MX2011006429A - Proceso para la preparacion de una forma de polvo de peptido. - Google Patents

Abstract

La invención comprende un proceso para la producción de una forma de polvo homogéneo, suspendido libremente de un análogo de péptido GLP-1. El proceso está caracterizado porque una solución del análogo de péptido en un solvente orgánico, acuoso que se obtiene de preferencia directamente del proceso de purificación cromatográfica, se sujeta a un proceso de secado por pulverización y se recupera en la forma de un polvo homogéneo, suspendido libremente.

Description

PROCESO PARA LA PREPARACION DE UNA FORMA DE POLVO DE PEPTIDO Descripción de la Invención La invención se refiere a la preparación de una forma de polvo de péptido, particularmente a una forma de polvo homogéneo, suspendido libremente de un fármaco del péptido GLP-1.

Los fármacos de péptido adecuados son análogos del péptido similar a glucagón-1 humano (GLP-1) , particularmente el análogo de GLP-1 con la secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEC ID No. 1: His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys- Glu-Phe-Ile-Ala^-Leu-Val-Lys-Aib-Arg-NH2, en donde 26 de estos aminoácidos están en la configuración natural L mientras cuatro no son quirales. Aib significa ácido a-aminoisobutírico . Este péptido también es llamado (Aib8,35) GLP-1 (7-36) NH2 y su uso farmacéutico y preparación por medio de la síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS, por sus siglas en inglés) se describen en la Publicación del PCT WO 2000/34331.

La síntesis de análogos de GLP-1 también puede obedecer un planteamiento híbrido que incluye tanto la síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS) como los acoplamientos de fragmentos en solución. Por ejemplo, la Publicación del PCT WO 2007/147816 describe la preparación de REF : 220214 (Aib8,35) GLP-1 (7-36)NH2 al preparar tres fragmentos y acoplar estos fragmentos en solución.

Los pasos de síntesis individuales son a menudo sumamente selectivos, sin embargo, al final de una síntesis química de múltiples pasos el producto no es suficientemente puro típicamente para utilizarse como un fármaco. Por lo tanto, el producto crudo se puede sujetar a la cromatografía líquida de alto desempeño de fase inversa (RP-HPLC, por sus siglas en inglés) para purificar adicionalmente el péptido y para lograr una pureza en el intervalo de 96 a 99% (área) .

Después de la etapa de RP-HPLC, el producto se obtiene normalmente en la forma de una solución con una concentración típicamente de 1 a 15% (p/p) del péptido.

Con el propósito de obtener un producto final seco, el cual es adecuado para la formulación de fármacos, la solución se puede sujetar a técnicas ya sea de liofilización o precipitación.

Sin embargo, los procedimientos conocidos en la técnica carecen del suministro de un producto en una forma la cual no está suspendida libremente. Adicionalmente, las técnicas de precipitación y liofilización requieren mucho tiempo y es necesario que se apliquen de manera discontinua.

Por lo tanto, el objetivo de la presente invención es desarrollar un proceso el cual es capaz de suministrar un fármaco del péptido GLP-1 en una forma de polvo homogéneo, suspendido libremente y el cual es aplicable a escala técnica .

Se descubrió que este objetivo se podría alcanzar con el proceso de la presente invención como se resume a continuación .

El proceso para la producción de una forma de. polvo homogéneo, suspendido libremente de un análogo del péptido GLP-1 se caracteriza porque una solución del análogo de péptido en un solvente orgánico, acuoso se sujeta a un proceso de secado por pulverización y se recupera en la forma de un polvo homogéneo, suspendido libremente. La solución del péptido se obtiene directamente de la etapa de RP-HPLC o de una RP-LPLC (cromatografía líquida de baja presión) o RP-MPLC (cromatografía líquida de presión intermedia) .

El término "suspendido libremente" describe la propiedad de los análogos del péptido GLP-1 secados por pulverización para mostrar propiedades de flujo favorables, es decir el péptido GLP-1 está una forma de polvo homogéneo sin tendencia a formar agregados o grumos.

El término "análogo del péptido GLP-1" incluye los análogos del péptido similar al glucagón-1 (GLP-1) humano, natural GLP-1 (7-37) y GLP-1 (7-36)NH2 y análogos sintéticos del péptido GLP-1 (análogos del GLP-1) .

