MX2010003669A - Metodo para reducir la deposicion de amiloide, neurotoxicidad y microgliosis con el enantiomero (-)-nilvadipina. - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona métodos para reducir la deposición de ßA, la neurotoxicidad ßA y la microgliosis en un animal o humano afectado con una enfermedad amiloidogénica cerebral, tal como enfermedad de Alzheimer (AD), al administrar cantidades efectivas terapéuticamente del enantiómero (R) de la nilvadipina compuesto de la dihidropiridina al animal o humano. Además se proporcionan métodos para reducir el riesgo de deposición de ßA, la neurotoxicidad de ßA y la microgliosis en animales o humanos que sufren de daño cerebral traumático al administrar (-)-nilvadipina después del daño cerebral traumático y continuar el tratamiento por un periodo prescrito de tiempo después.

Description

MÉTODO PARA REDUCIR LA DEPOSICIÓN DE AMILOIDE, NEUROTOXICIDÁD Y MICROGLIOSIS CON EL ENANTIOMERO (-) -NILVADIPINA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se relaciona a un método para animales o humanos aquejados con enfermedades asociadas con la amiloidosis cerebral, tal como la enfermedad de Alzheimer, con efectos laterales antihipertensivos reducidos én comparación a la mezcla racémica la nilvadipina. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Descripción del estado de la técnica relacionado i i La enfermedad de Alzheimer (EA) es una de la!s enfermedades neurodegenerativas más comunes de la edad, que afecta a aproximadamente al 1% de la población por arriba de los 65 años de edad. Las principales características de la enfermedad incluyen la acumulación progresiva enmarañamiento neurofibrilar intracelular, placas seniles extracelulares parenquimales , y depósitos cerebrovasculares i en el cerebro. El componente principal de las placas seniles y los depósitos cerebrovasculares es el péptido ß-amiloide (?ß) de 39-43 aminoácidos de longitud, el cual es proteolit icamente derivado de la proteina precursora del amiloide (APP por sus siglas en Inglés) , una glicoproteina le transmembrana .

La APP es una proteina única transmembrana con un dominio extracelular amino-terminal de 590-680 aminoácidos de I I longitud y una cola citoplasmática de aproximadamente 55 aminoácidos. El ARN mensajero del gen APP en el cromosoma 21 sufre un empalme alternativo para producir 8 posibles isoformas, tres de las cuales (las isoformas de 695, 751 y 770 aminoácidos de longitud) predominan en el cerebro. La APP j sufre un proceso proteolitico vía tres actividadés i enzimáticas, llamadas a-, ß- y ?-secretasa. La alfa-secretasa i corta o escinde la APP en el aminoácido 17 del dominio ?ß, de ese modo libera la OÍ-APP, un gran fragmento amino-terminil soluble, para su secreción. Debido a que la oí-secretasa escinde dentro del dominio ?ß, este corte excluye la formación de ?ß. Alternativamente, la APP puede sufrir escisión por la ß-secretasa para definir el extremo amirio' terminal de ?ß y generar el fragmento amino-terminal solubl'e I ß-???. Una escisión subsecuente del dominio intracelulár carboxi-terminal de APP por la ?-secretasa resulta en Ja generación de múltiples péptidos, los dos más comunes son él ¡ ?ß (?ß40) de 40 amino ácidos de longitud y el ?ß (?ß42) de 4Í2 amino ácidos de longitud. El ?ß40 comprende de 90-95% del ?ß secretado y es la especie predominante recuperada del fluido i cerebroespinal (Seubert et al., Nature, 359:325-7, 1992). En contraste, menos del 10% de la ?ß secretada es ?ß42. A pes†r de la escasez relativa de la producción de ?ß42, ?ß42 es la especie predominante encontrada en plaguetas y esta depositada inicialmente, tal vez debido a su capacidad de formar agregados amiloides insolubles más rápidamente que ?ß40 (Jarrett y colaboradores, Biochemistry, 32: 4693-j, 1993) . La acumulación anormal de ?ß en el cerebro se cree es debida a la sobreexpresion o proceso alterado de APP. i Los péptidos ?ß son entonces considerados como que juegan un papel cítrico en la patobiología de EA (AD) , así como todas las mutaciones asociadas con la forma familiar de EA (AD) resultantes del proceso de alteración de estds péptidos a partir de APP. Sin duda, los depósitos de fibrillas insolubles o agregadas de ?ß en el cerebro son unja característica neuropatológicas prominente de todas lajs formas de EA (AD) , a pesar de la predisposición genética de;l sujeto. I i Concomitante con la deposición de ?ß, existe la I activación robusta de las rutas inflamatorias en el cerebro con EA (AD) , incluyendo la producción de citoquinas proinflamatorias y reactivos de la fase aguda en y alrededor de los depósitos de ?ß (McGeer y colaboradores, J. Leukocyte Biol., 65: 409-15, 1999). La activación de las células inmunes innatas que residen en el cerebro, la microglia, esta pensada para estar involucrada intimamente en esta cascada inflamatoria. Se ha demostrado que la microglia reactiva produce citoquinas proinflamatorias , tal como proteínas inflamatorias y reactivos de la fase aguda, tal como alfa-í-antiquimotripsina , que transforma el factor de crecimiento ß, apolipoproteína E y factores del complemento, se ha demostrado que todos son localizados por las plaquetas de ?ß i y promover la "condensación" o maduración de las plaquetas de ?ß (Nilsson y colaboradores, J. Neurosci. 21:1444-5, 2001) ¡y los cuales a niveles altos promueven la neurodegeneración . Los estudios epidemiológicos han demostrado que pacientes que usan fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINES) han reducido hasta un 50% el riesgo de EA (AD) (Rogers y colaboradores, Neurobiol. Aging, 17:681-6, 1996) y la evaluación postmortem de pacientes con EA (AD) que estuvieron bajo tratamiento con AINES ha demostrado que la reducción del riesgo esta asociada con los números disminuidos de microglia activada (Mackenzie y colaboradores, Neurology, 50:986-90!, 1998). Además, cuando a ratones Tg APP3W, un modelo de ratón para la enfermedad del Alzheimer, se les administra AINES i ( ibuprofeno) , estos animales mostraron reducción de los I depósitos de ?ß, astrocitosis y neuritis distrófica que se correlacionan con la activación microglial disminuida (Lim y colaboradores, J. Neurosci., 20:5709-14, 2000) . 1 Los productos del proceso inflamatorio en el cerebro con EA (AD) por lo tanto pueden exacerbar la patología de EA (AD) . Además, existe evidencia que la microglía activada én cerebro con EA (AD) , en lugar del aclaramiento de ?ß, es patogénica al promover la fibrilogénesis de ?ß y la consecuente deposición como plaquetas seniles ( egiel y colaboradores, ActaNeuropathol . (Berl.) 100:356-64, 2000) . También se ha sugerido que la patogénesis de EA (AD) se debe a las propiedades neurotóxicas de ?ß . La citotoxicidad de ?ß primero fue establecida en cultivos de células i primarias de cerebros de roedores y también en cultivos de células humanas. El trabajo de Mattson y colaboradores (J. Neurosci., 12:376-389, 1992) indica que ?ß, en presencia de!l neurotransmisor excitatorio glutamato, ocasiona un increment.o patológico inmediato del calcio intracelular , lo que se cree es muy toxico para la célula a través de las actividades de su segundo mensajero muy incrementadas. La solicitud de patente U.S. No. 2005/0009885 (13 de enero de 2005) (Mullan y colaboradores) describe un método para reducir la deposición de ?ß usando nilvadipina, así como i métodos de diagnóstico de enfermedades amiloidogénicas j cerebrales usando nilvadipina. Sin embargo, la patente U.S. 4338322 describe los efectos antihipertensivos de ja nilvadipina. La nilvadipina (NIV7ADIL™) ha recibido la aprobación regulatoria en Irlanda para el tratamiento de la hipertensión a una dosis de 8 mg por día. Ver también ía patente U.S. 5508413 la cual describe los efectos antihipertensivos del ( +) -enantiómero de la nilvadipina. La nilvadipina racémica y su efecto sobre el flujo sanguíneo cerebral regional en sujetos humanos son reportados por Hanyu y colaboradores (Nuclear Medicine Communications, vol. 28,, no. 4, páginas 281-287, Abril 2007). A pesar de los reportes indicados anteriormente, existje una necesidad por una profilaxis para el progreso inexorable de la de3generacion del cerebro que es un sello de EA (AD)|, j donde la profilaxis se dirige a la deposición de ?ß|, neurotoxicidad de ?ß, inflamación microglial activada ¡y alteración o sobreexpresión de APPP que se ve en paciente!s i con EA (AD) con tratamiento efectivo terapéuticamente con mínimos efectos secundarios tales como reducción excesiva jo superflua de la presión sanguínea. j SUMARIO DE LA INVENCIÓN | Con el objetivo de cumplir esta necesidad, la presente invención proporciona los métodos para reducir la deposición de ?ß, neurotoxicidad ?ß y microgliosis en un animal o humano afectado con una enfermedad amiloidogénicas cerebral, tal como enfermedad de Alzheimer (EA (AD) ) , al administrar al animal o humano cantidades efectivas terapéuticamente (-)- nilvadipina enriquecida enantioméricamente . En particular, la presente invención proporciona por la administración de (-)- nilvadipina enriquecida enantioméricamente un efecto hipotensor reducido comparado con la misma cantidad de nilvadipina racémica. Además, la administración de la {-. - nilvadipina enriquecida enantioméricamente permite incrementar permite incrementar las dosis comparado con la administración de nilvadipina racémica o (+) -nilvadipina debido a una reducción en el efecto hipotensor. Por ejemplo, los datos presentados aquí para el ( - ) -enantiómero demuestran la contracción aórtica basal cuando se estimula con FPL64176, lo que se correlaciona con la vasoact ividad reducida para el (-) -enantiómero comparado con la mezcla racémica o el ( + ) - ¡ enantiómero el cual exhibe vasoactividad (es decir, antagonismo de vasoconstricción inducida) . En modalidades favorecidas, el (-) -enantiómero esta presente en exceso en la composición administrada y el exceso enantiomérico es preferentemente de 90% o más, 95% o más y más preferentemente 98% o más, incluyendo 100%, hasta el limite detectable de pureza .

