27 (s, 1H) , 7.96 (s, 1H) , 7.82 (s, 1H) , 7.44 (d, 1H, J = 8.2 Hz) 7.20 (m, 4H) , 7.05 (dd, 1H, Ji = 1.0 Hz, J2 = 7.8 Hz) , 6.75 (m, 1H) , 6.15 (m, 2H) , 1.81 (d, 3H, J = 7.8 Hz) ppm. (d) 3- [6- ( 3 -Cloro-4 - fluorofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenilamina (IR-4) y cloruro de acriollo dio N-{3-[6- ( 3 -cloro-4 - fluorofenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenil}-2-propenamida (1-2) . MS (m/z) : MH+ = 384, 386. XH RMN (DMSO) : 9.29 (s, 1H) , 9.20 (s, 1H) , 8.27 (s, 1H) , 7.93 (m, 1H) , 7.86 (s, 1H) , 7.41 (m, 1H) , 7.25 (m, 5H) , 6.42 (dd, 1H, Jx = 10.1 Hz, J2 = 17.0 Hz) , 6.22 (dd, 1H, Jx = 1.9 Hz, J2 = 17.0 Hz) , 6.09 (d, 1H, Ji = 0.7 Hz) , 5.69 (dd, 1H, J1 = 10.1 Hz, J2 = 1.9 Hz) ppm.
(E) 3- [6- (3 -Metilfenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenilamina y cloruro de acriollo dio N- {3- [6- (3-metilfenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenil } -2 -propenamida (1-4) . MS (m/z) : M+H+ = 346. R RMN (DMSO) : 9.11 (s, 1H) , 9.00 (S, 1H) , 8.21 (s, 1H) , 7.86 (d, 1H, J = 1.7 Hz), 7.31-7.05 (m, 7H) , 6.74 (d, 1H, J = 7.6 Hz) , 6.41 (dd, 1H, J1 = 10.0 Hz, J2 = 17.0 Hz) , 6.20 (dd, 1H, Jx = 2.0 Hz , J2 = 17.0 Hz), 6.14 (s, 1H) , 5.69 (dd, 1H, Ji = 10.1 Hz , J2 = 2.0 Hz) , 2.23 (s, 3H) ppm. (f) 3- {6- [3-Cloro-4- (3-fluorofenil ) metoxifenilamino] -pirimidin-4 - ilamino} fenilamina (IR-6) y cloruro de acriollo dio N- {3- [6- (3-cloro-4- (3-fluorofenil) metoxifenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] enil} -2-propenamida (II-6) . MS (m/z) : M+H+ = 490, 492. 1H RMN (DMSO) : 9.13 (s, 1H) , 9.07 (s, 1H) , 8.22 (s, 1H) , 7.85 (d, 1H, J = 1.5 Hz) , 7.40-7.10 (m, 10H) , 6.41 (dd, 1H, J1 = 10.0 Hz, J2 = 17.0 Hz) , 6.20 (dd, 1H, Ji = 2.0 Hz, J2 = 17.0 Hz) , 6.05 (s, 1H) , 5.70 (dd, 1H, J1 = 10.1 Hz , J2 = 2.0 Hz) , 5.14 (s, 2H) ppm. (g) 4 -Fenoxifenilamina dio 3- [6- (4-fenoxifenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenilamina (IR-7) y cloruro de acriollo dio N- {3- [6- (4 -fenoxifenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenil} -2 propenamida (1-13) . MS (m/z) : MH+ = 424. XH RMN (DMSO) : 9.14 (s, 1H) , 9.10 (s, 1H) , 8.22 (s, 1H ) , 7.89 (s, 1H) , 7.52 (d, 2H, J = 9.0 Hz) , 7.35 - 6.92 (m, 11H) , 6.42 (dd, 1H, Jx = 10.1 Hz , J2 = 16.9 Hz) , 6.22 (dd, 1H, J = 1.9 Hz, J2 = 16.9 Hz) , 6.12 (s, 1H) , 5.70 (dd, 1H, J = 1.9 Hz, J2 = 10.1 Hz) ppm. (h) 3- [6- (N-metil-iV-fenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina (IR-8) y cloruro de acriollo dio iV-{3-[6- (iV-metil-N-fenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenil} -2-propenamida (1-15) : un sólido blanquecino; 70mg; 20%; MS (m/z) : MH+ = 346. H RMN (DMSO) : 10.02 (s, 1H) , 9.00 (s, 1H) , 8.25 (s, 1H ) , 7.85 (s, 1H) , 7.45 - 7.12 (m, 6H) , 6.45 (dd, 1H) , 6.20 (d, 1H) , 5.70 (m, 1H) , 3.35 (s, 3H) ppm. (i) 3-{ [6- (3-Cloro-4- (2-piridil) metoxifenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina (IR-9) y cloruro de acriollo dio N- (3- (6- (3-cloro-4- (piridin- 2 - ilmetoxi ) fenilamino) pirimidin-4 -ilamino) fenil) -2 -propenamida (1-16) . MS (m/z) : MH+ = 473, 475(3: 1) . XH RMN (DMSO) : 10.10 (s, 1H) , 9.17 (s, 1H) , 9.08 (s, 1H ) , 8.55 (m, 1H) , 8.24 (s, 1H) , 7.92 - 7.73 (m, 4H) , 7.57 (d, 1H) , 7.38 - 7.06 (m, 5H) , 6.45 (dd, 1H) , 6.23 (dd, 1H) , 6.08 (s, 1H) , 5.72 (dd, 1H) , 5.20 (s, 2H) ppm. (j) 3- [6- (3-Cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina (IR-4) y cloruro de 1-cianoci lopropancarbonilo dio N- [3- (6- {3-cloro-4-fluorofenilamino}pirimidin-4-il) amino] fenil-1-cianociclopropancarboxamida (1-47) . MS (m/z) : +l = 423/425, H RMN (DMSO-d6) d 10.04 (s, 1H) , 9.18 (s, 1H) , 9.12 (s, 1H) , 8.27 (d, 1H) , 7.88 (s, 1H) , 7.8 (s, 1H) , 7.47-7.16 (m, 9H) , 6.74 (b, 1H) , 6.28 (d, 1H) , 6.1 (s, 1H) , 5.19 (s, 2H) , 3.05 (s, 2H) , 2.18 (s, 6H) . (k) 3- [6- (3-Cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina (IR-4) y cloruro de cloroacetilo dio 2-cloro-N-{3- [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] -fenil} -acetamida (1-49) . MS (ES+) : (M + I)+ = 406 (100%) , (M + 3)+ = 408 (75%) . 1H-RMN (DMSO-d6, d 10.31 (s, 1H) , 9.37 (s, 1H) , 9.30 (s, 1H) , 8.33 (s, 1H) , 8.00 (m, 1H) , 7.87 (s, 1H) , 7.47-7.24 (m, 5H) , 6.15 (s, 1H) , 4.26 (s, 2H) . (1) 3- [6- (3 -Cloro-4 -fluorofenil ) aminopirimidin-4-il] aminofenilamina (IR-4) y cloruro de 2 -cloropropionilo dio 2-cloro-N- [3- (6- {3-cloro-4-fluorofenil } aminopirimidin-4 -il) aminofenil] propionamida (1-50) . MS (ES+) : (M + 1)+ = 420 (100%) , (M + 3)+ = 422 (75%) . 1H-RMN (DMS0-d6, d 10.32 (s, 1H) , 9.37 (s, 1H) , 9.28 (s, 1H) , 8.33 (s, 1H) , 8.00-7.98 (m, 1H) , 7.87 (s, 1H) , 7.47-7.26 (m, 5H) , 6.14 (s, 1H) , 4.69 (cuarteto, 1H) , 1.61 (d, 3H) . (m) 3- [6- (3-Cloro-4-fluorofenilamino) irimidin-4-i lamino] fenilamina (IR-4) y cloruro 1-trifluorome ilciclopropancarbonilo dio N- [3 - ( 6 - { 3 -cloro-4 -fluorofenil}aminopirimidin-4-il) aminofenil] -1-trifluoromet ilciclopropancarboxamida (1-51) . MS (ES) (m/z) : 466/468 [M+ 1, 100/45%] . XH MN (DMSO-d6) d 9.61 (m, 1H) , 9.07-9.18 (m, 2H) , 8.14 (m, 1H) , 7.63- 7.8 (m, 2H) , 7.03-7.21 (m, 5H) , 5.94 (bs, 1H) , 1.12-1.27 (m, 4H) . (n) N-3- [6- (3-Cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenil-N-metilamina (Int-D) y cloruro de acriollo dio N-3- [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) pirimidin-4-il] aminofenil-iV-metil-2-propenamida (1-53) . MS (m/z) : 398/400 (M+l, 100/63%) . ¾ RMN (DMS0-d6) d 10.32 (s, 1H) , 9.21 (s, 1H) , 8.33 (s, 1H) , 7.99 (bs, 1H) , 7.25-7.68 (m, 5H) , 7.06 (bs, 1H) , 6.41-6.47 (m, 1H) , 6.26-6.29 (m, 1H) , 5.71-5.80 (m, 2H) . (o) 3- [6- (4-Bromo-2-fluorofenil) aminopirimidin-4-il] aminofenil amina (IR-17) y cloruro de acriollo dio iV-3-[6-(4 -bromo- 2 - luorofenilamino) pirimidin-4-il] aminofenil] -2-propenamida (1-55) . MS (M + H+) 430, 428. ¾ RMN (d6-DMS0) d 10.13 (s, 1H) , 9.25 (s, 1H) , 9.02 (s, 1H) , 8.26 (s, 1H) , 7.91 (m, 2H) , 7.57 (d, J = 11 Hz, 1H) , 7.45-7.15 (m, 4H) , 6.46 (dd, J = 12 y 10 Hz, 1H) , 6.26 (d, J = 12 Hz , 1H) , 6.23 (s, 1H) , 5.75 (d, J = 10 Hz, 1H) . (p) 2- [6- (4-fenoxifenil) amino-pirimidin-4-il] amino-6 -aminopiridina (IR-11) y cloruro de acriollo dio N-6-[6-(4- f enoxi f eni 1 ) amino -pirimidin-4-il) ] aminopi r i din - 2 -ilpropenamida (1-63) 1K RMN (DMSO-ds) d ppm : 5.75 (d, J = 10.20 Hz, 1H) , 6.29 (d, J - 17.04 Hz, 1H) , 6.62 (dd, J = 10.08 & 16.92 Hz, 1H) , 6.96-7.00 (m, 4H) , 7.07-7.11 (m, 1H) , 7.18 (bd, J = 3.28 Hz, 1H) , 7.33-7.38 (m, 3H) , 7.62 -7.69 (m, 4H) , 8.29 (s, 1H) , 9.13 (s, 1H) , 9.66 (s, 1H) , 10.15 (s, 1H) ; MS : m/z 425.3 (M+l) . (q) 2- [6- ( 3 -me t i 1 f enoxi ) -p i r imidin - 4 -i 1 ] amino - 6 - aminopi r idina (IR-12) y cloruro de acriollo dio N- 6 - [6- ( 3 -me t i 1 f enoxi ) -pirimidin-4 -il) ] aminopiridin-2 -ilpropenamida (1-65) 1H RMN (CDC13) d ppm: 2.40 (s, 3H) , 5.86 (d, J = 9.44 Hz, 1H) , 6.49-6.61 (ra, 2H) , 6.83 (bs, 1H) , 6.95-7.05 (m, 3H) , 7.15 (d, J = 7.48 Hz, 1H) , 7.34 (t, J = 15.08 Hz, 2H) , 7.54 (bd, J = 5.56 Hz, 1H) , 8.78 (s, 1H) , 10.78 (s, 1H) ; LCMS : m/z 348.8 (M+ 1) . (r) 2- [6- (4-fenoxifenoxi) -pirimidin-4 -il] amino- 6-aminopiridina (IR-13) y cloruro de acriollo dio N-6-[6-(4-fenoxifenoxi ) -pirimidin-4-il) ] aminopiridin-2- iljpropenamida (1-66) H RMN (MeOD) d ppm: 5.92 (dd, J = 11.60, Hz, 1H) , 6.50-6.54 (m, 2H) , 6.75-7.28 (m, 10H) , 7.37-7.41 (m, 2H) , 7.91 (t, J" = 16.08 Hz, 1H) , 8.63 (s, 1H) ; LCMS: m/z 426 (M+ 1) · (s) 3- [6- (fenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina (IR-15) y cloruro de acrioilo dio N-3-[6- (fenilamino) -pirimidin-4-il] aminofenilpropenamida (1-67) . 1H RMN (DMSO-d6) d pm : 5.72 (dd, J = 2.04 & 10.04 Hz, 1H) , 6.19 (s, 1H) , 6.25 (dd, J = 2 & 16.92 Hz, 1H) , 6.46 (dd, J = 10.04 & 16.88 Hz, 1H) , 6.96 (t, J" = 7.36 Hz, 1H) , 7.19-7.31 (m, 4H) , 7.54 (d, J = 7.68 Hz, 2H) , 7.91 (s, 1H) , 8.26 (s, 1H) , 9.13 (s, 1H) , 9.18 (s, 1H) , 10.11 (s, 1H) ; MS : m/z 332.8 (M+l) .
Ejemplo 4 Esquema de reacción 4a Secuencia A para Síntesis de N-3- (6-mono o disustituida-aminopirimidin-4 - il ) amino-N-mono- o unsusti uidas-fenil -4 -amino- susti uidas -2 -butenamidas _ R2 2N. N(R¾ N CICOCH=CHCH2N(R2)2 Esquema de reacción 4b Secuencia B para Síntesis de N-3- (6-mono o disustituida-aminopirimidin-4 - il ) amino-N-mono- o unsustituidas-fenil - -amino-susti uidas -2 -butenamidas HN(R2)2 2h Síntesis de (E) -N- (3- (6- (3-cloro-4- (piridin-2-ilmetoxi) fenilamino) -pirimidin-4-ilamino) fenil) -4-(dimetilamino) but-2 -enamida (1-19) . 3 - { [6 - (3 -cloro-4 - ( 2 -piridil ) metoxifenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenilamina (IR-9) se disolvió en N-metilpirrolidinona (1.2 mL) y se le añadió por goteo durante 10 minutos a la solución enfriada en hielo de clorhidrato de cloruro de (E) -4- (dimet ilamino) but-2-enoilo en. acetonitrilo . La reacción se agitó en un baño de hielo durante 2 hr. A la mezcla se le añadió bicarbonato de sodio hasta pH más grande que 9. El aceite que se formó se extrajo con EtOAc (3 x 25 mL) . Una porción del material fue insoluble y colocada a un lado. La capa orgánica se secó (MgS04) , se filtro y se evaporó hasta un aceite rojo oscuro. Ambos aceites contenían cantidad sustancial de producto como se mostró por TLC: Si02 CHCl3 : MeOH/NH4OH · (8:1) 19:1. Los aceites se combinaron y purificaron mediante cromatografía por vaporización en columna sobre gel de sílice (25X300 mm) se eluyeron primero con metanol al 5%/hidróxido de amonio 8/1 para remover impurezas no polares seguido por metanol al 10%/hidróxido de amonio 8/1 para eluir 59 mg de producto. La muestra se purificó más por segunda cromatografía por vaporización en columna sobre gel de sílice (25x250 mm) eluída con metanol al 10%/hidróxido de amonio 8/1 para dar el compuesto del título (16.3 mg, 0.03 inmoles, 6.4% rendimiento) . MS (ES+) 530(M+) : 552, (M+Na) ; XH MN (DMSO-4, 500 MHz) d (ppm) : 10.04 (s, 1H) , 9.19 (s, 1H) , 9.14 (s, 1H) , 8.60 (s, 1H) , 8.27 (s, 1H) , 7.88 (s, 2H) , 7.57 (s, 1H) , 7.36 (d, 1H, J" = 7.4 Hz) , 7.29 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.22 (d, 2H, J = 7.9 Hz) , 7.18 (m, 2H) , 6.74 (m, 1H) , 6.30 (d, 1H, J = 15 Hz) 6.10 (s, 1H) , 5.24 (s, 2H) , 3.06 (s, 2H) , 2.18 (s, 6H) ppm; HPLC: tR = 5.15 min, 97.5% (YMC-Pack ODS-A 4.6x100 mm, 80% agua/20% acetonitrilo a 5% agua/95% acetonitrilo sobre 5.5 min, mantener a 9 min.) .
Síntesis de [E) -N-3- (6- [3 -metilfenil] aminopirimidin-4 -il) aminofenil-4 -bromo-2 -butenamida (Int-D) . A una solución en agitación de ácido 4-bromo-but-2-enoico (0.72 g) a 0°C bajo atmósfera de nitrógeno y trietilamina (0.61 mL, 4.38 mmoles) en 5 mL de THF se le añadió cloroformiato de iso-butilo (0.56 mL, 4.32 mmoles) . La mezcla se agitó durante 15 min seguido por adición por goteo de una solución de N- (3-amino-fenil) -N-3-metilfenilamino-pirimidin-4 , 6 -diamina (1.015 g, 3.483 mmoles) en 50 mL de THF. La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche. La muestra se concentró después se dividió entre EtOAc y solución NaHC03 saturada. El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró. El sólido espumoso café resultante se lavó con éter dietílico y se secó al vacío para dar 0.960 g de (E) -N-3- (6- [3 -metilfenil] aminopirimidin-4 - il ) aminofenil-4-bromo- 2 -butenamida cruda (Int-D) como sólido color marrón. MS (m/z) : (M+l) 438/440 (71/75%) .
Síntesis de (JE?) -N-3 - ( 6 - [3 -metilfenil] aminopirimidin-4-il) aminofenil-4- (metil-prop-2-inil) amino-2 -butenamida (1-58) . A una solución en agitación a 0°C bajo N2 de N- [3- (6- { 3 -metilfenil } amino-pirimidin-4 -ilamino) -4-bromo-2-butenamida (Int-D) (0.492 g, 1.122 mmoles) y trietilamina (0.20 mL, 1.44 mmoles) en 10 mL de THF se le añadió (mediante jeringa) W-metil-propargilamina (0.11 mL, 1.173 mmoles) . La solución se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche, se concentró y después se dividió entre EtOAc y solución NaHC03 sat.. El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía (gel de sílice, 10% MeOH en CHC13) para dar 0.110 g de (E) -N-3 - ( 6 - [3 -metilfenil] aminopirimidin-4-il) aminofenil -4 - (metil-prop-2 -inil) amino-2 -butenamida (1-58) . MS (APCI) m/z 427 ( +l, 100%) . ?? R N (D SO-dg) d 10.06 (s, 1H) , 9.07 (s, 1H) , 9.17 (s, 1H) , 8.27 (s, 1H) , 7.90 (s, 1H) , 7.16-7.36 (m, 6H) , 6.70-6.73 (m, 1H) , 6.79 (d, 1H) , 6.20 (s, 1H) , 6.32 (d, 1H) , 3.30-3.49 (m) , 3.14-3.27 (m, 3H) , 2.18-2.39 (m, 7H que contain singlets a d 2.25 [3H] y d 2.29 [3H] ) .
Síntesis de (E) -N-3- (6- [3-metilfenil] aminopirimidin-4 - il ) minofenil-4-piperazinil-2-butenamida (1-57) . A una solución en agitación a 0°C bajo N2 de N- [3- (6-{3-metilfenil}amino-pirimidin-4-ilamino) -4-bromo-2-butenamida (Int-D) (2.15 g, 4.91 mmoles) y trietilamina (0.86 mL, 6.17 mmoles) en 10 mL de THF se le añadió por goteo una solución de 1-Boc-piperazina (0.92 g, 4.91 mmoles) en 10 fflr" de THF. La solución se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche, se concentró y después se dividió entre EtOAc y solución NaHC03 sat .. El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró para dar 2.76 g de éster ter-butílico de ácido 4-{3- [3- (6- { 3 -metilfenil }amino-pirimidin-4 -ilamino) -fenilcarbamoil] -alil } -piperazina-l-carboxílico como sólido gomoso café. Este material se disolvió en 100 mL de CH2C12. Se le añadió 20 mL de ácido trifluoroacét ico y la mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 2 h. La mezcla se concentró al vacío, se hizo básico con solución NaHC03 sat. y se extrajo con EtOAc (2x 100 mi) . El extracto orgánico combinado se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se sometió a cromatografía (gel de sílice, 5% MeOH en CHC13 [500 mL] después 1% NH4OH- 10% MeOH en CHCl3) para dar 0.404 g de (E) -N-3- (6- [3 -metilfenil] aminopirimidin-4 -il) aminofenil-4-piperazinil-2-butenamida. (1-57) MS (m/z) : 444 (M+l, 100%) . *H RMN (DMSO-d6) d 10.03 (s, 1H) , 9.17 (s, 1H) , 9.07 (s, 1H) , 8.27 (s, 1H) , 7.90 (s, 1H) , 7.17-7.36 (m, 6H) , 6.79-6.80 (d, 1H) , 6.72-6.75 (m, 1H) , 6.29 (d, 1H) , 6.20 (s, 1H) , 3.08-3.39 (m, que contiene agua y ~3H) , 2.70-2.72 (m, 4H) , 2.30-2.42 (m, 4H) , 2.29 (s, 3H) .