Los análogos del GLP-1 preferidos son el análogo del GLP-1 humano con la secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEC ID No. 1 : His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys- Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg-NH2, es decir (Aib8,35) GLP- 1 ( 7-36 ) NH2 y análogos adicionales como se describe en la Publicación del PCT WO 2000/34331. El (Aib8,35) GLP-1 (7-36 ) NH2 es el más preferido. La forma corta designa un análogo derivado formalmente del GLP-1 (1-37) humano, natural por medio de la supresión de los residuos de aminoácidos Nos. 1 a 6, amidación en la terminación C y sustitución de los residuos de aminoácidos de origen natural en la posición 8 (Ala) y 35 (Gly) por el ácido oc-aminoisobutírico (Aib) .

Los análogos adecuados del péptido GLP-1 se pueden seleccionar adicionalmente de GLP-1 (7-37), GLP-1 (7-36)NH2( (Gly8) GLP-1 (7-37), (Gly8) GLP-1 (7-36) , (Ser34)GLP-l (7-37), (Val8)GLP-l (7-37), (Val8,Glu22) GLP-1 (7-37), (N-E- (?-Glu (N-Ot-hexadecanoil) ) ) -Lys26Arg34-GLP-1 (7-37) (Liraglutida) y D-Ala8Lys37- (2- (2- (2 -maleimidopropionamido (etoxi) etoxi) acetamida) ) GLP-1 (7-37) (CJC-1131) .

Los análogos aún adicionales del péptido GLP-1 pueden ser los análogos de exendina seleccionados de exendina-3, exendina-4 (exenatida) que tienen la secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEC ID No. 2: His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gbi-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg- Leu-Phe-lle-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-GIy-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2, ácido de exendina-4, exendina-4 (1-30), amida de exendina-4 (1-30) , exendina-4 (1-28) , amida de exendina-4 (1-28) , amida de 14Leu,25Phe exendina-4 y amida de 14Leu,25Phe exendina-4 (1-28) así como también AVE- 0010, un análogo de exendina que tiene la secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEC ID No. 3 : His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu- Ala-Val-Arg- Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys- Lys-Lys-Lys-Lys-NH2.

Las figuras tienen el significado resumido a continuación : La Figura 1: muestra un diagrama de flujo del proceso de secado por pulverización.

La Figura 2a: muestra una microscopía electrónica de barrido de un (Aib8,35) GLP-1 (7-36)NH2 precipitado.

La Figura 2b: muestra una microscopía electrónica de barrido de un (Aib8,35) GLP-1 (7-36) NH2 secado por pulverización .

En una modalidad preferida de la invención, el proceso se caracteriza porque la solución del análogo de péptido en un solvente orgánico, acuoso se obtiene directamente a partir de la HPLC preparativa y se alimenta en el proceso de secado por pulverización.

El proceso de secado por pulverización comprende los pasos que consisten en a) alimentar una solución del péptido en un solvente orgánico, acuoso de un tanque de alimentación (1) a través de un filtro (2) ; b) atomizar la solución filtrada en una cámara de pulverización (3) con la ayuda de un atomizador (4) ; c) combinar la mezcla atomizada con un gas de secado caliente alimentado a través de la entrada (5) , causando en consecuencia que el solvente se evapore y el polvo de péptido se precipite; y d) alimentar la mezcla de gas-polvo en un ciclón (6) donde el péptido se puede recolectar como un polvo homogéneo, suspendido libremente.

Paso a) El paso a) requiere la alimentación de una solución del péptido en un solvente orgánico, acuoso desde un tanque de alimentación (1) a través de un filtro (2) .

Como se resume anteriormente, la solución del análogo de péptido en un solvente orgánico, acuoso se toma de preferencia directamente de la HPLC preparativa (simbolizada como "A" en la Figura 1) . En caso de que las mezclas de agua con acetonitrilo y THF se utilicen como solvente en el paso de purificación, una concentración subsecuente de la solución de péptido se tiene que llevar a cabo por medio de la HPLC o, alternativamente, por medio de la LPLC (cromatografía líquida de baja presión) o MPLC (cromatografía líquida de presión intermedia) utilizando una mezcla de agua con un alcohol alifático como solvente.

El solvente orgánico, acuoso es usualmente una mezcla de 20% a 80% en p/p de agua con 20% a 80% en p/p de un alcohol alifático, preferiblemente una mezcla de 40% a 70% en p/p de agua con 30% a 60% en p/p de alcohol alifático.

El alcohol alifático se puede seleccionar de metanol, etanol, n-propanol, 2-propanol, n-butanol, s-butanol o t-butanol, preferiblemente metanol o etanol.

