MX2011009491A - Compuestos para el tratamiento de trastornos metabolicos. - Google Patents

Abstract

La presente invención se dirige a compuestos terapéuticos los cuales tienen actividad como agonistas de GPR119 y son útiles para el tratamiento de trastornos metabólicos que incluyen la diabetes tipo II.

Description

COMPUESTOS PARA EL TRATAMIENTO DE TRASTORNOS METABOLICOS Antecedentes de la Invención La presente invención se dirige a compuestos terapéuticos que son útiles para el tratamiento de trastornos metabólicos que incluyen la diabetes tipo II. En particular, la presente invención se dirige a compuestos los cuales tienen actividad como agonistas del GPR119.

Los fármacos dirigidos a la patofisiología asociada con la diabetes tipo II no dependiente de insulina tienen muchos efectos colaterales potenciales y no atienden adecuadamente la dislipidemia e hiperglicemia en una alta proporción de pacientes. El tratamiento se enfoca frecuentemente en las necesidades individuales del paciente utilizando una dieta, ejercicio, agentes hipoglicémicos e insulina, pero existe una necesidad continua de nuevos agentes antidiabéticos, particularmente aquellos que puedan ser mejor tolerados con menos efectos adversos.

Similarmente , el síndrome metabólico (síndrome X) pone a las personas en un alto riesgo de una enfermedad de las arterias coronarias y se caracteriza por una agrupación de factores de riesgo que incluyen la obesidad central (tejido adiposo excesivo en la región abdominal), intolerancia a la glucosa, alta cantidad de triglicéridos y baja cantidad de colesterol HDL y presión sanguínea alta. La REF: 223536 isquemia de miocardio y la enfermedad microvascular son una morbosidad establecida que está asociada con el síndrome metabólico no tratado o controlado deficientemente.

La obesidad se caracteriza por una masa excesiva de tejido adiposo en relación con el tamaño del cuerpo. Clínicamente, la masa de la grasa del cuerpo se calcula por medio del índice de masa corporal (BMI, por sus siglas en inglés; peso (kg) /altura (m) 2) o la circunferencia de la cintura. Los individuos se consideran obesos cuando el BMI es mayor que 30 y existen consecuencias médicas establecidas por tener sobrepeso. Ha habido una perspectiva médica aceptada durante algún tiempo de que un peso corporal incrementado, especialmente como resultado de grasa abdominal del cuerpo, está asociado con un riesgo incrementado de diabetes, hipertensión, enfermedad cardíaca y otras numerosas complicaciones de la salud, tales como artritis, apoplejía, enfermedad de la vesícula biliar, problemas musculares y respiratorios, dolor de espalda e incluso ciertos cánceres.

Existe una necesidad continua de agentes antidiabéticos novedosos, particularmente aquellos que sean bien tolerados con menos efectos adversos y en particular de agentes que sean imparciales respecto al peso o preferiblemente que causen una pérdida de peso.

El GPR119 (referido previamente como GPR116) es un GPCR identificado como SNORF25 en el documento WO00/50562 el cual da a conocer los receptores tanto de humano como de rata, el documento US 6,468,756 también da a conocer el receptor de ratón (números de acceso: AA 95194 (humano), AA 95195 (rata) y A N95196 (ratón) ) .

En los humanos, . el GPR119 es expresado en el páncreas, intestino delgado, colon y tejido adiposo. El perfil de expresión del receptor GPR119 humano indica su utilidad potencial como un objetivo para el tratamiento de la diabetes .

Se ha mostrado que los agonistas del GPR119 estimulan la liberación del GLP-1 del tracto GI . Como consecuencia, los agonistas del GPR119 (1) aumentan la liberación de insulina dependiente de glucosa del páncreas conduciendo a mejoramientos en la tolerancia a la glucosa oral; (2) atenúan el progreso de la enfermedad al incrementar las concentraciones de cA P en células ß; y (3) inducen la pérdida de peso posiblemente a través de la capacidad del GLP-1 para reducir la captación de alimento.

Las Solicitudes de Patente Internacional WO2005/061489, WO2006/070208 , WO2006/067532 , WO2006/067531 , WO2007/003960, WO2007/003961, WO2007/003962 , O2007/003964 , WO2007/116229, WO2007/116230 , WO2007/138362 , O2008/081204 , WO2008/081205, WO2008/081206 , O2008/081207 , O2008/081208 , WO2009/050522, O2009/050971 , WO2010/004343 , WO2010/004344 , WO2010/004345, WO2010/004347 y O2010/00166 dan a conocer agonistas del receptor GPR119.

La dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV) es una serina proteasa omnipresente, no obstante sumamente específica, que escinde los dipéptidos N- terminales de los polipéptidos con L-prolina o L-alanina en la penúltima posición. Los estudios con inhibidores de la DPP-IV muestran que el papel principal de la DPP-IV está en la inactivación del GLP-1. Al extender la duración de acción del GLP-1, la secreción de insulina es estimulada, la liberación de glucagón es inhibida y el vaciado gástrico es desacelerado. Los inhibidores de la DPP-IV se utilizan para el tratamiento de la diabetes tipo II, los ejemplos de inhibidores de la DPP-IV incluyen vildagliptina, sitagliptina, alogliptina y saxagliptina .

La posibilidad de utilizar una combinación de un agonista del GPR119 y un inhibidor de la DPP-IV ha sido sugerida, sin embargo esto requiere la administración de dos productos formulados por separado al paciente o la co-formulación de dos ingredientes activos con los problemas inherentes de conseguir la compatibilidad en las propiedades fisicoquímicas, farmacocinéticas y farmacodinámicas de los dos ingredientes activos. La Solicitud de Patente Internacional WO2009/034388 , publicada después de la fecha de prioridad de la presente solicitud, da a conocer compuestos que tienen una actividad doble como agonistas del GPR119 e inhibidores de la DPP-IV.

Los compuestos de la invención también pueden tener una actividad doble como agonistas del GPR119 e inhibidores de la DPP-IV.

Breve Descripción de la Invención La presente invención se dirige a compuestos los cuales tienen actividad como agonistas del GPR119 y también pueden ser inhibidores de la DPP-IV y son útiles para el tratamiento de trastornos metabólicos que incluyen la diabetes tipo II.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención proporciona compuestos de la fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos : en donde p es 1 o 2; cuando p es 2, Z es N-C(0)OR4, N-C(0)NRR5 o N- heteroarilo el cual puede ser sustituido opcionalmente por uno o dos grupos seleccionados de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono sustituido opcionalmente por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono y halógeno; cuando p es 1, Z también puede ser -N-CH2-fenilo en donde el grupo fenilo es sustituido opcionalmente por 1 o 2 grupos seleccionados independientemente de alquilo de 1 a 4 átomo de carbono, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono y halo; A es un grupo fenilo para-sustituido o un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno; B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S o un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno; cuando B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros,. X es -0-CR6H- o -CR7H-0-CR6H- ; y cuando B es un anillo de heteroarilo de 6 miembros, X es -O- o CR6H-0-; R1 es hidrógeno, halo, ciano, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono; q es 1 o 2 ; , fenilo sustituido opcionalmente por uno o más grupos halo o piridilo sustituido opcionalmente por uno o más grupos halo o metilo; R3 es independientemente halo o metilo; n es 0 o 1; m es 0 , 1 o 2 , R4 es alquilo de 2 a 6 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono en donde el grupo cicloalquilo es sustituido opcionalmente por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R6 y R7 son independientemente hidrógeno o alquilo de 1 a 2 átomos de carbono .

En una modalidad preferida, los compuestos de la invención tienen la estereoquímica definida en la fórmula (la) , estos compuestos demuestran la actividad inhibitoria de la DPP-IV: (la) En una modalidad de la invención, cada p es independientemente 1 o 2, es decir que forma un anillo de 4, 5 o 6 miembros. En otra modalidad de la invención, cada p es el mismo, es decir que forma un anillo de 4 o 6 miembros. En los compuestos de la invención p es preferiblemente 2.

En una modalidad de la invención, Z es N-C(0)0R4.

En una modalidad adicional de la invención, Z es N-heteroarilo el cual puede ser sustituido opcionalmente por uno o dos grupos seleccionados de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono sustituido opcionalmente por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono y halógeno.

Cuando Z es N-heteroarilo, los grupos heteroarilo preferidos incluyen oxadiazol y pirimidina A es preferiblemente fenilo, piridilo o pirimidinilo .

R1 es preferiblemente hidrógeno.

En una modalidad de la invención, B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros, en otro B es un grupo heteroarilo de 6 miembros.

Cuando B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros, X es preferiblemente -0-CR6H-; y cuando B es un anillo de heteroarilo de 6 miembros, X es preferiblemente o CR6H-0- .

R2 es preferiblemente fenilo o piridilo, más preferiblemente fenilo y aún más preferiblemente fenilo sustituido .

Cuando R2 es fenilo sustituido por uno o más grupos halo, es sustituido preferiblemente por 1 a 3 grupos halo, los grupos halo son preferiblemente fluoro o cloro, más preferiblemente fluoro.

Cuando R2 es piridilo, es preferiblemente 2-piridilo .

Cuando R2 es piridilo sustituido, es sustituido preferiblemente por 1 a 3 grupos halo o metilo, más preferiblemente 1 o 2 grupos metilo. n es preferiblemente 1.

R4 es preferiblemente alquilo de 2 a 6 átomos de carbono .

R6 y R7 son de manera preferible independientemente hidrógeno o metilo.

Un grupo de compuestos los cuales se pueden mencionar son aquellos de la fórmula (Ib) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos: (Ib) en donde p es 1 o 2; cuando p es 2, Z es N-C(0)OR4, N-C(0)NRR5 o N-heteroarilo el cual puede ser sustituido opcionalmente por uno o dos grupos seleccionados de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono y halógeno; cuando p es 1, Z es -N-CH2-fenilo en donde el grupo fenilo es sustituido opcionalmente por 1 o 2 grupos seleccionados independientemente de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono y halo; A es un grupo fenilo para-sustituido o un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno; B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, 0 y S o, un anillo de heteroarilo de 6 miembros para- sustituido que contiene uno o más átomos de nitrógeno; cuando B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros, X es -0-CR6H- y cuando B es un anillo de heteroarilo de 6. miembros, X es -0- o CR6H-0- ; R1 es hidrógeno, halo, ciano, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono; q es 1 o 2 ; R2 es o fenilo sustituido opcionalmente por uno o más grupos halo; R3 es independientemente halo o metilo; n es 0 o 1; m es 0 , 1 o 2 ; R4 es alquilo de 2 a 6 átomos de carbono; R5 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R6 es hidrógeno o alquilo de 1 a 2 átomos de carbono.

En una modalidad preferida de los compuestos de la fórmula (Ib) , éstos tienen la estereoquímica definida en la fórmula (la) .

Mientras que los grupos preferidos para cada variable han sido listados en general anteriormente por separado para cada variable, los compuestos preferidos de esta invención incluyen aquellos en los cuales múltiples o cada variable en la fórmula (I) se seleccionan de los grupos preferidos para cada variable. Por lo tanto, esta invención tiene por objeto incluir todas las combinaciones de los grupos listados preferidos.

El peso molecular de los compuestos de la invención es preferiblemente menor que 800, más preferiblemente menor que 600.

Como se utiliza en este documento, a menos que se establezca de otra manera, "alquilo" significa cadenas de carbono las cuales pueden ser lineales o ramificadas. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec- y tere-butilo.

El término anillos de "heteroarilo" significa anillos de heteroarilo que contienen N de 5 o 6 miembros que contienen hasta 2 heteroátomos adicionales seleccionados de N, 0 y S. Los ejemplos de estos anillos de heteroarilo son pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo y triazinilo.

La referencia a la sustitución en la posición para con relación a los anillos A y B se refiere a las posiciones del grupo -B- y el heterociclo que contiene N en el anillo A y los grupos -X- y -A- en el anillo B.

Los compuestos descritos en este documento pueden contener uno o más centros asimétricos y de esta manera pueden dar origen a diastereómeros e isómeros ópticos. La presente invención incluye todos estos diastereómeros posibles asi como también sus mezclas racémicas, sus enantiómeros resueltos sustancialmente puros, todos los posibles isómeros geométricos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. La presente invención incluye todos los estereoisómeros de los compuestos de la invención y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Además, las mezclas de estereoisómeros así como también los estereoisómeros específicos, aislados también están incluidos. Durante el curso de los procedimientos sintéticos que se utilizan para preparar estos compuestos, o en el uso de procedimientos de racemización o epimerización conocidos para aquellas personas expertas en el campo, los productos de estos procedimientos pueden ser una mezcla de estereoisómeros .

Cuando existe un tautómero del compuesto de la invención, la presente invención incluye cualquier tautómero posible y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y mezclas de los mismos, exceptó donde se defina o establezca específicamente de otra manera.

Cuando el compuesto de la invención y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo existen en la forma de solvatos o formas pol imórf icas , la presente invención incluye cualquier solvato y forma polimórfica posible. Un tipo de solvente que forma el solvato no está limitado particularmente siempre y cuando el solvente sea farmacológicamente aceptable. Por ejemplo, se puede utilizar agua, etanol, propanol, acetona o similares.

El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de bases o ácidos no tóxicos, farmacéuticamente aceptables. Cuando el compuesto de la presente invención es ácido, su sal correspondiente se puede preparar convenientemente a partir de bases no tóxicas, farmacéuticamente aceptables, que incluyen bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales derivadas de estas bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre (cúpricas y cuprosas), férricas, ferrosas, de litio, magnesio, potasio, sodio, zinc y similares. Se prefiere particularmente las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. Las sales derivadas de bases no tóxicas, orgánicas, farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, así como también aminas cíclicas y aminas sustituidas tales como aminas sustituidas de origen natural y sintetizadas. Otras bases no tóxicas, orgánicas, farmacéuticamente aceptables a partir de las cuales se pueden formar las sales incluyen arginina, betaína, cafeína, colina, ?',?'-dibencilet ilendiamina , dietilamina, 2 -dietilaminoetanol , 2 -dimetilaminoetanol , etanolamina, et ilendiamina , N-etilmorfolina , N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina , lisina, met ilglucamina , morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina , t rimet ilamina , tripropi lamina , trometamina y similares .

Cuando el compuesto de la invención es básico, su sal correspondiente se puede preparar convenientemente a partir de ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, que incluyen ácidos inorgánicos y orgánicos. Estos ácidos incluyen, por ejemplo, ácido acético, bencensulfónico , benzoico, canforsulfónico , cítrico, etanosulfónico, fumárico, glucónico, glutámico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosul fónico , múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p- toluensul fónico y similares.

Puesto que los compuestos de la invención están proyectados para el uso farmacéutico, se proporcionan preferiblemente en una forma sustancialmente pura, por ejemplo por lo menos 60% puros, más adecuadamente por lo menos 75% puros, especialmente por lo menos 98% puros (los % están en una base en peso por peso) .

Los compuestos de la fórmula (I) se pueden preparar como se describe posteriormente, en donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, A, B, X, Z, m, n, p, q son como se definiera para la fórmula (I) . PG es un grupo protector, Hal es halógeno y E es ya sea halógeno o trif lato .

Los compuestos de la fórmula (I) se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 1. Los compuestos de la fórmula (IV) se pueden preparar por medio del desplazamiento mediante SNAr de compuestos haloaromát icos , adecuados de la fórmula (II) con aminas de la fórmula (III) bajo condiciones estándar, por ejemplo, DBU y DMSO a 120°C. Alternativamente, los compuestos de la fórmula (IV) se pueden preparar por medio de la reacción de compuestos haloaromát icos , adecuados de la fórmula (II) con aminas de la fórmula (III) bajo condiciones de Buchwald-Hartwig, tal como Pd2(dba)3 y BINAP en un solvente adecuado, tal como tolueno a 110°C. La desprotección de la funcionalidad de amina, utilizando condiciones estándar bien conocidas para aquellas personas de experiencia en el campo, proporciona los compuestos de la fórmula (I) como se describieran anteriormente.

Esquema de Reacción 1 i Los bloques de construcción de la fórmula (II), donde B es un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno y X es -0- o CR6H-0-, se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 2. Los haluros de arilo de la fórmula (V) se pueden tratar con boronatos de la fórmula (VI) bajo condiciones estándar de Suzuki, por ejemplo [1,1-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio en un solvente adecuado tal como DMF/agua a 80 °C.

Esquema de Reacción 2 V VI II Alternativamente, los bloques de construcción de la fórmula (II) , donde B es un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno y X es -0- o CR6H-0- , se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 3. Los boronatos de arilo de la fórmula (VII) se pueden preparar por medio de la reacción de haluro de arilo de la fórmula (V) y bis (pinacolato) diboro en presencia de un catalizador adecuado, tal como [1,1-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio en un solvente adecuado tal como 1,4-dioxano a 110 °C. Los bloques de construcción de la fórmula (II) se pueden preparar por medio de la reacción de los boronatos de la fórmula (VII) con haluros de arilo o triflatos de arilo de la fórmula (VIII) bajo condiciones estándar de Suzuki, por ejemplo, [1,1-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio en un solvente adecuado tal como DMF/agua a 80 °C.

Esquema de Reacción 3 II Los bloques de construcción de la fórmula (V) , donde B es un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno y X es -O- o CR6H-O-, se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 4. Los alcoholes de la fórmula (IX) se pueden tratar con hidroxiarilos de la fórmula (X) bajo condiciones estándar de Mitsonobu, por ejemplo, utilizando dipiperidido azodicarboxílico y tributilfosfina en un solvente adecuado tal como tolueno.

Esquema de Reacción 4 Alternativamente, los bloques de construcción de la fórmula (V) , donde B es un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno y X es -O- o CR6H-0- , se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 5. Los alcoholes de la fórmula (IX) se pueden tratar con un compuesto de dihaloarilo adecuado de la fórmula (XI) bajo condiciones estándar de SNAr, tal como DBU y DMSO a 120°C.

Esquema de Reacción 5 Los bloques de construcción de la fórmula (II) , donde B es 1 , 2 , 4 -oxadiazol-5- ilo y X es -0-CR6H- se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 6. La amidoxima de la fórmula (XII) se puede preparar por medio de la reacción de nitrilo de la fórmula (XIII) y clorhidrato de hidroxilamina en presencia de una base adecuada tal como K2C03 en un solvente adecuado tal como etanol/agua a 78 °C. Los bloques de construcción de la fórmula (II) como se describieran anteriormente se pueden preparar por medio de la reacción de amidoxima de la fórmula (XII) con un ácido de la fórmula (XIV) bajo condiciones estándar, tal como cloroformiato de isobutilo y trietilamina, en un solvente adecuado tal como DMF.

Esquema de Reacción 6 XIII XII XIV II Los bloques de construcción de la fórmula (II), donde B es 1 , 2 , 4 -oxadiazol-5- ilo y X es -0-CR6H- se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 7. Las amidoximas de la fórmula (XV) se pueden preparar por medio de la reacción de nitrilo de la fórmula (XVI) y clorhidrato de hidroxilamina en presencia de una base adecuada tal como K2C03 en un solvente adecuado tal como etanol/agua a 78 °C. Los bloques de construcción de la fórmula (II) como se describieran anteriormente se pueden preparar por medio de la reacción de amidoxima de la fórmula (XV) con un ácido de la fórmula (XVII) bajo condiciones estándar, tal como cloroformiato de isobutilo y trietilamina, en un solvente adecuado tal como DMF.

Esquema de Reacción 7 p(CH Hal XVI XV XVII Los bloques de construcción de la fórmula (II) donde B es un tiazol-2-ilo y X es -0-CR6H- se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 8. Las amidas primarias de la fórmula (XVIII) se pueden preparar por medio de la reacción de ácidos de la fórmula (XIV) con amoníaco en una solución de 1,4-dioxano bajo condiciones estándar de acoplamiento de amida, por ejemplo, HOBT y EDCI, en un solvente adecuado, tal como DCM. Las tioamidas de la fórmula (XIX) se pueden preparar por medio de la reacción de amidas primarias de la fórmula (XVIII) bajo condiciones estándar, por ejemplo utilizando el reactivo de Lawesson en un solvente adecuado tal como tolueno a reflujo. Los bloques de construcción de la fórmula (II) como se describieran anteriormente se pueden preparar por medio de la reacción de bromocetonas de la fórmula (XX) con tioamida de la fórmula (XIX) bajo condiciones estándar de Hantzsch, por ejemplo etanol a temperatura ambiente.

