MX2010009479A

MX2010009479A - Activacion de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas por un extracto de ginseng.

Info

Publication number: MX2010009479A
Application number: MX2010009479A
Authority: MX
Inventors: Darryl J Adamko; Yingqi Wu; Kenneth L Rosenthal; Jacqueline Shan; Sharla Sutherland
Original assignee: Afexa Life Sciences Inc
Priority date: 2008-02-29
Filing date: 2009-02-27
Publication date: 2010-12-07
Also published as: EP2268295B1; EP2268295A2; JP5879037B2; WO2009106975A3; MY158195A; US20130295205A1; CA2716366C; BRPI0908541B1; PL2268295T3; SG188833A1; CN102014941A; NZ587615A; BRPI0908541B8; BRPI0908541A2; AU2009219793A1; CN102014941B; EP2268295A4; ES2539532T3; KR101664871B1; KR20100124304A

Abstract

La invención se dirige a fracciones de ginseng y métodos para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas, para prevenir, tratar o aminorar una afección en un sujeto al administrar al sujeto una cantidad efectivade una fracción de ginseng, una composición farmacéutica que comprende la fracción en combinación con otro medicamento o con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, o un artículo de alimentos que comprende la fracción. La fracción se puede hacer de Panax quinquefolius, o se puede seleccionar de CVT-E002, PQ2, PQ223 y fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2, PQ223.

Description

ACTIVACIÓN DE RESPUESTAS INMUNITARIAS INNATAS Y ADAPTATIVAS POR UN EXTRACTO DE GINSENG CAMPO DE LA INVENCION Esta invención se refiere a las fracciones de ginseng y a métodos para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección en un sujeto al administrar al sujeto una cantidad efectiva de una fracción de ginseng, una composición farmacéutica o articulo alimenticio que comprende la fracción. Tales condiciones incluyen alergias, asma, infecciones microbianas y virales, y cáncer. Las fracciones de ginseng se pueden usar como adyuvantes para vacunas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Un extracto soluble en agua patentado, de las raices del ginseng de Norteamérica {Panax quinquefolium) , CVT-E002, está comercialmente disponible como COLD-FX™. Este extracto difiere de otros productos asiáticos y americanos de ginseng en el contenido de polisacáridos y ginsenósidos , que consisten principalmente de poli-furanosil-piranosil-sacáridos. La calidad de lote a lote del producto -se certifica por la tecnología ChemBioPrint™, la cual asegura su consistencia química como farmacológica. Este extracto natural patentado se sabe que tiene efectos inmunomoduladores (Wang et al. 2001, 2004). El CVT-E002 mejora la proliferación de células del bazo en ratones, e incrementa la producción de interleucina 1 (IL-I), IL-6, factor de necrosis de tumor (TNF)-OÍ y óxido nítrico (NO) a partir de macrófagos del peritoneo in vitro. La administración de CVT-E002 a ratones incrementó los niveles de anticuerpos de inmunoglobulina G (IgG) en suero (Wang et al, 2001), y la dosificación diaria de CVT-E002 a los ratones con leucemia inducida viral incrementó las proporciones de macrófagos, y células NK en la médula ósea y bazo mientras reducía los números de células leucémicas (Miller, 2006) . En un estudio reciente sobre células mononucleares de sangre periférica humanas (PBMC) cultivadas con el virus vivo de la influenza, CVT-E002 fue efectivo en mejorar la producción de IL-2 e interferón ? (IFNy) (Jing et al, enviado). IL-2 e IFNy son citoquinas importantes de células T y NK y se asocian con respuestas inmunitarias adaptativas específicas de virus. En un estudio clínico, el complemento diario de dosis bajas de COLD-FX11M a adultos saludables incrementó la proporción de células NK en plasma (Predy et al., 2006).

Al ser la primera línea de defensa contra patógenos microbianos, tanto los macrófagos como las células NK son componentes importantes de la inmunidad innata. Estas células actúan inmediatamente para limitar la proliferación y distribución de agentes infecciosos a través de la liberación de agentes antimicrobianos tales como citoquinas, interferones y quimiocinas y por sus actividades fagociticas y citoliticas.

Ya que los estudios pre-clinicos sugirieron el uso potencial de CVT-E002 para la profilaxis de infecciones relacionadas con virus del tracto respiratorio superior, se efectuó un ensayo clínico que involucró 198 adultos mayores institucionalizados. Este estudio demostró que la administración diaria de CVT-E002 durante 4 meses durante una temporada de influenza, redujo el riesgo relativo de enfermedad respiratoria aguda debida a influenza y al virus sincitial respiratorio por hasta 89% (McElhaney et al, 2004). Otro estudio también demostró que CVT-E002 redujo significativamente la recurrencia de infecciones respiratorias en 323 adultos saludables de edades medias (Predy et al, 2005) . El tratamiento con CVT-E002 también redujo la severidad y duración de los síntomas con relación a infecciones del tracto respiratorio superior en adultos saludables. En un estudio controlado por placebo, de doble ciego, aleatorio, de 43 adultos residentes en la comunidad con una edad de 65 años o mayor, la ingestión diaria de CVT- E002 redujo el riesgo relativo y la duración de los síntomas respiratorios por 48% y 55%, respectivamente. La administración diaria de CVT-E002 demostró ser un medio terapéutico . seguro, natural de prevención de enfermedad respiratoria aguda en adultos mayores saludables.

El sistema inmunitario de los mamíferos ha evolucionado en sistemas de defensas, múltiples, en capas e interactivos para proteger contra las infecciones, lo cual se ha dividido ampliamente en inmunidad innata e inmunidad adaptativa. La inmunidad innata es la primera línea de defensa contra los patógenos microbianos y actúa casi inmediatamente para limitar la proliferación temprana y la distribución de agentes infecciosos a través de la activación de células que presentan antígenos y fagocíticas, tales como las células dendríticas y macrófagos, y el inicio de respuestas inflamatorias a través de la liberación de una variedad de citoquinas, quimiocinas y factores antimicrobianos, tales como interferones y defensinas. La inmunidad innata es evolutivamente antigua y durante muchos años su estudio fue ampliamente ignorado por los inmunólogos por ser relativamente no específico. Para la mayor parte, los humanos están protegidos contra la infección por el sistema inmunitario innato. Si organismos infecciosos penetran las defensas inmunitarias innatas, las defensas innatas facilitan y guían la generación de respuestas inmunitarias adaptativas que se dirigen contra determinantes altamente específicos que se expresan únicamente por el patógeno invasor. Estas respuestas dependen en la reconfiguración de genes específicos receptores de antígenos en células B y células T, y resultan en la producción de anticuerpos específicos de antígenos de alta afinidad (inmunidad humoral) e inmunidad mediada por células o células T. Los anticuerpos facilitan la remoción, destrucción o neutralización de patógenos extracelulares y sus toxinas. Las respuestas inmunitarias mediadas por células T ayudan a eliminar o controlar los patógenos intracelulares . En contraste a las respuestas inmunitarias innatas, las respuestas inmunitarias adaptativas tienen el distintivo de la memoria inmunitaria específica.

Se han intentado estudios previos para determinar la forma en que el sistema inmunitario innato hospedero detecta la infección y cómo la discrimina entre propia y patógenos o infecciosos no propios, El descubrimiento y caracterización de los receptores tipo Toll (TLRs) ha proporcionado una gran visión dentro del reconocimiento inmunitario innato y estableció un papel clave del sistema inmunitario innato en la defensa del hospedero contra la infección (Akira et al, 2006; Hargreaves and Medzhitov, 2005; Kawai and Akira, 2006; Philpott and Girardin, 2004; Seth et al, 2006). Los TLRs son moléculas clave en la inmunidad innata y adaptativa. El sistema inmunitario innato usa familias múltiples de receptores de reconocimiento de patrones codificados por lineas germinales (PRRs por sus siglas en inglés) para detectar la infección y disparar una variedad de mecanismos de defensa antimicrobianos (Janeway and Medzhitov, 1998). Estos PRRs son evolutivamente altamente conservados entre las especies desde plantas y moscas de la fruta hasta los mamíferos. La estrategia de reconocimiento inmunitario innato se basa en la detección de estructuras esenciales y altamente conservadas presentes en muchos tipos de microorganismos y ausente de las células hospederas (Janeway, 1992; Janeway and Medzhitov, 1999). Ya que los objetivos del reconocimiento inmunitario innato son patrones moleculares conservados, se denominan patrones moleculares asociados con patógenos (PAMPs por sus siglas en inglés). Los PAMPS tienen características importantes que los hacen objetivos ideales para registrar la inmunidad innata. Los PAMPs se producen solamente por microorganismos, y no por células hospederas. Esta es la base para la discriminación de propios e infecciosos no propios. Los PAMPs son conservados entre microorganismos de una clase dada, permitiendo a un número limitado de PRRs detectar la presencia de una amplia clase de patógenos invasores. Por ejemplo, un patrón en LPS permite que un PRR sencillo detecte la presencia de cualquier bacteria Gram-negativa . Los PAMPs son esenciales para la supervivencia microbiana y cualquier mutación o pérdida de PAMPs es ya sea letal para el organismo o reduce ampliamente su ajuste adaptado. Estas nuevas visiones dentro del reconocimiento inmunitario innato están revolucionando el entendimiento de la defensa inmunitaria, patogénesis, y tratamiento y prevención de las enfermedades infecciosas .

Los TLRs representan una familia de PRRs que son receptores de transmembrana evolutivamente conservados que detectan PAMPs y funcionan como receptores de la señalización. Los TLRs se descubrieron en Drosop ila donde juegan un papel en el desarrollo de la orientación ventral/dorsal de las moscas de la fruta (Stein et al., 1991). Cuando este gen fue mutado, las moscas que se desarrollaron se encontraron que estaban "toll", que es el modismo alemán para loco o "excéntrico". Además las moscas con la mutación de los Toll se encontró que eran altamente susceptibles a infecciones fúngicas (Lemaitre et al, 1996) . A la fecha, se han identificado 11 TLRs en mamíferos, cada uno registrando un conjunto diferente de estímulos microbianos y activando diferentes trayectorias de señalización y factores de transcripción que impulsan respuestas específicas contra patógenos (Kawai and Akira, 2005) . Los TLRs son glicoproteínas de membrana integrales de tipo I caracterizadas por dominios extracelulares que contienen diversas porciones de repetición ricas en leucina (LRR) , un dominio de transmembrana y un dominio de señalización citoplásmico homólogo con aquel del receptor de interleucina 1 (IL-IR) , denominado el dominio de homología Toll/IL-IR (TIR) (O'Neill, 2006). Los dominios LRR están compuestos de 19-25 porciones en tándem LRR, cada una de las cuales tiene 24-29 aminoácidos de longitud.

