MX2009002794A

MX2009002794A - Uso de agonistas lxr para el tratamiento de osteoartritis.

Info

Publication number: MX2009002794A
Application number: MX2009002794A
Authority: MX
Inventors: Sunil Nagpal; Zhiyong Yang; Elisabeth Morris; Edward Lavallie; Lisa Collins-Racie
Original assignee: Wyeth Corp
Priority date: 2006-09-19
Filing date: 2007-09-18
Publication date: 2009-03-30
Also published as: PE20080908A1; WO2008036239A2; PA8748501A1; EP2089009A2; AR062913A1; BRPI0716833A2; CL2007002712A1; CN101547688A; TW200820978A; CA2662965A1; US20090012053A1; WO2008036239A3; JP2010503730A; AU2007297721A1

Abstract

Se describen en la presente métodos para prevenir y tratar osteoartritis a través del uso de agonistas LXR.

Description

USO DE AGONISTAS LXR PARA EL TRATAMIENTO DE OSTEOARTRITIS CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a métodos para tratar o prevenir osteoartritis con agonistas LXR.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La osteoartritis, también conocida como enfermedad degenerativa de las articulaciones, se caracteriza por la degeneración del cartílago articular así como proliferación y remodelación del hueso subcondral. Los síntomas usuales son rigidez, limitación de movimiento, y dolor. La osteoartritis es la forma más común de artritis, y las velocidades de prevalencia se incrementan marcadamente con la edad. Los enfoques existentes para tratar la osteoartritis incluyen ejercicio, medicinas, cuidado de las articulaciones y reposo, cirugía, técnicas de alivio del dolor, terapias alternativas, y control de peso. Las medicinas comúnmente usadas en el tratamiento de osteoartritis incluyen fármacos anti-inflamatorios no esferoidales (NSAIDs, por sus siglas en inglés), por ejemplo, aspirina, ibuprofeno, naproxeno sódico, cetoprofeno; cremas que alivian el dolor tópicas, masajes, y rocíos (por ejemplo, crema de capsaicina) aplicados directamente a la piel; corticoesteroides, típicamente inyectados en las articulaciones afectadas para aliviar temporalmente el dolor; y REF. : 200630 ácido hialurónico. La cirugía puede realizarse para renovar (alisar) los huesos, reposición de huesos, y reemplazo de articulaciones. Aunque varios medicamentos se han usado para tratar la enfermedad, no son efectivos para control y prevención a largo plazo. Los receptores X del hígado (LXR) , originalmente identificados del hígado como receptores huérfanos, son miembros de la super familia del receptor de la hormona nuclear y se han encontrado para ser reguladores negativos de la expresión del gen inflamatorio de macrófago (ver Solicitud de Patente de E.U.A. Publicada No. 2004/0259948; Joseph SB et al., Nat. Med. 9:213-19 (2003) ) . Los LXR son factores de la transcripción activados por el ligando y se enlazan al ADN como heterodímeros comprometidos con receptores X de retinoide. Mientras que LXRa se restringe a ciertos tejidos tales como hígado, riñon, adiposo, intestino, y macrófagos, LXRp muestra un patrón de distribución de tejido ubicuo. La activación de los LXR por oxiesteroles (ligandos endógenos) en macrófagos resulta en la expresión de diversos genes involucrados en el metabolismo del lípido y transporte de colesterol inverso, incluyendo ABCAl, ABCGl, y apolipoproteína E.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Un aspecto es para un método para el tratamiento de un mamífero que padece de osteoartrit is , que comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad que induce la expresión del gen que responde a LXR de un agonista LXR. Otro aspecto es para un método de la expresión inducida de apolipoproteína D en un mamífero que tiene cartílago osteoart rít ico que comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad efectiva de un agonista LXR. Un aspecto adicional se refiere a un método para prevenir la osteoartritis que comprende: (a) determinar un nivel de expresión de la apolipoproteína D de línea base en el cartílago normal de un sujeto; y (b) mantener el nivel de expresión de la apolipoproteína D de línea base en el cartílago del sujeto por medio de tratamiento con el agonista LXR. Un aspecto adicional es para un método para el tratamiento de un mamífero que padece de osteoartritis que comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad que inhibe la actividad de agrecanasa de un agonista LXR. Un aspecto adicional es para un método para inhibir la actividad