Esquema de Reacción 8 XIV XVIII XIX XX Los bloques de construcción de la fórmula (II) donde B es un tiazol-5-ilo y X es -0-CR6H- se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 9. Las amidas primarias de la fórmula (XXI) se pueden preparar por medio de la reacción de ácidos de la fórmula (XVII) con amoníaco en solución de 1,4-dioxano bajo condiciones estándar de acoplamiento de amida, por ejemplo, HOBT y EDCI , en un solvente adecuado, tal como DCM. Las tioamidas de la fórmula (XXII) se pueden preparar por medio de la reacción de amidas primarias de la fórmula (XVIII) bajo condiciones estándar, por ejemplo utilizando el reactivo de Lawesson en un solvente adecuado tal como tolueno a reflujo. Los bloques de construcción de la fórmula (II) como se describieran anteriormente se pueden preparar por medio de la reacción de clorocetonas de la fórmula (XXIII) con tioamida de la fórmula (XXII) bajo condiciones estándar 'de Hantzsch, por ejemplo etanol a temperatura ambiente .

Esquema de Reacción 9 XVII XXI XXII X III Los bloques de construcción de la fórmula (XVI) donde X es -0-CR6H- se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 10. Los alcoholes de la fórmula (XXIV) se pueden tratar con bromuros de la fórmula (XXV) bajo condiciones estándar, por ejemplo, NaH en un solvente adecuado, tal como THF a 0°C.

Esquema de Reacción 10 OH RR x—=N *-(CH.)P ? Y R" - ><CH>z)--f(CH2)P XXIV XXV XVI Los bloques de construcción de la fórmula (XX) se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 11. Las cetonas de la fórmula (XXVI) se pueden tratar con tribromuro de trimetilfenilamonio en un solvente adecuado, tal como THF.

Esquema de Reacción 11 XXVI XX Los bloques de construcción de la fórmula (XXIII) donde X es -0-CR6H- se pueden preparar como se resume en el Esquema de Reacción 12. Los alcoholes de la fórmula (XXIV) se pueden tratar con 1 , 3 -dicloroacetona en presencia de una base adecuada, tal como 2C03, en un solvente adecuado tal como DMF .

Esquema de Reacción 12 XXIV XXIII Los ejemplos y síntesis de los bloques de construcción de la fórmula (III) han sido descritos en alguna otra parte: Benbow y colaboradores, documento O2007/148185 ; Brackes y colaboradores, Bioorg. Med. Chem. Lett, 2007, 17 2005-2012; Pei y colaboradores, J. Med. Chem., 2007, 50(8) , 1983-1987; Cox y colaboradores, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2007, 17 4579-4583; Wright y colaboradores, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2007, 17 5638-5642.

La síntesis de los bloques de construcción de la fórmula (IX) donde p es 2 y X es -O- o CR6H-0- han sido descritos en alguna otra parte: Fang y colaboradores, documento WO2008/070692 ; Alper y colaboradores, documento WO2008/097428; acker y colaboradores, documento WO2009/012275.

.La síntesis de los bloques de construcción de la fórmula (IX) donde p es 1 y X es -0- o CR6H-0- han sido descritos en alguna otra parte: Arnould y colaboradores, documento WO2007/091046 ; Evans y colaboradores, documento WO2008/079028.

La síntesis de los bloques de construcción de la fórmula (XIV) donde X es -0-CR5H- han sido descritos en alguna otra parte: Bertram y colaboradores, documento WO2007/116229.

Otros compuestos de la fórmula (I) se pueden preparar por medio de métodos análogos a aquellos descritos anteriormente o por medio de métodos conocidos per se. Los detalles adicionales para la preparación de los compuestos de la fórmula (I) se encuentran en los ejemplos.

Los compuestos de la fórmula (I) se puede preparar individualmente o como colecciones de compuestos que comprenden por lo menos 2, por ejemplo de 5 a 1,000 compuestos y más preferiblemente de 10 a 100 compuestos de la fórmula (I) . Las colecciones de compuestos se pueden preparar por medio de un planteamiento combinatorio de "división y mezclado" o por medio de múltiples síntesis paralelas utilizando una química en fase ya sea de solución o sólida, utilizando procedimientos conocidos para aquellas personas expertas en el campo.

Durante la síntesis de los compuestos de la fórmula (I), los grupos funcionales lábiles en los compuestos intermedios, por ejemplo grupos hidroxi, carboxi y amino, se pueden proteger. Los grupos protectores se pueden retirar en cualquier etapa en la síntesis de los compuestos de la fórmula (I) o pueden estar presentes en el compuesto final de la fórmula (I) . Un planteamiento comprensivo de las maneras en las cuales se puede proteger varios grupos funcionales, lábiles y los métodos para escindir los derivados protegidos, resultantes se proporciona en, por ejemplo, Protective Groups in Organic Chemistry, T.W. Greene and P.G.M. uts, (1991) Wiley- Interscience , Nueva York, 2a edición.

Los procesos para la producción de los compuestos de la fórmula (I) y compuestos intermedios para los mismos como se describen anteriormente también están incluidos como aspectos adicionales de la presente invención.

Cualquier compuesto intermedio novedoso como se define en los Esquemas de Reacción anteriores o en los Ejemplos, también está incluido dentro del alcance de la invención. Por lo tanto, de acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un compuesto de cualquiera de las fórmulas (II), (IV), (V), (XIV), (XV), (XVI), (XVIII), (XIX) y (XXIII) como se definiera anteriormente. Los grupos preferidos para las variables citadas anteriormente en relación con los compuestos de la fórmula (I) también tienen aplicación para los compuestos intermedios.

Como se indicara anteriormente, los compuestos de la invención son útiles como agonistas del GPR119, por ejemplo para el tratamiento y/o profilaxis de la diabetes. Para este uso, los compuestos de la invención se administrarán generalmente en la forma de una composición farmacéutica .

Los compuestos de la invención también pueden ser útiles como agonistas del GPR119/inhibidores de la DPP-IV dobles, por ejemplo para el tratamiento y/o profilaxis de la diabetes. Para este uso, los compuestos de la invención se administrarán generalmente en la forma de una composición farmacéutica.

La invención también proporciona un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el uso como una composición farmacéutica.

La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.

Preferiblemente, la composición está comprendida de un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva, no tóxica de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Por otra parte, la invención también proporciona una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad al modular el GPR119 y opcionalmente la DPP-IV, dando por resultado el tratamiento profiláctico o terapéutico de la diabetes, que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva, no tóxica de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Las composiciones farmacéuticas pueden comprender opcionalmente otros ingredientes terapéuticos o adyuvantes. Las composiciones incluyen composiciones adecuadas para la administración oral, rectal, tópica y parenteral (inclusive subcutánea, intramuscular e intravenosa) , aunque la vía más adecuada en cualquier caso determinado dependerá del hospedante particular y el carácter y gravedad de las condiciones para las cuales se está administrando el ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas se pueden presentar convenientemente en una forma de dosificación unitaria y se pueden preparar por medio de cualquiera de los métodos bien conocidos en el campo de la farmacia.

En la práctica, los compuestos de la invención, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se pueden combinar como el ingrediente activo en una mezcla íntima con un portador farmacéutico de acuerdo con las técnicas de combinación farmacéuticas, convencionales. El portador puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración, por ejemplo oral o parenteral (inclusive intravenosa) .

De esta manera, las composiciones farmacéuticas se pueden presentar como unidades discretas que son adecuadas para la administración oral tales como cápsulas, sellos o tabletas cada uno que contiene una cantidad predeterminada del ingrediente activo. Además, las composiciones se pueden presentar como un polvo, como granulos, como una solución, como una suspensión en un líquido acuoso, como un líquido no acuoso, como una emulsión de aceite en agua o como una emulsión líquida de agua en aceite. Además de las formas de dosificación comunes expuestas anteriormente, el compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, también se puede administrar por medios de liberación contralada y/o dispositivos de suministro. Las composiciones se pueden preparar por medio de cualquiera de los métodos de farmacia. En general, estos métodos incluyen un paso que consiste en poner en asociación el ingrediente activo con el portador que constituye uno o más ingredientes necesarios. En general, las composiciones se preparan al mezclar de manera uniforme e íntima el ingrediente activo con portadores líquidos o portadores sólidos finamente divididos o ambos. Luego, al producto se le puede dar una forma conveniente en la presentación deseada.

Los compuestos de la invención, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, también se pueden incluir en composiciones farmacéuticas en combinación con uno o más de otros compuestos terapéuticamente activos .

El portador farmacéutico empleado puede ser, por ejemplo, un sólido, un líquido o un gas. Los ejemplos de portadores sólidos incluyen lactosa, alabastro, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, goma arábiga, estearato de magnesio y ácido esteárico. Los ejemplos de portadores líquidos son jarabe de azúcar, aceite de cacahuate, aceite de olivo y agua. Los ejemplos de portadores gaseosos incluyen dióxido de carbono y nitrógeno.

En la preparación de las composiciones para la forma de dosificación oral, se puede emplear cualquier medio farmacéutico, conveniente. Por ejemplo, el agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes , conservadores, agentes colorantes y similares se pueden utilizar para formar preparaciones líquidas, orales tales como suspensiones, elixires y soluciones; mientras que los portadores tales como almidones, azúcares, celulosa microcristalina , diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, sustancias aglutinantes, agentes de desintegración y similares se pueden utilizar para formar preparaciones sólidas, orales tales como polvos, cápsulas y tabletas. Debido a su facilidad de administración, las tabletas y las cápsulas son las unidades de dosificación oral preferidas por lo cual se emplean portadores farmacéuticos, sólidos. Opcionalmente , las tabletas pueden ser revestidas por medio de técnicas estándar acuosas o no acuosas .

Una tableta que contiene la. composición de esta invención se puede preparar por medio de la compresión o el moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes o adyuvantes secundarios . Las tabletas comprimidas se pueden preparar al comprimir, en una máquina adecuada, el ingrediente activo en una forma de flujo libre tal como polvo o gránulos, mezclado opcionalmente con una sustancia aglutinante, lubricante, diluyente inerte, agente tensioactivo o agente de dispersión. Las tabletas moldeadas se pueden hacer al moldear en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido, inerte. Cada tableta contiene preferiblemente de aproximadamente 0.05 mg a aproximadamente 5 g del ingrediente activo y cada sello o cápsula contiene preferiblemente de aproximadamente 0.05 mg a aproximadamente 5 g del ingrediente activo.

Por ejemplo, una formulación proyectada para la administración oral a humanos puede contener de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 5 g de agente activo, combinado con una cantidad apropiada y conveniente de un material portador la cual puede variar de aproximadamente 5 a aproximadamente 95 por ciento de la composición total.

Las formas de dosificación unitarias contendrán generalmente entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 2 g del ingrediente activo, típicamente 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg o 1000 mg.

Las composiciones farmacéuticas .de la presente invención que son adecuadas para la administración parenteral se pueden preparar como soluciones o suspensiones de los compuestos activos en agua. Se puede incluir un tensioactivo adecuado tal como, por ejemplo, hidroxipropilcelulosa . Las dispersiones también se pueden preparar en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos en aceites. Además, se puede incluir un conservador para impedir el crecimiento perjudicial de microorganismos.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención que son adecuadas para el uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas, estériles. Adicionalmente , las composiciones pueden estar en la forma de polvos estériles para la preparación extemporánea de estas soluciones o dispersiones inyectables, estériles. En todos los casos, la forma inyectable, final debe ser estéril y debe ser fluida realmente para una fácil aplicación con jeringa. Las composiciones farmacéuticas deben ser estables bajo las condiciones de manufactura y almacenamiento; de esta manera, deben conservarse preferiblemente contra la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos . El portador puede ser un solvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo glicerol, propilenglicol y polielilenglicol líquido) , aceites vegetales y mezclas adecuadas de los mismos .

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden estar en una forma que es adecuada para el uso tópico tal como, por ejemplo, un aerosol, crema, ungüento, loción, polvo muy fino o similares. Además, las composiciones pueden estar en una forma adecuada para el uso en dispositivos transdérmicos . Estas formulaciones se pueden preparar, utilizando un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, por vía de métodos de procesamiento convencionales. Como un ejemplo, una crema o ungüento se prepara al mezclar un material hidrófilo y agua, junto con de aproximadamente 5% en peso a aproximadamente 10% en peso del compuesto, para producir una crema o ungüento que tiene una consistencia deseada.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden estar en una forma que es adecuada para la administración rectal en donde el portador es un sólido. Es preferible que la mezcla forme supositorios de dosis unitaria. Los portadores adecuados incluyen manteca de cacao y otros materiales utilizados comúnmente en el campo. Los supositorios se pueden formar convenientemente al mezclar primero la composición con el (los) portador (es) ablandado(s) o fundido (s) seguido por el enfriamiento y la conformación en moldes .

Además de los ingredientes portadores mencionados anteriormente, las formulaciones farmacéuticas descritas anteriormente pueden incluir, como sea apropiado, uno o más ingredientes portadores, adicionales tales como diluyentes, amortiguadores, agentes saborizantes , sustancias aglutinantes, agentes tensioactivos , espesadores, lubricantes, conservadores (inclusive anti-oxidantes) y similares. Adicionalmente , se pueden incluir otros adyuvantes para que la formulación se vuelva isotónica con la sangre del receptor proyectado. Las composiciones que contienen un compuesto de la invención, o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, también se pueden preparar en una forma concentrada en polvo o líquida.

Generalmente, los niveles de dosificación en el orden de 0.01 mg/kg a aproximadamente 150 mg/kg de peso corporal al día son útiles en el tratamiento de las condiciones indicadas anteriormente, o alternativamente de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 7 g por paciente al día. Por ejemplo, la obesidad puede ser tratada de manera efectiva por medio de la administración de aproximadamente 0.01 a 50 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal al día, o alternativamente de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 3.5 g por paciente al día.

Se entiende, sin embargo, que el nivel de dosis específico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores que incluyen la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, vía de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos y la gravedad de la enfermedad particular que se somete a terapia.

Los compuestos de la invención se pueden utilizar en el tratamiento de enfermedades o condiciones en las cuales el GPR119 y opcionalmente la DPP-IV desempeñan un papel principal .

De esta manera, la invención también proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad o condición en la cual el GPR119 y opcionalmente la DPP-IV desempeñan un papel principal que comprende un paso que consiste en administrar a un sujeto necesitado del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Estas enfermedades o condiciones son diabetes, obesidad, tolerancia deteriorada a la glucosa, resistencia a la insulina y complicaciones diabéticas tales como neuropatía, nefropatía, retinopatía, cataratas, complicaciones cardiovasculares y dislipidemia) . Y el tratamiento de pacientes quienes tienen una sensibilidad anormal a grasas ingeridas que conduce a una dispepsia funcional . Los compuestos de la invención también se pueden utilizar para tratar enfermedades metabólicas tales como el síndrome metabólico (síndrome X) , tolerancia deteriorada a la glucosa, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia , bajos niveles de HDL e hipertensión.

La invención también proporciona un método para el tratamiento de la diabetes tipo II, que comprende un paso que consiste en administrar a un paciente necesitado del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La invención también proporciona un método para el tratamiento de la obesidad, síndrome metabólico (síndrome X) , tolerancia deteriorada a la glucosa, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, bajos niveles de HDL o hipertensión que comprende un paso que consiste en administrar a un paciente necesitado del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La invención también proporciona un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el uso en el tratamiento de una condición como se definiera anteriormente.

La invención también proporciona el uso de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una condición como se definiera anteriormente .

En los métodos de la invención, el término "tratamiento" incluye un tratamiento tanto terapéutico como profiláctico.

Los compuestos de la invención pueden exhibir propiedades ventajosas en comparación con compuestos o terapias de combinación conocidos para el tratamiento de la diabetes .

Los compuestos de la invención, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se pueden administrar solos o en combinación con uno o más de otros compuestos terapéuticamente activos. Los otros compuestos terapéuticamente activos pueden ser para el tratamiento de la misma enfermedad o condición que los compuestos de la invención o una enfermedad o condición diferente. Los compuestos terapéuticamente activos se pueden administrar de manera simultánea, de manera secuencial o por separado.

Los compuestos de la invención se pueden administrar con otros compuestos activos para el tratamiento de la obesidad y/o diabetes, por ejemplo insulina y análogos de insulina, inhibidores de lipasa gástrica, inhibidores de lipasa pancreática, sulfonil ureas y análogos, biguanidas por ejemplo metformina, agonistas de (X2 , glitazonas, agonistas de PPAR-?, agonistas mezclados de PPAR- /?, agonistas de RXR, inhibidores de la oxidación de ácidos grasos, inhibidores de oc-glucosidasa, ß-agonistas, inhibidores de fosfodiesterasa , agentes para disminuir los lípidos, inhibidores de glicógeno fosforilasa, agentes antiobesidad por ejemplo inhibidores de lipasa pancreática, antagonistas de MCH-1 y antagonistas de CB-1 (o agonistas inversos) , antagonistas de amilina, inhibidores de lipoxigenasa, análogos de somostatina, activadores de glucocinasa, antagonistas de glucagón, agonistas de señalización de insulina, inhibidores de PTP1B, inhibidores de gluconeogénesis , agentes antilipolíticos , inhibidores de GSK, agonistas de receptores de galanina, agentes anorexigenos , agonistas de receptores de CCK, leptina, fármacos antiobesidad serotonérgicos/dopaminérgicos, inhibidores de la reabsorción por ejemplo sibutramina, antagonistas de CRF, proteínas de unión de CRF, compuestos tiromiméticos , inhibidores de aldosa reductasa, antagonistas de receptores de glucocorticoides , inhibidores de NHE-1 o inhibidores de sorbitol deshidrogenasa .

La terapia de combinación que comprende la administración de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y por lo menos otro agente, por ejemplo otro agente para el tratamiento de diabetes u obesidad, representa un aspecto adicional de la invención .

La presente invención también proporciona un método para el tratamiento de la diabetes en un mamífero, tal como un humano, método el cual comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro agente, por ejemplo otro agente para el tratamiento de la diabetes u obesidad, a un mamífero necesitado del mismo.

La invención también proporciona el uso de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro agente para el tratamiento de la diabetes.

La invención también proporciona el uso de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la manufactura de un medicamento para el uso en combinación con otro agente, para el tratamiento de la diabetes.

El compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el (los) otro(s) agente (s) se pueden co-administrar o administrar secuencialmente o por separado.

La co-administración incluye la administración de una formulación la cual incluye tanto el compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como el (los) otro(s) agente (s), o la administración simultánea o separada de diferentes formulaciones de cada agente. Donde los perfiles farmacológicos del compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el (los) otro(s) agente (s) lo permiten, se puede preferir la coadministración de los dos agentes .

La invención también proporciona el uso de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro agente en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de la diabetes.

La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro agente antidiabético y un portador farmacéuticamente aceptable. La invención también comprende el uso de estas composiciones en los métodos descritos anteriormente.

Todas las publicaciones, incluyendo, pero no limitadas a, las patentes y solicitudes de patente citadas en esta especificación, se incorporan en este documento a manera de referencia como si cada publicación individual fuera indicada específica e individualmente para ser incorporada a manera de referencia en este documento como se expone completamente .

La invención ahora será descrita por referencia a los siguientes ejemplos los cuales son para propósitos ilustrativos y no se deben interpretar como una limitación del alcance de la presente invención.

EJEMPLOS Materiales y métodos La cromatografía en columna se llevó a cabo en Si02 (malla 40-63) a menos que se especifique de otra manera. Los datos de LCMS se obtuvieron de la siguiente manera: Columna Cía 3µ AtlantisMR (3.0 x 20.0 mm, caudal de salida = 0.85 mL/minuto) eluyendo con una solución de H20-MeCN que contenía 0.1% de HC02H durante 6 minutos con detección UV a 220 nm. Información de gradiente: 0.0-0.3 minutos a 100% de H20; 0.3-4.25 minutos: Aumentar a 10% de H2O-90% de MeCN; 4.25-4.4 minutos: Aumentar a 100% de MeCN; 4.4-4.9 minutos: Mantener a 100% de MeCN; 4.9-6.0 minutos: Regresar a 100% de H20. Los espectros de masas se obtuvieron utilizando una fuente de ionización por electropulverización en los modos de iones ya sea positivos (ES+) o negativos (ES") .

