MX2011010077A - Composicion para regular la actividad nerviosa autonoma y metodo para regular el nervio autonomo. - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona una composición que se puede ingerir oralmente y un método para regular una actividad nerviosa autónoma; en particular, la presente invención proporciona una composición que se puede ingerir oralmente capaz de suprimir un aumento de una actividad nerviosa simpática y una composición que se puede ingerir oralmente capaz de promover una actividad nerviosa parasimpática; la presente invención es una composición para regular una actividad nerviosa autónoma, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

Description

COMPOSICIÓN PARA REGULAR LA ACTIVIDAD NERVIOSA AUTÓNOMA Y MÉTODO PARA REGULAR EL NERVIO AUTÓNOMO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una composición para regular una actividad nerviosa autónoma y a un método para regular una actividad nerviosa autónoma. En particular, la presente invención se refiere á una composición para suprimir un aumento en una actividad nerviosa simpática, y una composición para promover una actividad nerviosa parasimpática. Por otra parte, la presente invención se refiere a un método para suprimir un aumento en una actividad nerviosa simpática, y a un método para promover una actividad nerviosa parasimpática.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El sistema nervioso autónomo es un sistema nervioso que constituye una parte de los sistemas nerviosos que no se regulan conscientemente y controla el músculo cardiaco, el músculo liso y los tejidos de la glándula, en contraste con el sistema nervioso motor somático, que controla principalmente el músculo esquelético. El sistema nervioso autónomo es diferente del sistema nervioso motor también en términos de estructura y se constituye de dos clases de células del nervio llamadas el nervio pregangliónico y el nervio postgangliónico. El sistema nervioso autónomo se clasifica ampliamente en el sistema nervioso simpático y el sistema nervioso parasimpático, que tienen funciones mutuamente diversas. Se ha sabido que la actividad del nervio simpático generalmente causa un aumento en el ritmo cardíaco, una elevación en la presión arterial, dilatación del pupilar, liberación de la glucosa en sangre, y lo similar, mientras que la actividad del nervio parasimpático aumenta generalmente la motilidad gastrointestinal, estimula la secreción de fluidos digestivos y lo similar, y reduce el ritmo cardíaco. Los dos sistemas nerviosos cooperan para desempeñar papeles importantes en el mantenimiento de homeostasis de organismos vivos.

Como un reporte sobre la medida directa de una influencia de un péptido o de un derivado de péptido en la actividad nerviosa autónoma, un efecto para controlar el nervio autónomo de carnosina se ha reportado (documento 1). Sin embargo, desde que este efecto se evalúa a través de la administración intravenosa, el efecto por la administración oral se desconoce. Por otra parte, no hay un informe sobre la medida directa de una influencia del dipéptido Tyr-Pro (YP) o un análogo del mismo en una actividad nerviosa autónoma. Mientras tanto, han existido algunos informes sobre las funciones fisiológicas de Tyr-Pro y de análogos del mismo. Por ejemplo, se sabe a través de una prueba que usa el músculo longitudinal ileal extirpado que algunas clases de penta péptidos que tienen Tyr-Pro en la porción N-terminal tiene una actividad del opioide para aliviar el dolor, y son eficaces en controlar las emociones, y en la regulación de la respiración, la temperatura del cuerpo y las actividades digestivas (documento 2). Por otra parte, Tyr-Pro se sabe que exhibe un efecto analgésico cuando se administra intraperitoneal a una rata, aunque Tyr-Pro carece de la capacidad de unión a los receptores de opioide (documento 3). Además, se ha informado que algunos péptidos que tienen 4 a 9 residuos incluyendo Tyr-Pro regulan un efecto de un neurotransmisor inducido por estrés (documento 4). Sin embargo, ninguno de estos informes muestra algún ejemplo de la medida directa de una influencia de un péptido en la actividad nerviosa autónoma, y no proporcionan ningún informe específico que se centra en el efecto regulador de la misma. Por otra parte, estos informes se refieren a los efectos en órganos digestivos extirpados o efectos sobre el organismo vivo a través de la inyección intraperitoneal, y por lo tanto tiene problemas en demostrar sustancias que se pueden ingerir oralmente que producen suficientes efectos. Mientras tanto, Tyr-Pro oralmente administrado también se sabe que tiene un efecto para disminuir la presión arterial (documento 5). Sin embargo, los efectos relacionados con la regulación de las actividades autónomas del nervio también se desconocen.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona una composición que se puede ingerir oralmente para regular una actividad nerviosa autónoma. Además, la presente invención proporciona un método para regular una actividad nerviosa autónoma.