de agrecanasa en un mamífero que tiene cartílago osteoartrít ico que comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad efectiva de un agonista LXR. Otro aspecto se refiere a un método para el tratamiento de un mamífero que padece de osteoartritis que comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad efectiva de un agonista LXR para inhibir la elaboración de citoquinas pro-inflamatorias en lesiones osteoartríticas . Un aspecto adicional se refiere a un método para detectar un fenotipo osteoartrít ico en un sujeto que comprende: (a) determinar un nivel de expresión de la apolipoproteína D de línea base en el cartílago normal; (b) obtener una muestra del cartílago de un sujeto que se sospecha que tiene osteoartritis ; y (c) detectar el nivel de expresión de la apolipoproteína D en la muestra; en donde una cantidad inferior de expresión de la apolipoproteína D en la muestra comparada con la expresión de la apolipoproteína D de la línea base es indicativa de osteoartritis. Un aspecto adicional es para un método de identificar un ligando LXR capaz de reducir un efecto osteoartrítico en el cartílago que comprende: (a) proporcionar una muestra que contiene LXR; (b) poner en contacto la muestra con un compuesto de prueba; y (c) determinar si el compuesto de prueba induce la expresión de la apolipoproteína D, inhibe la actividad de agrecanasa, inhibe la elaboración de citoquinas pro-inflamatorias, o una combinación de los mismos. Otros aspectos y ventajas de la presente invención se volverán aparentes para aquellos experimentados en la técnica durante la referencia a la descripción detallada que sigue de aquí en adelante.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La Figura 1A es una gráfica de barras que muestra los niveles de expresión con relación a la expresión del receptor nuclear (NR) en el cartílago con osteoartritis severa (OA, por sus siglas en inglés) . La Figura IB es una gráfica de barras que muestra los niveles de expresión con relación a la expresión del receptor de retinoide en el cartílago con OA severa. La Figura 2A es una gráfica de barras que muestra la expresión ApoD en el cartílago normal, y cartílago con OA suave y OA severa. La severidad de la enfermedad se evaluó macroscópicamente al examinar los tamaños y profundidades de las lesiones en los especímenes de cartílago. La Figura 2B es una gráfica de barras que muestra la expresión TNFa en el cartílago normal, y el cartílago con OA suave y OA severa. La Figura 3 es una gráfica de barras que muestra que la degradación/liberación del proteoglicano inducido por citoquina de los explantes del cartílago de OA humano se inhibe por agonistas LXR, y que la reducción inducida por citoquina del contenido de proteoglicano total en estos explantes se previene por los agonistas LXR. La Figura 4A es una inmunotransferencia Western que muestra los neoepítopos de agrecano generados por agrecanasa usando el anticuerpo BC-3, que reconoce la terminal N en los catabolitos de agrecano generados por agrecanasa. Se usaron explantes de cartílago de dos donadores humanos con OA en etapa final (después de la cirugía de reemplazo de articulaciones) . El donador #259 es un paciente del sexo masculino de 57 años de edad, y el donador #261 es un paciente del sexo femenino de 55 años de edad. Pistas 1, 5: vehículo. Pistas 2, 6: TO901317 (2 µ?) . Pistas 3, 7: IL-?ß + oncoestatina M (OSM) (10 ng/ml cada uno) . Pistas 4, 8: IL-?ß + OSM + TO901317. La Figura 4B es una inmunot ransferencia Western que muestra los neoepitopos de agrecano generados por agrecanasa usando el anticuerpo AGEG, que reconoce un epitopo diferente en los catabolitos de agrecano generados por agrecanasa. Pistas 1, 5: vehículo. Pistas 2, 6: TO901317 (2 µ ) . Pistas 3, 7: IL-?ß + OSM (10 ng/ml cada una) . Pistas 4, 8: IL-?ß + OSM + TO901317. La Figura 5A es una gráfica de barras que muestra la inhibición de la producción de prostaglandina E2 total (PGE2) de los explantes de cartílago humano tratados con citoquina por agonistas LXR. La Figura 5B compara las cantidades de ácido araquidónico en las formas de fosfolípidos de membrana PC y PE en los explantes tratados con vehículo de control o agonista LXR GW3965 (2 µ?) durante 21 días. Las muestras de cartílago de los 2 donadores OA humanos se usaron en este estudio.