Los siguientes compuestos se prepararon en una forma sustancialmente similar a aquellos descritos en el Esquema de reacción 4a, arriba: (a) 3- (6- [3-cloro-4- { 3 - fluorobenciloxi } ] fenilamino-pirimidin-4-il) aminofenilamina (IR-6) y cloruro de 4-dimetilamino-2-butenoilo dio (E) -iV-3- ( [6- (3-cloro-4- {3-fluorobenciloxi } fenilamino) - irimidin-4 - il ) aminofenil -4 -(dimetilamino) but-2 -enamida (1-46) . MS (m/z) : M+ = 547, 549(3:1) , 1H-R N (DMSO-d6) d 10.04 (s, 1H) , 9.18 (s, 1H) , 9.12 (s, 1H) , 8.27 (d, 1H) , 7.88 (s, 1H) , 7.8 (s, 1H) , 7.47-7.16 (m, 9H) , 6.74 (b, 1H) , 6.28 (d, 1H) , 6.1 (s, 1H) , 5.19 (s, 2H) , 3.05 (s, 2H) , 2.18 (s, 6H) . (b) 3- [6- (3-metilfenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenilamina (IR-5) y cloruro de 4 - (dimetilamino) -2-butenoilo dio (E) -N- { 3 - [6 -( 3 -metilfenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenil } -4 -dimet ilamino-2 -butenamida (1-17) . MS (m/z) : MH+ = 403. (c) 3- [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina (IR-4) y cloruro de 4 - (dimetilamino) -2-butenoilo dio (E) -N- {3- [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenil} -4 -dimetilamino- 2 -butenamida (I-18) . MS (M + H+) 441, 443; XH RMN (400 MHz , d6-DMSO) d 10.01 (s, 1H) , 9.30 (s, 1H) , 9.20 (s, 1H) , 8.28 (s, 1H) , 7.95 (dd, J = 7 y 3 Hz, 1H) , 7.86 (s, 1H) , 7.41 (m, 1H) , 7.35-7.10 (m, 3H) , 6.69 (dt, J = 15 y 5 Hz, 1 H) , 6.26 (d, J = 15 Hz, 1H) , 6.11 (s, 1H) , 3.02 (d, J = 5 Hz , 2H) , 2.14 (s, 6H) ppm. (d) [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 ilamino] fenil-N-metilamina (Int-C) y cloruro de 4-dimetilamino-2-butenoilo dio (B) -N- (3- [6- (3-cloro-4- fluorofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenil-N-metil-4- (dimetilamino)but-2-enamida (1-48) S (ES) (m/z) : 455/457 (M+l, 37/13%) y 228 (100%). ¾ RMN (DMSO-dg) d 10.22 (s, 1H) , 9.20 (s, 1H), 8.33 (s, 1H) , 7.99 (bs, 1H) , 7.25-7.68 (m, 5H) , 7.05 (bs, 1H) , 6.73-6.76 (m, 1H) , 6.26-6.29 (m, 1H) , 5.71 (s, 1H) , 3.06 (bs, 2H) , 1.99 (s, 6H) . (e) 3- [6- (4-fenoxifenilamino) -pirimidin-4-il] aminofenilamina (1-7) y cloruro de 4-dime ilamino-2-butenoilo dio (E) -N-3- [6- (4-fenoxifenil)amino-pirimidin-4-il]aminofenil-4- (dimetilamino)but-2-enamida (1-62) ¾ RMN (DMSO-dg) d ppm: 2.19 (s, 6H) , 3.07 (d, J = 5.36 Hz, 2H) , 6.16 (s, 1H) , 6.29 (d, J" = 15.4 Hz, 1H) , 6.68-6.75 (m, 1H) , 6.95-6.98 (m, 4H) , 7.06-7.10 (m, 1H) , 7.20 (dd, J = 7.88 & 8.12 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 8.32 Hz, 2H) , 7.36 (dd, J = 7.52 & 7.84 Hz, 2H) , 7.55 (d, J = 8.76 Hz, 2H) , 7.90 (s, 1H) , 8.24 (s, 1H) , 9.15 (d, J = 8.84 Hz, 2H) , 10.04 (s, 1H) ; LCMS: m/z 481 (M+l).
Ejemplo 5 Esquema de reacción 5a Síntesis de N- {3- [6- (arilamino) -pirimidin-4-ilaminol - fenil } -etensulfonamidas H en donde L' es un subconjunto de L, como definido en la presente, de forma que Y-L'S02C1 resulta en formación de compuestos provistos en donde R1 es -L-Y en donde una unidad de metileno terminal de L se reemplaza con -NHS02-.
Síntesis de N-{3- [6- (3-cloro-4-fIuorofenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenil} -etensulfonamida (1-3) . Una solución de 3- [6- (3-cloro-4-fIuorofenilamino) -pirimidin-4-ilamino] fenilamina (IR-4) (300 mg, 0.9 mmoles) y trietilamina (500 mg, 5 mmoles) en 10 mL de THF se agitó a temperatura ambiente. Se añadió cloruro de 2 -cloroetansulfonilo (360 mg, 2.25 mmoles) en la mezcla de reacción y se continuó agitando a temperatura ambiente durante 1 hr. El producto crudo se purificó mediante cromatografía por vaporización sobre gel de sílice con sistema de solvente EtOAc/heptano para dar 35 mg (9%) del compuesto del título, un sólido color café. MS (m/z) : MH+ = 420, 422.
XU RMN (DMSO) : 9.92 (s, 1H) , 9.29 (s, 1H) , 9.21 (s, 1H) , 8.26 (s, 1H) , 7.92 (m, 1H) , 7.40-7.22 (m, 4H) , 7.14 (m, 1H) , 6.20 (m, 2H) , 6.05 (m, 3H) ppm. .
Los siguientes compuestos se prepararon en una forma sustancialmente similar al Esquema de reacción 5a: (a) 3- {6- [3-cloro-4- (3-fiuorofenil ) metoxifeni lamino] -pirimidin-4 - ilamino} fenilamina (IR-6) dio N-{3- [6- (3-cloro-4- ( 3 -fIuorofenil ) metoxi-fenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenil } -etensulfonamida (1-7) .
MS (m/z) : M+H+ = 526, 528 (2:1). MS (m/z) : M+H+ = 490, 492 (2:1). XH RMN (DMSO) : 9.91 (s, 1H) , 9.16 (s, 1H) , 9.07 (s, 1H ), 8.22 (s, 1H) , 7.73 (s, 1H) , 7.40-7.10 (m, 9H) , 6.70 (m, 2H) , 6.12 (d, 1H, J = 17.0 Hz) , 6.02 (m, 2H) , 5.14 (s, 2H) ppm. (b) 3- [6- (3 -metilfenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenilamina (IR-5) dio N- {3- [6- (3- metilfenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] fenil } -etensulfonamida (II-5) . MS (m/z): M+H+ = 382. XH RMN (DMSO) : 9.90 (s, 1H) , 9.12 (s, 1H) , 9.00 (s, 1H ), 8.21 (s, 1H) , 7.37 (d, 1H, J = 1.7 Hz), 7.26 (m, 3H) , 7.13 (m, 2H) , 6.70 (m, 3H) , 6.13 (m, 2H) , 6.00 (d, 1H, J = 10.0 Hz) , 2.24 (s, 3H) ppm.
Ejemplo 6 Esquema de reacción 6a Síntesis de 6- (6 -mono o disustituida- - il ) amino-2 -aminopiridinas A^-aciladas Síntesis de N- (6 -cloro-pirimidin-4 -il) -piridin-2 , 6-diamina. Una mezcla de 2 , 6-diaminopiridina (1.530 g, 14.020 mmoles) y 4 , 6 -dicloropirimidina (2.610 g, 17.519 mmoles) en 15 mL de n-butanol en recipiente sellado se calentó a 100°C durante 72 h. La muestra café oscuro se enfrió, se concentró para remover la mayoría del n-butanol, y después se dividió entre EtOAc y solución NaHC03 sat .. Se formó una emulsión, la muestra se filtró a través de una almohadilla de Celite y las capas se separaron. El extracto orgánico se lavó con soluciones de KH2P0 sat. y salmuera, se secó (MgS04, se filtró y se concentró hasta sólido grasoso café. La muestra se suspendió en 50 mL de CH2C12, se enfrió y se filtró para dar 1.017 g de N- (6-cloro-pirimidin-4-il) -piridin-2 , 6-diamina como sólido amarillo-anaran ado. MS (ES) (m/z) 222/224 (M+ 1, 100/63%) . TLC (Si02, 50% EtOAc en hexanos) : Rf 0.33.
Síntesis de N- (6-amino-piridin-2-il) -N- (3-cloro-4-fluorofenil) -pirimidin-4, 6-diamina (Int-E) . Una mezcla de N- (6-cloro-pirimidin-4-il) -piridin-2, 6-diamina (1.000 g, 4.512 mmoles) y 3 -cloro-4 -fluoroanilina (1.380 mmoles) en 10 mL de n-butanol en recipiente sellado se calentó a 120°C durante 24 h. La muestra se enfrió, se concentró para remover la mayoría del n-butanol, y se diluyó después con EtOAc y solución NaHC03 sat.. La muestra se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y se filtró. El sólido se lavó con fresh EtOAc y agua y se secó al vacío para dar 1.063 g de N-(6-amino-piridin-2-il) -N' - ( 3 -cloro-4 - fluorofenil) -pirimidin-4 , 6 -diamina (Int-E) como sólido pardo. MS (ES) (m/z) 331/333 (M+ 1, 100/65%) . TLC (Si02, 10% MeOH en CHC13) : Rf 0.25.
Síntesis de (E) -N- [6- (3-cloro-4-fluorofen lamino) irimidin-4 -ilaminopiridin-2 -il] -4 - (dimetilamino) but-2 -enamida (1-52) . A una suspensión en agitación a 0°C bajo N2 de clorhidrato de ácido 4-dimetilamino-but-2-enoico, (0.500 g, 3.019 mmoles) en 15 mL de THF que contenía 5 gotas de DMF se le añadió por goteo (mediante jeringa) cloruro de oxalilo (0.28 mL, 3.210 mmoles) . Se inicio inmediatamente formación de gas. La muestra se agitó a 0°C durante -30 min, temperatura ambiente durante ~2 h, se reenfrió a 0°C, después se trató con adición por goteo de una solución de N- (6-amino-piridin-2-il) -N- (3-cloro-4-fluoro-fenil) -pirimidin-4 , 6-diamina (Int-E) (0.500 g, 1.512 mmoles) en 15 mL de THF y 3 mL de NMP . El baño de hielo se removió, la muestra se agitó a temperatura ambiente durante 2 h después se dividió entre EtOAc y solución NaHC03 sat .. El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró hasta un sólido amarillo. El sólido se suspendió en EtOAc (-25 mL) , se agitó a temperatura ambiente durante ~ 12 h, se filtró y se secó al vacío para dar 0.459 g (69%) de (E) -N- [6- (3-cloro-4-fluorofeni lamino) irimidin-4 - ilaminopiridin- 2- il] -4 -(dimetilamino) but-2 -enamida (1-52) como sólido amarillo claro. MS (m/z) : 442/444 (M+l, 100/37%) . aH RMN (DMSO-d6) d 10.19 (s, 1H) , 9.78 (s, 1H) , 9.43 (s, 1H) , 8.36 (s, 1H) , 8.05-8.07 (m, 1H) , 7.54-7.72 (m, 4H) , 7.32-7.35 (m, 1H) , 7.10 (bs, 1H) , 6.79-6.82 (m, 1H) , 6.54-6.57 (m, 1H) ( 3.14 (bs, 2H) , 2.23 (bs, 6H) .
Ejemplo 7 Esquema de reacción 7a Síntesis de 3- (6 -mono o disust ituida-aminopirimidin-4 - il) amino-mono- susti uidas-fenilaminas N-aciladas H reducción Síntesis de N- ( 5 -amino-2 -metilfenil) -N'~ (3-cloro-4-fluorofenil) -pirimidin-4, 6-diamina (Int-F) . Una mezcla de 4- (3-cloro-4-fluorofenil) -6-cloropirimidin-4-ilamina (IR-4) (1.2 g, 4.6 mmoles) , 2-metil-5-nitroanilina (0.85 g, 5.5 mmoles) y 1 mL de se concentró HC1 en 10 mL de n-butanol se calentó a 120°C durante 16 h. Con agitación, 5 mL de EtOAc se le añadió a la mezcla de reacción. El producto amarillo claro que se precipitó, se filtró y se secó al vacío para dar N- (3-cloro-4-fluorofenil) -N- (2-metil-5-nitrofenil) pirimidin-4 , 6-diamina. MS (APCI) (m/z) : 374/376 (M+ 1) . Una mezcla de N- (3-cloro-4-fluorofenil ) -N- (2-metil-5-nitrofenil) pirimidin-4 , 6-diamina (0.55 g, 1.5 mmoles) y polvo de hierro (35 mallas, 0.5 g, 5 eq) en 5 mL de HOAc y 2 mL de MeOH se calentó a reflujo durante 2 h. El solvente se removió al vacío y el residuo color oscuro se mezcló con 150 mL de CH2C12 y 15 mL de solución de K2C03 sat . y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La capa orgánica se secó (MgS04, se concentró, y se purificó después mediante cromatografía por vaporización (gel de sílice, eOH/NH4OH/CH2Cl2) para dar 0.115 g de N- (5-amino-2-metilfenil) -N- (3-cloro-4-fluorofenil) pirimidin-4 , 6-diamina como un sólido color claro. (Int-F) S (m/z) : 344/346 (M+ 1) .
En una forma sustancialmente similar a la descrita arriba 4 - (3 -cloro-4 - fluorofenilamino) -6 -cloropirimidina y 2-metoxi-5-nitroanilina dio N- (5-amino-2-metoxifenil) -N- (3-cloro-4 - fluorofenil ) pirimidin-4 , 6 -diamina . (Int-G) MS (m/z) : 360/362 (M+l) .
Síntesis de {E) -N- [3- ( 6 - {3 -Cloro- 4 -fluorofenil}amino-pirimidin-4-ilamino) - -metilfenil] -4- (dimetilamino) but-2-enamida (1-54) . N- ( 5 -amino- 2 -metilfenil ) -N- ( 3 -cloro-4 -fluorofenil ) pirimidin-4 , 6 -diamina (Int-F) y cloruro de 4-dimetilamino-2-butenoilo se combinaron en una manera similar a la descrita en el Esquema de reacción 4a para dar (E) -N- [3 -( 6 -{ 3 -cloro-4 - fluorofenil } amino-pirimidin-4-ilamino) -4-metilfenil] -4- (dimetilamino) but-2 -enamida (I-54) . MS (m/z) : 455/457 (M+l, 100/39%) . XH RMN (DMSO-d6) d 11.02 (bs, 1H) , 10.66 (bs, 1H) , 9.92 (bs, 1H) , 9.39 (bs, 1H) , 7.92-7.94 (m, 1H) , 7.75 (bs, 1H) , 7.27-7.56 (m, 4H) , 6.80 (m, 1H) , 6.54 (d, 1H) , 5.89 (bs, 1H) , 3.92 (bs, 2H) , 2.75 (bs, 6H) , 2.17 (bs, 3H) .
En una forma sustancialmente similar a la descrita para la síntesis de (1-54) N- (5-Amino-2-metoxifenil) -N- (3-cloro-4 - fluorofenil ) pirimidin-4 , 6 -diamina (Int-G) y cloruro de 4-dimetilamino-2-butenoilo dio (E) -N- [3- (6- [3-cloro-4-fluorofenil) -aminopirimidin-4 - ilamino-4 -metoxifenil] -4-(dimetilamino) but-2 -enamida (1-59) . S (m/z) : 471/473 (M+l, 100/41%) . ?? RMN (DMS0-d6) d 9.97 (s, 1H) , 9.28 (s, 1H) , 8.46 (s, 1H) , 8.26 (s, 1H) , 7.93-7.98 (m, 2H) , 7.44-7.51 (m, 2H) , 7.30-7.33 (m, 1H) , 7.02 (d, 1H) , 6.69-6.72 (m, 1H) , 6.26 (d, 1H) , 6.03 (s, 1H) , 3.80 (s, 3H) , 3.05 (m, 2H) , 2.17 (s, 6H) .
Ejemplo 8 Síntesis de 2- [6- (3 -metilfenoxi) -pirimidin-4-il] amino- 6 -aminopiridina (IR-12) Una mezcla de 2 , 6-diaminopiridina (1.530 g, 14.020 mmoles) y , 6-dicloropirimidina (2.610 g, 17.519 mmoles) en 15 mL de n-butanol en recipiente sellado se calentó a 100°C durante 72 h. La muestra café oscuro se enfrió y se concentró a presión reducida para remover la mayoría del n-butanol. El residuo después se dividió entre EtOAc y solución saturada de NaHC03. Se formó una emulsión, la muestra se filtró a través de una almohadilla de Celite y las -capas se separaron. El extracto orgánico se lavó con soluciones de H2P04 sat . y de salmuera, se secó (MgS04, se filtró y se concentró hasta solio aceitoso café. La muestra se suspendió en -50 mL de CH2C12, se enfrió y se filtró para dar 1.017 g (36%) de N- (6-cloro-pirimidin-4-il) -piridin-2 , 6-diamina como sólido amarillo-anaranjado. MS : m/z 222/224 (M+ 1, 100/63%) . A una solución de N- (6-cloro-pirimidin-4-il) -piridin-2 , 6-diamina (100 mg, 0.45 mmoles) en DMF (1 mL) se le añadió 3 -metilfenol (88 mg, 0.8 mmoles) y K2C03 anhidro (93 mg, 0.6 mmoles) . La mezcla de reacción se calentó a 145°C durante 16 h. Se enfrió después y DMF se removió bajo presión reducida para obtener un residuo gomoso amarillo. El residuo se tomó en EtOAc (20 mL) , se lavó secuencialmente con agua (5 mL) y salmuera (5 mL) y se secó sobre Na2S0 . La filtración seguida por concentración bajo presión reducida produjo una goma amarilla que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, EtOAc/hexano, 5/5) para dar 100 mg de 2- [6- (3-metilfenoxi) -pirimidin-4-il] amino-6-aminopiridina (IR-12) como un sólido amarillo pálido. S : m/z 294 (M+H) Los siguientes compuestos se prepararon en una forma sustancialmente similar al procedimiento descrito arriba : (a) 4 -Fenoxifenol y 2 , 6 -diaminopiridina dio 2- [6-(4-fenoxifenoxi) -pirimidin-4-il] amino-6-aminopiridina (IR-13) MS (m/z) : MH+ = 372. (b) 4-nitrofenol y 1 , 3 -diaminobenceno dio 3- [6- (4-nitrofenoxi) -pirimidin-4-il] amino-aminobenceno (IR-16) MS (m/z) : MH+ = 324 Ejemplo 9 Síntesis de N-3 - [6 - (3 -etinilfenilamino) -pirimidin-4-il] aminofenil-2-propenamida (1-68) . A una solución agitada de IR-1 (150 mg, 0.42 mmoles) en DMF seco (4.0 mL) bajo N2 se le añadió Pd(PPh3)2Cl2 (14.7 mg, 0.021 mmoles) , Cul (3.9 mg, 0.021 mmoles) , PPh3 (22.07 mg, 0.08 mmoles) , y dietilamina (94.8 mg, 6.3 mmoles) . La mezcla de reacción se purgó con N2 durante 10 min adicionales, se le añadió trimetilsililacetileno (45.5 mg, 0.46 mmoles) , y se sometió después a irradiación de microondas a 120 °C durante 30 min. La mezcla se enfrió, se diluyó con 5 mL agua, se filtró a través de celite* y se extrajo con EtOAc (2x10 mL) . El extracto de EtOAc combinado se lavó con agua, después con salmuera y se secó sobre Na2S04. Concentración bajo presión reducida dio un producto crudo que se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, MeOH/CHCl3, 1/99) para dar 100 mg de un sólido café. Una solución de este material en 2 mL de metanol seco bajo atmósfera de nitrógeno que contenía K2C03 anhidro (73.9 mg, 0.53 mmoles) se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida para dar un residuo, que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 230-400, MeOH/CHCl3, 1/99) para dar 70 mg de un sólido café claro. A una solución agitada de este material en NMP (1.0 mL) a 0°C se le añadió cloruro de acriollo (105 mg, 1.16 mmoles) , y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente después con agua, se hizo básica con solución de NaHC03 al 10% y se extrajo con EtOAc . El extracto de EtOAc combinado se lavó secuencialmente con agua y salmuera, se secó sobre Na2S0 y se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se purificó más mediante HPLC preparativa para dar 8 mg de N-3- [6- (3-etinilfenil) aminopirimidin-4-il] amino-fenil-2 -propenamida (1-68) como un sólido blanquecino. 1H RMN (DMSO-d6) d ppm: 4.15 (s, 1H) , 5.73-5.76 (m, 1H) , 6.19 (s, 1H) , 6.25 (dd, J" = 1.96 & 17.00 Hz, 2H) , 6.46 (dd, J = 10.2 & 16.96 Hz, 1H) , 7.05 (d, J = 7.64 Hz , 1H) , 7.21-7.33 (m, 3H) , 7.54 (d, J = 7.96 Hz , 1H) , 7.81 (s, 1H) , 7.91 (s, 1H) , 8.32 (s, 1H) , 9.28 (d, J" = 11.08 Hz, 2H) , 10.13 (s, 1H) ; MS : m/z 356.8 (M+ 1) .
Ejemplo 10 Síntesis de N-3- [6- (4- [4- [ [4-cloro-3- ( trifluorometil) fenil] amiiio] -carbonil] amino) fenoxipirimidin-4-il] aminofenilcloroacetamida (1-69) Etapa 1: A una solución de 3 - [6 - (4 -nitrofenoxi ) -pirimidin-4 - il] amino -aminobencen (IR-16) (650 mg, 2.01 mmoles) en THF (10 mL) se le añadió Et3N (305 mg, 3.01 mmoles) y (Boc)20 (525 mg, 2.4 mmoles) bajo atmósfera de N2.
La mezcla de reacción se calentó además a 60° C durante 16 h. Un residuo se obtuvo después de enfriar a temperatura ambiente y remoción de solvente al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc (10 mL) . El extracto de EtOAc se lavó secuencialmente con agua (5 mL) y salmuera (2 mL) , se secó sobre Na2S04. Concentración bajo presión reducida seguido por purificación mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, CHCl3/MeOH, 9/1) dio 400 mg del derivado Boc como un sólido amarillo .
Etapa 2: El material de la Etapa 1 se disolvió en MeOH (8 mL) y Pd/C al 10% (40 mg) se le añadió bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se hidrogenó en un aparato Parr (H2, 3 Kg, temperatura ambiente, 16 h) . La mezcla de reacción ® se filtró a través de celite y el solvente se removió bajo presión reducida para dar 250 mg, de la amina como un sólido amarillo .
Etapa 3 : Al material de la Etapa 2 se le añadió una solución de tolueno de 4-cloro-3-trifluorometilfenilisocianato preparado al hacer reaccionar bajo atmósfera de nitrógeno a 0°C 24 mg de 4-cloro-3-trifluorometilanilina en 10 mL de tolueno con 0.08 mL de una solución al 20% de fosgeno en tolueno seguido por adición de Et3N (0.07 mL) y a 110°C durante 16 h. La mezcla de reacción de la amina y el isocianato se calentó además a 110°C durante 4 h y después se enfrió rápidamente con agua (1 mL) y se extrajo con EtOAc (2x20 mL) . El extracto de EtOAc se lavó con agua (5 mL) , salmuera (2 mL) y se secó sobre Na2S04. Filtración seguida por concentración al vacío ofreció un residuo que se purificó mediante una cromatografía en columna (Si02, 230-400, hexano/EtOAc, 9/1) para 20 mg del intermediario Boc/urea como un sólido amarillo.
Etapa 4 : A una solución de 45 mg de este intermediario en CH2C12 (2 mL) a 0°C se le añadió TFA (0.01 mL) bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h, se lavó secuencialmente con solución de NaHC03 al 10% (1 mL) y salmuera (1 mL) y se secó sobre Na2S04. Concentración bajo presión reducida dio 25 mg del intermediario de amina/urea como un sólido marrón.
Etapa 5 : A una solución del intermediario de amina/urea de la Etapa 4 (45 mg, 0.05 mmoles) , en THF (2 mL) y Et3N (10 mg, 0.1 mmoles) a 0°C bajo atmósferas de N2 se le añadió cloruro de cloroacetilo (55 mg, 0.1 mmoles) . La mezcla de reacción se dejó llegar a temperatura ambiente y con agitación durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo se dividió entre EtOAc (4 mL) y agua (1 mL) . La capa EtOAc se separó, se lavó con salmuera (2 mL) y se secó sobre Na2S04. Filtración seguida por concentración bajo presión reducida dio un residuo que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 230-400, CHCl3MeOH, 9/1) para dar N- 3 - [6 - (4 - [4 - [ [ [ [4 - cloro- 3 - (trifluorometil) fenil] amino] carbonil] amino] fenoxi] fenil] amino-pirimidin-4-il] aminofenilcloroacetamida (1-69) como un sólido amarillo pálido. H RMN (MeOD) d ppm: 4.19 (s, 2H) , 6.61 (s, 1H) , 7.13 (d, J = 6.92 Hz, 2H) , 7.14-7.23 (m, 3H) , 7.50-7.55 (m, 3H) , 7.63-7.66 (m, 1H) , 7.95 (s, 1H) , 8.00 (s, 1H) , 8.30 (s, 1H) ; MS : m/z 593 (M+ 1) .