El TLR4 , el primer TLR de mamíferos descubierto, probó ser el receptor largamente buscado para el lipopolisacárido bacteriano Gram-negativo (LPS) (Medzhitov et al, 1997; Poltorak et al, 1998). El TLR2 reconoce los péptidoglicanos , además, a las lipoproteínas y los lipopéptidos de bacterias y micoplasma Gram-positivo (Takeda et al, 2003; Takeuchi et al, 1999) . El TLR2 puede formar heterodímeros con TLR1 o TLR6 para discriminar entre diacil y triacil lipopéptidos, respectivamente (Takeda et al, 2003). Además, TLR2 en colaboración con el receptor que no es TLR de dectina 1 media la respuesta al zymosan, encontrada en la pared celular de levadura (Gantner et al, 2003) . El TLR5 reconoce la flagelina, un componente de proteínas de los flagelos bacterianos (Hayashi et al, 2001) . El TLR1 1, un pariente cercano del TLR5, se encontró que era abundantemente expresado en el tracto urogenital de ratones y se asoció con la protección contra las bacterias uropatogénicas (Zhang et al, 2004), y se demostró recientemente que reconocía la proteína de tipo profilina del parásito protozoario Toxoplasma gondii (Yarovinsky et al., 2005). TLR3, 7, 8 y 9 reconocen ácidos nucleicos y no están expresados en la superficie celular, sino se expresan exclusivamente en los compartimientos del endosoma (Latz et al., 2004; Matsumoto et al, 2003) . El TLR3 está involucrado en el reconocimiento del ARN de hebra doble (dsRNA) generado durante la infección viral (Alexopoulou et al, 2001), mientras que los TLR 7 y 8 relacionados cercanamente reconocen los ARN(ss) de hebra viral sencilla ricos en guanosina o uridina (Diebold et al, 2004 ; Heil et al, 2004) y las moléculas sintéticas de tipo imidazoquinolina, imiquimod y resiquimod (R-848) (Hemmi et al, 2002; Jurk et al, 2002) . El TLR9 media el reconocimiento de las porciones de ADN CpG no metiladas bacterianas y virales (Hemmi et al, 2000) y también se demostró recientemente que reconocen los componentes no patogénicos del ADN, tales como la hemozoina de los parásitos del paludismo (Coban et al, 2005) . El TLR10 juega un papel en la trayectoria de inflamación mediada por patógenos, reconocimiento de patógenos y la activación de la inmunidad innata, pero el ligando TLR10 es actualmente desconocido.

Los TLRs también pueden dividirse en seis subfamilias importantes con base en la similitud de secuencias (Roach et al, 2005), cada una reconociendo PAMPS relacionados. La subfamilia que consiste de TLR1, TLR2 y TLR6 reconoce lipopéptidos, TLR3 reconoce a dsRNA, TLR4 LPS, TLR5 flagelina, y la subfamilia de TLR9 que incluye los TLR7 y TLR8 altamente relacionados reconocen ácidos nucleicos, De manera importante, la localización subcelular de los TLRs se correlaciona con la naturaleza de sus ligandos, más que con la similitud de secuencias (Hargreaves and Medzhitov, 2005) . TLR1, 2, 4, 5, 6 y 10 están presentes en la membrana de la superficie del plasma donde están involucrados en la trayectoria de inflamación mediada por patógenos y/o reconocen los componentes bacterianos y virales, mientras que los TLRs antivirales, TLR 3, 7, 8, y 9 se expresan en endosomas intracelulares . Ya que los ácidos nucleicos reconocidos por los TLRs también se encuentran en los ' vertebrados, su localización en los endosomas limita su reactividad a los ácidos nucleicos mismos (Barton et al, 2006) . TLR1 1 está presente en la superficie celular y es un receptor para las bacterias uropatogénicas y los parásitos protozoarios .

La señalización por TLRs es compleja y ha sido revisada en otras partes (Akira and Takeda, 2004; O'Neill, 2006).

Brevemente, todos los TLRs con la excepción de TLR3 señalizan a través del factor 88 de diferenciación mieloide de moléculas de adaptador (MyDSS) , una proteina citoplásmica que contiene un dominio de TIR y un dominio de muerte. Finalmente, NF-?? y MAPKs se activan cadena abajo de TRAF6 lo que lleva a la producción de citoquinas y quimiocinas proinflamatorias , tales como TNF-a, IL-6, IL- 1ß e IL- 12. Además de MyD88 , TLR3 y TLR4 señalizan a través de TRIF, otro adaptador que contiene TIR que se requiere para la producción de interferones de tipo I y genes dependientes del interferón de tipo I.

Los TLRs se expresan en una variedad de células inmunitarias y no inmunitarias . Los macrófagos murinos expresan TLR1-9, lo que refleja su importancia en el inicio de las respuestas proinflamatorias . Los DCs plasmacitoides (pDCs) que producen grandes cantidades de interferones de tipo I durante las infecciones virales expresan TLR7 y 9. Todos los DCs convencionales en el ratón expresan TLR 1, 2, 4, 6, 8 y 9, mientras que TLR3 está confinado al subconjunto DC de CD8+ y CD4- CD8- (Iwasaki and edzhitov, 2004) . En los humanos, la expresión de TLR9 se restringe a pDCs y células B (Bauer et al, 2001; Krug et al, 2001) .

Existe un gran interés en el entendimiento de la expresión de los TLRs en las células epiteliales de la mucosa (ECs) que sirven como la primera linea de defensa contra la mayoría de las infecciones. En nuestros estudios recientes (Yao X-D et al, 2007), nos hemos concentrado en el entendimiento de la expresión y regulación de los TLRs en ECs en el tracto genital de ratones y humanos. La microdisección por captura láser (LCM) se usó para mostrar que el ciclo del estro en ratones hembra tiene profunda influencia en la expresión de los TLRs en el epitelio vaginal. La expresión de mRNA de esencialmente todos los TLRs excepto TLR11 se incrementó significativamente durante el diestro y especialmente después del tratamiento con la progestina de acción prolongada Depo-Provera (Yao X-D et al, manuscrito enviado) . Estos hallazgos contribuyen a nuestro entendimiento de la defensa inmunitaria innata contra las infecciones de transmisión sexual, y potenciar la calidad de la salud reproductiva femenina.

El suministro a las mucosas de los ligandos de TLR, incluyendo CpG oligodesoxinucleótidos (ODN el cual es un ligando para TLR9), dsRNA, y flagelina, pueden inducir un efecto anti-viral innato que puede proteger a los ratones contra la prueba de estimulación intravaginal (IVAG) con HSV-2 (Ashkar and Rosenthal, 2002). Los estudios han demostrado que la administración intranasal de la glicoproteína de envolvente purificada (gB) de HSV-2 más ODN de CpG como un adyuvante indujeron una fuerte IgA e IgG especifica de gB en el tracto vaginal (que persiste a lo largo del ciclo del estro) asi como CTL especifico de gB sistémico y genital, y protegió contra la infección letal por HSV-2 de FVAG (Gallichan et al., 2001). Posteriormente, se demostró que la inmunización intranasal con VIH-1 suprimido de gpl20 inactivado más ODN de CpG indujo la IgA anti-VIH en el tracto genital y respuestas inmunitarias mediadas por células T especificas del VIH, incluyendo la producción de IFNy y ß-quimiocinas (Dumais et al, 2002). Además, los ratones inmunizados por vía intranasal con VIH-1 más CpG indujeron las células T de CD8+ en el tracto genital, proporcionando una protección de ciado cruzado contra la estimulación por IVAG con virus recombinantes de vacuna que expresan gag de VIH-1 de diferentes ciados (Jiang et al, 2005) . Más recientemente, aunque el tracto genital se ha considerado ser un sitio inductivo inmunitario pobre, especialmente después de la inmunización con antigenos no replicantes, la inmunización intravaginal (IVAG) de ratones hembra con la subunidad recombinante HSV-2 gB más CpG indujo niveles superiores de anticuerpos IgG e IgA específicos de gB en suero y lavados vaginales contra los ratones inmunizados solo con antígeno y los ratones inmunizados con gB más CpG estuvieron mejor protegidos contra la infección vaginal con HSV-2 (Kwant and Rosenthal, 2004). Así, es posible inducir respuestas inmunitarias protectoras que sigan a la inmunización con IVAG con un antígeno de proteína de subunidad no replicante con tal de que se use un adyuvante apropiado de la mucosa.

Estudios recientes han demostrado que los PAMPs que incluyen CpG DNA, dsRNA, y LPS pudieron inhibir el virus tipo 2 del herpes simplex 2 (HSV-2) y el virus de estomatitis vesicular (VSV) in vitro (Ashkar et al, 2003 Se 2004). Una dosis sencilla de ODN de CpG suministrado a través de la mucosa a la mucosa vaginal, en ausencia de cualquier antígeno viral, protegió contra la infección genital con dosis letales de HSV-2. Esta protección estuvo mediada por el sistema inmunitario innato, ya que sucedió en ratones con genes inactivados que carecen de células B y T. El suministro local de IVAG de ODN de CpG resultó en una rápida proliferación y el engrosamiento del epitelio vaginal y la inducción de un estado antiviral dependiente de TLR-9 que no bloqueó la entrada del virus pero inhibió la replicación viral en células epiteliales vaginales (Ashkar et al, 2003) . El suministro de la mucosa de dsRNA, el ligando para TLR3, protegió contra la infección genital por HSV-2 sin la inflamación local o sistémica observada con el ODN de CpG (Ashkar et al, 2004). Por lo tanto, el suministro local del ligando TLR3 puede ser un medio más seguro de protección contra la infección genital viral.

