MX2010011643A - Tiofencarboxamidas sustituidas como inhibidores de la proteina cinasa ikk-beta serina, treonina. - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con compuestos de la fórmula (lA) o (IB) como inhibidores de IKK útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias; en donde R7 es hidrógeno o alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido; A es un arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido de 5-13 átomos de anillo; Z es un radical de la fórmula R1C(R2) (R3)NH-Y-L1-X1-(CH2)z- en donde R1 es un grupo de ácido carboxílico (-COOH) o un grupo éster que es hidrolizable por una o más enzimas de esterasa intracelulares a un grupo de ácido carboxílico; y R2 y R3 representan independientemente la cadena lateral de un aminoácido alfa natural o no natural, pero ninguno de R2 y R3 es hidrógeno o R2 y R3 tomados juntos con el átomo de carbono al que se enlazan forman un anillo cicloalquilo C3-C7 y z, Y, L1 y X1 son como se definen en las reivindicaciones.

Description

TIOFENCARBOXAMIDAS SUSTITUIDAS COMO INHIBIDORES DE LA PROTEINA CINASA IKK-BETA SERINA, TREONINA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con tiofen carboxamidas caracterizadas por la presencia en la molécula de un radical de éster de glicina a, a-disustituido, con composiciones que los contienen, con procesos para su preparación y con su uso en medicina como inhibidores de IKK para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias, incluyendo enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad de intestino inflamatorio, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, esclerosis múltiple, diabetes, dermatitis atópica, enfermedad de injerto contra hospedero, lupus eritematoso sistémico. Los compuestos también son de uso en el tratamiento de estados de enfermedades proliferativas , tales como cáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La expresión de muchos genes pro- inflamatorios se regula por el factor nuclear de activador transcripcional -KB (NF-KB) . Estos factores de transcripción han sido sospechosos dado su descubrimiento para jugar un papel pivotal en las enfermedades inflamatorias crónicas y agudas. Parece ahora REF. : 214906 que la regulación aberrante de NF-KB también podría ser la base de las enfermedades autoinmunitarias y los diferentes tipos de cáncer.

Ejemplos de los genes dependientes de la activación de NF-KB incluyen: el factor de necrosis tumoral de citosinas TNF-a, interleucina (IL)-6, IL-8 e IL-?ß; las moléculas de adhesión de E-selectina, molécula de adhesión intercelular (ICAM) -I y molécula de adhesión celular vascular (VCAM)-I; y las enzimas de óxido nítrico sintasa (NOS) y ciclooxigenasa (C0X)-2. NF-KB normalmente reside en el citoplasma de las células no estimuladas como un complejo inactivo con un miembro de la familia de la proteína inhibidora de IkB. Sin embargo, debido a la activación celular, IkB se fosforila por la IkB cinasa (IKK) y se degrada subsecuentemente. NF-KB libre después se transloca al núcleo en donde media la expresión génica pro- inflamatoria .

Hay tres IKB: ???a, ???ß y ???e clásicos; todos requieren la fosforilación de dos residuos de serina clave antes de que puedan degradarse, dos enzimas principales IKK-OÍ y ???-ß parece que son responsables para la fosforilación de IKB. Las versiones negativas dominantes (DN) de cualquiera de estas enzimas (en donde la unión de ATP es discapacitada por la mutación de un residuo del dominio de cinasa clave) se encontraron que suprimen la activación de NF-KB por TNF-a, IL-?ß y LPS . De manera importante, DN de ???-ß se encontró que era un inhibidor, mucho más potente que DN de IKK-OÍ (Zandi, E Cell, 1997, 91, 243) . Además, la generación de ratones deficientes de IKK-a y ???-ß estableció el requerimiento de ???-ß para la activación de NF-JCB por estímulos proinflamatorios y reforzó el papel dominante de ???-ß sugerido por datos bioquímicos. De . hecho, se demostró que IKK-a fue dispensable para la activación de NF-KB por estos estímulos (Tanaka, M. ; Immunity 1999, 10, 421). De esta manera, la inhibición de ???-ß representa un blanco potencialmente atractivo para la modulación la función inmunitaria y de aquí el desarrollo de los fármacos para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención hace disponible una clase de tiofen carboxamidas que son inhibidores potentes y selectivos de las isoformas de IKK, particularmente ???-ß. De esta manera, los compuestos son de uso en medicina, por ejemplo, en el tratamiento de una variedad de estados de enfermedades proliferativas , tales como las afecciones relacionadas con la hiperactividad de IKK, así como las enfermedades moduladas por la cascada de NF-KB. Además, los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento de ataque, osteoporosis , artritis reumatoide y otros trastornos inflamatorios. Los compuestos se caracterizan por la presencia en la molécula de un radical de éster de glicina a , a-disustituido que se hidroliza por" una carboxilesterasa intracelular . Los compuestos de la invención que tienen el radical de éster de glicina OÍ, a-disustituido lipofílico cruzan la membrana celular, y se hidrolizan al ácido por las carboxilesterasas intracelulares . El producto de hidrólisis polar se acumula en la célula dado que no cruza fácilmente la membrana celular. Por esto, la actividad inhibidora de IKK del compuesto se prolonga y se mejora dentro de la célula. Los compuestos de la invención se relacionan con los inhibidores de IKK abarcados por la descripción en la Solicitud de Patente - Internacional No. WO 2004063186, pero difieren de la misma en que los presentes compuestos tienen el radical del éster de glicina , -disustituidos referido anteriormente.

Los compuestos de la invención también se relacionan con los descritos en la Solicitud de Patente Internacional co-pendiente No. PCT/GB2007/004114. Los últimos compuestos tienen un radical de éster de glicina a-monosustituido que mejora los compuestos para cruzar la membrana celular en la célula en donde se hidrolizan al ácido correspondiente por carboxilesterasas intracelulares. Sin embargo, tal publicación no sugiere que tales conjugados del éster de glicina , a-disustituidos pueden hidrolizarse por carboxilesterasas intracelulares. De hecho, parece que la capacidad de las carboxil esterasas intracelulares , principalmente hCE-1, hCE-2 y hCE-3, para hidrolizar los ásteres de glicina a , a-disustituidos no se ha investigado previamente .

El concepto general para conjugar un radical de éster de glicina a-mono sustituido a un modulador de una enzima o receptor intracelular, para obtener los beneficios de la acumulación intracelular del producto.de hidrólisis del ácido carboxílico se describe en la Solicitud de Patente Internacional WO 2006/117567. Sin embargo, esta publicación no sugiere que los conjugados del. éster de glicina a,a-disustituidos pueden hidrolizarse por carboxilesterasas intracelulares. Como se mencionó anteriormente, parece que no se ha investigado previamente la capacidad de las carboxilesterasas intracelulares, principalmente hCE-1, hCE-2 y hCE-3, para hidrolizar los esteres de glicina a,a-disustituidos .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN De acuerdo con la presente invención se proporciona un compuesto de la fórmula (IA) o (IB) o una sal del mismo: en donde: R7 es hidrógeno o alquilo (d-C6) opcionalmente sustituido; A es un anillo de arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido o un sistema de anillo de 5-13 átomos de anillo; Z es un radical de la fórmula ¾C (R2) (R3) NH-Y-I^-X1- (CH2) z- en donde : z es 0 ó 1; Y es un enlace, -C(=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)NR7-, -C(=S)-NR7, -C(=NH)NR7 o -S(=0)2NR7- en donde R7 es hidrógeno o alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido; L1 es un radical,, divalente . de la. . fórmula {Alq1) m(Q) n (Alq2) p- en donde m, n y p son independientemente 0 ó 1, Q es (i) un radical mono- o bicíclico carbocíclico o heterocíclico divalente opcionalmente sustituido que tiene 5-13 miembros del anillo, o (ii) , en el caso en donde m y p son O, un radical divalente de la fórmula -X2-Q1- o -Q1-X2- en donde X2 es -0-, S- o NRA- en donde RA es hidrógeno o alquilo Ci-C3 opcionalmente sustituido, y Q1 es un radical mono- o bicíclico - carbocíclico o heterocíclico divalente opcionalmente sustituido que tiene de 5-13 miembros de anillo, Alq1 y Alq2 representan independientemente radicales de cicloalquilo C3-C7 divalentes opcionalmente sustituidos, o radicales alquileno Ci ^ Cg , alquenileno C2-C6 o alquinileno C2-C6 lineales o ramificados opcionalmente sustituidos que pueden contener opcionalmente o terminar en un enlace éter (-0-), tioéter (-S-) o amino ( -NRA- ) en donde RA es hidrógeno o alquilo C1 - C3 opcionalmente sustituido; y X1 representa un enlace; -C(=0); o -S(=0)2-; -NR4C(=0)-, - C(=0) NR4 - , -NR4C(=0) NR5 - , -NR4S(=0)2-, o -S(=0) 2NR4 - en donde R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo Ci - C6 opcionalmente sustituido.

Ri es un grupo de ácido carboxílico (-C00H), o un grupo éster que es hidrolizable por una o más enzimas de esterasa intracelulares a un grupo de ácido carboxílico; y R2 y R3 representan independientemente la cadena lateral de un aminoácido alfa natural o no natural, pero ninguno de R2 y R3 es hidrógeno, o R2 y R3 tomados juntos con el átomo de carbono al que se enlazan forman un anillo cicloalquilo C3-C7.

Los compuestos de la fórmula (IA) o (IB) anteriores pueden prepararse en la forma de sales, especialmente sales farmacéuticamente aceptables, N-óxidos, hidratos y solvatos de los mismos. Cualquier reivindicación a un compuesto en la presente, o referencia en la presente a "compuestos de la invención", "compuestos con los que la invención está relacionada", "compuestos de la fórmula (IA) o (IB)" y similares, incluye sales, N-óxidos, hidratos y solvatos de tales compuestos.

En otro aspecto amplio, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (IA) o (IB) como se definió anteriormente, o un N-óxido, sal, hidrato o solvato del mismo en la preparación de una composición para la inhibición de la actividad de IKK, especialmente ???-ß, así como las enfermedades moduladas por la cascada de NF-KB.

Los compuestos con los que la invención está relacionada, pueden usarse para la inhibición de la actividad de IKK, especialmente ???-ß, in vitro o in vivo.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la invención junto con uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables, .también forman parte de la invención.