El contenido de péptido en el solvente orgánico, acuoso por regla general varía entre 0.5% a 15% en p/p, preferiblemente entre 1.0% a 10% en p/p, más preferiblemente entre 0.5% a 8% en p/p.

La solución del péptido contiene apropiadamente un amortiguador común para la estabilización del pH. Un amortiguador adecuado se selecciona preferiblemente de acetato de amonio, el cual se puede dosificar en el intervalo de 0.05% a 0.25% en p/p, o ácido acético, el cual se puede dosificar en el intervalo de 0.05% a 1% en p/p. Más pre eriblemente, el amortiguador es ácido acético en una cantidad de 0.05 a 1% en p/p.

La solución del péptido se alimenta desde un tanque de alimentación (1) a través de un filtro (2) usualmente con una velocidad de alimentación de 1 kg/h a 20 kg/h, preferiblemente de 5 kg/h a 15 kg/h en la cámara de pulverización (3) . Dependiendo del tamaño del equipo de secado por pulverización utilizado, la velocidad de alimentación se puede incrementar consecuentemente por un factor de escala de 5 a 10.

La temperatura de la solución del péptido se puede seleccionar entre 5°C a 35°C.

El tamaño del filtro (2) por regla general está en el intervalo de 0.2 µp? a 4.0 µp?.

Paso b) El paso b) requiere la atomización de la solución filtrada en una cámara de pulverización (3) con la ayuda de un atomizador (4) .

Por regla general, se utiliza un atomizador de ruedas giratorias. La velocidad del atomizador se selecciona en un intervalo de 10,000 rpm a 30,000 rpm.

Paso c) El paso c) requiere la combinación de la mezcla atomizada con el gas de secado caliente alimentado a través de la entrada (5) , causando en consecuencia que el solvente se evapore y el polvo de péptido se precipite.

Como el "gas de secado caliente" se puede utilizar nitrógeno, dióxido de carbono o aire. El "gas de secado caliente" preferido es nitrógeno el cual se puede aplicar a una temperatura de 100°C a 200 °C, preferiblemente de 110 °C a 140°C.

El gas de secado caliente es alimentado dentro de la cámara de pulverización (3) con una velocidad de alimentación de 300 kg/h a 500 kg/h. Dependiendo del tamaño del equipo de secado por pulverización utilizado, la velocidad de alimentación se puede incrementar consecuentemente por un factor de escala de 5 a 10.

Paso d) El paso d) requiere la alimentación de la mezcla de gas-polvo dentro de un ciclón (6) donde el péptido se puede recolectar como un polvo homogéneo, suspendido libremente.

El gas alimentado dentro del ciclón (6) por regla general tiene una temperatura de 50°C a 150°C, preferiblemente de 50 °C a 110 °C y más preferiblemente de 60 °C a 80°C.

El péptido se puede recolectar con un equipo bien conocido en la técnica tal como en un alojamiento de bolsa (B) .

Recuperación del gas En una modalidad preferida de la invención, el gas se puede recuperar de acuerdo con los siguientes pasos de recuperación del gas: e) purificar el gas que sale del ciclón (6) con un filtro (7) ; f) condensar el solvente orgánico, acuoso en un condensador (8) ; g) calentar el gas que sale del condensador (8) en un calentador (9) y reintroducir el gas de secado caliente en la cámara de pulverización (3) .

El filtro (7) se conecta apropiadamente a un equipo adecuado (C) para recolectar partículas finas retenidas en el filtro.

El condensador (8) también se conecta al equipo adecuado (D) para recuperar el solvente condensado .

En el calentador (9) , el gas se lleva nuevamente a la temperatura para el uso como "gas de secado caliente" en el proceso de secado por pulverización.

Alternativamente, solo se puede utilizar gas nuevo. El proceso de secado por pulverización luego se opera en un modo de "ciclo abierto" contra la operación en un modo de "ciclo cerrado" cuando se recupera el gas.

Características del producto: El péptido obtenido del proceso de secado por pulverización de acuerdo con la presente invención está por regla general en una forma de polvo homogéneo, suspendido libremente. Por consiguiente, las partículas, cuando se comparan con un producto precipitado, muestran un área superficial específica más baja y una densidad aparente más baja. La mayoría de las partículas del producto secado por pulverización tienen un diámetro mucho más bajo en comparación con el producto precipitado.