La presente invención también proporciona métodos para reducir el riesgo de deposición de ?ß, neurotoxicidad de ?ß | y 1 microgliosis en animales o humanos que sufren de daño cerebral traumático al administrar al animal o humano u†a cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipiña enriquecida enant ioméricamente después del traumatismo craneal y continuar el tratamiento con (-) -nilvadipi a enriquecida enantioméricamente por un periodo prescrito de I tiempo después. En particular, la presente invención proporciona para la administración de (-) -nilvadipiña enriquecida enantioméricamente un efecto hipotensor comparado i con la misma cantidad de la nilvadipiña racémica. Además, lia administración de (-) -nilvadipiña enriquecida enantioméricamente permite dosis incrementadas comparado ccjn la administración de nilvadipiña racémica debido a uria reducción del efecto hipotensor. En modalidades favorecidasj, el ( - ) -enantiómero esta presente en exceso en la composiciójn administrada y el exceso enantiomérico es preferentemente de 90% o más, 95% o más y mas preferentemente 98% o másj, incluyendo 100%, hasta el limite detectable de pureza. ' I La presente invención también proporciona métodos parja reducir el riesgo de desarrollar, o retrasar el comienzo o progreso de, o de estabilizar los síntomas de una enfermedaid o condición amiloidogénica cerebral en animales y humanos diagnosticados con un riesgo de desarrollar enfermedad I o condición amiloidogénica cerebral, que comprende administrar al animal o humano una cantidad terapéuticamente efectiva de ¡ ( - ) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente , donde la administración de (-) -nilvadipina enriquecióla enantioméricamente inicia después de diagnosticar el riesgo de desarrollar enfermedad o condición amiloidogénica cerebral. En particular, la presente invención proporciona para la administración de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente un efecto hipotensor reducido comparado con la misma cantidad de nilvadipina racémica. Además, ía administración de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente permite dosis incrementadas comparado con la administración de nilvadipina racémica debido a una reducción del efecto hipotensor. En modalidades favorecidas, el ( - ) -enant iómero esta presente en exceso en la composición administrada y el exceso o más, 95% o más y más preferentemente 98% o más, incluyendo i 100% hasta el limite detectable de pureza. j La presente invención prevé el tratamiento del perfil clínico de una enfermedad amiloidogénica cerebral qu'e comprende uno o más de todos las características cognitivas y de comportamiento asociadas con la enfermedad amiloidogénica cerebral. Por ejemplo, en lo concerniente a EA (AD) , tales características pueden incluir una lista no limitante de síntomas tales como pérdida de la memoria de largo plazo, dificultad para realizar tareas cotidianas, problemas con el lenguaje, desorientación, razonamiento abstracto dañado, cambios de la personalidad, humor o comportamiento yío puntuaciones características en una serie de pruebas cognitivas. Tales pruebas cognitivas incluyen la Escala de Memoria Wechsler-Revisada (WMS-R) , la Clasificación de Demencia Clínica (CDR) , el Examen de Estado Mini-Mental (MMSE) y/o la Escala de Evaluación de la Enfermedad de Alzheimer-Escala Cognitiva (ADAS) . La presente invención prevé el tratamiento con nilvadipina enriquecida enantioméricamente la cual puede producir un resultado clínico especifico. Un punto finll (endpoint) para el tratamiento es una mejora medible en uno o más síntomas de la enfermedad en aquellos afectados por la enfermedad amiloidogénica cerebral. La mejora puede resultar en un paciente asintomático o puede reflejar una mejora en la capacidad comparada con uno o más síntomas previos al tratamiento. Alternativamente, un punto final para el tratamiento puede ser mantener un nivel sintomático basal. En otras palabras, este punto final representa la estabilización de la enfermedad o uno o más síntomas de la enfermedad de manera permanente o por un periodo de tiempo. Además, un punto final para el tratamiento puede ser una reducción en velocidad de progreso de la enfermedad comparada con un control no tratado. Además, el tratamiento puede incluir el pretratamiento de un individuo considerado con riesgo de desarrollar la enfermedad amiloidogénica cerebral aunque previo a la manifestación clínica de uno o más síntomas. La referencia al tratamiento de la enfermedad también comprende el tratamiento de uno o más síntomas, donde el tratamiento es paliativo más que curativo. j La presente invención también proporciona métodos paira el tratamiento de células de tallo neuronal transplantable , que comprenden administrar una cantidad de ( - ) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente a las células de tallo neuronal previo al transplante de las células del tallo en el sistema nervioso central de un animal o humano afectado por una enfermedad amiloidogénica cerebral, tal como EA (AD) . La í cantidad administrada es la cantidad que logra el efecto citoprotector deseado. En modalidades favorecidas, el (-)-enantiómero esta presente en exceso en la composición administrada y el exceso enantiomérico es preferentemente 90% o más, 95% o más y más preferentemente 98% o más, incluyendo 100%, hasta el limite detectable de pureza. : BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS FIG.l es una gráfica de barras que ilustra el efecto de la administración crónica de nilvadipina sobre la deposición de ?ß (carga de ?ß) en diferentes regiones del cerebro de ratones TgAPPsw usando la técnica de inmunotinción 4G8. : FIG. 2 es una gráfica de barras que ilustra el efecto de la administración crónica de nilvadipina sobre la activación microglial en ratones TgAPPsw en tres regiones del cerebro usando la técnica de inmunotinción CD45 que determina él número de microglia CD45+. FIG.3 es una gráfica de barras que ilustra el efecto de nilvadipina sobre la activación microglial en célula¡s microgliales de murino N9 in vitro activadas cojn lipopolisacárido (LPS) durante 24 horas. La activación microglial esta determinada por la producción del TNF-L (pg/mL) medidos por ELISA. | I FIG. 4 es una gráfica de barras que ilustra el efecto de la administración de nilvadipina sobre la neurototoxicidad dje ?ß usando células HPNC tratadas durante tres días con 30µ? de ?ß1-40 (AgAß) preagregado. La neurotoxicidad es evaluada a|l medir la cantidad de deshidrogenasa láctica (LDH) liberada por las células. FIG. 5A y 5B son gráficas que ilustran el efecto de la nilvadipina sobre el procesamiento de APP usando células dé glioblastoma de humano transfectadas con células APPSW. Las células se trataron con 50 nM y 250 nM de nilvadipina durante 24 horas (FIG. 5A) y por 48 horas (FIG. 5B) . La producción cié ?ß1-40 en el medio de cultivo se midió por ELISA. j FIG. 6 es una curva de respuesta a la dosis que ilustra el efecto de las formas enantioméricas puras de nilvadipina (nilvadipina 1 y nilvadipina 2) asi como una mezcla de los 2 enantíómeros en igual proporción (N1+N2) sobre la producción de ?ß1-40 por las células ováricas de hámster chino 7W WT APP751 después de 24 horas de tratamiento. Ambos enantíómeros parecen inhibir dependiendo de la dosis la producción de ?ß?-40 de manera similar. FIG. 7 es una curva de respuesta a la dosis que ilustra el efecto de las formas enantioméricas puras de nilvadipina (nilvadipina 1 y nilvadipina 2) así como una mezcla de los !2 enantíómeros en igual proporción (N1+N2) sobre la producción de ?ß1-40 por células ováricas de hámster chino 7W WT APP751 después de 24 horas de tratamiento. Observar que el enantiómero puro nilvadipina 2 así como la mezcla racémica de nilvadipina (N1+N2) estimula ligeramente ?ß1-42 a dosis baja mientras que el enantiómero nilvadipina 1 no posee este efecto. j FIG. 8A-8C es una cromatografía quiral que muestra la separación de los enantíómeros de nilvadipina. Nilva_Peak_l corresponde a ( - ) -nilvadipina (nilvadipina 1); Nilva_Peak corresponde a (+) -nilvadipina (nilvadipina 2) . Nilva_10 se refiere a la mezcla racémica original de nilvadipina, se incluye con propósitos ilustrativos.