Particularmente, la presente invención proporciona una composición que se puede ingerir oralmente para suprimir un aumentó en una actividad nerviosa simpática, y una composición que se puede ingerir oralmente para promover una actividad nerviosa parasimpática. (1) La presente invención es una composición para regular una actividad nerviosa autónoma, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o sal del mismo. (2) La presente invención también es una composición para promover una actividad nerviosa parasimpática, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo. (3) La presente invención es una composición para suprimir un aumento de una actividad nerviosa simpática, que comprende, cómo un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo. (4) Por otra parte, la presente invención es la composición de acuerdo a (2) o (3), en donde la composición tiene un efecto para promover la motilidad gastrointestinal, un efecto de prevenir la amnesia, o un efecto antiansiedad. (5) La presente invención también es una composición para promover la motilidad gastrointestinal, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo. (6) La presente invención también es una composición para prevenir amnesia que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo. (7) La presente invención también es una composición para reducir la ansiedad, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo. (8) La presente invención también es la composición de acuerdo a cualquiera de (1) a (7), en donde la composición es para ingestión oral. (9) Además, la presente invención es un método para regular una actividad nerviosa autónoma en un animal no humano, que comprende la administración a un animal no humano Tyr-Pro o una sal del mismo. (10) La presente invención también es un método para promover una actividad nerviosa parasimpática en un animal no humano, que comprende la administración a un animal no humano Tyr-Pro o una sal del mismo. (11) La presente invención es también un método para suprimir un aumento en una actividad nerviosa simpática en un animal no humano, que comprende la administración a un animal no humano Tyr-Pro o una sal del mismo. (12) La presente invención es también el método de acuerdo a (10) o (11), en donde el método es para promover la motilidad gastrointestinal, prevenir la amnesia o reducir la ansiedad, en un animal no humano. (13) La presente invención también es un método para la promoción de motilidad gastrointestinal, que comprende la administración a un animal no humano Tyr-Pro o una sal del mismo. (14) La presente invención también es un método para la prevención de amnesia, que comprende la administración a un animal no humano Tyr-Pro o una sal del mismo. (15) La presente invención también es un método para reducir la ansiedad, que comprende la administración a un animal no humano Tyr-Pro o una sal del mismo. (16) La presente invención también es el método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9 a 15, en donde la administración es la administración oral.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra un efecto del péptido Tyr-Pro (YP) en una actividad nerviosa parasimpática en el estómago. Agua o 0.045 mg/kg de peso o 0.12 mg/kg de peso de Tyr-Pro se administra a ratas (n=3), y el potencial de acción del nervio parasimpático (vago) que controla el estómago se mide con el tiempo. El eje vertical (GVNA: actividad del nervio vago gástrico) muestra el porcentaje de potencial de acción relativa de cada grupo experimental, donde se toma el valor antes de la administración (valor 0 minutos) como 100. El eje horizontal muestra el tiempo transcurrido (minutos) después de la administración de la muestra. Los valores para 5 a 60 minutos después de la administración se tratan como un grupo, y se lleva a cabo una prueba de importancia con respecto al grupo de control de agua administrados por el análisis de varianza (ANOVA).

La figura 2 muestra un efecto del péptido Tyr-Pro (YP) en una actividad nerviosa simpática en la glándula adrenal. Agua o 0.12 mg/kg de peso de Tyr-Pro se administra a ratas (n=3), y el potencial de acción del nervio simpático que controla la glándula adrenal se mide con el tiempo. El eje vertical (ASNA: Actividad del Nervio Simpático Adrenal) muestra el porcentaje de potencial de acción relativa de cada grupo experimental, donde se toma el valor antes de la administración (valor 0 minutos) como 100. El eje horizontal muestra el tiempo transcurrido (minutos) después de la administración de la muestra. Los valores de 5 a 60 minutos después de la administración se tratan como un grupo, y se lleva a cabo una prueba de importancia con respecto al grupo de control administrado con agua por el análisis de varianza (ANOVA).

Las figuras 3A-3B muestran efectos de Tyr-Pro (YP) (figura 3A) y un hidrolizado de caseína (figura 3B) en una actividad nerviosa simpática en la arteria cutánea. Agua, 0.12 mg/kg de peso de Tyr-Pro, o 4.2 mg/kg de peso de un hidrolizado de caseína se administra a ratas (n=3), y el potencial de acción del nervio simpático en la arteria cutánea de la cola se mide con el tiempo. El eje vertical (CASNA: Actividad del Nervio Simpático Adrenal) muestra el porcentaje de potencial de acción relativa de cada grupo experimental, donde se toma el valor antes de la administración (valor 0 minutos) como 100. El eje horizontal indica el tiempo (minutos) después de la administración de la muestra. Los valores de 5 a 60 minutos después de la administración se tratan como un grupo, y se lleva a cabo una prueba de importancia con respecto al grupo de control administrado con agua por el análisis de varianza (ANOVA).

Figura 4 muestra un efecto del péptido Tyr-Pro (YP) en una función de vaciado gástrico. Agua o 0.1 mg/kg de peso de Tyr-Pro se administra a ratas (n=10), y 30 minutos más tarde se administra un colorante (rojo fenol). Después de 20 minutos adicionales, cada estómago se extirpa, y el colorante restante en el estómago se determina. Se realiza una prueba de importancia con respecto al grupo de control administrado con agua por una prueba t de Student no apareada.

Las figuras 5-1 A y 5-1 B muestran un efecto de prevenir la amnesia inducida por escopolamina del péptido Tyr-Pro (YP). Agua, solo escopolamina, o 1.5 mg/kg o 15 mg/kg de peso de Tyr-Pro junto con la escopolamina se administra a ratones, y sus respectivos efectos de prevenir amnesia se evalúan de acuerdo a un método descrito en el ejemplo 3. El eje vertical en la figura 5-1A muestra el porcentaje de cambió en el comportamiento de alteración espontánea. El eje vertical en la figura 5-1 B muestra el número total de entradas en brazos. Una prueba de significancia en los grupos se conduce por una prueba de comparación múltiple de Dunnett. En la figura 5-1 A, *** indica que p<0.001 con respecto al grupo de control administrado con agua, # indica que p<0.05 con respecto al grupo al que se administra la escopolamina solamente, y ### indica que p<0.001. Mientras tanto, en la figura 5-1 B, * indica que p<0.05 con respecto al grupo de control administrado con agua, y ## indica que p<0.01 con respecto al grupo al que se administra la escopolamina solamente.