Ejemplo 11 Síntesis de (E) -N-3- (6- [3 -metilfenilamino] -pirimidin-4 -il) aminofenil-4 - (4 -acetilpiperazin- lil) -2-butenamida (1-60) A una solución en agitación a 0°C bajo N2 de (E) -N-3- (6- [3 -metilfenil] aminopirimidin-4-il) aminofenil-4-piperazinil-2-butenamida (1-57) (0.291 g, 0.655 mmoles) y trietilamina (0.14 mL, 1.004 mmoles) en 10 mL de THF se le añadió (mediante jeringa) cloruro de acetilo (0.05 mL, 0.70 mmoles) . La muestra se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche, se concentró y después se dividió entre EtOAc y solución NaHC03 sat.. El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS04, se filtró, se concentró y se sometió a cromatografía (gel de sílice, 1% NH4OH-10% MeOH en CHC13) para dar 0.0705 g de (E) -N-3- (6- [3-metilfenil] aminopirimidin-4-il) aminofenil -4 - (4-acetilpiperazin-lil) -2 -butenamida (1-60), un sólido blanco. XH RMN (DMS0-d6 d 2.00 (s, 3H) , 2.29 (s, 3H) , 2.35-2.41 (m, 4H) , 3.15-3.16 (m, 2H) , 3.31-3.46 (m, que contenía agua y ~ 4H) , 6.19 (s, 1?) , 6.32 (d, 1H) , 6.73-6.80 (m, 2H) , 7.16-7.35 (m, 6H) , 7.90 (s, 1H) , 8.27 (s, 1H) , 9.07 (s, 1H) , 9.17 (s, 1H) y 10.05 (s, 1H) ; MS : m/z 486 (M+l, 100%) .
Ejemplo 12 Síntesis de {E) -N- (3- [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 -ilamino] fenil-N-metil-4-(dimeti 1 -d6- amino) but- 2 - enamida (1-61) A una solución en agitación de ácido 4-bromo-but-2-enoico (0.28 g) a 0°C bajo atmósfera de nitrógeno y trietilamina (0.25 mL) en 3 mL de THF se le añadió cloroformiato de iso-butilo (0.22 mL) . La mezcla se agitó durante 15 min seguido por adición por goteo de una solución de 3- [6- (3-cloro-4-fluorofenil) aminopirimidin-4 -il] aminofenilamina (IR-4) (0.46 g) en 50 mL de THF. La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche. La muestra se concentró después se dividió entre EtOAc y solución NaHC03 sat .. El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró. El sólido espumoso café resultante se lavó con éter dietílico y se secó al vacío para dar 0.378 g de {E) -N-3- (6- [3 -cloro-4- fluorofenilamino] pirimidin-4 - ilaminofenil-4 -bromo-2 -butenamida (Int-E) . S (m/z) : 480, 478, 476 (25/100/80 %) . A una solución en agitación a 0°C bajo N2 de Int-E (0.378 g, 0.794 mmoles) y trietilamina (0.28 mL, 2.01 mmoles) en 10 mL de THF se le añadió en una porción de clorhidrato de dimetil-d6-amina (0.070 g, 0.799 mmoles) . La muestra se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche y después se dividió entre EtOAc y solución NaHC03 sa .. El extracto orgánico se lavó con solución de salmuera, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía (gel de sílice, 1% NH40H- 10% MeOH en CHC13) para dar 0.0582 g (16%) de (E) -N- (3- [6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) -pirimidin-4 - il ] aminofenil -4 - (dimetil-d6-amino) but-2 -enamida (1-61), un sólido pardo. 1H RMN (DMSO-d6) d 3.05-3.07 (m, 2H) , 6.16 (s, 1H) , 6.29-6.32 (m, 1H) , 6.72-6.75 (m, 1H) , 7.21-7.47 (m, 5H) , 7.90 (s, 1H) , 7.92-8.01 (m, 1H) , 8.32 (s, 1H) , 9.26 (s, 1H) , 9.36 (s, 1H) y 10.06 (s, 1H) ; MS: m/z 447/449 (M+ 1, 100/49%) .
Ejemplo 13 1-80 se pueden preparar en una forma sustancialmente similar a la descrita en el Esquema de reacción 4a, arriba: H 1-80 4- [6- (4-fenoxifenil) amino-pirimidin-4 -il] amino-aminobenceno (IR-14) y cloruro de acriollo dio N-4- [6- (4- fenoxifenil) amino-pirimidin-4-il] aminofenilpropenamida (I- 80) , un sólido blanquecino. H RM (DMS0-d6) d ppm : 5.73 (dd, J = 1.6 & 10.0 Hz, 1H) , 6.08 (d, J = 5.6 Hz, 1H) , 6.24 (dd, J = 2 & 16.8 Hz, 1H) , 6.43 (dd, J = 10 & 16.8 Hz, 1H) , 6.95- 6.70 (m, 4H) , 7.09 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.35-7.39 (m, 2H) , 7.45-7.49 (m, 2H) , 7.55-7.61 (m, 4H) , 8.23 (s, 1H) , 9.08 (s, 1H) , 9.1 (s, 1H) , 10.1 (s, 1H) ; LCMS : m/e 423.8 (M+) .
Ejemplo 14 Esquema de reacción 14a Síntesis de N- 6 - ( 6 - ( fenilamino) irimidin- 4 - ilamino) iridin-2 - il) acrilamida (1-72) Etapa 1. Una solución de N2- (6 -cloropirimidin-4 - il) piridin-2 , 6-diamina (1) (0.25 g, 1.1 mmoles) y anilina (2) (0.16 g, 1.7 mmoles) en n-BuOH (25 mL) se calentó a 120°C durante 12 h en un tubo a presión. La mezcla de reacción se enfrió, se disolvió en metanol (10 mL) y se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (35 mL) y se lavó sucesivamente con solución de bicarbonato de sodio al 10% (20 mL) , agua (20 mL) , y salmuera saturada (20 mL) . El extracto de acetato de etilo se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida para dar un residuo, que se trituró con éter dietílico para dar (260 mg , 83%) N4 - ( 6 - aminopi r i din- 2 - i 1 ) -N6 -f enilpir imidin- 4 , 6 -diamina (3) como un sólido blanquee ino .
Etapa 2. A una solución agitada de 3 (0.2 g, 0.7 mmoles) en NMP (10 mL) se le añadió cloruro de acriollo (0.097 g, 1 mmoles) , por goteo a 0°C. La mezcla de reacción se dejó agitar a la misma temperatura durante 20 min y después se calentó a temperatura ambiente durante 1.5 h. Se enfrió rápidamente con solución de bicarbonato de sodio al 10% (4 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2x35 mL) . La capa de acetato de etilo combinada se lavó con agua (20 mL) , salmuera saturada (20 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, Éter de petróleo/EtOAc : 90/10) para dar N- 6 - ( 6 - ( f eni 1 amino ) p i r imidin- 4 -i lamino ) pi r i din- 2 - i 1 ) acr i 1 amida (1-72) como un sólido café. *H RMN (DMSO-d6) d ppm : 5.80 ( dd , J" = 1.84 & 10.12 Hz, 1H) , 6.31 (dd, J = 1.8 & 16.96 Hz , 1H) , 6.64 (dd, J" = 10.08 & 16.88 Hz , 1H) , 6.96 (t, J = 7.32 Hz, 1H) , 7.15-7.20 (m, 1H) , 7.28 (t, J" = 7.52 Hz, 2H) , 7.34 (s, 1H) , 7.60-7.70 (m, 4H) , 8.30 (s, 1H) , 9.08 (s, 1H) , 9.66 (s, 1H) , 10.06 (s, 1H) ; LCMS m/e 332.6 (M+) .
Ejemplo 15 Esquema de reacción 15a 3 1-73 Síntesis de (E) -4 - (dimetilamino) -N- (6- (6-( fenilamino) irimidin-4 -ilamino) iridin-2 -il) but-2 -enamida (1-73) . A una solución agitada de acetonitrilo (20 mL) y DMF (0.05 mL) bajo N2 se le añadió clorhidrato de ácido N,N-dimetilamino crotónico (0.47 g, 2.8 mmoles) . Después de 10 min esta solución se enfrió a 0-5°C. Cloruro de oxalilo (0.44 g, 3.5 mmoles) se le añadió y la mezcla de reacción se mantuvo a 0-5°C durante 30 min. Se dejó calentar a temperatura ambiente y agitación se continuó durante 2 h. Se calentó después a 40 °C durante 5 min y de nuevo se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante 10 min para obtener una solución verdosa clara de cloruro de dimetilaminocrotonilo que se usó como tal para la siguiente etapa. A una solución agitada de N4- (6-aminopiridin-2-il) -N6-fenilpirimidin-4 , 6 -diamina (0.2 g, 0.7 mmoles) en NMP (10 mL) se le añadió por goteo bajo atmósfera de N2 a 0°C la solución de cloruro de dimetilaminocrotonilo. La mezcla de reacción se mantuvo a esta temperature durante 30 min y se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. La mezcla se enfrió rápidamente con solución de bicarbonato de sodio (1 mL) y se extrajo con EtOAc (2x35 mL) . El extracto de acetato de etilo combinado se lavó con agua (20 mL) y salmuera (20 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, producto se eluyó a 4-6% metanol en cloroformo) para dar (E) -4- (dimetilamino) -N- (6- (6- (fenilamino) pirimidin-4 -ilamino) piridin-2 - il ) but- 2 -enamida (1-73) como un sólido amarillento. 1H R N (DMSO-ds) d ppm : 2.24 (s, 6H) , 3.13 (d, J = 5.76 Hz , 2H) , 6.56 (d, J = 15.52 Hz, 1H) , 6.80 (d, J = 15.36 Hz , 1H) , 6.95 (t, J = 7.36 Hz, 1H) , 7.11 (t, J = 1.16 Hz, 1H) , 7.29 (t, J = 7.56 Hz , 2H) , 7.58 (s, 1H) , 7.65-7.7 (m, 4H) , 8.31 (d, J = 2.44 Hz , 1H) , 9.23 (s, 1H) , 9.68 (s, 1H) , 10.16 (s, 1H) ; LCMS : m/e 390.3 (M+l) .
Ejemplo 16 Esquema de reacción 16a lR-11 I-64 Síntesis de (E) -4- (dimetilamino) -N- (6- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4-ilaniino) piridin-2-il) but-2-enamida (1-64) Una solución de cloruro de dimet ilaminocrotonilo se preparó mediante reacción de clorhidrato de ácido dimetilamino crotónico (0.36 g, 2.16 mmoles) en CH3CN (4 mL) que contenía DMF (1 gota) con cloruro de oxalilo (0.34 g, 2.70 mmoles) de acuerdo con el procedimiento en el Ejemplo 15a. Este cloruro de ácido se le añadió por goteo a 0°C en una solución agitada de N4- (6-aminopiridin-2-il) -N6-4-fenoxifenilpirimidin-4 , 6 -diamina (IR-11) (0.2 g, 0.54 mmoles) en NMP (8 mL) . La reacción se agitó a 0°C durante 1 h, se diluyó con EtOAc (5 mL) , y se lavó con NaHC03 al 10% (2 mL) , agua (2 mL) y salmuera (2 mL) . Se secó sobre Na2S04 seguido por concentración bajo presión reducida ofreció un residuo que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, clorof ormo/metanol , 9/1) para dar (E) -4- (dimetilamino) - N- (6 - (6- (4-f enoxifenilamino) írimidin-4 - i 1 amino ) p i r i din - 2 - i 1 ) but - 2 - enamida (1-64) como un sólido amarillo. XH RMN (DMS0-d6) d ppm : 2.18 (s, 6H) , 3.05 (d, J = 5.2 Hz , 2H) , 6.48 (d, J = 15.2 Hz, 1H) , 6.79 (d, J = 6 & 15.6 Hz, 1H) , 6.96-6.99 (m, 4H) , 7.07-7.15 (m, 2H) , 7.36 (t, J = 7.6 Hz , 2H) , 7.42 (s, 1H) , 7.64-7.7 (m, 4H) , 8.30 (s, 1H) , 9.12 (s, 1H) , 9.69 (s, 1H) , 10.07 (s, 1H) ; LCMS : m/e Ejemplo 17 Esquema de reacción 17a IR-12 1-74 Síntesis de (S) -4- (dimetilamino) -N- (6- (6- (3-metilfeiioxi) irimidin-4 -ilamino) iridin-2 -il) but-2 -enamida (1-74) Etapa 1 A una solución de N- (6-cloropirimidin-4-il) piridin-2,6-diamina (100 mg, 0.45 mmoles) en DMF (1 mL) se le añadió 3-metilfenol (88 mg, 0.8 mmoles) y K2C03 anhidro (93 mg, 0.6 mmoles) . La mezcla de reacción se calentó a 145° C durante 16 h. Se enfrió después y DMF se removió bajo presión reducida para obtener un residuo gomoso amarillo. El residuo se tomó en EtOAc (20 mL) y se lavó con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) y se secó sobre Na2S04. Filtración seguida por concentración bajo presión reducida produjo una goma amarilla que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, EtOAc/hexano, 5/5) para dar N2- (6- ( 3 -metilfenoxi ) pirimidin-4-il) piridin-2 , 6-diamina (IR-12) (100 mg, 75%) como un sólido amarillo pálido.
Etapa 2 A una solución de IR-12 (75 mg, 0.25 mmoles) en NMP (2 mL) se le añadió cloruro de dimetilaminocrotonilo (168 mg, 1.02 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se enfrió rápidamente después con solución de NaHC03 (2 mL) . La mezcla se extrajo con EtOAc (3x5 mL) y el extracto EtOAc combinado se lavó con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) y se secó sobre Na2S04 Concentración bajo presión reducida produjo un aceite amarillo, que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, Cloroformo/Metanol , 9/1) para dar (E) -4- (dimetilamino) -N- (6- (6- (3 -metilfenoxi ) pirimidin-4 -ilamino) iridin-2 - il) but-2 -enamida (1-74) como un sólido café claro. H RMN (CD3OD) d ppm : 2.35 (s, 6H) , 2.38 (s, 3H) , 3.25 (dd, J = 1.2 & 6.6 Hz, 2H) , 6.40 (d, J = 13.16 Hz , 1H) , 6.92-7.01 (m, 3H) , 7.12 (t, J = 8.12 Hz , 2H) , 7.34 (t, J = 7.84 Hz, 1H) , 7.54 (s, 1H) , 7.69 (t, J = 6.24 Hz , 1H) , 7.79 (d, J = 8 Hz, 1H) , 8.30 (s, 1H) ; LCMS : m/e 404.8 (M+) .
Ejemplo 18 Esquema de reacción 18a Síntesis de IV- (3 -( 6- (3 - fenoxifenilamino) pirimidin-4-ilamino) fenil) acrilamida (1-75) Etapa 1 Una solución de 4 , 6-dicloropirimidina (0.5 g, 3.3 mmoles) , 3-fenoxi anilina (0.75 g, 4 mmoles) y DIPEA (0.65 g, 5 mmoles) en n-butanol (5 mL) se sometió a irradiación de microondas (110 C, 30 min) . La mezcla de reacción se enfrió, se concentró bajo presión reducida y el residuo se disolvió en EtOAc (10 mL) . Esta solución se lavó con agua (5 mL) y salmuera (5 mL) , y se secó sobre Na2S04. Se concentró bajo presión reducida dio un residuo que se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, hexano/acetato de etilo, 8/2) para dar 6-cloro-I\7- (3-fenoxifenil) pirimidin-4-amina (0.56 g, 56%) como un sólido blanquecino.
Etapa 2 Una solución de 6-cloro-iV- (3 -fenoxifenil) pirimidin-4-amina (0.25 g, 0.8 mmoles), 1 , 3 -diaminobenceno (0.36 g, 3.3 mmoles), n-butanol (10 mL) y HCl conc . (61 mg, 1:6 mmoles) se sometió a irradiación de microondas (160 C, 15 min) . La mezcla de reacción se enfrió, se concentró bajo presión reducida y el residuo se tomó en EtOAc (10 mL) . La solución de EtOAc se lavó con agua (5 mL) y salmuera (5 mL) , y se secó sobre Na2S04. Concentración bajo presión reducida dio un residuo que se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, hexano/acetato de etilo, 6/4) para dar N4- (3-aminofenil ) -Ns- (3-fenoxifenil) pirimidin-4 , 6-diamina (0.1 g, 32%) como un sólido café.
Etapa 3 A una solución agitada de N4- (3-aminofenil) - 6- (3-fenoxifenil)pirimidin-4, 6-diamina (40 mg, 0.1 mmoles) , Et ¡ (0.03 mL, 0.2 mmoles) y MP (0.4 mL) en CH2C12 (2 mL) , a 0°C, se le añadió cloruro de acriollo (6) (29 mg, 0.3 mmoles). La mezcla de reacción se dejó llegar a temperatura ambiente y se agitó a esta temperatura durante 3 h. Se lavó con solución de NaHC03 al 10% (2 mL) , agua (2 mL) , salmuera (2 mL) y se secó sobre Na2S04. Filtración seguida por concentración bajo presión reducida ofreció un residuo que se purificó mediante cromatografía en columna (Si02/ 230-400, cloroformo/metanol , 9/1) para dar N- (3- (6- (3-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil) acrilamida (1-75) como un sólido café claro. ¾ RMN (DMSO-dg) d ppm : 5.73 (dd, J" = 1.72 & 10 Hz, 1H) , 6.18 (s, 1H) , 6.24 (dd, J = 1.92 & 17 Hz, 1H) , 6.45 (dd, J = 10.04 & 16.88 Hz, 1H) , 6.54-6.57 (m, 1H) , 7.01-7.05 (m, 2H) , 7.11-7.15 (dd, J = 0.88 & 7.48 Hz, 1H) , 7.19-7.32 (s, 4H) , 7.35-7.41 (m, 4H) , 7.89 (s, 1H) , 8.26 (s, 1H) , 9.2 (s, 1H) , 9.25 (s, 1H) , 10.26 (s, 1H) ; LCMS : m/e 423.8 (M+ 1).
Ejemplo 19 Esquema de reacción 19a compuesto 1-76 se puede preparar de acuerdo Esquema de reacción 19a al acoplar intermediario 1 con 3-bromofenol, seguido por ácido borónico que acopla de intermediarios 3 y 4 para dar intermediario 5. Intermediario 5 se puede tratar después con cloruro de acriollo usando un protocolo similar a aquel en el Ejemplo 6 para dar compuesto 1-76.
Ejemplo 20 Esquema de reacción 20a El compuesto 1-77 se puede preparar de acuerdo al Esquema de reacción 20a al tratar el intermediario 5 con cloruro de (£) -4-(dimetilamino)but-2-enoilo usando un protocolo similar a aquel en el Ejemplo 6.
Ejemplo 21 Esquema de reacción 21a Síntesis de -V-metil-W- (6- (6- (4-fenoxifeni lamino) irimidin-4 -ilamino) piridiii-2 -il) acrilamida (1-78) Etapa 1 A una solución de 2 , 6 -diaminopiridina (10 g, 91.63 mmoles) en THF seco (100 mL) se le añadió K2C03 (18.8 g, 136.23 mmoles) y CH3I (13 g, 91.63 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Agua se le añadió (10 mL) y la mezcla se extrajo con EtOAc (100 mL) . La capa EtOAc se secó y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo) para dar 2 -metilamino-6 -aminopiridina (1.1 g, 10%) como un sólido café.
Etapa 2 Una mezcla de 2 -metilamino-6 -aminopiridina (0.5 g, 4.04 mmoles), 4 , 6 -dicloropirimidina (1.51 g, 10.13 mmoles), DIPEA (1.5 g, 12.17 mmoles) en n-butanol (5 mL) se calentó a 120°C durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió, se concentró bajo presión reducida y el residuo se tomó en diclorometano (25 mL) . La solución de diclorometano se lavó con solución NaHC03 (2 mL) , agua (2 mL) y salmuera (2 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, éter de petróleo/acetato de etilo, 6/4) para dar N2- (6-cloropirimidin-4 - il) -N6-metilpiridin-2 , 6 , diamina (0.3 g, 33%) como un sólido amarillo.
Etapa 3 Una solución de N2- (6-cloropirimidin-4-il) -N6-metilpiridin-2 , 6 , diamina (0.3 g 1.27 mmoles) , 4-fenoxianilina (0.28 g, 1.52 mmoles) y HCl conc . (2 gotas) en n-butanol (2 mL) se sometió a irradiación de microondas (120°C, 1 h) . La mezcla de reacción se enfrió, se concentró bajo presión reducida, y el residuo se diluyó con CH2C12 (5 mL) . La solución de diclorometano se lavó con NaHC03 (2 mL) , agua (2 mL) , y salmuera (2 mL) , y se secó sobre Na2S04. Filtración seguida por concentración bajo presión reducida dio un residuo que se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para dar ^-(6-(metilamino)piridin-2-il) - N6 - (4-fenoxif e'ni 1 ) pirimidin-4,6-diamina (0.2 g, 41%) como un sólido café claro.
Etapa 4 A una solución de W4 - ( 6 - (me t i lamino ) i r idin-2 - i 1 ) - N6 - ( 4 - f enoxi f eni 1 ) pi r imidin- 4 , 6 -diamina (0.07 g, 0.18 mmoles) en NMP (1 mL) se le añadió cloruro de acriollo (0.032 g, 0.36 mmoles) a 0°C y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (2 mL) , se lavó con NaHC03 (1 mL) , agua (1 mL) , y salmuera (1 mL) . La solución de diclorometano se secó sobre Na2S04 y se concentró ba o presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60 - 120, c lorof ormo/met anol , 9/1) para dar N-metil-N- (6- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-i lamino ) pi r idin- 2 - i 1 ) ac i 1 amida (1-78) como un sólido amarillo. 1U RMN (DMS0-d6) d ppm : 3.22 (s, 3H) , 5.60 (dd, J = 2.56 & 9.76 Hz , 1H) , 6.12-6.16 (m, 2H) , 6.79 (d, J = 7.56 Hz, 1H) , 6.96 (d, J = 8.64 Hz, 5H) , 7.09 (t, J = 7.32 Hz, 1H) , 7.23 (s, 1H) , 7.33-7.37 (m, 4H) , 7.45 (d, J = 8.2 Hz , 2H) , 7.32 (t, J = 7.8 Hz , 1H) , 8.24 (s, 1H) ; LCMS : m/e 439.3 (M+ 1) .