En un aspecto de la invención, los compuestos de la invención pueden usarse en la preparación de una composición para el tratamiento de enfermedades neoplásicas/proliferativás , autoinmunitarias o inflamatorias, particularmente las mencionadas anteriormente en las que la actividad de IKK, especialmente ???-ß, juega un papel.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento de los tipos de enfermedades anteriores, que comprende administrar a un paciente que sufre de tal enfermedad, una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula (IA) o (IB) como se definió anteriormente.

Terminología Como se usa en la presente, el término "alquilo (Ca-Cb) " en donde a y b son enteros, se refiere a un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b átomos de carbono. De esta manera, cuando a es 1 y b es 6, por ejemplo, el término incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo y n-hexilo .

Como se usa en la presente, el término "radical alquileno (Ca-Cb) divalente" en donde a y b son enteros, se refiere a una cadena de hidrocarburo saturado que tiene de a a b átomos de carbono y dos valencias no satisfechas.

Como se usa en la presente el término "alquenilo (Ca-Cb) " en donde a y b son enteros se refiere a un radical alquenilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b átomos de carbono, que tiene por lo menos un enlace doble de estereoquímica ya sea E o Z cuando sea aplicable. El término incluye, por ejemplo, vinilo, alilo, 1- y 2-butenilo y 2-metil-2 -propenilo .

Como se usa en la presente el término "radical de alquenileno (Ca-Cb) divalente" significa una cadena de hidrocarburo que tiene de a - a b átomos de carbono, por lo menos un enlace doble, y dos valencias no satisfechas.

Como se usa en la presente el término "alquinilo (Ca-Cb) " en donde a y b son enteros se refiere a grupos de hidrocarburos de cadena lineal o ramificada que tienen de a a b átomos de carbono y que tienen además un enlace triple. Este término incluiría, por ejemplo, etinilo, 1-propinilo, 1-y 2-butinilo, 2-metil-2-propinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4-hexinilo y 5-hexinilo.

Como se usa en la presente el término "radical alquinileno (Ca-Cb) divalente" en donde a y b son enteros, se refiere a una cadena de hidrocarburo divalente que tiene de a a b átomos de carbono, y por lo menos un enlace triple.

Como se usa en la presente el término "carbocíclico" se refiere a un radical mono-, bi- o tricíclico que tiene hasta 16 átomos de anillo, todos los cuales son carbono, e incluye arilo y cicloalquilo .

Como se usa en la presente el término "cicloalquilo" se refiere a un radical carbocíclico saturado monocíclico que tiene de 3-8 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.

Como se usa en la presente el término no calificado "arilo" se refiere a un radical aromático carbocíclico mono-, bi- o tri-cíclico, e incluye radicales que tienen dos anillos aromáticos carbocíclicos monocíclicos que se enlazan directamente por un enlace covalente . Son ilustrativos de tales radicales,, fenilo, bifenilo y naftilo.

Como se usa en la presente el término no calificado "heteroarilo" se refiere a un radical aromático mono-, bi- o tri-cíclico que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de S, N y 0, e incluye los radicales que tienen dos de tales anillos monocíclicos , o uno de tales anillos monocíclicos y un anillo arilo monocíclico, que se enlazan directamente por un enlace covalente . Son ilustrativos los radicales tienilo, benztienilo, furilo, benzfurilo, pirrolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, benztiazolilo, isotiazolilo, benzisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, bencisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benztriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo,. triazinilo, indolilo e indazolilo.

Como se usa en la presente el término no calificado "heterociclilo" o ''heterocíclico" incluye "heteroarilo" como se definió anteriormente, y en su significado no aromático se relaciona con un radical no aromático mono-, bi- o tri-cíclico que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de S, N y 0, y con grupos que consisten de un radical no aromático monocíclico que contiene uno o más de tales heteroátomos que se enlaza covalentemente a otro radical o a un radical carbocíclico monocíclico. Son ilustrativos de tales radicales los grupos pirrolilo, furanilo, tienilo, piperidinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirimidinilo, morfolinilo, piperazinilo, indolilo, morfolini benzfuranilo, piranilo, isoxazolilo, bencimidazolilo, metilendioxifenilo, etilendioxifhenilo, maleimido y succinimido .

Un "radical fenileno, piridinileno, pirimidinileno o pirazinileno divalente" es un anillo de benceno, piridina, pirimidina o pirazina, con dos valencias insatisfechas, e incluye 1, 3-fenileno, 1,4-fenileno y los siguientes: A menos que se especifique lo contrario en el contexto en el que se presenta, el término "sustituido" como se aplica a cualquier radical en la presente significa sustituido con hasta cuatro sustituyentes compatibles, cada uno de los cuales puede ser independientemente, por ejemplo, alquilo (Ci-C6) , alcoxi (Ci-C6) , hidroxi, hidroxialquilo (Ci-C6) , mercapto, mercaptoalquilo (Cx-Ce) , alquiltio (Ci-C6) , fenilo, halo (que incluye fluoro, bromo y cloro) , trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN) , oxo, -COOH, -COORA, - CORA, -S02RA, -CONH2J -SO2NH2, -CONHRA, -S02NHRA, -CONRARB, - S02NRARB, -NH2, -NHRA, -NRARB, -OCONH2, -OCONHRA, -OCONRARB, -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHS02ORA, -NR8S02OH, -NRBS02ORA, -NHCONH2, -NRACONH2, -NHCONHR8 -NRACONHRB, -NHCONRARB o NRACONRARB en donde RA y R8 son independientemente un alquilo (Ci-C6) , cicloalquilo (C3-C6) , fenilo o heteroarilo monocíclico que tiene 5 ó 6 átomos de anillo, o RA y RB cuando se enlazan al mismo átomo de nitrógeno forman un grupo amino cíclico (por ejemplo, morfolino, piperidinilo, piperazinilo o tetrahidropirrolilo) . Un "sustituyente opcional" puede ser uno de los grupos anteriores.

El término "cadena lateral de un aminoácido alfa natural o no natural" se refiere al grupo RY en un aminoácido natural o no natural de la fórmula NH2-CH (RY) -C00H .

Ejemplos de las cadenas laterales de los aminoácidos alfa naturales incluyen las de alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, cistina, ácido glutámico, histidina, 5-hidroxilisina, -hidroxiprolina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina, ácido -aminoadípico, ácido a-amino-n-butírico, 3 , 4 -dihidroxifenilalanina , homoserina, a-metilserina, ornitina, ácido pipecólico y tiroxina.

Los aminoácidos alfa naturales que contienen sustituyentes funcionales, por ejemplo los grupos amino, carboxilo, hidroxi, mercapto, guanidilo, imidazolilo o indolilo en sus cadenas laterales características incluyen arginina, lisina, ácido glutámico, ácido aspártico, triptófano, histidina, serina, treonina, tirosina y cisteína. Cuando R2 o R3 en los compuestos de la invención es una de las cadenas laterales, el sustituyente funcional puede estar protegido opcionalmente .

El término "protegido" cuando se usa con relación a un sustituyente funcional en una cadena lateral de un aminoácido alfa natural significa un derivado de tal sustituyente que es sustancialmente no funcional. Por ejemplo, los grupos carboxilo pueden esterificarse (por ejemplo como un éster de alquilo Ci-C6) , los grupos amino pueden convertirse a amidas (por ejemplo, como una alquilamida NHC(=0) Ci-C6) o carbamatos (por ejemplo como un NHC(=0)0 alquilo Ci-C6- o NHC (=0) OCH2Ph carbamato) , los grupos hidroxilo pueden convertirse a éteres (por ejemplo un 0 alquilo Ci-C6 o un 0 (alquilo Ci-C6) fenil éter) o ésteres (por ejemplo a 0C(=0)CiC6 alquil éster) y los grupos tiol pueden convertirse a tioéteres (por ejemplo un ter-butil o bencil tioéter) o tioésteres (por ejemplo a SC (=0) alquilo Ci-C6 tioéster) .

Ejemplos de las cadenas laterales de los aminoácidos alfa no naturales incluyen los referidos a continuación en la descripción de los grupos R2 y R3 apropiados para el uso en los compuestos de la presente invención.

Como se usa en la presente el término "sal" incluye adición de base, adición de ácido y sales cuaternarias. Los compuestos de la invención que son ácidos pueden formar sales, que incluyen las sales farmacéuticamente aceptables, con bases, tales como hidróxidos de metales alcalinos, por ejemplo, hidróxidos de sodio y potasio; hidróxidos de metales alcalinotérreos , por ejemplo, hidróxidos de calcio, bario y magnesio; con bases orgánicas, por ejemplo, N-metil-D-glucamina, colina tris (hidroximetil) amino-metano, L-arginina, L-lisina, N-etilpiperidina , dibencilamina y similares. Los compuestos (IA) o (IB) que son básicos, pueden formar sales, incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos, por ejemplo, con ácidos hidrohálicos tales como ácidos clorhídrico o bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico o ácido fosfórico y similares, y con ácidos orgánicos, por ejemplo, con ácido acético, tartárico, succínico, fumárico, maleico, málico, salicílico, cítrico, metansulfónico, p-toluensulfónico, benzoico, bencensulfónico, glutámico, láctico y mandélico y similares. Para una revisión sobre las sales apropiadas, ver Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties. Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002) .

Se espera que los compuestos de la invención puedan recuperarse en la forma hidratada o solvatada, o en el caso de algunas estructuras en la forma N-oxidada, y tales formas se espera que tengan la actividad de las formas no hidratada, no solvatada o no N-oxidada. El término "solvato" se usa en la presente para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una cantidad estequiométrica de uno o más moléculas de solventes farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol. El término "hidrato" se emplea cuando el solvente es agua .

Los compuestos de la invención que contienen uno o más centros quirales reales o potenciales, debido a la presencia de átomos de carbono asimétricos, pueden existir como enantiómeros o como un número - de diastereoisómeros con una estereoquímica R o S en cada^ centro quiral . La invención incluye todos los enantiómeros y diastereoisómeros y mezclas de los mismos.

Como se menciona, los ásteres de la invención se convierten por esterasas intracelulares a los ácidos carboxílieos . Los ésteres y ácidos carboxílicos pueden tener una actividad inhibidora de ???-ß cinasa por sí mismos. Por lo tanto, los compuestos de la invención incluyen no sólo el éster, sino también los productos de hidrólisis del ácido carboxílico correspondientes.