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Los solicitantes específicamente incorporan los contenidos completos de todas las referencias citadas en esta descripción. Además, cuando una cantidad, concentración, u otro valor o parámetro se da ya sea como un rango, rango preferido, o una lista de valores preferidos superiores y valores preferidos inferiores, estos se entienden como que describen específicamente todos los rangos formados de cualquier par de cualquier límite de rango superior o valor preferido y cualquier límite de rango inferior o valor preferido, sin tener en cuenta si los rangos se describen separadamente. Donde un rango de valores numéricos se enumera en la presente, a menos que se establezca de otra manera, el rango se pretende que incluya los puntos finales de los mismos, y todos los enteros y fracciones dentro del rango. No se pretende que el alcance de la invención se limite a los valores específicos recitados cuando se define un rango. La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique de otra manera, técnicas convencionales de biología celular, cultivo celular, biología molecular, biología transgénica, microbiología, ADN recombinante , e inmunología, que están dentro de la experiencia de la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la literatura. Ver, por ejemplo, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a Ed., editado por Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989); DNA Cloning, Volúmenes I y II (D. N. Glover ed., 1985) ; Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed., 1984) ; Patente de E.U.A. No. 4,683,195; Nucleic Acid Hybridi zat ion (B. D. Hames & S. J. Higgins eds . 1984); Transcription and Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984) ; Culture of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R . Liss, Inc., 1987) ; Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press, 1986) ; B. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984) ; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.) ; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory) ; Methods in Enzymology, Vols. 154 and 155 ( u et al. eds . ) . Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Mayer and alker, eds . , Academic Press, London, 1987) ; Handbook of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds . , 1986) ; Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 1986) . Aquí, los solicitantes muestran que LXRa y LXR (receptor a y ß X de hígado) se expresan en cartílagos normales, osteoartríticos medios y osteoartrí ticos severos. Los solicitantes también demuestran por primera vez un defecto de lípido convincente en la osteoartritis debido a la expresión de apolipoproteína D (ApoD) , que se expresa a un nivel muy alto en el cartílago normal, se subregula completamente de manera dramática en el cartílago osteoartrítico medio y severo. Los ligandos LXR inducen la expresión de ApoD por medio de un elemento que responde a LXR presente en la región promotora ApoD. De acuerdo con los datos de expresión, los niveles de proteina de la proapolipoproteina D también se reducen en las muestras de cartílago osteoartrít ico cuando se comparan con el cartílago normal. Debido a que ApoD es una proteína de enlace a lípidos (ácido araquidónico y colesterol) , su reducción en el cartílago osteoart rít ico puede contribuir a niveles de lípido incrementados que se observan en el cartílago osteoart rít ico . El ácido araquidónico incrementado en el cartílago se espera que resulte en niveles incrementados de mediadores de lípido de la inflamación (PGE2, leucotrienos , y los similares) en el tejido enfermo. El cartílago osteoartrítico también muestra actividad incrementada de las enzimas que degradan el cartílago (agrecanasas y metaloproteasas ) . Los solicitantes también muestran por primera vez que el ligando LXR inhibe la actividad de agrecanasas en explantes de tejido de cartílago articular de osteoartrít is humano. Los ligandos LXR también inhiben la expresión de TNFa, y un número de otras citoquinas proinflamatorias . Por lo tanto, un ligando LXR se espera que sea terapéuticamente eficaz en la osteoartritis , y más eficaz que las terapias actuales así como terapias osteoart ríticas próximas a llegar, al normalizar el defecto de lípido, inhibir la expresión y/o actividad de agrecanasas/metaloproteasas, e inhibir la elaboración de citoquinas pro-inflamatorias en lesiones osteoartríticas .