FIG.9 ilustra el efecto de (-) -nilvadipina (nilvadipina 1) y (+) -nilvadipina (nilvadipina 2) sobre FPL64176 indujo vasoconstricción en aorta de rata. Los datos demuestran que (+) -nilvadipina antagoniza completamente FPL64176 indujo vasoconstricción mientras que (-) -nilvadipina no afecta ll efecto vasoactivo del agonista del canal de calcio tipo L que demuestra que (+) -nilvadipina es un bloqueador del canal de calcio tipo L mientras que (-) -nilvadipina carece de tal efecto. 1 FIG. 10 es una gráfica de barras que ilustra el efectio de (-) -nilvadipina sobre los niveles de ?ß1-40 y ?ß1-42 en el cerebro en ratones Tg APPSW de 93 semanas de edad. Los animales se trataron diariamente de manera intraperitoneal por cuatro días con (-) -nilvadipina (10 mg/kg de peso corporal) . j FIG. 11 es una gráfica de barras que ilustra el efecto i de una liberación prolongada de (-) -nilvadipina sobre los niveles de ?ß1-42 en el cerebro en ratones Tg APPSW de 70 semanas de edad. Los animales se trataron por 26 días usando pellets biodegradables que se implantaron subcutáneamente. j FIG. 12 ilustra un modelo in vitro de la Barrera Hematoencefálica usando insertos de membrana de 0.4 pm, translúcidos, con 24 pozos que contienen una capa de Células Endoteliales de la Microvasculatura Cerebral de Humano (HBMEC) . La migración de fluoresceina-beta amiloide 1-42 dentro del compartimento apical se evalúo en varios puntos en el tiempo. FIG. 13 es una gráfica de barras que muestra el efecto in vitro de ( - ) -nilvadipina sobre el aclaramiento de ?ß cerebral a través de la Barrera Hematoencefálica . A= apical, B= basolateral. FIG. 14 es una gráfica de barras que ilustra el efecto in vitro de (-) -nilvadipina vs mezcla racémica de nilvadipina sobre el aclaramiento de ?ß cerebral a través de la Barrera Hematoencefálica . A= apical, B= basolateral. FIG. 15 es una gráfica de barras que muestra el efecto in vivo de (-) -nilvadipina sobre el aclaramiento de ?ß cerebral a través de la barrera hematoencefálica, al medirse a través de los niveles de ?ß plasmáticos en ratones. FIG. 16 es una gráfica de barras que muestra el efecto in vivo de un pellet de (-) -nilvadipina biodegradable sobre el aclaramiento de ?ß cerebral a través de la barrera hematoencefálica .

FIG. 17A y 17B ilustran las propiedades vasoactivas de (+) -nilvadipina versus ( -) -nilvadipina a través de u In intervalo de dosis, de fármaco. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos profilácticos y métodos terapéuticos para tratar el progreso inexorable de la degeneración cerebral que es un sello distintivo die ciertas enfermedades amiloidogénicas cerebrales, tales como enfermedad de Alzheimer (EA (AD) ) en animales y humanos al administrar (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamentie (dicarboxilato de isopropilo-3-metil-2-ciano-l, 4-dihidro-6-metil-4- (m-nitrofenil ) -3, 5-piridina; MW 385.4). El tratamiento, prevención y mejora de los síntomas están comprendidos en los métodos de conformidad con la invención. A menos que se especifique otra cosa, el término nilvadipina como El término "enr se refiere a un en la que el preferentemente y más preferentemente 98% o más, incluyendo 100%, hasta él limite detectable de pureza. Por ejemplo, la pureza puede sejr determinada por detección con métodos HPLC quiral. En un;a modalidad, el exceso enantiomérico se calculo al sustraer el componente menor del componente mayor. Por ejemplo, una mezcla de enantiómeros con 98% de ( - ) -enantiómero y 2% ¿e ( + ) -enant iómero se calcularía como un 96% de exceso enantiomérico del (-) -enant iómero . En particular, una modalidad de la presente invención proporciona un método para reducir la deposición de ?ß, la neurotoxicidad de ?ß y microgliosis en un animal o humano afectado con una enfermedad o condición amiloidogénica cerebral al administrar cantidades efectivas terapéuticamente de ( - ) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente al animal ¡o humano. Debido a que la mayoría de las enfermedades amiloidogénicas cerebrales, como EA (AD) , son demencias crónicas, progresivas, intratables, se contemplo que la i duración del tratamiento con (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente será por hasta el tiempo de vida del animal o humano. Las enfermedades o condiciones amiloidogénicas cerebrales incluyendo sin limitación enfermedad de Alzheimer, daño cerebral traumático ly angiopatía amiloide cerebral. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar la encefalopatía espongiforme transmisible, síndrome de Gerstmann-Straüssler-Scheinker ¡o tembladera.

En otra modalidad de la presente invención, se I proporciona un método para reducir el riesgo de deposición de ?ß, la neurotoxicidad de ?ß y microgliosis en animales humanos que sufren de daño cerebral traumático (TBI) al administrar al animal o humano una cantidad efectiva terapéuticamente de ( - ) -nilvadipina enriquecida i enant ioméricamente después del TBI y continuar el tratamiento con (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente por un periodo de tiempo prescrito después. La duración del tratamiento con (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente que esta contemplada para aquellos que comprende una o más o todas las características cognitivas y de comportamiento asociadas con la enfermedad amiloidogénica cerebral. Por ejemplo, con respecto a la EA (AD) , tales características pueden incluir una lista no limitante de síntomas como perdida de memoria de largo plazo, dificultad al realizar tareas cotidianas, problemas con él lenguaje, desorientación, juicio pobre o disminuido, razonamiento abstracto dañado, cambios de la personalidad, humor o comportamiento y/o puntuaciones características en una serie de pruebas cognitivas. Tales pruebas cognitivas incluyen la Escala de Memoria echsler-Revisada (WMS-R) , la Clasificación de Demencia Clínica (CDR) , el Examen de Estado Mini-Mental (MMSE) y/o la Escala de Evaluación de la Enfermedad de Al zheimer-Escala Cognitiva (ADAS) . \ En una o mas modalidades, el tratamiento con (_))- ¡ nilvadipina enriquecida enant ioméricamente puede producir un j resultado clínico especifico. El punto final del tratamientio i es una mejora medible de uno o más síntomas de la enfermedad en aquellos afectados por la enfermedad amiloidogénica cerebral. La mejora puede resultar en un paciente asintomático o puede reflejar una mejora en la capacidad al comparar con uno o más síntomas previos al tratamiento. De manera alternativa, un punto final para el tratamiento puede ser mantener un nivel sintomático basal. En otras palabras, este punto final representa la estabilización de la enfermedad o uno o más síntomas de la enfermedad de manerja permanente o por un periodo de tiempo. También, un punto final para el tratamiento puede ser una reducción en la velocidad de progreso de la enfermedad comparado con u'n j control no tratado. Además, el tratamiento puede incluir e¡l pretratamiento de un individuo considerado con riesgo para desarrollar la enfermedad amiloidogénica cerebral aunque previo a la manifestación clínica de uno o más síntomas. En j lo que se refiere al tratamiento de la enfermedad también comprende el tratamiento de uno o más síntomas, donde el tratamiento es paliativo más que curativo. ¡ La cantidad efectiva terapéuticamente de ( - ) -nilvadipina enriquecida enant ioméricamente que es administrada, i opcionalmente en forma de dosis unitaria, a los animales humanos afectados con una enfermedad amiloidogénica cerebral o que sufren de un daño cerebral traumático, así como administrada con el propósito de determinar el riesgo de desarrollar y/o un diagnóstico de una enfermedad i amiloidogénica cerebral en un animal o humano, de acuerdo ja los método de la presente invención puede variar desde entre aproximadamente 0.05 mg hasta 20 mg por día, preferentemente entre aproximadamente 2 mg hasta 15 mg por día, majs preferentemente desde entre aproximadamente 4 mg hasta 12 mg por día y mas preferentemente aproximadamente 8 mg por día. La dosis diaria puede ser administrada en una dosis unitaria única o dividida en dos, tres o cuatro dosis unitarias pojr día. En otra modalidad, la cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente es mayor |a 16 mg por día hasta el limite de la dosis máxima toleradai Por ejemplo, la cantidad efectiva terapéuticamente de (- nilvadipina enriquecida enant ioméricamente puede variar desde 16 mg hasta aproximadamente 20 mg por día. Alternativamente, la cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipina enriquecida terapéuticamente puede ser aproximadamente 20 rhg por día, aproximadamente 30 mg por día, aproximadamente 40 mg por día, aproximadamente 50 mg por día, aproximadamente 75 mg por día, aproximadamente 100 mg por día, aproximadamente 125 mg por día, aproximadamente 150 mg por día, aproximadamente 175 mg por día, aproximadamente 200 mg por día, aproximadamente 200 mg por día, aproximadamente 225 mg pór día, aproximadamente 250 mg por día, aproximadamente 275 mg por día, aproximadamente 300 mg por día, aproximadamente 325 mg por día, aproximadamente 350 mg por día, aproximadamente I 375 mg, aproximadamente 400 mg por día, aproximadamente 425 mg por día, aproximadamente 450 mg por día, aproximadamentje 475 mg por día, aproximadamente 500 mg por día o hasta lia máxima dosis tolerada por día y cualquier cantidad entera jo de manera distinta entre las cantidades precedentes. Los intervalos pueden variar. Por ejemplo, los intervalos no limitantes incluyen puntos finales más bajos de 20, 40, 60 80 o 100 mg por día y puntos finales superiores de 50, 100 200, 250, 300 y 500 mg por día y cualquier cantidad entera de manera distinta entre las cantidad mencionadas arriba pueden servir como un punto final.