Los TLRs inducen un intervalo de respuestas dependiendo del tipo de células en el cual se activan (Ashkar and Rosenthal, 2002; Iwasaki and Medzhitov, 2004). Por ejemplo, el tratamiento de DCs con ADN de CpG que actúa a través de TLR9 activa los DCs a maduros, incluyendo la sobreregulacion de las moléculas HC de clase II y moléculas coestimuladoras , asi como la producción de citoquinas proinflamatorias, quimiocinas y potenciar la presentación de antigenos. Similarmente , el tratamiento de células B con CpG induce su activación y proliferación, secreción de anticuerpos asi como IL-6 y IL-10 y las células B se hacen resistentes a la apoptosis. La activación de células inmunitarias por medio de ADN de CpG induce una respuesta dominada por Thl.

Los mecanismos por los cuales los PRRs median la defensa del hospedero contra los patógenos son el foco de una investigación intensa. Debido a su capacidad de potenciar respuestas inmunitarias innatas, existe la necesidad de estrategias novedosas para usar ligandos, agonistas o antagonistas sintéticos de PRRs (es decir, " inmunológicos innatos") como agentes autónomos para proporcionar protección o tratamiento contra la infección con bacterias, parásitos y virus intracelulares . Además, la activación del sistema inmunitario innato a través de los PRRs al usar sus respectivos ligandos o agonistas representa una estrategia para potenciar respuestas inmunitarias contra patógenos específicos, haciendo a los agentes que señalizan por medio de los PRRs, adyuvantes potenciales para vacunas.

Existe la necesidad de una fracción o composición natural, herbal, que active específicamente las respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para tratar condiciones asociadas tales como alergias, asma, infecciones virales y microbianas, y cáncer sin provocar los efectos colaterales perjudiciales o incomodidad. Los tipos de respuestas inmunitarias son bien conocidos. Las respuestas Thl se caracterizan por la generación de células T asesinas y determinados anticuerpos en respuesta a patógenos intracelulares y defectos intracelulares tales como cánceres. Las respuestas de Th2 combaten los patógenos extracelulares . Las reacciones alérgicas se presentan en respuesta a sustancias ambientales (es decir, alérgenos), y son el resultado de respuestas específicas de Th2. Las respuestas de Th2 se caracterizan por la generación de otros tipos específicos de anticuerpos y son típicas de las reacciones alérgicas, en las cuales el alérgeno es confundido con un patógeno en la superficie de la mucosa y dispara una respuesta inmunitaria que resulta en síntomas tales como ojos llorosos, inflamación de las vías respiratorias y contracción de las células musculares de las vías respiratorias en los pulmones. La activación de TLR induce las células que presentan antigenos para producir citoquinas que favorecen las respuestas inmunitarias del tipo Thl, con lo que se evita o reduce el desarrollo de respuestas perjudiciales de Th2 debidas a exposición a los alérgenos.

Las alergias se caracterizan específicamente por la activación excesiva de glóbulos blancos denominados mastocitos y basófilos por IgE, lo que resulta en una respuesta inflamatoria extrema. Cuando una persona propensa a alergias se expone inicialmente a un alérgeno, se hacen grandes cantidades del correspondiente antígeno específico IgE. Las moléculas de IgE se unen a la superficie de los mastocitos (en el tejido) o basófilos (en la circulación). Los mastocitos se encuentran en los pulmones, piel, lengua y revestimientos de la nariz y el tracto intestinal. Cuando un anticuerpo IgE en un basófilo o mastocito encuentra su alérgeno específico, el anticuerpo IgE señaliza al mastocito o basófilo para liberar químicos tales como histamina, heparina, y sustancias que activan las plaquetas sanguíneas y atraen células secundarias tales como eosinófilos y neutrófilos. El mastocito o basófilo activado también sintetiza nuevos mediadores, incluyendo prostaglandinas y leucotrienos . Estos mediadores químicos provocan los síntomas asociados con las alergias, que incluyen silbidos, estornudos, ojos llorosos, y comezón. Las reacciones alérgicas comunes incluyen eccema, urticaria, · fiebre del heno, asma, alergias a los alimentos, y reacciones a venenos de insectos que pican tales como avispas y abejas.

Una exacerbación del asma es un deterioro serio en la función del pulmón de un paciente que resulta a menudo en la hospitalización e incluso la muerte. El asma se presenta cuando se inflaman los conductos principales del aire de los pulmones, los tubos bronquiales. Los músculos de las paredes bronquiales se endurecen, y las células en los pulmones producen moco adicional estrechando además las vías respiratorias, provocando un silbido menor hasta dificultad severa en la respiración. El asma se dispara con frecuencia por una infección viral respiratoria, tal como el resfriado común, pero otros irritantes tales como humo de cigarrillos, ácaros del polvo, caspa de los animales, polen de plantas, contaminación del aire, desodorantes y perfume pueden hacer más frecuentes, severos e incontrolables los síntomas del asma. Otros disparadores del asma incluyen el ejercicio, aire frío, y estrés emocional. La mayoría de las exacerbaciones del asma se precipitan por infecciones comunes por virus en las vías respiratorias. En los niños, al ser atópica y tener una infección por virus son ambos factores importantes de riesgo para ser admitido en un hospital por una enfermedad con sibilancia. Aunque está clara la importancia clínica de los ataques del asma y específicamente la exacerbación viral del asma, las razones por las que los pacientes con asma se enferman tanto después de virus por resfriado común permanecen pobremente entendidas.

Normalmente, las infecciones virales provocan una entrada de neutrófilos dentro de las vías respiratorias con un componente celular mononuclear grande de células T, predominantemente CD8+. Sin embargo, se ha vuelto evidente que las infecciones virales pueden producir un intervalo de respuestas inflamatorias, incluyendo eosinofilia de las vías respiratorias, dependiendo de la condición pre-existente del hospedero. En individuos atópicos, la infección experimental por rinovirus incrementa el reclutamiento de los eosinófilos a las vías respiratorias después de la prueba de estimulación de antígenos y provoca una reactividad creciente en las vías respiratorias en comparación con los individuos no alérgicos. Después de la infección intranasal con rinovirus, las biopsias de las vías respiratorias inferiores de individuos asmáticos contienen eosinófilos crecientes, lo cual persiste incluso en la convalecencia. En pacientes con asma, la presencia de eosinófilos de vías respiratorias durante los periodos de exacerbaciones ha sido bien establecida. El hallazgo de los eosinofilos en las vías respiratorias durante la exacerbación del asma se vuelve de alguna manera paradójico, considerando que estas exacerbaciones se disparan a menudo por infección viral. Aunque la asociación de los eosinofilos y sus productos de desgranulación en las vías respiratorias se ha descrito durante la infección por virus en pacientes con asma, se desconoce si los eosinofilos están activos en respuesta a los virus y cómo pudiera suceder esta activación.

Para que suceda una exacerbación por asma, el entendimiento actual sugiere que se pueden activar las células efectoras (es decir, eosinofilos, mastocitos, basófilos, neutrófilos. La Figura 1 ilustra un modelo de liberación de mediador de eosinofilos inducido por virus en las vías respiratorias lo cual resulta en una hiper-reactividad de las vías respiratorias por medio de la disfunción del control neuronal del músculo liso de las vías respiratorias. El virus o antigeno del virus se presenta en las células T de memoria. Las células T activadas (CD4) liberan un factor de desgranulación soluble desconocido, probablemente una citoquina tal como GM-CSF. Estas células T también pueden expresar ligandos de superficie celular, por ejemplo, ICAM-I. Los eosinofilos responden al mediador soluble, ligandos de superficie celular, o combinación de los mismos con liberación de diversos mediadores eosinófilos (es decir proteina básica importante de eosinófilos, eosinofil peroxidasa, RANTES) .

En los asmáticos, la liberación del mediador de eosinófilos inducida por virus en las vias respiratorias se correlaciona con el desarrollo de la exacerbación del asma. Para que se involucre el eosinófilo en el desarrollo de exacerbaciones del asma inducidas por virus, debe responder al virus ya sea indirectamente por medio de otra célula o directamente. Este proceso representaría la liberación del mediador de eosinófilos inducida por virus.

Los médicos occidentales han estado renuentes a recetar medicinas herbales debido a la carencia de investigación científica sobre sus propiedades preventivas y terapéuticas. Sin embargo, las medicinas herbales no requieren un tiempo de desarrollo prolongado y altos costos que se encuentran normalmente en los fármacos sintéticos. Además, están fácilmente disponibles y le ofrecen al sujeto una alternativa más cómoda y permisible con efectos colaterales mínimos en comparación con los medicamentos o vacunas de prescripción.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la presente invención se dirige a un método de tratamiento de una afección susceptible a tratamiento por activación de la señalización innata de inmunidad en un sujeto que necesita de tal tratamiento, que comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de al menos una fracción de ginseng. En una modalidad, la afección se selecciona de una alergia, asma, infección viral, infección microbiana o cáncer. En una modalidad, la infección viral es de un virus transmitido en la mucosa o respiratorio que incluye, pero no se limita a, influenza, corona virus, herpes, virus sincitial respiratorio, Rhabdoviridae, o virus de inmunodeficiencia humana.

En una modalidad, la fracción se hace de un ginseng seleccionado de Panax quinquéfolius , Panax trifo'íia, Panax ginseng, Panax japonicus, Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis, Panax elegatior, Panax wangianus, Panax bipinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, o ginseng rojo. En una modalidad, la fracción es una fracción de Panax quinquéfolius . En una modalidad, la fracción se selecciona de CVT-E002, PQ2, PQ223 fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223. En una modalidad, la fracción es CVT-E002. En una modalidad, CVT-E002 modula la transducción de señal desde un receptor tipo Toll. En una modalidad, el receptor tipo Toll es el receptor tipo Toll 2. En una modalidad, el receptor tipo Toll es un heterodimero del receptor tipo Toll 2 y del receptor tipo Toll 6. En una modalidad, el receptor tipo Toll es un heterodimero del receptor tipo Toll 2 y receptor tipo Toll 1. En una modalidad, el receptor tipo Toll es el receptor tipo Toll 4. En una modalidad, CVT-E002 induce la sobre-regulación de linfocitos y células que presentan antigenos, secreción de citoquinas, secreción de factores anti-virales , o combinaciones de los mismos.