Las figuras 5-2A y 5-2B muestran un efecto de prevenir la amnesia inducida por escopolamina de un hidrolizado de caseína. Agua, escopolamina sola, o 200 mg/kg de peso o 2000 mg/kg de peso de un hidrolizado de caseína junto con escopolamina se administrado a ratones, y sus respectivos efectos de prevenir amnesia se evalúan de acuerdo con un método descrito en el ejemplo 3. El eje vertical en la figura 5-2A muestra el porcentaje de cambio en el comportamiento de alteración espontánea. El eje vertical en la figura 5-2B muestra el número total de entradas en brazos. Una prueba de significancia en los grupos se conduce por una prueba de comparación múltiple de Dunnett. En la figura 5-2A, *** indica que p<0.001 con respecto al grupo de control administrado con agua, # indica que p<0.05 con respecto al grupo al que se administra la escopolamina solamente, y ## indica que p<0.001. Mientras tanto, en la figura 5-2B, *** indica que p<0.001 con respecto al grupo de control administrado con agua, y # indica que p<0.05 con respecto al grupo al que se administra la escopolamina solamente.

La figura 6 muestra efectos anti-ansiedad del péptido Tyr-Pro (YP) y un hidrolizado de caseína. Agua, 0.1 mg/kg de peso a 100 mg/kg de peso de Tyr-Pro, o 10 mg/kg a 1000 mg/kg de peso de un hidrolizado de caseína se administra a ratones (n=12), y se mide el tiempo por el cual los ratones se quedan con los brazos abiertos (ejemplo 4). El eje vertical muestra el porcentaje del tiempo de estancia con los brazos abiertos de cada uno del grupo de control al que se administra agua solamente, los grupos administrados con Tyr-Pro, y los grupos de administrados con hidrolizado de caseína. Los datos se expresan en forma de media ± error estándar. La prueba de significancia con respecto al grupo de control administrado con agua se conduce con una prueba t de Student, y *, **, y *** indican que P< 0.05, P<0.01 y PO.001 , respectivamente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El péptido Tyr-Pro, que es un ingrediente activo de una composición de la presente invención, puede ser un péptido sintetizado químicamente o un péptido derivado de un producto natural. Para la síntesis química orgánica de estos péptidos, un método comúnmente utilizado, tal como una síntesis de fase sólida (Boc-química o Fmoc-química) y una síntesis de fase líquida, se puede emplear. Por ejemplo, estos péptidos se pueden sintetizar mediante un sintetizador de péptido automatizado tal como un sintetizador de péptido (PSS -8) disponible de Shimadzu Corporation. Se puede seleccionar un método para la síntesis de péptidos, condiciones de reacción apropiadas, y lo similar basado en los conocimientos técnicos generales comunes de una persona experta en la técnica a la discreción de la persona. Un método para purificar un péptido sintetizado químicamente también es bien conocido por los expertos en la técnica.

Como se utiliza en la especificación, al referirse al péptido Tyr-Pro, "Tyr-Pro" y "el péptido Tyr-Pro" incluyen sales de los mismos a menos que se indique claramente lo contrario o sea evidente de otra forma en el contexto que debe excluirse. Ejemplos de tales sales de sodio sales, sales de potasio, que pueden existir en condiciones fisiológicas. La composición de la presente invención puede incluir otro péptido y un aminoácido libre o una sal del mismo, además del péptido Tyr-Pro, que es el ingrediente activo de la composición de la presente invención. En relación con la presente invención, códigos de tres letras y de una sola letra de aminoácidos y notación de péptidos siguen las reglas generales bien conocidas por aquellos especializados en la técnica.

En un modo de la presente invención, el péptido Tyr-Pro se puede derivar de un producto de fermentación obtenido por fermentación de una materia prima que contiene una proteína que tiene una secuencia de Tyr-Pro (por ejemplo, leche de vaca, leche de caballo, leche de cabra, leche de oveja, su leche descremada en polvo, soya, trigo o lo similar) con bacterias de la especie Lactobacillus helveticus o lo similar. En la fermentación, la cantidad de la materia prima de proteína no es particularmente limitada y preferiblemente 1 a 19% en peso, en general. Dicho producto de fermentación se puede utilizar como una composición de la presente invención directamente o después de tratamientos adecuados como centrifugación, filtración, cromatografía, secado y similares.