Mientras no se desee enlazarse en teoría, se cree que los efectos ant ihipertensivos pueden limitar la cantidad I máxima tolerada de nilvadipina racémica. En una modalidad de acuerdo a la invención, la cantidad efectiva terapéuticamentje de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente reduce la presión sanguínea en una cantidad seleccionada del grupo que consiste de menor a aproximadamente 30%, menor la aproximadamente 20%, menor a aproximadamente 10%, menor ja aproximadamente 5% y menor a aproximadamente 1% de la presión sanguínea pret ratamiento después de la administración de la (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente. La presión sanguínea puede medirse a través de variadas formas. Por ejemplo, la presión sanguínea puede medirse como una presión sistólica ?· una presión diastólica en milímetros de mercurio.

Alternativamente, la presión sanguínea puede calcularse de acuerdo a la formula de 2/3 de la lectura de presidn diastólica más 1/3 de la lectura de la presión sistólica. En una modalidad, la presión sanguínea es monitoreada continuamente e integrada sobre el tiempo para obtener un valor único para el área bajo la curva (AUC) . El cambio en la presión sanguínea puede estar en comparación con la poblaciójn normal o puede estar en compasión con la presión sanguíneja pretratamiento de los individuos tratados. En una modalidad, la presión sanguínea pretratamiento se mide después de un periodo de pretratamiento tal gue ha sido establecido un cambio en el estado estacionario en la presión sanguínea. Pór ejemplo, la presión sanguínea postratamiento puede medirse después de aproximadamente 1 semana de tratamiento, aproximadamente 4 semanas de tratamiento, aproximadamente 12 semanas de tratamiento, aproximadamente 6 meses de tratamiento y similar. En una modalidad, la ( -) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente se administra a un humano o j animal que tiene presión sanguínea normal o es hipotenso. En una modalidad, la (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente se administra a un humano o animal que es hipertenso. En humanos, la presión sanguínea normal esta considerada entre aproximadamente 90/50 mm de Hg hasta aproximadamente 135/90 mm de Hg . La presión sanguínea en humanos por debajo del intervalo normal se considera hipotensa. i En otra modalidad, el agente terapéutico de la invención se administra a los pacientes que son hipertensos o a pacientes a pesar de sus niveles de presión sanguínea. Lo!s pacientes hipertensos pueden ser tratados concurrentemente con un antihipertensivo . La presión sanguínea en humano,s i sobre el intervalo normal se considera hipertensa. ¡ Los intervalos normales para distintos animales pueden encontrarse en manuales de veterinaria estándar. En una i modalidad, la presión sanguínea esta en el intervalo normar ya sea naturalmente o debido a intervención medica, tal como la administración de un agente antihipertensivo adicional. J i Aun en otra modalidad de la presente invención es ün método para el pretratamiento de células del tallo neuronal xenogénicas o humanas transplantables al administrar uria j cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente a las células de tallo neuronal previo al transplante de las células al sistema nervioso central de una animal o humano que puede estár afectado con una enfermedad amiloidogénica cerebral, tal como EA (AD) . Presumiblemente, las células del tallo neuronal por i si mismas no tienen una deposición significativa de ?ß. Sin embargo, si el transplante neuronal esta previsto para un ambiente cagado de ?ß el pretratamiento de las células de tallo neuronal deben mejorar la capacidad de las neuronas transplantadas para sobrevivir en su ambiente al reducir la concentración de ?ß y por lo tanto la toxicidad de ?ß ahí. L'a j cantidad efectiva terapéuticamente de ( -) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente que se administra paJa pretratar las células de tallo neuronal puede variar desdje entre aproximadamente 1 nM hasta 3 µ?, preferentemente entrje aproximadamente 10 nM hasta 2 µ? y mas preferentemente entíe i aproximadamente 100 nM hasta 1 µ?. Se sabe que las células de I tallo, cuando están orientadas a diferenciar entre tipos de células especificas, tal como células neuronales, ofrecen la posibilidad de una fuente renovable de células y tejidos sustitutos para tratar enfermedades y condiciones, como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson o daño de I medula espinal. Cuando dichas células son transplantadas/implantadas en un paciente, es recomendable no solo pretratar las células con ( - ) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente sino también iniciar el tratamiento terapéutico del paciente con (-) -nilvadipina enriquecida I enantioméricamente postimplantación. ] Esta contemplado que los métodos de la presente invención puedan ser evaluados en modelos de animales transgénicos conocidos para EA (AD) , como los modelos de ratón PDAPP y Tg APPSW previo a la evaluación de eficacia en condiciones de tratamiento, prevención y/o inhibición asociadas con la deposición amiloide, neurotoxicidad de ?ß ¡y microgliosis en el sistema nervioso central de humanos. Tales modelos de animales transgénicos para EA (AD) son construidos usando métodos estándar conocidos en el arte previo y por ejemplo como se expone en las patentes U.S. Nos. 5,487,992; 5,464,764; 5,387,742; 5,360,735; 5,347,075; 5,298,422; 5,288,846; 5,221,778; 5,175,385; 5,175,384; 5,175,383; |y 4,736, 866. La ( - ) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente puede ser administrada a un paciente vía varias rutas incluyendo parenteralmente, oralmente o intraperitonealmente. La administración parenteral incluye las siguientes rutas intravenosa; intramuscular; intersticial; intrarteria subcutánea; intraocular ; intracraneal; intratecal; intraventricular ; intrasinovial ; transepitelial , incluyendo transdérmica , pulmonarmente vía inhalación, oftálmica, sublingual y bucal; tópica, incluyendo oftálmica, dérmica, ocular, rectar o inhalación nasal vía insuflación nebulización . La (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente que se administra oralmente puede estar contenida en cápsulas gelatinosas de capa dura o suave o comprimida en comprimidos. La (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente también puede ser incorporada con un excipiente y usada en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, pastillas para chupar, cápsulas, bolsitas, pastillas masticables, elixires, suspensiones, jarabes, obleas y similares. Además, la ( nilvadipina enriquecida enantioméricamente puede estar en forma de un polvo o granulado, una solución o suspensión en un liquido acuoso o liquido no acuoso, o en una emulsión aceite-en-agua o agua-en-aceite . J Los comprimidos, pastillas para chupar, pildoras, cápsulas y similares también pueden contener, por ejemplo, un aglutinante, tal como goma tragacanto, acacia, almidón de maíz; excipientes gelatinosos, tal como fosfato de dicalció; un agente desintegrante, tal como almidón de maíz, almidón de papa, ácido alginico y similares; un lubricante, tal como estearato de magnesio; un agente endulzante tal como sucrosa, lactosa o sacarina; o un agente saborizante. El ingrediente activo puede estar formulado o administrado en forma de una dosis unitaria o en forma de dosis no unitarias. Cuando la forma unitaria de dosificación es una cápsula, puede contener, además de los materiales descritos anteriormente, un portador liquido. Otros varios materiales pueden estar presentes como recubrimientos o para modificar de otra manera la forma física de la dosis unitaria. Por ejemplo, lo's ¡ comprimidos, pildoras o cápsulas pueden estar recubiertos con laca, azúcar o ambos. Un jarabe o elixir puede contener nilvadipina, sucrosa como agente endulzante, metil y propilparabeno como preservativos, un colorante y saborizante. Adicionalmente , la (-) -nilvadipina enriquecida enant ioméricamente puede incorporarse en preparaciones y I formulaciones de liberación prolongada. ¡ La (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente puede ser administrada al SNC parenteralmente ¡o intraperitonealmente . Las soluciones de nilvadipina como una base libre o una sal aceptable farmacéuticamente pueden prepararse en agua mezclada con un surfactante adecuado, tal como hidroxipropilcelulosa . Las dispersiones también pueden prepararse en glicerol, polietilen glicoles líquidos ¡y mezclas de los mismos y en aceites. Bajo condiciones j ordinarias de almacenamiento y uso, estas preparaciones pueden contener un conservador y/o antioxidantes para prevenir el crecimiento de microorganismos o la degeneración (degradación) química. ! i El enantiómero (-) -nilvadipina deseado tiene la j configuración (R) en su centro quiral. El compuesto proporcionado aquí puede ser enantioméricamente puro o se|r una mezcla estereoisomérica con alguna cantidad de (+) (S) nilvadipina. Se entiende que la publicación de (-) nilvadipina enriquecida enantioméricamente aquí comprende cualquier forma estereoisomérica, polimorfita u ópticamente activa o mezclas de las mismas, que posea preferiblemente la¡s propiedades útiles descritas aquí, se sabe bien en el arte previo como preparar formas ópticamente activas y como determinar la actividad usando las pruebas estándar descritas aquí o usando otras pruebas similares que son bien conocida's en el arte previo. El término "enriquecido i enantioméricamente" se uso aquí para referirse a un compuesto que es una mezcla de enantiómeros en la cual el (-)¦- i enantiómero esta presente en exceso y preferentementlje presente hasta 90% o más, 95% o más y más preferentemente 98% de velocidades de reacción diferentes para los enantiómeros con una enzima. iv. Síntesis asimétrica enzimática - una técnica en la cual al menos un paso de la síntesis usa una reacción enzimática para obtener un precursor sintétiéo enriquecido o puro enantioméricamente del enantiómero deseado; v. Síntesis asimétrica química - una técnica sintética én la cual el enantiómero deseado se sintetiza a partir de un precursor aquiral bajo condiciones que producen asimetría (es decir, quiralidad) en el producto, la cual puede alcanzarse usando catalizadores quirales auxiliares quirales; vi. Separaciones diasteroméricas - una técnica en cual un compuesto racémico, precursor o intermediario semisintético reacciona con un reactivo I i enantioméricamente puro (el auxiliar quiral) que convierte los enantiómeros individuales en diasteroisómeros . Los diasteroisómeros resultantes son entonces separados por cromatografía o cristalización én virtud de sus ahora diferencias estructurales distintas I mas distintas y el auxiliar quiral finalmente removido para obtener el enantiómero deseado (véase, por ejemplo, patente U.S. 5,508,413 propiedad de Fujisaia Pharmaceutical Co . , Ltd) ; ] i vii. Transformaciones asimétricas de primer y segundo orden - una técnica en la cual los diasteroisómeros provenientes del racemato se equilibran para producir preponderancia en solución del diasteroisómeros a partir del enantiómero deseado o donde la cristalización I preferencial del diasteroisómero a partir del enantiómero deseado perturba el equilibrio tal que eventualmente en principio todo el material se convierte al diasteroisómero cristalino a partir del enantíómer;0 deseado. El enantiómero deseado es entonces liberado partir del diasteroisómero; viii. Resoluciones cinéticas - esta técnica se refiere ' Ia la realización de la resolución parcial o completa de ün racemato (o de una solución adicional o un compuestjo parcialmente resuelto) en virtud de las velocidades de reacción desiguales de los enantiómeros con un reactivo o catalizador no racémico y quiral en condiciones cinéticas; ¡ ix. Síntesis enantioespecífica a partir de precursores no racémicos - una técnica sintética en la cual el enantiómero deseado se obtiene a partir de materias I primar no quirales y donde la integridad estereoquímica no es o esta comprometida sólo mínimamente durante él curso de la síntesis; x. Cromatografía de líquidos quiral - una técnica en cual los enantiómeros de un racemato son separados én una fase móvil liquida en virtud de sus interacciones diferentes con una fase estacionaria. La fase estacionaria puede ser un material quiral o la fase móvil puede contener un material quiral adicional para provocar las interacciones diferentes; xi . Cromatografía de gases quiral - una técnica en lía cual el racemato es volatilizado y los enantiómeros son separados en virtud de sus interacciones diferentes en la fase móvil gaseosa con una columna que contiene una fase adsorbente quiral no racémica fija; xii. Extracción con disolventes quirales - una técnica en la cual los enantiómeros son separados en virtud de la disolución preferencial de un enantiómero en un disolvente quiral particular; y xiii. Transporte a través de membranas quirales - una técnica en la cual un racemato se pone en contacto con una barrera membranal delgada. La barrera típicamente separa dos fluidos miscibles, uno que contiene el racemato y un gradiente de potencial como concentración o presión diferencial, ocasiona el transport'e preferencial a través de la barrera membranal. La j separación ocurre como resultado de la naturaleza quiral no racémica de la membrana la cual permite solamente que uno de los enantiomeros del racemato pase a través de ella; xiv. Cromatografía de líquidos - una técnica en la cual los enantiomeros son separados en un sistema de disolventes en fase normal en virtud de la diferencia en sus coeficientes de partición con respecto a una fase estacionaria quiral. Esta técnica se empleo para generJr preparaciones activas ópticamente de (-) -nilvadipina ( + ) -nilvadipina descritas aquí (véase Figura 8A-8C) .