Los datos del método 2 de LCMS se obtuvieron de la siguiente manera: Columna C18 XbridgeMR (2.1 x 50 mm, 2.5 µ?, caudal de salida 0.8 mL/minuto) eluyendo con una solución de MeCN-NH4HC03 10 mM durante 1.5 minutos con detección UV a 215-350 nm. Información de gradiente: 0-0.8 minutos: 98% de MeCN 2% de NH4HCO3 hasta 98% de NH4HC03 2% de MeCN; 0.8-1.2 minutos: mantener a 98% de NH4HC03 2% de MeCN. Los espectros de masas se obtuvieron utilizando una fuente de ionización por electropulverización en el modo positivo (ES+) .

Los datos del método 3 de LCMS se obtuvieron de la siguiente manera: Columna C18 XbridgeMR (2.1 x 5.0 mm, 2.55 µ?, caudal de salida 0.8 mL/minuto) eluyendo con una solución de MeCN-NHHC03 10 mM durante 5 minutos con detección UV a 215-350 nm. Información de gradiente: 0-4 minutos: 98% de MeCN 2% de NH4HC03 hasta 98% de NH4HC03 2% de MeCN; 4-4.6 minutos: mantener a 98% de NH4HC03 2% de MeCN. Los espectros de masas se obtuvieron utilizando una fuente de ionización por electropulverización en el modo positivo (ES+) .

Los datos del método 4 de LCMS se obtuvieron de la siguiente manera: Columna C18 XbridgeMR (3.0 x 150 mm, 5 µ?, caudal de salida 1.0 mL/minuto) eluyendo con una solución de MeCN-NHHC03 10 mM durante 5 minutos con detección UV a 215-350 nm . Información de gradiente: 0-0.1 minutos: mantener a 5% de MeCN 95% de NH4HC03 ; 0.1-3.0 minutos: de 5% de MeCN 95% de NH4HC03 hasta 5% de NH4HC03 95% de MeCN; 3.0-3.9 minutos: mantener a 5% de NH4HC03 95% de MeCN. Los espectros de masas se obtuvieron utilizando una fuente de ionización por electropulverización en el modo positivo (ES+) .

La HPLC quiral se realizó en una columna Daicel chiralpak IAMR de 250 x 20 mm, 5 µ?.

Abreviaciones y siglas: AcOH: Acido acético; atm: Atmósferas; BA: n-butilamina ; CHC13 : Cloroformo, DBU: 1,8-Diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno, DCM Diclorometano, DEA: Dietilamina; DIPEA: Diisopropiletilamina ; DMAP : Dimetilpiridin-4-ilamina; DMF : Dimetilformamida ; DMSO : Sulfóxido de dimetilo, EDCI : Clorhidrato de (3-dimetilaminopropil ) etilcarbodiimida ; EtOAc : Acetato de Etilo; Et20: Eter dietílico; EtOH: Etanol ; h hora(s); HC1 : Acido clorhídrico; HC02H Acido fórmico; H20 : Agua; HOBt : Monohidrato de 1 -Hidroxibenzotriazol ; HPLC : Cromatografía líquida de alto desempeño; IH: Isohexano; IMS: Alcohol metilado industrial; IPA: Alcohol Isopropí1 ico ; M Molar; MeCN: Acetonitrilo; MeOH : Metanol; MgS04 : Sulfato de Magnesio; min: minuto/s, MTBE : Eter metil - terc-butílico ; NaHC03 : Carbonato ácido de sodio; Na2C03 : Carbonato de sodio, NaOH : Hidróxido de sodio; Na2S04 : Sulfato de sodio; NH3 : Amoníaco; NH4HC03 : Bicarbonato de amonio; NH40H: Hidróxido de amonio; Pd : Paladio; RT : Tiempo de retención ; r.t. : Temperatura ambiente, sat : saturado; SCX: Resina Fuerte de Intercambio Catiónico; Si02: Gel de sílice; THF : Tetrahidrofurano ; TFA: Acido trifluoroacético ; TFAA : Anhídrido trifluoroacético ; TsOH: Monohidrato de ácido p-toluensulfónico .

La síntesis de los siguientes compuestos ha sido descrita en alguna otra parte: Ester terc-butílico del ácido 4- (N-hidroxicarbamimidoilmetoxi) piperidin-1-carboxílico: Bradley y colaboradores, documento WO2007/003961, Ester terc-butílico del ácido 4-((R)-l-carboxietoxi ) piperidin- 1-carboxílico : Bertram y colaboradores, documento WO2007/116229 ; ( 3S, S) - 3 , 4 -Diaz ido- 1 -bencilpirrol idina : Benbow y colaboradores, documento WO2007/148185. Todos los otros compuestos estuvieron disponibles de fuentes comerciales.

Preparación 1: Ester terc-butílico del ácido 4- [5- (6- cloropiridin-3-il) - [1,2,4] oxadiazol-3-ilmetoxi] piperidin-1- carbox lico A una solución de ácido 6 - c loroni co t í ni co (500 mg, 3.17 mraol) en THF (25 mL) se agregó EDCI (0.74 g, 3.89 mmol) , seguido por HOBt (583 mg, 3.81 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. El éster terc-but í 1 ico del ácido 4 - (N-hidroxicarbamimidoi lmetoxi )piperidin-l- carboxílico (866 mg , 3.17 mmol) se agregó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas antes de retirar el solvente in vacuo. El residuo resultante se dividió entre EtOAc (100 mL) y agua (50 mL) . La fase orgánica se separó, se lavó con una solución saturada de NaHC03 , luego salmuera y se secó ( gS04) , antes de. la remoción del solvente in vacuo. El residuo se disolvió en tolueno y la reacción se calentó a 110°C durante 16 horas. La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 70:30) proporcionaron el compuesto del título: RT 3.97 mm, m/z (ES+) = 395.2 [M + H]+.

Preparación 2: Ester terc-butílico del ácido 4- [5- (2-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol - 3 - ilmetoxi] piperidin- 1-carboxílico A una solución del ácido 2-cloropirimidin-5-carboxílico (100 mg, 0.63 mmol) en THF (10 mL) se agregó 1,3-diisopropilcarbodiimida (99 µ??, 0.63 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. El éster tercbutílico del ácido 4- (N-hidroxicarbamimidoilmetoxi) piperidin-1-carboxílico (172 mg, 0.63 mmol) se agregó y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. El solvente de reacción se retiró in vacuo y el residuo resultante se disolvió de nuevo en EtOAc (100 mL) . La mezcla orgánica se lavó con agua, luego salmuera y se secó (MgS04) , antes de la remoción del solvente in vacuo. El residuo resultante se disolvió en tolueno y se calentó a 80°C durante 16 horas. La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 60:40) proporcionaron el compuesto del título: RT = 3.77 min, m/z (ES+) = 396.1 [M + H] + .

Preparación 3: Ester terc-butílico del ácido 4- [3- (6-cloropiridin-3-il) - [1,2,4] oxadiazol- 5-ilmetoxi] piperidin- 1-carboxílico A una solución del éster terc-butílico del ácido 4-carboximetoxipiperidin-l-carboxílico (1.51 g, 5.83 mmol) en THF (40 mL) se agregó EDCI (1.11 g, 6.99 mmol) , seguido por HOBt (0.95 g, 6.99 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. La 6-cloro-N-hidroxinicotinamidina (1.00 g, 5.83 mmol) se agregó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas antes de la remoción del solvente in vacuo. El residuo resultante se dividió entre EtOAc (200 mL) y agua (100 mL) , luego la fase orgánica se separó, se lavó con una solución saturada de NaHC03 (100 mL) y se secó (MgS04) antes de la remoción del solvente in vacuo. El residuo se disolvió en tolueno y se calentó a reflujo durante 20 horas antes de la remoción del solvente in vacuo y la disolución de nuevo del producto en EtOAc (200 mL) . La solución se lavó con agua (100 mL) , luego salmuera (50 mL) y se secó ( gS04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la recristalización a partir de EtOAc/ IH proporcionaron el compuesto del título: RT = 4.02 min, m/z (ES+) = 395.1 [M + H] + . Preparación 4: Ester terc-butílico del ácido 4 -{ (R) -1- [3 - ( 6 -cloropiridin-3 -il) - [1, 2, 4] oxadiazol-5-il] etoxi}piperidin- 1-carboxílico El compuesto del título se preparó al hacer reaccionar el éster terc-butílico del ácido 4-((J?)-l-carboxietoxi) iperidin-l-carboxílico con la 6-cloro-N-hidroxinicotinamidina empleando el procedimiento resumido en la Preparación 3. RT = 4.20 min, m/z (ES+) = 409.2 [M + H]+. Preparación 5:. Ester isopropílico del ácido 4- [5- (6-cloropiridin-3 -il) - [1,2,4] oxadiazol-3 -ilmetoxi] iperidin-l-carboxílico El éster terc-butílico del ácido 4- [5- (6-cloropiridin-3-il) - [1,2,4] oxadiazol-3 -ilmetoxi] iperidin-l-carboxílico (Preparación 1, 578 mg, 1.47 mmol) en una solución de HCl en dioxano (4M, 10 mL) se agitó durante 2 horas antes de la remoción del solvente in vacuo. A una solución del producto en DCM (20 mL) se agregó trietilamina (0.66 mL, 4.70 mmol) y la mezcla se enfrió a 0°C. Una solución del cloroformiato de isopropilo en tolueno (1M, 1.76 mL, 1.76 mmol) se agregó, gota a gota, luego la reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla cruda se diluyó con DCM (100 mL) , se lavó con agua (50 mL) , una solución saturada de Na2C03 (50 mL) y salmuera, luego se secó (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo proporcionó el compuesto del título: RT = 3.75 min, m/z (ES+) = 381.2 [ + H] + .

Los siguientes compuestos se prepararon a partir del compuesto protegido con carbamato de tere-butilo apropiado empleando el procedimiento resumido en la Preparación 5: Preparación 9: Ester isopropílico del ácido 4- ( (J?) -1- carboxietoxi) piperidin-l-carboxílico Una solución del éster isopropílico del ácido 4- hidroxipiperidin- 1-carboxílico (10.0 g 53.4 mmol) en THF (100 mL) , en un matraz secado en horno, bajo argón, se enfrió a 0°C.

El hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 8.55 g, 213.6 mmol) se agregó, en porciones, y la mezcla resultante se agitó a 0°C durante 1 hora antes de la agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. A la reacción se agregó una solución del ácido (5) -2-bromopropiónico (4.82 g, 53.4 mmol) en THF (40 mL) , gota a gota, durante 30 minutos, seguido por más THF (60 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se enfrió rápidamente por la adición cautelosa de agua, luego el THF se retiró in vacuo. La mezcla acuosa, resultante se lavó con Et20 y se acidificó a H 1 con HCl 2M. La mezcla se extrajo con EtOAc (2 x 150 mL) luego las fracciones orgánicas se combinaron, se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RM XH ¾ (400MHz , CDCl3) : 4.97 - 4.86 (m, 1H) , 4.19 -4.09 (m, 1H) , 3.89 - 3.79 (m, 2H) , 3.66 - 3.58 (m, 1H) , 3.18 -3.08 (m, 2H) , 1.91 - 1.80 (m, 2H) , 1.65 - 1.50 (m, 2H) , 1.47 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 1.26 - 1.22 (m, 6H) .

Preparación 10: Ester isopropílico del ácido 4- ( (J ) -1-carbamoiletoxi) piperidin-l-carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 4- ( {R) - 1 -carboxietoxi ) piperidin-l-carboxílico (Preparación 9, 200 mg, 0.77 mmol) en THF (10 mL) , en un matraz secado en horno, bajo argón, se agregó EDCI (177 mg, 0.93 mmol) , seguido por HOBt (126 mg, 0.93 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Una solución de NH3 en dioxano (0.5 M, 15 µ].., 7.72 mmol) se agregó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. El solvente se retiró in vacuo y el residuo resultante se dividió entre EtOAc (75 mL) y agua (25 mL) . La capa orgánica se retiró, se lavó con una solución saturada de NaHC03 (25 mL) , luego salmuera (25 mL) y se secó (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 5:95, 0:100) proporcionaron el compuesto del título: RT = 2.49 min, m/z (ES+) = 259.2 [M + H]+.

Preparación 11: Ester isopropílico del ácido 4- ( (R) -cianometilmetoxi) piperidin-l-carboxílico Una solución del éster isopropílico del ácido 4- ( (R) -1-carbamoiletoxi) piperidin-l-carboxílico (Preparación 10, 200 mg, 0.78 mmol) en THF, en un matraz secado en horno, bajo argón, se enfrió a 0°C. A la solución se agregó trietilamina (320 µL, 2.34 mmol) seguido por TFAA (165 µL, 1.16 mmol) y la mezcla se agitó a esta temperatura durante 1 hora. La reacción se enfrió rápidamente por la adición de agua y la mezcla se extrajo con DCM (100 mL) . La fracción orgánica se lavó con salmuera, se secó (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 3.62 min, m/z (ES+) = 240.1 [M + H]+.

Preparación 12: Ester isopropílico del ácido 4 - [ (R) - 1- (N-hidroxicarbamimidoil) etoxi] piperidin- 1-carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 4-( (i?) -cianomet ilmetoxi ) piperidin-l-carboxílico (Preparación 11, 51 mg, 0.02 mmol) en EtOH (5 mL) se agregó hidroxilamina (50% en peso en agua, 470 µ?,, 0.02 mmol) y la reacción se calentó a 80°C durante 16 horas. La mezcla se concentró in vacuo y el residuo se sometió a la destilación azeotrópica con tolueno (x 3) para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.02 min, m/z (ES+) = 274.1 [M + H]+.

Los siguientes compuestos se prepararon al hacer reaccionar el éster isopropílico del ácido 4- [ (R) -1- (N-hidroxicarbamimidoil ) etoxi] piperidin-l-carboxílico (Preparación 12) con el ácido carboxílico apropiado, Ester isopropílico del ácido 4- { {R) -1- RT = 3.88 N [5- (5-cloropirazin- min, m/z 14 2-il) - (ES*) = [1,2,4] oxadiazol-3 - 396.1 [M + o il] etoxi } -piperidin- H] + 1-carboxílico Preparación 15: Ester metílico del ácido 3- (2,5-difluorofenil) -4-nitrobutírico A una solución del ácido (2E)-3-(2,5-difluorofenil ) acrílico (21.10 g, 114.7 mmol) en una mezcla de DCM y MeOH (DCM:MeOH, 4:1, 250 mL) se agregó una solución de trimetilsilildiazometano (2M en Et20, 57.34 mL, 114.7 mmol), durante 15 minutos y la reacción se agitó a temperatura ambiente hasta completarse. El AcOH se agregó gota a gota, hasta que la mezcla de reacción se volvió incolora, luego el solvente se retiró in vacuo. El residuo se disolvió de nuevo en MeCN (114 mL) , luego se agregó nitrometano (7.45 mL, 137.6 mmol) . La mezcla se enfrió a 0°C antes de agregar DBU (17.49 mL, 117.0 mmol), gota a gota, durante 30 minutos. Se permitió que la reacción se calentara a la temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 95:5, 90:10) proporcionaron el compuesto del título: RMN XH ¾ (400MHz, CDC13) : 7.18 - 7.00 (m, 3H) , 4.91 -477 (m, 2H) , 4.27 - 4.17 (m, 1H) , 3.75 (s, 3H) , 2.91 (m, 2H) . Preparación 16: ( trans) -l-Bencil-4- (2, 5-difluorofenil) -5-nitropiperidin-2 -ona Una combinación del éster metílico del ácido 3-(2 , 5-dif luorofenil) -4 -nitrobutírico (Preparación 15, 16.27 g, 62.81 mmol) , paraformaldehído (1.94 g, 64.63 mmol) y bencilamina (13.7 mL, 125.62 mmol) en EtOH se calentó a 90°C en un tubo sellado durante 16 horas. Después de la reacción completa, la mezcla se dividió entre EtOAc (400 mL) y HCl 2M (600 mL) . La fracción orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 70:30) proporcionó el compuesto del título: RT = 3.72 min m/z (ES+) = 347.1 [M + H] + .

Preparación 17: Clorhidrato de ( trans) - l-bencil-4 - (2 , 5-difluorofenil) -3 -nitropiperidina HCl A una solución de la ( trans) - 1 -bencil-4 - ( 2 , 5 -difluorofenil) -5-nitropiperidin-2-ona (Preparación 16, 10.44 g, 30.17 mmol) en THF (90 mL) , bajo argón, se agregó un complejo de dimetilsulfuro de borano (2.0M en DCM, 45.3 mL, 90.60 mmol) y la reacción se calentó a 70°C durante 3 horas. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con MeOH (20 mL) luego se agregó HC1 1M (.30 mL) . La mezcla se agitó durante 10 minutos antes de la remoción del solvente in vacuo. Se agregaron porciones adicionales de MeOH (20 mL) y HC1 1M (20 mL) y la reacción se agitó durante 10 minutos. La remoción del solvente in vacuo proporcionó el compuesto del título: RT = 3.30 min m/z (ES+) = 333.1 [M + H]+.

Preparación 18: Ester terc-butílico del ácido [ (3J¾, 4J?) -1-bencil-4- (2 , 5-difluorofenil) iperidin-3 -il] carbámico Una combinación del clorhidrato de (trans)-l-bencil-4- (2 , 5-difluorofenil) -3 -nitropiperidina (Preparación 17, 11.12 g, 30.17 mmol) y polvo de zinc (15.69 g, 241.36 mmol) en una mezcla de AcOH (55 mL) y EtOH (55 mL) se calentó a 80°C. Después de la reacción completa, la mezcla se filtró y el solvente se retiró in vacuo. A una solución del residuo resultante en MeOH (30 mL) se agregó HC1 en dioxano (4M, 30 mL) y el solvente se retiró in vacuo. El material se trituró con Et20 (x 2), luego tolueno (x 3) para proporcionar la amina como la sal de clorhidrato. A una solución del producto en una mezcla de THF (150 mL) y agua (75 mL) , enfriada a 0°C, se agregó trietilamina (12.6 mL, 90.51 mmol) , seguido por dicarbonato de di- ere-butilo (9.59 g, 45.26 mmol) . Se permitió que la reacción alcanzara la temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas, hasta que se completó. La mezcla se dividió entre EtOAc (750 mL) y agua (200 mL) y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (500 mL) , luego las fracciones orgánicas se combinaron, se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (IH: EtOAc, 80:20) y la purificación adicional por medio de la HPLC quiral (IH:IPA:DEA 90:10:0.1, 15 ml/minuto, 270 nm, RT = 9.8 min) proporcionaron el compuesto del título: RT = 2.68 min m/z (ES+) = 403.2 [M + H]+.

Preparación 19: Ester fcerc-butílico del ácido [ {3R, iR) -4- (2, 5-difluorofenil)piperidin-3-il] carbámico Una solución del éster terc-butílico del ácido [ (3i?, 4J?) -l-bencil-4- (2 , 5-difluorofenil) piperidin-3-il] carbámico (Preparación 18, 1.89 g, 4.70 mmol) en MeOH (94 mL) se pasó a través de un aparato H-CubeMR (Catcart 70 de pd al 10%/C, 30 bares, 80°C) a un caudal de salida de 1 mL por minuto. El solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.37 min m/z (ES+) = 313.2 [M + H]+.