En una modalidad, la presente invención se dirige a una fracción de ginseng para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección. En una modalidad, la fracción se hace a partir de un ginseng seleccionado de Panax quinquéfolius , Panax trifolia, Panax ginseng, Panax japonicus , Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis, Panax elegatior, Panax wangianus, Panax bipinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, o ginseng rojo. En una modalidad, la fracción es una fracción de Panax quínquefolius . En una modalidad, la fracción se selecciona de CVT-E002, PQ2, PQ223 o fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223. En una modalidad, la fracción es CVT-E002.

En una modalidad, la presente invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende una fracción de ginseng en combinación con otro medicamento o con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables incluyendo artículos de alimentos para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección. En una modalidad, la fracción se hace a partir de un ginseng seleccionado de Panax quiñquefolius , Panax trifolia , Panax ginseng, Panax japonicus , Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis , Panax elegatior, Panax wangianus , Panax bipinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, o ginseng rojo. En una modalidad, la fracción es una fracción de Panax quiñquefolius . En una modalidad, la fracción se selecciona de CVT-E002, PQ2, PQ223 o fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223- En una modalidad, la fracción es CVT-E002. ¦ En una modalidad, la presente invención se dirige a un artículo de alimentos que comprende una fracción de ginseng para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección. En una modalidad, la fracción se hace a partir de un ginseng seleccionado de Panax quiñquefolius , Panax trifolia , Panax ginseng, Panax japonicus , Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis , Panax elegatior, Panax wangianus , Panax bipinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, o ginseng rojo. En una modalidad, la fracción es una fracción de Panax quinquéfolius . En una modalidad, la fracción se selecciona de CVT-E002, PQ2, PQ223 o fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223. En una modalidad, la fracción es CVT-E002.

En otra modalidad, la presente invención se dirige al uso de una fracción de ginseng para la preparación de una composición farmacéutica o un articulo de alimentos para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección. En una modalidad, la afección se selecciona de una alergia, asma, infección viral, infección microbiana o cáncer. En una modalidad, la infección viral es a partir de un virus transmitido en la mucosa o respiratorio incluyendo influenza, corona virus, herpes, virus sincitial respiratorio, Rhabdoviridae, y virus de inmunodeficiencia humana. En una modalidad, la fracción se hace a partir de un ginseng seleccionado de Panax quínquefolius , Panax trifolia, Panax ginseng, Panax japonicus , Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis , Panax elegatior, Panax wangianus , Panax bipinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, o ginseng rojo. En una modalidad, la fracción es una fracción de Panax quínquefolius . En una modalidad, la fracción se selecciona de CVT-E002, PQ2, PQ223 o fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223. En una modalidad, la fracción es CVT-E002.

En otra modalidad, la presente invención se dirige a un método para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección en un sujeto que necesita de tal activación al administrar una fracción de ginseng o una composición farmacéutica, que comprende la fracción en combinación con otro medicamento o con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables incluyendo artículos de alimentos, al sujeto.

Todavía en otra modalidad, la presente invención se dirige a un método para prevenir, tratar o aminorar una afección asociada con la activación de la señalización innata de inmunidad que comprende modular la transduccion de señal a partir de receptores tipo Toll al administrar una fracción de ginseng a un sujeto que lo necesita.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra un modelo de trabajo de mediador eosinófilo inducido por virus liberado en las vías respiratorias .

La Figura 2 muestra eosinófilo peroxidasa liberado de eosinófilos humanos después del co-cultivo con virus de parainfluenza y varias combinaciones de linfocitos autólogos, células dendriticas, y macrófagos (p<0.001). Cada barra es la media + SEM de al menos doce experimentos usando diferentes donadores.

La Figura 3 muestra que la proliferación de linfocito (como se mide por incorporación de H3-timidina) se presenta después de seis días en cultivo (34°C, 5% C02) con virus de parainfluenza y células que presentan antigeno (es decir, macrófagos y células dendriticas) . Cada barra es la media ± SEM de al menos cinco experimentos usando diferentes donadores para virus activo. Se obtuvieron resultados similares con RSV (datos no mostrados) .

La Figura 4 muestra los resultados de citometría de flujo para caracterizar linfocitos en co-cultivo con células dendriticas .

La Figura 5 muestra una tabla que enlista citoquinas/quimiocinas medidas por ELISA/Reflector , n=l, Las flechas representan valores con relación al control respectivo apropiado.

La Figura 6 muestra que. la proliferación de linfocito (como se visualiza por microscopio de luz y medido por incorporación de H3-timina) se presenta después de seis días en cultivo (34°C, 5% C02) con linfocitos, CVT-E002 y células dendríticas .

Las Figuras 7A-7D muestran los resultados de análisis de citometria de flujo de presentación de antigeno y maduración DC. La Figura 7A muestra las subpoblaciones de células. La Figura 7B muestra resultados de selección de células para absorción y degradación de DQ-OVA bajo condiciones diferentes. Los valores representan el porcentaje de células dentro de cada categoría que son positivos en DQ-OVA. La Figura 7C muestra la evaluación de maduración DC por medio del tamaño y granularidad (los valores representan el porcentaje de células totales presentes en cada categoría). La Figura 7D son imágenes de citometria de flujo que representan las subpoblaciones de DC sin (izquierda) y con (derecha) tratamiento de CVT-E002.

Las Figuras 8A y 8B muestran que el tratamiento con CVT- E002 estimula la producción de IL-6 (Figura 8A) e IFN-ß (Figura 8B) en células RA 264.7 in vitro.

La Figura 9 muestra que el tratamiento con CVT-E002 estimula la producción de óxido nítrico (NO) in vitro.

La Figura 10 muestra la producción de IL-6 por monocitos/macrófagos humanos primarios después de la incubación con CVT-E002.

Las Figuras HA y 11B muestran que CVT-E002 inhibe significativamente la replicación de VSV in vitro.

La Figura 12 muestra la producción de IL-6 durante tratamiento con CVT-E002 o HT-1001 de macrofagos peritoneales C57/B6 y MyD88-/-.

Las Figuras 13A y 13B muestran producción de IL-6 (Figura 13A) o IFN-B (Figura 13B) durante el tratamiento con CVT-E002 o HT-1001 de macrofagos peritoneales C57/B6 and MyD88-/-.

La Figura 14 muestra que el tratamiento con CVT-E002 sobre un periodo de 24 horas estimula la producción de IL-8 en células 293 transíectadas hTLR2, hTLRl/2, hTLR2 / 6 y hTLR4 (Pam3CSK/LPS Controls) . hTLR4 representa la co-expresión de hTLR4 con MDR y CD14.

La Figura 15 muestra que el tratamiento con CVT-E002 sobre un periodo de 48 horas estimula la producción de IL-8 en células 293 transfectadas con hTLR2, hTLRl/2, hTLR2/6 y hTLR4 (Pam3CSK/LPS Controls) . hTLR4 representa la coexpresión de hTLR4 con MDR y CD 14.

Las Figuras 16A y 16B muestran que el tratamiento con CVT-E002 inhibe el desarrollo de hiperrespuestas de las vías respiratorias (AHR) (Figura 16A) y reduce la cantidad de inflamación de las vías respiratorias eosinofilica (Figura 16B) .

La Figura 17A y 17B demuestra que el suministro de CVT-E002 a las interfaces mucosales ofrece protección de un virus (HSV-2) suministrado a las mismas superficies mucosales. La Figura 17A muestra registros de patología vaginal de ratones C57BL/6 que se les da CVT-E002, HT1001 o PBS IVAG seguido por estimulación con HSV-2 IVAG. La Figura 17B es el porcentaje de supervivencia de ratones C57BL/6 que se les da CVT-E002, HT1001 o PBS IVAG seguido por estimulación con HSV-2 IVAG.

Serán aparentes aspectos y ventajas adicionales en vista de la descripción, que sigue. Se entenderá, sin embargo, que la descripción detallada y los ejemplos específicos, aunque indican modalidades preferidas de la invención, se dan sólo a modo de ilustración, ya que varios cambios y modificaciones dentro del espíritu y alcance de la invención serán aparentes para aquellos expertos en la técnica a partir de esta descripción detallada.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Cuando se describe la presente invención, todos los términos no definidos en la presente tienen sus significados reconocidos en la técnica comunes. En la medida en que la siguiente descripción es de una modalidad específica o un uso particular de la invención, se pretenden que sólo sea ilustrativa, y no limitante de la invención reivindicada. La siguiente descripción se pretende que cubra todas las alternativas, modificaciones y equivalentes que se incluyen en el espíritu y alcance de la invención, como se define en las reivindicaciones adjuntas.

Como se usa en la presente y en las reivindicaciones, los términos y frases establecidas en seguida tienen los significados que siguen.

"Biocompatible" significa que genera una respuesta del hospedero indeseable no importante para la utilidad pretendida. Más preferiblemente, los materiales biocompatibles son no tóxicos para la utilidad pretendida. De esta manera, para utilidad en humanos, biocompatible es más preferiblemente no tóxico a humanos o tejido humano.

"Portador" significa un vehículo apropiado que es biocompatible y farmacéuticamente aceptable, incluyendo por ejemplo, uno o más diluyentes, excipientes, adyuvantes, saborizantes, o sustancias encapsulantes sólidas, semisólidas o líquidas que son apropiadas para administración.

"Sujeto" significa humanos u otros vertebrados. El sujeto puede ser un niño o un adulto.

Un "alimento funcional" es similar en apariencia a, o puede ser, un alimento convencional que se consume como parte de una dieta usual, y se demuestra que tienen beneficios fisiológicos y/o reduce el riesgo de enfermedad, más allá de las funciones nutricionales básicas, es decir, contienen un ingrediente activo.

Un "nutracéutico" es un producto aislado o purificado de alimentos que se vende generalmente en formas de medicina no asociadas usualmente con alimentos. Un nutracéutico deberá tener un beneficio fisiológico o proporcionar protección contra enfermedad.

Un "adyuvante de vacuna" significa cualquier sustancia o compuesto capaz de promover una respuesta inmunitaria incrementada o aumentada cuando se agrega a una vacuna.

Una "vacuna" significa cualquier compuesto o preparación de antigenos diseñados para estimular una respuesta inmunitaria normal. La vacuna puede ser profiláctica o terapéutica .