Los enantiomeros de nilvadipina han sido separados así: Nilvadipina 1 (-) -Nilvadipina Literatura: [cr];? -219.6° ( c= 1.0, MeOH) Observado: [a -99.0° ( c= 0.57, MeOH) i Nilvadipina 2 (+) -Nilvadipina Literatura: [a~¡1 + 222.4° ( c= 1.0, MeOH) Observado: [a];,5 +170.1° ( c= 0.57, MeOH) Los valores de la literatura para las rotaciones óptica's de los enantiómeros de nilvadipina están reportados en Satoh, Y.; Okuraura, K.; Shiokawa, Y. Chem. Pharm. Bull. 42(4) 950, 952 (1994) . Véase Figura 5 para los datos concernientes a lja pureza enantiomérica de los compuestos separados. El término "aproximadamente" quiere decir entre ± 10% de la cantidad establecida o entre el error experimental de la técnica de medición. La frase "una composición que consiste esencialmente de" significa que comprende una composición en la cual el ingrediente farmacéutico activo es como se indicJ. En una modalidad, la frase "que consiste esencialmente de" excluye ingredientes farmacéuticos activos no enlistados, aunque no excluye vehículos, portadores o diluyentes aceptables farmacéuticamente o la manera en la cual él ingrediente farmacéuticamente activo esta formulado. En una modalidad, por ejemplo en un método de tratamiento, la frase "que consiste esencialmente de" puede comprender la administración de uno o más ingredientes farmacéuticamente activo como el agente (s) terapéutico (s) solo para esa indicación particular, mientras que no excluye agentes terapéuticos administrados por otras razones o indicaciones. Ejemplos Los métodos de la presente invención para reducir los efectos patológicos de ?ß en animales o humanos que sufren por enfermedades asociadas con amiloidosis, tal como EA (AD) , I se describirá a más detalle en los siguientes ejemplos no limitantes. Los ejemplos 1-5 proporcionan datos para la nilvadipina racémica con propósitos comparativos. Purificación Cromatográfica de Enantiómeros de Nilvadipina j La purificación cromatográfica de ambos enantiómeros de la nilvadipina se logro vía Cromatografía de líquidos de alta i resolución (HPLC) usando una fase estacionaria de celulosja modificada (Chiral Technologies, West Chester, PA) . Las condiciones cromatográficas son las siguientes: diámetro interno de la columna, 10 mm; longitud de la columna, 250 mJ; fase móvil, 95:5 relación volumétrica de hexano: etanolj; velocidad de flujo, 2.5 mL/min; temperatura de la columna, 7°C. Las inyecciones repetidas de nilvadipina racémica usando recolección de fracciones basada en la señal produjeron I enantiómeros purificados para los ejemplos aquí descritos.

Véase Figura 8A-8C. j Ejemplo 1 Administración crónica de Nilvadipina sobre la deposición de ?ß (carga de amiloide) El efecto de la administración crónica de nilvadipina sobre la deposición de ?ß (carga de amiloide) en diferentes regiones del cerebro de ratones Tg APPSW se examino usando una técnica de inmunotinción de anticuerpos monoclonales anti-?ß 4G8. La técnica de inmunotinción 4G8 se eligió para determinar la carga amiloide debido a su señal robusta y resultados óptimos par el análisis cuantitativo de la deposición de ?ß . Brevemente, las secciones de parafina sje sometieron a inmunohistoquimica como se ha descrito previamente (Nakagawa, Y., y colaboradores, Exp. Neurol. 163:244-252, 2000) . Las secciones se deparafinizaron ejn xileno, hidrataron en una serie de etanol y agua demonizada y se sometieron a un paso de recuperación de antigenos al sumergir las secciones en 88% de ácido fórmico durante 60 mi antes de la inmunohistoquimica para ?ß . Las secciones s1^ lavaron en agua y las peroxidasas endógenas se inhibieron usando una mezcla preparada recientemente de metanol (150 mL) mas peróxido de hidrógeno (33%, 30 mL) . El método de complejo avidina-biot ina se uso de acuerdo a las instrucciones del vendedor (Vector Laboratories, Burlingame, California) . La carga amiloide se evalúo al determinar el porcentaje de la región cerebral que fue positiva a la tinción para ?ß . Los controles negativos incluyeron la aplicación del misrtio protocolo de inmunohistoquímica a las secciones, excepto suero preinmune se aplico en lugar del anticuerpo primario.

Los ratones Tg APPSW se dividieron en un grupo experimental que recibió una cantidad efectiva de nilvadipina (n = 7) y un grupo control que recibió un vehículo (n = 5) . ; Como se ilustra en la FIG. 1, el tratamiento cón nilvadipina redujo la carga de ?ß aproximadamente 62% en él corteza visual comparado con los controles, aproximadamente 65% en la corteza parietal comparado con los controles, aproximadamente 58% en la corteza motora comparado con los controles, aproximadamente^ 58% en la corteza piriforme I i comparado con los controles, aproximadamente 52% en la región CAI del hipocampo comparado con los controles y aproximadamente 50% en la región CA2-CA3 del hipocampo comparado con los controles.

Ejemplo 2 Administración crónica de nilvadipina sobre la activación microglial El efecto de la administración crónica de nilvadipina j sobre la activación microglial en ratones Tg APPsw se examino en tres regiones del cerebro de los ratones usando una técnica de inmunotinción CD45 en el cual se determino él numero de CD45+microglia .