Además, los ligandos LXR inducen la familia de proteínas c-jun/c-fos y, como un resultado, aumentan la actividad API, que se requiere para la formación de cartílago. Por lo tanto, con los ligandos LXR, por primera vez, un tratamiento para osteoart rit is puede no solamente inhibir la degradación del cartílago sino también puede inducir la regeneración del cartílago .

I. Definiciones En el contexto de esta descripción, deberán utilizarse un número de términos. Como se usa en la presente, el término "alrededor" o "aproximadamente" significa dentro del 20%, preferiblemente dentro del 10%, y más preferiblemente dentro del 5% de un valor o rango dado. El término "actividad de agrecanasa" se refiere a al menos un proceso celular interrumpido o iniciado por una enzima de agrecanasa enlazada a agrecano. Generalmente, la actividad se refiere al desdoblamiento proteolítico de agregano por agrecanasa. Otras actividades de agrecanasa incluyen, pero no se limitan a, enlace de agrecanasa a agrecano y una respuesta biológica que resulta del enlace a o desdoblamiento de agrecano por agrecanasas. El término "elaboración de citoquina" se refiere a la producción de citoquinas por el tejido cartilaginoso o condrocitos . Los términos "cantidad efectiva", "cantidad terapéuticamente efectiva", "una cantidad que induce la expresión del gen que responde a LXR", "cantidad que inhibe la actividad de agrecanasa", y "dosificación efectiva" como se usan en la presente, se refieren a la cantidad de una molécula efectora que, cuando se administra a un mamífero que la necesita, es efectiva para aminorar al menos parcialmente o para prevenir al menos parcialmente las condiciones relacionadas con la osteoartritis . Como se usa en la presente, el término "expresión" incluye el proceso por el cual el ADN se transcribe en el mARN y se traduce en polipéptidos o proteínas. El término "inducir" o "inducción" de la expresión de apolipoproteína D (ApoD) se refiere a un incremento, inducción, o de otra manera aumento de la expresión de apolipoproteína D mARN y/o proteína. El incremento, inducción, o aumento pueden medirse por uno de los ensayos proporcionados en la presente. La inducción de la expresión de apolipoproteína D no necesariamente indica la expresión máxima de apolipoproteína D. Un incremento en la expresión de ApoD puede ser, por ejemplo, al menos alrededor de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o más. En una modalidad, la inducción se mide al comparar los niveles de expresión de ApoD mARN del cartílago normal con aquel de los niveles de expresión ApoD mARN del cartílago osteoartrít ico . El término "inhibir" o "inhibición" de agrecanasa o actividad de agrecanasa se refiere a una reducción, inhibición, o de otra manera disminución de al menos una actividad de agrecanasa. La reducción, inhibición, o disminución del enlace puede medirse por uno de los ensayos proporcionados en la presente. La inhibición de la actividad de agrecanasa no necesariamente indica una negación completa de la actividad de agrecanasa. Una reducción en la actividad puede, por ejemplo, ser de al menos alrededor de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o más. En una modalidad, la inhibición se mide por una reducción en la detección de productos desdoblados de agrecano. El término "inhibir" o "inhibición" de la elaboración de citoquinas pro-inflamatorias se refiere a una reducción, inhibición, o de otra manera disminución de la actividad de una citoquina tal como, por ejemplo, iNOS, MCP-3, COX-2, ????ß, MMP-9, IP-10, IL-?