"Cantidad efectiva" y/o "cantidad terapéutica" significan una dosificación suficiente para proporcionar prevención, tratamiento y/o aminoramiento del estado de enfermedad a tratarse. Esto variará dependiendo del paciente, la enfermedad y el tratamiento efectuado. Por ejemplo, en caso de una infección vírica, una "cantidad efectiva" es tal cantidad necesaria para mejorar sustancialmente la probabilidad de tratar la infección, en particular la cantidad que mejora la probabilidad de prevenir exitosamente la infección o eliminar la infección cuando se presenta.

Una "fracción" está destinada a referirse a una preparación concentrada obtenida de la extracción de una planta o parte de la planta con un solvente apropiado tal como, por ejemplo, agua, etanol, una mezcla del mismo, aceites o cualquier otro solvente apropiado bien conocido en el estado de la técnica de extracción de planta. La fracción o extracto puede usarse como tal si el farmacológicamente aceptable, o el solvente de las soluciones resultantes se remueve y el residuo se usa como tal o después de un trabajo adicional, por ejemplo, después de resolver o volver a suspender en un solvente apropiado. El término "planta" se entiende que significa la planta entera y partes de la planta que comprenden los ingredientes activos, por ejemplo, las hojas, los tallos, los frutos o raices.

"Ginseng" está destinado a referirse a cualquier variedad y tipo de ginseng incluyendo, pero no limitado a, aquellos enlistados enseguida.

TABLA 1. Variedades y Tipos de Ginseng Se entenderá por aquellos expertos en la técnica que hay muchos otros géneros de plantas del género Panax que pertenecen a las Araliáceas de las cuales pueden obtenerse fracciones de ginseng y usarse dentro del contexto de la presente invención. El término "ginseng" también incluye ginseng silvestre o procesado. El ginseng silvestre es ginseng que no se ha plantado y cultivado domésticamente, pero crece naturalmente y el cosechado del cual se encuentra en crecimiento. El ginseng procesado incluye, por ejemplo, ginseng fresco o verde, ginseng blanco, y ginseng rojo. El ginseng fresco o verde es ginseng crudo cosechado en el campo. El ginseng blanco se obtiene al secar ginseng fresco, y el ginseng rojo se obtiene al ahumar ginseng fresco seguido por secado del ginseng vaporizado.

Una "fracción de ginseng" o "fracciones de ginseng" está destinado a referirse a cualquier variedad y tipo de ginseng como se enlista en la Tabla 1 o se describe enseguida, y subfracciones obtenidas de estas fracciones de ginseng, que exhiben la actividad de respuestas inmunitarias adaptativas e innatas activadoras para prevenir, tratar o aminorar una afección en un sujeto, como se verifica al conducir una o más evaluaciones farmacológicas in vitro o in vivo.

"CVT-E002" está destinado a referirse a una fracción de ginseng ejemplar que se obtiene de Panax quinquéfolius, y que tiene propiedades inmunoreguladoras (como se describe previamente en. las Patentes de Estados Unidos de América Nos. 6,432,454; 7,067,160; 7,186,423 y 7,413,756 que se incorporan en la presente para referencia) . CVT-E002 exhibe la actividad adicional de respuestas inmunitarias adaptativas e innatas activadoras como se describe en 1.a presente.

"PQ2" está destinado a referirse a una fracción de ginseng ejemplar que se obtiene de Panax quinquéfolius, y que tienen propiedades inmunoreguladoras como se describe previamente en las Patentes de los Estados Unidos de América Nos. 6,432,454; 7,067,160; 7,186,423 y 7,413,756 que se incorporan en la presente para referencia.

"PQ223" está destinado a referirse a una fracción de ginseng ejemplar que se obtiene de Panax quinquefolius, y que tiene propiedades inmunoreguladoras como se describe previamente en las Patentes de Estados Unidos de América Nos. 6,432,454; 7,067,160; 7,186,423 y 7,413,756 que se incorporan en la presente para referencia.

Se apreciará por aquellos expertos en la técnica que las fracciones de plantas o partes de planta diferente al ginseng, o fracciones sintéticas que pueden igualmente usarse bien en el presente contexto, están dentro del alcance de la presente invención, en cuanto sus propiedades químicas y actividades sean suficientemente similares a la fracción de ginseng usada en la presente.

La presente invención se refiere a una fracción de ginseng, o una composición farmacéutica o artículo alimenticio que comprende la fracción, para activar respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección. Además, la presente invención se refiere a una fracción de ginseng, o una composición farmacéutica o artículo alimenticio que comprende la fracción, para la activación del sistema inmunitario innato y adaptativo a través de receptores de reconocimiento de patrón (PPRs), tales como los receptores tipo Toll, para tratar, prevenir o aminorar varias .afecciones en un sujeto. Tales afecciones incluyen, pero no se limitan a, infecciones virales y microbianas, alergias, asma, y cáncer. Conforme al conocimiento de los inventores, esta es la primera vez que una fracción derivada de una planta natural se ha mostrado para activar específicamente el sistema inmunitario innato del mamífero por medio de PRRs . En una modalidad, la fracción de ginseng es una fracción de Panax quinquéfolius . En una modalidad, la fracción de ginseng se selecciona del grupo que consiste de CVT-E002, PQ2, PQ223 y fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223 - En una modalidad, la fracción de ginseng es CVT-E002.

La fracción de ginseng se prepara típicamente al secar primero y pulverizar la planta de ginseng o partes de planta y luego realizar un proceso de extracción usando un solvente apropiado, típicamente agua, etanol, mezcla de etanol/agua, metanol, butanol, iso-butanol, acetona, hexano, éter de petróleo u otros solventes orgánicos. La fracción o extracto puede entonces evaporarse además y concentrarse de esta manera para proporcionar un extracto seco por medio de secado por rocío, secado en horno al vacío, o secado por congelado.

Los procesos para hacer fracciones de ginseng ejemplares seleccionadas del grupo que consiste de CVT-E002, PQ2, PQ223 y fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223r de un extracto de agua soluble de la porción de raíz de Panax quinquéfolius se han descrito previamente en Patentes de Estados Unidos de América Nos. 6,432,454; 7,067,160; 7,186,423 y 7,413,756, las descripciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia.

Una vez preparada, la fracción de ginseng se evalúa para asegurar y confirmar la actividad de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas activadoras al conducir una o más evaluaciones farmacológicas in vitro o in vivo. En la presente invención, tales evaluaciones incluyen, pero no se limitan a, un estudio in vitro de los efectos de una fracción de ginseng ejemplar, CVT- E002, en la replicacion del virus (ver Ejemplos 1 y 2) y función celular dendritica (ver Ejemplo 3). Para la presente invención, cualquiera de las evaluaciones farmacológicas es apropiada, con la condición de que se enfoquen sobre la indicación de las actividades anteriores en cualquier fracción de ginseng, una muestra representativa de un lote de la fracción de ginseng en el evento de manufactura a gran escala, o una subfracción de la fracción de ginseng. La calidad lote a lote del producto puede certificarse por la tecnología ChemBioPrint™, que asegura su consistencia química así como farmacológica, como se describe en la Patente de los Estados Unidos de América No. 6,156,291 que se incorpora en la presente para referencia .

Además, la presente invención se dirige al uso de la fracción de ginseng sola o en combinación con otro medicamento, en la preparación de una composición farmacéutica o un artículo alimenticio apropiado para activar respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para tratar, prevenir o aminorar una afección en un sujeto. En una modalidad, la fracción de ginseng es una fracción de Panax quinquéfolius . En una modalidad, la fracción de ginseng se selecciona del grupo que consiste de CVT-E002, PQ2, PQ223 y fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223. En una modalidad, la fracción de ginseng es CVT-E002.

Además, la presente invención' se dirige a una composición farmacéutica que comprende la fracción de ginseng en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Aquellos expertos en la técnica son familiares con cualquier portador farmacéuticamente aceptable que podría ser útil a este respecto, y por lo tanto el procedimiento para hacer composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención no se discutirá en detalle. De forma apropiada, las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de tabletas, cápsulas, líquidos, pastillas para chupar, lociones, aerosoles, soluciones apropiadas para inyección o supositorios.

Las composiciones orales pueden incluir un diluyente inerte o un portador comestible. Para el propósito de administración terapéutica oral, la fracción de ginseng puede incorporarse con excipientes y usarse en la forma de comprimidos, pastillas para chupar, o cápsulas, por ejemplo, cápsulas de gelatina. Las composiciones orales también pueden prepararse usando un portador fluido para uso como un lavado bucal. Los agentes de enlace farmacéuticamente compatibles u otros materiales portadores pueden incluirse como parte de la composición. Tales agentes de enlace y portadores pueden ser un aglutinante tal como celulosa microcristalina , goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidón o lactosa, un agente desintegrante tal como ácido algínico, o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato de magnesio; un agente mejorador de flujo tal como dióxido de sílice coloidal; un agente endulzante tal como sacarosa o sacarina; o un agente saborizante.

Para administración por inhalación, los' compuestos se suministran en la forma de un rocío en aerosol de un recipiente o dispensador a presión que contiene un propelente apropiado, por ejemplo, un gas tal como dióxido de carbono, o un nebulizador.

La administración sistémica también puede ser por medios transmucosales o transdérmicos . Para administración transmucosal o transdérmica, se usan penetrantes apropiados para la barrera a permearse en la formulación. Tales penetrantes se conocen generalmente en el arte. La administración transmucosal puede realizarse a través del uso de rocíos nasales, supositorios o enemas de retención para suministro rectal. Los supositorios pueden incluir bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao y otros glicéridos. Para administración transdérmica, los compuestos activos se formulan en ungüentos, bálsamos, geles, o cremas como se conoce generalmente en el arte.

La fracción de ginseng también puede prepararse con portadores que protegerán los agentes activos contra la eliminación rápida del cuerpo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes, recubrimientos y sistemas de suministro microencapsulados.

La fracción de ginseng puede usarse sola o en combinación con otro medicamento. Las fracciones de ginseng de la invención son especialmente apropiadas para coadministración con un agente quimioterapéutico o como un suplemento a terapia de radiación, ya que los pacientes con cáncer se conoce que tienen supresión seria del sistema inmunitario. Las fracciones de ginseng también pueden usarse como inmunomoduladores o adyuvantes para vacunas.