Preparación 20: 2-metoxipirimidin-5-carbonitrilo A una solución de la 5 -bromo-2 -metoxipirimidina (2.55 g, 13.49 mmol) y cianuro de zinc (1.90 g, 16.19 mmol) en DMF (40 mL) , en un matraz secado en horno, se agregó paladio-tetracis (4.68 g, 4.05 mmol) y la mezcla se burbujeó con argón durante 10 minutos antes de ser calentada a 85 °C hasta completarse. El solvente de reacción se concentró in vacuo y el residuo se dividió entre EtOAc (300 mL) y agua (200 mL) . La capa orgánica se separó, luego la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 150 mL) . Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución saturada de NaHC03 (2 x 100 mL) , salmuera (100 mL) y se secaron (MgS0 ) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:DCM, 1:9, DCM, DCM-MeOH, 95:5) proporcionaron el compuesto del título: RMN 1H d? (400MHz, CDC13) : 8.80 (s, 2H) , 4.12 (s, 3H) .

Preparación 21: N-Hidroxi-2-metoxipirimidin-5-carboxamidina A una solución del 2-metoxipirimidin-5-carbonitrilo (Preparación 20, 1.21 g, 9.01 mmol) en EtOH (50 mL) se agregó hidroxilamina (50% en peso en agua, 0.65 mL, 9.91 mmol) y la reacción se calentó a 65°C durante 16 horas. La mezcla se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 0.85 min, m/z (ES+) = 169.0 [M + H]+.

Preparación 22: Ester terc-butílico del ácido 4-[3-(2-metoxipirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-5-ilmetoxi] piperidin-1-carboxílico A una solución del éster terc-butílico del ácido 4-carboximetoxipiperidin-l-carboxílico (1.08 g, 4.16 mmol) en THF (30 mL) se agregó EDCI (0.96 g, 5.00 mmol) seguido por HOBt (0.77 g, 5.00 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. La N-hidroxi-2-metoxipirimidin-5 -carboxamidina (Preparación 21, 0.70 g, 4.16 mmol) se agregó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas antes de la remoción del solvente in vacuo. El residuo resultante se dividió entre EtOAc (50 mL) y agua (50 mL) , luego la fase orgánica se separó, se lavó con una solución saturada de NaHC03 (50 mL) , salmuera (50 mL) y se secó (MgS04) , antes de la remoción del solvente in vacuo. El residuo se disolvió en tolueno (30 mL) y calentó a 85°C hasta la terminación. La remoción del solvente in vacuo proporcionó el compuesto del título: RT = 3.58 min, m/z (ES+) = 392.2 [M + H] + .

Preparación 23: Ester isopropílico del ácido 4- [3- (2-metoxipirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-5-ilmetoxi] piperidin-1-carboxílico A una solución del éster terc-butílico del ácido 4- [3- (2-metoxi irimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-5-ilmetoxi] -piperidin-l-carboxílico (Preparación 22, 1.33 g, 3.40 mmol) en dioxano (10 mL) se agregó HCl en dioxano (4M, 2.55 mL, 10.19 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Una porción adicional de HCl en dioxano (7.5 mL, 30 mmol) se agregó y la agitación continuó durante 72 horas. La remoción del solvente in vacuo proporcionó el producto intermedio clorhidrato de 2-metoxi-5- [5- (piperidin-4 -iloximetil )- [1 , 2 , 4] oxadiazol-3 -il] irimidina : RT = 1.95 min, m/z (ES+) = 292.1 [M + H]+.

A una suspensión del producto en DCM (20 mL) se agregó trietialmina (0.99 mL, 7.11 mmol) y la mezcla se enfrió a 0°C. El cloroformiato de isopropilo (1M en tolueno, 3.73 mL, 3.73 mmol) se agregó, gota a gota, durante 20 minutos y se permitió que la reacción se agitara durante 2 horas adicionales. La mezcla se dividió entre DCM (50 mL) y agua (50 mL) y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con DCM (100 mL) luego las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (100 mL) , se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 98:2, 97:3, 96:4) proporcionó el compuesto del título: RT = 3.44 min, m/z (ES+) = 378.2 [M + H] + .

Preparación 24: Ester isopropílico del ácido 4- [3- (2-hidroxipirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol - 5 - ilmetoxi] iperidin-1-carboxílico A una solución del áster isopropílico del ácido 4- [3 - (2-metoxipirimidin-5- il ) - [1,2,4] oxadiazol - 5 - ilmetoxi ] -piperidin-l-carboxílico (Preparación 23, 885 mg, 2.34 mmol) en MeCN (30 mL) , bajo una atmósfera de argón, se agregó yoduro de sodio (1054 mg, 7.03 mmol) seguido por cloruro de trimetilsililo (893 µL, 7.03 mmol) y la reacción se calentó a 65 "C durante 16 horas. La mezcla se dividió entre EtOAc (100 mL) y una solución saturada de tiosulfato de sodio (100 mL) y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 mL) luego las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (100 mL) , se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM :MeOH, 100:0, 98:2, 96:4, 94:6) proporcionó el compuesto del título: RT = 2.76 min, m/z (ES+) = 364.2 [M + H]+.

Preparación 25: Ester isopropílico del ácido 4- [3-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-5 -ilmetoxi] piperidin-carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 4- [3 - (2 -hidroxipirimidin- 5 -il) - [1,2,4] oxadiazol-5 -ilmetoxi] -piperidin-l-carboxílico (Preparación 24, 199 mg, 0.55 mmol) en oxicloruro de fósforo (6 mL) , bajo argón, se agregó N,N-dimetilaminoanilina (90 µ??, 0.71 mmol) y la mezcla se calentó a 50°C durante 5 horas. La reacción se enfrió rápidamente al ser agregada, gota a gota, a hielo (50 mL) y los productos orgánicos se extrajeron en DCM (3 x 50 mL) . Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (50 mL) , se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM : MeOH, 97:3) proporcionó el compuesto del título: RT = 3.71 min, m/z (ES+) = 382.1 [M + H] + .

Preparación 26: Ester isopropílico del ácido 4 - { (R) -1- [3 - (2 -metoxipirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-5-il] etoxi}piperidin-1-carboxílico El éster isopropílico del ácido 4- ( (i?) -1- carboxietoxi) piperidin-l-carboxílico (Preparación 9) se hizo reaccionar con la N-hidroxi-2-metoxipirimidin-5-carboxamidine (Preparación 21) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 22. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 97:3) proporcionó el compuesto del título: RT = 3.55 min, m/z (ES+) = 392.2 [M + H] + .

Preparación 27: Ester isopropílico del ácido 4-{ (J?) -1- [3- (2-hidroxipirimidin-5-il) - [1, 2 , 4] oxadiazol-5-il] etoxi}piperidin-1-carboxílico compuesto del título se preparó a partir del éster isopropílico del ácido 4- { (R) -1- [3- (2 -metoxipirimidin 5-il) - [1,2,4] oxadiazol -5 - il ] etoxi }piperidin- 1 -carboxílico (Preparación 26) empleando el procedimiento resumido en 1 Preparación 24: RT = 2.87 min, m/z (ES+) = 378.2 [M + H] + . Preparación 28: Ester isopropílico del ácido - { (R) -1- [3 - (2 cloropirimidin-5-il) - [1, 2, 4] oxadiazol-5-il] etoxi}piperidin-l-carboxílico compuesto del título se preparó a partir del éster isopropílico del ácido 4-{ (R) -1- [3- (2-hidroxi irimidin- 5 -il) - [1,2,4] oxadiazol - 5 - 1] etoxi }piperidin- 1 -carboxílico (Preparación 27) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 25: RT = 3.82 ran, m/z (ES+) = 396.1 [M + H] + .

Preparación 29: Ester terc-butílico del ácido (trans) -3- (9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino) -4- (2-fluorofenil)pirrolidin-l-carboxílico A una solución del ácido (trans) -3- amino-4- (2-fluorofenil)pirrolidin-l-carboxílico (2.00 g, 7.13 mmol) y trietilamina (1.59 mL, 11.40 mmol) en una combinación de dioxano y agua (2:1, 75 mL) , enfriada a 0°C, se agregó cloroformiato de 9-fluorenilmetilo (2.31 g, 8.92 mmol). Se permitió que la reacción alcanzara la temperatura ambiente antes de la agitación durante 16 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc, luego la solución se lavó con agua, HCl 1M, solución saturada de NaHC03, salmuera y se secó (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtQAc, 90:10, 80:20, 70:30) proporcionaron el compuesto del título: RT = 4.28 min m/z (ES+) = 503.3 [ + H] + .

Preparación 30: Clorhidrato del éster 9H-fluoren-9-ilmetílico del ácido [ (trans) -4- (2-fluorofenil)pirrolidin-3-il] carbámico A una solución del éster terc-butílico del ácido (trans) -3- (9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino) -4- (2- fluorofenil) pirrolidin-l-carboxílico (Preparación 29, 1.50 g, 2.98 mmol) en dioxano (30 mL) se agregó una solución de HC1 en dioxano (4M, 30 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, tiempo después de lo cual se había formado un producto precipitado. El Et20 se agregó a la mezcla hasta que no se observó precipitación adicional y el solvente se decantó. El residuo se suspendió en un volumen adicional de Et20 y la mezcla se agitó durante 5 minutos antes de la decantación del solvente. Este proceso se repitió dos veces más y el residuo resultante se concentró a sequedad para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.82 min m/z (ES+) = 403.1 [M + H] + .

Preparación 31: Ester terc-butílico del ácido (322, 4S) -3 - (9H- fluoren- 9 - ilmetoxicarbonilamino) -4- (2 - fluorofenil) irrolidin- l-carboxílico El compuesto del título se proporcionó por vía de la separación mediante la HPLC quiral del éster terc-butílico del ácido ( trans) -3- (9H-fluoren- 9 -ilmetoxicarbonilamino) -4- (2- fluorofenil) irrolidin-l-carboxílico (Preparación 29) : IH:CHC13:IPA:DEA 85:10:5:0.1, 15 mL/min, 270 nm, RT = 9.4 min.

Preparación 32: Clorhidrato del éster 9H-fluoren-9-ilmetílico del ácido [ (3R, 4S) -4- (2-fluorofenil)pirrolidin-3-il] carbamico El compuesto del título se preparó a partir del éster terc-butílico del ácido (3R, 4S) -3- (9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino) -4- (2-fluorofenil) irrolidin-1-carboxílico (Preparación 31) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 30: RT = 2.82 min m/z (ES+) = 403.1 [M + H] +.

Preparación 33: 2 , 4 -Difluoro-1- ( (E) -2 -nitrovinil) benceno A una solución de 2 , 4 -difluorobenzaldehído (25.0 g, 0.18 mol) y nitrometano (11.4 mL, 0.21 mol) en MeOH (53 mL) , bajo argón, enfriada a -15 °C, se agregó una solución de NaOH (7.4 g, 0.19 mol) en agua (26 mL) , gota a gota, durante 20 minutos. La mezcla resultante se agitó a -15 °C y un producto precipitado se formó después de 30 minutos. Se agregó más MeOH para formar una suspensión espesa y la agitación continuó durante 15 minutos antes de permitir que la reacción se calentara a 0°C. Se agregó agua helada y la mezcla se agitó durante 15 minutos antes de agregar HCl 4M (100 mL) . La fracción orgánica se extrajo con DCM (3 x 300 mL) , se secó (Na2S04) y el solvente se retiró in vacuo. Una porción del residuo (10.0 g, 50 mmol) se disolvió en anhídrido acético (8.1 mL, 90 mol) y se enfrió a 0°C bajo argón. Se agregó DMAP (Q.4 g, 3 mmol) y la reacción se agitó a esta temperatura durante 20 minutos antes del calentamiento de la mezcla a temperatura ambiente y de permitir que se agitara durante 16 horas adicionales. El solvente de reacción se retiró in vacuo y el residuo resultante se disolvió de nuevo en DCM. El anhídrido acético restante se destruyó por medio de la adición de un pequeño volumen de solución de NaOH 1M, luego la solución resultante se secó (MgS04) y se concentró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM) proporcionó el compuesto del título: RT = 3.60 min, m/z (ES+) = 186.1 [M + H] + .

Preparación 34: ( trans) -l-Bencil-3- (2 , -difluorofenil) -4-nitropirrolidina Una solución del 2 , 4 -difluoro- 1- ( (E) -2 -nitrovinil) benceno (Preparación 33, 8.0 g, 43.0 mmol) en DCM (250 mL) , bajo argón, se enfrió a -30°C. La N- (metoximetil) -N- (trimetilsililmetil) bencilamina (11.7 mL, 45.0 mmol) se agregó con el propósito de mantener la temperatura a -30 °C.

La reacción se agitó durante 10 minutos antes de la adición gota a gota de TFA (0.3 mL, 4.3 mmol) y se permitió que la mezcla resultante se agitara a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se lavó con agua, luego salmuera y se secó (Na2S04) . La remoción del solvente in vacuo proporcionó el compuesto del título: RT = 3.05 min; m/z (ES+) = 319.1 [M + H] + .

Preparación 35: Ester terc-butílico del ácido [( trans) -1-bencil-4 - (2 , 4 -difluorofenil) pirrolidin-3 -il] carbámico Una combinación de la ( trans) - l-bencil-3 - (2 , 4 -difluorofenil ) -4 -nitropirrolidina (Preparación 34, 25.0 g, 0.08 mol) y polvo de zinc (17.8 g, 0.28 mol) en una mezcla de AcOH y EtOH (1:1, 500 mL) se calentó a 70°C. Después de 45 horas, una porción adicional de polvo se zinc (12.0 g, 0.18 mol) se agregó y el calentamiento continuó durante 20 minutos. Después de la reacción completa, el solvente se retiró in vacuo. El residuo resultante se disolvió de nuevo en EtOAc, se lavó con una solución saturada de NaHC03, luego salmuera y se secó (Na2S04) . La remoción del solvente in vacuo proporcionó el producto intermedio ( trans) -l-bencil-4- (2, 4-difluorofenil)pirrolidin-3-ilamina: RT = 1.82 min; m/z (ES+) = 289.1 [M + H] + . A una solución del producto en THF (400 mL) , bajo argón, se agregó trietilamina (20.4 mL, 0.15 mol) y la solución se enfrió a 0°C. El dicarbonato de di- tere-butilo (19.0 g, 0.09 mol) se agregó durante 5 minutos y se permitió que la reacción alcanzara la temperatura ambiente durante 16 horas. El solvente se retiró ín vacuo, luego el residuo resultante se disolvió de nuevo en EtOAc, se lavó con salmuera, se secó (Na2S04) y el solvente se retiró in vacuo. Al producto se agregó heptano (100 mL) y la suspensión se sónico hasta que se disolvió completamente. Se permitió que la solución reposara durante 60 horas, permitiendo la formación de un producto precipitado. El solvente se decanto y los sólidos se lavaron con una porción fresca de heptano (50 mL) para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.74 min; m/z (ES+) = 389.3 [M + H]+.

Preparación 36: Ester terc-butílico del ácido [ (32¾, 4¿S) -1-bencil-4 - (2 , -difluorofenil) irrolidin-3 - il] carbámico El compuesto del título se proporcionó por vía de la separación mediante la HPLC quiral del éster terc-butílico del ácido [( trans) -l-bencil-4- (2 , 4-difluorofenil) irrolidin-3-il] -carbámico (Preparación 35) IH:IPA:DEA 96:4:0.1, 15 mL/min, 270 nm, RT = 9.8 min.

Preparación 37: Ester fcerc-butílico del ácido [ (3JR, 4S) -4 -(2 , 4 -difluorofenil) pirrolidin-3-il] carbámico El compuesto del título se preparó a partir del éster terc-butílico del ácido [ (3R, 4S) - l-bencil- - ( 2 , 4 -difluorofenil) pirrolidin-3 - il] carbámico (Preparación 36) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 19, pero a una presión de 10 bares y una temperatura de 50 °C: RT = 2.38 mm; m/z (ES+) = 299.1 [ + H] + .

Preparación 38: Ester isopropílico del ácido 4 - ( (R) -1- {5 - [6 - (benzotriazol-l-iloxi) piridazin-3-il] - [1,2,4] oxadiazol-3-il}etoxi) piperidin- 1-carboxílico A una solución del ácido 6-cloropiridazin-3 -carboxílico (60 mg, 0.38 mmol) en THF (10 mL) se agregó EDCI (107 mg, 0.46 mmol) , seguido por HOBt (69 mg, 0.46 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. El éster isopropílico del ácido 4- [ (R) -1- (N-hidroxicarbamimidoil) etoxi] piperidin-l-carboxílico (Preparación 12, 103 mg, 0.38 mmol) se agregó y la agitación continuó durante 4 horas, antes de la remoción del solvente in vacuo. El residuo resultante se dividió entre EtOAc y agua, luego la fase orgánica se separó, se lavó con una solución saturada de NaHC03, se secó (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. El residuo se disolvió en tolueno y se calentó a reflujo durante 16 horas antes de la concentración del solvente in vacuo y la disolución de nuevo del producto en EtOAc . La solución se lavó con agua, luego salmuera, y se secó (MgS0 ) , antes de la remoción del solvente in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (IH: EtOAc, 1:1) proporcionó el compuesto del título: RT = 3.87 min, m/z (ES+) = 495.2 [M + H] + .

Preparación 39: Ester terc-butílico del ácido 3-((J¾)-l-carboxietoxi) azetidin-l-carboxílico Una solución del éster terc-butílico del ácido 3-hidroxiazetidin-l-carboxílico (3.00 g, 17.32 mmol) en THF (50 mL) , bajo argón, se enfrió a 0°C y se agregó hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 0.76 g, 18.98 mmol) en porciones, durante 10 minutos. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas, luego se agregó agua (50 mL) . La mezcla se lavó con EtOAc (2 x 100 mL) y la solución acuosa, resultante se acidificó a H 1 con HC1 2M. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 80 raL) luego las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (100 mL) , se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RMN -"? d? (400MHz, CDC13) : 4.40 - 4.31 (m, 1H) , 4.16 - 40.08 (m, 2H) , 4.04 -3.93 (m, 2H) , 3.90 - 3.85 (m, 1H) , 1.48 (d, J = 7.0 Hz, 3H) , 1.44 (s, 9H) .

Preparación 40: Ester fcerc-butílico del ácido 3-((J2)-l-metoxicarboniletoxi ) aze idin- 1 - carbox lico A una solución del éster terc-butí lico del ácido 3 -( (R) - 1 -carboxietoxi ) azetidin- 1- carboxílico (Preparación 39, 3.29 g, 13.40 mmol) en una mezcla de tolueno y MeOH (4:1, 25 mL) , enfriada a 0°C, se agregó trimet ilsilildiazometano (2M en hexanos , 8.71 mL, 17.42 mmol), gota a gota, durante 5 minutos. La reacción se agitó a esta temperatura durante 30 minutos antes de ser enfriada rápidamente por la adición de AcOH (1 mL) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM : MeOH , 100:0, 98:2, 95:5) proporcionaron el compuesto del título: RMN 1H d? (400MHz, CDCI3) 4.35 - 4.27 (m, 1H) , 4.13 - 4.04 (m, 2H) , 3.99 - 3.91 (m, 2H) , 3.87 - 3.82 (m, 1H) , 3.75 (s, 3H) , 1.44 - 1. 1 (m, 12H) .

Preparación 41: Sal de ácido trifluoroacético de éster metílico del ácido {R) - 2 - (azetidin-3-iloxi)propiónico A una solución del éster terc-butílico del ácido 3- ( (i?) -1-metoxicarboniletoxi) azetidin-l-carboxílico (Preparación 40, 2.69 g, 10.37 mmol) en DCM (50 raL) , bajo argón, enfriada a 0°C, se agregó TFA (10 mL) y la reacción se agitó a esta temperatura durante 1 hora. Una porción adicional de TFA (2 mL) se agregó y la agitación continuó durante 30 minutos. La remoción del solvente in vacuo proporcionó el compuesto del título: RMN ? d? (400MHz, DMSO-d6) : 4.51 - 4.43 (m, 1H) , 4.24 - 4.17 (m, 1H) , 4.16 - 4.08 (m, 2H) , 3.96 -3.83 (m, 2H) , 3.66 (s, 3H) , 1.30 (d, J = 6.6 Hz, 3H) .