En los compuestos de la invención, los sustituyentes y grupos variables se describirán ahora en más detalle: Sustituyente R7 R7 es hidrógeno- o alquilo (Ci-C6) opcionalmente sustituido, tales como metilo, etilo o n- o iso-propilo. Se prefiere actualmente cuando R7 es hidrógeno.

Anillo o sistema de anillo A El anillo A es arilo o heteroarilo divalente opcionalmente sustituido de 5-13 átomos, por ejemplo, un radical de fenileno, piridinileno, pirimidinileno o pirazinileno divalente. Se prefiere actualmente el 1,3-fenileno .

Radical -Y-I^-X1- [CH2] z- Este radical (o enlace) surge de la estrategia química particular elegida para enlazar el radical del éster de aminoácido R1R2R3CNH- al sistema de anillo A. Claramente, la estrategia química para tal acoplamiento puede variar ampliamente, y de esta manera, son posibles muchas combinaciones de las variables Y, L1, X1 y z . La combinación precisa de las variables que hacen la química de unión entre el radical del éster de aminoácido y el sistema de anillo A a menudo será irrelevante para el modo de unión primario del compuesto como una totalidad. Por otro lado, tal química de unión, en algunos casos, recogerá las interacciones de unión adicionales con la enzima.

También debería observarse que los beneficios del radical del éster de aminoácido (entrada fácil en la célula, hidrólisis de esterasa dentro de la célula y acumulación dentro de la célula del producto de hidrólisis del ácido carboxílico activo) se logran mejor cuando el enlace entre el radical de éster de aminoácido y el sistema de anillo A no es un sustrato para la actividad de peptidasa dentro de la célula, lo que podría resultar en la escisión del aminoácido de la molécula. Por supuesto, la estabilidad de las peptidasas intracelulares se prueba fácilmente incubando el compuesto con los contenidos celulares interrumpidos y analizando cualquiera de tales escisiones.

Con las observaciones generales anteriores en mente, tomando las variables que forman el radical -Y-L1-X1- [CH2] z- , entonces : z puede ser 0 ó 1, de modo que un radical metileno enlazado al sistema de anillo A es opcional; los ejemplos preferidos específicos de Y cuando la selectividad del macrófago no se requiere incluyen -(C=0)-, -(C=0)NH- y - (C=0)0-. Cuando se requiere la selectividad del macrófago, son apropiadas cualquiera de las otras opciones para Y, incluyendo el caso en donde Y es un enlace.

En el radical L1, los ejemplos de los radicales Alq1 y Alq2, cuando están presentes, incluyen: — H2— , — H2 H2 ~ , — H2 H2 H2— , — CH2 H2CH2CH2- , — CH=CH— , — CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2-C=C- , -C=CCH2-, -CH2C=C- y CH2C=CCH2. Los ejemplos adicionales de Alq1 y Alq2 incluyen - CH2W-, - CH2CH2W-, -CH2CH2WCH2- , -CH2CH2WCH (CH3) - , -CH2WCH2CH2- , -CH2WCH2CH2WCH2- y -WCH2CH2- en donde W es -O-, -S-, -NH-, -N(CH3)- o -CH2CH2N(CH2CH2OH) CH2- . Ejemplos adicionales de Alq1 y Alq2 incluyen los radicales divalentes de ciclopropilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

En L1, cuando n es 0, el radical es una cadena de hidrocarburo (opcionalmente sustituido y que tiene quizá un enlace éter, tioéter o amino) . Actualmente, se prefiere que no haya sustituyentes opcionales en L1. Cuando m y p son 0, L1 es un radical carbocíclico o heterocíclico divalente mono- o bicíclico con 5-13 átomos de anillo (opcionalmente sustituido) . Cuando n es 1 y por lo menos uno de m y p es 1, L1 es un radical divalente que incluye una cadena o cadenas de hidrocarburos y un radical carbocíclico o heterocíclico mono- o bicíclico con 5-13 átomos de anillo (opcionalmente sustituido) . Cuando está presente, Q puede ser, por ejemplo, un radical divalente de fenilo, naftilo, ciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo, o un radical heterocíclico mono-o bicíclico que tiene 5 a 13 átomos de anillo, tale como el radical piperidinilo, piperazinilo, indolilo, piridilo, tienilo o pirrolilo, pero se prefiere actualmente el 1,4-fenileno.

Específicamente, en algunas modalidades de la invención, L1, m y p pueden ser 0, siendo n igual a l. En otras modalidades, n y p pueden ser 0, siendo m igual a l. En las modalidades adicionales, m, n y p pueden ser todos 0. En las modalidades aún adicionales, m puede ser 0, n puede ser 1, siendo Q un radical heterocíclico monocíclico, y p puede ser 0 ó 1. Alq1 y Alq2, cuando están presentes, pueden seleccionarse de -CH2-, -CH2CH2- y -CH2CH2CH2- y Q puede ser 1,4- fenileno .

Los ejemplos específicos del radical -?-??-?1- [CH2] z-incluyen -C(=0)- y -C(=0)NH- así como -(CH2)V-, -(CH2)vO-, -C(=0) - (CH2)V-, -C(=0) - (CH2)v0-, -C (=0) -NH- (CH2) w- , -C(=0)-NH- (CH2)w0- en donde v es l, 2, 3 ó 4 y w es 1, 2 Ó 3, tales como -Y X1-[CH2]Z-, es -CH2-, -CH2CH2-, . -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-CH20-, -CH2CH20-, -CH2CH2CH20- , -CH2CH2CH2CH20- , -C(=0)-CH2-C(=0)-CH20-, -C (=0) -NH-CH2- o -C (=0) -NH-CH20- .

Grupo Ri En una clase de compuestos de la invención, Ri es un grupo de ácido carboxílico. Aunque los compuestos de esta clase pueden administrarse como el ácido carboxílico o una sal del mismo, se prefiere que sean generados en la célula por la acción de una esterasa intracelular en un compuesto correspondiente en el que Rx es un grupo éster.

El grupo éster Ri debe ser uno en el que en el compuesto de la invención sea hidrolizable por una o más enzimas de carboxilesterasa intracelulares a un grupo de ácido carboxílico. Las enzimas de carboxilesterasa. intracelulares capaces de hidrolizar el grupo éster de un compuesto de la invención al ácido correspondiente incluyen los tres isotipos de la enzima humana conocidos hCE-1, hCE-2 y hCE-3. Aunque éstas se consideran que son enzimas principales, otras enzimas, tales como bifenilhidrolasa (BPH) también pueden jugar un papel en la hidrólisis del éster. En general, si la carboxilesterasa hidroliza el éster de aminoácido libre al ácido padre, también hidrolizará el radical éster cuando se conjuga covalentemente al inhibidor. Por esto, la prueba de la célula rota y/o la prueba de la carboxilesterasa aislada descritas en la presente, proporcionan una primer selección verdadera, rápida y simple para los éteres que tienen el perfil de hidrólisis requerido. Los radicales éster seleccionados de esta manera, después pueden volverse a probar en la misma prueba de carboxilesterasa cuando se conjugan al inhibidor por medio de la química de conjugación elegida, para confirmar que es aún un sustrato carboxilesterasa en tal antecedente .

Sujetos al requerimiento de que sean hidrolizables por las enzimas de carboxilesterasa intracelulares, ejemplos de los grupos ásteres particulares Ri incluyen los de la fórmula -(C=0)0Ri4 en donde Ri4 es R8R9R10C-, en donde: (i) R8 es hidrógeno, flúor o alquilo ( C1-C3) - (Z1) a-[alquilo (Ci-C3)]b- o alquenilo (C2-C3) - (Z1) a- [alquilo ( Ci -C3) ] b _ opcionalmente sustituido, en donde a y b son independientemente 0 ó 1 y Z1 es -0-, -S- o -NRn - en donde Rn es hidrógeno o alquilo ( C1 - C3 ) ; y R9 y R10 son independientemente hidrógeno o alquilo ( C1-C3) -; (ii) R8 es hidrógeno o Ri2Ri3N-alquilo ( C1-C3) -opcionalmente sustituido en donde Ri2 es hidrógeno o alquilo ( C1-C3) y R13 es hidrógeno o alquilo ( C1-C3) ; o Ri2 y R13 junto con el nitrógeno al que se enlazan forman un anillo heterocíclico monocíclico opcionalmente sustituido de 5 ó 6 átomos de anillo o sistema de anillo heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos de anillo, y R9 y Ri0 son independientemente hidrógeno o alquilo ( C1-C3) -; o (iii) R8 y R9 tomados junto con el átomo de carbono al que se enlazan forman un anillo carbocíclico monocíclico opcionalmente sustituido de 3 a 7 átomos de anillo o sistema de anillo carbocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos de anillo, y Rio es hidrógeno.

En los casos (i) , (ii) y (iii) anteriores, "alquilo" incluye fluoroalquilo .

Dentro de las clases (i) , (ii) y (iii) , io a menudo es hidrógeno. Ejemplos específicos de Ri4 incluyen metilo, trifluorometilo, etilo, n- o iso-propilo, n-, sec- o ter-butilo, ciclohexilo, alilo, fenilo, bencilo, 2-, 3- ó 4- piridilmetilo, N-metilpiperidin-4-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, metoxietilo, indanilo, norbornilo, dimetilaminometilo o morfolinoetilo . Se prefiere actualmente cuando Ri es ciclopentilo .