En otro modo de la presente invención, Tyr-Pro se puede derivar de un hidrolizado de una proteína que contiene Tyr-Pro. Ejemplos de tales proteínas incluyen caseínas leche animal como caseínas de vacas de leche, leche del caballo, leche de oveja, leche de cabra y similares y sus concentraciones. Además, el Tyr-Pro se puede derivar de un producto de fermentación obtenido por fermentación de una materia prima de alimento que contiene caseína de leche animal con moho o bacterias tales como bacterias Aspergíllus o ácido láctico. La concentración de la caseína para la hidrólisis o fermentación de la caseína de leche animal no es particularmente limitado y preferiblemente 1 a 19% en peso, en general. Cuando se utiliza una mezcla de enzimas disponibles comercialmente, condiciones óptimas se establecen en general, pero condiciones tales como la cantidad de enzima utilizada, tiempo de reacción, y lo similar se puede cambiar según se apropiado en función de la mezcla de enzimas para que puede obtenerse el hidrolizado de caseína. Por ejemplo, una enzima de degradación de proteína se puede añadir a una solución acuosa, en la cual un caseína de leche animal se disuelve en una relación en peso de mezcla enzimática/caseína de leche animal de 1/1000 o superior, preferentemente 1/100 a 1/10, particularmente preferentemente 1/40 a 1/10. Las condiciones de reacción se pueden seleccionar según sea apropiado dependiendo de la mezcla de enzimas utilizada, y generalmente son de 25 a 60°C, preferiblemente de 45 a 55°C y un pH de 3 a 5, preferiblemente de 5 a 9. Mientras tanto, el tiempo de reacción es 2 a 48 horas y preferentemente de 7 a 15 horas. Dicho hidrolizado de proteínas, en particular, se puede utilizar un hidrolizado de caseína como la composición de la presente invención directamente o después de tratamientos tales como la centrifugación, filtración, cromatografía, secado y similares.

La composición de la presente invención tiene un efecto de regulación de una actividad nerviosa autónoma. Actividades del nervio autónomo incluyen actividades nerviosas simpáticas y parasimpáticas. La composición de la presente invención tiene un efecto de suprimir un aumento de una actividad nerviosa simpática y un efecto de promover una actividad nerviosa parasimpática. En particular, dado que la composición de la presente invención suprime un aumento de una actividad nerviosa simpática, o promueve una actividad nerviosa parasimpática, la composición en consecuencia tiene un efecto de promover la motilidad gastrointestinal, un efecto de prevenir la amnesia, un efecto anti-ansiedad o un efecto de promover el flujo de sangre. Además, dado que la composición de la presente invención tiene un efecto de regular el nervio autónomo, la composición tiene una amplia gama de efectos tales como un efecto de regulación del ritmo cardiaco, un efecto de regulación de la glucosa en la sangre, un efecto de regulación de la secreción de jugos gástricos, un efecto de regulación de la temperatura del cuerpo, un efecto de regulación de la presión arterial, un efecto de relajación de estrés y lo similar.

Los efectos de regular actividades nerviosas autónomas, particularmente, el efecto de suprimir un aumento de una actividad nerviosa simpática y el efecto de promover una actividad nerviosa parasimpática se pueden confirmar por la composición de la presente invención y el péptido Tyr-Pro, que es el ingrediente activo del mismo, por ejemplo, como sigue.

El efecto de promover una actividad nerviosa parasimpática de la composición de la presente invención se puede confirmar, por ejemplo, en la base de un incremento en el potencial de acción observado en la presente composición se administra a una rata o un ratón y el potencial de acción del nervio parasimpático (vago) que controla el estómago se mide sobre tiempo. De manera alternativa, el efecto de promover la actividad nerviosa parasimpática de la presente composición se puede confirmar al usar un incremento de la función de vaciado gástrico, es decir, la activación del estómago como un índice. Específicamente, la composición de la presente invención se administra a una rata o un ratón, y, después de un cierto período de tiempo (por ejemplo, 15 minutos a 30 minutos más tarde), una tinta, por ejemplo, rojo fenol se introduce en el estómago de la rata o del ratón. Después de que un cierto período de tiempo ha transcurrido (por ejemplo, 20 minutos más tarde), el estómago de la rata o ratón se extirpa y la cantidad de tinta restante en él se determina para confirmar el efecto. Mientras tanto, el efecto de suprimir un incremento en una actividad nerviosa simpática de la composición de la presente invención se puede confirmar en la base de la disminución en el potencial de acción observado cuando la presente composición se administra a una rata o un ratón, y el potencial de acción de un nervio simpático que controla la glándula adrenal se mide a través del tiempo. Además, el efecto anti-ansiedad de la presente composición se puede confirmar basado, por ejemplo, la prueba de laberinto en cruz elevado realizada en un ratón. En concreto, agua, la composición presente, o el péptido Tyr-Pro se administra a un ratón y el ratón se coloca sobre una plataforma en el centro de un laberinto elevado. Entonces, los períodos de tiempo durante los cuales el ratón permanece con los brazos abiertos (brazos sin pared) y en los brazos cerrados (brazos con pared) se miden por un cierto período de tiempo. Si el período de tiempo durante el cual el ratón permanece con el brazo abierto es más largo que el del grupo control al cual se administra solamente agua, se determina que un efecto anti-ansiedad se exhibe. El efecto para prevenir amnesia de la composición o el péptido Tyr-Pro se puede confirmar usando un sistema basado en un sistema de evaluación similar al sistema para fármacos terapéuticos contra enfermedad de Alzheimer, por ejemplo, un sistema que utiliza una prueba de laberinto en forma de Y. Específicamente, un fármaco que induce amnesia, como escopolamina, solo se administra a una rata o un ratón. Además, la composición de la presente invención se administra a una rata o un ratón de manera simultánea o con anterioridad a la administración de dicho fármaco. Después, el ratón o la rata se puede someter a una prueba que usa un laberinto en forma de Y de modo que un efecto para prevenir amnesia de la composición de la presente invención se puede confirmar al usar el porcentaje de cambio en el comportamiento de alteración espontánea para diferentes brazos y el número total de entradas en el laberinto como indicadores (véase el Ejemplo 3).