Ejemplo 22 Esquema de reacción 22a 1-79 Síntesis de (£) -4- (dimeti lamino) -W-metil-jN'- (6- (6- (4- fenoxifenilamino) pirimidin-4 -ilamino) iridin-2 - il) but-2-enamida (1-79) . A una solución de clorhidrato de ácido de dimetilaminocrotónico (0.120 g, 0.72 mmoles) en CH3CN (1.4 mL) se le añadió DMF (1 gota) seguido por cloruro de oxalilo (0.07 mL, 0.91 mmoles) a 0°C bajo atmósfera de nitrógeno. La reacción se dejó agitar a esta temperatura durante 30 min y después a temperatura ambiente durante 2 h. Este cloruro de ácido se le añadió, por goteo, a 0°C en una solución agitada de N4- (6- (metilamino) piridin- 2 - il ) -N6- (4-fenoxifenil) pirimidin-4 , 6-diamina (0.07g, 0.18 mmoles) en NMP (2.8 mL) . La reacción se dejó agitar a 0°C durante 1 h, se diluyó con EtOAc (5 mL) , y se lavó con NaHC03 al 10% (2 mL) , agua (2 mL) y salmuera (2 mL) . Secado sobre Na2S04 seguido por concentración bajo presión reducida dio un residuo que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para dar (E) -4- (dimetilamino) -N-metil-N- (6- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4-ilamino) iridin-2-il) but-2 -enamida (1-79) como un sólido amarillo. XH RM (DMS0-d6) d ppm: 2.05 (s, 6H) , 2.91 (d, J = 6 Hz, 2H) , 3.27 (s, 3H) , 6.08 (d, J = 15.2 Hz , 1H) , 6.65 (dd, J = 5.6 & 14.8 Hz, 1H) , 6.82 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.97-7.00 (m, 4H) , 7.10 (t, J = 7.2 Hz, 1H) , 7.20 (s, 1H) , 7.35-7.39 (m, 2H) , 7.46 (d, J = 8 Hz , 1H) , 7.53 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.75 (t, J = 8 Hz, 1H) , 8.30 (s, 1H) , 9.30 (s, 1H) , 9.95 (s, 1H) ; LCMS : m/e 496 (M+ 1) .
Ejemplo 23 Esquema de reacción 23a N Síntesis de (E) -4 -dimetilamino) -N- (6- (6- (4-fenoxifenoxi) pirimidin- 4 -ilamino) iridin-2 -il) but-2 -enamida (1-82) A una solución agitada de N2-(6-(4-f enoxif enoxi) pirimidin- -il) iridin-2 , 6 - di amina (0.65 g, 1.75 mmoles) en NMP (10 mL) se le añadió cloruro de dime t i laminoc rotoni lo (1.026 g, 7 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se dejó llegar a temperatura ambiente y se mantuvo ahí durante 1 h. Se diluyó con diclorometano (10 mL) , se lavó con solución de NaHC03 (2 mL) y agua (2 mL) , y se secó sobre Na2S04.
La solución de diclorometano se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar un residuo que se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, clorof ormo/metanol , 9/1) para dar (E)-4-dimet i lamino) -N- (6- (6- ( 4 - fenoxifenoxi ) pirimidin- 4 -i lamino ) p i r idin- 2 - i 1 ) but - 2 - enami da (1-82) como un sólido blanquecino. 1R RMN (DMS0-d6) d ppm : 2.19 (s, 6H) , 3.08 (d, J = 5.52 Hz, 2H) , 6.50 (d, J = 15.4 Hz, 1H) , 6.77 (td, J = 5.92 & 15.4 Hz, 1H) , 7.00-7.07 (m, 5H) , 7.15 (t, J = 7.36 Hz, 1H) , 7.21 (dd, J" = 2.2 & 8.92 Hz, 2H) , 7.41 (t, J" = 7.52 Hz, 2H) , 7.68 (t, J = 7.96 Hz , 1H) , 7.77 (d, J = 7.96 Hz, 1H) , 7.95 (s, 1H) , 8.35 (s, 1H) , 10.20 (s, 1H) , 10.40 (s, 1H) ; LCMS : m/e 483 (M+ 1) .
Ejemplo 24 Esquema de reacción 24a 1-84 Síntesis de 2 - (hidroxi (3 - ( 6 - ( 4 -fenoxifenilamino) irimidin-4 -ilamino) fenil)metil) acrilamida (1-84) Etapa 1 A una solución agitada de N-metoxi -N-metil -3 - (6 - (4-fenoxifenilamino) irimidin-4 - ilamino) benzamida (0.75 g, 1.7 mmoles) en THF (10 mL) se le añadió LAH (3.4 mL, 3.4 mmoles, 1 M solución en THF) a -60°C. La mezcla de reacción se agitó a -60°C durante 1 h, se enfrió rápidamente con solución de Na2S04 (2 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) . La capa orgánica se separó y se lavó con agua (2 mL) y con solución de salmuera (2 mL) y se secó sobre Na2S04 anhidro. Filtración seguida por concentración bajo presión reducida dio un residuo que se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para dar 3-(6- (4 - fenoxifenilamino) pirimidin-4-ilamino) benzaldehído (0.6 g, 92%) como un sólido amarillento.
Etapa 2 A una solución agitada de 3- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino)benzaldehído (100 mg, 0.26 mmoles) y acrilonitrilo (36 mg, 0.52 mmoles) en l,4-dioxano/H20 (0.5 mL / 0.5 mL) se le añadió DABCO (29 mg, 0.26 mmoles) a temperatura ambiente. Se continuó agitando a temperatura ambiente durante 48 h después de ese tiempo la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, éter pet/acetato de etilo, 6/4) para dar 2- (hidroxi (3-(6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil) metil) acrilamida (I-84) como un sólido blanco. XH R N (DMSO-ds) d ppm : 5.33 (s, 1H) , 6.06 (s, 1H) , 6.20 (s, 1H) , 6.25 (s, 1H) , 6.80 (s, 1H) , 6.88 (s, 1H) , 6.95-7.05 (m, 4H) , 7.09-7.13 (m, 2H) , 7.16 (bd, J = 7.92 Hz, 1H) , 7.32-7.39 (m, 5H) , 7.47 (s, 1H) , 8.31 (s, 1H) ; LCMS : m/e 436 (M+ 1).
Ejemplo 25 Esquema de reacción 25a etapa- 1 NH etapa-2 NH etapa-3 N" "NH etapa-4 A N — N, C 'ó NH BOC B0 NH °j N N H 1-85 Síntesis de 1- (3- (6- (4 - fenoxifenilamino) pirimidin-4 -ilamino) irrolidin-l-il) rop-2-en-l-ona (1-85) Etapa 1 Una solución de 4 , 5 -dicloropiriraidina (0.6 g, 4.02 mmoles) , 3 -amino-Boc-pirrolidina (0.5 g, 2.6 mmoles) y DIPEA (1.73 g, 13.3 mmoles) en n-butanol (5.0 mL) se calentó en un tubo a presión (120°C, 12 h) . Se enfrió, se extinguió con agua (10 mL) y se extrajo con EtOAc (2x25 mL) . El extracto de EtOAc combinado se lavó con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida para dar 3- (6-cloropirimidin-4-ilamino) pirrolidina-l-carboxilato de tert-butilo (0.4 g, 50%) como un sólido amarillo.
Etapa 2 A una solución en agitación de 3- (6-cloropirimidin-4-ilamino) pirrolidin-l-carboxilato de tert-butilo (0.5 g, 1.6 mmoles) y 4 - fenoxianilina (0.309 g, 1.6 mmoles) en etanol (4 mL) se le añadió ácido acético (0.1 mL) y la mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 36 h. La mezcla de reacción se enfrió, etanol se removió bajo presión reducida y el residuo se tomó en acetato de etilo (10 mL) . Se lavó con solución de NaHC03 (2 mL) , salmuera (2 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para producir 3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - ilamino) pirrolidina-1- carboxilato de tert-butilo (0.3 g, 42.8%) como un sólido blanco .
Etapa 3 A una solución agitada de 3- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino)pirrolidin-l-carboxilato de tert-butilo (0.1 g, 0.2 mmoles) en CH2Cl2 seco (2.0 mL) a 0°C se le añadió CF3COOH (2 mL, 20 yol.) y la mezcla de reacción se mantuvo a esta temperatura durante 30 min. Se dejó llegar a temperatura ambiente y agitar a esta temperatura durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo se enfrió rápidamente con agua (2 mL) , se hizo básico con solución de NaHC03, y se extrajo con acetato de etilo (2x8 mL) . El extracto de acetato de etilo combinado se lavó con agua (2 mL) y salmuera (2 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida para dar üfi- (4-fenoxifenil) -l> - (pirrolidin-3-il)pirimidin-4,6-diamina (0.025 g, 32.4%) como un sólido café claro.
Etapa 4 A una solución agitada de if- (4-fenoxifenil) -i\ - (pirrolidin-3-il)pirimidin-4,6-diamina (0.13 g, 0.3 mmoles) en THF (1.5 mL) a -60°C se le añadió DIPEA (0.07 g, 0.5 mmoles) y cloruro de acriollo (1 M solución en THF, 0.3 mL, 0.3 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a -60°C durante 5 min. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente al añadir agua y se extrajo con EtOAc (2x5 mL) . El extracto de EtOAc combinado se lavó con salmuera (3 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna (Si02/ 230-400, cloroformo/metanol: 98/2) para dar 1- (3- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4- ilamino)pirrolidin-l-il)prop-2-en-l-ona (1-85) como un sólido verde claro. ¾ RMN (DSO-dg) d ppm: 1.83-1.86 & 1.90-1.94 (m, 1H) , 2.07-3.0 & 2.16-2.20 (m, 1H) , 3.38-3.86 (m, 4H) , 4.2-4.75 & 4.35-4.5 (bs, 1H) , 5.65 (dt, J = 2 & 10 Hz, 1H) , 5.78 (d, J" = 3.6 Hz, 1H) , 6.11 & 6.15 (dd, J" = 2.4 & 7.0 Hz & dd, J"=2.4 & 7.2 Hz, 1H) , 6.51-6.64 (m, junto 1H) , 6.93-7.00 (m, 4H) , 7.07-7.18 (m, 2H) , 7.36 (t, J = 8 Hz, 2H) , 7.51 (d, J = 8 Hz, 2H), 8.12 (s, 1H) , 8.93 (s, 1H) ; LCMS : m/e 401.8 (M+l) .
Ejemplo 26 Esquema de reacción 26a 1-86 Síntesis de 1- (3- (6 - (4- fenoxifenilamino) irimidin-4-ilamino)piperidin-l-il)prop-2-en-lona (1-86) Etapa 1 Una solución de 4 , 6-dicloropirimidina (0.1 g, 0.671 mmoles) , 3-amino-Boc-piperidina (0.16 g, 0.80 mmoles) y DIPEA (0.086 g, 6.71 mmoles) en n-butanol (5.0 mL) se calentó en un tubo a presión (120 C, 12 h) . La solución se enfrió, se extinguió con agua (2 mL) y se extrajo con EtOAc (2x15 mL) . El extracto de EtOAc combinado se lavó con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida para dar 3- (6 -cloropirimidin-4 -ilamino) iperidin- 1-carboxilato de tert-butilo, que se secó bajo alto vacío y se usó así para la siguiente etapa sin purificación adicional.
Etapa 2 Una solución de 3- (6-cloropirimidin-4-ilamino) iperidin-l-carboxilato de tert-butilo (0.15 g, 0.48 mmoles), 4-fenoxianilina (0.089 g, 0.48 mmoles), Pd(0Ac)2 ( 0.010 g, 0.048 mmoles), BINAP (0.014 g, 0.024 mmoles) y CS2C03 (0.39 g, 1.2 mmoles) en tolueno desgasificado (tolueno se purgó con N2 durante 15 min) se calentó durante 12 h a 100°C bajo atmósfera de N2. La mezcla de reacción se enfrió, se diluyó con EtOAc (20 mL) y se lavó con agua (4 mL) y salmuera salmuera (2 mL) y se secó sobre Na2S04. El producto crudo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 230-400, cloroformo/metanol : 99/1) para dar 3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - i lamino) piperidin- 1-carboxilato de tert-butilo (90 mg, 40.9%) como a sólido amarillo claro.
Etapa 3 A una solución agitada de 3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - ilamino) piperidin- 1-carboxilato de tert-butilo (110 mg, 0.238 mmoles) en CH2C12 seco (1.0 mL) a 0°C se le añadió CF3C0OH (0.5 mL, 5 vol) y la mezcla de reacción se mantuvo a esta temperatura durante 30 min. Se dejó llegar a temperatura ambiente y agitar a esta temperatura durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo se enfrió "rápidamente con agua (2 mL) , se hizo básica con solución de NaHC03, y se extrajo con acetato de etilo (2x8 mL) . El extracto de acetato de etilo combinado se lavó con agua (2 mL) , salmuera (2 mL) , se secó sobre Na2S0 y se concentró bajo presión reducida para dar N4- (4-fenoxifenil) -N6 - (piperidin- 3 - il ) pi imidin-4 , 6-diamina (0.07 g, 81%) como a sólido amarillo claro.
Etapa 4 A una solución agitada de N4 - (4-fenoxifenil) -N6- (piperidin-3 - il ) pirimidin-4 , 6 -diamina (0.025 g, 0.069 mmoles) en NMP (0.5 mL) a 0°C se le añadió cloruro de acriollo (0.007 g, 0.083 mmoles) , y la mezcla de reacción se agitó a 0 C durante 5 min. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente al añadir solución de NaHC03 al 10% y se extrajo con EtOAc (2x5 mL) . El extracto de EtOAc combinado se lavó con agua (3 mL) y salmuera (3 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna (Si<¾, 230-400, cloroformo/metanol : 98/2) para dar 1- (3- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino)piperidin-l-il)prop-2-en-lona (1-86) como un sólido blanquecino. ¾ RM (MeOD) d ppm: 1.5-1.75 (m, 2H) , 1.80-2.00 (m, 1H) , 2.0-2.20 (m, 1H) , 2.70-2.90 (m, 1H) , 2.90-3.05 (m, 1H) , 3.80-4.00 (m, 2H) , 4.30-4.45 (m, 1H) , 5.65 & 5.75 (d, J = 10.8 Hz & d, J = 10.8 Hz respectivamente, junto 1H) , 5.81 (d, J = 10.8 Hz, 1H) , 6.14 & 6.18 (d, J = 17.2 Hz & d, J = 19.2 Hz respectivamente, junto 1H) , 6.60-6.70 & 6.70-6.85 (m, junto 1H) , 6.97-7.00 (m, 4H) , 7.04 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.32-7.38 (m, 4H) , 8.04 & 8.07 (s, junto 1H) ; LCMS: m/e 416.1 (M+ 1) .
Ejemplo 27 de reacción 27a 1-87 Síntesis de 3-metil-l- (3- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil)but-2-en-l-ona (I-87) Etapa 1 A una solución agitada de 4 , 6 -dicloropirimidina (0.5 g, 3.7 mmoles) en n-butanol (10 mL) se le añadió 3-aminobenzoato de metilo (0.498 g, 3.7 mmoles) y DIPEA (0.65 g, 5.0 mmoles) y la mezcla de reacción se calentó a 110°C durante 12 h. Se enfrió y el exceso de n-butanol se removió bajo presión reducida. El residuo se extrajo con EtOAc (2x30 mL) y el extracto EtOAc combinado se lavó con agua (5 mL) , salmuera (2.5 mL) , se secó sobre Na2S0 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se agitó con éter pet (30 mL) durante 30 min, el éter pet se removió mediante decantación y el sólido obtenido se secó bajo alto vacío para dar 3- (6-cloropirimidin-4-ilamino)benzoato de metilo (0.3 g, 34%) como sólido café claro.
Etapa 2 A una solución en agitación de 3- (6-cloropirimidin-4 -ilamino) benzoato de metilo (1.0 g, 3.8 mmoles) y 4-fenoxianilina (0.703 g, 3.8 mmoles) en etanol (5 mL) se le añadió ácido acético (0.22 mL) y la mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 48 h. La mezcla de reacción se enfrió, etanol se removió bajo presión reducida y el residuo se disolvió en acetato de etilo (50 mL) . Se lavó con solución de NaHC03 (5 mL) y salmuera (5 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para producir 3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - ilamino) benzoato de metilo (1 g, 66%) como un sólido blanquecino.
Etapa 3 A una solución agitada de 3- (6- (4-fenoxifenilamino) irimidin-4 - ilamino) benzoato de metilo (0.3 g, 0.72 mmoles) en metanol/THF (2/2, 4 mL) se le añadió LiOH (0.122 g, 2.9 mmoles) en H20 (4 mL) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró bajo presión reducida, el residuo se diluyó con agua (2 mL) y se extrajo con dieloróme año (5 mL) . La capa acuosa se separó y se hizo ácida con 1.5 N HCl (pH -5-6) para obtener un precipitado blanco, que se recolectó mediante filtración y se secó al vacío para dar ácido 3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - ilamino) benzoico (0.2 g 69%) como un sólido blanco.
Etapa 4 A una solución agitada de ácido 3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - ilamino) benzoico (0.05 g, 0.12 mmoles) en DMF (2 mL) se le añadió MeNH-OMe . HCl (0.0084 g, 0.12 mmoles), EDCIHCl (0.0361 g, 0.18 mmoles) , HOBT (0.0084 g, 0.062 mmoles) y DIPEA (0.023 g, 0.18 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se enfrió rápidamente con agua. Un sólido blanco se aisló mediante filtración y se secó al vacío para dar N-metoxi-iV-metil-3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 -ilamino) benzamida (0.025 g, 44.5%) como un sólido blanco.
Ktapa 5 A una solución agitada de N- metoxi - N-met i 1 - 3 - ( 6 - (4-f enoxif enilamino) pirimidin-4-ilamino) benzamida (50 mg, 0.11 inmoles) en THF (0.5 raL) a 0°C se le añadió bromuro de 2 -me t i lpropeni lmagnes i o (1.1 mL, 0.55 inmoles, 0.5 M en THF) . La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 min. Se enfrió rápidamente con solución de NH4C1 sat . (0.5 mL) y se extrajo con EtOAc (3x2 mL) . La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre anhidrous Na2S04, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar un sólido blanco, que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, clorof ormo/metanol , 9/1) para dar 3-metil-l- (3- (6- (4 -f enoxif enilamino) pirimidin-4-i 1 amino ) f eni 1 ) but - 2 - en - 1 - ona (1-87) como un sólido blanquecino. XH RMN (CDC13) d ppm : 2.01 (s, 3H) , 2.20 (s, 3H) , 6.14 (s, 1H) , 6.71 (s, 1H) , 6.95 (s, 1H) , 6.99-7.02 (m, 5H) , 7.11 (t, J = 7.36 Hz, 1H) , 7.26-7.28 (m, 2H) , 7.34 (t, J = 7.56 Hz, 2H) , 7.40-7.53 (m, 2H) , 7.65 (d, J = 7 Hz , 1H) , 7.86 (s, 1H) , 8.32 (S, 1H) ; LCMS : m/e 431.2 (M+ 1) .
Ejemplo 28 Esquema de reacción 28a H H 1-88 Síntesis de 1- (3- (6- (4 - fenoxifenilamino) irimidin-4-ilamino) fenil) but-2 -in-l-ona (1-88) A una solución agitada de N-metoxi-N-metil-3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - ilamino) benzamida (50 mg, 0.11 mmoles) en THF (0.5 mL) a 0°C se le añadió una solución de THF de bromuro de 1-butinilmagnesio (1.1 mL, 1.1 mmoles) . La mezcla de reacción se dejó llegar a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con solución NH4C1 saturada (0.5 mL) y se extrajo con EtOAc (2x3 mL) . La capa EtOAc combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 anhidro se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar un sólido blanco, que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para dar 1- ( 3 - (6 - (4 - fenoxifeni lamino) irimidin-4 -i lamino) fenil ) but-2 - in-1-ona (1-88) como un sólido amarillento. 1H RMN (DMSO-d6) d ppm: 2.22 (s, 3H) , 6.16 (s, 1H) , 6.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 7.01 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.1 (t, J = 7.2 Hz, 1H) , 7.35-7.39 (m, 2H) , 7.48 (t, J = 8 Hz, 1H) , 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 7.95 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 8.32 (s, 1H) , 8.39 (S, 1H) , 9.22 (s, 1H) , 9.47 (s, 1H) ; LC S : m/e 421.1 (M+ 1) .
Ejemplo 29 Esquema de reacción 29a 1-89 Síntesis de {E, Z) -1- (3 - ( 6 - (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil)but-2-en-l-ona (I-89) A una solución agitada de N-metoxi -N-metil -3 - (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - ilamino) benzamida (50 mg, 0.11 mmoles) en THF (0.5 mL) a 0°C se le añadió una solución de THF de bromuro de propenilmagnesio (2.2 mL, 1.1 mL, 0.5 M soln. en THF) . La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 min. Se enfrió rápidamente con solución de NH4CI saturada (0.5 mL) y se extrajo con EtOAc (2x3 mL) . La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 anhidro se filtró y se concentró bajo presión reducida para obtener un sólido blanco, que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para dar {E, Z) -1- (3- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil)but-2-en-l-ona (1-89) como un sólido amarillo pálido. ¾ R (DMSO-ds) d ppm: 1.98 (dd, J = 1.6 & 6.8 Hz, 3H) & 2.13 (dd, J" = 1.6 & 7.2 Hz, 3H) , 6.10-6.13 (m, 1H) , 6.75-6.90 (m, 1H) , 6.90-7.13 (m, 7H) , 7.25-7.27 (m, 1H) , 7.32-7.34 (m, 2H) , 7.34-7.50 (m, 2H) , 7.63-7.65 (m, 1H) , 7.86-7.88 (m, 1H) , 8.32 (s, 1H) ; LCMS : m/e 423 (M+l) .
Ejemplo 30 Esquema de reacción 30a 1-83 Síntesis de 2 -metil-1- (3 - (6- (4-fenoxi feni lamino) irimidin- 4 - ilamino) feni1 ) rop - 2 - en- 1 - ona (1-83) A una N-metoxi-N-metil-3- (6- (4-fenoxifenilamino) pirimidin-4 - ilamino) benzamida (0.150 g, 0.340 mmoles) a 0°C se le añadió bromuro de 2-metilpropenilmagnesio (6.8 mL, 3.4 mmoles, 0.5 M solución en THF) . La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 min. Se enfrió rápidamente con solución de N¾C1 saturada (0.5 mL) y se extrajo con EtOAc (2x3 mL) . La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04 se filtró y se concentró bajo presión reducida para obtener un sólido blanco, que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, obteniendo producto eluido en metanol/cloroformo : 2/98) para dar 2-metil-l- (3- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil)prop-2-en-l-ona (1-83) como un sólido blanco. ¾ RMN (DMS0-d6) d ppm: 1.99 (s, 3H) , 5.64 (s, 1H) , 6.03 (s, 1H) , 6.14 (s, 1H) , 6.96-7.02 (m, 4H) , 7.10 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.25 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.35-7.43 (m, 3H) , 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.88 (d, J = 8 Hz, 1H) , 7.92 (s, 1H) , 8.29 (s, 1H) , 9.21 (s, 1H) , 9.38 (s, 1H) ; LCMS : 423 m/e (M+l) .