Los macrófagos se conoce que juegan un papel clave en los trastornos inflamatorios por medio de la liberación de citosinas in particular TNFOÍ e IL-1 (van Roon et al, Arthritis and Rheumatism, 2003, 1229-1238) . En la artritis reumatoide son contribuyentes principales en el mantenimiento de la inflamación de articulaciones y destrucción de articulaciones. Los macrófagos también están involucrados en el crecimiento y desarrollo tumoral (Naldini . and Carraro, Curr Drug Targets lnflamm Allergy, 2005, 3-8) . Por esto, los agentes que dirigen selectivamente la proliferación celular del macrófago podrían ser de valor en el tratamiento de cáncer y enfermedades autoinmunitarias . La dirección de tipos celulares específicos se esperaría que conduzca a efectos secundarios reducidos . Los inventores han descubierto un método para dirigir los inhibidores de IKK a macrófagos y otras células derivadas de la línea mielo-monocítica, tales como monocitos, osteoclastos y células dendríticas. Esto se basa en la observación de que la manera en que el radical de esterasa se enlaza al inhibidor de IKK cinasa determina si se hidroliza, y por esto, sí o no se acumula en los diferentes tipos celulares. Específicamente, se ha encontrado que los macrófagos y otras células derivadas de la línea mielo-monocítica contienen hCE-1 de carboxilesterasa de humano, mientras que otros tipos celulares no. En la fórmula general (IA) o (IB) cuando el nitrógeno del radical de esterasa RiC(R2) (R3)NH- no se enlaza directamente a un carbonilo (-C(=0)-), es decir cuando Y no es un radical -C(=0), -C(=0)0-o -C(=0)NR3-, el éster sólo será hidrolizado por hCE-1 y por esto los inhibidores se acumularán selectivamente en las células relacionadas con el macrófago. En la presente, a menos que se especifique "monocito" o "monocitos", el término macrófago o macrófagos se usará para representar macrófagos (incluyendo los macrófagos asociados con el tumor) y/o monocitos.

Sustituyentes R2 y R3 Los sustituyentes R2 y 3 pueden considerarse como los sustituyentes a de una glicina a, -disustituida o un éster de glicina . -disustituido . Por lo tanto, estos sustituyentes pueden ser las cadenas laterales de un aminoácido alfa natural o no natural además de glicina, y en tales cadenas laterales pueden protegerse cualesquiera grupos funcionales.

Por ejemplo, ejemplos de R2 y R3 incluyen fenilo y los grupos de la fórmula -CRaRbRc en la que: cada uno de Ra, ¾ y Rc es independientemente hidrógeno, alquilo (Ci-C6) , alquenilo (C2-C6) , alquenilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-C6) , cicloalquilo (C3-C8) ; o Rc es hidrógeno y Ra y Rb son independientemente fenilo o heteroarilo, tales como piridilo; o Rc es hidrógeno, alquilo (Ci-C6) , alquenilo (C2-C6) , alquinilo (C2-C6) , fenilalquilo (0?-06) o cicloalquilo (C3-C8) , y Ra y Rb junto con el átomo de carbono al que se enlazan forman un cicloalquilo de 3 a 8 miembros o un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros; o Ra Rb y c junto con el átomo de carbono al que se enlazan forman un anillo tricíclico (por- ejemplo adamantilo) ; o Ra y R son cada uno independientemente alquilo (Ci-C6) , alquenilo (C2-C3) , alquinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-C6) , o un grupo como se define para Rc anterior además de hidrógeno, o Ra y Rb junto con el átomo de carbono al que se enlazan forman un anillo cicloalquilo o heterocíclico, y Rc es hidrógeno, -OH, -SH, halógeno, -CN, - C02H, perfluoroalquilo (Ci-C4) , -CH2OH, -O (alquilo Ci-C6) , -0 (alquenilo C2-C6) , S (alquilo Ci-C6) , -SO (alquilo Ci-C6) , -S02 (alquilo Ci-C6) , S(alquenilo C2-C6) , -SO (alquenilo C2-C6) , -S02 (alquenilo C2-C6) o un grupo -Q-W en donde Q representa un enlace u -O-, -S-, -SO- o -S02- y W representa un grupo fenilo, fenilalquilo, cicloalquilo (C3-C8) , cicloalquilalquilo (C3-C8) , cicloalquenilo (C4-C8) , cicloalquenilalquilo (C -C8) , heteroarilo o heteroarilalquilo, en donde el grupo W puede sustituirse opcionalmente por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de hidroxilo, halógeno, -CN, -CONH2 -CONH(alquilo Ci-C6) , -CONH (alquilo Ci-C6)2, -CHO, -CH2OH, perfluoroalquilo (C1-C4) , -0 (alquilo Ci-C6) , -S (alquilo Cj-Cg) , -S0(alquilo Ci-C6) , -S02(alquilo Ci~C6) , -N02, -NH2/ -NH (alquilo Ci-C6) , -N (alquilo (C1-C6))2, -NHCO (alquilo Ci-C6) , alquilo (Ci-C6) , alquenilo (C2-C6) , alquenilo (C2-C6) , cicloalquilo (C3-C8) , cicloalquenilo (C4-C8) , fenilo o bencilo.

Alternativamente, los sustituyentes R2 y R3, tomados juntos con el carbono al que se enlazan, pueden formar un anillo espirocicloalquilo saturado de 3-6 miembros, tal como un anillo ciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo o anillo espiroheterociclilo, tal como el anillo piperidin-4-ilo .

En algunos casos, por lo menos uno de los sustituyentes R2 y R3 es un sustituyente alquilo Ci-C6, por ejemplo, metilo, etilo o n- o iso-propilo.

En algunas modalidades, uno de los sustituyentes R2 y R3 es un sustituyente alquilo Ci-C6, por ejemplo, metilo, etilo o n- o iso-propilo y el otros se selecciona del grupo que consiste de metilo, etilo, n- e iso-propilo, n- , sec- y ter-butilo, fenilo, bencilo, tienilo, ciclohexilo y ciclohexilmetilo .

En un caso particular, los sustituyentes R2 y R3 son cada uno metilo.

Para los compuestos de la invención que serán administrados sistémicamente , se prefieren los ásteres con una velocidad lenta de escisión de carboxilesterasa, dado que son menos susceptibles al metabolismo pre-sistémico . Por lo tanto, se aumenta su capacidad para alcanzar su tejido blanco intacto, y el éster puede convertirse dentro de las células del tejido blanco en el producto ácido. Sin embargo, para la administración local, en donde el éster se aplica ya sea directamente al tejido blanco o se dirige allí mediante, por ejemplo, inhalación, a menudo será deseable que el éster tenga una velocidad rápida de escisión de esterasa, para minimizar la exposición sistémica y los efectos secundarios indeseables subsecuentes. En los compuestos de esta invención, si el carbono adyacente al carbono alfa del éster de aminoácido alfa es mono-sustituido, es decir, R2 y R3 son -CH2RZ (siendo Rz el mono-sustituyente) entonces los ésteres tienden a escindirse más rápidamente que si tal carbono fuera di- o tri-sustituido, como en el caso en donde R2 y R3 son, por ejemplo, fenilo o ciclohexilo, o juntos forman un anillo.

Como se mencionó anteriormente, los compuestos con los que la invención está relacionada son inhibidores de IKK, especialmente actividad de ???-ß cinasa, y, por lo tanto, son de uso en el tratamiento de las enfermedades moduladas por la actividad de IKK y la cascada de NF-KB. Estas enfermedades incluyen enfermedad neoplásica/proliferativa, inmunitaria e inflamatoria. En particular, los usos de los compuestos incluyen el tratamiento de cánceres, tales como cáncer hepatocelular o melanoma, pero también incluyen cáncer de intestino, cáncer de ovario, cánceres escamosos de cabeza y cuello y cervical, cánceres gástricos o pulmonares, oligodendrogliomas anaplásicos, glioblastoma multiforme o meduloblastomas ; y el tratamiento de artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad de intestino inflamatorio, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, esclerosis múltiple, diabetes, dermatitis atópica, enfermedad de injerto contra hospedero, lupus eritematoso sistémico, trastornos metabólicos., por ejemplo, diabetes mellitus de tipo II o trastornos neurológicos , por ejemplo, Alzheimer.

Los compuestos con los que la invención se relaciona pueden prepararse para la administración por cualquier ruta consistente con sus propiedades farmacocinéticas . Las composiciones administradas oralmente pueden estar en la forma de comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, pastillas, preparaciones líquidas o en gel , tales como soluciones o suspensiones parenterales orales, tópicas o estériles. Los comprimidos y cápsulas para la administración oral pueden estar en la forma de presentación de dosis unitaria, y pueden contener los excipientes convencionales, tales como agente aglomerantes, por ejemplo jarabe, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinilpirrolidona; rellenadores , por ejemplo lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricante de tableteo, por ejemplo, estearato de magnesio, talco, polietilenglicol o sílice; desintegrantes, por ejemplo, almidón de papa, o agentes humectantes aceptables, tales como lauril sulfato de sodio. Los comprimidos pueden ser recubiertos de acuerdo con los métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal. Las preparaciones líquidas orales pueden estar en la forma de, por ejemplo, suspensiones acuosas o aceitosas, soluciones, emulsiones, jarabes o elíxires, o pueden presentarse como un producto seco para la reconstitución con agua u. otro vehículo apropiado antes del uso. Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales, tales como agentes de suspensión, por ejemplo, sorbitol, jarabe, metilcelulosa , jarabe de glucosa, grasas comestibles hidrogenadas de gelatina; agentes emulsificantes , por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán, o acacia; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles) , por ejemplo, aceite de almendra, aceite de coco fraccionado, ésteres aceitosos, tales como glicerina, propilenglicol o alcohol etílico; conservadores, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico, y si se desea agentes saborizantes o colorantes convencionales.

Para la aplicación tópica a la piel, el fármaco puede elaborarse en una crema, loción o ungüento. Las formulaciones de crema o ungüento que pueden usarse para el fármaco son las formulaciones convencionales bien conocidas en la técnica, por ejemplo, como se describe en los libros de texto estándares de farmacéutica, tales como la British Pharmacopoeia .

Los compuestos de la invención pueden administrarse en forma inhalada. La generación de aerosol puede llevarse a cabo usando, por ejemplo, atomizadores de chorro accionados por presión o atomizadores ultrasónicos, que usan "de preferencia aerosoles dosificados accionados por propulsores o la administración libre de propulsores de compuestos activos micronizados de, por ejemplo, cápsulas de inhalación u otros sistemas de liberación de "polvo seco" .

Los compuestos activos pueden dosificarse como se describe dependiendo del sistema de inhalador usado. Además de los compuestos activos, las formas de administración pueden contener adicionalmente excipientes, tales como, por ejemplo, propulsores (por ejemplo, Frigen en el caso de aerosoles dosificados) , sustancias de superficie activa, emulsificantes , estabilizadores, conservadores, saborizantes , rellenadores (por ejemplo, lactosa en el caso de inhaladores en polvo) o, si es apropiado, compuestos activos adicionales.