Preparación 42: Ester isopropílico del ácido 3-({J?)-l-metoxicarboniletoxi) azetidin-l-carboxílico Una suspensión de la sal de ácido trifluoroacético del éster metílico del ácido (J?) -2- (azetidin-3-iloxi) propiónico_ (Preparación 41, 1.42 g, 5.19 mmol) en DCM (20 mL) , bajo argón, se enfrió a 0°C. Se agregó trietilamina (1.66 mL, 11.93 mmol), seguida por una solución de cloroformiato de isopropilo (1M en tolueno, 6.22 mL, 6.22 mmol) , gota a gota, y la reacción se agitó a esta temperatura durante 2 horas. La mezcla se diluyó con DCM (30 mL) , se lavó con HC1 1M (30 mL) , una solución saturada de NaHC03 (30 mL) , luego salmuera (30 mL) y se secó (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 99:0, 98:2) proporcionaron el compuesto del título: RMN 1H ¾ (400MHz, CDCI3) : 4.94 - 4.86 (m, 1H) , 4.38 - 4.30 (m, 1H) , 4.17 - 4.09 (m, 2H) , 4.01 - 3.94 (m, 2H) , 3.91 - 3.86 (m, 1H) , 3.76 (s, 3H) , 1.43 (d, J = 7.0 Hz , 3H) , 1.22 (d, J = 6.2 Hz , 6H) .

Preparación 43: Ester isopropílico del ácido 3-((J?)-l-carboxietoxi) azetidin-l-carboxílico una solución del éster isopropílico del ácido ( (R) -1-metoxicarboniletoxi) azetidin-l-carboxílico (Preparación 42, 829 mg, 3.38 mmol) en THF (6 mL) , enfriada a 0°C, se agregó agua (1.5 mL) seguida por monohidrato de hidróxido de litio (298 mg, 7.10 mmol) y la mezcla resultante se agitó a esta temperatura durante 3 horas. El solvente de reacción se concentró in vacuo, luego se agregó agua (15 mL) y la solución se lavó con EtOAc (20 mL) . La fase acuosa se acidificó a pH 1 con HCl 1M y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mL) . Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (20 mL) , se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RMN 1H 6H (400MHz, DMSO-d6) : 4.77 - 4.66 (m, 1H) , 4.39 - 4.31 (m, 1H) , 4.08 - 4.00 (m, 2H) , 3.99 - 3.92 (m, 1H) , 3.77 - 3.66 (m, 2H) , 1.28 (d, J = 6.6 Hz, 3H) , 1.15 (d, 6H) .

Preparación 44: 2 , 5-Difluoro-1- ( (E) -2 -nitrovinil) benceno El compuesto del título se preparó a partir del 2 , 5-difluorobenzaldehído empleando un método similar a aquel resumido en la Preparación 33. Después de la reacción con DMAP, la mezcla cruda se diluyó con una solución saturada de NaHC03. El producto precipitado que se formó se agitó durante 30 minutos, se filtró y se secó para proporcionar el compuesto del título RMN d? (300MHz, CDC13) : 8.00 - 7.96 (m, 1H) , 7.71 - 7.66 (m, 1H) , 7.25 - 7.11 (m, 3H) .

Preparación 45: ( trans) -l-Bencil-3- (2 , 5-difluorofenil) -4-nitropirrolidina El compuesto del título se preparó a partir del 2 , 5-difluoro-1- ( (E) -2 -nitrovinil ) benceno (Preparación 44) empleando el método resumido en la Preparación 34, pero la reacción se llevó a cabo a 0°C. La purificación por medio de la cromatografía en columna (Hexano: EtOAc, 100:0, 98:2, 95:5, 90:10) proporcionó el compuesto del título. Método 2 de LCMS: RT = 0.96 in; m/z (ES+) = 319.2 [M + H] + .

Preparación 46: Ester terc-butílico del ácido [ (trans) -1-bencil-4- (2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-3 -il] carbámico Una combinación de la ( trans) -l-bencil-3 - ( 2 , 5 -difluorofenil) -4 -nitropirrolidina (Preparación 45, 45.6 g, 0.14 mol) y polvo de zinc (57.0 g, 0.86 mol) en una mezcla de AcOH y EtOH (1:1, 820 mL) se calentó a 65 °C. Después de completar la reacción, la mezcla se filtró, lavando con AcOH, y el producto filtrado se concentró in vacuo. El residuo resultante se disolvió de nuevo en EtOAc, se lavó con una solución saturada de NaHC03, luego salmuera, y se secó (Na2S04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM :MeOH :NH3 , 100:0:0, 95:5:0, 90:10:0, 90:10:5) proporcionaron el producto intermedio (trans) -l-bencil-4- (2,4, 5-trifluorofenil) pirrolidin-3-ilamina. Método 2 de LC S: RT = 0.80 min; m/z (ES+) = 289.4 [M + H] + . A una solución del producto (12.2 g, 42.3 mmol) en THF (250 mL) , bajo argón, se agregó trietilamina (12.0 mL, 84.6 mol) y la mezcla se enfrió a 0°C. El dicarbonato de di- terc-butilo (11.0 g, 50.4 mol) se agregó durante 5 minutos, luego se permitió que la reacción alcanzara la temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. El solvente se concentró, luego el residuo resultante se disolvió de nuevo en EtOAc, se lavó con salmuera, se secó (Na2S04) y el solvente se retiró in vacuo. El producto se trituró varias veces con heptano para proporcionar el compuesto del título: Método 3 de LCMS: RT = 3.08 min; m/z (ES+) = 389.5 [M + H] + . .

Preparación 47: Ester terc-butílico del ácido [(3J?,4S)-1-bencil-4- (2, 5-difluorofenil) irrolidin-3 -il] carbámico compuesto del título se proporcionó por vía la separación mediante la HPLC quiral del áster terc-butílico del ácido [ ( trans) -1-bencil -4- ( 2 , 5 -difluorofenil ) pirrolidin-3 -il] carbámico .(Preparación 46) : IH:IPA:DEA 96:4:0.1, 15 mL/min, 270 nm, RT = 10.9 min.

Preparación 48: Ester terc-butílico del ácido [(32?,4S)-4- (2 , 5 -difluorofenil) irrolidin-3 -il] carbámico El compuesto del título se preparó a partir del terc-butílico del ácido [ (3R, 4S) -l-bencil-4- (2 , 5-difluorofenil ) pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 47) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 19, pero la reacción se llevó a cabo a 90°C. RT = 2.35 min; m/z (ES+) = 299.2 [M + H] + Preparación 49: Ester terc-butílico del ácido [ (3R, 4S) -1- (5-cianopirimidin-2 - il) -4 - (2 , 5 -difluorofenil) pirrolidin- 3 -il] carbámico A una mezcla de 2-cloropirimidin-5-carbonitrilo (71 mg, 0.51 mmol) y el éster terc-butílico del ácido [ (3i?, 4S) -4- ( 2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-3 - il] carbámico (Preparación 48, 160 mg, 0.54 mmol) en DMSO (1 mL) se agregó DBU (76 µ]_?, 0.51 mmol) . La mezcla se burbujeó con argón durante 5 minutos y luego se calentó a 70 °C durante 16 horas. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción cruda se dividió entre EtOAc (50 mL) y agua (50 mL) y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc (20 mL) luego las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (30 mL) , una solución saturada de NaHC03 (50 mL) , luego salmuera (50 mL) y se secaron (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM : MeOH , 100:0, 98:2) proporcionaron el compuesto del título: RT = 4.03 min, m/z (ES+) = 402.1 [ + H] + .

Preparación 50: Ester terc-butílico del ácido { (3J2, 4S) -4 -(2 , 5-difluorofenil) -1- [5- (N-hidroxicarbamimidoil) -pirimidin-2-il] pirrolidin-3 -il}carbámico El compuesto del título se preparó a partir del éster terc-butílico del ácido [ (3R, 45) -1- (5-cianopirimidin-2-il) -4- (2, 5-difluorofenil) pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 49) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 21: RT = 2.72 min; m/z (ES+) = 435.2 [M + H]+.

Preparación 51: Ester isopropílico del ácido 3- [ ( R) -1- (3-{2-[ (3J?, 4S) -3- fce-rc-butoxicarbonilamino-4 - (2 , 5-difluorofenil) -pirrolidin- 1-il] irimidin-5-il} - [1,2,4] oxadiazol-5 -il) etoxi] -azetidin- 1-carboxílico El éster isopropílico del ácido 3-((i?)-l-carboxietoxi) azetidin- 1-carboxí lico (Preparación 43) se hizo reaccionar con el éster terc-butílico del ácido { (3J?,45)-4- (2, 5-difluorofenil) -1- [5- (N-hidroxicarbamimidoil ) pirimidin-2 -il]pirrolidin-3-il}carbámico (Preparación 50) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 22. La purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 6:4) proporcionó el compuesto del título: RT = 4.44 min, m/z (ES+) = 630.2 [M + H]+.

Preparación 52: Ester terc-butílico del ácido [ (3J?, 4S) -1- (5-cianopirazin-2 -il) -4 - (2 , 5 -difluorofenil) irrolidin-3 -il] carbámico A una mezcla del 5 - cloropiraz in- 2 -carboni t ri lo (140 mg, 1.01 mmol) y el éster terc-butílico del ácido [(3J2,4S) -4-(2,5 - dif luorof eni 1 )pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 48, 300 mg, 1.01 mmol) en DMSO (1 mL) se agregó DBU (150 µ?_ , 1.01 mmol) . La mezcla se burbujeó con argón durante 5 minutos y luego se calentó a 70 °C durante 3 horas. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción cruda se dividió entre EtOAc (200 mL) y agua (75 mL) , luego la fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 60:40) proporcionó el compuesto del título: RT = 3.93 min; m/z (ES+) = 402.1 [?? + H] + .

Preparación 53: Ester terc-butí lico del ácido {(3-R,4S)-4- (2 , 5-dif luorofenil) -1- [5- (N-hidroxicarbamimidoil ) pirazin-2-il]pirrolidin-3-il}carbámico El compuesto del título se preparó a partir del éster terc-butí lico del ácido [ {3R, 4S) -1- ( 5 -cianopiraz in- 2 -il)-4-(2,5 -di f luorofeni l)pirrolidin-3-il]carbámico (Preparación 52) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 12, pero la reacción solamente se calentó durante 3 h: RT = 2.73 min; m/z (ES+) = 435.2 [M + H] + .

Preparación 54: Ester terc-butílico del ácido [(trans)-l-bencil-4- (2,4, 5- trifluorofenil) irrolidin-3-il] carbámico El compuesto del título se preparó en 3 pasos a partir de 2 , 4 , 5 - trifluorobenzaldehído empleando los procedimientos resumidos en la síntesis de la Preparación 46. Método 3 de LCMS : RT = 3.10 min; m/z (ES+) = 407.3 [M + H] + .

Preparación 55: Ester terc-butílico del ácido [ ( trans) (2,4,5- trifluorofenil) irrolidin-3 - il] carbámico Una solución del éster terc-butílico del ácido [ (trans) -l-bencil-4- (2,4, 5-trifluorofenil) pirrolidin-3 -il] carbámico (Preparación 54, 40.1 g, 98.8 mmol) en una combinación de IMS (325 mL) y EtOAc (50 mL) , en una autoclave, se colocó bajo una atmósfera de argón. Se agregó paladio sobre carbón (5%, 4.0 g, 1.9 mmol) como una suspensión espesa en un volumen mínimo de tolueno, luego la mezcla de reacción se colocó bajo una atmósfera de hidrógeno (50 atm) y se agitó durante 72 horas. La mezcla cruda se filtró a través de celite, lavando con EtOAc, y el producto filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título. Método 4 de LCMS : RT = 2.42 min; m/z (ES+) = 317.2 [M + H]+.

Preparación 56: Ester terc-butílico del ácido [ (3J?, 4S) -4 - (2,4, 5- trifluorofenil) pirrolidin-3 -il] carbámico El éster terc-butílico del ácido [ ( trans) -4- (2 , 4 , 5-trifluorofenil ) irrolidin-3 - il] carbámico (Preparación 55, 59.5 g, 188 mmol) se suspendió en EtOH (200 mL) y se calentó a 70 °C. A la suspensión se agregó una solución caliente de (S) - (+) -naproxeno (21.5 g, 93 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo. El calor se retiró y se permitió que la mezcla se enfriara lentamente a temperatura ambiente, con agitación, durante 16 horas. El producto precipitado resultante se filtró, lavando con EtOH, y el producto filtrado se dividió entre DCM (2400 mL) y NaOH 1M (600 mL) . La fase orgánica se separó, se lavó con NaOH 1M, salmuera, luego se secó (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. El proceso completo se repitió por segunda vez para proporcionar el compuesto del título: RMN H ¾ (400MHz, CD3OD) : 7.38 - 7.25 (m, 1H) , 7.14 -7.01 (m, 1H) .

Preparación 57: Ester isopropílico del ácido 3-hidroxipirrolidin-l-carboxílico Una solución del éster terc-butílico del ácido 3-hidroxipirrolidin-l-carboxílico (10.0 g, 53.4 mmol) en una solución de HC1 en dioxano (4M, 125 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos antes de la remoción del solvente de reacción in vacuo. El residuo se suspendió en DCM (150 mL) y se agregó trietilamina (22.0 mL, 160.2 mmol) antes de enfriar la mezcla de reacción a 0°C. Una solución de cloroformiato de isopropilo en tolueno (1M, 64 mL, 64 mmol) se agregó, gota a gota, luego la mezcla resultante se retiró del baño de hielo y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregó una porción adicional de cloroformiato de isopropilo (53.4 mi, 53.4 mmol) y la agitación continuó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción cruda se lavó con agua (2 x 100 mL) , luego se secó (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM : MeOH : NH40H , 9:1 0:1) proporcionaron el compuesto del título: RT = 2.29 min; m/z (ES+) = 174.0 [M + H]+.

Preparación 58: Ester isopropílico del ácido 3-((J?)-l-carboxietoxi) irrolidin- 1-carboxí1ico El compuesto del título se preparó empleando un método similar a aquel resumido en la Preparación 9. Después del tratamiento inicial el residuo se disolvió en una solución de NaOH 1M y se lavó con Et20. La fase acuosa se acidificó a pH 1 con HC1 2M, se extrajo con EtOAc y la fase orgánica se secó (Na2S04) . La remoción del solvente in vacuo proporcionó el compuesto del título: RT = 2.70 min; /z (ES+) = 246.2 [M + H] + Preparación 59: Ester isopropílico del ácido 3-((J?)-l-carbamoiletoxi) irrolidin-l-carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 3- ( (R) - 1 -carboxietoxi ) pirrol idin- 1 - carboxí lico (Preparación 58, 1.00 g, 4.08 mmol) en THF (50 mL) , bajo argón, se agregó EDCI (0.94 g, 4.90 mmol) , seguido por HOBt (0.66 g, 4.33 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se agregó una solución de NH3 en dioxano (0.05 M, 20.4 µ?? , 40.80 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Se agregó una porción adicional de NH3 en dioxano (0.05 M, 10 mL) y la reacción se agitó durante 1 hora. El solvente se retiró in vacuo y el residuo resultante se dividió entre EtOAc (150 mL) y agua (100 mL) . La fase orgánica se retiró y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (150 mL) . Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución saturada de NaHC03 (100 mL) , luego salmuera (100 mL) y se secaron (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM : MeOH , 95:5) proporcionaron el compuesto del título: RT = 2.53 min, m/z (ES+) = 245.2 [M + H] + .

Preparación 60: Ester isopropílico del ácido 3- ( (R) -cianometilmetoxi) pirrolidin- 1-carboxílico El compuesto del título se preparó a partir del éster isopropílico del ácido 3-((J?)-l-carbamoiletoxi) pirrolidin-l-carboxílico (Preparación 59) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 11: RT = 3.06 min, m/z (ES+) = 227.1 [Ai + H] + .

Preparación 61: Ester isopropílico del ácido 3-[(R)-l-(N-hidroxicarbamimidoil) etoxi] pirrolidin-l-carboxílico El compuesto del título se preparó a partir del éster isopropílico del ácido 3- ( (R) -cianometilmetoxi) pirrolidin-l-carboxílico (Preparación 60) empleando el procedimiento resumido en la Preparación 12, pero calentando la reacción durante 2 h: RT = 1.99 min, m/z (ES+) = 260.1 [M + H] + Preparación 62: Ester isopropílico del ácido 3-{ (R) -1- [5- (2-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-3 -il] etoxi }pirrolidin-1-carboxílico una solución del 2 -cloropirimidin-2 -ol (103 mg 0.65 mmol) en THF (10 mL) , enfriada a 0°C, se agregó 1,3-diisopropilcarbodiimida (101 µ]1?, 0.65 mmol) y la reacción se agitó durante 10 minutos a esta temperatura. El áster isopropílico del ácido 3- [ (R) -1- (N-hidroxicarbamimidoil) -etoxi] pirrolidin- 1-carboxílico (Preparación 61, 169 mg, 0.65 mmol) se agregó, el baño de hielo se retiró y se permitió que la mezcla se agitara a temperatura ambiente durante 1 hora. El solvente de la reacción se concentró a sequedad, luego el residuo resultante se disolvió en EtOAc, se lavó con agua, salmuera, luego se secó (Na2S04) y el solvente se retiró in vacuo. El residuo se disolvió en tolueno y se calentó a 80 °C durante 18 horas antes de ser calentado a reflujo durante 1 hora. La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 1:1) proporcionaron el compuesto del título: RT = 3.53 min, m/z (ES+) = 382.1 [M + H]+.

Preparación 63: l-Piperidin-4-il-etanol A una solución del oc-metil-4-piridin-metanol (3.7 g, 30 mmol) en EtOH (100 mL) se agregó AcOH (1.9 mL, 33 mmol) y óxido de platino (0.5 g, 2.2 mmol) y se permitió que la mezcla resultante se agitara bajo una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla se filtró y el producto filtrado se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en MeOH, al cual se agregó una solución de NaOH (1.6 g, 40 mmol) y agua (1.6 mL) en MeOH. La reacción se agitó durante 30 minutos antes de retirar el solvente in vacuo y el residuo resultante se suspendió en éter dietílico durante 30 minutos. La mezcla se filtró y el producto filtrado se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RMN XH ¾ (400MHz, CDC13) : 3.63 - 3.55 (m, 1H) , 3.39 - 3.31 (m, 2H) , 2.7 - 2.6 (m, 2H) , 2.01 - 1.92 (m, 2H) , 1.76 - 1.69 (m, OH), 1.67 - 1.54 (m, 2H) , 1.51 - 1.42 (m, 1H) , 1.1 - 1.14 (m, 3H) .

Preparación 64: Ester isopropílico del ácido 4-(l-hidroxietil) iperidin- 1-carboxílico A una solución de l-piperidin-4 - il -etanol (Preparación 63, 5.0 g, 38.76 mmol) en DCM (200 mL) en un matraz de 3 cuellos bajo argón se agregó DIPEA (8.8 mL, 50.39 mmol) y la reacción se enfrió a 0°C. Una solución de isopropilcloroformiato en tolueno (46.5 mL, 46.5 mmol) se agregó gota a gota, durante 10 minutos, luego la reacción se llevó a la temperatura ambiente y se agitó durante 2.5 horas adicionales. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se dividió con una solución de HCl 1M. La capa orgánica se separó, se lavó con una solución de HCl 1M, salmuera y se pasó a través de un separador de fases. La remoción del solvente in vacuo proporcionó el compuesto del título: RMN 1H 5H (400MHZ, CDCl3) : 4.97 - 4.87 (m, 1H) , 4.28 - 4.14 (m, 2H) , 3.66 - 3.55 (m, 1H) , 2.77 - 2.63 (m, 2H) , 1.88 - 1.81 (m, 1H) , 1.67 - 1.59 (m, 1H) , 1.48 - 1.38 (m, 1H) , 1.26 - 1.16 (m, 11H)..