La composición de la presente invención incluye, como un ingrediente activo, el péptido Tyr-Pro, y administración oral o su ingestión oral permite alcanzar los efectos deseados descritos anteriormente. El período de administración o ingestión de la composición de la presente invención o el péptido Tyr-Pro se puede ajustar de manera variable en consideración de la edad de un objetivo de la administración o ingestión, tal como un hümano o animal no humano, y las condiciones de salud y lo similar del objetivo. Ejemplos del animal no humano incluyen animales vertebrados superiores no humanos, en particular, animales no humanos, que incluyen animales de compañía, tal como perros y gatos, y animales domésticos, tal comó vacas, caballos, cerdos y ovejas, sin embargo, el animal no humano no se limita a esto. Una administración única de la composición de la presente invención es suficiente para demostrar sus efectos, sin embargo, un efecto continuo se puede esperar por la ingestión continua, que es una o más veces al día. La composición de la presente invención cuando se usa como medicina puede ser en forma de fármacos para administración oral. Por ejemplo, la forma puede ser una tableta, una pildora, una cápsula dura, una cápsula blanda, una microcápsula, un polvo, un gránulo, un líquido o lo similar. Cuando se produce como medicina, la composición de la presente invención puede ser producida en una dosis unitaria requerida para la administración de fármaco comúnmente aprobada por, por ejemplo, incluir un material farmacéuticamente aceptable, tal como un portador, un excipiente, una sustancia de relleno, un antiséptico, un estabilizador, un aglutinante, un modificador de pH, un regulador de pH, un espesante, un agente de gelatinización, un conservador y un antioxidante, conforme sea necesario.

La composición de la presente invención también se puede usar como un material para alimentos y bebidas o un material para alimento de animal. Por ejemplo, la composición de la presente invención o el péptido Tyr- Pro, que es el ingrediente activo de la composición de la presente invención, se puede considerar como un alimento funcional, tal como un alimento para uso saludable especificado, que tiene un efecto tal como un efecto para promover la motilidad gastrointestinal, un efecto anti-ansiedad, un efecto para promover el flujo de sangre, un efecto para prevenir amnesia, un efecto para regular la frecuencia cardiaca, un efecto para regular la glucosa en sangre, un efecto para regular la secreción de jugo gástrico, un efecto para regular la temperatura corporal o un efecto de relajación de tensión.

La dosis de administración o ingestión de la presente composición o el péptido Tyr-Pro es generalmente de aproximadamente 0.045 mg/kg de peso a 100 mg/kg de peso por administración o ingestión con el fin de obtener los efectos deseados, en términos de la cantidad del péptido Tyr-Pro, que es el ingrediente activo. Cuando la promoción de la motilidad gastrointestinal es principalmente deseada, la dosis de ingestión de la composición de la presente invención es preferentemente 0.045 mg/kg de peso a 0.12 mg/kg de peso en términos de la cantidad de Tyr-Pro. Mientras tanto, cuando un efecto anti-ansiedad es principalmente deseado, la cantidad de Tyr-Pro es particularmente preferentemente de 0.1 mg/kg de peso a 100 mg/kg de peso. Cuando un efecto para prevenir la amnesia es principalmente deseado, la cantidad de Tyr-Pro es preferiblemente de 1.5 mg/kg de peso a 15 mg/kg de peso. La dosis por ingestión en un alimento, que es, por ejemplo, un alimento funcional, también se puede disminuir adicionalmente el nivel descrito anteriormente, dependiendo del número de ingestas diarias. Una dosis apropiada de ingestión se puede ajustar adicionalmente en la consideración de varios factores, como se describe anteriormente.

Una comida, tal como un alimento funcional, que contiene la composición de la presente invención o el péptido Tyr-Pro, que es su ingrediente activo, se puede producir por la adición, a diversos tipos de alimentos, un hidrolizado de una proteína que contiene Tyr-Pro obtenido como se describe anteriormente, su condensado, un producto de fermentación de una materia prima que contiene una proteína que contiene Tyr-Pro por si mismo, o un producto en polvo o granulado de un producto de fermentación. Además, si es necesario, el equilibrio nutricional, sabores y lo similar de la comida se puede mejorar mediante la adición de un aditivo: hecho de otro ingrediente usado en el alimento tal como un sacárido, una proteína, un lípido, una vitamina, un mineral, y un sabor, que incluye varios carbohidratos, lípidos, vitaminas, minerales, edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, intensificadores de textura y lo similar, por ejemplo, o hecho de su mezcla. Alimento animal que contiene la composición de la presente invención o el péptido Tyr-Pro, que es el ingrediente activo de la composición, se puede preparar de manera similar al alimento para el consumo humano.

Por ejemplo, el alimento funcional descrito anteriormente puede ser en forma de un sólido, un gel o un líquido, y puede ser en forma de, por ejemplo, un producto diario fermentado, tal como una bebida de bacterias de ácido láctico, uno cualquiera de varios alimentos y bebidas procesados, un polvo seco, una tableta, una cápsula, un gránulo, o lo similar, y, además, puede ser cualquiera de varias bebidas, yogur, un alimento líquido, jalea, un caramelo, un alimento de envase flexible hermético, confitería de tableta, una galleta, un pastel, pan, un biscocho, un chocolate, o lo similar.