Para los propósitos de inhalación, está disponible un gran número de sistemas con los que los aerosoles de tamaño de partícula óptimo pueden generarse y administrarse, usando una técnica de inhalación que es apropiada para el paciente. Además del uso de los adaptadores (espaciadores, expansores) y recipientes en forma de pera (por ejemplo, Nebulator®, Volumatic®) , y los dispositivos automáticos que emiten una atomización de chorro (Autohaler®) , para aerosoles dosificados, en particular en el caso de inhaladores de polvo, están disponibles un número de soluciones técnicas (por ejemplo, Diskhaler®, Rotadisk®, Turbohaler® o los inhaladores, por ejemplo, como se describe en EP-A-0505321) .

Para la aplicación tópica al ojo, el fármaco puede elaborarse en una solución o suspensión en un vehículo acuoso o no acuoso estéril apropiado. También pueden incluirse aditivos, por ejemplo, amortiguadores, tales como metabisulfito de sodio o edeato disódico; conservadores que incluyen agentes bactericidas y fungicidas, tales como acetato o nitrato de fenilo mercúrico, cloruro de benzalconio o clorhexidina y agentes espesantes, tales como hipromelosa. El ingrediente activo también puede administrarse parenteralmente en un medio estéril. Dependiendo del vehículo y la concentración usada, el fármaco puede ya sea suspenderse o disolverse- -en el vehículo. De manera ventajosa, los adyuvantes, tales como un anestésico local, agentes conservadores y amortiguadores pueden disolverse en el vehículo.

Los compuestos de la invención pueden usarse en conjunto con un número de sustancias, farmacéuticamente activas conocidas. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden usarse con citotóxicos, inhibidores de HDAC, inhibidores de cinasa, inhibidores de aminopeptidasa, inhibidores de proteasa, antagonistas de bcl-2, inhibidores de mTor y anticuerpos monoclonales (por ejemplo los dirigidos en los receptores del factor de crecimiento) . Los citotóxicos preferidos incluyen, por ejemplo, taxanos, platinas, anti-metabolitos, tales como 5-fluoracilo, inhibidores de topoisomerasa y similares. Los medicamentos de la invención que comprenden los derivados de aminoácidos de la fórmula (IA) o (IB) , tautómeros de los mismos o sales farmacéuticamente aceptables, N-óxidos, hidratos o solvatos de los mismos, por lo tanto, comprenden típicamente además un citotóxico o inhibidor de HDAC, un inhibidor de cinasa, un inhibidor de aminopeptidasa y/o un anticuerpo monoclonal.

Además, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende: (a) un derivado de aminoácido de la fórmula (IA) o (IB) , o una sal farmacéuticamente aceptable, N-óxido, hidrato o solvato de la misma; (b) un agente citotóxico, un inhibidor de HDAC, un inhibidor de cinasa, un inhibidor de aminopeptidasa, un inhibidor de proteasa, un antagonista de bcl-2, un inhibidor de mTor y/o un anticuerpo monoclonal ; y (c) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. También se proporciona un producto que comprende: (a) un derivado de aminoácido de la fórmula (IA) o (IB) , o una sal farmacéuticamente aceptable, N-óxido, hidrato o solvato de la misma; y (b) un agente citotóxico, un inhibidor de HDAC, un inhibidor de cinasa, un inhibidor de aminopeptidasa, un inhibidor de proteasa, un antagonista de bcl-2, un inhibidor de mTor y/o un anticuerpo monoclonal, para el uso separado, simultáneo o secuencial en el tratamiento del cuerpo humano o animal .

Síntesis Hay múltiples estrategias de síntesis para la síntesis de los compuestos (IA) o (IB) con las que la presente invención está relacionada, pero todas dependen de la química conocida, que se conoce por un químico orgánico de síntesis. De esta manera, los compuestos de acuerdo con la fórmula (I) pueden sintetizarse de acuerdo con los procedimientos descritos en la literatura estándar y son bien conocidos por los experimentados en la técnica. Las fuentes de literatura típicas son "Advanced organic chemistry, 4th Edition (Wiley) , J March, "Comprehensive Organic Transíormation" , 2nd Edition (Wiley), R.C. Larock, "Handbook of Heterocyclic Chemistry", 2 Edition (Pergamon) , A.R. Katritzky) , revisión de artículos tal como los encontrados en "Synthesis", "Ace. Chem. Res.", "Chem. Rev" , o las fuentes de literatura primaria identificadas por las búsquedas de la literatura estándar en línea o de las fuentes secundarias, tales como "Chemical Abstracts" or "Beilstein" .

Los compuestos de la invención pueden prepararse por un número de procesos descritos generalmente a continuación y más específicamente en los siguientes Ejemplos. En las reacciones descritas a continuación, puede ser necesario proteger los grupos funcionales reactivos, por ejemplo, hidroxilo, grupos amino y carboxi, en donde éstos se desean en el producto final, para evitar su participación indeseada en las reacciones [ver, por ejemplo, Greene, T.W., "Protecting Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, 1999] . Los grupos protectores convencionales pueden usarse en conjunto con la práctica estándar. En algunos casos, la desprotección puede ser la etapa final en la síntesis de un -compuesto de la fórmula general (IA) o (IB) , y los procesos de acuerdo con la invención descritos en la presente después se entiende que extienden a tal remoción de los grupos protectores .

Como se mencionó anteriormente, los compuestos con los que la invención está relacionada, son inhibidores de la familia IJCB, es decir IKK-a e ???-ß, y, por lo tanto, de uso en el tratamiento de enfermedades proliferativas celulares, tal como cáncer, y en el tratamiento de inflamación, en humanos y otros mamíferos.

Abreviaciones MeOH = metano1 EtOH = etanol EtOAc = acetato de etilo DCM = diclorometano DIBAL = hidruro de di-isobutilaluminio DMF = dimetilformamida DME = 1 , 2-dimetoxietano DMSO = sulfóxido de dimetilo DMAP = 4-dimetilaminopiridina TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano Na2C03 = carbonato de sodio HCl = ácido clorhídrico DIPEA = -diisopropiletilamina LiHMDS = bis (trimetilsilil) amida de litio MP-CNBH3 = cianoborohidruro de trietilamonio metilpoliestireno macroporoso NaH = hidruro de sodio NaOH = hidróxido de sodio NaHC03 = bicarbonato de sodio Pd/C = paladio sobre carbono PdCl2(dppf) = [1 , 1 ' -bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II).

EDCI = 1-etil -3 - ( 3 -dimetilaminopropil ) carbodiimida KOAc = acetato de potasio TBAI = yoduro de tetrabutil amonio mi = mililitro (s) g = gramo (s) mg = miligramo (s) mol = mol (es) mmol = milimol (es) Sat = saturado LCMS = cromatografía líquida de alta resolución/espectrometría de masa RMN = resonancia magnética nuclear RT = temperatura ambiente Los reactivos y solventes comercialmente disponibles (grado HPLC) se usaron sin purificación adicional. Los solventes se removieron usando un rotavapor Buchi . La irradiación de microondas se llevó a cabo usando un CEM Discovery modelo establecido a 300W. La purificación de los compuestos por cromatografía de columna instantánea se realizó usando gel de sílice, tamaño de partícula 40-63 m (malla 230-400) obtenida de Fluorochem. La purificación de los compuestos por HPLC preparativa se realizó en un sistema Agilent prep usando columnas Agilent prep-C18 de fase inversa (5 µ??, 50 x 21.2 mm) , gradiente 0-100% B (A = agua/0.1% de amoníaco o ácido fórmico al 0.1% y B = acetonitrilo/0.1% de amoníaco o ácido fórmico al 0.1%) durante 10 minutos, flujo = 28 ml/min, detección UV a 254 nm.

Los espectros de ""? RMN se registraron en un espectrómetro AV Bruker 400 ó 300 MHz en solventes deuterados. Los cambios químicos (d) están en partes por millón. El análisis de cromatografía de capa fina (TLC) se realizó con placas Kieselgel 60 F254 (Merck) y se visualizó usando luz UV.

HPLC/MS analíticos se obtuvieron como sigue:, columna Agilent Prep-C18 Scalar, de 5 µt? (4.6 x 50 mm, velocidad de flujo 2.5 ml/min) eluyendo con un gradiente de H20-MeCN que contiene 0.1% v/v de ácido fórmico durante 7 minutos con detección UV a 254 nm. Información del gradiente: 0.0-0.5 min: 95% de H20-5% de MeCN; 0.5-5.0 min; Rampa de 95% de H20-5% de MeCN a 5% de H20-95% de MeCN; 5.0-5.5 min: Retención a 5% de H20-95% de MeCN; 5.5-5.6 min: Retención a 5% de H20-95% de MeCN, la velocidad de flujo se aumentó a 3.5 ml/min; 5.6-6.6 min: Retención a 5% de H20-95% de MeCN, velocidad de flujo 3.5 ml/min; 6.6-6.75 min: Retorno a 95% de H20-5% de MeCN, velocidad de flujo 3.5 ml/min; 6.75-6.9 min: Retención a 95% de H20-5% de MeCN, velocidad de flujo 3.5 ml/min; 6.9-7.0 min: Retención a 95% de H20-5% de MeCN, la velocidad de flujo se redujo a 2.5 ml/min. Los espectros de masa se obtuvieron usando una fuente multimodo Agilent en el modo positive (APCI + ESI+) o negativo (APCI + ESI") .

Se establecen los ejemplos de tales métodos que pueden emplearse para la síntesis de los compuestos de la fórmula general (IA) y (IB) , pero no se limitan a las reacciones mostradas en los siguientes Esquema de Reacción 1-5.

El Esquema de reacción 1 ilustra la ruta de síntesis general para la preparación de los ejemplos descritos a continuación, usando la química de Suzuki tradicional para acoplar el éster (o ácido) de boronato relevante con el centro de tiofeno central . ( Intermediario 1 ) para dar el Intermediario 2 correspondiente. .

Esquema de Reacción 1 El Esquema de reacción 2 ilustra la ruta de síntesis para la preparación del Ejemplo 3 usando la química de Suzuki para acoplar el Intermediario 6 con el centro de tiofeno central (Intermediario 1) .

Esquema de Reacción 2 El Esquema de reacción 3 describe la ruta de síntesis seguida para la preparación del Ejemplo 4.

Esquema de Reacción 3 Ejemplo El Esquema de reacción 4 describe la ruta de síntesis seguida para la preparación del Ejemplo 6 y el Ejemplo 10.

Esquema de Reacción 4 Ejemplo 0 El Esquema de Reacción 5 describe la ruta de síntesis seguida para la preparación del Ejemplo 7 y el Ejemplo 11.