Preparación 65: Ester isopropílico del ácido 4-[l-(5-bromopiridin-2 -iloxi) etil] piperidin-l-carboxílico Una solución seca del éster isopropílico del ácido 4- (1-hidroxietil) iperidin-l-carboxílico (Preparación 64, 7.4 g, 34.4 mmol) en DMF (100 mL) , bajo argón, se enfrió a 0°C. El hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 2.8 g, 68.8 mmol) se agregó en una porción, luego se permitió que la reacción se agitara a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregó 5-bromo-2-cloropiridina (13.2 g, 68.8 mmol) y la reacción se calentó a 80 °C durante 16 horas. Se permitió que la mezcla de reacción se enfriara a temperatura ambiente y se dividió entre EtOAc y agua. La fase orgánica se separó, se lavó con agua, luego salmuera, y se secó (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo, seguida por la trituración a partir de iso-hexano (2 6 mL) luego éter dietílico, proporcionaron el compuesto del título: RT = 4.34 min; m/z (ES+) = 371.2 [ + H] + .

Preparación 66: Ester isopropílico del ácido 4-{l-[5-(4,4,5, 5- tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan- 2 -il) piridin-2 -iloxi] etil}piperidin- 1-carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 4- [1- ( 5 -bromopiridin-2 - iloxi ) etil] piperidin-l-carboxílico (Preparación 65, 4.2 g, 11.3 mmol) en dioxano (90 mL) se agregó acetato de potasio (3.3 g, 33.9 mmol), [1,1-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (0.9 g, 1.1 mmol) y bis (pinacolato) diboro (3.4 g, 13.4 mmol) . La mezcla de reacción se burbujeó con argón durante 10 minutos, antes de ser calentada a 110 °C durante 16 horas. La remoción del solvente in vacuo seguida por la purificación del material crudo por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 100:0, 97.5:2.5,95:5) proporcionaron el compuesto del título: RT = 4.55 min; m/z (ES+) = 419.4 [M + H]+.

Preparación 67: (3S, 4S) -4 -Azido- l-bencilpirrolidin-3 - ilamina A una solución de (3S, 4S) -3 , 4-diazido-l-bencilpirrolidina (15.6 g, 64.10 mmol) en THF (500 mL) enfriada a 0°C se agregó una solución de trifenilfosfina (16.5 g, 62.81 mmol) en THF (100 mL) , gota a gota durante 4 horas y se permitió que la mezcla resultante alcanzara la temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas . El solvente de reacción se retiró in vacuo y el residuo resultante se disolvió de nuevo en THF (500 mL) y agua (1.3 mL) antes de ser calentado a reflujo durante 4 horas luego se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. El solvente de reacción se retiró in vacuo y el residuo resultante se trituró con Et2<3. El producto precipitado se filtró y el producto filtrado se concentró in vacuo. El residuo se tomó en Et20 nuevamente y se filtró. La remoción del producto filtrado in vacuo seguida por la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 90:10, 80:20, 50:50, 0:100 luego MeOH : H40H, 9:1) proporcionaron el compuesto del título: RT = 0.77 min; m/z (ES+) = 218.1 [M + H] +.

Preparación 68: Ester terc-butílico del ácido ( (3S, 4S) -4 -azido- l-bencilpirrolidin-3 -il) carbámico A una solución de la (3S, 4S) -4-azido-l-bencilpirrolidin-3-ilamina (Preparación 67, 6.0 g, 27.74 mmol) y trietilamina (4.6 mL, 33.29 mmol) en DCM (100 mL) , enfriada a 0°C, se agregó una solución de di-terc-butildicarbonato (7.3 g, 33.29 mmol) en DCM (10 mL) gota a gota durante 20 minutos. Se permitió que la mezcla resultante alcanzara la temperatura ambiente y se agitó durante 72 horas. El solvente de reacción se lavó con una solución saturada de NaHC03, luego salmuera, y se secó (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo seguida por la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH) proporcionaron el compuesto del título: RM ^ d? (400MHz, CDC13) : 7.37 - 7.26 (m, 5H) , 4.09 - 4.02 (m, 1H) , 3.84 - 3.76 (m, 1H) , 3.68 - 3.59 (m, 2H) , 3.12 - 3.01 (m, 1H) , 2.91 -2.82 (m, 1H) , 2.55 - 2.35 (m, 2H) , 1.46 (s, 9H) .

Preparación 69: Ester terc-butílico del ácido ((3S,4S)-4-amino-l-bencilpirrolidin-3 -il) carbámico El compuesto del título se preparó a partir del éster terc-butílico del ácido ( (35, 4S) -4-azido-l-bencilpirrolidin-3-il) carbámico (Preparación 68) empleando el procedimiento resumido en el documento O2007/148185.

Preparación 70: Ester terc-butílico del ácido [(3S,4S)-1-bencil-4- (2-oxopiperidin-l-il)pirrolidin-3-il] carbámico El compuesto del título se preparó en dos pasos a partir del éster terc-butílico del ácido ( (3S, 4S) -4-amino-l- bencilpirrolidin-3-il) carbámico (Preparación 69) empleando los procedimientos resumidos en el documento O2007/148185. Preparación 71: Ester terc-butílico del ácido [ (3S, 4S) -4- (2 -oxopiperidin-l-il) pirrolidin-3 -il] carbámico Una solución del éster terc-butílico del ácido [ ( 3S, 4S) - 1-bencil -4 - ( 2 -oxopiperidin- 1 - il ) pirrolidin-3 -il] carbámico (Preparación 70, 2.6 g, 7.07 mmol) en MeOH (140 mL) se pasó a través de un aparato H-CubeMR (Catcart 70 de pd al 10%/C, 10 bares, 90°C) a un caudal de salida de 1 mL por minuto. El solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RMN ?. d? (400MHz, CDCl3) : 5.25 - 5.07 (m, 1H) , 4.85 - 4.62 (m, 1H) , 4.34 - 4.07 (m, 1H) , 3.49 -3.28 (m, 3H) , 3.24 (s, 1H) , 2.99 (s, 1H) , 2.87 - 2.73 (m, 1H) , 2.52 - 2.39 (m, 2H) , 2.38 - 2.22 (m, 2H) , 1.91 - 1.74 (m, 1H) , 1.54 - 1.38 (m, 9H) .

Preparación 72: Ester terc-butílico del ácido [ (3S, 4S) -1- (5-bromopirimidin-2 -il) -4- (2-oxopiperidin-l-il) pirrolidin-3 -il] carbámico Una combinación del éster terc-butílico del ácido [ (3S, 4S) -4- (2-oxopiperidin-l-il)pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 71, 415 mg, 1.46 mmol) , 5-bromo-2-cloropirimidina (283 mg, 1.46 mmol) y DBU (219 µ?, 1.46 mmol) en DMSO (3 mL) se calentó a 70 °C durante 1 hora. Se permitió que la reacción se enfriara a temperatura ambiente antes de ser dividida entre EtOAc y agua. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera y se secó ( a2S04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 1:1) proporcionaron el compuesto del título: RT = 3.44 min, m/z (ES+) = 440.1 [M + H] + .

Preparación 73: Ester terc-butílico del ácido [ (3J¾, 4S) -1- (5-bromopirimidin-2 -il) -4 - (2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-3 -il) carbámico Una combinación del éster terc-butílico del ácido [ ( 3J?, 4S) -4 - (2, 5-difluorofenil ) pirrolidin-3 - il] carbámico (Preparación 48, 540 mg, 1.8 mmol), 5-bromo-2-cloropirimidina (350 mg, 1.8 mmol) y DBU (270 µ? , 1.8 mmol) en DMSO (3 mL) se calentó a 70 °C durante 30 minutos. Se permitió que la reacción se enfriara a temperatura ambiente antes de ser dividida entre EtOAc y agua. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera y se secó (Na2S04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 1:1) proporcionaron el compuesto del título: RT = 4.32 min, m/z (ES+) = 455.1 [M + H]+.

Ejemplo 1: Ester isopropílico del ácido 4- (5-{6- [ (3J?, 4¿S) -3-amino-4 - (2 - fluorofenil) pirrolidin-1-il] piridin-3 -il} -[1,2,4] oxadiazol-3-ilmetoxi) piperidin-l-carboxílico Una combinación del éster isopropílico del ác ido 4 - [ 5 - ( 6 - c lorop iridin-3-il) - [1,2,4] oxadiazol-3-ilmetoxi] -piperidin-l-carboxílico (Preparación 5, 150 mg , 0.39 mmol) , clorhidrato del éster 9H- f luoren- 9 -ilmetílico del ácido [ ( trajis) - 4- (2-f luorofeni 1 ) pi rrol idin- 3 - i 1 ] carbámi co (Preparación 30, 172 mg, 0.39 mmol) y D I PEA (143 µ?? , 0.82 mmol) en terc-butanol (2 mL) se calentó a 80°C hasta que se completó la reacción. La mezcla se diluyó con un pequeño volumen de DCM y se purificó por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 96:4) . La purificación adicional por medio de la HPLC quiral (MTBE : EtOH : BA 80:20:0.1, 11 mL/min, 285 nm , RT = 35.0 min) proporcionó el compuesto del título: RT = 2.75 min; m/z (ES+) = 525.2 [ + H]+.

Ejemplo 2: Sal de ácido p-toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 4- (5- {2 - [ (3J?, 4S) -3 -amino-4- (2 - fluorofenil) pirrolidin-1-il] pirimidin-5-il}- [1,2,4] oxadiazol-3 -ilmetoxi) piperidin-1-carboxílico Una combinación del éster isopropílico del ácido 4- [5- (6-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-3 -ilmetoxi] -piperidin-l-carboxílico (Preparación 6, 150 mg, 0.39 mmol) , clorhidrato del éster 9H-fluoren-9-ilmetílico del ácido [ ( trans) -4 - ( 2 - fluorofenil ) irrolidin-3 -il] carbámico (Preparación 30, 172 mg, 0.39 mmol) y DIPEA (143 µ].,, 0.82 mmol) en terc-butanol (2 mL) se calentó a 80 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró xn vacuo y se disolvió de nuevo en DCM (150 mL) . La mezcla orgánica se lavó con agua (50 mL) , salmuera (50 mL) , luego se secó (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM: eOH, 96:4) seguida por la HPLC quiral (MeOH : THF : CHC13 55:25:20, 11 ml/min, 285 nm, RT = 6.8 min) proporcionaron el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4- (5- {2- [ {3R, 4S) -3- (9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino) -4- (2-fluorofenil) irrolidin-1-il] irimidin-5-il} - [1,2,4] oxadiazol-3 -ilmetoxi) iperidin-1- carboxílico: RT = 4 89 min; m/z (ES+) = 748.3 [M + H] + . A una solución del producto en DCM (1 mL) , enfriada a 0°C, se agregó una solución de piperidina (0.5 mi) en DCM (1 mL) , gota a gota. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 2 horas antes de la remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DC : MeOH, 98:2, 92:8) . Una solución de TsOH (1 eq. ) en MeOH (2 mL) se agregó al producto antes de la remoción del solvente in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.78 min; m/z (ES+) = 526.4 [M + H] + .

Ejemplo 3: Sal de ácido p- toluensulfónico del éster isopropílico del ácido 4 - (5 - {2 - [ (3R, S) - 3 -amino-4 - ( 2 , 5 -difluorofenil) pirrolidin-l-il] pirimidin-5-il} - [1,2,4] -oxadiazol-3 -ilmetoxi) piperidin- 1- carboxílico Una combinación del éster isopropílico del ácido 4- [5- (6-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-3 -ilmetoxi] -piperidin-l-carboxílico (Preparación 6, 65 mg, 0.17 mmol) , éster terc-butílico del ácido [ ( 3R, 4S) -4 - ( 2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 48, 59 mg, 0.17 mmol) y DIPEA (38 µL, 0.22 mmol) en tejrc-butanol (1 mL) se calentó a 80 °C hasta que se completó la reacción. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 99:1, 96:4) para proporcionar el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4 - ( 5- { 2 - [ (3i?, 4S) -3 - terc-butoxicarbonilamino-4 - ( 2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-l-il] pirimidin-5-il} - [1,2,41-oxadiazol-3 - ilmetoxi ) piperidin-l-carboxílico : RT = 4.47 min; m/z (ES+) = 644.5 [M + H] + . A una solución del producto en DCM (5 mL) , enfriada a 0°C, se agregó TFA (1 mL) , gota a gota, y la reacción se agitó temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla se diluyó con DCM (75 mL) , se lavó con una solución saturada de Na2C03 (25 mL) , luego se secó (MgS0 ) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 96:4) proporcionó el compuesto del título como la amina libre. Una solución de TsOH (1 eq.) en MeOH (2 mL) se agregó al producto y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.79 min; m/z (ES+) = 544.2 [M + H]+.

Ejemplo 4: Sal de ácido p-toluensulfónico de éter isopropílico del ácido 4 - (5 - {2 - [ ( 3R, S) - 3 -amino-4 - (2 , 4 -difluorofenil) -pirrolidin-l-il] pirimidin-5-il}- [1,2,4] oxadiazol-3 -ilmetoxi) iperidin-l-carboxílico El compuesto del título se preparó a partir del éster isopropílico del ácido 4 - [5 - ( 6 -cloropirimidin- 5 - il) -[1,2,4] oxadiazol -3 -ilmetoxi] piperidin- 1-carboxí lico (Preparación 6) y el éster terc-butí lico del ácido [(3J?,4S)-4- (2 , 4-difluorofenil) pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 37) empleando el procedimiento resumido en la Ejemplo 3 : RT = 2.75 min; m/z (ES+) = 544.3 [M + H] + .

Ejemplo 5: Sal de ácido p-toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 4- (3-{6- [ (3.R, 4S) -3-amino-4- (2-fluorofenil) pirrolidin-l-il] iridin-3 -il} - [1,2,4] oxadiazol- 5 -ilmetoxi) iperidin- 1-carboxílico El éster isopropílico del ácido 4 - [3 - (6-cloropiridin- 3-il) - [1,2,4] oxadiazol- 5- ilmetoxi] iperidin- 1-carboxílico (Preparación 7) se hizo reaccionar con clorhidrato del éster 9H-fluoren-9-ilmetílico del ácido [ ( trans) -4- (2-fluorofenil) -pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 30) empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 1 para proporcionar el compuesto del título como la amina libre (HPLC quiral: MTBE : MeOH : BA 80:20:0.1, 12 ml/min, 285 nm, RT = 32.8 min) . Una solución de TsOH (1 eq.) en MeOH (5 mL) se agregó al producto y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.80 min; m/z (ES+) = 525.2 [M + H] + .

Ejemplo 6: Sal de ácido p-toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 4- (3-{6- [ (3S, 4.R) -3-amino-4- (2-fluorofenil) pirrolidin-l-il] piridin-3 -il} - [1,2,4] oxadiazol-5-ilmetoxi) piperidin-l-carboxílico El compuesto del título se preparó a partir del éster isopropílico del ácido 4- [3- (6-cloropiridin-3-il) - [1,2,4] oxadiazol -5 -ilmetoxi] piperidin-l-carboxílico (Preparación 7) y clorhidrato del éster 9H-fluoren-9-ilmetílico del ácido [( trans) -4 -( 2-fluorofenil ) pirrolidin-3 -il]carbámico (Preparación 30), empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 5. HPLC Quiral: MTBE : MeOH : BA 80:20:0.1, 12 mL/min, 285 nm, RT = 29.2 min. LCMS : RT = 2.80 min, m/z (ES+) = 525.2 [M + H] + .

Ejemplo 7: Sal de ácido p-toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 4 - (3 - { 6 - [ (3S, 4R) -3 -amino-4 - (2 -fluorofenil) pirrolidin-l-il] piridin-3 -il} - [1,2,4] oxadiazol-5-ilmetoxi) piperidin-l-carboxílico El compuesto del título se preparó a partir del éster isopropílico del ácido 4- { (R-l- [3- (6-cloropiridin-3-il) - [1,2,4] oxadiazol-5-il] etoxi } piperidin- 1-carboxíl ico (Preparación 8) y clorhidrato del éster 9H-fluoren-9-ilmetílico del ácido [( trans) -4 - (2 -fluorofenil ) pirrolidin-3 -il]carbámico (Preparación 30), empleando el procedimiento resumido en la Ejemplo 5. HPLC Quiral: MTBE : MeOH : BA 80:20:0.1, 12 mL/min, 285 nm RT = 20.4 min LC S : RT = 2.89 min; m/z (ES+) = 539.5 [ + H] + .

Ejemplo 8: Sal de ácido p-toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 4- (3-{6- [ (32¾, 4S) -3-amino-4- (2, 5-difluorofenil) pirrolidin-l-il] piridin-3 -il} - [1,2,4] oxadiazol-5 - ilmetoxi) piperidin- 1-carboxílico El éster isopropílico del ácido 4- [3- (6-cloropiridin-3 - il ) - [1,2,4] oxadiazol-5 -ilmetoxi] piperidin- 1-carboxílico (Preparación 7) se hizo reaccionar con el éster terc-butílico del ácido [ (2R, 4S) -4- (2, 5-difluorofenil) pirrolidin-3 -il] carbámico (Preparación 48) empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 3. Después de la reacción con TFA, la mezcla cruda se pasó descendentemente a un cartucho SCX eluyendo con MeOH luego NH4OH en MeOH y la fracción básica se recolectó para proporcionar el compuesto del título como la base libre. A una solución del producto en MeOH se agregó TsOH (1 eq.) en eOH, luego el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.82 min, m/z (ES+) = 5.43.2 [M + H]+.

Ejemplo 9: Sal de ácido p- toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 4- [ (J?) -1- (3-{6- [ (3J¾, 4S) -3-amino-4- (2 , 5 -difluorofenil) pirrolidin- 1- il] piridin-3 -il} - [1,2,4] oxadiazol-5-il) etoxi] piperidin-l-carboxílico Una combinación del éster isopropílico del ácido 4- { (R-l- [3- (6-cloropiridin-3-il) - [1,2,4] oxadiazol-5-il] etoxi } -piperidin-l-carboxílico (Preparación 8, 79 mg, 0.20 mmol) , éster terc-butílíco del ácido [ (3R, 4S) -4 - (2 , 5-difluorofenil ) pirrolidin-3 -il] carbámico (Preparación 48, 60 mg, 0.20 mmol) y DIPEA (38 µ?^ 0.22 mmol) en terc-butanol (1 mL) se calentó a 80 °C durante 72 horas y luego a 85°C hasta que no hubo reacción adicional. La mezcla se concentró in vacuo y se purificó por medio de la cromatografía en columna (DCM : MeOH , 99:1, 97:3) para proporcionar el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4 - [ (J?) -1- (3- { 6- [ (3R, 4S) -3- terc-butoxicarbonilamino-4- (2 , 5-difluorofenil) -pirrolidin-l-il] piridin-3 - il } - [1,2,4] oxadiazol- 5-il) etoxi] piperidin-l-carboxílico : RT = 4.39 min; m/z (ES+) = 657.4 [M + H] + . A una solución del producto en DCM (5 mL) , enfriada a 0°C, se agregó TFA (1 mL) , gota a gota, y .la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla se diluyó con DCM, se lavó con una solución saturada de Na2C03( se secó (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 97:3) proporcionó el compuesto del título como la amina libre. Una solución de TsOH (1 eq.) en MeOH (2 mL) se agregó al producto, luego el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.93 min; m/z (ES+) = 557.3 [ + H]+.

Ejemplo 10: Ester isopropílico del ácido 4 - [ (R) - 1- ( 5 - {2 - [ (3J?,4S) -3-amino-4- (2 , 5-difluorofenil) pirrolidin- 1-il] -pirimidin-5-il} - [1,2,4] oxadiazol -3 -il) etoxi] iperidin-l-carboxílico El éster isopropílico del ácido 4-{ (J?) -1- [5- (2-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol -3 -il] etoxi }piperidin- 1-carboxílico (Preparación 13) se hizo reaccionar con el éster terc-butílico del ácido [ ( 3R, 4S) -4 - ( 2 , 5 - difluorofenil) pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 48) empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 3. Después de la reacción con TFA, la mezcla cruda se pasó descendentemente en un cartucho SCX, eluyendo con MeOH luego NH40H en MeOH y la fracción básica se recolectó para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.80 min; m/z (ES+) = 558.2 [M + H] + .