Cuando un alimento funcional, tal como un alimento para uso saludable especificado, que contiene la composición de la presente invención se fabrica, aunque depende de cómo la composición se ha añadido y cómo el alimento que contiene la composición se sirve como un producto, el alimento funcional se prepara de modo que la cantidad del péptido Tyr-Pro, que es el ingrediente activo, sea contenido en el producto final puede ser 0.00001% en peso a 10% en peso, preferentemente 0.00003% en peso a 3% en peso, preferiblemente además 0.0001% en peso a 1% en peso.

Más adelante, la presente invención será específicamente descrita a manera de ejemplos; sin embargo, el alcance de la invención no se limita a ejemplos.

EJEMPLO 1 Efecto de Tyr-Pro en actividad nerviosa autónoma Ratas macho Wister (aproximadamente 0 semanas de edad) (n = 3) con un peso corporal de aproximadamente 300 g se usan, y toman comida y agua a voluntad. Para examinar la actividad nervio autónoma, después de un ayuno de 3 horas, un tubo de polietileno para administración oral se inserta en la cavidad oral de cada rata bajo anestesia con uretano, en la mitad de un período de luz. A partir de entonces, un nervio simpático que controla la glándula adrenal, un nen/io parasimpático (vago) que controla el estómago, o nervio simpático en una arteria cutánea de la cola se conecta a un electrodo de plata, y la actividad eléctrica del nervio se determina. Desde el inicio de la operación a la terminación de la determinación, el tubo se mantiene insertado en la tráquea para asegurar las vías respiratorias, y la temperatura corporal (temperatura rectal de la rata) se mantiene en 35.0 ± 0.5°C al usar una incubadora. En un período donde las actividades de estos nervios se estabilizan, 1 mi de cada muestra se administra oralmente a través dé un tubo de polietileno, y los cambios en las actividades de estos nervios se miden. Las muestras son 0.045 mg/kg de peso, 0.12 mg/kg de peso y 1.2 mg/kg dé peso de Tyr-Pro, así como 4.2 mg/kg de peso de un hidrolizado de caseína. El hidrolizado de caseína utilizado se obtiene a través de la hidrólisis de una caseína de leche de vaca con una enzima, y contiene 0.5% en peso O más de Tyr-Pro con respecto a la cantidad total del hidrolizado de caseína.

Para control 1 mi del agua de solvente se administra por vía oral. Los datos en cada una de las actividades del nervio simpático en la glándula adrenal, el nervio parasimpático en el estómago y el nervio simpático en la arteria cutánea se analizan en términos de la media de la velocidad de iniciación por cinco segundos (pulso/5 s) determinada cada cinco minutos, se representa como porcentaje donde el valor antes del inicio de la estimulación (valor en 0 minutos) se toma como 100%, y se expresa en forma de media ± error estándar. Los valores para 5 a 60 minutos después de la administración se tratan como un grupo, y una prueba de significancia con respecto al grupo control se conduce por el análisis de varianza (ANOVA). Las Figuras 1 a 3A-3B muestran los resultados.

Cuando Tyr-Pro se administra a 0.045 mg/kg de peso o 0.12 mg/kg de peso, la actividad nerviosa parasimpática en el estómago después de la administración es significativamente incrementada en comparación con la del grupo administrado con agua (figura 1). Además, cuando Tyr-Pro se administra a 0.012 mg/kg de peso, la actividad nerviosa simpática en la glándula adrenal se reduce significativamente en comparación con la del grupo administrado con agua (figura 2). Además, cuando Tyr-Pro se administra a 0.12 mg/kg de peso, una tendencia se observa que la actividad nerviosa simpática en la arteria cutánea se reduce en comparación con la del grupo administrado con agua (figura 3A). Además, cuando el hidrolizado de caseína se administra en 4.2 mg/kg de peso, la actividad nerviosa simpática en la arteria cutánea es significativamente disminuida en comparación con la del grupo administrado con agua (figura 3B). Estos resultados revelan que, cuando se administra oralmente en el intervalo de 0.045 mg/kg de peso a 0.12 mg/kg de peso, Tyr-Pro promueve la actividad nerviosa parasimpática en el estómago, se suprime la actividad nerviosa simpática en la glándula adrenal, y se suprime la actividad nerviosa simpática en la arteria cutánea. Además, se revela que el hidrolizado de caseína utilizado suprime la actividad nerviosa simpática en la arteria cutánea de 4.2 mg/kg de peso.

EJEMPLO 2 Efecto de Try-Pro en función de vaciado gástrico Ratas macho Sprague-Dawley (SD) (6 semanas de edad) (n = 10) se usan, y toman alimento y agua a voluntad. Después de la alimentación preliminar por una semana o más, las ratas se someten al experimento. Antes de la prueba, todas las ratas se mantienen en ayunas en una jaula de ayuno durante 24 horas. Durante el período, las ratas toman agua a voluntad. En la prueba, un solvente (agua destilada para inyección) y 0.1 mg/kg de peso de Tyr-Pro se administra por vía oral a las ratas, y, 30 minutos más tarde, una solución de tinta de 0.05% (rojo fenol) (que contiene 1.5% de carboximetil celulosa) se administra por vía oral en un volumen de 1.5 ml/rata. Cada estómago se extirpa bajo anestesia con éter 20 minutos después de la administración de la tinta sin retardo. El estómago extirpado se sumerge en un vaso de precipitado llenado con NaOH 0.1N, finamente cortado con unas tijeras, y después se homogeniza mediante por el uso de Polytron. El homogeneizado se deja reposar aún a temperatura ambiente durante una hora, y después las proteínas aquí se precipitan por la adición de una solución al 30% (p/v) de ácido tricloroacético en el sobrenadante. El sobrenadante se centrifuga y después se mide la absorbancia a 560 nm. La función de vaciado gástrico (GE: vaciado gástrico) se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula.