Ejemplo 31 Esquema de reacción 31a 1-90 Síntesis de N- (6- (6- (3-metoxifenoxi) pirimidin amino) iridin-2 - il) acrilamida (1-90) Etapa 1 A una solución de N2- ( 6 -cloropirimidin il) piridin-2 , 6-diamina (200 mg, 0.90 mmoles) en DMF seco (2 mL) se le añadió 3 -metoxifenol (112 mg, 0.90 mmoles) y K2C03 anhidro (186 mg, 1.353' mmoles) . La mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 16 h bajo atmósfera de N2. Se enfrió después y DMF se removió bajo presión reducida para dar un residuo gomoso amarillento que se tomó en EtOAc (10 mL) . Se lavó con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) , se secó sobre Na2S04 y después se concentró bajo presión reducida para dar un producto crudo. Esto se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, hexano/EtOAc , 5/5) para dar N2-(6- (3-metoxilfenoxi) pirimidin-4 - il ) iridin- 2 , 6 -diamina (110 mg, 40.7%) como un sólido amarillo pálido.
Etapa 2 A una solución agitada de N2-(6-(3-metoxilfenoxi) pirimidin-4 - il ) piridin-2 , 6-diamina (100 mg, 0.323 mmoles) en THF/NMP (1 mL / 0.5 mL) se le añadió cloruro de acriollo (0.029 g, 0.3 mmoles) bajo atmósfera de N2 a -10°C. La agitación se continuó a la misma temperatura durante 2 h y la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida para dar un residuo que se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol) para dar N- ( 6 -( 6 -( 3 -metoxifenoxi) pirimidin-4 - ilamino) piridin-2-il) acri lamida (I.-90) como un sólido amarillo pálido. 1H RMN (DMS0-d6) d ppm: 3.75 (s, 3H) , 5.79 (dd, J = 1.8 & 10.08 Hz, 1H) , 6.30 (dd, J" = 1.8 & 16.96 Hz , 1H) , 6.65 (dd, J = 10.12 & 16.96 Hz, 1H) , 6.74-6.76 (m, 2H) , 6.82 (td, J = 1.52 & 9.24 Hz, 1H) , 7.04 (d( J = 7.92 Hz , 1H) , 7.33 (t, J" = 8.28 Hz, 1H) , 7.70 (t, J = 7.96 Hz , 1H) , 7.76 (d, J = 8 Hz, 1H) , 7.90 (S, 1H) , 8.34 (s, 1H) , 10.20 (s, 1H) , 10.48 (s, 1H) ; LCMS : m/e 364 (M+ 1) .
Ejemplo 32 Esquema de reacción 32a OMe N N N NH2 Etapa- 1 Etapa- 2 1-91 Síntesis de N- (6- (6- (4-metoxifenoxi) pirimidin-4-ilamino) iridin-2 -il) acrilamida (1-91) Etapa 1 A una solución de N2- (6-cloropirimidin-4-il) piridin-2 , 6-diamina (200 mg, 0.90 mraoles) en DMF seco (2 mL) se le añadió 4 -metoxifenol (168 mg, 1.3 mmoles) y K2C03 anhidro (179 mg, 1.3 mmoles) . La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 16 h bajo atmósfera de N2. Se enfrió después y DMF se removió bajo presión reducida para dar un residuo gomoso amarillento que se tomó en EtOAc (10 mL) . La solución se lavó con agua (5 mL) y salmuera (5 mL) , se secó sobre Na2S04 y después se concentró bajo presión reducida para obtener producto crudo. Esto se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, hexano/EtOAc , 5/5) para dar N2- ( 6 - (4 -metoxilfenoxi ) pirimidin-4 - il) piridin-2 , 6 -diamina (160 mg, 59.2 %) como un sólido amarillo pálido.
Etapa 2 A una solución agitada de N2-(6-(4-metoxilfenoxi) pirimidin-4-il) piridin-2 , 6-diamina (150 mg, 0.474 mmoles) en THF/NMP (1 mL / 0.5 mL) se le añadió cloruro de acriollo (64 mg, 0.712 mmoles) a -10 C bajo atmósfera de N2. Después de agitación a esta temperatura durante 30 min, la reacción se detuvo y la mezcla de reacción lentamente se le añadió a solución de NaHC03 (10 mL) . Un sólido blanco se precipitó el cual de aisló mediante filtración y se disolvió en una mezcla de acetato de etilo (5 mL) y Et3N (0.5 mL) . La solución se lavó con agua (2 mL) y salmuera (2 mL) . Secado sobre Na2S04 seguido de filtración y concentración bajo presión reducida produjo un sólido amarillo. Se purificó más mediante cromatografía en columna (S1O2, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para dar N- (6- (6- (4-metoxifenoxi ) pirimidin-4 - ilamino) piridin- 2 - il ) acrilamida ( 1 -91) como un sólido blanquecino. ¾ RMN (DMSO-d6) d ppm: 3.76 (s, 3H) , 5.79 (dd, J = 1.84 & 10.16 Hz, 1H) , 6.30 (dd, J" = 1.84 & 17 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 10.12 & 16.92 Hz , 1H) , 6.96-6.99 (m, 2H) , 7.02 (d, J = 7.88 Hz, 1H) , 7.09-7.13 (m, 2H) , 7.69 (t, J = 7.96 Hz, 1H) , 7.76 (d, J" = 7.44 Hz , 1H) , 7.86 (s, 1H) , 8.30 (d, J = 0.88 Hz , 1H) , 10.17 (s, 1H) , 10.17 (s, 1H) ; LCMS : m/e 364 (M+l) .
Ejemplo 33 Esquema de reacción 33a IR 10 Síntesis de N- (3- (6- ( - fenoxifenilamino) irimidin- 4-ilamino) fenil) propionamida (IR-10) Etapa 1 Una solución de 3- (6-cloropirimidin-4-ilamino) fenilcarbamato de tert-butilo (200 mg, 0.6 mmoles) , 4-fenoxianilina (346 mg, 1.8 mmoles) y HCl concentrado (45 mg, 1.2 mmoles) en n-butanol (8 mL) se sometió a irradiación de microondas (160°C, 20 min) . La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con solución de NaHC03 (2 mL) y se extrajo con EtOAc (2x10 mL) . El extracto de EtOAc combinado se lavó con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó más . mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, cloroformo/metanol , 9/1) para dar N4- (3-aminofenil) - 6- (4-fenoxifenil)pirimidin-4, 6-diamina (87 mg, 37.8%) como un sólido café.
Etapa 2 A una solución de ácido propiónico (12 mg, 0.1 mmoles) en D F (0.6 mL) se le añadió HATU (92 mg, 0.2 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. A esto se le añadió (3-aminofenil) -}f- (4-fenoxifenil)pirimidin-4, 6-diamina (60 mg, 0.1 mmoles) seguido por DIPEA (41 mg, 0.3 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante 16 h. Se concentró bajo presión reducida. El residuo se diluyó con CH2C12 (5 mL) y se lavó con solución de NaHC03 (2 mL) , agua (2 mL) , y salmuera (2 mL) . Secado sobre Na2S04 seguido por concentración bajo presión reducida ofreció un residuo que se purificó mediante cromatografía en columna (Si(¾, 230-400, cloroformo/metanol : 9/1) para dar N- (3- (6- (4-fenoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil)propionamida (IR-10) como un sólido café. ¾ RMN (DMSO-ds) d ppm: 1.06 (t, J = 7.56 Hz, 3H) , 2.30 (q, J = 7.48 Hz, 2H) , 6.13 (s, 1H) , 6.94-6.99 (m, 4H) , 7.08 (t, J = 7.36 Hz, 1H) , 7.16-7.24 (m, 3H) , 7.36 (t, J = 7.44 Hz, 2H) , 7.54 (d, J = 8.88 Hz, 2H) , 7.81 (s, 1H), 8.23 (s, 1H) , 9.12 (s, 2H) , 9.81 (s, 1H) ; LCMS: m/e 426.3 (M+l) .
Ejemplo 34 Esquema de reacción 34a Cl etapa 1 etapa 2 Síntesis de (J?) -N- (3 - (6- (3 -cloro-fluorofenoxi) irimidin-4 -ilamino) fenil) -4- (dimetilamino) but 2-enamida (1-92) Etapa 1 Una solución de 3 - ( 6 -cloropirimidin- ilamino) fenilcarbamato de tert-butilo (1.6g, 5 mmoles) , 3-cloro-4-fluorofenol (1.4g, 10 mmoles) y carbonato de potasio (1.4g, 10 mmoles) en 15 mL de DMF se calentó a 120°C durante 16h. La mezcla de reacción se mezcló en 15 mL de agua, el producto crudo se precipitó, se filtró, se purificó mediante cromatografía por vaporización sobre gel de sílice con sistema de solvente MeOH/DCM para dar 750 mg (45% rendimiento) de NI- (6 -( 3-cloro-4 - fluorofenoxi ) pirimidin-4 -il ) bencen- 1 , 3 -diamina como un sólido blanquecino. MS (m/z) : MH+ = 331.
Etapa 2 Cloruro de oxalilo (155 mg, 1.2 mmoles) se le añadió por goteo a una mezcla de sal de HCl de ácido 4-N,N-dimetilaminocrotónico (200mg, 1.2 mmoles) en 5 mL de THF a 0°C. A esta mezcla se le añadió 3 gotas de DMF/solución de THF (hecho de 5 gotas de DMF en 1 mL de THF) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, después se enfrió a 0°C en baño de hielo. Una solución de N- (6- (3-cloro-4 - fluorofenoxi ) pirimidin-4 - il ) bencen- 1 , 3 -diamina (200mg, 0.6 mmoles) 2 mL de NMP) se le añadió a la solución de cloruro de dimetilaminocrotonilo y la mezcla resultante se agitó durante 3 h a 0°C. La reacción se enfrió rápidamente con 3 mL de NaOH 1N, y se extrajo con EtOAc (2 x 25 mL) . La mezcla de producto crudo se purificó mediante cromatografía por vaporización sobre gel de sílice con sistema de solvente MeOH/NH4OH/DCM para dar (E) -N- (3- (6- (3-cloro-4-fluorofenoxi ) irimidin-4 - ilamino) fenil) -4- (dimetilamino) but-2-enamida (1-92) como un sólido color claro. MS (m/z) : MH+ = 442, 444 (3:1), H-RMN (DMSO) d 10.08 (s, 1H) , 9.67 (s, 1H) , 8.36 (s, 1H) , 7.98 (s, 1H) , 7.59 (d, 1H) , 7.57 (t, 1H) , 7.53-7.24 (m, 4H) , 6.29 (b, 1H) , 6.23 (s, 1H) , 3.51 (d, 2H) , 2.21 (s, 6H) .
Ejemplo 35 Esquema de reacción 35a Síntesis de 1- (3 - (6- (3 -cloro-4-fluorofeniamino) pirimidin-4 -ilamino) pirrolidin-l-il) prop-2 -en-l-ona (1-70) Etapa 1 Una mezcla limpia de 3- ( 6 -cloropirimidin-4 -ilamino) pirrolidin-l-carboxilato de tert-butilo (354 mg, 1.18 mmoles) y 3 -cloro-4-f luoroanilina (3.03 g, 20.8 mmoles) se calentó a 140 °C durante 21 horas. Al enfriar a temperatura ambiente, la fusión se diluyó con EtOAc y la mezcla se agitó durante 1 hora. Un precipitado amorfo beige se recolectó, se lavó con agua y se secó al vacío a 50-60°C dando 292 mg (80%) de N4- ( 3 -cloro-4 - fluorofenil ) -N6- (pirrolidin-3-il) pirimidin-4,6-diamina. MS (APCI) : (M + 1) = 308, (M - 1) = 306.
Etapa 2 A una solución de IV4- (3-cloro-4-fluorofenil) -N6-(pirrolidin-3 -il) irimidin-4 , 6-diamina (287 mg, 0.93 mmoles) y trietilamina (0.32 ral, 2.33 mmoles) en THF anhidro (5 mi) bajo nitrógeno se le añadió cloruro de acriollo (91 µ?, 1.12 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró bajo presión reducida. El residuo se eluyó a través de una columna por vaporización (gel de sílice 60, 230-400 malla, 5% MeOH en EtOAc a 10% MeOH en EtOAc) para dar dos productos. El producto menos polar (Rf = 0.24 en 1 : 9 MeOH : EtOAc) se encontró que es un análogo diacrilatado . El producto más polar (Rf = 0.14 en 1 : 9 MeOH : EtOAc) fue 1- (3- (6- (3-cloro-4-fluorofeniamino) pirimidin-4-ilamino) irrolidin-l-il) prop-2-en-l-ona (1-70) . MS (APCI) (M + 1)+ = 362, (M - 1)+ = 360: XH-RMN (DMSO-d6) d 9.11 (s, 1H) , 8.14 (s, 1H) , 7.92 (d, 1H) , 7.38-7.23 (m, 3H) , 6.58-6.48 (m, 1H) , 6.13-6.08 (m, 1H) , 5.75 (d, 1H) 5.63-5.59 (m, 1H) , 3.64-3.59 (m, 2H) , 2.17-1.81 (m, 6H) .
Ejemplo 36 Esquema de reacción 36a Síntesis de 1- (3- (6- (3-cloro-4-fluorofeniamino) irimidin-4 -ilamino) iperidin- 1-il) rop-2 -en-1-ona (1-71) Etapa 1 N- (3-Cloro-4-fluorofenil) -N-piperidin-3 - il pirimidin-4 , 6 -diamina .
H H Una mezcla de 3- (6-cloropirimidin-4-ilamino) piperidin-l-carboxilato de tert-butilo (295 mg, 0.94 mmoles) y 3 -cloro-4 - fluoroanilina (2.83 g, 19.4 mmoles) se calentó limpio a 140°C durante 19 horas. Al enfriar, la fusión se agitó en EtOAc y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 1 hora. El precipitado se recolectó, se lavó con EtOAc y se secó para dar 256 mg (85%) de N- ( 3 -cloro-4 -fluorofenil ) -N6 - (piperidin-3 - il ) irimidin-4 , 6 -diamina, un sólido amorfo violeta-grisáceo. MS (APCI) : (M + 1)+ = 322.
Etapa 2 A una solución de N4- (3-cloro-4-fluorofenil) -N6- (piperidin- 3 - il ) pirimidin-4 , 6 -diamina (251 mg, 0.78 mmoles) y trietilamina (0.27 mi, 1.95 mmoles) en THF anhidro (7 mi) bajo nitrógeno se le añadió cloruro de acriollo (76 µ?, 0.94 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró bajo presión reducida. El residuo se eluyó a través de una columna por vaporización (gel de sílice 60, 230-400 malla con 5% MeOH en EtOAc para dar dos productos. El producto menos polar (Rf = 0.33 en 1 : 9 MeOH : EtOAc) se encontró que es un análogo diacrilatado . El producto más polar (Rf = 0.24 en 1 : 9 MeOH : EtOAc) fue 1- (3- (6- (3-cloro-4-fluorofenilamino) pirimidin-4-ilamino) piperidin-l-il) prop-2-en-l-ona (1-71) . MS (APCI) (M + 1)+ = 376, (M - 1)+ = 374: 1H-RMN DMSO-d6( d 9.15 (br s, 1H) , 8.18 (d, 1H) , 7.95 (br s, 1H) , 7.43-7.20 (m, 2H) , 7.03-6.48 (m, 3H) , 6.26-5.97 (m, 2H) , 5.86-5.51 (m, 3H) , 3.90-3.66 (m, 2H) , 1.98-1.66 (m, 2H) , 1.59-1.12 (m, 2H) .
Ejemplo 37 Esquema de reacción 37a Síntesis de N- (6 - (6- (2 , 3 -dihidrobenzo [b] [1, 4] dioxin-6-iloxi) pirimidin-4-ilamino) iridin-2-il) acrilamida (1-95) Etapa 1 A una solución agitada de 2,3-dihidrobenzo [£>] [1, 4] dioxina-6-carbaldehído (1 g, 6.09 mmoles) en CH2C12 (16 mL) se le añadió m-CPBA (4.204 g, 24.36 mmoles) .
La suspensión se calentó a 50°C durante 2 días, se enfrió a temperatura ambiente, se enfrió rápidamente con solución de NaHC03 saturada y se extrajo con CH2C12 (3x10 mL) . El extracto combinado se concentró bajo presión reducida, y después se disolvió en MeOH que contenía NaOH. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, se hizo ácida con HC1 y se extrajo con acetato de etilo (3x10 mL) . El extracto combinado se lavó con saturated solución de NaHC03 y salmuera, se secó sobre anhidrous Na2S0 , se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en CH2C12 y se filtró. La solución de DCM se secó sobre Na2S04 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar 2,3-dihidrobenzo [d] [1, 4] dioxin-6-ol (0.591 g, 63%) como un líquido aceitoso café rojizo.
Etapa 2 Una mezcla agitada de 2,3-dihidrobenzo [6] [1, 4] dioxin-6-ol (0.137 g, 0.90 mmoles), Cs2C03 (0.734 g, 2.25 mmoles), Cul (0.02 g, 10% p/p) , y N2- (6-cloropirimidin-4 -il ) piridin-2 , 6 -diamina (0.29 g, 0.90 mmoles) en NMP (1 mL) se calentó a 100 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y lentamente se le añadió a agua desmineralizada. El sólido que se precipitó se recolectó mediante filtración y se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, éter pet/acetato de etilo, 7/3) para dar N2- ( 6 - ( 2 , 3 -dihidrobenzo [Jb] [1 , 4] dioxin- 6 -iloxi ) iriraidin-4 - il) iridin-2 , 6 -diamina (0.088 g, 29%) como sólido amarillo.
Etapa 3 A una solución agitada de N2- (6- (2, 3-dihidrobenzo [¿] [1 , 4] dioxin- 6 - iloxi) pirimidin-4 - il ) piridin- 2,6-diamina (0.080 g, 0.23 mmoles) y carbonato de potasio (0.065 g, 0.47 mmoles) en NMP (0.8 mL) a 0°C se le añadió cloruro de acriollo (0.026 g, 0.29 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a 0o C durante 30 min. La mezcla de reacción se le añadió por goteo a una solución agitada fría de NaHC03 al 10% y se agitó a 0°C durante 30 min. Un sólido blanco se aisló mediante filtración. El sólido se lavó con agua fría y hexano y se disolvió en 2 mL de metanol/diclorometano (l/l) . Esta solución se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se suspendió en agua fría (5 mL) , Et3N se le añadió y se extrajo con acetato de etilo (2 x 5 mL) . El extracto de acetato de etilo combinado se lavó con agua (2 mL) y salmuera (2 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida para obtener N- (6- (6- (2 , 3 -dihidrobenzo [b] [1, 4] dioxin-6-iloxi) pirimidin-4-ilamino) piridin-2-il) acrilamida (1-95) como a sólido amarillo claro. XH R N (DMS0-d6) d ppm: 4.25 (s, 4H) , 5.79 (dd, J = 1.84 & 10.08 Hz, 1H) , 6.30 (dd, J = 1.84 & 16.96 Hz, 1H) , 6.62-6.72 (m, 3H) , 6.88 (d, J = 8.72 Hz , 1H) , 7.03 (d, J = 7.84 Hz, 1H) , 7.69 (t, J = 7.96 Hz , 1H) , 7.70 (d, J = 7.84 Hz, 1H) , 7.85 (s, 1H) , 8.32 (d, J = 0.4 Hz , 1H) , 10.16 (s, 1H) , 10.47 (s, 1H) ; LCMS : m/e 392.
Ejemplo 38 Síntesis de N- (3 - (6 - (4 - fenoxifenoxi) irimidin-4 -ilamino) fenil) acrilamida (1-97) 1-97 El compuesto del título se preparó de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas e intermediarios descritos abaj o . etapa-2 B Cl 5 etapa-3 A) Cs2C03, DMF, 80°C, 16 h; B) TFA, CH2Cl2, temperatura ambiente, 16 h; C) K2C03, NMP, 0°C, 60 min.
Etapa 1 A una solución agitada de 2 (4.35 g, 23.38 mmoles) y Cs2C03 (15.26 g, 46.76 mmoles) en DMF seco (50 mL) se le añadió 1 (5.0 g, 15.58 mmoles) a temperatura ambiente y la reacción se agitó a 80°C durante 16 h bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió, se concentró bajo presión reducida y el residuo se diluyó con acetato de etilo (50 mL) . Se lavó con agua (2x10 mL) , salmuera (10 mL) , se secó sobre Na2S0 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, éter pet/acetato de etilo, 5/5) para dar 3 (1.6 g, 23.3%) como sólido café.
Etapa 2 A una solución agitada de 3 (1.6 g, 3.9 mmoles) en CH2Cl2 seco (8 mL) a 0°C se le añadió CF3COOH (4.8 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 min. La reacción se dejó llegar a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. Se concentró bajo presión reducida y el residuo se enfrió rápidamente con solución de NaHC03 (15 mL) . Los contenidos se extrajeron con acetato de etilo (3x15 mL) y los extractos combinados se lavaron con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) , se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para dar 4 (1.2 g, 99%) como a sólido amarillo claro.
Etapa 3 H 1-97 A una solución agitada de 4 (1.2 g, 3.23 mmoles) y carbonato de potasio (2.237 g, 16.19 mmoles) en NMP (12 mL) a 0°C se le añadió cloruro de acriollo (0.322 g, 3.56 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 60 min La mezcla de reacción se le añadió por goteo a una solución en agitación, fría de NaHC03 al 10% y se agitó a la misma temperatura (0°C) durante 30 min. Un sólido se precipitó y se aisló mediante filtración a través de un embudo Buchner. Se lavó con agua fría y hexano, se disolvió en una mezcla de metanol/diclorometano (50:50, 5 mL) , y se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se suspendió en agua fría (10 mL) , Et3N se le añadió, y se extrajo con acetato de etilo (2x10 mL) . El extracto de acetato de etilo combinado se lavó con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) , se secó sobre Na2S0 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, metanol/cloroformo : 10/90) para dar el compuesto del título (0.83 g, 60.3 %) como un sólido verde claro. 1H RMN (DMSO-de) d ppm: 5.74 (dd, J = 1.92 & 10.04 Hz, 1H) , 6.16 (s, 1H) , 6.24 (dd, J = 1.92 & 16.92 Hz, 1H) , 6.45 (dd, J = 10.08 & 16.96 Hz, 1H) , 7.03-7.09 (m, 4H) , 7.16 (t, J = 7.30 Hz, 1H) , 7.20-7.26 (m, 3H) , 7.30-7.35 (m, 2H) , 7.39-7.44 (m, 2H) , 7.98 (s, 1H) , 8.36 (s, 1H) , 9.62 (s, 1H) , 10.15 (s, 1H) ; LCMS : m/e 425.2 (M+ 1).
Ejemplo 39 Síntesis de N- (3- (morfolin-4-carbonil) -5- (6- (4-fenoxifenoxi) irimidin-4 -ilamino) fenil) acrilamida (1-100) 1-100 El compuesto del título se preparó de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas e intermediarios descritos aba j o .