Pueden prepararse artículos alimenticios sólidos, semi-sólidos o líquidos diversos para incluir la fracción de ginseng como un ingrediente activo. Los ejemplos no limitantes de tales artículos alimenticios incluye cereal, pasta, productos de repostería (por ejemplo, galletas, pasteles, caramelos, gomas, caramelos macizos), de nutrición, barras de reemplazo de comida o botanas, yogurt, gelatina, jaleas, budines, sopas, una base de frutas o vegetales, bebidas (por ejemplo, jugos, refrescos, bebidas energéticas deportivas, agua embotellada, leche, productos de soya) , y alimentos para niños y bebes (por ejemplo, fórmulas infantiles, leche en polvo modificada, alimento para bebes) . Además, la fracción de ginseng puede usarse como ingrediente activo en alimentos funcionales, nutracéuticos, o suplementos dietéticos .

Las formulaciones de la fracción de ginseng puede perder alguna actividad con el añejamiento y de esta manera se preparan ya sea en formas estables, o se preparan listas para administración, por ejemplo en kit multicomponente de manera que se evite el añejamiento y se maximiza la efectividad de la fracción de ginseng. Los kits o recipientes apropiados son bien conocidos por mantener las fases de las formulaciones separadas hasta el momento de uso. Por ejemplo, un kit que contiene la fracción de ginseng en forma en polvo puede empacarse separadamente del portador estéril tal como solución salina, alcohol o agua, y posiblemente otros ingredientes en cantidades especificas de dosificación para mezclar al momento de uso. La fracción de ginseng puede proporcionarse en un infusor tipo "bolsa de té", bolsita o saquito, para generar formulaciones líquidas al momento del uso. El infusor tipo bolsa de té es ventajoso en que la bolsita puede servir como filtro para partículas pequeñas del polvo que pueden ser perjudiciales con ciertos tipos de administración (por ejemplo, por medio de inyección o infusión) . Las partículas también pueden removerse, por ejemplo, por filtración.

Las dosificaciones de fracciones de ginseng de acuerdo con la invención dependen de la afección particular a tratarse, así como la edad, sexo y condición de salud general del paciente. Sin embargo, las dosificaciones apropiadas pueden encontrarse en el rango entre 1 y 5000 mg/kg de peso corporal por día, con entre 1 y 10 dosis diarias. La dosificación preferida es 400 mg diariamente para uso crónico y preventivo. Para usos agudos, se administran inicialmente dosis significativamente más altas. Por ejemplo, podrán administrarse 1800 mg el primer día dividido en tres dos, podrán administrarse 1200 mg el segundo día dividido en tres dosis y podrán administrase 900 mg el tercer día dividido en tres dosis. Posteriormente, podrán administrarse 200-400 mg diariamente hasta que se reducen los síntomas. Las fracciones de ginseng pueden administrarse oralmente, por medio de inyección o infusión, tópicamente, nasalmente, ocularmente, vaginalmente o rectalmente.

La fracción de ginseng de esta invención es efectiva en la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar varias afecciones en un sujeto. Adicionalmente, ya que la fracción de ginseng se prepara de un producto comestible, natural, se reduce el potencial de efectos secundarios. Se discute enseguida la capacidad de una fracción de ginseng para estimular las respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una infección vírica, alergia y asma, y/o se demuestra en los Ejemplos usando una fracción de ginseng ejemplar, CVT-E002.

CVT-E002 modula la actividad del sistema inmunitario innato para producir factores inflamatorios y anti-víricos . El tratamiento de células monocíticas de murino in vitro con CVT-E002 y la posterior exposición al virus de herpes simplex tipo 2 o estomatitis vesicular resulta en niveles significativamente elevados de IL-6, interferon-ß y producción de óxido nítrico en una manera dependiente de la dosis, mientras que los cultivos tratados de control y no tratados fueron negativos (Ejemplo 1, Figuras 8A, 8B y 9) . Similarmente , la incubación de monocitos/macrófagos humanos primarios con CVT-E002 por cuarenta horas resulta en una producción dependiente de la dosis importante de IL-6 (Figura 10) .

Usando el virus de estomatitis vesicular etiquetado con proteina fluorescente verde (VSV-GFP) , el CVT-E002 de forma importante inhibe la replicación del virus in vitro (Figuras HA y 11B) . El CVT-E002 puede proteger contra una variedad de infecciones víricas transmitidas sexualmente, incluyendo VIH-1. Los resultados descritos en la presente soportan la aplicación tópica de CVT-E002 para activar rápidamente el sistema inmunitario de la mucosa innato e inducir un estado antivírico local que protege las superficies de la mucosa contra infección con agentes transmitidos sexualmente. Este enfoque puede ser más seguro y menos susceptible a la selección de patógenos resistentes ya que deberá usar más "microbicidas naturales" y las respuestas inmunitarias de la mucosa innata evolucionariamente antiguas para protección.

La señalización por todos los TLR (excepto TLR3) ocurre a través del gen de respuesta primario de diferenciación de mieloide 88 (MyD88) , una proteína adaptadora que activa el factor de transcripción NF-KB. Para determinar si las respuestas de citoquina después del tratamiento CVT-E002 fueron dependientes en la señalización MyD88, cultivos de macrófago peritoneales se establecieron de ratones con genes inactivados MyD88 (MyD88-/-) o de tipo natural C57B1/6 y trataron con o sin CVT-E002 (Ejemplo 4). La producción de tanto IL-6 como IFN-ß después del tratamiento CVT-E002 fue dependiente de MyD88, indicando que CVT-E002 activa la producción de citoquinas proinflamatorias y anti-viricas en células inmunitarias con base en la estimulación de la señalización TLR.

Para determinar cuáles TLR se activan por CVT-E002, las células HEK293 se utilizaron las cuales se construyeron para expresar establemente genes TLR humanos específicos (Ejemplo 5, Figuras 14 y 15) . Aunque CVT-E002 no estimula la producción IL-8 de células que expresan hTLR4 solo, los resultados muestran que CVT-E002 estimula la producción IL-8 de células que expresan hTLR4 y MD2-CD14 en una manera dependiente de dosis en dos diferentes puntos de tiempo. De forma interesante, CVT-E002 también estimula células que expresan TLR2 humano en una manera dependiente de la dosis. Ya que TLR2 también puede formar heterodímeros con TLR1 y TLR6, la estimulación de células que expresan hTLR2 solo o hTLR2/l y hTLR2 /6 se comparó. La incubación con CVT-E002 resulta en producción IL-8 dependiente de la dosis en cada una de estas líneas celulares, aunque las células que expresan hTLR2 solo consistentemente producen de manera importante niveles IL-8 superiores. En los experimentos que comparan las cuatro líneas con cuentas de célula equivalentes, el volumen de la activación inmune innata de CVT fue por medio de TLR2. Usando las células que expresan TLR individuales, se encontró que CVT-E002 demuestra una señal mínima por medio de TLR4, que es el PRR innato para el lipopolisacárido (LPS) (Figura 14). En general, los resultados sugieren que las tracciones de ginseng (por ejemplo, CVT-E002) pueden activar el sistema inmunitario innato por medio de TLR. Esto puede contar para sus efectos protectores anti-infecciosos e indica que las fracciones de ginseng pueden ser útiles como adyuvantes para vacunas potenciales para ayudar a estimular la inmunidad adaptativa e innata contra los ingredientes de la vacuna, por ello hace la vacuna más efectiva.

En vista de la capacidad de CVT-E002 para activar las respuestas inmunitarias adaptativas y/o innatas para inhibir la replicación del virus, los inventores han encontrado que CVT-E002 también es útil en la prevención, tratamiento o alivio de otras afecciones asociadas con la activación de la señalización innata de inmunidad incluyendo, pero no limitado a, alergias y asma.

Con base en los modelos in vitro de alérgeno/antígeno, se ha desarrollado un sistema de co-cultivo celular que incuba los virus de las vías respiratorias con glóbulos blancos humanos aislados usando virus de parainfluenza tipo I (PIV) y virus sincitial respiratorio (RSV) . Estos virus se eligieron debido a que son virus de las vías respiratorias ssARN que frecuentemente infectan a humanos a lo largo de sus vidas, y se asocian con exacerbaciones del asma.

Como se muestra en la Figura 2, los virus en la presencia de eosinófilos no inducen directamente la liberación de eosinófilo peroxidasa (EPO) . Al contrario, los virus inducen liberación de EPO solo cuando los eosinófilos se incuban con combinaciones particulares de linfocitos, células dendriticas, y macrófagos (es decir, los últimos dos son células que presentan antigeno) . Las células que presentan antígeno solo con virus y eosinófilos no inducen liberación de EPO. No ocurre la liberación de EPO en cualquier combinación en la ausencia de virus. De esta manera, el virus cultivado con células que presentan antígeno, aparece para activar los linfocitos para inducir la liberación de EPO de eosinófilos. La inactivación UV del virus no previene este efecto.

La liberación de EPO se eligió como una medición de la liberación mediadora debido a su importancia en la función del eosinófilo, sus propiedades anti-viricas , y la experiencia en su medición. Cuando PIV o RSV se incuban con eosinófilos solo, no se aprecia liberación de EPO, sugiriendo que la desgranulación del eosinófilo directa no es posible. Los resultados negativos similares se apreciaron por otros usando rinovirus. Los donadores de leucocito son adultos con antecedente atópico que muestran eosinofilia de sangre periférica. Ya que PIV y RSV son infecciones comunes, estos donadores deberán tener inmunidad a este virus en la forma de células T de memoria. En el presente modelo, la proliferación de linfocito ocurre en respuesta a PIV y RSV pero de nuevo únicamente cuando se co-cultiva con células que presentan antígeno. Como se muestra en la Figura 3, la proliferación de linfocito ocurre después de seis días en cultivo con el virus de parainfluenza y células que presentan antigeno (es decir, macrófagos y células dendriticas) , con mayor proliferación observada con células dendriticas comparadas con macrófagos. La fitohemaglutinina (PHA, 5 pg/ml) con linfocitos solo sirven el control positivo. La producción de citoquinas (IFN-? y GMCSF) se encontraron en este co-cultivo, aunque su fuente o relevancia para la inducción de liberación de EPO no se ha determinado.