Brevemente, la inmunohistoquimica para CD45, un marcador especifico de microglia, se realizo sobre las seccionés cerebrales en criostato, las células microgliales positivas para CD45se inmunolocalizaron al incubar con un anticuerpo monoclonal contra CD45 (Chemicon International) toda la noche a 4°C, seguido de la aplicación de un anticuerpo secundario i antiratón de conejo biotinado durante 30 minutos. La detección de CD45 se completo con el sustrato cromogénico diaminobenzidina, el cual produce una superficie celular café teñida sobre las células microgliales positivas para CD45. j Como se ilustra en la FIG. 2, el tratamiento con nilvadipina administrado en una cantidad de dosis efectiva redujo la activación microglial aproximadamente 33% en el hipocampo, aproximadamente 43% en la corteza parietal aproximadamente 27% en la corteza motora al ser comparadas con los controles.

Ejemplo 3 El efecto de la administración de nilvadipina sobre la activación microglial I El efecto de nilvadipina sobre la activación microglial se examino en células microgliales de murino N9 in vitro activadas con lipopolisacarido (LPS) durante 24 horas. Las células microgliales de murino N9 están atrapadoras bien caracterizadas de clones microgliales de murino derivados de cerebro de ratón embriónico. El alcance de la activación I microglial se determino a través de la producción de TNF-a (pg/mL) medida por ELISA. Como se muestra en la FIG. 3, lás células microgliales no activadas con LPS (células control) produjeron aproximadamente 40 pg/mL de TNF-a. Las célula's microgliales en presencia de 50 nM de nilvadipina produjerojn aproximadamente 40 pg/mL de TNF-a. Al incrementar lja administración de nilvadipina 10 veces (500 nM) no cambio la producción de TNF-a. Las células microgliales en presencia de 1 yg/mL de LPS produjeron aproximadamente 820 pg/mL de TNF-a, un incremento de aproximadamente 95% a partir de las células control y células a las que se administro nilvadipina. Las i células microgliales en presencia de tanto 1 yg/mL de LPS má's 50 nM de nilvadipina produjeron aproximadamente 670 pg/mL de TNF-a. La administración de LPS más 500 nM de nilvadipinadisminuyo la producción de TNF-a hasta aproximadamente 610 pg/mL. Asi, la nilvadipina combatió la t activación microglial inducida por LPS por aproximadamente 20 a 25%. Ejemplo 4 El efecto de la administración de nilvadipina sobre la neurotoxicidad de ?ß I El efecto de la administración de nilvadipina (10 nM y 100 nM) sobre la neurotoxicidad de ?ß) se examino usando células progenitoras neuronales de humano (HNPC) tratadas durante tres días con 30 µ? de ?ß1-40 preagregado (AgAß) . Las i células HNPC diferencian se diferencian en neuronas fácilmente en el tratamiento con AMP cíclico. El AMP cíclico (lmM) (Sigma) se adiciono al medio de cultivo y las células HNPC se incubaron a 37 °C durante 48 horas o más en condiciones libres de suero. Este medio permitió la i diferenciación de los progenitores en células de linaje neuronal así como confirmo por tinción de la mayoría de las células con anticuerpos contra la proteína asociada microtúbulos ,' MAP-2. La neurotoxicidad se evalúo al medir lja cantidad de deshidrogenasa láctica (LDH; una enzima intracelular encontrada en todas las células) liberada de las células . Como se ilustra en la FIG. 4, el tratamiento de las células con AgAß produjo aproximadamente 44% de incremento en de LDH liberada comparado con el tratamiento de las células con nilvadipina. No existió cambio en la liberación de LDH cuando se adiciono 10 nM de nilvadipina junto con ???ß . embargo, cuando se incremento la cantidad dosificada nilvadipina .10 veces a 100 nM, la cantidad de LDH liberada disminuyo aproximadamente 44%. ' Ejemplo 5 El Efecto de la Administración de Nilvadipina en l Procesamiento de la APP El efecto de nilvadipina en ejl procesamiento de la APP se examinó utilizando células de I glioblastoma humano transíectadas con APPsw. Las célula|s fueron tratadas con nilvadipina 50nM y 250nM por 24 y 4$ horas, y la producción de ?ß1-40 en el medio de cultivo s,e midió por medio de un ELISA de ?ß1-40 humano disponible comercia lraente (Biosource, CA) . Como se muestra en la FIG. 5A después de 24 horas de tratamiento, la nilvadipina 50riM reduce la producción de ?ß.1-40 en aproximadamente 9%, 'y nilvadipina 250nM reduce la producción de ?ß'1-40 ein i aproximadamente 15%. Después de 48 horas de tratamiento { Fld. i 5B) , nilvadipina 50nM educe la producción de ?ß1-40 ein I aproximadamente 18%, y nilvadipina 250nM reduce la producción i de ?ß1-40 en aproximadamente 51. j Ejemplo 6 El Efecto de Variar las Dosis de los Enantiómeros Aislados y la Mezcla. Racómica de Ni Ivadipina en los Nivelas de ?ß El efecto ele las formas enantioméricas puras 4e i ni 1vaci.ipina, ( - ) -ni 1vadipina {ni 1vadipina 1 ) y ( + ) -nilvadipina íni Ivadipina 2) (FIG. 8A-8C) así corno una mezcla I de los dos enantiómeros (en igual proporción) en la producción de ?ß 1-40 y ?ß 1-42 se examinó utilizando células de ovario de hámster Chino 7W T APP751 después de 24 horas de tratamiento. La producción de ?ß 1-40 y ?ß 1-42 en <jl medio de cultivo se midió utilizando un ELISA de ?ß 1-40 humano disponible cornercialmente (Biosource, CA) y un ELISA de ?ß 1-42 humano disponible cornercialmente (Biosource, CA) respect ivamente. j Como se muestra en la FIG. 6, ambos enantiómeros i aparentemente inhiben de forma dependiente a la dosis la producción de ?ß 1-40 en una forma similar. Sin embargo, el (+) -nilvadipina (nilvadipina 2) así como la mezcla racémióa j de nilvadipina (N1+N2) estimulan ligeramente ?ß 1-42 a dosis bajas mientras que {-) -nilvadipina (nilvadipina 1) no muestra este efecto (FIG. 7). ¡ Ejemplo 7 Efecto de los Enantiómevos Aislados de Nilvadipina en la Vasoconstricción en la Aorta de Rata Se examinó el efecto ele las formas enantioméricas puras de nilvadipina: (-) -nilvadipina {nilvadipina 1) y ( + )' -nilvadipina (nilvadipina 2) ( FIG . 8A-8C) en vasoconstricción inducida de FPL6 176 en la aorta de rata. Ratas machos normales Sprague-Dawley (de 7-8 meses de. edao) fueron, sometidos a eutanasia de la forma, más humanamente posible, y se segmentó la aorta fresca disectada de la ratía en anillos de 3-mm y se suspendió en amortiguador de Kreb sobre ganchos en el recipiente de un aparato de baño. Estcjs ganchos fueron conectados a un transductor isométrico unido al sistema MacLab. Los anillos aórticos fueron equilibradejs en el sistema ele baño de tej ido por 2 horas con ejl i amortiguador de Kreb el cual se cambió cada 30 min. ! Una tensión inicial de 2 q se aplico a cada anill'o aórtico. Los anillos aórticos se p etrataron, con 100 nM de (-) -nilvadipina (nilvadipina 1), 100 nM de ( + ) -nilvadipinia (nilvadipina 2) o no tratados 2 min previo a la adición de jl µ? de FPL64176 (éster metílico del ácido 2, 5-dimetil-4 [2¡- ( fenilmet il ) benzollo ] -lH-pirrol-3-carboxí1 ico) , un potente ¡y selectivo agonista de los canales de calcio tipo L. Lós anillos aórticos se comprimen con FPL64176 durante $0 minutos. Se determino la cantidad de compresión (en g) al compararse con el estado inicial y la media y desviación estánda r de ta1es va1ores se ca 1.cu1aron . j Como se ilustra en la FIG. 9, (+) -nilvadipina antagónica completamente la vasoconstricción inducida de FPL6 17¡6 mientras que (-) -nilvadipina no produce el efecto vasoacti o del agonista del canal de calcio tipo L, mostrando que (+) -nilvadipina es un bloqueador del canal de calcio tipo |L mientras que la (-) -nil adipina carece de dicho efecto. Lcj datos presentados aquí demuestran el estado basal de la contracción aórtica cuando se reta con FPL64176 para el (-);- enantiómero, lo que correlaciona con la reducción de lja vasoact. ividad para el (-) -enantiómero en comparación a 1 mezcla racémica o el ( + ) -enantiómero el cual exhib!e vasoact ividad (por ejemplo, antagonismo de l'a i asoconstricción inducida ) . : Ejemplo 8 El Efecto de ( Nilvadipina en los Niveles %ß Ce.re.bra les El efecto de (-) -nil adipina aislada en los niveles de ?ß 1-40 y ?ß 1-42 cerebrales fue examinado. Ratonas transgénicos de APPSW de 93 semanas de edad (Tg APP,:W línea 2576) fueron inyectados int aperitonealmente de fo ma dia ia con 10 mg/Kg de peso corporal con (-) -nilvadipina disuelta en DMSO (n=4) o con el mismo volumen. (n=4) de vehículo (100 L) Después de 4 días de tratamiento, los animales fueron sometidos a eutanasia de la forma más humanamente posible una hora después de la última inyección, sus cerebros fuero'n recolectados y se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido. Los cerebros fueron homogeneizados a 4°C con agua i destilada conteniendo IX del coctel de inhibidores de j proteasa IV (Calbiochem, CA) y centrifugados a 14, 000 rpm p r 30 minutos a 4 C. El pellet fue resuspendido con un volumetn i igual de Gu.an.id.ina 5M disuelto en amortiguador de Tris HC¡1 (pH=8) e incubado a temperatura ambiente por una hora. Lajs concentraciones de proteína fueron determinadas en las muestras tratadas con. guanidina con el método BCA (Biorac., CA) . Los niveles de ?ß 1-40 y ?ß 1-42 fueron evaluados cdn ELISA (Biosource, CA) y los resultados fueron repor ados én pg de ?ß 1-40 o ?ß 1-42 por mg de proteína.