GE (%) = absorbancia de solución recuperada de estómagos de grupo administrado con sustancia de prueba/absorbancia en vaciado gástrico de 0%) x 100 Los resultados se muestran en la figura 4. Los resultados de mediciones se expresan en la forma de media ± error estándar, y la prueba t de Student no pareada se usa para comparar el grupo administrado con el grupo control. En la prueba de función de vaciado gástrico en ratas, el porcentaje de descarga de tinta del grupo de control (grupo administrado con agua destilada) es de 78.8 + 2.41 %, mientras que el porcentaje de descarga de tinta del grupo administrado con Tyr-Pro es 85.4 ± 2.01 %. Estos resultados revelan que, cuando se administra a 0.1 mg/kg de peso, Tyr-Pro exhibe un efecto para promover la motilidad gastrointestinal.

EJEMPLO 3 Efectos para prevenir amnesia de Trv-Pro e hidrolizado de caseína Ratones machos ddY (aproximadamente 7 semanas de edad) (n = 15) se utilizan, y toman alimento y agua a voluntad. Las sustancias de prueba utilizadas son 1.5 mg/kg de peso o 15 mg/kg de peso de Tyr-Pro, o 200 mg/kg de peso o 2000 mg/kg de peso de un hidrolizado de caseína. El hidrolizado de caseína utilizado es el mismo que el descrito en el ejemplo 1.

Las sustancias de prueba se administran a los ratones una vez por vía oral 60 minutos antes de la ejecución de una prueba del laberinto en forma de Y para la evaluación del comportamiento de alteración espontánea. Además, 30 minutos antes de la ejecución de la prueba del laberinto en forma de Y, 1 mg/kg de peso de escopolamina se administra por vía subcutánea en el dorso de los ratones a fin de inducir dismnesia y/o deterioro cognitivo en los ratones. En la prueba del laberinto en forma de Y, un laberinto en forma de Y se utiliza como un dispositivo experimental, en el que la longitud de cada brazo es de 40 cm, la altura de la pared es de 12 cm, el ancho del piso es de 3 cm, y el ancho de la parte superior es de 10 cm y tres brazos se conectan entre sí en un ángulo de 120 grados. Cada uno de los ratones se coloca en la punta de uno de los brazos del laberinto en forma de Y, y después se deja ir a explorar libremente en el laberinto durante 8 minutos. La secuencia de los brazos en los que cada uno de los ratones entra se registra. El número de entradas en los brazos de cada ratón durante el tiempo de medición se cuenta que es el número total de entradas. En la secuencia, la combinación en la que tres brazos diferentes se seleccionan en la sucesión (por ejemplo, con los tres brazos, respectivamente, llamados A, B y C, si la secuencia de los brazos introducidos es ABCBACACB, el conteo es 4 inclusive si se superponen) se investiga y el número del conteo se utiliza como el número del comportamiento de alteración espontánea. El porcentaje de cambio en el comportamiento de alteración espontánea se calcula dividiendo el número de comportamiento alteración espontánea por un número obtenido restahdo 2 del número total de entradas y multiplicando un número resultante por 100. El porcentaje de cambio en comportamiento de alteración espontánea se utiliza como un indicador del comportamiento de alteración espontánea. Los valores medidos se expresan en forma de media ± error estándar para cada grupo.

Una prueba importante con respecto al grupo control se realiza mediante la prueba de comparación múltiple de Dunnett después de un análisis unidireccional de varianza. Figura 5-1A a figura 5-2B muestran los resultados.

Estos resultados revelan que Tyr-Pro exhibe un efecto de prevención de amnesia, cuando se administra en un intervalo de 1.5 mg/kg de peso a 15 mg/kg de peso, y que el hidrolizado de caseína utilizado exhibe un efecto de prevención de amnesia, cuando se administra en un intervalo de 200 mg/kg de peso a 2000 mg/kg de peso.