ß, IL-?a, G-CSF, TNF , MCP-1, IL-6. La reducción, inhibición, o disminución de la elaboración de citoquina puede medirse por uno de los ensayos proporcionados en la presente. La inhibición de la elaboración de citoquina pro-inflamatoria no necesariamente indica una negación completa de la elaboración de citoquina pro-inflamatoria. Una reducción en la elaboración puede ser, por ejemplo, al menos alrededor de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o más. En una modalidad, la inhibición se mide al comparar los niveles de expresión de TNFa mARN del cartílago normal con los niveles de expresión de TNFa mARN del cartílago osteoartrítico. "Receptor X de hígado" o "LXR" se refiere a tanto LXRa como LXRß, y variantes, isoformas, y fragmentos activos de los mismos. El ?,??ß se expresa omnipresente, mientras que la expresión LXRa se limita a hígado, riñon, intestino, bazo, tejido adiposo, macrófagos, músculo esqueletal, y, como se demuestra en la -presente, cartílago. Los números de acceso al GenBank® representativos para las secuencias LXRa incluyen los siguientes: humano (Homo sapiens, Q13133), ratón {Mus musculus, Q9Z0Y9), rata {Rattus norvegicus, Q62685), vaca {Bos taurus, Q5E9B6) , cerdo {Sus scrofa, AAY43056), pollo {Gallus gallus, AAM90897) . Los números de acceso al GenBank® representativos para LXRß incluyen los siguientes: humano {Homo sapiens, P55055), ratón {Mus musculus, Q60644), rata {Rattus norvegicus, Q62755), vaca {Bos taurus, Q5BIS6) . El término "mamífero" se refiere a un humano, un primate no humano, canino, felino, bovino, ovino, porcino, murino, u otro mamífero veterinario o de laboratorio. Aquellos experimentados en la técnica reconocen que una terapia que reduce la severidad de una patología en una especie de mamífero predice el efecto de la terapia en otras especies de mamífero.

El término "modulado" abarca ya sea una disminución o un incremento en la actividad o expresión dependiendo de la molécula objetivo. Por ejemplo, un modulador ApoD se considera que modula la expresión de ApoD si la presencia de tal modulador ApoD resulta en un incremento o disminución en la expresión de ApoD.

II. Agonistas LXR Los agonistas LXR útiles en la presente invención incluyen oxiesteroles naturales, oxiesteroles sintéticos, oxiesteroles no sintéticos, y oxiesteroles no naturales. Los oxiesteroles naturales ejemplares incluyen 20 (S) hidroxicolesterol , 22 (R) hidroxicolesterol , 24 (S) hidroxicolesterol, 25-hidroxicolesterol , 24(S),25 epoxicolesterol , y 27-hidroxicolesterol. Los oxiesteroles sintéticos ejemplares incluyen N , N-dimetil-3 ß-hidroxicolenamida (DMHCA) . Los oxiesteroles no sintéticos ejemplares incluyen sulfonamida de N- (2, 2, 2 -trifluoroetil) -N- { 4- f 2 , 2 , 2-trifluoro-l-hidroxi-1- (trifluorometil) etil] fenil } benceno (TO901317; Tularik 0901317), [ácido 3- ( 3- (2-cloro-trifluoromet ilbencil-2 , 2-difeniletilamino ) propoxi) fenilacético] (GW3965), N-metil-N- [ 4- (2,2, 2-trifluoro-l-hidroxi-l-trifluoromet i 1-1 -etil ) -fenil ] -bencensulfonamida (TO314407), 4 , 5-dihidro-l- ( 3- ( 3-trifluorometil-7-propil-benzisoxazol-6-iloxi )propil) -2, 6-pirimidindiona , ácido 3-cloro-4- ( 3- ( 7-propil-3-trifluorometil- 6- ( 4 , 5 ) -isoxa zolil ) propiltio) -fenil acético (F3MetilAA), y dímero acetil-podocarpico . Los oxiesteroles no naturales ejemplares incluyen paxilina, desmosterol , y estigmasterol . Otros agonistas LXR útiles se describen, por ejemplo, en la Solicitud de Patente de E.U.A. Publicada Nos. 2006/0030612, 2005/0131014, 2005/0036992, 2005/0080111, 2003/0181420, 2003/0086923, 2003/0207898, 2004/0110947, 2004/0087632, 2005/0009837, 2004/0048920, y 2005/0123580; Patentes de E.U.A. Nos. 6, 316, 503, 6,828, 446, 6, 822, 120, y 6,900,244; WO01/41704; Menke JG et al., Endocrinology 143:2548-58 (2002); Joseph SB et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 99:7604-09 (2002); Fu X et al., J. Biol. Chem. 276:38378-87 (2001); Schultz JR et al., Genes Dev. 14:2831-38 (2000); Sparrow CP et al., J. Biol. Chem. 277:10021-27 (2002); Yang C et al., J. Biol. Chem., Manuscrito M603781200 (20 de julio del 2006); Bramlett KS et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 307:291-96 (2003); Ondeyka JG et al., J. Antibiot (Tokyo) 58:559-65 (2005).