Similar a los resultados para la estimulación del virus, CVT-E002 no puede inducir directamente la proliferación de linfocito; sin embargo, una respuesta proliferativa fuerte se observa cuando CVT-E002 se cultiva con células dendriticas (Ejemplos 2 y 3) . La proliferación de linfocito se presenta después de seis días en cultivo con linfocitos, CVT-E002 y células dendriticas. Puede existir un ligero incremento en la proliferación cuando CVT-E002 se agrega a los pozos con virus. Usando citometria de flujo para caracterizar las células, se observó la expresión incrementada de HLA-DR en células dendriticas estimuladas con CVT-E002. Los linfocitos proliferados fueron CD4 positivos y demuestran expresión incrementada del marcador de activación CD25. La estimulación LPS sirve como el control positivo. Sin CVT-E002 o virus, no se observó proliferación ni sobre regulación CD25 del co-cultivo de células dendriticas con linfocitos. La estimulación CVT-E002 induce expresión incrementada de CD25 de linfocitos CD4+ similares a aquellos apreciados en la infección de virus sola. La combinación aumenta además la expresión .

El asma atópica/alérgica es una enfermedad Th2. El CVT-E002 es capaz de producir las respuestas Thl (ejemplo 2, Figura 5) y esta tendencia Thl tiene el potencial para inhibir la respuesta Th2 y de esta manera usarse como un terapéutico para enfermedades atópicas/alérgicas . En un modelo ampliamente usado de asma atópica/alérgica, por ello los ratones se sintetizaron con OVA i.p y alumbre y luego con prueba de estimulación con OVA para iniciar la enfermedad alérgica en las vías respiratorias, el CVT-E002 fue capaz de prevenir el desarrollo de AHR y disminuir la cantidad de inflamación de las vías respiratorias eosinofilicas (Ejemplo 7, Figuras 16a y 16b). En los animales.no sensibilizados de control no se presentó enfermedad atópica/alérgica mientras que los ratones que se sensibilizaron, alimentados por sonda con solución amortiguadora salina, y luego la prueba de estimulación con OVA desarrolla una enfermedad atópica/alérgica robusta en las vías respiratorias que consiste de inflamación de las vías respiratorias eosinofilicas y AHR. En ratones de prueba sensibilizados para OVA, alimentados por sonda con CVT-E002, y luego la prueba de estimulación con OVA se inhibieron tanto la inflamación de las vías respiratorias eosinofilicas como AHR para metacholina inhalada.

El CVT-E002 puede ser útil en el tratamiento de asma que se provoca por ya sea infecciones víricas respiratorias u otros irritantes y disparadores. Aunque más adultos se expondrán a las mismas infecciones de virus comunes cada año, un subconjunto de pacientes con asma reaccionará con función del pulmón disminuida. Las propiedades de CVT-E002 pueden ser benéficas para tales pacientes. Como se describe en la presente y en los Ejemplos, el CVT-E002 puede ser útil al modular la respuesta para la infección del virus en los pacientes con asma al inhibir la replicación del virus y/o al favorecer una respuesta inmune Thl. La inhibición de la replicación del virus es benéfica, ya que disminuye el grado de inflamación y obstrucción de las vías aéreas posteriores. La promoción de una respuesta inmune Thl es benéfica ya que contrarresta la respuesta Th2 involucrada en las reacciones Atópicas.

Además del tratamiento de asma debido a las infecciones víricas respiratorias, el CVT-E002 también puede ser efectivo para el tratamiento de asma provocado por otros irritantes y disparadores. Tales irritantes y disparadores incluyen, pero no se limitan a, alérgenos de interiores tales como ácaros domésticos, pieles de animales, cucarachas y hongos; alérgenos de exteriores tales como polen y mohos; contaminantes de aire del interior tales como humo del cigarrillo; contaminante de aire del exterior tales como ozono, óxidos de nitrógeno, aerosoles ácidos y partículas; exposiciones ocupacionales ; alimentos y aditivos de alimento; fármacos tales como aspirina y fármacos anti-inflamatorios no esferoidales y bloqueadores beta; rinitis; sinusitis; poliposis; reflujo gastroesofágico; fluctuaciones hormonales; aire frió seco; y ejercicio.

Las propiedades inmunoraoduladoras de CVT-E002 también pueden ser benéficas para pacientes, ya que CVT-E002 potencia la liberación de citoquinas, los interferones de linfocitos y/o células dendriticas y se involucra en la interacción de linfocitos y células que presentan antigeno.

En la descripción de arriba y los siguientes ejemplos es para entenderse que la mención de la modalidad preferida de CVT-E002 es ejemplar solamente y la utilidad descrita en actividades deberá ser apropiada para todas las fracciones de ginseng que tienen la actividad deseada.

La invención ahora se aclarará además por los siguientes Ej emplos .

EJEMPLOS Ejemplo 1 - Efecto CVT-E002 en la replicación del virus in vitro .

Se investigó la capacidad de varias dosis de CVT-E002 para inhibir la replicación del virus en células monociticas de murino in vitro. Varias dosis (0, 10, 100 y 500 g/ml) de CVT-E002 y HT-1001 (una fracción de ginseng ejemplar comprende ginsenósidos Rbl y Rgl y se describe en la Patente de E.U.A. No. 6,083,932) como control (250-2000 yg) se disolvieron en solución amortiguadora PBS y diluyeron a concentraciones finales en medio de cultivo de tejido completo y agregaron a células de macrófago de murino RA -264 a 37°C in vitro. Después del tratamiento de las células durante 24 ó 48 horas, los cultivos celulares tratados y no tratados se expusieron a virus simple de herpes tipo 2 (VSH-2) o virus de estomatitis vesicular (VSV) . La replicación del virus se evaluó usando ensayos de la placa. Los sobrenadantes de los cultivos CVT-E002 y de control se recolectaron en varias veces después del tratamiento y evaluaron para IFN tipo I, TNFa, IL-6 y óxido nítrico (NO) usando ELISA. Los niveles significativamente elevados de IL-6 (Figura 8A) , ?? ß (Figura 8B) y NO (Figura 9) se produjeron por células RAW después del tratamiento con CVT-E002 en una manera dependiente de la dosis. Los cultivos no tratados y tratados con control fueron negativos. Los datos en la producción de citoquina y titulación vírica se examinaron para las correlaciones .

El CVT-E002 también se probó para la estimulación de TNFa e IFNa. El TNFa se evaluó en tanto grupos tratados con CVT-E002 como HT-1001. Los resultados de IFNa fueron variables, posiblemente debido a un ELISA pobre (datos no mostrados) . De manera importante, la incubación de cultivos de monocito/macrófago humanos primarios con CVT-E002 resulta en producción dependiente de la dosis importante de IL-6 (Figura 10). El VSV preparado por ingeniería genéticamente para expresar la proteína fluorescente verde (VSV-GFP) también se utilizó para mostrar que CVT-E002 de manera importante inhibe la replicación del virus in vitro (Figuras HA y 11B) .

Ejemplo 2 - Mecanismo por el cual la actividad anti-virica se induce por CVT-E002 Las células dendríticas (DC) se co-cultivaron con linfocitos y se usó citometría de flujo para caracterizar los linfocitos. La estimulación LPS se usó como un control positivo. El RSV y PrV se encontraron para inducir proliferación de células T CD3+CD4+CD25+ en la presencia de de células dendríticas (DC) (Figura 4, n=3 cada una). Se compara con DC no infectados cultivados con linfocitos, el RSV induce producción de interferonas a y ?, TNF a, RANTES, IL-1, 2, 4, 10, 12, 13, y 15 (Figura 5, n=l). Los datos se representaron en relación a controles no infectados respectivos (dando un valor de 1) . El CVT-E002 con células T solo induce la liberación de EFNy e IL12. El CVT-E002 con DC solo induce la liberación de TNF, IFNy, IL-1, 10, 12, y 15. Agregar CVT-E002 al cultivo celular con virus enormemente aumenta la liberación de citoquina/quimiocina . Además, comparado con células no infectadas, el CVT-E002 puede inducir la proliferación de linfocito en la presencia de DC sin virus (Figura 6).

Ejemplo 3 - Efecto de CVT-E002 en la función celular dendritica Las células dendriticas (DC) se derivaron de monocitos de sangre por el tratamiento con GM-CSF e IL-4 durante siete días. Los DC se incubaron en la presencia o ausencia de 5 mg/ml de DQ-Ovalbúmina auto-apagada (DQ-OVA) y CVT-E002. La DQ-OVA es un pigmento fluorescente unido a ovalbúmina. La fluorescencia de DQ-OVA se apaga como una molécula intacta, pero cuando se degrada a través de la presentación de antigeno por DC, el pigmento fluorescente se libera y la emisión se permite.

La Figura 7A muestra las subpoblaciones de células. Las células "tipo DC" son consistentes en tamaño y granularidad con células dendríticas maduras mientras que "sin DC" son DC inmaduras asi como monocitos refractivos de diferenciación y células T. las células tratas con LPS se usaron como un control positivo para la maduración DC . Usando citometria de flujo para determinar el tamaño y granularidad, aparecen para ser una subpoblación de monocitos, que se consideran para representar un fenotipo inmaduro (sin DC) como se compara con el DC maduro (tipo DC) . Esta impresión es con base en la experiencia previa de la tinción con CDllc y HLA-DR (datos no mostrados) .

Los DC incorporan DQ-OVA como exhibidos por fluorescencia (Figura 7B) . De forma interesante, el CVT-E002 potencia la señal DQ-OVA general en una manera dependiente de la dosis {Todas las células OVA+) . Aunque la población tipo DC es positiva OVA al 100%, la población inmadura aparece para tomar la mejor ovalbúmina después de CVT-E002 (sin DC OVA+, Figura 7B) .

El tratamiento CVT-E002 cambia el número de monocitos de la población sin DC a la tipo DC madura (grupo DC maduro) (Figuras 7C y 7D) . La fenotipificación preliminar de estas poblaciones con CDllc y la tinción MHC II confirma la impresión de madurez contra inmadurez. Estos datos sugieren que CVT-E002 mejora la función DC y la madurez además de los datos de citoquina DC.

Ejemplo 4 - Capacidad de CVT-E002 para activar el factor nuclear kappa B (NF-??) y para la señal por medio de MyD88.