En una modalidad preferida, el polvo homogéneo, suspendido libremente de (Aib8,35) hGLP-1 (7-36)NH2 se caracteriza por un área superficial específica medida de acuerdo con el método BET (ISO 9277) de 0.5 m2/g a 5 m2/g, preferiblemente de 0.5 m2/g a 2.5 m2/g es decir valores los cuales son sustancialmente más bajos que los valores medidos para el producto precipitado.

El (Aib8,35) hGLP-1 (7-36) NH2 secado por pulverización se caracteriza adicionalmente por una distribución de tamaño de partícula d90 (medida por medio de la dispersión de rayo láser) menor que 200 µp?, preferiblemente menor que 150 µ?t? y más preferiblemente menor que 100 µ??, lo cual significa que 90% de las partículas tienen un tamaño de partícula menor que 200 µp?, preferiblemente menor que 100 µp?. Más de 60% del péptido precipitado tiene un tamaño de partícula que excede 500 µp? .

El tamaño promedio de las partículas del (Aib8,35) hGLP-1 (7-36) NH2 secado por pulverización está por regla general dentro de un intervalo de 10 a 60 preferiblemente dentro del intervalo de 20 a 40 µ?? y más preferiblemente dentro del intervalo de 20 a 30 ]Xm.

El parámetro de procesabilidad densidad aparente del (Aib8,35) hGLP-1 (7-36)NH2 secado por pulverización es por regla general menor que 0.25 g/cm3, preferiblemente menor que 0.2 g/cm3, pero se puede ajustar a menos de 0.1 g/cm3 y de esta manera es superior en comparación con un producto precipitado el cual muestra valores que exceden de 0.3 a 0.4 g/cm3.

Se ha descubierto que la densidad aparente y la densidad compactada del producto secado por pulverización se pueden ajustar dependiendo de parámetros tales como la relación del agua con respecto al alcohol alifático en el solvente orgánico acuoso (solución de alimentación) , la concentración del péptido y del acetato en la solución de alimentación y el valor de pH de la solución de alimentación. Con cantidades pequeñas de acetato en la solución de alimentación, se obtienen densidades aparentes del (Aib8,35) hGLP-1 (7-36) NH2 secado por pulverización menores que 0.1 g/cm3, mientras que cantidades más altas de acetato en la solución de alimentación conducen a densidades aparentes de aproximadamente 0.2 a 0.25 g/cm3.

De esta manera, un polvo secado por pulverización de (Aib8,35) hGLP-1 (7-36) NH2 con una densidad aparente menor que 0.1 g/cm3 se obtiene por medio del proceso como se describe en este documento que se caracteriza porque la solución del péptido (solución de alimentación) contiene menos de 2% en p/p de (Aib8'35) hGLP-1 (7-36)NH2 y menos de 0.15, preferiblemente menos de 0.10% en p/p de acetato. Un polvo secado por pulverización de (Aib8, 35) hGLP-1 (7-36) NH2 con una densidad aparente de aproximadamente 0.20 a 0.25 g/cm3 se obtiene por medio del proceso como se describe en este documento que se caracteriza porque la solución del péptido (solución de alimentación) contiene de 7 a 8% en p/p de (Aib8,35) hGLP-1 (7. 36)NH2 y acetato en el intervalo de 0.4 a 0.6% en p/p.

Los siguientes ejemplos deberán ilustrar la invención sin limitarla.

Ej emplos Ejemplo A Preparación del péptido El péptido crudo (Aib8,35) GLP-1 (7-36) NH2 se puede preparar de acuerdo con el método descrito en el documento WO 2007/147816 al producir tres fragmentos y acoplar estos fragmentos en solución.

Ejemplo B Purificación en RP-HPLC La purificación del péptido crudo se realiza en una fase estacionaria (fase inversa) RP . De esta manera, el agente absorbente es un material de RP tal como gel de sílice (por ejemplo Kromasil 100-16-C18MR) o el agente de adsorción macroreticular de éster acrílico (por ejemplo Amberchrom CG71MMR) . La purificación implica una purificación cromatográfica de 1er paso a un pH de aproximadamente 2 seguida por un 2° paso a un pH de aproximadamente 9. 1er Cromatografía: El (Aib8,35) GLP-1 (7-36)NH2 crudo se disuelve en agua/acetonitrilo/ácido acético (por ejemplo 90/9/1 v/v/v) y se carga en una columna de HPLC (que carga hasta 20 g/L, profundidad del lecho aproximadamente 25 cm) y el programa de purificación (por ejemplo una columna con una longitud de 45 cm se describe en la Tabla 1) se inicia. Las fracciones se recolectan y se pueden diluir con agua o una solución diluida de hidróxido de amonio.