III. Métodos de tratamiento/prevención De conformidad con un método modulador, la actividad LXR se estimula en una célula al poner en contacto la célula con un agonista LXR. Los ejemplos de tales agonistas LXR se describen arriba en la Sección II. Otros agonistas LXR que puede usarse para estimular la actividad LXR pueden identificarse usando los ensayos de separación por exclusión que seleccionan tales compuestos, como se describen en detalle en la presente (Sección V) . Los métodos moduladores pueden realizarse in vitro (por ejemplo, al cultivar la célula con un agonista LXR o al introducir un agonista LXR en las células en el cultivo) , o alternativamente, in vivo (por ejemplo, al administrar un agonista LXR a un sujeto o al introducir un agonista LXR en las células de un sujeto) . Para practicar un método modulador in vitro, las células pueden obtenerse de un sujeto por los métodos estándar y se incuban (esto es, cultivan) in vitro con un agonista LXR para modular la actividad LXR en las células. 1. Métodos Profilácticos En un aspecto, la invención proporciona un método para prevenir en un sujeto la osteoart rit is al administrar al sujeto un agonista LXR que induce la expresión ApoD e/o inhibe la actividad de agrecanasa e/o inhibe la elaboración de las citoquinas pro-inflamatorias en lesiones osteoartrit icas . La administración de un agonista LXR profiláctico puede presentarse previo a la manifestación de los síntomas de osteoartrit is , de tal manera que se previene la osteoartrit is o alternativamente, se retrasa su progreso. 2. Métodos Terapéuticos Otro aspecto de la invención concierne a métodos para modular la actividad LXR para propósitos terapéuticos de osteoartrit is . En consecuencia, en una modalidad ejemplar, un método modulador de la invención involucra poner en contacto una célula con un agonista LXR que modula la expresión ApoD y/o la actividad de agracanasa e/o inhibe la elaboración de las citoquinas pro- inflamatorias en las lesiones osteoartriticas . Estos métodos moduladores pueden realizarse in vitro (por ejemplo, al cultivar la célula con un agonista LXR) , o alternativamente, in vivo (por ejemplo, al administrar un agonista LXR a un sujeto) . Como tal, la presente invención proporciona métodos para tratar a un individuo que padece osteoartrit is que se beneficiaría de la modulación de la expresión ApoD y/o actividad de agrecanasa y/o elaboración de la citoquina pro-inflamatoria en las lesiones osteroartr it icas .