Ejemplo 11: Ester isopropílico del ácido 4- [ (R) -1- (5-{5- [ (3J?, 4S) -3 -amino-4 - (2 , 5 -difluorofenil) pirrolidin-1- il] pirazin-2-il}- [1,2,4] oxadiazol-3-il) etoxi] piperidin-l-carboxílico una solución del éster isopropílico del ácido { (£) -1- [5- (5-cloropirazin-2-il) - [1,2,4] oxadiazol-3-il] etoxi } -piperidin-l-carboxílico (Preparación 14, 127 mg, 0.32 mmol) en DMSO (0.5 mL) se agregó el éster terc-butílico del ácido [ (3i?,4S) -4 - (2, 5-difluorofenil) pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 48, 98 mg, 0.33 mmol) y DBU (48 µ?,, 0.32 mmol) y la reacción se calentó a 70 °C durante 1 hora. La mezcla se dividió entre DCM (100 mL) y agua (50 mL) y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con DCM (50 mL) , luego las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera y se secaron (MgS04) . La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 98:2) proporcionó el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4- [ (R) -1- (5-{5 - [ (3i?,4S) - 3- terc-butoxicarbonilamino-4 - (2,5-difluorofenil) pirrolidin-l-il] pirazin-2-il}- [1,2,4] oxadiazol-3-il) etoxi] piperidin-l-carboxílico : RT = 4.43 min; m/z (ES+) = 658.3 [M + H] + . A una solución del producto en DCM (5 mL) , enfriada a 0°C, se agregó TFA (1 mL) , gota a gota, y la reacción se agitó a temperatura ambiente hasta que se completó. La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCMrMeOH, 95:5) proporcionaron el compuesto del título: RT = 2.74 min; m/z (ES+) = 558.2 [M + H]+.

Ejemplo 12: Clorhidrato de éster isopropílico del ácido 4-{5- [ {3R, 4J¾) -3-amino-4- (2 , 5-difluorofenil) -3 , 4 , 5 , 6- tetrahidro-2H- [1,2'] bipiridinil-5 ' il] - [1,2,4] oxadiazol-3 -ilmetoxi} -piperidin-l-carboxílico Una combinación del éster isopropílico del ácido 4- [5- (6-cloropiridin-3-il) - [1 , 2 , 4 ] oxadiazol - 3 - ilmetoxi ] -piperidin-l-carboxílico (Preparación 5, 38 mg, 0.10 mmol) , éster terc-butílico del ácido [ (3R, 4i?) -4- (2 , 5-difluorofenil ) piperidin-3 - il] carbámico (Preparación 19, 31 mg, 0.10 mmol) y DIPEA (18 µL, 0.11 mmol) en terc-butanol (0.30 mL) se calentó a 80°C hasta que se completó la reacción. La mezcla se diluyó con EtOAc (50 mL) , se lavó con salmuera (50 mL) , se secó (MgS04) y se concentró in vacuo para proporcionar el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4- {5- [ (3R, 4J?) -3- terc-butilcarbonilamino-4- (2, 5- difluorofenil) -3 , 4 , 5 , 6-tetrahidro-2H- [1,2'] bipiridinil - 5 ' il] - [1 , 2 , 4 ] oxadiazol -3 - ilmetoxi }piperidin- 1-carboxílico : RT 4.53 min; m/z (ES+) = 657.2 [M + H] + . A una solución del producto en DCM (3 mL) se agregó TFA (3 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla cruda se pasó descendentemente en un cartucho SCX, eluyendo con MeOH luego NH4OH en MeOH y la fracción básica se recolectó y se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título como la amina libre. El residuo se disolvió en una solución de HC1 en dioxano (4M) , luego el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.85 min; m/z (ES+) = 557.3 [M + H] + .

Ejemplo 13: Diclorhidrato de éster isopropílico del ácido 4- {3- [ (3J?, 4J?) -3 -amino-4- (2 , 5-difluorofenil) -3,4,5, 6 -tetrahidro- 2H- [1,2'] bipiridinil- 5' -il] - [1, 2,4] oxadiazol- 5- ilmetoxi} - piperidin- 1-carboxílico El compuesto del título se preparó a partir del éster isopropílico del ácido 4- [3- (6-cloropiridin-3-il) - [1,2,4] oxadiazol-5- ilmetoxi] piperidin- 1-carboxílico (Preparación 7) y éster terc-butílico del ácido [ {3R, 4R) -4- (2 , 5 -difluorofenil) piperidin-3 - il] carbámico (Preparación 19) empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 12. Después de la purificación por medio del cartucho SCX, el residuo se purificó adicionalmente por medio de la HPLC preparativa. La formación de sal empleando el método resumido en el Ejemplo 12 proporcionó el compuesto del título como la sal de diclorhidrato: RT = 2.73 min; m/z (ES+) = 557.2 [M + H] + .

Ejemplo 14: Sal de ácido p- toluensulfónico del éster isopropílico del ácido 4 - (3 - {2 - [ (3R, 4S) -3 -amino- 4 - (2 , 4 -difluorofenil) irrolidi-l-il] irimidin-5-il} - [1,2,4] -oxadiazol - 5 -ilmetoxi ) piperidin- 1 -carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 4- [3- (2-cloropirimidin-5-il) - [1 , 2 , 4] oxadiazol-5 -ilmetoxi] -piperidin-1-carboxílico (Preparación 25, 40 mg, 0.10 mmol) y el éster fcerc-butílico del ácido [ (3R, 4.S) -4- (2 , 4-difluorofenil) pirrolidin-3 -il] carbámico (Preparación 37, 38 mg, 0.13 mmol) en DMSO (0.4 mL) se agregó DBU (16 µL, 0.10 mmol) y la mezcla se burbujeó con argón durante 1 minuto antes de ser calentada a 70°C durante 16 horas. La mezcla de reacción se dividió entre EtOAc (50 mL) y agua (20 mL) y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (20 mL) luego las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución saturada de NaHC03 (50 mL) , salmuera (50 mL) , luego se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 100:0, 98:2) proporcionó el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4- (3-{2- [ (3i?,4S) -3- erc-butoxicarbonilamino-4- (2,4-difluorofenil) irrolidin-l-il] pirimidin-5-il} - [1,2,4] oxadiazol- 5- ilmetoxi)piperidin-l-carboxílico: RT = 4.43 min; m/z (ES+) = 644.3 [ + H]+. A una solución del producto en DCM (5 mL) , bajo argón, enfriada a 0°C, se agregó TFA (1 mL) y la reacción se agitó a esta temperatura durante 2 horas . Se agregó TFA adicional (0.5 mL) y la agitación continuó hasta que la reacción se completó. La mezcla cruda se pasó descendentemente en un cartucho SCX, eluyendo con MeOH luego NH4OH en MeOH. La fracción básica se recolectó y se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título como la amina libre. A una solución del producto en DCM (2 mL) se agregó una solución de TsOH (1 eq.) en MeOH (2 mL) , luego el solvente se retiró in. vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.86 min; m/z (ES+) = 544.2 [ + H] + .

Los siguientes ejemplos se prepararon al hacer reaccionar el producto intermedio apropiado de 2-cloropirimidina con el bloque de construcción paropiado de amina empleando el procedimiento utilizado en el Ejemplo 14 : Ejemplo 19: Sal de ácido p- toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 4- (3-{2- [ (3J?, 4S) -3-amino-4- (2-fluorofenil) pirrolidin-l-il] pirimidin-5-il}- [1,2,4] oxadiazol-5 -ilmetoxi) piperidin-l-carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 4- [3- (2-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol- 5 -ilmetoxi] -piperidin-l-carboxílico (Preparación 25, 19 mg, 0.05 mmol) y clorhidrato del éster 9H- fluoren- 9 - ilmetílico del ácido [ (3i?, 4S) - 4- (2-fluorofenil) pirrolidin- 3 - il] carbámico (Preparación 32, 3.1 mg, 0.07 mmol) en DMSO (0.4 mi) , bajo argón, se agregó DBU (15 µ??, 0.10 mmol) y la reacción se calentó a 80 °C durante 65 horas. La mezcla se diluyó con agua (10 mL) y la solución resultante se extrajo con EtOAc (3 x 30 mL) . Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (30 mL) , una solución saturada de NaHC03 (30 mL) y salmuera (30 mL) , luego se secaron (MgS04) . La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM :MeOH, 100:0, 98:2, 97:3, 95:5, 92:8) proporcionaron el compuesto del título como la amina libre. A una solución del producto en DCM (4 mL) se agregó una solución de TsOH (1 eq.) en MeOH (2 mL) , luego el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.74 min; m/z (ES+) = 526.2 [M + H] + .

Ejemplo 20: Sal de ácido p- toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 4 - [ {R) - 1- (3 - {2 - [ {3R, 4S) -3 -amino- 4 - (2 -fluorofenil) pirrolidin-1-il] pirimidin-5 -il}- [1,2,4] oxadiazol-5-il) etoxi] piperidin-l-carboxílico El compuesto del título se preparó al hacer reaccionar el éster isopropílico del ácido 4- { (R) -1- [3- (2-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol -5-il] etoxi }piperidin-l-carboxílico (Preparación 28) con el clorhidrato del éster 9H-fluoren-9-ilmetílico del ácido [ (3R, 4S) -4- (2-fluorofenil) -pirrolidin- 3 - il] carbámico (Preparación 32) empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 19: RT = 2.84 min; m/z (ES+) = 540.3 [ + H] + .

Ejemplo 21: Ester isopropílico del ácido 4- [(B) -1- (5-[ (3B,4S) -3-amino-4- (2 , 5-difluorofenil) pirrolidin- 1-il]piridazin-3-il}- [1,2,4] oxadiazol-3 -il) etoxi] iperidin-1 rarboxílico Una combinación del éster isopropílico del ácido 4- ((B)-l-{5-[6- (benzotriazol-l-iloxi) piridazin- 3- il] - [1,2,4] -oxadiazol - 3 - il } etoxi) iperidin- 1-carboxílico (Preparación 38, 12 mg, 0.02 mmol) y el éster terc-butílico del ácido [ (3B, 4S) - 4- (2, 5-difluorofenil) pirrolidin- 3 -il] carbámico (Preparación 48, 8 mg, 0.03 mmol) en DMSO (0.5 mL) se calentó a 70 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (2 x 50 mi) . Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4-[(B)-l-(5- {6- [ (3B,4S) -3- erc-butoxicarbonilamino-4 - (2, 5-difluorofenil) -pirrolidin- 1- il] piridazin-3-il}- [1,2,4] oxadiazol-3 -il) etoxi] piperidin-l-carboxílico : RT = 4.23 min; m/z (ES+) = 658.3 [M + H] + . A una solución del producto en DCM (5 mL) , enfriada a 0°C, se agregó TFA (0.5 mL) , gota a gota, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla cruda se pasó descendentemente en un cartucho SCX, eluyendo con MeOH luego NH4OH en MeOH y la fracción básica se recolectó y se concentró in vacuo. La purificación adicional por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 95:5) proporcionó el compuesto del título: RT = 2.72 min; m/z (ES+) = 558.2 [M + H] .

Ejemplo 22: Sal de ácido p- toluensulfónico de éster isopropílico del ácido 3- [ (J?) -1- (3-{2- [ (3J?, 4S) -3-amino-4- (2 , 5 -difluorofenil) irrolidin- 1- il] pirimidin- 5 -il} - [1,2,4] oxadiazol-5-il) etoxi] azetidin- 1-carboxí lico A una solución del éster isopropílico del ácido 3- [ (i?) -1- (3 - {2 - [ (3i?, 4S) - 3- terc-butoxicarbonilamino-4- (2,5-difluorofenil ) pirrolidin- 1-il] pirimidin- 5 -il} - [1,2,4] -oxadiazol-5-il) etoxi] azetidin-l-carboxílico (Preparación 51, 109 mg, 0.17 mmol) en DCM (5 mL) , enfriada a 0°C, se agregó TFA (1.0 mL) , gota a gota, y la reacción se agitó a esta temperatura durante 2 horas . Una porción adicional de TFA (0.5 mL) se agregó y la agitación continuó durante 30 minutos. La mezcla de reacción cruda se pasó descendentemente en un cartucho SCX, eluyendo con MeOH luego NH4OH en MeOH, y la fracción básica se recolectó y se concentró in vacuo. A una solución del producto en DCM (2 mL) se agregó solución de TsOH (1 eq.) en MeOH (2 mL) , luego el solvent retiró in vacuo para proporcionar el compuesto del título = 2.73 min; m/z (ES+) = 530.2 [ + H] + .

Ejemplo 23: Ester isopropílico del ácido 4-[(J2)-l-(3 [ (3J¾, 4S) -3 - amino-4- (2 , 5-difluorofenil) irrolidin-1-il] irazin-2 -il} - [1,2,4] oxadiazol-5-il) etoxi] iperidin-1-carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 4- ( (R) -1-carboxietoxi) piperidin-l-carboxílico (Preparación 9, 72 mg, 0.28 mmol) en THF (20 mL) se agregó EDCI (63 mg, 0.33 mmol), seguido por HOBt (45 mg, 0.30 mmol) , y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos . El éster terc-butílico del ácido { (3R, 4S) -4- (2 , 5-difluorofenil) -1- [5- (N-hidroxicarbamimidoil) pirazin-2 -il] pirrolidin-3 - il}carbámico (Preparación 53, 120 mg, 0.28 mmol). se agregó y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. El solvente de reacción se concentró in vacuo y el residuo resultante se dividió entre EtOAc (100 mL) y agua (50 mL) . La fase orgánica se separó, se secó (MgS04) y se concentró in vacuo. El residuo se tomó en tolueno y se calentó a reflujo durante 16 horas. La remoción del solvente in vacuo y la purificación por medio de la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 97:3) proporcionaron el producto intermedio: RT = 4.39 min; m/z (ES+) = 658.3 [M + H]+. A una solución del producto en DCM (7 mL) , enfriada a 0°C, se agregó TFA (0.7 mL) . El baño de hielo se retiró y 1.a reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La purificación por medio de la HPLC preparativa seguida por la cromatografía en columna (DCM:MeOH, 95:5) proporcionaron el compuesto del título: RT = 2.79 min; m/z (ES+) = 558.2 [M + H]+.

Ejemplo 24: Ester isopropílico del ácido 4- [ (J?) -1- (5-{2- [ (3R, 4S) -3 -amino-4- (2,4, 5- trifluorofenil) pirrolidin- 1 -il] irimidin-5 - il} - [1,2,4] oxadiazol-3 - il) etoxi] piperidin- 1-carboxílico Una combinación del éster isopropílico del ácido 4- { (R) -1- [5- (2-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-3 -il] -etoxi}piperidin-l-carboxílico (Preparación 13, 100 mg, 0.25 mmol) y el éster terc-butílico del ácido [ {3R, 4S) -4- (2 , 4 , 5-trifluorofenil) pirrolidin-3 -il] carbámico (Preparación 56, 80 mg, 0.25 mmol) en DMSO (1.0 mL) se trató con DBU (38 µL, 0.25 mmol) y la reacción se calentó a 70°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (70 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 mL) . Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04) y el solvente se retiró in vacuo para proporcionar el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4- [ (R) -1- (5- {2-[ {3R, S) -3 - terc-butoxicarbonilamino-4 - (2,4, 5 - trifluorofenil ) -pirrolidin-l-il] irimidin-5-il } - [1 , 2 , ] oxadiazol-3 -il) etoxi] -piperidin-l-carboxílico: RT = 4.69 min; m/z (ES+) = 676.3 [M + H]+. A una solución del producto en DCM (7 mL) , enfriada a 0°C, se agregó TFA (0.7 mL) , gota a gota, y la reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla cruda se pasó descendentemente en un cartucho SCX, eluyendo con MeOH luego NH40H en MeOH, y la fracción básica se recolectó y se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.88 min; m/z (ES+) = 576.2 [M + H]+.

Ejemplo 25: Ester isopropílico del ácido (J?) -3- [ (?) -1- (5-{2- [ (3J¾, 4S) -3 -amino-4- (2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-l-il] pirimidin-5-il} - [1,2,4] oxadiazol-3 -il) etoxi] pirrolidin- 1-carboxílico Una combinación del éster isopropílico del ácido 3- { (R) -1- [5- (2-cloropirimidin-5- il) - [1,2, 4] oxadiazol-3 -il] etoxi}pirrolidin-l-carboxílico (Preparación 62, 60 mg, 0.16 mmol) , éster terc-but ílico del ácido [ (3J?, 4S) -4 - (2 , 5 -difluorofenil) irrolidin-3-il] carbámico (Preparación 48, 48 mg, 0.16 mmol) y DIPEA (29 µ?, 0.18 mmol) en terc-butanol (1 mL) se calentó a 80 "C hasta que la reacción se completó. El solvente se concentró in vacuo, luego la purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 1:1) seguida por la HPLC quiral ( IH : EtOH : THF 70:20:10, 15 ml/min, 290 nm, RT = 11.4 min) proporcionaron el producto intermedio éster isopropílico del ácido {R) -3 - [ (i?) - 1- ( 5- {2 - [ (3R, AS) -3 - terc-butoxicarbonilamino-4 - (2 , 5-difluorofenil ) pirrolidin- 1-il] irimidin-5 - il } - [1,2,4] oxadiazol-3 -il ) etoxi] pirrolidin- 1-carboxílico: RT = 4.49 min; m/z (ES+) = 644.5 [M + H] + . A una solución del producto en DCM (0.5 mL) , enfriada a 0°C, se agregó TFA (0.05 mL) y la reacción se agitó durante 2 horas. Una porción adicional de TFA (0.05 mL) se agregó y la agitación continuó hasta que la reacción se completó. La mezcla cruda se pasó descendentemente en un cartucho SCX, eluyendo con MeOH luego NH4OH en MeOH (10%) . La fracción básica se recolectó y se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.83 min; m/z (ES+) = 544.0 [M + H] + . Ejemplo 26: Ester isopropílico del ácido (S) -3- [ (R) -1- (5-{2- [ (3J2, 4S) -3-amino-4- (2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-1-il] pirimidin-5-il}- [1,2,4] oxadiazol-3-il) etoxi] irrolidin- 1-carboxílico compuesto del título se preparó reaccionar el éster isopropílico del ácido 3- { (R) -1- [5- (2-cloropirimidin-5-il) - [1,2,4] oxadiazol-3-il] etoxi }pirrolidin-1-carboxílico (Preparación 62) con el éster terc-but ílico del ácido [ {3R, 4S) -4- (2 , 5-dif luorofenil) pirrol idin- 3 -il] carbámico (Preparación 48) empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 25. HPLC quiral : IH : EtOH : HF 70:20:10, 15 mL/min, 290 nm, RT: 9.8 min; LCMS : RT = 2.72 min; m/z (ES+) = 544.2 [M + H] + .

Ejemplo 27: Ester isopropílico del ácido 4- [ (S) -1- (5-{2-[ (3S, 4S) -3-amino-4- (2-oxopiperidin-l-il)pirrolidin-l-il] -pirimidin-5-il}piridin-2-iloxi) etil] iperidin-1- carboxílico A una solución del éster isopropílico del ácido 4 - { 1 - [5- (4,4,5, 5 - tetramet il - [1,3,2] dioxaborolan- 2 -il)piridin-2- i loxi ] e i 1 } iperidin- 1 - carboxí 1 ico (Preparación 66, 350 mg, 0.84 mmol) y el éster terc-butílico del ácido [ ( 3S, 4S) - 1 - ( 5 -bromopirimidin- 2 - il ) -4 - ( 2 -oxopiperidin- l-il)pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 72, 442 mg , 1.00 mmol) en una combinación de DMF (7 mL) y agua (1.8 mL) se agregó [1,1- bis (difenilfosf ino) ferroceno] dicloropaladio (82 mg, 0.10 mmol) y trietilamina (418 mL, 3.00 mmol) . La reacción se calentó en un reactor de microondas a 80°C durante 20 minutos y luego se hizo reaccionar durante 5 minutos adicionales a 80°C, antes de ser filtrada a través de celite, lavando con EtOAc . La mezcla orgánica se lavó con agua, ácido cítrico 1M, una solución saturada de NaHC03, luego salmuera y se secó (Na2S04) , antes de la remoción del solvente in vacuo. La purificación por medio de la cromatografía en columna (IH:EtOAc, 1:1, 0:100) , seguida por la HPLC quiral ( MeCN : THF : MeOH , 67:30:3, 1 ml/min, 285 nm , RT = 7.48 mm) , proporcionaron el producto intermedio éster isopropílico del ácido 4 - [ ( S) - 1 - ( 5 - { 2 - [ ( 3 S , 4 S) - 3 - t erc-butoxicarbonilamino-4 - ( 2 - oxop iperidin- 1 - i 1 ) p i rrol idin -l-il]pirimidin-5-il}piridin-2-iloxi)etil]piperidin-l-carboxílico: RT = 4.18 min, m/z (ES+) = 652.2 [M + H] + . A una solución del producto en DCM (1 mL) se agregó TFA (0.5 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla cruda se pasó directamente de modo descendente en un cartucho SCX, eluyendo con MeOH luego NH OH en MeOH (10%) . La fracción básica se recolectó y se concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título: RT = 2.83 min, m/z (ES+ ) = 552.4 [M + H] + .