Tabla 1 Parámetros y Programa de Purificación de la Cromatografía 1 Parámetro Descripción Agente Absorbente Gel de sílice RP (Kromasil 100-16-C18MR) Detección Luz UV Eluyente A Fosfato de amonio acuoso (aprox. pH 2) /acetonitrilp (80/20 v/v) Eluyente B Fosfato de amonio acuoso (aprox. pH 2) /acetonitrilo (60/40 v/v) Lavado de la Acido acético acuoso o agua/acetonitrilo (25/75 v/v) Columna Programa Tiempo (min.) % de Flujo Descripción solvente (L/min . ) orgánico (en peso) 7 20 5 a 7 Equilibrio de columna antes de la inyección inicial 20 5 a 7 Condiciones iniciales después de que se carga el material en la columna 1 20-30 5 a 7 Gradiente inicial 40 30-35 5 a 7 Segundo gradiente (el producto se eluye) 4 70 5 a 7 Lavado de la columna Las proporciones de A y B se pueden variar con el propósito de lograr aproximadamente el % de solvente orgánico indicado en el programa de purificación, que corresponde a una retención mínima para el pico principal (péptido (Aib8,35) GLP-1 (7-36)NH2) . Los aspectos de tiempo del evento, gradiente y carga se pueden variar con el propósito de optimizar la purificación. Las fracciones reunidas se purifican adicionalmente por medio de las condiciones de la 2a Cromatografía. 2a Cromatografía: Las fracciones diluidas, reunidas de la Cromatografía 1 del (Aib8,35) GLP-1 (7-36) NH2 se cargan en la columna de HPLC y el programa de purificación (véase los ejemplos para una columna de 45 cm en la Tabla 2 y la Tabla 3_) se inicia. Las fracciones se recolectan y se pueden diluir con agua o ácido acético diluido.

Tabla 2 Parámetros y Programa de Purificación de la Cromatografía 2 (Alternativa 2a) Parámetro Descripción Agente Absorbente Gel de sílice RP (Kromasil 100-1G-C18 MR) Detección Luz UV Eluyente C Acetato de amonio acuoso (aprox. pH 9)/etanol (80/20 v/v) Eluyente D Acetato de amonio acuoso (aprox. pH 9)/etanol (35/65 v/v) Lavado de la Columna Acido acético acuoso/etanol (10/90 v/v) Programa Tiempo (min . ) % de solvente Flu o Descripción orgánico (L/min. ) (en peso) inicial 15 5 a 7 Condiciones iniciales 1 15-35 5 a 7 Gradiente inicial 30 35-44 5 a 7 Segundo gradiente (el producto se eluye) Las proporciones de C y D se pueden variar con propósito de lograr aproximadamente el % de solvente orgánico indicado en el programa de purificación, que corresponde a una retención mínima para el pico principal (péptido (Aib8,35) GLP-1(7-36)NH2) . Los aspectos de tiempo del evento, gradiente y carga se pueden variar con el propósito de optimizar la purificación.

Las fracciones reunidas se pueden utilizar directamente en el proceso de precipitación o el proceso de secado por pulverización como se describe posteriormente en este documento. Tabla 3 Parámetros y Programa de Purificación de la Cromatografía 2 (Alternativa 2b) Parámetro Descripción Agente Gel de sílice RP (Kromasil 100-10-C4 MR) Absorbente Detección Luz UV Eluyente E Acetato de amonio acuoso (aprox. pH 7 ) /acetonitrilo (80/20 v/v) Eluyente F Acetato de amonio acuoso (aprox. pH 9) /acetonitrilo/THF (25/60/15 v/v/v) Lavado de la Acido acético acuoso/acetonitrilo (10/90 v/v) Columna Programa Tiempo (min . ) % de Flujo Descripción solvente (L/min . ) orgánico (en peso) 10 12 5 a 7 Equilibrio de columna antes de la inyección inicial 12 5 a 7 Condiciones iniciales 10 12-28 5 a 7 Gradiente inicial 25 28 5 a 7 Soporte isocrático 10 28-72 5 a 7 Lavado de la columna Las proporciones de E y F se varían con el propósito de lograr aproximadamente el % de solvente orgánico indicado en el programa de purificación, que corresponde a una retención mínima para el pico principal (péptido (Aib8,35) GLP-1 (7-36) H2) . Los aspectos de tiempo del evento, gradiente y carga se pueden variar con el propósito de optimizar la purificación .