IV. Administración de los Agonistas LXR Los agonistas LXR se administran a sujetos en una forma biológicamente compatible adecuada para la administración farmacéutica in vivo para aumentar la expresión ApoD y/o suprimir la actividad de la agrecanasa y/o suprimir la elaboración de citoquinas pro-inflamatorias. Por "forma biológicamente compatible adecuada para la administración in vivo" significa una forma del agonista LXR a administrarse en la cual cualquier efecto tóxico se ve compensado por los efectos terapéuticos del agonista. El término "sujeto" se pretende que incluya organismos vivos en los cuales una respuesta inmunitaria puede producirse, por ejemplo, mamíferos. La administración de agonistas LXR como se describe en la presente puede ser en cualquier forma farmacológica que incluya una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista LXR solo o en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable . Una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista LXR puede variar de conformidad con factores tales como el estado de la enfermedad, edad, sexo y peso del individuo, y la capacidad del agonista LXR para producir una respuesta deseada en el individuo. El régimen de dosificación puede ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, diversas dosis divididas pueden administrarse diariamente, o la dosis puede reducirse proporcionalmente como se indica por las exigencias de la situación terapéutica. Las composiciones terapéuticas o farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse por cualquier vía adecuada conocida en la técnica que incluye, por ejemplo, oral, intravenosa, subcutánea, intramuscular, transdérmica , intratecal o intracerebral o administración a las células en protocolos de tratamiento ex vivo. La administración puede ser ya sea rápida como por inyección o durante un periodo de tiempo como por infusión lenta o administración de formulación de liberación lenta. Para tratar o prevenir la osteoartritis , la administración de las composiciones terapéuticas o farmacéuticas de la presente invención puede realizarse, por ejemplo, por la administración oral o por la inyección intra-art icular . Adicionalmente , los agonistas LXR pueden ligarse establemente a un polímero tal como polietilen glicol para obtener las propiedades deseables de solubilidad, estabilidad, vida media, y otras propiedades farmacéuticamente ventajosas (ver, por ejemplo, Davis et al., Enzyme Eng. 4:169-73 (1978); Burnham NL, Am. J. Hosp. Pharm. 51:210-18 (1994) ) . Los agonistas LXR pueden estar en una composición que ayuda en la liberación en el citosol de una célula. Por ejemplo, un agonista LXR puede conjugarse con una porción portadora tal como una liposoma que es capaz de liberar el agonista en el citosol de una célula. Tales métodos son bien conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Amselem S et al., Chem. Phys. Lipids 64:219-37 (1993) ) . Además, un agonista LXR puede liberarse directamente en una célula por microinyeccion. Los agonistas LXR pueden emplearse en la forma de preparaciones farmacéuticas. Tales preparaciones se hacen en una manera bien conocida en la técnica farmacéutica. Una preparación preferida utiliza un vehículo de solución salina fisiológica, pero se contempla que otros portadores farmacéuticamente aceptables tales como concentraciones fisiológicas de otras sales no tóxicas, solución de glucosa acuosa al cinco por ciento, agua estéril o similares puedan también usarse. Como se usa en la presente, "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y anti-hongos, agentes isotónicos y que retardan la absorción, y similares. El uso de tales medios y agentes para las substancias farmacéuticamente activas son bien conocidos en la técnica. Excepto en cuanto a que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el agonista LXR, se contempla el uso del mismo en las composiciones terapéuticas. Los compuestos activos complementarios pueden también incorporarse en las composiciones. También puede ser deseable que una solución amortiguadora adecuada se presente en la composición. Tales soluciones pueden, si se desea, liofilizarse y almacenarse en una ampolleta estéril lista para la reconstitución por la adición de agua estéril para la inyección. El solvente primario puede ser acuoso o alternativamente no acuoso. Los agonistas LXR pueden también incorporarse en una matriz biológicamente compatible semi-sólida o sólida la cual puede implantarse en tejidos que requieren el tratamiento. El portador puede también contener otros excipientes farmacéuticamente aceptables para modificar o mantener el pH, osmolaridad, viscosidad, claridad, color, esterilidad, estabilidad, velocidad de disolución, u olor de la formulación . La dosis de administración puede repetirse dependiendo de los parámetros farmacocinéticos de la formulación