Esquema de Reacción 5 Intermediarios Intermediario 1 : 5-Bromo-2- (carbamoilamino) tiofen-3-carboxamida síntesis del Intermediario 1 descrita por las etapas 1-4 en el Esquema de reacción 1 se detalla dentro de WO 03104218.

Intermediario 2: 2- (carbamoilamino) -5- (3-formilfenil) tiofen-3 -carboxamida A una mezcla de 5-bromo-2- (carbamoilamino) tiofen-3-carboxamida (1.0 g, 3.79 mmol) , ácido 3 - formilfenilborónico (0.625 g, 4.17 mmol) y tetracis (trifenilfosfina) paladio (0.438 g, 0.379 mmol) en DME (50 mi) se adicionó una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (10 mi) . El recipiente de reacción se purgó con nitrógeno y se calentó a 90 °C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida usando un rotavapor. El residuo café oscuro resultante se disolvió en DCM (17 mi) y se agitó con solución de hidróxido de sodio 2M (8.5 mi) durante 20 minutos. Se adicionó éter dietílico (20 mi) y la mezcla se agitó durante 30 minutos adicionales. La suspensión resultante se sonicó durante 2 minutos. La filtración dio un precipitado, que se trituró con éter dietílico caliente para dar un sólido coloreado (440 mg) . LCMS: m/z 288 [M-H] \ m/z 290 [M+H] + .

Intermediario 3: Clorhidrato de 2 -metilalaninato de ciclopentilo El intermediario 3 se sintetizó usando la ruta mostrada 1 siguiente Esquema de Reacción 6.

Esquema de Reacción 6 Etapa 1. ciclopentanol EDQ, DMAP, OCM Etapa 1: N- (ter-butoxicarbonil) -2-metilalaninato ciclopentilo A una solución de N- (ter-butoxicarbonil) -2 -metilalanina (1.00 g, 4.92 mmol) en DCM (10 mi) a 0°C se adicionó ciclopentanol (0.83 mi, 9.84 mmol) , EDCI (1.06 g, 5.42 mmol) y por último DMAP (60 mg, 0.49 mmol) . La mezcla de reacción se calentó a RT y se agitó durante 18 horas. El DCM se removió in vacuo para dar un aceite claro. El residuo crudo se disolvió en EtOAc (100 mi) y se lavó con agua, NaHC03 1 M y salmuera. La fase orgánica se secó (MgS04) y se concentró in vacuo. El extracto crudo se purificó por cromatografía de columna (10% de EtOAc en heptano) para dar el producto deseado como un aceite claro (0.254 g, 20%) .

¾ RMN (300 MHz , CDCl3) d: 5.25-5.17 (1H, m) , 5.04 (1 H, br s) , 1.93-1.54 (8H, m) , 1.49 (6H, S) , 1.45 (9H, s) .

Etapa 2 - Clorhidrato de 2-metilalaninato de ciclopentilo (Intermediario 3) Se disolvió N- (ter-butoxicarbonil) -2-metilalaninato de ciclopentilo (0.254 g, 0.93 mmol) en THF (5 mi) y se calentó con HC1 4M/dioxano (2 mi) y la mezcla de reacción se agitó a RT durante 24 horas. La mezcla cruda se concentró a presión reducida y se trituró con Et20 para dar un precipitado blanco. Éste se lavó adicionalmente con Et20 para dar el producto deseado como un polvo blanco (0.16 g, 82 %) . 1H RMN (300 MHz, DMS0-d6) d: 8.58 (3H, br s) , 5.21-5.14 (1 H, m) , 1.93-1.78 (2H, m) , 1.74-1.53 (6H, m) , 1.45 (6H, s) .

Intermediario 4: 2 -metilalaninato de ter-butilo El intermediario 4 se sintetizó usando la ruta mostrada en el siguiente Esquema de Reacción 7.

Esquema de Reacción 7 Etapa 1: N- [ (benciloxi) carbonil] -2 -metilalaninato de ter-butilo A una solución de N- [ (benciloxi ) carbonil] -2 -metilalanina (1 g, 4.21 mmol) en DCM (10 mi anhidro), ciclohexano (10 mi) a 0°C bajo nitrógeno, se trifluoruro de boro dietil eterato (7 µ?, catalítico), después se adicionó 2,2,2-tricloroacetimidato de ter-butilo (1.51 mi, 8.43 mmol) en ciclohexano (10 mi) lentamente durante 30 minutos antes de dejar calentar a RT. La reacción se dejó agitar a RT durante 16 horas. A la mezcla de reacción cruda se adicionó 190 mg de NaHC03 y la reacción se filtró. Los licores madre se concentraron in vacuo. El extracto crudo se purificó por cromatografía de columna (10% EtOAc en heptano) para producir el producto deseado (0.863 g, 70%). ?? RM (300 MHz , CDC13) d: 7.39-7.31 (5H, m) , 5.46 (1 H, br s) , 5.10 (2H, s) , 1.54 (6H, s) , 1.45 (9H, s) .

Etapa 2: 2 -metilalaninato de ter-butilo (Intermediario 4) A una solución de N- [ (benciloxi) carbonil] -2 -metilalaninato de ter-butilo (0.86 mg, 2.90 mmol) en EtOAc (20 mi) se adicionó 100 mg de 10% catalizador de paladio sobre carbono. La mezcla se evacuó y se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 18 horas, se filtró a través de Celite®, se lavó con EtOAc y se concentró in vacuo. El producto se aisló como un aceite amarillo (0.45 mg, 96%) que se contuvo trazas de EtOAc. XH RMN (300 MHz, CDC13) d: 1.48 (9H, s) , 1.32 (6H ,s) .

Intermediario 5: Clorhidrato de 2 -amino-2 -etilbutanoato de ciclopentilo El intermediario 5 se preparó de una manera similar al intermediario 3 usando la ruta de síntesis descrita en el Esquema de reacción 6.

LCMS: m/z 200 [M+H]+.

Intermediario 6 : N- [3- (dihidroxiboril) benzoil] -2-metilalaninato de ciclopentilo A una solución de ácido 3-carboxi bencenborónico (200 mg, 1.2 mmol) en DCM anhidro (15 mi) a 0°C se adicionaron HOBt (162 mg, 1.2mmol), EDCI (230 mg, 1.2 mmol) y la mezcla se agitó a °C durante 20 min. Una solución del intermediario 3 (310 mg, 1.81 mmol) en DCM (5 mi) se adicionó y la mezcla se agitó a RT durante 4 horas. La reacción se diluyó con DCM (10 mi) y se lavó con HC1 acuoso 1 M, Na2C03 acuoso 1 M y salmuera. La fase orgánica se secó (MgS04) y se concentró a presión reducida para dar el producto deseado como un sólido blanco (198 mg, 90%). LCMS : m/z 320 [M+H]+.

Intermediario 7: 2- [ (3-bromobencil) amino] -2 -etilbutanoato de ciclopentilo A una solución de 3 -bromobenzaldehído (0.49 g, 2.64 mmol) en DCM anhidro (10 mi) bajo nitrógeno se adicionó el Intermediario 5 (0.75 g, 3.17 mmol) y la mezcla se dejó agitar durante 20 minutos antes de la adición de triacetoxiborohidruro de sodio (1.68 g, 7.93 mmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche después se apagó con agua (40 mi) . Las capas se separaron, la capa acuosa se extrajo con DCM y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04) , se filtraron y se evaporaron a sequedad para dar el producto crudo. La purificación por cromatografía de columna (50% de EtOAc en heptano) proporcionó el compuesto del título como un aceite incoloro (0.5 g, 52% de rendimiento). LCMS : m/z 369 [M+H]+.

Intermediario 8: 2 -etil-2- { [3 - (4 , 4 , 5.5 -tetrametil -1 , 3 , 2 -dioxaborolan-2-il)bencil] amino}butanoato de ciclopentilo 2- [ (3-bromobencil) amino] -2 -etilbutanoato de ciclopentilo (Intermediario 7) (0.5 g, 1.37 mmol) se disolvió en DMSO (10 mi) bajo una atmósfera de nitrógeno y se adicionó bis (pinacolato) diboro (0.52 g, 2.06 mmol) seguido de PdCl2(dppf) (0.056 g, 0.07 mmol) y acetato de potasio (0.2 g, 2.06 mmol) . La mezcla se calentó a 65°C durante 3 horas. La reacción se enfrió a RT y se dividió entre EtOAc (20 mi) y agua (20 mi) . La capa acuosa se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04 y se concentraron in vacuo para dejar un aceite café. La purificación por cromatografía de columna (50% EtOAc en heptano) proporcionó el compuesto del título como un aceite amarillo (0.32 g, 58% de rendimiento).

LCMS: m/z 416 [M+H] + .

Intermediario 9: N- (4-bromobencil) -2-metilalaninato de ciclopentilo El Intermediario 9 se preparó de una manera similar al Intermediario 7 usando 4-bromobenzalde ído y el Intermediario 3.

LCMS : m/z 341 [M+H] + .

Intermediario 10: 2-metil-N- [4- (4 , , 5, 5-tetrametil-l, 3 , 2-dioxaborolan-2 -il) bencil] alaninato de ciclopentilo El Intermediario 10 se preparó siguiendo procedimiento similar al Intermediario 8 usando Intermediario 9.

LCMS: m/z 388 [M+H] + .

Intermediario 11: (3-bromofenil) acetaldehído A una solución de 2- (3-bromofenil) etanol (4.9 g, 24.4 mmol) en DCM (20 mi) a 0°C se adicionó periodinano de Dess Martin (10.8 g, 25 mmol) y la mezcla se calentó a RT y se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con DCM (100 mi) y se agitó con una solución saturada de tiosulfato de sodio (100 mi) y NaHC03 saturado (100 mi) . Las capas se separaron y la capa orgánica se secó (MgS0 ) , se filtró y se evaporó a presión reducida para dejar el producto crudo como un aceite anaranjado (4.07 g, 84%). El producto se usó sin purificación. LCMS: m/z 200 [M+H] + .

Intermediario 12: N- [2- (3-bromofenil) etil] -2-metilalaninato de ciclopentilo El Intermediario 12 se preparó a partir de los Intermediarios 3 y 11, siguiendo un procedimiento similar al Intermediario 7.

LCMS: m/z 355 [ +H] + .