Las fracciones reunidas se recolectan y se pueden diluir con agua o ácido acético diluido. Luego se cargan directamente sobre la columna de HPLC para el siguiente paso de concentración.

Concentración del (Aib8,35) GLP-1 (7-36) NH2 : El siguiente paso para la concentración se realiza opcionalmente en caso de que la alternativa 2a se utilice en el paso de la 2a cromatografía. Las fracciones diluidas, reunidas de la Cromatografía 2 se cargan en la columna y se equilibran con una fase móvil débil (Amortiguador Inicial en la Tabla 4 o ácido acético acuoso/etanol (85/15 v/v) ) . La composición amortiguadora se cambia a una fase móvil fuerte (Amortiguador Final en la Tabla 4 o ácido acético acuoso/etanol (20/80 v/v)) y el (Aib8,35) GLP-1 (7- 36)NH2 se recolecta conforme se eluye de la columna.

Tabla 4 Concentración XE1 etanol puede ser sustituido por metanol .

Los aspectos de tiempo del evento, gradiente y carga de la columna se pueden variar con el propósito de optimizar la concentración. Varias corridas de concentración se combinan y se determina el contenido de etanol de la solución que contiene el (Aib8,35) GLP-1 (7-36)NH2 (por ejemplo por medio de GC) .

Ejemplo Comparativo C Precipitación : En un reactor adecuado, 184 kg de éter metil terc-butílico (MTBE) se mezclan con 122 kg de etanol a una temperatura de 24 a 26°C. 36.7 kg de la solución purificada del (Aib8'35) hGLP-1 (7-36)NH2 obtenido de la HPLC preparativa se agregan dentro de 5 a 15 minutos. La mezcla se calienta a una temperatura de 34 °C a 36 °C, se agita durante 1 hora y luego se enfría de 24 °C a 26 °C. Después de la filtración en una secadora de filtro (0.2 m2) la torta se seca con nitrógeno durante 15 minutos y se seca adicionalmente al vacío (menos de 100 mbar) durante 9 horas de 25°C a 30°C. La torta luego se lava dos veces con 3.4 kg de etanol cada una y se seca al vacío (menos de 100 mbar) durante 19 horas a 25 °C. El producto obtenido se humidifica al pasar a través de la secadora de filtro desde abajo nitrógeno húmedo durante 3 horas y nitrógeno seco durante 1 hora de una manera alternante hasta que el contenido de etanol ha sido agotado a menos de 1%. Por lo cual, el producto absorbe la humedad y es necesario otro ciclo de secado. Al pasar a través de la secadora de filtro desde abajo nitrógeno seco durante 3 horas el contenido de humedad se ajusta a aproximadamente 6%. 601 g de producto (Rendimiento: 92% de acuerdo con el ensayo de HPLC) se obtienen (que contiene 97.9% (área) de (Aib8, 35) hGLP-1(7-36)NH2, 6.1% de H20, 0.73% de etanol y 0.02% de MTBE) .

Ejemplos de Secado por Pulverización la y Ib: Condiciones del secado por pulverización aplicadas para los ejemplos la y Ib: Tabla 5 El (Aib8,35) hGLP-1 (7-36)NH2 secado por pulverización es de buena calidad sin ninguna impureza nueva relacionada con la degradación térmica (véase la siguiente Tabla 6) . Contiene aproximadamente 1-2% (p/p) de etanol, 4-5% (p/p) de agua así como también 3% (p/p) de acetato (tabla 4) .