A) K2C03 , DMF , temperatura ambiente, 16 h; B) HC1 conc , E t OH , 90°C, 10 h( tubo de presión; C) EDC1.HC1 , HOBT, DI PEA , DMF, temperatura ambiente, 18 h; D) K2C03, NMP, 0°C, 30 min.
Etapa 1 3 A una solución en agitación de 1 (2.0 g, 10.75 mmoles) y K2C03 (2.96 g, 21.5 mmoles) en DMF seco (20 mL) se le añadió 2 (1.59 g, 10.75 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h bajo atmósfera de nitrógeno. Se enfrió, se extinguió con agua (100 mL) y se extrajo con EtOAc (2x50 mL) . El extracto de EtOAc combinado se lavó con solución de NaHC03 al 10% (50 mL) , agua (3x50 mL) , salmuera (50 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida para dar 3 (1.92 g, 60.0%) como un sólido amarillo claro, que se usó en la siguiente etapa sin purificaciones adicionales.
Etapa 2 COOH A una solución de 3 (0.5 g, 1.678 mmoles) en etanol (10 mL) se le añadió HC1 conc . (0.172 g, 1.678 mol) y 4 (1.27 g, 8.34 mol) . La mezcla de reacción se agitó en un tubo sellado a presión durante 10 h a 90°C. La reacción se enfrió, se extinguió con agua (50 mL) y se extrajo con EtOAc (2x25 mL) . Los extractos combinados se lavaron con solución de ácido cítrico al 5% (25 mL) , agua (25 mL) , salmuera (25 mL) , se secaron sobre Na2S0 y se concentraron bajo presión reducida para obtener 5 (0.4 g, 57.53%) como un sólido café.
Etapa 3 A una solución agitada de 5 (0.15 g, 0.362 mmoles) en DMF (6 mL) se le añadió morfolina (0.095 g, 1.085 mmoles) , EDCI HC1 (0.104 g, 0.542 mmoles), HOBT (0.0049 g, 0.036 mmoles) y DIPEA (0.07 g, 0.543 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h bajo atmósfera de nitrógeno. Se diluyó con agua fría (30.0 mL) y se extrajo con EtOAc (2x25 mL) . Los extractos combinados se lavaron con agua (2x15 mL) , salmuera (10 mL) , se secaron sobre Na2S04 y se concentraron bajo presión reducida para dar 6 crudo. El residuo crudo se purificó más mediante cromatografía en columna (Si02, MeOH/Cloroformo : 2/98) para obtener 6 (0.075 g, 42.87%) como un sólido café.
Etapa 4 1-100 I \ O A una solución agitada de 6 (0.09 g, 0.186 mmoles) y carbonato de potasio (0.128 g, 0.93 mmoles) en NMP (1.5 mL) a 0°C se le añadió 7 (0.021 g, 0.232 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 min. La mezcla de reacción se le añadió por goteo a una solución en agitación, fría de NaHC03 al 10% y se agitó a la misma temperatura (0°C) durante 5 min. Se precipitó un sólido que se aisló mediante filtración a través de un embudo Buchner. El sólido se lavó con agua fría, hexano y se disolvió en una mezcla de metanol/diclorometano (50:50, 5 mL) y se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se suspendió en agua fría (5 mL) , Et3 se le añadió, y se extrajo con acetato de etilo (2x15 mL) . Los extractos combinados se lavaron con agua (10 mL) , salmuera (10 mL) , se secaron sobre Na2S04 y se concentraron bajo presión reducida para dar el compuesto del título (0.08 g, 79.95%) como como un sólido café pálido. ¾ RMN (DMSO-ds) d ppm: 3.62 (bs, 8H) , 5.79 (dd, J = 1.6 & 10.4 Hz, 1H) , 6.18 (s, 1H) , 6.28 (dd, J = 1.6 & 16.8 Hz, 1H) , 6.41-6.50 (m, 1H) , 7.05-7.10 (m, 4H) , 7.17 (t, J = 7.2 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.39 (s, 1H) , 7.43 (t, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.51 (s, 1H), 8.0 (s, 1H), 8.41 (s, 1H) , 9.79 (s, 1H) , 10.31 (s, 1H) ; LC S : m/e 538.2 (M+ 1) .
Ejemplo 40 Síntesis de 3 -acri lamido-W- (2-metoxietil) -5- (6- (4-fenoxifenoxi) irimidin-4 -ilamino) benzamida (1-102 ) O I [-102 El compuesto del título se preparó de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas e intermediarios descritos en el Ejemplo 39, al usar 2-metoxietilamina en la Etapa 3. XH RMN (DMSO-ds) d ppm: 3.25 (s, 3H) , 3.30-3.50 (m, 4H) , 5.76 (dd, J = 1.84 & 10.08 Hz, 1H) , 6.17 (s, 1H) , 6.27 (dd, J = 1.88 & 16.96 Hz, 1H) , 6.46 (dd, J = 10.12 & 16.92 Hz, 1H) , 7.03-7.09 (m, 4H) , 7.16 (dt, <J = 0.88 & 7.4 Hz, 1H) , 7.22 (td, J = 3.28 & 9.96 Hz, 2H) , 7.41 (dt, J" = 1.92 & 7.6 Hz, 2H) , 7.70 (d, J = 1.64 Hz, 2H) , 8.17 (s, 1H) , 8.38 (s, 1H) , 8.42 (t, J = 5.28 Hz, 1H) , 9.75 (S, 1H) , 10.30 (s, 1H) ; LCMS : m/e 526.2 (M+l) .
Ejemplo 41 Síntesis de N- (3 -( 6 - (4 - fenoxifeniltio) irimidin- 4-ilamino) fenil) acrilamida (1-103) H 1-103 El compuesto del título se preparó de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas e intermediarios descritos abaj o .
A) K2C03, DMF, 110°C, 16 h; B) TFA, CH2C12, temperatura ambiente, 16 h; C) 5, K2C03, NMP, 45 min, temperatura ambiente.
Etapa 1 H 3 A una solución en agitación de 2 (0.25 g, 1.235 mmoles) y K2C03 (0.512 g, 3.705 mmoles) en DMF seco (2.5 mL) se le añadió 1 (0.320 g, 1.235 mmoles) a temperatura ambiente, y la reacción se agitó a 110°C durante 16 h bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con agua y se extrajo con acetato de etilo (3x5 L) . Los extractos combinados se lavaron con agua (2x25 mL) , salmuera (25 mL) , se secaron sobre Na2S04 y se concentraron bajo presión reducida para dar 3 (0.130 g, 21 %) como un sólido blanco, que se usó en la siguiente etapa sin purificación.
Etapa 2 A una solución agitada de 3 (0.170 g, 0.349 mmoles) en CH2C12 seco (2 mL) a 0°C se le añadió CF3COOH (1 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 min. La reacción se dejó llegar a temperatura ambiente y se le agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo se enfrió rápidamente con solución de NaHC03 (8 mL) . Los contenidos se- extrajeron con acetato de etilo (3x5 mL) y los extractos combinados se lavaron con agua (5 mL) , salmuera (5 mL) , se secaron sobre Na2S04, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (Si02, 60-120, producto siendo eluido en 3% metanol /cloroformo ) para dar 4 (0.100 g, 74%) .
Etapa 3 A una solución agitada de 6 (0.095 g, 0.24 mmoles) y carbonato de potasio (0.169 g, 1.22 mmoles) en NMP (0.95 mL) a 0°C se le añadió 7 (0.024 g, 0.27 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 min. La mezcla de reacción se le añadió por goteo a una solución en agitación, fría de NaHC03 al 10% y se agitó a la misma temperatura (0°C) durante 5 min. Se precipitó un sólido y se aisló mediante filtración a través de un embudo Buchner. El sólido se lavó con agua fría y hexano, se disolvió en una mezcla de metanol/diclorometano (50:50, 5 mL) , y se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se suspendió en agua fría (5 mL) , Et^ se le añadió, y se extrajo con acetato de etilo (2x15 mL) . El extracto de acetato de etilo combinado se lavó con agua (10 mL) , salmuera (10 mL) , se secó sobre Na2S04 y se concentró bajo presión reducida para obtener más para dar el compuesto del título (61 mg, 56%) como un sólido amarillo. "? R N (DMSO-dg) d ppm: 5.75 (dd, J = 1.96 & 10.04 Hz, 1H) , 6.19 (d, J = 0.84 Hz, 1H) , 6.25 (dd, J = 2 & 16.92 Hz, 1H) , 6.45 (dd, J = 10.08 S 16.96 Hz, 1H) , 7.11-7.15 (m, 4H) , 7.20-7.30 (m, 4H) , 7.48 (dt, J = 1.88 & 6.56 Hz, 2H) , 7.65· (dd, J = 2.04 & 6.64 Hz, 2H) , 7.97 (s, 1H) , 8.41 (d, J = 0.56 Hz, 1H) , 9.55 (s, 1H) , 10.15 (s, 1H) ; LCMS : m/e 441 (M+ 1).
Ejemplo 42 Síntesis de N- (2-morfolino-5- (6- (4-fenoxifenoxi) irimidin-4-ilamino) fenil) acrilamida (1-101) 1-101 El compuesto del título se preparó de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas e intermediarios descritos abaj o .
O Cl etapa- 1 etapa-2 NH2 NH, 02N^^N^N^ etaPa" 3 JL JL H ^ H2N N? Nj 6 c,^ jfy°Y^ etapa-4 D HNI -101 A) THF, reflujo, 18 hr; B) Pd(OAc)2, X-Phos, CsC03 , dioxano, reflujo, 12 hr; C) Pd/C, H2, temperatura ambiente, 12 hr; D) DEIA, THF, -10°C.
Etapa 1 O N R NH2 4-Fluoro-3-nitroanilina (1, 1 g, 1 equiv.) y morfolina (1.67 g, 3 equiv.) se disolvieron en THF (10 mL) . La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante la noche. Después de en riamiento, se le añadió agua/salmuera (10 mL) , la mezcla se agitaron, y las capas se separaron. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, y el solvente se removió mediante evaporación giratoria. El material se purificó mediante cromatografía por vaporización usando 0-40% gradiente de heptane/EtOAc para dar 800 mg de 3 como un sólido anaranjado-rojo. 2 4-Cloro-6- (4-fenoxifenoxi) pirimidina (4, 200 mg, 1 equiv.) y 3 -nitro-4 -morfolinoanilina (164 mg, 1.1 equiv.) se disolvieron en dioxano (5 mL) . La solución se desgasificó durante 1 min. Acetato de paladio (22 mg, 5 mol%) , ligando X- Phos (39 mg, 10 mol%) y CSC03 (436 mg, 2 equiv.) se añadieron en ese orden. La suspensión se desgasificó durante 1 min y se colocó bajo una atmósfera de argón, y la mezcla se calentó a reflujo durante 12 h. Después de enfriamiento, solvente se removió mediante evaporación giratoria. El aceite oscuro se dividió entre agua/salmuera y EtOAc (5 mL cada uno) , se agitó, se filtró precipitado, y se separaron las capas del filtrado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio. El solvente se removió mediante evaporación giratoria para dar un aceite oscuro. El aceite se purificó mediante cromatografía por vaporización usando 0-30% gradiente de heptano/EtOAc para dar 100 mg de 5 como un sólido anaranj adorojo .
Etapa 3 6 Una cantidad catalítica de Pd/C al 10% se le añadió a una solución de 5 (100 mg) en EtOH (3 mL) . Usando un globo, se introdujo hidrógeno, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite, y el filtrado se concentró mediante evaporación giratoria para dar 6 como una pélicula morado oscuro.
Etapa 4 Una solución de 6 (100 mg, 1 equiv.) en THF (4 mL) se enfrió en agua/baño de hielo-MeOH -10°C. Cloruro de acriloilo se le añadió a la solución (18.6 µ??, 1.05 equiv.) y se agitó durante 10 min, después se le añadió base de Hunig (31.7 yL, 1.05 equiv.) y se agitó durante 10 min. Agua/salmuera (5 mL) se le añadió, se agitó y las capas se separaron. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio. El solvente se removió mediante evaporación giratoria para dar un aceite oscuro. El aceite se purificó mediante cromatografía por vaporización usando 30-80% heptano/EtOAc gradiente para dar el compuesto del título como una película roja. LC/MS (RT = 3.029/(M + H) ) 510.2 Ejemplo 43 Síntesis de 1- ( 6 - ( 6 - (3 -clorofenoxi ) irimidin- 4 - ilamino) -2 , 2 -dimetil-2H-benzo [b] [1,4] oxazin-4 (3H) -il) rop-2 - en-l-ona (1-104) 1-104 El compuesto . del título se preparó de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas e intermediarios descritos en el Ejemplo 42, al omitir la Etapa 1, usando 4-ter- butilcarboxi-6-amino-2 , 2-dimetil-2H-benzo [b] [1,4] oxazina en la Etapa 2 y usando TFA en CH2C12 en lugar de hidrogenación en la Etapa 3. LC/MS (RT = 3.035/(M + H) ) 437.1 Ejemplo 44 Síntesis de N- (2-morfolino-5- (6- (3-clorofenoxi) pirimidin-4-ilamino) fenil) acrilamida (1-105) O^^O O^NH |^0 H 1-105 El compuesto del título se preparó de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas e intermediarios descritos en el Ejemplo 42 al usar 4-cloro-6- (3-clorofenoxi) irimidina en lugar de 4 en Etapa 2. LC/MS (RT = 2.957/ (M + H) ) 452.1.
Ejemplo 45 Síntesis de N1- (4 - ( ( (E) -4 - (3 - ( 6 - (3 -cloro- 4 -fluorofenilamino) irimidin-4-ilamino) -4 -metoxifenilamino) -4-oxobut-2 -enil) (metil) amino)butil) -N5- (15-oxo-19-( (3aS,4S, 6aR) -2 -oxohexahidro- 1H- tieno [3,4-d] imidazol-4-il) -4,7, 10 -trioxa-14 -azanonadecil) glutaramida (1-99) 1-99 El compuesto del título se preparó de acue con los esquemas de reacción, etapas, intermediarios descritos abajo.
A) 2, HATU, DIPEA, DMF; B) 4, K2C03 , acetona; C) TFA, DCM; D) N-biotinil-NH-PEG2-COOH»DIPEA, EDCI , HOBt , M , DMF Etapa 1 La preparación de N4- (5-amino-2-metoxi enil) -N6- (3-cloro-4-f luorofenil)pirimidin-4 , 6-diamina (1) se describió en el Ejemplo 7 (Int-G) . A una solución agitada de 1 (150 mg, 0.41 mmoles) en DMF (8 mL) se le añadió 2 (137 mg, 0.83 mmoles) , HATU (317 mg, 0.83 mmoles) y DIPEA (215 mg, 1.67 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h a temperatura ambiente. Después de la finalización de la reacción (monitoreada por TLC) , la mezcla cruda se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (4 x 100 mL) . Las capas orgánicas se secaron sobre Na2S04 anhidro y se concentraron bajo vacío para dar 3 (100 mg, 47.3%) como sólido blanquecino, que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. 1H RMN (CDC13, 500 Hz) : d 8.35 (s, 1H) , 8.12 (s, 1H) , 7.48 - 7.43 (m, 1H) , 7.24 (s, 1H) , 7.16 - 7.10 (m, 2H) , 7.03 (s, 1H) , 6.84 (t, J = 9.0 Hz, 2H) , 6.49 (s, 1H) , 6.15 (s, 1H) , 5.29 (s, 1H) , 3.85 (s, 3H) , 3.33 (d, J = 5.0 Hz, 2H) , 2.80 (s, 3H) . Masa: m/z 506 (M++1) .
Etapa 2 A una solución agitada de 3 (300 mg, 0.59 mmoles) y 4 (179 mg, 0.89 mmoles) en acetona (25 mL) se le añadió K2C03 (163 mg, 1.88 mmoles) a temperatura ambiente, y la mezcla de reacción se agitó durante 18 h a temperatura ambiente'. Después de la finalización de la reacción (monitoreada por TLC) , la mezcla de reacción se diluyó con agua (200 mL) y se extrajo con EtOAc (7 x 100 mL) . Las capas orgánicas se lavaron con agua (4 x 100 mL) , se secaron sobre Na2S04 anhidro y se concentró bajo vacío.
El compuesto crudo se purificó mediante cromatografía en columna para dar 5 (205 mg, 55.1%) como sólido blanquecino. *H RMN (DMS0-d6, 500 MHz) : d 9.91 (s, 1H) , 9.24 (s, 1H) , 8.41 (s, 1H) , 8.23 (s, 1H) , 7.95 (dd, J = 2.5, 6.5 Hz, 1H) , 7.90 (s, 1H) , 7.47 (dd, J = 2.5, 9.0 Hz , 1H) , 7.47 - 7.41 (m, 1H) , 7.30 (t, J = 9.0 Hz, 1H) , 7.00 (d, J = 9.0 Hz, 1H) , 6.80 - 6.76 (m, 1H) , (dt, J = 5.5, 16.0 Hz, 1H) , 6.23 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 6.00 (s, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 3.09 (d, J = 5.5 Hz, 2H) , 2.93 - 2.87 (m, 2H) , 2.29 (t, J" = 6.5 Hz, 2H) , 2.13 (s, 3H) , 1.42 - 1.32 (m, 13H) . Masa: m/z 628 (M++l) .
Etapa 3 TFA (0.5 mL) se le añadió a una solución de 5 en DCM seco (1 mL) . Después de agitación 2 h a temperatura ambiente, la mezcla se concentró bajo presión reducida para dar 6. El residuo se usó en la siguiente etapa sin purificación.
Etapa 4 El residuo 6 de la Etapa 3 se diluyó en DMF seco (1 mL) , y HOBt (10.2 mg) , EDCI (14.5 mg) , N-biot inil-NH-PEG2-COOH DIPEA (52.1 mg) , y se le añadió N-metil morfolina (23 uL) . La mezcla resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El producto crudo se inyectó directamente a HPLC semi-prep (modificador TFA) y dio un sólido blanco como una sal TFA. 1H RMN (DMS0-d6) d ppm: 10.2 (s, 1H) , 9.66 (s, 1H) , 9.60 (br, 1H) , 9.08 (br, 1H) , 8.25 (s, 1H) , 7.78 (m, 3H) , 7.68 (dd, J = 5.5 & 11.4 Hz , 2H) , 7.43 (dd, J = 2.3 & 8.7 Hz, 1H) , 7.30 (m, 2H) , 7.00 (d, J" = 9.2 Hz, 1H) , 6.64 (m, 1H) , 6.36 (d, J = 15.1 Hz, 1H) , 6.28 (m, 1H) , 5.93 (s, 1H) , 4.21 (dd, J = 4.6 & 7.8 Hz, 1H) , 4.03 (dd, J = 4.6 & 7.8 Hz, 1H) , 3.89 (m, 1H) , 3.71 (s, 3H) , 3.38 (m, 9H) , 3.28 (t, J = 6.4 Hz , 4H) , 2.97 (m, 9H) , 2.71 (dd, J = 5.0 & 12.4 Hz, 1 H) , 2.66 (d, J = 4.1 Hz , 3H) , 2.47 (d, J = 12.4 Hz, 1H) , 1.95 (m, 6H) , 1.1-1.6 (m, 13H) ; LCMS : m/e 1070.4 (M+l) . 4 - (Metilamino) butilcarbamato de tert-butilo (4) se preparó mediante el esquema de reación mostrado abajo. etapa-1 0H etapa-2 _^\/\^OMs etapa-3 ^/ ^^ H locHN'— BocHN *- BocHN B C 4 A) (Boc)20, TEA, DCM; B) MsCl, TEA, DCM; C) MeNH2, EtOH.
Etapa 1 A una solución agitada de 4 -aminobutanol (5 g, 56.0 mmoles) en DCM (100 mL) se le añadió anhídrido Boc (12.2 g, 56.0 mmoles) y TEA (7.7 mL, 56.0 mmoles) a 0°C y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 8 h. Después de la finalización de la reacción (monitoreada por TLC) , la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con DCM (3 x 25 mL) . Las capas orgánicas se secaron sobre Na2S04 anhidro y se concentró bajo vacío. El compuesto crudo se purificó mediante cromatografí en columna para dar 4-hidroxibutiIcarbamato de tert-butilo (6.0 g, 56.6%) como líquido viscoso incoloro. XH RMN (CDC13, 200 MHz) : d 4.63 (bs, 1H) , 3.72 - 3.60 (m, 2H) , 3.23 - 3.08 (m, 2H) , 1.99 - 1.50 (m, 4H) , 1.43 (s, 9H) .
Etapa 2 A una solución agitada de 4 -hidroxibutilcarbamato de tert-butilo (7 g, 37.0 ramoles) en DCM (100 raL) se le añadió TEA (9.35 mg, 92.5 mmoles) seguido por cloruro de metansulfonilo (5.09 g, 44.4 mmoles) sobre un periodo de 20 minutos a 0°C. La mezcla de reacción se agitó más durante 18 h a temperatura ambiente. Después de la finalización de la reacción (monitoreada por TLC) , la mezcla de reacción se diluyó con agua (100 mL) y se extrajo con DCM (3 x 30 mL) . Las capas orgánicas se secaron sobre Na2S04 anhidro y se concentraron bajo vacío. El compuesto crudo se purificó mediante cromatografía en columna para dar metansulfonato de (4-tert-butiloxicarbonilamino) -butilo (5 g, 52.2%) como líquido viscoso amarillo claro. ¾ RMN (CDC13, 200 MHz) : d 4.62 (bs, 2H) , 4.25 (t, J = 6.0 Hz , 2H) , 3.14 (q, J" = 6.6 Hz, 2H) , 3.01 (s, 3H) , 1.85 - 1.70 (m, 2H) , 1.78 - 1.54 (m, 2H) , 1.44 (s, 9H) . Masa: m/z 168 (M++l-Boc) .
Etapa 3 A una solución agitada de metansulfonato de (4-tert-butiloxicarbonilamino) -butilo (5 g, 18.7 mmoles) en etanol (25 mL) se le añadió metilamina (25 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h a temperatura ambiente. Después de la' finalización de la reacción (monitoreada por TLC) , los materiales volátiles se removieron bajo presión reducida para dar 4 - (metilamino) butilcarbamato de tert-butilo (4) (3.4 g, 89.9%) como líquido viscoso incoloro. El compuesto crudo se usó en la siguiente etapa sin más purificación. XH RMN (CDC13, 200 MHz) : d 5.15 (bs, 2H) , 3.22 - 3.10 (m, 2H) , 2.95 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 2.70 (s, 3H) , 1.90 - 1.70 (m, 2H) , 1.88 - 1.50 (m, 2H) , 1.43 (s, 9H) .
Ejemplo 46 Preparación de N1- (4- (metil ( (B) -4-oxo-4- (6- (6-( fenilamino) pirimidin-4 -ilamino) iridin-2 -ilamino) but-2 -enil) amino) buril) -N5- (15-oxo-19- ( (3aS, 4S, 6aR) -2 -oxohexahidro-lH-tieno [3 , 4-d] imidazol-4-il) -4,7, 10-trioxa-14-azanonadecil) glutaramida (1-116) 1-116 El compuesto del título se puede preparar de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas, e intermediarios descritos en el Ejemplo 45 al usar N4- (6-aminopiridin-2-il) -N6- fenilpirimidin-4 , 6-diamina en lugar de 1 en la Etapa 1. La síntesis de N4- (6-aminopiridin-2-il) -N6-fenilpirimidin-4 , 6-diamina se describe en el Ejemplo 14, y N4- (6-aminopiridin-2-il) -N6-fenilpirimidin-4 , 6-diamina se describe como un intermediario en la preparación de 1-73 en el Ejemplo 15.