Intermediario 13: 2-metil-N- {2- [3- (4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-l , 3 , 2-dioxaborolan-2 - il ) fenil] etil } alaninato de ciclopentilo El Intermediario 13 se preparó a partir del Intermediario 12, siguiendo un procedimiento similar al Intermediario 8.

LCMS: m/z 424 [M+Na] .

Intermediario 14: (6-bromo-2-naftil) metanol A una solución del ácido 6 -bromo-2 -naftoico (1 g, 3.98 mmol) en THF (20 mi) a 0°C se adicionó dimetil sulfuro de borano 2 M en THF (0.53 mi, 5.97 mmol) porción por porción. La mezcla se calentó a RT y se agitó durante la noche. La reacción se enfrió a 0°C y se adicionó MeOH. La solución se concentró a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna (EtOAc en heptano) para proporcionar el compuesto del título (0.4 g, 89%) .

LCMS: m/z 238 [M+H] + .

Intermediario 15: 6-bromo-2-naftaldehído A una solución de ( 6 -bromo- 2 -naftil ) metanol (Intermediario 14) (0.84 g, 3.56 mmol) se adicionó óxido de manganeso (2.29 g, 26.45 mmol) y la suspensión se agitó a RT durante 48 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celite y se concentró a presión reducida. El producto se usó sin purificación. (0.8 g, 95%) . LCMS: m/z 236 [M+H]+.

Intermediario 16: N- [ ( 6 -bromo - 2 - naf ti 1 ) met i 1 ] - 2 -metilalaninato de ciclopentilo El Intermediario 16 se preparó a partir de los Intermediarios 3 y 15, siguiendo un procedimiento similar al Intermediario 7.

LCMS: m/z 391 [M+H]+.

Intermediario 17: 2 -metil -N- { [6 - ( 4 , 4 , 5 , 5 - tetramet i 1 - 1,3,2- dioxaborolan-2-il) -2-naftil] metil } alaninato de ciclopentilo El Intermediario 17 se preparó a partir del Intermediario 16, siguiendo un procedimiento similar al intermediario 8.

LCMS: m/z 438 [M+H] + .

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos ilustran la preparación de los compuestos específicos de la invención, y las propiedades inhibidoras de IKK de los mismos : E emplo 1 : N- {3- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] bencil} -2-metilalaninato de ciclopentilo A una solución de 2- (carbamoilamino) -5- (3-formilfenil) tiofen-3-carboxamida (Intermediario 2) (0.24 g, 0.83 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (8 tnl) bajo nitrógeno se adicionó el intermediario 3 (0.197 g, 1.24 mmol) y la mezcla se dejó agitar durante 20 minutos antes de la adición de triacetoxiborohidruro de sodio (0.528 g, 2.49 mmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se apagó con agua. Se removió tetrahidrofurano a presión reducida y el producto se extrajo con diclorometano (2 x 20 mi) . Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (MgS04) , se filtraron y se evaporaron a sequedad para dar el producto crudo. La purificación por HPLC preparativa proporcionó el compuesto del título (50 mg) . XH RMN (300 MHz , CD30D) d 7.74-7.67 (2H, m) , 7.61 (1 H, s), 7.53-7.44 (1 H, m) , 7.42-7.36 (1 H, m) , 5.40-5.32 (1 H, m) , 4.23 (2H, s) , 2.02-1.69 (8H, m) , 1.67 (6H, s). LCMS : m/z 445 [M+H]+.

El siguiente ejemplo se preparó de una manera similar al Ejemplo 1.

Ejemplo 2 : N- { 3 - [4 -carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] bencil) -2-metilalaninato de ciclopentilo Del Intermediario 2 y el Intermediario 4. 1H RM (300 MHz , CD3OD) d 7.75-7.68 (2H, m) , 7.62 (1 H, s) , 7.50 (1 H, 1, J=7.6 Hz) , 7.42-7.38 (1 H, m) . 4.22 (2Hf s) , 1.66 (6H, s) , 1.59 (9H, s) . LCMS : m/z 433 [M+H]+.

Ej emplo 3j N-{3- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil]benzoil}-2-metilalaninato de ciclopentilo A una solución del Intermediario 6 (198 mg , 0.62 mmol) en DME (4 mi) , se adicionó el Intermediario 1 (136 mg , 0.51 mmol) y tetrac is ( tri feni 1 fos f ina ) paladio (0.06 g) . Después se adicionaron 2 mi de NaHC03 saturado acuoso. La suspensión se desgasificó con nitrógeno y se calentó a reflujo durante 16 horas. La reacción se enfrió a RT, se vertió en agua (5 mi) , se extrajo con EtOAc (2 x 20 mi) . Las capas orgánicas se combinaron se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04) y se concentraron a presión reducida para proporcionar el producto crudo. La purificación por cromatografía de columna (4% de MeOH en DCM) dio el compuesto del título como un sólido anaranjado claro (195 mg , 25%) . 1H RMN (300 MHz , CD3OD ) d 7.97 (3H, t, J= 1.5 Hz), 7.74-7.69 (1 H, m) , 7.67-7.60 (2 H, m) , 7.44 (1 H, t, J=7.8 Hz) , 5.21-5.14 (1 H , m) , 1.89-1.58 (8H, m) , 1.55 (6H, s) . LCMS: m/z 459 [M+H]+.

Ej emplo 4j 2- ( {3- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] bencil }amino) -2-etilbutanoato de ciclopentilo A una solución del Intermediario 1 (0.19 g, 0.73 mmol) en DME (10 mi) bajo nitrógeno se adicionó 2-etil-2- { [3- (4,4,5, 5-tetrametil-l, 3 , 2-dioxaborolan-2-il ) bencil] amino}butanoato de ciclopentilo (Intermediario 8) (0.33 g, 0.8 mmol) seguido de Pd(PPh3)4 (0.083 g, 0.07 mmol) y NaHC03 acuoso saturado (1 mi) . La mezcla de reacción se agitó a 80°C durante la noche después se enfrió a RT, se dividió entre EtOAc (40 mi) y agua (40 mi) . La capa acuosa se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04 y se concentraron in vacuo. La purificación por HPLC preparativa proporcionó el compuesto del título como —un aceite amarillo (0.015 g, 4% de rendimiento) .

'H RMN (300 MHz , DMSO-Cf6) d: 11.04 (1 H, s) , 9.28 (2H, br s) 7.81-7.68 (3H, m) , (7.49-7.38 (3H, m) , 6.99 (1 H, br s) , 5.26 (1 H, m) , 4.12 (2H, m) , 2.01-1.91 (6H, m) , 1.71-1.66 (6H, m) , 0.94 (6H, 1, J=7.3 Hz) . LCMS : m/z 473 [M+H]+.

Los Ejemplos 5-7 se prepararon de una manera similar al Ejemplo 4.

Ej emplo 5j N-{4- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2- Del Intermediario 10 y el Intermediario 1. 1H RM (300MHz, DMSO-Gf6) d: 11.00 (1H, s) , 7.84 (2H, br s) . 7.47 (2H, d, J=8.1 Hz) , 7.34 (3H# d, J=8.1 Hz) , 6.99 (2H, br s) , 5.13-5.06 (1 H, m) , 3.59 (2H, br s) , 1.91- 1.77 (2H, m) ; 1.73-1.53 (6H, m) , 1.26 (6H, s) . LCMS: m/z 445 [M+H]+.

Ej emplo N- (2- {3- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] feniljetil) -2 -metilalaninato de ciclopentilo Del Intermediario 1 y el Intermediario 13.

XH RMN (300 MHz , DMS0-Cf6) d 11.00 (1 H, s) , 7.72 (1 H, s) , 7.4 (1 H, br s) , 7.27 - 7.38 (3H, m) , 7.07 (1 H, d, J=7.3 Hz) , 6.95 (2H, br s) , 5.01 (1 H, s) , 2.68 (4H, d, J=5.3 Hz) , 1.75 (2H, br. s.), 1.54 (6H, m) , 1.16 (6H, s) . LCMS : m/z 459 [M+H] +.

Ejemplo 7: N- ( {6- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] -2-naftil }metil) -2 -metilalaninato de ciclopentilo Del Intermediario 1 y el Intermediario 17.

XH RM (300 MHz , DMS0-d6) d 11.04 (1 H, br s) , 7.98-7.94 (1 H, m) , 7.92-7.85 (3H, m) , 7.80-7.68 (3H, m) , 7.51-7.45 (1 H, m) , 7.35 (1H, br s) , 7.02 (2H, br s) , 5.14-5.07 (1 H, m) , 3.75 (2H, m) , 1.93-1.77 (2H, m) , 1.74-1.52 (6H, m) , 1.28 (6H, s) . LCMS: m/z 495 [M+H]+.

Ejemplo 8j N-{3- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] bencil} -2 -metilalanina Del ej emplo 2.

A una solución de N- { 3 - [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) - -tienil] bencil} -2-metilalaninato de ter-butilo (Ejemplo 2) (30 mg, 0.07 mmol) en diclorometano (1 mi) se adicionó ácido trifluoroacético (1 mi) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El solvente se removió a presión reducida y el residuo se trituró en éter dietílico. El sólido resultante se colectó por filtración y se secó a presión reducida. La purificación por HPLC preparativa dio el compuesto del título (17 mg, 75%) .

XH RMN (300 MHz, CD3OD) d 7.74-7.68 (2H, m) , 7.63-7.60 (1 H, m) , 7.52-7.44 (1 H, m) , 7.42-7.37 (1 H, m) , 4.24 (2H( s) , 1.70 (6H, s) . LCMS: m/z 377 [M+H]+.

Ej emplo N-{3- [4-Carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] benzoil) -2 -metilalanina Del ejemplo 3.

A una solución de N- {3- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] benzoil} -2-metilalaninato de ciclopentilo (Ejemplo 3) (194 mg, 0.42 mmol) en tetrahidrofurano (5 mi) se adicionó una solución de hidróxido de litio (50 mg, 2.11 mmol) en agua (5 mi). La reacción se agitó a 40°C durante la noche. El solvente se removió in vacuo y al residuo se adicionó agua (2 mi) . El pH se ajustó a pH 5 usando HC1 1 M. El precipitado se colectó por filtración y se lavó secuencialmente con agua y éter dietílico antes de secar a presión reducida. El producto crudo se purificó por HPLC preparativa para proporcionar el compuesto del título (33 mg, 20%) . ¾ RMN (300 MHz, CD3OD) d 8.02-7.99 (2H, m) , 7.79-7.64 (2H, m) , 7.63 (1 H, s) , 7.45 (1 H, 1, J=7.8 Hz) , 1.60 (6H, s) . LCMS: m/z 781 [2M+H] +.