Tabla 6: Atributos de calidad típicos del (Aib8,35) hGLP-1 (7-36) NH2 secado por pulverización Atributo de Calidad (Aib8,35) hGLP-1 (7-3s) NH2 secado por pulverización Ejemplo la Ejemplo Ib Cantidades aisladas 0.44.kg 0.15 kg Ensayo - (Aib8'35) hGLP-1 (,-36)NH2 (% de área) 98.0 % 97.6% - (Aib8'35) hGLP-1 (7.36)NH2 (% de masa) 87.6% 86.9% Impureza orgánica (% de masa) -RRT=0.98 0.39% 0.39% -RRT=1.06 0.23% 0.20% -RRT=1.08 0.25% 0.27% -Impurezas no especificadas 0.77% 0.92% -Total de todas las impurezas orgánicas 1.6% 1.8% Solventes residuales (% (p/p) ) - Etanol 1.1% 2.0% - otros solventes orgánicos < 0.01% cada uno < 0.01% cada uno Agua (% (p/p)) 4.8% 4.7% Acetato (% (p/p)) 2.9% 3.1% Trifluoroacetato (% (p/p) ) < 0.05% < 0.05% Trietilamina (% (p/p)) 0.04% 0.04% Amonio (% (p/p) ) < 0.02% < 0.02% Fosfato (% (p/p)) 0.02% 0.02% nd = no detectado Ejemplos 2a a 2f Las pruebas de optimización a escala pequeña adicionales se realizaron con algunas variaciones de los parámetros de proceso con el propósito de minimizar la cantidad de etanol residual : Tabla 7 Por lo tanto, una purga de nitrógeno "in situ" continua se ha establecido y un agotamiento relativo de 23 a 28% de etanol se ha logrado exitosamente (tabla 8) .

Tabla 8: Parámetros de proceso y atributos de calidad específicos de las pruebas a escala pequeña Ejemplos Ej . 2a Ej . 2b Ej . 2c Ej . 2d Ej . 2e Ej . 2f -temperatura de entrada (°C) 135 120 120 135 135 135 -temperatura de salida (°C) 65 70 65 65 65 65 -flujo de gas (kg/h) 350 400 400 350 350 350 Purga de nitrógeno "in-situ" no no no no si si Solventes residuales (%(p/p) ) 2.2% 2.2% 2.4% 2.3% 1.7% 1.8% - Etanol <0.01% <0.01% <0.01% <0.01% <0.01% <0.01% - otros, cada uno Agua (% en masa) 5.6% 4.0% 4.0% 4.8% n . a 3.4% Acetato (% en masa) 2.7% 2.2% 2.3% 2.3% n . a 2.7% Ejemplos 3a y 3b Los lotes a escala de múltiples kilogramos subsecuentes se realizaron utilizando los siguientes parámetros optimizados: Tabla 9 Los atributos de calidad obtenidos de dos lotes se ilustran en la tabla 10: Tabla 10: Atributos de calidad de lotes a gran escala Ejemplo 4 160 kg de una solución que contiene 1.87% (p/p) de (Aib8'35)hGLP-l (7_36)NH2, 61% (p/p) de agua y 37% (p/p) de etanol se alimentan en un dispositivo Niro SD-4-R-CC (Cámara de pulverización 0 1.2 x 0.75 m, capacidad de 8 kg de H20/h) . Después de aproximadamente 15 horas, 2.73 kg de un polvo fino (para los valores analíticos véase el ejemplo 3a anterior) se recolectan del ciclón.

Tabla 11: Comparación de propiedades en estado sólido entre los productos de (Aib8,35) hGLP-1 (7-36) NH2 precipitados y secados por pulverización .

Se proporciona un intervalo obtenido de varias mediciones .

Ejemplo 5 Las pruebas de optimización adicional realizaron para determinar como la densidad aparente del polvo secado por pulverización se puede ajustar con el propósito de facilitar el procesamiento corriente abajo. Los resultados se muestran en la tabla 12. Los ejemplos 5a a 5f se llevaron a cabo con diferentes composiciones de la solución de alimentación, es decir variaciones de la relación de solventes (etanol con respecto a agua) , la concentración de (Aib8,35) hGLP-1 (7-36) NH2 y la concentración de acetato en la solución de alimentación dando por resultado un pH diferente. Las variaciones se integraron en el paso final de HPLC preparativa con el propósito de llevar a cabo el secado por pulverización de la solución de HPLC preparativa directamente y sin ninguna modificación adicional.

Tabla 12 : Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (25)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un proceso para la producción de una forma de polvo homogéneo, suspendido libremente de un análogo del péptido GLP-1, caracterizado porque una solución del análogo de péptido en un solvente orgánico, acuoso se sujeta a un proceso de secado por pulverización y se recupera en la forma de un polvo homogéneo, suspendido libremente.

2. Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la solución del péptido en un solvente orgánico, acuoso se obtiene de la HPLC preparativa, LPLC o MPLC.

3. Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la solución del péptido en un solvente orgánico, acuoso se obtiene de la HPLC preparativa .