Para determinar si CVT-E002 activa las ' respuestas inmunitarias innatas por medio de la interacción con los TLR, las capacidades de CVT-E002 para activar NF-?? y para la señal por medio de MyD88 se examinaron. Los macrófagos perifonéales se aislaron de ratones normales (C57B1/6 de tipo natural) y ratones que carecen de MyD88 (es decir, ratones con genes inactivados MyD88 designados como "MyD88-/-") .

Después de 24 horas de incubación in vitro para permitir la unión a las placas de cultivo, se lavaron los macrófagos, se trataron con diversas dosis de CVT-E002 o HT-1001, y se incubaron por 24 horas adicionales. El HT-1001 se usó como un control. Los sobrenadantes fueron recolectados y evaluados para la producción de IL-I, IL-6, IFNP y SIN usar ELISA. Se incluyeron el ADN de CpG (dependiente de MyD88) y dsRNA (un ligando independiente de MyD88 para TLR3) como controles positivos y negativos, respectivamente. Adicionalmente, se construyeron los plásmidos con el promotor NF-?? que impulsa un gen reportero, LacZ. Las células transíectadas con este plásmido se trataron con diversas dosis de CVT-E002 y se evaluaron para la producción del producto del gen reportero.

Los resultados demuestran que el CVT-E002 indujo niveles importantes de la citoquina proinflamatoria IL-6 y la producción de IFN de tipo I del factor anti-viral en macrófagos peritoneales solamente a partir de ratones de tipo silvestre pero no de ratones MyD88-/- (Figuras 12, 13A y 13B) . Los cultivos tratados con HT-1001 o sin tratar fueron negativos. Estos resultados muestran que la estimulación inducida por CVT-E002 de IL-6 e IFN es dependiente de MyD88 , e indica que CVT-E002 activa la producción de citoquinas proinflamatorias y anti-virales en células inmunitarias de vertebrados por medio de los TLRs .

Ejemplo 5 - Identificación de TLR utilizado por CVT-E002 Para identificar los TLRs que pueden ser receptores para CVT-E002, se construyeron células para expresar solamente los receptores individuales TLR. Estas células fueron tratadas in vitro con dosis óptimas de CVT-E002 y ligandos/agonistas TLR de control, y los sobrenadantes de estas células fueron usados para medir la producción de IL-I, IL-6, TNFa y NO. Para asegurar que las células que expresan cada TLR individual eran funcionales, se incluyeron controles positives al usar ligandos/agonistas conocidos para cada TLR. Los resultados indican que CVT-E002 no hace la señalización solamente por medio de TLR4. El tratamiento con CVT-E002 durante 24 horas estimuló la producción de IL-8 en células 293 transfectadas con hTLR2, hTLRl/2, hTLR2/6 y hTLR4 (Controles Pam3CSK/LPS) (Figura 14) . El tratamiento con CVT-E002 durante 48 horas estimuló la producción de IL-8 en células 293 transfectadas con hTLR2 , hTLRl/2 , hTLR2 / 6 y hTLR4 (Controles Pam3CSK/LPS) (Figura 15) . hTLR4 representa la coexpresión de hTLR4 con MDR y CD 14. Para ambos periodos de tiempo, se observaron incrementos importantes en la producción de IL-8 para todos los receptores.

Ejemplo 6 - Efecto del suministro a la mucosa de CVT-E002 Se suministraron CVT-E002 o controles a ratones oralmente en su dieta, intranasalmente o intravaginalmente . Los ratones fueron posteriormente estimulados por via intranasal o intravaginal con diversas dosis de HSV-2 o virus de estomatitis vesicular sensible al interferón (VSV) . La protección contra la infección viral se evaluó al medir el peso corporal, monitorear la patología gruesa, y medir las concentraciones de virus de estimulación en lavados y tejidos del pulmón y genitales al usar ensayos de placas a diversos puntos de tiempo después de la estimulación del virus (días 1-3 y 6 días después de la infección) (Figura 17A y 17B) .

Ejemplo 7 - Capacidad de CVT-E002 para inhibir el desarrollo de la hiper-respuesta de las vias respiratorias (AHR) y para disminuir la cantidad de inflamación eosinofilica de las vias respiratorias Ratones OVA y CVT-E002+OVA se sensibilizaron dos veces con inyecciones i.p. de OVA y alumbre mientras los animales de control no recibían inmunización. Siete días después de las inmunizaciones finales, los animales de control y los ratones CVT-E002+OVA recibieron 200mg/kg de compuesto CVT- E002 por cebadura durante siete días consecutivos. 24 horas después de la cebadura final, todos los ratones fueron estimulados dos veces i.n. con 50 µg de OVA y evaluados por inflamación de AHR y de vías respiratorias 24 h después de la segunda estimulación. Se midió la pausa potenciada (Penh) por pletismografía de cuerpo complete para determinar AHR en respuesta a la estimulación con metacolina (n=3) *P < 0.05 en comparación con los grupos de OVA o de control (Figura 16A) . La inflamación de las vías respiratorias fue determinada por el número de eosinófilos en fluido BAL (n=3) . *P < 0.05 en comparación con los grupos con OVA o control (Figura 16B) .

Como será evidente para aquellos expertos en la técnica, se pueden hacer diversas modificaciones, adaptaciones y variaciones de la descripción específica anterior sin alejarse del alcance de la invención aquí reivindicada.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Un método para prevenir, tratar o aminorar una afección susceptible a la prevención, tratamiento o aminoramiento por la activación de una señalización innata de inmunidad en un sujeto que necesita de tal tratamiento, que comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de al menos una fracción de ginseng.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la afección se selecciona del grupo que consiste de una alergia, asma, infección viral, infección microbiana y cáncer.

3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la infección viral es de un virus transmitido en la mucosa o respiratorio que incluye influenza, corona virus, herpes, virus sincitial respiratorio, Rhabdoviridae, y virus de inmunodeficiencia humana .

4. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la fracción se hace a partir de un ginseng seleccionado del grupo que consiste de Panax quinquefolius , Panax trífolia , Panax ginseng, Panax japonicus , Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis , Panax elegatior, Panax wangianus , Panax bípinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, y ginseng rojo.

5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la fracción es una fracción de Panax quinquefolius .

6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la fracción se selecciona del grupo que consiste de CVT-E002, PQ2, PQ223 y fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223.

7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la fracción es CVT-E002.

8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque CVT-E002 modula la transducción de señal desde un receptor tipo Toll.

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el receptor tipo Toll es receptor tipo Toll 2.

10. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el receptor tipo Toll es un heterodimero del receptor 2 tipo Toll y del receptor tipo Toll 6.

11. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el receptor tipo Toll es un heterodimero del receptor Toll tipo 2 y receptor Toll tipo 1.

12. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el receptor tipo Toll es el receptor tipo Toll 4.

13. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque CVT-E002 induce la sobre-regulación de linfocitos y células que presentan antigenos, secreción de citoquinas, secreción de factores anti-virales, o combinaciones de los mismos.

14. Una fracción de ginseng caracterizada porque es para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección.

15. La fracción de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque la fracción se hace a partir de un ginseng seleccionado del grupo que consiste de Panax quinquefolius , Panax trifolia , Panax ginseng, Panax japonicus , Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis , Panax elegatior, Panax wangianus , Panax bipinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, y ginseng rojo.

16. La fracción de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque la fracción es una fracción de Panax quinquéfolius .

17. La fracción de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque la fracción se selecciona del grupo que consiste de CVT-E002, PQ2, PQ223 y fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223.

18. La fracción de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque la fracción es CVT-E002.

19. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende la fracción de conformidad con la reivindicación 14 en combinación con otro medicamento o con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables que incluyen artículos de alimentos para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección.

20. La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada porque la fracción se hace a partir de un ginseng seleccionado del grupo que consiste de Panax quinguefolius , Panax trifolia, Panax ginseng, Panax japonicus , Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis , Panax elegatior, Panax wangianus , Panax bipinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, y ginseng rojo.

21. La composición de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada porque la fracción es una fracción de Panax quinquéfolius .

22. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque la fracción se selecciona del grupo que consiste de CVT-E002, PQ2, PQ223 y fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223.

23. La composición de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque la fracción es CVT-E002.

24. El uso de la fracción de ginseng de conformidad con la reivindicación 14, para la preparación de una composición farmacéutica o un articulo de alimentos para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección.

25. El uso de conformidad con la reivindicación 24, en donde la afección se selecciona del grupo que consiste de una alergia, asma, infección viral, infección microbiana y cáncer .

26. El uso de conformidad con la reivindicación 25, en donde la infección viral es de un virus transmitido en la mucosa o respiratorio que incluye influenza, corona virus, herpes, virus sincitial respiratorio, Rhabdoviridae , y virus de inmunodeficiencia humana.

27. El uso de conformidad con la reivindicación 25, en donde la fracción se hace a partir de un ginseng seleccionado del grupo que consiste de Panax quinquefolius , Panax trifolia , Panax ginseng, Panax japonicus , Panax schinseng, Panax notoginseng, Panax pseudoginseng, Panax vietnamensis , Panax elegatior , Panax wangianus, Panax bipinratifidus, ginseng verde o fresco, ginseng blanco, y ginseng rojo.

28. El uso de conformidad con la reivindicación 27, en donde la fracción es una fracción de Panax quinquefolius .

29. El uso de conformidad con la reivindicación 28, en donde la fracción se selecciona del grupo que consiste de CVT-E002, PQ2, PQ223 y fracciones purificadas de CVT-E002, PQ2 y PQ223.

30. El uso de conformidad con la reivindicación 29, en donde la fracción es CVT-E002.

31. Un método para la activación de respuestas inmunitarias innatas y adaptativas para prevenir, tratar o aminorar una afección en un sujeto que necesita de tal activación, caracterizado porque comprende administrar una fracción de ginseng de conformidad con la reivindicación 14 al sujeto.

32. Un método para prevenir, tratar o aminorar una afección asociada con la activación de la señalización innata de inmunidad caracterizado porque comprende modular la transducción de señal de receptores tipo Toll al administrar una fracción de ginseng de conformidad con la reivindicación 14 a un sujeto que necesita de tal prevención, tratamiento o aminoramiento .