EJEMPLO 4 Evaluación del efecto anti-ansiedad de Trv-Pro por prueba de laberinto en cruz elevado Ratones machos ddY (aproximadamente 6 semanas de edad) (n = 12) se usan. Después de la alimentación preliminar, Tyr-Pro (0.1 mg/kg de peso, 1.0 mg/kg de peso, 10 mg/kg de peso, 30 mg/kg de peso, o 100 mg/kg de peso) o un hidrolizado de caseína (10 mg/kg de peso, 100 mg/kg de peso o 1000 mg/kg de peso) se administra una vez por vía oral. El efecto antiansiedad se examina por una prueba de laberinto en cruz elevado 30 minutos después de la administración. El hidrolizado de caseína es el mismo que en el ejemplo 1. Diazepam (1.0 mg/kg de peso), lo que se conoce como un agente anti-ansiedad, se administra para un control positivo. El laberinto en cruz elevado tiene una forma tal que dos placas de cloruro de vinilo cada una con una longitud de 65 cm y un ancho de 5 cm se cruzan entre sí en una forma más, donde las paredes con una altura de 50 cm (resina de acrílico negro) se coloca alrededor de una de las vías, excepto la porción de cruce en el centro. Específicamente, el laberinto en cruz incluye dos brazos sin pared (brazos abiertos), dos brazos con pared (brazos cerrados) y la porción de cruce en el centro. En la prueba de laberinto en cruz elevado, cada uno de los ratones se coloca en la porción de cruce en el centro del laberinto, de tal manera que el ratón se enfrenta a uno de los brazos con pared, y después se deja en libertad para explorar libremente en el laberinto durante 5 minutos. Los comportamientos de los mismos se observan, y el tiempo acumulado de la estancia en los brazos abiertos se mide. Del valor medido, el porcentaje del tiempo acumulado de estancia en los brazos abiertos en una prueba de 5 minutos se encuentra, y se utiliza como un índice del efecto anti-ansiedad. Agua destilada se administra a un grupo de control y diazepam se administra una vez por vía oral en 1 mg/kg de peso a un grupo de control positivo. Los valores medidos se expresan en forma de media ± error estándar para cada grupo y una comparación con el grupo control se realiza usando una prueba t de Student. Los resultados se muestran en la figura 6.

Estos resultados revelan que Tyr-Pro exhibe un efecto anti-ansiedad en un intervalo de 0.1 mg/kg de peso a 100 mg/kg de peso y el hidrolizado de caseína utilizada exhibe un efecto anti-ansiedad en un intervalo de 10 mg/kg de peso a 1000 mg/kg de peso.

Referencias Documento 1 : WO 2002/076455 Documento 2: Publicación de solicitud de patente japonesa No.

Documento 3: Izv. Akad. Nauk. Ser. Biol., (2008), No. 1 , 61-67 Documento 4: WO 2007/030035 Documento 5: Patente Japonesa No. 3364579.

Claims (32)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Una composición para regular una actividad nerviosa autónoma, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

2. - Una composición para promover una actividad nerviosa parasimpática, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro ó una sal del mismo.

3. - Una composición para suprimir un aumento de una actividad nerviosa simpática, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

4. - La composición de conformidad con la reivindicación 2 o 3, caracterizada además porque la composición tiene un efecto de promover motilidad gastrointestinal, un efecto de prevenir la amnesia o un efecto antiansiedad.

5. - Una composición para promover la motilidad gastrointestinal, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

6.- Una composición para prevenir amnesia que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

7.- Una composición para reducir la ansiedad, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

8. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada además porque la composición está adaptada para ser administrable oralmente.

9. - El uso de Tyr-Pro o una sal del mismo, para preparar un medicamento para regular una actividad nerviosa autónoma en un animal no humano.

10. - El uso de Tyr-Pro o una sal del mismo, para preparar un medicamento para promover una actividad nerviosa parasimpáticá en un animal no humano.

11.- El uso de Tyr-Pro o una sal del mismo, para preparar un medicamento para suprimir un aumento de una actividad nerviosa simpática en un animal no humano.

12. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 10 o reivindicación 11 , en donde el medicamento es para promover la rnotilidad gastrointestinal, prevenir la amnesia o reducir ansiedad, en un animal no humano.

13. - El uso de Tyr-Pro o una sal del mismo, para preparar un medicamento para promover la rnotilidad gastrointestinal.

14. - El uso de Tyr-Pro o una sal del mismo, para preparar un medicamento para prevenir la amnesia.

15. - El uso de Tyr-Pro o una sal del mismo, para preparar un medicamento para reducir la ansiedad.

16. - El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 9 a 15, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable oralmente.

17.- Un agente para regular la actividad nerviosa autónoma, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

18.- Un agente para promover la actividad nerviosa parasimpática, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

19. - Un agente para suprimir un aumento de actividad nerviosa simpática, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

20. - El agente de conformidad con la reivindicación 18 o 19, caracterizado además porque la composición tiene un efecto de promover motilidad gastrointestinal, un efecto de prevenir la amnesia o un efecto antiansiedad.

21.- Un agente para promover la motilidad gastrointestinal, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

22. - Un agente para prevenir amnesia que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

23. - Un agente para reducir la ansiedad, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

24. - El agente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23, caracterizado además porque la composición está adaptada para ser administrable oralmente.

25. - Una composición farmacéutica para regular una actividad nerviosa autónoma, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

26. - Una composición farmacéutica para promover una actividad nerviosa parasimpática, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

27. - Una composición farmacéutica para suprimir un aumento de una actividad nerviosa simpática, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

28.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 26 o 27, caracterizada además porque la composición tiene un efecto para promover la motilidad gastrointestinal, un efecto para prevenir la amnesia o un efecto anti-ansiedad.

29. - Una composición farmacéutica para promover la motilidad gastrointestinal, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

30. - Una composición farmacéutica para prevenir la amnesia, que comprende, como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

31. - Una composición farmacéutica para reducir la ansiedad, que comprende como un ingrediente activo, Tyr-Pro o una sal del mismo.

32. - La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 25 a 31 , caracterizada además porque la composición está adaptada para ser administrable oralmente.