4. Un proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el proceso de secado por pulverización comprende los pasos que consisten en a) alimentar una solución del péptido en un solvente orgánico, acuoso desde un tanque de alimentación a través de un filtro; b) atomizar la solución filtrada en una cámara de pulverización con la ayuda de un atomizador; c) combinar la mezcla atomizada con gas de secado caliente alimentado a través de la entrada, causando en consecuencia que el solvente se evapore y el polvo de péptido se precipite; y d) alimentar la mezcla de gas-polvo en un ciclón donde el péptido se puede recolectar como un polvo homogéneo, suspendido libremente.

5. Un proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el solvente orgánico, acuoso es una mezcla de 20% a 80% en p/p de agua con 20% a 80% en p/p de un alcohol alifático.

6. Un proceso de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el alcohol alifático es metanol o. etanol .

7. Un proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la solución del péptido contiene un amortiguador.

8. Un proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la solución del péptido contiene acetato.

9. Un proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la solución del péptido contiene de 0.4 a 0.6% en p/p de acetato.

10. Un proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la solución del péptido contiene menos de 0.15% p/p de acetato.

11. Un proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque en el paso a) del proceso de secado por pulverización la solución del péptido es alimentada desde el tanque de alimentación a través de un filtro con una velocidad de alimentación de 1 kg/h a 20 kg/h.

12. Un proceso de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la solución del péptido tiene una temperatura de 5°C a 35°C.

13. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4, 11 y 12, caracterizado porque en el paso a) del proceso de secado por pulverización el tamaño del filtro está en el intervalo de 0.2 µ?? a 4.0 µp

14. Un proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque en el paso b) del proceso de secado por pulverización se utiliza un atomizador de ruedas giratorias.

15. Un proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la velocidad del atomizador se selecciona en un intervalo de 10,000 rpm a 30,000 rpm.

16. Un proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque en el paso c) del proceso de secado por pulverización, el nitrógeno con una temperatura de 100°C a 200°C se utiliza como un gas de secado caliente .

17. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4 y 16, caracterizado porque el gas de secado caliente es alimentado con una velocidad de alimentación de 300 kg/h a 500 kg/h.

18. Un proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque en el paso d) del proceso de secado por pulverización la alimentación de gas dentro del ciclón tiene una temperatura de 50 °C a 110 °C.

19. Un proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el proceso de secado por pulverización comprende además los pasos de recuperación del gas que consisten en: e) purificar el gas que sale del ciclón con un filtro ; f) condensar el solvente orgánico, acuoso en un condensador; g) calentar el gas que sale del condensador en un calentador y reintroducir el gas de secado caliente en la cámara de pulverización.

20. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque el análogo del péptido GLP-1 se selecciona del grupo que consiste de GLP-1 (7-37), GLP-1 (7-36)NH2, (Gly8) GLP-1 (7-37 ) , (Gly8) GLP- 1(7-36), (Ser34)GLP-l (7-37), (Val8)GLP-l (7-37), (Val8, Glu22) GLP-1 (7-37), (Aib8'35)hGLP-l(7-36)NH2., (?-e- (?-Glu (N-GC-hexadecanoil) ) ) -Lys26Arg34-GLP-1 (7-37) , D-Ala8Lys37- (2- (2- (2-maleimidopropionamido (etoxi) etoxi) acetamida) ) GLP-1 (7-37), exendina-3, exendina-4, ácido de exendina-4, exendina-4 (1-30) , amida de exendina-4 (1-30) , exendina-4 (1-28) , amida de exendina-4 (1-28), amida de 1Leu,25Phe exendina-4 y amida de 14Leu,25Phe exendina-4 (1-28) y AVE-0010.

21. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque el análogo del péptido GLP-1 es el (Aib8,35) hGLP-1 (7-36) NH2.

22. Un análogo del péptido GLP-1, caracterizado porque se puede obtener con un proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 19.

23. Una forma de polvo homogéneo, suspendido libremente, caracterizada porque es de (Aib8, 35) hGLP- 1 ( 7 -36)NH2.

24. Una forma de polvo homogéneo, suspendido libremente de (Aib8, 35) hGLP-1 ( 7-36 ) NH2 de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque las partículas tienen un área superficial específica (BET) de 0.5 m2/g a 5 m2/g.

25. Una forma de polvo homogéneo, suspendido libremente de (Aib8,35) hGLP-1 ( 7-36 ) NH2 de conformidad con las reivindicaciones 22 y 23, caracterizada porque 90% de las partículas tienen un diámetro menor que 200 µ??.