Ejemplo 28: Ester isopropílico del ácido 4- [ (S) -1- (5-{2-[ (3JR, 4S) -3 -amino-4- (2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-l-il] -pirimidin-5 -il}piridin-2 -iloxi) etil] piperidin-l-carboxílico compuesto del título se preparó al hacer reaccionar el éster isopropílico del ácido 4- {l- [5- (4 , 4 , 5, 5-tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il)piridin-2-iloxi] etil} -piperidin-1-carboxílico (Preparación 66) con el éster terc-butílico del ácido [ (3R,AS) -1- (5-bromopirimidin-2-il) -4- (2,5-difluorofenil)pirrolidin-3-il] carbámico (Preparación 73) empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 27. Condiciones de la HPLC quiral y RT del producto intermedio MTBE-.THF 85:15, 1 mL/min, 285 nm, RT = 8.6 min LCMS : RT = 3.00 min, m/z (ES+) = 567.3 [M + H]+.

Ejemplo 29: Ester isopropílico del ácido 4 - [ (R) -1- ( 5 - {2 - [ (3R, 4S) -3 -amino-4 - (2 , 5-difluorofenil ) irrolidin- 1-il] -pirimidin-5-il}piridin-2-iloxi) etil]piperidin-l-carboxílico El compuesto del título se preparó al hacer reaccionar el éster isopropílico del ácido 4 - { 1- [5- (4 , 4 , 5 , 5-tetrametil - [1,3,2] dioxaborolan-2 - il ) iridin-2 -iloxi] etil } -piperidin-l-carboxílico (Preparación 66) con el éster terc-butílico del ácido [ {3R, 4S) -1- (5-bromopirimidin-2-il) -4- (2 , 5-difluorofenil) pirrolidin-3 - il] carbámico (Preparación 73) empleando el procedimiento resumido en el Ejemplo 27. Condiciones de la HPLC quiral y RT del producto intermedio MTBE-.THF 85:15, 1 mL/min, 285 nm, RT = 7.2 min. LCMS : RT = 3.10 min, m/z (ES+) = 567.3 [M + H]+.

La actividad biológica de los compuestos de la invención se puede someter a prueba en los siguientes sistemas de ensayo: Ensayo Reportero de Levadura de GPR119 Ensayo Reportero de Levadura Los ensayos reporteros basados en células de levadura han sido descritos previamente en la bibliografía (véase por ejemplo Miret J. J. y colaboradores 2002, J. Biol . Chem., 277:6881-6887; Campbell R.M. y colaboradores 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett . , 9:2413-2418; King K. y colaboradores 1990, Science, 250:121-123) ; WO 99/14344; O 00/12704; y US 6,100,042) . En resumen, las células de levadura han sido diseñadas de tal manera que la levadura endógena G-alfa (GPA1) ha sido suprimida y reemplazada por quimeras de proteína G construidas utilizando múltiples técnicas. Adicionalmente , la levadura endógena GPCR, Ste3 ha sido suprimida para permitir la expresión heteróloga de una GPCR de mamífero preferida. En la levadura, los elementos de la vía de transducción de señalización de feromonas, los cuales están conservados en las células eucarióticas (por ejemplo, la vía de proteína cinasa activada por .mitógenos) , impulsan la expresión de Fusl. Al colocar la ß-galactosidasa (LacZ) bajo el control del promotor Fusl (Fuslp) , se ha desarrollado un sistema por medio del cual la activación de receptores conduce a una lectura enzimática.

Las células de levadura se transformaron por medio de una adaptación del método de acetato de litio descrito por Agatep y colaboradores (Agatep, R. y colaboradores 1998, Transformation of Saccharomyces cerevisiae by the lithium acetate/single-stranded carrier DNA/polyethylene glycol (LiAc/ss-DNA/PEG) protocol . Technical Tips Online, Trends Journals, Elsevier) . En resumen, las células de levadura se desarrollaron durante toda la noche en placas de levadura/triptona (YT) . El ADN de cadena individual portador (10 , 2 µ9 de cada uno de los dos plásmidos reporteros Fuslp-LacZ (uno con un marcador de selección de URA y uno con TRP) , 2 µ9 de GPR119 (receptor de humano o ratón) en un vector de expresión de levadura (2 µ9 de origen de replicación) y un amortiguador de acetato de litio/polietilenglicol/TE se pipetearon en un tubo Eppendorf . El plásmido de expresión de levadura que contiene el control de receptor/sin receptor tiene un marcador de LEU. Las células de levadura se inocularon en esta mezcla y la reacción procede a 30 °C durante 60 minutos. Las células de levadura luego se impactaron con calor a 42 °C durante 15 minutos. Las células luego se lavaron y se esparcieron sobre placas de selección. Las placas de selección son medios de levadura definidos, sintéticos menos LEU, URA y TRP (SD-LUT) . Después de la incubación a 30°C durante 2-3 días, las colonias que se desarrollaron sobre las placas de selección entonces se sometieron a prueba en el ensayo de LacZ.

Con el propósito de realizar ensayos fluorimétricos de enzimas para ß-galactosidasa, las células de levadura que llevaban el receptor GPR119 humano o de ratón se desarrollaron durante toda la noche en medio líquido de SD-LUT hasta una concentración insaturada (es decir, las células aún eran divisorias y no habían alcanzado todavía la fase estacionaria) . Se diluyeron en medio fresco hasta una concentración óptima del ensayo y 90 µL de células de levadura se agregaron a placas de poliestireno negras de 96 pocilios (Costar). Los compuestos, disueltos en DMSO y diluidos en una solución de DMSO al 10% hasta una concentración 10X, se agregaron a las placas y las placas se colocaron a 30 °C durante 4 horas. Después de 4 horas, el substrato para la ß-galactosidasa se agregó a cada pocilio. En estos experimentos, la di (ß-D-galactopiranosida) de Fluoresceína se utilizó (FDG) , un substrato para la enzima que libera fluoresceína, permitiendo una lectura fluorimétrica. 20 S. por pocilio de FDG 500 µ?/Tritón X100 al 2.5% se agregaron (el detergente era necesario para volver permeables las células) . Después de la incubación de las células con el substrato durante 60 minutos, 20 µ??. por pocilio de carbonato de sodio 1M se agregaron para terminar la reacción y mejorar la señal fluorescente. Las placas luego se leyeron en un fluorímetro a 485/535 nm.

Todos los Ejemplos 1 a 29 mostraron actividad en este ensayo dando un incremento en la señal fluorescente de por lo menos ~ 1.5 veces aquel de la señal de fondo (es decir la señal obtenida en presencia de DMSO al 1% sin compuesto) . Se pueden preferir los compuestos de la invención los cuales proporcionan un incremento de por lo menos 5 veces.

Ensayo de cA P Una línea de células estable que expresaba el GPR119 humano recombinante se estableció y esta línea de células se utilizó para investigar el efecto de los compuestos de la invención sobre los niveles intracelulares de AMP cíclico (cAMP) . Las monocapas de células se lavaron con solución salina amortiguada con fosfato y se estimularon a 37 °C durante 30 minutos con varias concentraciones del compuesto en amortiguador de estimulación más DMSO al 1%. Las células luego se lisaron y el contenido de cAMP se determinó utilizando el kit de cAMP Perkin Elmer AlphaScreen (Ensayo Homogéneo de Proximidad Luminiscente Amplificado) . Los amortiguadores y las condiciones de ensayo fueron como se describe en el protocolo del fabricante.

Los compuestos de la invención produjeron un incremento dependiente de la concentración en el nivel intracelular de cAMP y tuvieron generalmente un valor EC50 de <10 µ?. Se pueden preferir los compuestos que muestran un valor EC50 menor que 1 [IM en el ensayo de cAMP.

Método de Ensayo de DPP-IV La actividad de DPP-IV se midió al supervisar la escisión del substrato peptídico fluorogénico, H-Gly-Pro-7-amino-4-metilcumarina (GP-AMC) por lo cual el producto 7-amino-4 -metilcumarina se cuantifica por medio de la fluorescencia en excitación 380 nm y emisión 460 nm. Los ensayos se llevaron a cabo en placas de 96 pocilios (Black OptiPlate-96F) en un volumen total de 100 µL por pocilio que consistía de Tris 50 mM pH 7.6, GP-AMC 100 µ?, DPP-IV humana recombinante 10-25 µ? y un rango de diluciones de inhibidor en una concentración final de 1% de DMSO. Las placas se leyeron en un fluorímetro después de 30 minutos de incubación a 37 °C. Los residuos de DPP-IV humana recombinante Asn29-Pro766 se adquirieron de BioMol .

Todos los Ejemplos 1 a 53 mostraron actividad en este ensayo teniendo un valor IC50 de <20 µ?. Los compuestos de la invención de la fórmula (la) tienen generalmente un valor IC50 de <20 µ?.

Efectos anti-diabéticos de los compuestos de la invención en un modelo in vitro de células beta pancreáticas (HIT-T15) Cultivo de Células Las células HIT-T15 (pasada 60) se obtuvieron de ATCC y se cultivaron en medio RPMI1640 complementado con 10% de suero bovino fetal y selenito de sodio 30 nM. Todos los experimentos se realizaron con células en menos de la pasada 70, de acuerdo con la bibliografía, la cual describe propiedades alteradas de esta línea de células en los números de pasadas superiores a 81 (Zhang HJ, Walseth TF, Robertson RP. Insulin secretion and cAMP metabolism in HIT cells. Reciprocal and serial passage-dependent relationships . Diabetes. 1989 Jan; 38 (1) : 44-8) .

Ensayo de cAMP Las células HIT-T15 se colocaron en medio de cultivo estándar en placas de 96 pocilios a 100,000 células/0.1 mL/pocillo y se cultivaron durante 24 horas y el medio luego se desechó. Las células se incubaron durante 15 minutos a temperatura ambiente con 100 µ? de amortiguador de estimulación (solución salina amortiguada de Hanks, HEPES 5 raM, IBMX 0.5 mM, BSA al 0.1%, pH 7.4). Este se desechó y se reemplazó por diluciones del compuesto superiores al rango de 0.001, 0.003, 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30 µ? en amortiguador de estimulación en presencia de DMSO al 0.5%. Las células se incubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos. Luego 75 uL de amortiguador de lisis (HEPES 5 mM, Tween-20 al 0.3%, BSA al 0.1%, pH 7.4) se agregaron por pocilio y la placa se agitó a 900 rpm durante 20 minutos. El material particulado se retiró por medio de la centrifugación a 3000 rpm durante 5 minutos, luego las muestras se transfirieron por duplicado a placas de 384 pocilios y se procesaron siguiendo las instrucciones del kit de ensayo de cAMP Perkin Elmer AlphaScreenMR . En resumen, se establecieron reacciones de 25 L que contenían 8 µL de muestra, 5 L de mezcla de perlas aceptadoras y 12 µL de mezcla de detección, de tal manera que la concentración de los componentes de reacción finales es la misma que aquella establecida en las instrucciones del kit. Las reacciones se incubaron a temperatura ambiente durante 150 minutos y la placa se leyó utilizando un instrumento Packard FusionMR. Las mediciones para el cAMP se compararon con una curva estándar de cantidades conocidas de cAMP (0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30, 100, 300, 1000 nM) para convertir las lecturas a cantidades absolutas de cAMP . Los datos se analizaron utilizando el software XLfit 3.

Se descubrió que los compuestos representativos de la invención incrementan el cAMP en un valor EC50 menor que 10 µ?. Se pueden preferir los compuestos que muestran un valor EC5o menor que 1 µ? en el ensayo de cAMP.

Ensayo de secreción de insulina Las células HIT-T15 se colocan en un medio de cultivo estándar en placas de 12 pocilios a 106 células/1 ml/pocillo y se cultivan durante 3 días y el medio luego se desecha. Las células se lavan x 2 con amortiguador Krebs-Ringer complementado (KRB) que contiene NaCl 119 mM, KCl 4.74 mM, CaCl2 2.54 mM, MgS04 1.19 mM, KH2P04 1.19 mM, NaHC03 25 mM, HEPES 10 mM a pH 7.4 y albúmina de suero bovino al 0.1%. Las células se incuban con 1 mi de KRB a 37 °C durante 30 minutos el cual luego se desecha. Esto es seguido por una segunda incubación con KRB durante 30 minutos, el cual se recolecta y se utiliza para medir los niveles básales de secreción de insulina para cada pocilio. Las diluciones de compuestos (0, 0.1, 0.3, 1, 3, 10 µ?) luego se agregan a los pocilios por duplicado en 1 mi de KRB, complementado con glucosa 5.6 mM. Después de la incubación durante 30 minutos a 37 °C, las muestras se retiran para la determinación de los niveles de insulina. La medición de la insulina se realizó utilizando un kit de ELISA de insulina Mercodia RatM , siguiendo las instrucciones del fabricante, con una curva estándar de concentraciones conocidas de insulina. Para cada pocilio, los niveles de insulina se corrigen por medio de la sustracción del nivel basal de secreción de la preincubación en ausencia de glucosa. Los datos se analizan utilizando el software XLfit 3.

Los compuestos de la invención incrementan preferiblemente la secreción de insulina en un valor EC50 menor que 10 UM.

Pruebas de Tolerancia a la Glucosa Oral Los efectos de los compuestos de la invención sobre la tolerancia a la glucosa oral (Glc) se pueden evaluar en ratas macho Sprague-Dawley . El alimento se retira 16 horas antes de la administración de Glc y permanece retirado durante todo el estudio. Las ratas tienen acceso libre al agua durante el estudio. Se hace un corte a las colas de los .animales, luego la sangre (1 gota) se retira para la medición de los niveles básales de Glc 60 minutos antes de la administración de la carga de Glc. Luego, las ratas se pesan y se dosifican oralmente con el compuesto de prueba o vehículo (hidroxipropil-/?-ciclodextrina acuosa al 20%) 45 minutos antes de la remoción de una muestra de sangre adicional y el tratamiento con la carga de Glc (2 g kg"1 p.o.) . Las muestras de sangre se toman de la punta cortada de la cola 5, 15, 30, 60, 120 y 180 minutos después de la administración de Glc. Los niveles de glucosa en la sangre se miden justo después de la recolección utilizando un medidor de glucosa comercialmente disponible (OneTouch UltraMR de Lifescan) . Preferiblemente, los compuestos de la invención reducen estadísticamente la excursión de Glc en dosis de <100 mg kg~ .

Los efectos de los compuestos de la invención sobre la tolerancia a la glucosa oral (Glc) se evaluaron en ratones macho C57B1/6 o ratones macho oh/oh. El alimento se retiró 5 horas antes de la administración de Glc y permaneció retirado durante todo el estudio. Los ratones tuvieron acceso libre al agua durante el estudio. Se hizo un corte a las colas de los animales, luego la sangre (20 µL) se retiró para la medición de los niveles básales de Glc 45 minutos antes de la administración de la carga de Glc. Luego, los ratones se pesaron y se dosificaron oralmente con el compuesto de prueba o vehículo (hidroxipropil-/?-ciclodextrina acuosa al 20% o Gelucire 44/14 acuoso al 25%) 30 minutos antes de la remoción de una muestra adicional de sangre (20 µL) y el tratamiento con la carga de Glc (2-5 g kg"1 p.o.) . Las muestras de sangre (20 µL) luego se tomaron 25, 50, 80, 120 y 180 minutos después de la administración de Glc. Las muestras de sangre de 20 µL para la medición de los niveles de Glc se tomaron de la punta cortada de la cola en micropipetas desechables (Dade Diagnostics Inc., Puerto Rico) y la muestra se agregó a 480 µL de reactivo de hemolisis. Las alícuotas de 20 µL por duplicado de la sangre hemolisada, diluida luego se agregaron a 180 µL de reactivo de glucosa Trinders (método colorimétrico , enzimático (Trinder) de Sigma) en una placa de ensayo de 96 pocilios. Después del mezclado, las muestras se dejaron a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de ser leídas contra los estándares de Glc (conjunto estándar combinado de glucosa/nitrógeno úrico de Sigma) . Preferiblemente, los compuestos de la invención redujeron estadísticamente la excursión de Glc en dosis <100 mg kg"1, por ejemplo en una dosis de 30 mg kg"1 el compuesto del Ejemplo 18 mostró una reducción >40% en la excursión Glc.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (20)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: caracterizado porque p es 1 o 2 ,- cuando p es 2, Z es N-C(0)0R4, N-C(0)NR4R5 o N- heteroarilo el cual puede ser sustituido opcionalmente por uno o dos grupos seleccionados de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono sustituido opcionalmente por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono y halógeno; cuando p es .1, Z también puede ser -N-CH2-fenilo en donde el grupo fenilo es sustituido opcionalmente por 1 o 2 grupos seleccionados independientemente de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono y halo; A es un grupo fenilo para-sustituido o un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno; B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de N, 0 y S o un anillo de heteroarilo de 6 miembros para-sustituido que contiene uno o dos átomos de nitrógeno; cuando B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros, X es -0-CR6H- o -CR7H-0-CR6H- ; y cuando B es un anillo de heteroarilo de 6 miembros, X es -0- o CR6H-0- ; Rl es hidrógeno, halo, ciano, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono; q es 1 o 2; , fenilo sustituido opcionalmente por uno o más grupos halo o piridilo sustituido opcionalmente por uno o más grupos halo o metilo; R3 es independientemente halo o metilo; n es 0 o 1 ; m es 0 , 1 o 2 , R4 es alquilo de 2 a 6 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono en donde el grupo cicloalquilo es sustituido opcionalmente por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ; R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ; y R6 y R7 son independientemente hidrógeno o alquilo de 1 a 2 átomos de carbono.

2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque tiene la estereoquímica definida en la .fórmula (la) : (la)

3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque p es 2.

4. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque Z es N-C(0)OR4.

5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque R4 es alquilo de 2 a 6 átomos de carbono .

6. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque Z es N-heteroarilo el cual puede ser sustituido opcionalmente por uno o dos grupos seleccionados de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 6 átomos de carbono sustituido opcionalmente por alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono y halógeno.

7. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque Z es oxadiazol sustituido opcionalmente o pirimidina.

8. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque A es fenilo, piridilo o pirimidinilo .

9. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque Rl es hidrógeno.

10. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque B es oxadiazol, tiazol o piridina.

11. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores o una sal farmacéu icamente aceptable del mismo, caracterizado porque cuando B es un anillo de heteroarilo de 5 miembros, X es -0-CR6H-; y cuando B es un anillo de heteroarilo de 6 miembros, X es CR6H-0- .

12. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque R2 es fenilo sustituido por uno o más grupos halo.

13. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 12 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque R2 es fenilo sustituido por uno o más grupos fluoro.

14. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque R6 y R7 son independientemente hidrógeno o metilo.

15. Un compuesto, caracterizado porque se define de conformidad con cualquiera de los ejemplos 1 a 29 como la base libre o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

16. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y un portador farmacéuticamente aceptable .

17. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición en la cual el GPR119 desempeña un papel principal, administrar a un sujeto necesitado del mismo.

18. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición en la cual el GPR119 y la DPP-IV desempeñan un papel principal, a un sujeto necesitado del mismo.

19. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de la diabetes tipo II, a un sujeto necesitado del mismo.

20. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de la obesidad, síndrome metabólico (síndrome X) , tolerancia deteriorada a la glucosa, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, bajos niveles de HDL o hipertensión, a un paciente necesitado del mismo.