Los Ejemplos 10 y 11 se prepararon siguiendo el mismo procedimiento como para el Ejemplo 8.

Ejemplo 10: N- (2- {3- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] fenil) etil) -2-metilalanina Del ejemplo 6.

XH RMN (300 MHz, DMSO-de) d 11.0 (1 H, s) , 9.0 (1 H, br s) , 7.75 (1 H, s) , 7.65 (1H, s) , 7.45 (6H, m) , 7.15 (1 H, m) , 6.96 (2H, m) , 3.41 (4H, m) , 1.50 (6H, s) . LCMS: m/z 391 [M+H]+.

Ejemplo 11: N- ( {6- [4-carbamoil-5- (carbamoilamino) -2-tienil] -2-naftiljmetil) -2-metilalanina Del ejemplo 7.

? RM (300 MHz , DMS0-Cf6) d 11.06 (1 H, br s) , 8.02-7.87 (5H, m) , 7.80-7.71 (2H, m) , 7.63-7.56 (1 H, m) , 7.37 (1 H, br s) , 7.03 (2H, br s) , 4.07 (2H, s) , 1.39 (6H, s) .

Medición de la actividad biológica Prueba de la enzima ???ß La capacidad de los compuestos para inhibir la actividad de ???-ß cinasa se midió en una prueba realizada por Invitrogen (Paisley, UK) . La prueba bioquímica Z-LYTE™ emplea un formato de enzima acoplada, a base de fluorescencia y se basa en la sensibilidad diferencial de los péptidos fosforilados y no fosforilados a la escisión proteol ítica . El sustrato peptídico se marca con dos fluoróforos — uno en cada extremo — que forman un par FRET. En la reacción primaria, la cinasa transfiere gama-fosfato de ATP a un residuo de serina o treonina simple en un péptido FRET sintético. En la reacción secundaria, una proteasa de sitio específico reconoce y escinde los péptidos FRET no fosforilados. La fosforilación de los péptidos FRET suprime la escisión por el reactivo de desarrollo. La escisión interrumpe FRET entre los fluoróforos donador (es decir, cumarina) y aceptor (es decir, fluoresceína) en el péptido FRET, mientras que los péptidos FRET no escindidos, fosforilados mantienen FRET.

Un método radiométrico , que calcula la relación (la relación de emisión) de la emisión del donador a la emisión del aceptor después de la excitación del fluoróforo donador a 400 nm, se usa para cuantificar el progreso de la reacción.

La Reacción de Cinasa de 10 µ?? final consiste de 0.9-8.0 ng de IKBKB (???-ß) , 2 µ? de Ser/Thr 05 Peptide y ATP en HEPES 50 mM a pH 7.5, 0.01% de BRIJ-35, MgCl2 10 mM, EGTA 1 mM . La prueba se realiza en una concentración de ATP en, o cerca de la Km. Después de una incubación de Reacción de Cinasa de 60 minutos a temperatura ambiente, se adicionan 5 \il¡ de una dilución 1:128 del Reactivo de desarrollo. La placa de prueba se incuba durante 60 minutos adicionales a temperatura ambiente y se lee en un lector de placa de fluorescencia.

Los puntos de los datos duplicados se generan de una serie de dilución 1/3 log de una solución patrón del compuesto de prueba en DMSO. Se realizan nueve etapas de dilución desde una concentración máxima de 10 µ?, y se incluye un "no compuesto" blanco. Los datos se colectan y se analizan usando el elemento de programación (software) XLfit de IDBS . La curva de._la respuesta a la dosis se ajusta al modelo número 205 (modelo de dosis-respuesta sigmoide) . De la curva generada, se determina y se reporta la concentración que da 50% de inhibición.

Estimulación LPS de las células THP-1 Las células THP-1 se colocaron en placas en 100 µ? a una densidad de 4xl04 células/pozo en placas tratadas con cultivo de tejido de 96 pozos de fondo V y se incubaron a 37°C en 5% de C02 durante 16 horas. 2 horas después de la adición del inhibidor en 100 µ? de medio de cultivo tisular, las células se estimularon con LPS (cepa de E. coli 005: B5, Sigma) a una concentración final de 1 pg/ml y se incubaron a 37 °C en 5% de C02 durante 6 horas. Los niveles de TNF- se midieron de sobrenadantes libres de células por ELISA de emparedado (R&D Systems #QTA00B) .

Estimulación LPS de sangre completa de humano La sangre completa se tomó por punción venosa usando vacutainers heparinizados (Becton Dickinson) y se diluye en un volumen igual de medio de cultivo tisular RPMH 640 (Sigma) . Se colocan en placas 100 µ? en placas tratadas con el cultivo tisular de 96 pozos de fondo V. 2 horas después de la adición del inhibidor en 100 µ? de medio RPM11640, la sangre se estimuló con LPS (cepa de E. coli 005 :B5, Sigma) a una concentración final de 100 ng/ml y se incubó a 37 °C en 5% de C02 durante 6 horas. Los niveles de TNF-a se midieron de los sobrenadantes libres de células por ELISA de emparedado (R&D Systems #QTA00B) .

Los valores de IC50 se asignaron a uno de los tres intervalos como sigue: Intervalo A: IC50 < 500 nM Intervalo B: 500 nM < IC50 <1000 nM Intervalo C: IC50 > 1000 nM Tabla de resultados Actividad Actividad inhibidora Actividad inhibidora contra Número de inhibidora contra liberación de ej emplo contra ???ß liberación de TNFot de sangre THP-1 TNFcc de humano completa 1 A . A A 2 A A C 3 A C C 4 C " A C 5 A C B 6 B B A 7 C A C 8 A NR NR 9 A NR NR 10 A NR NR 11 A NR NR "NR" indica "No Relevante". Los ejemplos 8-11 son los análogos del ácido carboxílico resultantes de los ásteres de aminoácidos que se escinden dentro de las células. Cuando estos ácidos carboxílieos están en contacto con las células, no penetran en las células y por esto, no inhiben TNF-a en esta prueba.

Prueba de carboxilesterasa de células rotas Cualquier compuesto dado de la presente invención, en donde Ri es un grupo éster puede probarse para determinar si satisface el requerimiento que se hidroliza por las esterasas intracelulares , mediante la siguiente prueba.

Preparación del extracto celular Células tumorales U937 o HCT 116 (- 109) se lavaron en 4 volúmenes de PBS de Dulbecco (~ 1 litro) y se granularon a 525 g durante 10 minutos a 4°C. Esto se repitió dos veces y el granulado celular final se volvió a suspender en 35 mi de amortiguador de homogeneización frío (Trizma 10 mM , NaCl 130 mM , CaCl2 0.5 mM , pH 7.0 a 25°C) . Los homogene izados se prepararon por cavitación de nitrógeno (700 psi durante 50 minutos a 4°C) . El homogene i zado se mantuvo en hielo y se suplementaron con un cóctel de inhibidores a una concentración final de: Leupeptina 1 µ? Aprotinina 0.1 µ? E64 8 µ? Pepstatina 1.5 µ? Bestatina 162 µ quimios tat ina 33 µ? Después de la clarificación del homogene i zado celular por centrifugación a 525 g durante 10 minutos, el sobrenadante resultante se usó como una fuente de actividad de esterasa y se almacenó a -80 CC hasta que se requirió.

Medición de la escisión del áster La hidrólisis de los ásteres a los ácidos carboxílicos correspondientes puede medirse usando el extracto celular, preparado como anteriormente. Para este efecto se incubó el extracto celular (-30 g/volumen de prueba total de 0.5 mi) a 37°C en un amortiguador Tris-HCl 25 mM , NaCl 125 mM , pH 7.5 a 25°C. Al tiempo cero el áster (sustrato) después se adicionó a una concentración final de 2.5 µ? y las muestras se incubaron a 37°C durante el tiempo apropiado (usualmente de 0 u 80 minutos) . Las reacciones se detuvieron mediante la adición de volúmenes 3 x de acetonit ri lo . Para las muestras de tiempo cero el acetonitrilo se agregó antes del compuesto de éster. Después de la centrifugación a 12000 g durante 5 minutos, las muestras se analizaron para el éster y su ácido carboxílico correspondiente a temperatura ambiente por LCMS (Sciex API 3000, bomba binaria HP1100, CTC PAL) . La cromatografía se basó en una columna MeCN (75 x 2.1 mm) y una fase móvil de 5-95% de acetonitrilo en agua/ácido fórmico al 0.1% .

Prueba en sangre completa de humano La sangre heparinizada humana (17-IU/ml) se diluyó con un volumen igual de RPMI-1640 y luego se colocaron sub- al í cuotas en placas de mi c rot i tulac ión de 96 pozos (100Dl/pozo) . Los inhibidores de ???ß que se habían diluido serialmente en RPMI-1640 se adicionaron , a los .- pozos (100Dl/pozo) para dar un intervalo de concentraciones finales (5-10000 nM) . Después de la incubación durante 2 horas a 37°C, la producción de TNFn se estimuló durante 6 horas a 37°C mediante la adición de 10 DI de LPS (E. Coli 055:B5) para dar una concentración final de 100 ng/ml. Las placas después se centrifugaron durante 3 minutos a 800 g y después se midió el TNFD presente en el sobrenadante, usando un ELISA QuantiGlo Chemiluminescent (R&D Systems) .

Tabla 2 La prueba de sangre completa de humano mide la capacidad de los compuestos para inhibir la producción estimulada de LPS de TNF alfa en las células sanguíneas de humano mediadas por ???ß en un ambiente fisiológicamente relevante. Por lo tanto, la Tabla 2 ilustra que la conjugación del compuesto inhibidor de IKK padre al radical del éster de glicina a,a- disustituido que es hidrolizable por una carboxilesterasa intracelular (Ejemplo 1) conduce a una disminución significativa en la relación entre la potencia en las células y la enzima comparado con el compuesto padre (Compuesto 1: WO 2004063186) , lo que indica que la adición del radical de esterasa conduce a compuestos que muestran un nivel mejorado de la potencia de las células .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.