Ejemplo 47 Preparación de N1- (4- ( ( (£) -4- (3- (6- (3-cloro-4-fluorofenoxi)pirimidin-4-ilamino) fenilamino) -4-oxobut-2-enil) (metil) amino) buril) -N5- (15-oxo-19- ( (3aS, 4S, 6aR) -2 -oxohexahidro-lH- tieno [3 , 4-d] imidazol-4 -il) -4,7,10- trioxa- 14 -azanonadecil) glutaramida (1-117) 1-117 El compuesto del título se puede preparar de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas, e intermediarios descritos en el Ejemplo 45 al usar N1-^-^-cloro-4 - f luorofenoxi ) irimidin-4 - il) bencen- 1 , 3 -diamina en lugar de 1 en la Etapa 1. La síntesis de N1- (6- (3-cloro-4-fluorofenoxi) irimidin-4 -il) bencen-1 , 3 -diamina se describe en el Ejemplo 34 en la preparación de 1-92.
Ejemplo 48 Preparación de N1- (4 - ( ( { E) - 4- (3 - (6 - ( 3 -bromofenilamino) irimidin-4-ilamino) fenilamino) -4-oxobut-2-enil) (metil) amino)butil) -N5- (15-oxo-19- ( (3aS, S, 6aR) -2-oxohexahidro-??- tieno [3 , 4-d] imidazol-4 -il) -4,7, 10- trioxa-14-azanonadecil) glutaramida (1-120) Br O 1-120 El compuesto del título se puede preparar de acuerdo con los esquemas de reacción, etapas, e intermediarios descritos en el Ejemplo 45 al usar 3- [6- (3-bromofenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] -fenilamina en lugar de 1 en Etapa 1. La síntesis de 3- [6- (3 -bromofenilamino) -pirimidin-4 - ilamino] - fenilamina se describe en el Ejemplo 1, y 3 - [6 -( 3 -bromofenilamino) -pirimidin- - ilamino] -fenilamina se describe como un intermediario en la preparación de 1-1 en el Ej emplo 3.
Los ensayos descritos a continuación se utilizan para medir la actividad biológica de los compuestos proporcionados como inhibidores de ErbBl (EGFR), ErbB2 , ErbB4, TEC, BTK, ITK, BMX, y JAK3.
Ejemplo 49 Clonación, expresión y purificación de mutante de EGFR-WT y EGFR C797S usando baculovirus y células de insecto (i) Subclonación de EGFR-WT y dominios de ciñasa mutantes Los aminoácidos 696 a 1022 del dominio de cinasa EGFR-WT (NM_005228, NP_005219.2) fueron subclonados en los sitios Ncol y HindIII del vector pFastHTa (Invitrogen, Carlsbad, CA) . Para elaborar la proteína EGFR-mutante, la cisteína en la posición 797 se cambió por una serina usando el kit Stratagene QuikChange (Stratagene, Cedar Creek, TX) , de acuerdo con las instrucciones del fabricante. (ii) Expresión Grupos de baculovirus Pl se generaron en células SF9 mediante protocolo de transfección de suspensión de Blue Sky Biotech (Worcester, MA) . El análisis de expresión se llevó a cabo en un cultivo de 125 mi de células de insectos SF21 (cultivadas en SF9001 SFM (Invitrogen cat#10902 - 088 ) , complementado con 10 mg/L de gentamicina (Invitrogen, Carlsbad, CA, cat#15710-064) ) usando una carga viral de 0.1 mi de virus por 100 mi de suspensión celular. La expresión se optimizó usando el sistema Blue Sky Biotech's Infection Kinetics Monitoring (Worcester, MA) . (iii) Purificación Células de insecto infectadas fueron sedimentadas. Los sedimentos de células fueron resuspendidos en regulador de pH de lisis de Blue Sky Biotech (Worcester, MA, IX WX; regulador de pH de solubilización, que contenía un coctel inhibidor de proteasa de leupeptina, pepstatina, PMSF, aprotinina y EDTA) a una relación de 10 mi por gramo de pasta celular húmeda. Las células fueron lisadas mediante sonicación y el lisado se aclaró mediante centrifugación a 9,000 RPM durante 30 minutos en un rotor GSA. Un volumen de lecho de 500 µ? de resina NiNTA (Qiagen, Valencia, CA) se añadió a los sobrenadantes y el lote se unió durante dos horas con agitación constante. El material se transfirió por gravedad a una columna de 2 mi vacía. La columna se lavó con 2 mi de regulador de pH de lavado (Blue Sky Biotech, Worcester, MA, IX WX, 25 mM de imidazol) . La proteína fue eluida con IX WX + imidazol á concentraciones variables: elución 1: 75 mM de imidazol (2 fracciones, 1 volumen de columna) ; elución 2: 150 mM de imidazol (2 fracciones, 1 volumen de columna) ; elución 3:300 mM de imidazol (2 fracciones, 1 volumen de columna) . Todas las fracciones de elución fueron analizadas mediante SDS-page seguidas por tinción con Coomassie y Western Blotting usando anticuerpo anti -penta-his (Qiagen, Valencia, CA) . El "marcador" de histidina seis de la terminal carboxi fue removido de cierta parte de la proteína modificada usando el kit AcTEV Protease (Invitrogen, Carlsbad, CA, Cat# 12575-015) , siguiendo las instrucciones del fabricante. Todas las muestras (antes y después del corte con Tev) fueron analizadas mediante SDS-page seguidas por tinción de Coomassie y Western Blotting, como se describió arriba.
Ejemplo 50 Espectrometría de masas para EGFR EGFR tipo silvestre y EGFR (mutante C797S) se incuba con un exceso de 10 veces del compuesto 1-1 durante 1 hora y 3 horas. Alícuotas de 1 µ? de las muestras (volumen total de 5-8 ul) se diluyen con 10 ul de TFA al 0.1% antes de micro C4 ZpiTipping directamente en el objetivo MALDI usando ácido sinapínico como la matriz de desorción (10 mg/ml en 0.1% de TFA: acetonitrilo, 50:50) . La medición de la masa intacta revela que el tipo silvestre tiene una masa nominal de alrededor de 37557 y el mutante ligeramente más bajo a 37500. La reactividad sólo se observa para el EGFR tipo silvestre con un nuevo pico apareciendo en una masa consistente con un solo sitio de modificación covalente con compuesto 1-1 que tiene una masa de 410 Da. (Véase Figura 8) . El EGFR mutante (C797S) no mostró reactividad significativa incluso después de tres horas, confirmando modificación de la cisteína de interés, Cys797.
Ejemplo 51 Protocolo de ensayo Omnia para la evaluación de potencia contra enzimas activas EGFR (WT) y EGFR (T790M/L858R) El siguiente protocolo describe ensayos de cinara de lectura continua para medir la potencia inherente de los compuestos contra formas activas de enzimas EGFR (WT) y EGFR (T790M/L858R) . La mecánica de la plataforma de ensayo se describe mejor por el vendedor (Invitrogen, Carlsbad, CA) en su sitio web en la siguiente URL: www . invitrogen . com/content . cfm?pageid=11338 o www. invitrogen . com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Drug-Discovery/Target-and-Lead-Identificatión-and-Validation/KinaseBiology/KB-Misc/Biochemical-Assays/Omnia-Kinase-Assays . html .
Brevemente, soluciones 10X de EGFR-WT (PV3872) de Invitrogen y EGFR-T790M/L858R (40350) de BPS Bioscience, San Diego, CA, 1.13X ATP (AS001A) y substratos de péptido conjugados Tyr-Sox adecuados (KCZ1001) se prepararon en IX de regulador de pH de reacción de cinasa que consistía en 20 mM de Tris, pH 7.5 , 5 mM de MgCl2/- 1 mM de EGTA, 5 mM de ß-glicerofosfato, 5% de glicerol (solución 10X, KB002A) y 0.2 mM de DTT (DS001A) . Se pre- incubaron 5 L de cada enzima en una placa de microtitulación de superficie de no unión blanca de 384 pocilios Corning (#3574) (Corning, NY) durante 30 minutos a 27°C con un volumen de 0.5 µ??? de 50% de DMSO y los compuestos diluidos en serie se prepararon en 50% de DMSO .
Las reacciones de cinasa se iniciaron con la adición de 45 yi de la mezcla de substrato de péptidos ATP/Tyr-Sox y se monitoreó cada 30-90 segundos durante 60 minutos a ?e?360 /?e??485 en un lector de placa Synergy4 de BioTek (Winooski, VT) . Al concluir cada ensayo, las curvas de progreso de cada pocilio se examinaron para cinética de reacción lineal y estadística de ajuste (R2, 95% de intervalo de confianza, suma de cuadrados absolutos) .
La velocidad inicial (0 minutos a -30 minutos) de cada reacción se determinó a partir de la pendiente de una gráfica de las unidades de fluorescencia relativa contra el tiempo (minutos) y luego se graficaron contra la concentración de inhibidor para estimar la IC50 a partir de log [ inhibidor] contra Respuesta, modelo de Pendiente Variable en GraphPad Prism de GraphPad Software (San Diego, CA) .
Las condiciones de reactivo optimizadas modificadas por EGFR (WT) y EGFR ( T790M/ L858R ) son: [EGFR-WT] = 5 nM, [ATP] 15 mM , [Y12-Sox] = 5 mM (ATP KMapp -12 mM) ; y [EGFR- T790M/ L858R] = 3 nM, [ATP] = 50 mM, [Y12-SOX] = 5 mM (ATP KMapp - 45 mM) .
Ejemplo 52 La tabla 7 muestra la actividad de los compuestos seleccionados de esta invención en el ensayo de inhibición de EGFR. Los números de compuesto corresponden a los números de compuesto en la tabla 5. Los compuestos que tienen una actividad designada como "A" proporcionaron una IC5o=10 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron una IC50 10 - 100 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron una IC50 de 100-1,000 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "D" proporcionaron una IC50 de 1,000-10,000 nM; y los compuestos que tienen actividad designada como "E" proporcionaron una IC50=10 , 000 nM.
Tabla 7 Datos de inhibición de EGFR tipo silvestre y EGFR (C797S mutante) Inhibición de Inhibición de Compuesto # EGFR EGFR (T790M/L858R) 1-1 A A 1-2 A A 1-3 A A 1-4 A B ?-5 A A 1-6 B B 1-7 A B 1-8 A D 1-9 A C 1-10 A C Inhibición de Inhibición de Compuesto # EGFR EGFR (T790M L858R) 1-11 B E 1-12 B E 1-13 A B 1-14 A B 1-15 A B 1-16 A B 1-17 A B 1-18 A A 1-19 A A 1-46 A A 1-47 A E 1-48 C C 1-49 A A 1-50) A B 1-51 A D 1-52 A A 1-53 B C 1-54 A A 1-55 A A 1-56 A A 1-57 - C 1-58 - C 1-59 A A 1-60 D C 1-61 - A 1-63 A A 1-65 A B 1-66 A C 1-67 A A 1-68 A - 1-69 B - 1-70 A - 1-71 A - 1-73 A - 1-75 A - • 1-78 A - 1-79 A - 1-80 C - 1-81 A - 1-82 A - 1-83 A - 1-84 B - Inhibición de Compuesto # Inhibición de EGFR EGFR (T790M/L858R) 1-85 B - 1-86 B - 1-87 B - 1-88 A - 1-89 A - 1-90 A - 1-91 A - 1-92) A - 1-93 A - 1-94 A A 1-95 A - 1-97 A - 1-98 A - 1-99 A - 1-100 A - 1-101 A - 1-102 A - 1-103 A - 1-104 A - 1-105 A - Ejemplo 53 Ensayos celulares para la actividad de EGFR Los compuestos fueron ensayados en células de carcinoma epidermoide humano A431 usando un método sustancialmente similar a aquél descrito en Fry, et al., Proc. Nati. Acad. Sci . E.U.A. vol . 95, pág. 12022-12027, 1998. Específicamente, células de carcinoma epidermoide humano A431 fueron cultivadas en placas de 6 pocilios a una confluencia de 90% y luego incubadas en medio libre de suero durante 18 horas. Conjuntos duplicados de células fueron tratados con 1 µ? de compuesto designado durante 2, 5, 10, 30 ó 60 min. Las células fueron lavadas para liberarlas de compuesto con medio libre de suero tibio, incubadas durante 2 horas, lavadas nuevamente, incubadas otras 2 horas, lavadas de nuevo y luego incubadas otras 2 horas y lavadas nuevamente e incubadas durante 2 horas más y después estimuladas con 100 ng/ml de EGF durante 5 minutos. Los extractos se hicieron como se describe por Fry, et al. La Figura 1 ilustra la actividad de inhibición de EGFR del compuesto 1-1.
Los compuestos fueron ensayados en células de carcinoma epidermoide humano A431 usando un método sustancialmente similar a aquél descrito en Fry, et al. Específicamente, células de carcinoma epidermoide humano A431 fueron cultivadas en placas de 6 pocilios hasta 90% de confluencia y luego incubadas en medio libre de suero durante 18 h. Las células fueron tratadas con 10, 1, 0.1, 0.01 ó 0.001 µ? de compuesto de prueba durante 1 h. Las células fueron después estimuladas con 100 ng/ml de EGF durante 5 minutos, y se hicieron extractos como se describe en Fry, et al. 20 ug de proteína total de los lisados se cargaron en gel y los blots fueron sondeados ya sea para fosforilación de EGFR o para fosforilación de p42/p44 Erk.
La inhibición de respuesta a dosis de fosforilación de EGFR y fosforilación de p42/p44 Erk con los compuestos I-16 e 1-17 en células A431 se ilustra en la Figura 3. La inhibición de respuesta a dosis de fosforilación de EGFR y fosforilación de p42/p44 Erk con el compuesto 1-19 en células A431 se ilustra en la Figura 4. La inhibición de respuesta a dosis de fosforilación de EGFR con el compuesto 1-1 en células A431, en comparación con su compuesto de "control reversible" (IR-3), se ilustra en la Figura 5.
Ejemplo 54 Experimento de lavado para actividad EGFR Células de carcinoma epidermoide humano A431 fueron cultivadas en placas de 6 pocilios hasta 90% de confluencia y luego incubadas en medio libre de suero durante 18 h. Conjuntos duplicados de células se trataron con 1 µ? de compuesto designado durante 1 hora. Un conjunto de células se estimuló después con 100 ng/ml de EGF durante 5 minutos y los extractos se hicieron como se describió. El otro conjunto de células se lavó para liberarlo del compuesto con medio libre de compuesto tibio, incubado durante 2 horas, lavado de nuevo, incubado durante 2 horas, lavado de nuevo y luego incubado durante 2 horas, lavado de nuevo e incubado durante 2 horas más y luego estimulado con EGF. Los resultados de este experimento se ilustran en a Figura 6 en donde se muestra que el compuesto 1-7 mantiene la inhibición enzimática después del "lavado" mientras que su compuesto de "control reversible" (IR-3) fue enjuagado en el experimento, dando como resultado actividad enzimática reactivada.
Ejemplo 55 Espectrometría de masas para ErbB4 El dominio de cinasa ErbB4 (Upstate) fue incubado con compuesto durante 60 minutos a un exceso de 10 veces del compuesto 1-1 a la proteína. Alícuotas de 1 µ? de las muestras (volumen total de 4.24 ul) se diluyeron con 10 µ? de 0.1% de TFA al 0.1% antes de C4 ZipTipping directamente en el objetivo ALDI usando ácido sinapínico como la matriz de desorción (10 mg/ttiL en TFA al 0.1% : acetoni tr ilo , 50:50) . Para la medición de masa de proteína intacta el instrumento se puso en modo lineal usando un ajuste de extracción pulsado de 16, 952 para el estándar de mioglobina usado para calibrar el instrumento (Shimadzu Axima TOF2) .
La proteína ErbB4 intacta ocurre a MH+ de 35850 con aductos cinapínicos (matriz) correspondientes ocurriendo aproximadamente 200 Da más altos. Una incorporación es tequiométrica del compuesto 1-1 (Mw de 410 Da) produjo un nuevo pico de masa que es aproximadamente 410 Da más alto (MH+ de 36260 ) . Esto concuerda con la modificación covalente de ErbB4 con el compuesto 1-1 como se ilustra en la Figura 7.
Ej emplo 56 Inhibición de cinasa ErbBl, ErbB2 y/o ErbB4 Los compuestos de la presente invención fueron ensayados como inhibidores de una o más de ErbBl, ErbB2 y/o ErbB4 de una manera sustancialmente similar al método descrito por Invitrogen Corp (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, California, CA; http : / /www. invitrogen. com/downloads/Z-LYTE_Brochure_1205.pdf ) usando el procedimiento de ensayo bioquímico Z' -LYTE™ o un ensayo bioquímico similar. El ensayo bioquímico Z' -LYTE™ emplea un formato de enzima acoplado a base de fluorescencia y se basa en la sensibilidad diferencial de péptidos fosforilados y no fosforilados al corte prot eol í t i co .
Ejemplo 57 La tabla 8 muestra la actividad de compuestos seleccionados de esta invención en el ensayo de inhibición de ErbB . Los números de compuesto corresponden a los números de compuesto de la Tabla 5.
Tabla 8 Datos de inhibición de ErbBl, ErbB2 y/o ErbB4 % Inhibición de % Inhibición % Inhibición de Compuesto # ErbBl de ErbB2 ErbB4 1-1 76% @ 1 µ? 86% @ 1 µ? 99% @ 10 nM 61% (¾ 100 nM 64% (¾ 100 nM 98% @ 100 nM 1-2 96% @ 1 µ? 75% @ 1 µ? 75% @ 10 nM 39% @ ????? 96% @ ????? 1-3 89% @ 1 µ? 95% @ 1 µ? 56% @ lOnM 1-4 100% @ 10 nM 86% @ 1 µ? 78% @ 1 µ? 1-5 100% @ 10 nM 86% @ 1 µ? 95% @ 1 µ? 100% @ 100 nM 1-6 84% @ 1 µ? 97% @ 1 µ? 49% @ 10 nM 100% @ 100 nM 1-7 89% @ 1 µ? 100% @ 1 µ? 53% @ 10 nM 1-8 83% @ 10 nM - 57% @ 1 µ? % Inhibición de % Inhibición % Inhibición de Compuesto # ErbBl de ErbB2 ErbB4 1-9 100% @ 1 µ? - 75% @ 1 µ? 1-10 96% @ 1 µ? - - 1-11 79% @ 1 µ? - - 1-12 82% @ 1 µ? - - 1-13 92% @ 1 µ? 98% @ 1 µ? - 1-14 96% @ 1 µ? - - 1-15 98% @ 1 µ? - - 87% @ 100 nM 93% @ 100 nM 1-16 98% @ 1 µ? 24% @ 10 nM 26% @ 10 nM 1-17 95% @ 1 µ? 89% @ 1 µ? 94% @ 1 µ? 1-18 - 91% @ 1 µ? 94%, @ 1 µ? 1-19 96% @ 1 µ? 98% @ 1 µ? 97% @ 1 µ? Ejemplo 58 Espectrometría de masas para cinasa TEC Cinasa TEC (45 pmoles; Invitrogen) fue incubada con (1-13) (450 pmoles) durante 3 horas a un exceso de 10X antes de la digestión tríptica. Se usó yodoacetaraida como el agente alquilante después de la incubación del compuesto. También se preparó una muestra de control (45 pmoles) la cual no tenía la adición de (1-13) . Para las digestiones trípticas se diluyó un alícuota de 5 ul (7.5 pmoles) con 15 ul de TFA al 0.1% antes de C18 Zip Tipping directamente de el objetivo MALDI usando ácido alfa ciano-4-hidroxicinámico como la matriz (5 mg/ml en 0.1% de TFA : acetonitrilo , 50:50) .
Como se ilustra en la Figura 11, el péptido que se esperaba (GCLLNFLR) fuera modificado fue inmediatamente evidente a H+ de 1358.65. esto es la masa que se espera cuando el compuesto 1-13, con una masa de aducto de 423.17, se añade a la masa de péptido de 935.51. El péptido también fue bastante evidente en la muestra de control modificada por yodoacetamida a MH+ de 992.56. Interesantemente el péptido modificado con yodoacetamida no fue evidente en la digestión reaccionada con compuesto 1-13 indicando que la reacción estaba completa. No hubo evidencia de otros péptidos modificados .
La evidencia del compuesto 1-13 se observó a MH+ de 424.20 en la escala de baja masa del espectro. Los espectros de fragmentación del pico de 424.20 mostraron fragmentos de diagnóstico que eran aparentes en los espectros PSD del péptido modificado en 1358.65 (véase Figura 11) .
Para verificar más la presencia del péptido modificado con compuesto 1-13, el péptido a H+ de 1358.65 fue sometido a análisis PSD (MS/MS) . Un análisis correlacional con la base de datos homo sapien identificó el péptido correcto modificado por 1-13.
Instrumental : Para digestiones trípticas el instrumento se puso en modo Reflectron con un ajuste de extracción pulsado de 2200. La calibración se hizo usando el parámetro Láser Biolabs Pep Mix (1046.54, 1296.69, 1672.92, 2093.09, 2465.20) . Para el análisis CID/PSD el péptido se seleccionó usando cursores para establecer la sincronización de control de iones y la fragmentación ocurrió a una potencia láser aproximadamente 20% más alta y se usó He como el gas de colisión para CID. La calibración para los. fragmentos se llevó a cabo usando la calibración de fragmentación P14R para el Reflectron de campo Curvo.
Ejemplo 59 Protocolo de ensayo Omnia para la evaluación de potencia contra BTK El Protocolo de Ensayo Omnia para la medición de la potencia contra BTK se lleva a cabo de una manera sustancialmente similar a la descrita en el ejemplo 25 arriba excepto que las condiciones de reactivo optimizadas por BTK son: [BTK] = 5 nM, [ATP] = 40 mM, [Y5-Sox] = 10 mM (ATP KMapp -36 mM) .
Ejemplo 60 La tabla 9 muestra la actividad de los compuestos seleccionados de esta invención en el ensayo de inhibición de BTK. Los números de compuesto corresponden a los números de compuesto en la tabla 5. Los compuestos que tienen una actividad designada como "A" proporcionaron una IC50=10 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron una IC50 10-100 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron una IC50 de 100-1,000 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "D" proporcionaron una IC50 de 1,000-10,000 nM; y los compuestos que tienen actividad designada como "E" proporcionaron una IC50=10,000 nM.