Como se muestra en la FIG. 10, la administración de (-) nilvadipina a ratones TgAPPsw a una dosis de 10 mg/kg en peso corporal de forma diaria por cuatro días resultó en un decremento del 26& en los nivles de ?ß 1-42 cerebrales (pg/ml) , y de un decremento del 43% en los niveles ?ß 1-4:0 cerebrales, en comparación con los animales control.

Ejemplo 9 El Efecto de una Liberación Lenta de (-) -Nilvadipina en i 1 los Niveles de ?ß Cerebrales Se examinó el efecto de una liberación lente de {-)- ni Ivadipina en los niveles de ?ß cerebrales. Se implantarán Tg APPSW de 66 semanas de edad (Tg APP,,W línea 2576) de forma subcutánea con un pellet biodegradable de (-) -nilvadipina i asegurando una liberación lenta y continua de 30mg de (-):- nilvadipina /Kg de peso corporal /día (n=5), un pellejt biodegradable de (-) -nilvadinpina asegurando una liberacicjn j lenta y continua de 56mg /Kg/día (n=6) , o un pellet liberando I un placebo (n= 6) por un periodo de 30 días. Los animales fueron sometidos a eutanasia, de la forma más humanamemtje j posible 26 días después de la implantación del pellet, sus cerebros fueron recolectados y congelados i stantáneamente nitrógeno liquido. Los cerebros fueron homoqenei zados a 4C ]C con agua destilada conte iendo IX del coctel de inhibidores de proteasa IV (Calbiochem, CA) y centrifugados a 14,000 rpin por 30 minutos a 4°C. El sobrenadante fue. resuspendido con iln volumen igual de Guan.id.ina 5M disuelto en amortiguador cjle Tris HC1 (pH=8) e incubado a temperatura ambiente por urja hora. Las concentraciones de proteína fueron determinadas en las muestras tratadas con guanidina con el método BCA (Biorad, CA) . Los niveles de ?ß 1-42 fueron evaluados ??? ELISA (Biosource, CA) y los resultados fueron reportados e.n pg de ?ß 1-42 por mg de proteína.

Como se muestra en la FIG. 11, la administ ación de (-)- nilvadipina de liberación lenta, a ratones TgAPPsw resultó en una reducción del doble en los niveles de ?ß 1-42 cerebrales para los ratones a los que se administró 30mq/Kg/Día del pellet de (-) -nilvadipina de liberación lenta, mientras que una reducción de 2.5 más en ?ß 1-42 fue observada en los animales tratados con un pellet de liberación lenta de 36 mg/kg/Día en comparación con ratones a los que se implantó qn I pellet placebo.

I Ejemplo 10 j j El Efecto de. (-) -Nilvadipina en el Aclaramiento de lós j Niveles de ?ß Cerebrales a través de la Barreda Hema toencefálica Modelo in vitro Se examinó el efecto de (-) -nilvadipina en el aclaramiento de los niveles de ?ß cerebrales a través de la barrera hematoencefálica (BBB por sus siglas en Inglés) utilizando tanto un modelo in vitro como uno in vivo. El modelo in vitro se muestra en la FIG. 12. Se colocó el medio de cultivo celular endotelial (ECM, ScienCell Research Laboratories) conteniendo fluoresceina-^-amiloide 2 µ? (1-42;) (3) en el compartimento (donador) basolateral. El lado api ajl i ( receptor) de la membrana fue expuesto a varios compuestos de i I dihidropiridina (DHP por sus siglas en Inglés) (1, 5 y 10 µ?) I en ECM (2) . El compartimento donador fue rnuestreado al tiempo 0 para establecer la concentración inicial de fluoresceina-ß- amiloide (1-42) en cada grupo . Después de la exposición del inserto al pozo conteniendo la a iloide fluorescente, se recolectaron las muestras del compartimiento apical en varioj tos temporales hasta 90 minutos (1) para asegurar movimiento de la fluoresceina- -amiloide (1-42) a t avé la monocapa cié la célula enciotel ial mícrovascular de cerebi humano (HBMEC) (4) (basolateral a apical) . Las muestras fueron analizadas (Aex = ¦185nrn y Aem = 516nm) buscande fluoresceína-p-ami loide (1-42) utilizando un lector de multa detección con micropiato BioTek Synergy HT (Winooski, VT) . I permeabilidad aparente (Papp) de la fluoresceína-p-amiloide (1-42) fue determinada utilizando la ecuación Papp = 1/ACo (dQ/dt), en donde A. representa el área superficial de lia membrana, Co es la concentración inicial, de :' 1 ucreccema-amiloide (1-42) en el compartimento donador basolateral, |y dQ/dt es la cantidad de fluoresceína-p-amiloide (1-42) que aparece en el comp timento receptor apical en un periodo ce tiempo dado (polli) . El Papp de la fluoresceína-p-amiloice ,1-42) en presencia de ( - ) -nilvadipina fue comparada a les pozos de control y expresada corno porcentaje.

Como se muestra en la FIG. 13, la dosis de (¦ nilvadipina estimula de forma dependiente el transporte de ¾ß desde el lado del cerebro (B) al lado periférico (A) en ujn modelo in vitro en la barrera hematoencefálica El modelo in vitro también fue usado para examinar el efecto in vitro de (-) -nilvadipina vs . La mezcla racéroica de nilvadipina en el a laramiento de ?ß cerebral a través de 1 BBB. Un protocolo similar al descrito anteriormente fue usado en estos experimentos siendo la diferencia principal la i adición de la mezcla racémica para comparación. Como se muestra en la FIG. 14 tanto (-) -nilvadipina como la mezcla racémica de nilvadipina estimulan de forma dependiente de .ja dosis el transporte de ?ß a través de la barreda hematoence fálica (B) a la periferia (A) en. un modelo i.n vi tro. j i I Modelo in vivo | Se examinó el efecto de (-) -nilvadipina en él aclaramiento de los niveles de ?ß cerebrales a través de BBB utilizando un modelo in vivo. Ratones B6/SJL hembras de t ipo si 1vestre fueron anestesiados via inha1a.ción uti1i zanao una mezcla de 3% de isof1uorano/oxígeno. Mientras que estaban en anestesia, los ratones fueron inyectados con un vehículo j (DMSO) o (-) -nilvadipina intrape itonealrnente (i.p.) . Cinco i minu os después de la inyección i.p. , los ratones fueran inyectados de forma estereotáxica con 3 µ? de ß-amiloide humana (1-42) (lmM en DMSO) en la región intraventricular del í cerebro ( 3mm posterior y 1.0 mrn lateral del bregma y 4 mm por debajo de la superficie del cerebro) . Diez minutos después de 1.a inyección de la ß-amiloide humanal (1-42), se sometiéronla eutanasia los ratones. Muestras de plasma fueron recolectadas y analizadas para ß-amiloide humana (1-42) utilizando un sándwich ELISA para ß-amiloide humana (1-42) . El nivel de fj- amiloide (1-42) en las muestras de plasma recolectadas de los ratones tratados con (-) -nilvadipina fue comparada a aquellos que recibieron sólo el vehículo.

Adicionalmente, experimentos similares se desarrollaran utilizando animales a los que se implantó de maneja subcutánea un pellet biodegradable de (-) -ni Ivadipina o Un placebo y que recibieron la inyección intracerebral de ?ß ]- 42 trece días después de la implantación del pellet. Todos los experimentos utilizando animales fueron desarrollados bajo los protocolos aprobados por el Comité Institucional de Uso y Cuidado de Animales ( Institutí onal Animal Care and Uée Committee) .

Como se muestra en la FIG. 15, tanto la mezcla racémica de nilvadipina como la (-) -nilvadipina incrementan el transporte de ?ß a tra és de la barrera hematoencefálica vivo, la (-) -ni Ivadipina a 2 mg/Kg de peso corporal estimula el aclaramiento de ?ß desde el cerebro a la sangre al doble 4 veces más a una dosis de 5 mg/ g de peso corporal mientras ' que la mezcla. racémica de nilvadipina incremente aclaramiento de ?ß por 4 veces más a una dosis de 2 mg/Kg <|e peso corporal.

La FIG. 16 es una gráfica de barras que ilust a e efecto de ( - } -nilvadipina en el aciaramiento de los niveles ?ß cerebrales a través de la BBB utilizando animales a lós que se implantó de manera subcutánea un pellet biodegradabl e de (-) -nilvadipina o un placebo y que recibieron urta inyección intracerebral de ?ß 1-42 trece dias después de ja implantación del pellet. Como se muestra en la FIG. 16, urja liberación lenta de (-) -nilvadipina asegurada por un pellet biodegradable a una dosis de 30mg/Kg de peso corporal /Dija incrementa el aciaramiento de ?ß intracerebral por 3 vecejs más en comparación con ratones controlados a los que áe implantó el pellet placebo.

Estos estudios in vitro e in vivo del efecto de (-)-nilvadipina en el aciaramiento de los niveles de ?ß a través de la barrera, ernatoencefálica (BBB) divulga un resultado terapéuticamente relevante y potencial. Los datos sugiere!n que el efecto de (-) -nilvadipina en el aciaramiento es para incrementar la migración del ? cerebral a través de la BBB. Esto se debe a partir del aumento observado en los niveles c-e ?ß séricos después de la administración de ( - ) -nilvadipina .

Como se muestra en las FIGS.17A y B, la (-) -nilvadipina puede ser administrada a dosis mucho mayores en el modelo d,e vasoconstricción de la aorta de rata fPL64176 antes cíe exhibir propiedades vasoactivas cornparadas a 1a ( + )! nilvadipina .

Cono1 us iones genera 1es Con respecto a los efectos de los diferentes enantiómeros de nilvadipina, ambos enantiómeros parec r inhibir dependiendo de la dosis la producción de ?ß1-40 c|e i manera similar, aunque ( + ') -nilvadipina y nilvadipina racernida estimulan ligeramente A(Jl-42 a dosis baja. El e nilvadipina sobre ? 1-·?2 es m s bajo y no estadísticamente. Véase, por ejemplo, las Figuras 6 y · i También fue descubierto sorprendentemente que (+) -nilvadipina antagóniza completamente la vasoconstricción inducida por FPL64176 mientras que (-) -nilvadipina no antagoniza la vasoconstricción inducida por FPL64176 del aaonista del canal í de calcio tipo L- Los daos aquí presentados demuestran la I i contracción aórtica basal cuando se estimulo con FLP64176 para el (-) -enantiómero, lo que correlaciona con la vasoactividad reducida para el (-) -enantiómero comparado con la mezcla racémica o el (+) -enantiómero que exhibe vasoactividad (es decir, antagonismo de vasoconstricción Una evaluación de la influencia de ( - ) -nilvadipina sobre j los niveles de ?ß cerebrales demuestra que la administración (-) -nilvadipina (10 mg/kg de peso corporal, dia iamente) produce una disminución de 26% en los niveles cerebrales de ?ß1-42 (pg/mL) y una disminución de 43% en los niveles cerebrales de ?ß1-40 en ratones Tg APPSW después de solo í cuatro días de tratamiento. Como se ilustra en la FIG. 11, la administración de {-) -nilvadipina de liberación lenta ja í ratones Tg APPsw por 26 días resultó en una reducción de |2 veces en los niveles cerebrales de ?ß1-42 para los ratones los que se administró dosis de un pellet de liberación lenta de 30 mg/kg/día de (-) -nilvadipina mient as que una reducción de 2.5 veces en ?ß1-42 se observó en los animales tratados con un pellet de liberación lenta de 56 mg/kg/día comparado con los ratones implantados con un pellet de placebo.

Los estudios in vitro e in vivo del efecto de (-)- nilvadipina sobre el acia ramiento de los niveles de ß cerebral a través de la membrana hematoencefálica (BBB) también producen resultados inesperados y esperanzadores . Los datos sugieren que el efecto de (-) -nilvadipina sobre esíie a cíaramiento es incrementar la migración de ?ß cerebral través de la BBB. Esto es resultado del incremento observado en los niveles de ?ß séricos después de la administración de ( - ) -nilvadipina . i I En vista de los datos anteriores, se puede extrapolar que la administ ración de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente a animales o humanos afectados con una i enfermedad amiloidoqénica cerebral, tal como EA (AD) , puecje disminuir significativamente la cantidad de deposición de ß en regiones criticas del cerebro que caracteristicamentje i I demuestran una abundancia de tales depósitos patológicos asjí como reducen la cantidad de ?ß fácilmente depositada en ejl cerebro sin afectar innecesa iamente la presión sanguínea !u I I otros posibles efectos secundarios. Adicionalmente, la administración de (-) -nilvadipina enriqueciera enantioméricamente puede oponerse a los efectos neurotóxicós de ?ß, los efectos que se cree son responsables de la destrucción neuronal extensa y devastadora observada con la EA (AD) , asi como reduce la activación microglial que ocasiona la respuesta inflamatoria característica vista e^n los cerebros de pacientes con EA (AD) con efectos secundariejs i"educidos. Fina1mente , e1 t ra.tamiento con (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente puede reducir la concentración de ?ß ya depositado en cerebros de animales o humanos afectados con enfermedades ami loidogénicas cerebrales tal como ?? (AD) sin ocasionar efectos secundarios superfluos . | I Será aparente para aquellas personas expertas en el arte previo que pueden hacerse varias modificaciones y variaciones i en los métodos de la presente invención sin alejarse del alca ce o campo de la invención . Así, se p evé que la presente invención incluye modificaciones y variaciones qije i están dentro del alcance de las reivindicaciones anexadas y i " sus equi alentes. Todas las referencias aquí citadas .je incorporan corno referencias.

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento se considera como novedad y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES I

1. Un método para reducir la deposición de ?ß, i neurotoxicidad de ?ß y microgliosis en un animal o humano afectado con una enfermedad o condición amiloidogénica cerebral que comprende administrar al animal o humano una cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente .

2. Un método para reducir el riesgo de enfermedad condición amiloidogénica cerebral resultante de la deposición de ?ß, neurotoxicidad de ?ß y microgliosis en un animal jo humano que sufre de daño cerebral traumático que comprende administrar al animal o humano una cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipina enriquecida I enantioméricamente, caracterizado porque la (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente comienza después de¡l traumatismo craneal agudo.

3. Un método para reducir el riesgo de desarrollar j enfermedad o condición amiloidogénica cerebral que comprende administrar al animal o humano una cantidad efectiva i I terapéuticamente de (- ) -nilvadipina enriquecida enant ioméricamente . ,

4. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la enfermedad condición amiloidogénica cerebral es seleccionada del grupo que consiste de enfermedad de Alzheimer, daño cerebral traumático y angiopatía amiloide cerebral.

5. El método de conformidad con cualquiera de lás reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente es seleccionada del grupo que consiste de l entre aproximadamente 0.05-20 mg por día, aproximadamente 2- 15 mg por día, aproximadamente 4-12 mg por día jy aproximadamente 8 mg por día. !

6. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente es seleccionada del grupo que consiste de entre 16 hasta la máxima dosis tolerada, 16 a 50, aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50, aproximadamente 100, aproximadamente 3?(? y aproximadamente 500 mg por día.

7. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la cantidad i efectiva terapéuticamente de ( - ) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente reduce la presión sanguínea en uña cantidad seleccionada del grupo que consiste de menos que aproximadamente 20%, menos que aproximadamente 10%, menos que aproximadamente 5% y menos que aproximadamente 1% la presión sanguínea antes del tratamiento después de la administración de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente, donde la I presión sanguínea se calculo al monitorear continuamente le integrar sobre el tiempo por un área bajo la curva y donde la presión sanguínea pretratamiento es determinada después de un periodo de tratamiento suficiente para alcanzar un resultado en estado estacionario.

8. El método de conformidad con cualquiera de las í reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la (~)|~ nilvadipina enriquecida enantioméricamente es administrada a un humano o animal con presión sanguínea en un intervalo normal o hipotenso.

9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la (_);- nilvadipina enriquecida enantioméricamente es administrada a un humano o animal con presión sanguínea en un intervalo hipertenso.

10. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el enriquecimiento enantiomerico es seleccionado del qrupo que consiste de mayor que aproximadamente 95%, mayor que aproximadamente 98% y nilvadipina enriquecida enantioméricamente es administrada én forma de una dosis unitaria la cual es seleccionada del grupo que consiste de cápsulas gelatinosas de cobertura dura o suave, comprimidos, pastillas para chupar, sobrecitos, pastillas masticables, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, polvos, gránulos, soluciones y emulsiones. 13. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la administración es vía administración parenteral, oral ,o intraperitoneal y opcionalmente caracterizado porque la ruta parenteral de administración seleccionada del grupo que consiste de intravenosa; intramuscular; intersticial; intrarterial ; subcutánea; intraocular; intracraneal; intratecal; intraventricular ; intrasinovial ; t ransepitelial , incluyendo transdérmica , pulmonarmente vía inhalación, oftálmica, sublingual y bucal; tópica, incluyendo oftálmica, dérmica, ocular, rectal e inhalación nasal vía insuflación o nebulización, opcionalmente seleccionado del grupo que consiste de aerosoles, atomizadores y nebulizadores . 14. Un método para tratar enfermedad o condición amiloidogénica cerebral en un animal o humano afligido con una enfermedad o condición amiloidogénica cerebral que comprende administrar al animal o humano una composición que consiste esencialmente de una cantidad efectiva terapéuticamente de (-) -nilvadipina enriquecida enantioméricamente y un portador aceptable farmacéuticamente.