Tabla 9 Datos de inhibición de BTK Compuesto # Inhibición de BTK 1-1 B 1-2 B 1-3 B 1-4 A 1-5 A 1-6 C 1-7 B 1-8 E 1-9 C 1-10 C 1-11 E 1-12 E 1-13 A 1-14 C 1-15 B 1-16 B 1-17 A 1-18 B 1-19 B 1-46 C 1-47 E 1-48 B 1-49 A 1-50 D 1-51 E 1-52 A 1-53 B 1-54 C 1-55 B 1-56 B 1-57 D 1-58 D 1-59 C 1-60 D 1-61 B 1-62 A 1-63 A 1-64 A 1-65 A Compuesto # Inhibición de BTK 1-66 A 1-67 B 1-68 B 1-69 C 1-70 C 1-71 D 1-73 A 1-75 A 1-78 A 1-79 A 1-80 D 1-81 A 1-82 A 1-83 A 1-84 D 1-85 B 1-86 B 1-87 E 1-88 A 1-89 A 1-90 A 1-91 A 1-92 B 1-93 D 1-94 A 1-95 A 1-97 C 1-98 C 1-99 A 1-100 A 1-101 A 1-102 B 1-103 C 1-104 A 1-105 B Ejemplo 61 Ensayo celular de BTK en Ramos Los compuestos 1-13 y (1-52) fueron ensayados en células Ramos de linfoma de Burkit humano. Células Ramos fueron cultivadas en suspensión en matraces T225, centrifugadas, resuspendidas en 50 mi de medio libre de suero e incubadas durante 1 hora. Se añadió compuesto a células Ramos en medio libre de suero hasta una concentración final de 1, 0.1, 0.01 ó 0.001 µ?. Las células Ramos fueron incubadas con compuesto durante 1 hora, lavadas de nuevo y resuspendidas 100 ul de medio libre de suero. Las células fueron después estimuladas con 1 µ9 de IgM anti-humano F(ab')2 de cabra y se incubaron en hielo durante 10 minutos para activar las vías de señalización del receptor de células B. Después de 10 minutos, las células se lavaron una vez con PBS y después se lisaron en hielo con regulador de pH de extracción de células Invitrogen. 16 µg de proteína total de los lisados se cargaron en gel y los blots fueron sondeados para fosforilación del substrato de BTK PLCy2. A 1 µ? 1-13 mostró 85% de inhibición y (1-52) mostró 50% de inhibición de señalización de BTK en células Ramos. Inhibición de respuesta a dosis adicional de señalización de BTK con 1-13 se ilustra en la Figura 9.
La tabla 10 proporciona datos de inhibición para compuestos seleccionados en células Ramos. Los números de compuesto corresponden a los números de compuesto en la tabla 5. Los compuestos que tienen una actividad designada como "A" proporcionaron una IC50=10 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron una IC50 10-100 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron una IC50 de 100-1,000 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "D" proporcionaron una IC50 de 1,000-10,000 nM; y los compuestos que tienen actividad designada como "E" proporcionaron una IC50>10,000 nM.
Tabla 10 Datos de inhibición de células Ramos por BTK Compuesto # Inhibición de BTK (nM) 1-5 C 1-13 B 1-17 D 1-63 A 1-64 B 1-65) A 1-66) A 1-78 A 1-79 A 1-81 A 1-82 A 1-95 A 1-99 A 1-100 B Ejemplo 62 Experimento de lavado con células Ramos para actividad de BTK Células Ramos fueron privadas de suero durante 1 hora en medio RPMI +1% de glutamina a 37°C. Después de la privación, las células Ramos fueron tratadas con 100 nM de compuesto diluido en medio RPMI libre de suero durante 1 h. Después del tratamiento con compuesto, los medios fueron removidos y las células se lavaron con medio libre de compuesto. Posteriormente, las células Ramos fueron lavadas cada 2 horas y resuspendidas en medio libre de compuesto fresco. Las células se recogieron en puntos de tiempo especificados, se trataron con 1 ug de IgM anti-humana (Southern Biotech cat # 2022-01) durante 10 minutos sobre hielo para inducir la señalización de BCR y luego se lavaron en PBS. Las células Ramos fueron después lisadas en regulador de pH de extracción de células (Invitrogen FN 0011) complementado con tabletas inhibidoras de proteasa completas Roche (Roche 11697498001) e inhibidores de fosfatasa (Roche 04 906 837 001) y 18 ug de lisado de proteínas total se cargó en cada columna. La inhibición de la actividad BTK cinasa se ensayó al medir su fosforilación de substrato (PLCy2) mediante Western blot con anticuerpos fosfo-específicos de Cell Signaling Technologies cat# 3871. La Figura 10 ilustra los resultados del compuesto 1-13 en el experimento de lavado en puntos de tiempo de 0 hora, 4 horas, 6 horas y 8 horas. Como se muestra en la Figura 10, el compuesto 1-13 mantiene inhibición de BTK durante 8 horas.
La tabla 11 proporciona datos para compuestos seleccionados en el ensayo de lavado de Ramos.
Tabla 11 Datos de lavado de BTK Compuesto # Tipo de Inhibición de BTK 1-13 irreversible 1-63 irreversible 1-64 irreversible 1-65 reversible 1-66 irreversible 1-82 irreversible E emplo 63 Espectrometría de masas para BTK BTK intacta se incubó durante 1 hora a un exceso de 10X veces de 1-63 o 1-66 a proteína. Alícuotas (2 µ?) de las muestras se diluyeron con 10 µ? de 0.1% de TFA antes de micro C4 ZipTipping directamente en el objetivo MALDI usando ácido sinapínico como la matriz de desorción (10 mg/ml al 0.1% de TFA :Acetonitrilo 20:80). Los trazos de la espectrometría de masas se muestran en la Figura 12 y Figura 13. Los paneles superiores de las Figuras 12 y 13 muestran el trazo de espectrometría de masas de la proteína BTK intacta (m/z 81,169 Da) . Los paneles inferiores muestran el trazo del espectro de masas cuando BTK se incubó con compuesto 1-63 (pm 424.5) o compuesto 1-66 (pm 452.5) en las Figuras 12 y 13, respectivamente. La masa centroide (m/z 81,593 kDa) en el panel inferior de la Figura 12 muestra un desplazamiento positivo de aproximadamente 424 Da, indicando modificación completa de BTK por el compuesto 1-63. La masa centroide (m/z 81,593 kDa) en el panel inferior de la Figura 13 muestra un desplazamiento positivo de aproximadamente 407 Da, indicando modificación completa de BTK por el compuesto 1-66.
Ejemplo 64 Protocolo de ensayo Qmnia para la evaluación de la potencia contra formas activas de ciñasa ITK Este ejemplo describe ensayos de cinasa de lectura continua para medir la potencia inherente del compuesto contra formas activas de enzimas ITK como se describe -en el ejemplo 251 arriba excepto que las condiciones del reactivo utilizadas para ITK modificadas son: [ITK] = 10 nM, [ATP] = 25 uM, [Y6-Sox] = 10 uM (ATPKMapp=33 UM) .
Ej emplo 65 La tabla 12 muestra la actividad de los conpuestos seleccionados de esta invención en el ensayo de inhibición de ITK. Los números de compuesto corresponden a los números de compuesto de la tabla 5. Los compuestos que tienen una actividad designada como "A" proporcionaron una IC50 10 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron una IC50 10-100 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron una IC50 de 100-1,000 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "D" proporcionaron una IC50 de 1,000-10,000 nM; y los compuestos que tienen actividad designada como "E" proporcionaron una IC50=10,000 nM.
Tabla 12 Datos de inhibición de ITK Compuesto # Inhibición de ITK 1-10 E 1-13 D 1-14 D 1-15 D 1-63 D 1-64 B 1-65 B 1-66 D 1-78 B 1-79 A 1-81 B 1-88 B 1-89 C 1-90 C 1-94 B 1-95 E 1-98 E 1-100 E 1-101 C Ejemplo 66 Protocolo de ensayo Omnia para la evaluación de potencia contra formas activas de cinasa BMX Este ejemplo describe los ensayos de cinasa de lectura continua para medir la potencia inherente del compuesto contra formas activas de enzimas BMX como se describe en el ejemplo 251 arriba, excepto que las condiciones de reactivo optimizado para BMX modificado son: [BMX] = 2.5 nM, [ATP] = 100 µ? , [Y5-Sox] = 7.5 µ? (ATP KMapp=107 µ?) .
Ejemplo 67 La tabla 13 muestra la actividad de los compuestos seleccionados de esta invención en el ensayo de inhibición de BMX. Los números de compuesto corresponden a los números de compuesto en la tabla 5. "A" proporcionaron una ICso=10 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron una IC50 10 - 100 nM ; los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron una IC50 de 100-1,000 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "D" proporcionaron una IC50 de 1,000-10,000 nM; y los compuestos que tienen actividad designada como "E" proporcionaron una IC50 10,000 n .
Tabla 13 Datos de inhibición de BMX Compuesto # Inhibición de BMX 1-10 - 1-13 A 1-14 - 1-15 - 1-63 A 1-64 B 1-65 A 1-66 A 1-78 B 1-79 A 1-81 A 1-94 A E j em lo 68 Protocolo de ensayo Omnia para la evaluación de la potencia contra la forma activa de cinasa Janus-3 ( JAK3 ) El Protocolo de Ensayo Omnia para evaluación de potencia contra JAK3 se llevó a cabo de una manera sus tancialmente similar a la descrita en el ejemplo 25 arriba excepto que las condiciones de reactivo optimizadas por JAK3 modificada fueron: [JAK3] = 5 nM, [ATP] = 5 µ?, [Y12-Sox] = 5 µ? (ATP KMapp -5 µ?) .
Ejemplo 69 La tabla 14 muestra la actividad de los compuestos seleccionados de esta invención en el ensayo de inhibición de JAK3. Los números de compuesto corresponden a los números de compuesto de la tabla 5. "A" proporcionaron una IC50=10 nM ; los compuestos que tienen una actividad designada como "B" proporcionaron una IC5o 10-100 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "C" proporcionaron una IC50 de 100-1,000 nM; los compuestos que tienen una actividad designada como "D" proporcionaron una IC50 de 1,000-10,000 nM; y los compuestos que tienen actividad designada como "E" proporcionaron una IC50=10,000 nM .
Tabla 14 Datos de inhibición de JAK3 Compuesto # Inhibición de JAK3 1-1 A 1-2 A 1-3 A 1-4 A 1-5 A 1-6 D 1-7 C 1-8 D 1-9 C 1-10 C 1-11 E 1-12 E 1-13 C 1-14 A 1-15 B 1-16 B 1-17 B 1-18 B 1-19 C Compuesto # Inhibición de JAK3 1-46 D 1-47 E 1-48 E 1-49 A 1-50 C 1-51 E 1-52 A 1-53 C 1-54 D 1-55 B 1-56 B 1-57 E 1-58 C 1-59 D 1-60 D 1-61 B 1-62 C 1-63 B 1-64 A 1-65 A 1-66 C 1-67 A 1-68 A 1-69 C 1-70 C 1-71 D 1-73 A 1-75 C 1-78 A 1-79 A 1-80 E 1-81 A 1-82 B 1-84 E 1-85 D 1-86 E 1-92 B 1-93 E 1-94 A Ejemplo 70 Medición de la ocupación de ErbB Muestras de proteínas de células que expresaban ErbB (por ejemplo, lisados de carcinoma epidermoide humano A431 o células de tumor de cáncer ovárico SKOV3 cultivadas in vivo) que son o no previamente tratadas con un complejo de inhibidores covalentes serán capturadas usando esferas de estreptavidina o usando un anticuerpo que reconoce el objetivo ErbB. Las proteínas capturadas serán separadas por SDS-PAGE y analizadas por Western blot usando el enfoque complementario, es decir, an anticuerpo anti-ErbB para los complejos capturados con estreptavidina o estreptavidina para los complejos capturados usando el anticuerpo anti-ErbB. La cantidad de objetivo que se une a la sonda covalente será cuantificada y comparada con la cantidad de proteína ErbB total para determinar el porcentaje de objetivo que es ocupado por el fármaco covalente.
Aunque un número de modalidades de esta invención se describen en la presente, es aparente que los ejemplos básicos pueden ser alterados. para proporcionar otras modalidades que utilicen los compuestos y métodos de esta invención. Por lo tanto, se apreciará que el alcance de esta invención debe definirse por las reivindicaciones anexas en lugar de por las modalidades específicas que han sido representadas a manera de ejemplo.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (39)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un compuesto caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste en: Cl 1-101 1-102 H H 1-105 , Y 1-114, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Una composición caracterizada porque comprende el compuesto de conformidad con la reivindicación 1, y un adyuvante, portador o vehículo farmacéuticamente aceptable.
3. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque está en combinación con un agente terapéutico adicional.
4. La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque el agente terapéutico adicional es un agente quimioterapéutico .
5. Un método para inhibir la actividad de una o más de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 o ErbB4 , o un mutante de las mismas, en un paciente o en una muestra biológica, caracterizado porque comprende la etapa de administrar al paciente o poner en contacto la muestra biológica con el compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la actividad de una o más de ErbBl, ErbB2 , ErbB3 o ErbB4 , o un mutante de las mismas, es inhibida irreversiblemente .
7. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la actividad de una o más de ErbBl, ErbB2, ErbB3 o ErbB4 , o un mutante de las mismas es inhibida irreversiblemente al modificar en forma covalente Cys797 de ErbBl, Cys805 de ErbB2 o Cys803 de ErbB4.
8. Un método para tratar un trastorno mediado por ErbBl, ErbB2, ErbB3 o ErbB4 en un paciente que lo requiera, caracterizado porque comprende administrar al paciente el compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el trastorno es un carcinoma seleccionado de cáncer de mama, glioblastoma, cáncer de pulmón, cáncer de la cabeza y cuello, cáncer colorrectal, cáncer de vejiga, cáncer pulmonar no microcítico, carcinoma de células escamosas, carcinoma de glándulas salivales, carcinoma ovárico o cáncer pancreático.
10. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el trastorno se selecciona de neurofibromatosis tipo I (NF1) , neurofibromatosis tipo II (NF2), neoplasmas de células Schwann (por ejemplo, MPNST's), o un Schwannoma.
11. Un método para inhibir la actividad de una o más TEC-cinasas, o un mutante de las mismas, en un paciente o en una muestra biológica, caracterizado porque comprende la etapa de administrar al paciente o poner en contacto la muestra biológica con el compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la actividad de TEC-cinasa, o un mutante de la misma, es inhibida irreversiblemente.
13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la TEC-cinasa se selecciona de una o más de TEC, ITK o BMX .
14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la actividad de una o más de TEC, ITK o BMX es inhibida irreversiblemente al modificar de manera covalente Cys 449 de TEC, Cys 442 de ITK o Cys 496 de BMX.
15. Un método para tratar un trastorno mediado por TEC-cinasa en un paciente que lo requiera, caracterizado porque comprende administrar al paciente el compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el trastorno es una enfermedad autoinmune, un trastorno inflamatorio, un trastorno proliferativo, un trastorno hiperproliferativo, una enfermedad mediada inmunológicamente , una enfermedad del tracto respiratorio, una enfermedad del hueso y articulaciones, un trastorno de la piel, un trastorno gastrointestinal, una enfermedad sistémica o rechazo de aloinjerto.
17. Un método para inhibir la actividad de BTK, o un mutante de la misma, en un paciente o en una muestra biológica, caracterizado porque comprende la etapa de administrar al paciente o poner en contacto la muestra biológica con el compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la actividad de BTK, o un mutante de la misma, es inhibida irreversiblemente.
19. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la actividad de BTK, o un mutante de la misma, es inhibida irreversiblemente al modificar en forma covalente Cys 481 de BTK.
20. Un método para tratar un trastorno mediado por BTK en un paciente que lo requiera, caracterizado porque comprende administrar al paciente el compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque el trastorno es una enfermedad autoinmune, una enfermedad heteroinmune , una enfermedad inflamatoria, un cáncer, una enfermedad del hueso y articulaciones, o un trastorno tromboembólico .
22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el trastorno se selecciona de artritis reumatoide, esclerosis múltiple, leucemia linfocítica crónica de células B, leucemia linfocítica aguda, leucemia de células pilosas, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, mieloma múltiple, cáncer de hueso, metástasis ósea, osteoporosis , síndrome del intestino irritable, enfermedad de Crohn, lupus o trastornos asociados con transplante renal.
23. Un método para inhibir la actividad de JAK3 , o un mutante de la misma, en un paciente o en una muestra biológica, caracterizado porque comprende la etapa de administrar al paciente o poner en contacto la muestra biológica con el compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
24. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la actividad de JAK3 , o un mutante de la misma, es inhibida irreversiblemente.
25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la actividad de JAK3 , o un mutante de la misma, es inhibida irreversiblemente al modificar en forma covalente Cys 909 de JAK3.
26. Un método para tratar un trastorno mediado por JAK3 en un paciente que lo requiera, caracterizado porque comprende administrar al paciente el compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el trastorno se selecciona de un trastorno autoinmune, un trastorno inflamatorio, un trastorno neurodegenerativo, o un tumor sólido o hematológico.
28. Un compttesto caracterizado porque tiene la fórmula V: H V, en donde : Anillo A es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de fenilo, un anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo raonocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo bicíclico de 8-10 miembros que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; Anillo B es fenilo, un anillo heteroarilo de 5-6 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo bicíclico parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; R1' es un grupo de cabeza bivalente; Ry es hidrógeno, halógeno, CN, alquilo inferior o haloalquilo inferior; W es una cadena alquileno de Ci-3 bivalente en donde una unidad metileno de W es reemplazada opcionalraente por -NR2-, -N(R2)C(0)-, C(0)N(R2)-, -N(R2)S02-, -S02N(R2)-, -O-, -C(0)-, -OC(O)-, -C(0)0-, -S-, -SO- o -S02-; R2 es hidrógeno o alifático de Ci-6 opcionalmente sustituido, o: R2 y un sustituyente en Anillo A se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado de 4-6 miembros, o: R2 y RY se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo carbocíclico de 4-7 miembros ; m es 0 -4 ; cada Rx se selecciona independientemente de -R, halógeno, -0R, -CN, -N02, -S02R, -SOR, -C(0)R, -C02R, C(0)N(R)2, -NRC(0)R, -NRC(0)NR2, -NRS02R, o -N(R)2, O: Rx y R1 se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con un grupo de cabeza y 0-3 grupos seleccionados independientemente de oxo, halógeno, -CN o alifático de Ci-6; y cada grupo R es independientemente hidrógeno o un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de alifático de Ci-6/ fenilo, un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre ; T es una porción de unión bivalente; y Rfc es una porción detectable.
29. Un compuesto caracterizado porque tiene la fórmula VI o VII: VI VII, en donde Anillo A es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de fenilo, un anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene- 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo bicíclico de 8-10 miembros que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; Anillo B es fenilo, un anillo heteroarilo de 5-6 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo bicíclico parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; R1 es un grupo de cabeza; Ry es hidrógeno, halógeno, CN, alquilo inferior o haloalquilo inferior; es una cadena alquileno de Ci-3 bivalente en donde una unidad metileno de W es reemplazada opcionalmente por -NR2- , -M(R2)C(0)-, C(0)N(R2)-, -N(R2)S02-, -S02N(R2)-, -0-, -C(0)-, -OC(0)-, -C(0)0-, -S-, -SO- o -S02-; R2 es hidrógeno o alifático de Ci-6 opcionalmente sustituido, o: R2 y un sustituyente en Anillo A se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado de 4-6 miembros, o: R2 y Ry se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo carbocíclico de 4-7 miembros ; m es 0-4; cada R se selecciona independientemente de -R, halógeno, -0R, -CN, -N02, -S02R, -SOR, -C(0)R, -C02R, -C(0)N(R)2, -NRC(0)R, -NRC(0)NR2( -NRS02R, o -N(R)2, O: Rx y R1 se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con un grupo de cabeza y 0-3 grupos seleccionados independientemente de oxo, halógeno, -CN o alifático de Ci-S; y cada grupo R es independientemente hidrógeno o un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de alifático de Ci-6, fenilo, un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre T es una porción de unión bivalente; y Rfc es una porción detectable.
30. El compuesto de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque T se selecciona de: H O -N OMe O -o
31. El compuesto de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque es biotina.
32. El compuesto de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque Rfc es sulfóxido de biotina.
33. El compuesto de conformidad con la reivindicación 28 29, caracterizado porque Rfc es un radioisótopo .
34. El compuesto de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque Rfc es un marcador fluorescente.
35. El compuesto de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque tiene una de las siguientes estructuras: o 1-120.
36. Un método caracterizado porque comprende etapas de : (a) proporcionar uno o más tejidos, tipos lulas o un lisado de las mismas, obtenidos de un paciente ien se le administró al menos una dosis de un compuesto fórmula I: I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: Anillo A es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de fenilo, un anillo bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátoraos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo bicíclico de 8-10 miembros que tiene 1-5 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; Anillo B es fenilo, un anillo heteroarilo de 5-6 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, un anillo heterocíclico saturado de 5-6 miembros que tiene 1-2 ' heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo bicíclico parcialmente insaturado o arilo de 8-10 miembros que tiene 1-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; R1 es un grupo de cabeza; Ry es hidrógeno, halógeno, CN, alquilo inferior o haloalquilo inferior; es una cadena alquileno de Ci-3 bivalente en donde una unidad metileno de W es reemplazada opcionalmente por -NR2-, -N(R2)C(0)-, C(0)N(R2)-, -N(R2)S02-, -S02N(R2)-, -0-, -C(0)-, -0C(0)-, -C(0)0-, -S-, -SO- o -S02-; R2 es hidrógeno o alifático de C1-6 opcionalmente sustituido, o: R2 y un sustituyente en el anillo A se toman juntó con sus átomos interventores para formar un anillo saturado de 4-6 miembros, o: R2 y Ry se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo carbocíclico de 4-7 miembros ; m es 0-4; cada R se selecciona independientemente de -R, halógeno, -0R, -CN, -N02, -S02R, -SOR, -C(0)R, -C02R, C(0)N(R)2, -NRC(0)R, -NRC(0)NR2, -NRS02R, O -N(R)2, O : Rx y R1 se toman junto con sus átomos interventores para formar un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-7 miembros que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde el anillo es sustituido con un grupo de cabeza y 0-3 grupos seleccionados independientemente de oxo, halógeno, -CN o alifático de Ci-6; y cada grupo R es independientemente hidrógeno o un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de alifático de Ci- 6 , fenilo, un anillo heterocíclico de 4-7 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre, o un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros que tiene 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre; (b) poner en contacto el tejido, tipo de célula o un lisado de la misma, con un compuesto de la fórmula I, unido a una porción detectable para formar un compuesto de sonda, para modificar covalentemente al menos una proteína cinasa presente en el tejido, tipo de célula o un lisado de la misma; y (c) medir la cantidad de la proteína cinasa modificada covalentemente por el compuesto de sonda para determinar la ocupación de la proteína cinasa por el compuesto de la fórmula I en comparación con la ocupación de la proteína cinasa por el compuesto de sonda.
37. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque comprende además la etapa de ajustar la dosis del compuesto de la fórmula I para incrementar la ocupación de la proteína cinasa.
38. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque comprende además la etapa de ajustar la dosis del compuesto de la fórmula I para reducir la ocupación de la proteína cinasa.
39. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque la etapa de medición se lleva a cabo por uno de los siguientes: citometría de flujo, Western blot o ELISA.
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