de dosificación y la vía de administración usada. Se contempla también que ciertas formulaciones que contienen los agonistas LXR se administren oralmente. Tales formulaciones se encapsulan y formulan preferiblemente con los portadores adecuados en formas de dosificación sólidas. Algunos ejemplos de los portadores, excipientes y diluyentes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma de acacia, fosfato de calcio, alginatos, silicato de calcio, celulosa microcristalina , polivinilpirrolidona , celulosa, gelatina, jarabe, metilcelulosa , metil y propilhidroxibenzoatos , talco, magnesio, estearato, agua, aceite mineral, y similares. Las formulaciones pueden adicionalmente incluir agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes emulsificantes y de suspensión, agentes conservadores, agentes edulcorantes, o agentes saborizantes . Las composiciones pueden formularse de manera que proporcionen liberación rápida, sostenida o retardada de los ingredientes activos después de la administración al paciente al emplear los procedimientos bien conocidos en la técnica. Las formulaciones pueden también contener substancias que disminuyen la degradación proteolitica y/o substancias las cuales promueven la absorción tales como, por ejemplo, agentes activos de superficie. Es especialmente ventajoso formular las composiciones en forma de dosificación unitaria para facilitar la administración y uniformidad de la dosificación. La forma de dosificación unitaria como se usa en la presente se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para los sujetos mamíferos a ser tratados; cada unidad contiene una cantidad predeterminada del compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La especificación de las formas unitarias de dosificación de la invención se dictan por y dependen directamente de (a) las características únicas del agonista LXR y el efecto terapéutico particular a alcanzarse y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de formación de compuesto tal como un compuesto activo para el tratamiento de la sensibilidad en individuos. La dosis específica puede calcularse fácilmente por alguien de experiencia en la técnica, por ejemplo, de acuerdo al peso corporal aproximado o área de superficie corporal del paciente o el volumen del espacio corporal que ocupa. La dosis también se calculará dependiendo de la ruta particular de administración seleccionada. Un perfeccionamiento adicional de los cálculos necesarios para determinar la dosificación apropiada para el tratamiento se hace rutinariamente por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica. Tales cálculos pueden hacerse sin experimentación indebida por alguien de experiencia en la técnica a la luz de las actividades del agonista LXR descritas en la presente en preparaciones del ensayo de las células objetivo. Las dosificaciones exactas se determinan en conjunto con los estudios de respuesta a la dosis estándar. Se entenderá que la cantidad de la composición actualmente administrada se determinará por un practicante, a la luz de las circunstancias relevantes que incluyen la condición o condiciones a ser tratadas, la elección de la composición a administrarse, la edad, peso y respuesta del paciente individual, la severidad de los síntomas del paciente, y la vía elegida de administración . La toxicidad y eficacia terapéutica de tales agonistas LXR puede determinarse por los procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos de las células o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal para 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en 50% de la población) . La relación de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la relación LD50/ED50. Los agonistas LXR que exhiben índices terapéuticos grandes se prefieren. Aunque pueden usarse agonistas LXR que exhiben efectos secundarios tóxicos, deberá tenerse cuidado en diseñar un sistema de liberación que dirija tales agonistas al sitio del tejido afectado con objeto de minimizar el daño potencial a las células no infectadas y, por ello, reducir los efectos secundarios . Los datos obtenidos de los ensayos de cultivo celular y los estudios animales pueden usarse para formular un rango de dosificación para uso en humanos. La dosificación de tales agonistas LXR cae preferiblemente dentro de un rango de concentraciones circulantes que incluyen la ED50 con poca o sin toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosificación empleada y la ruta de administración utilizada. Para cualquier agonista LXR usado en un método de la invención, la dosis terapéuticamente efectiva puede estimarse inicialmente de los ensayos de cultivo celular. Una dosis puede formularse en modelos animales para alcanzar un rango de concentración en plasma circulante que incluye la IC50 (esto es, la concentración del agonista LXR que alcanza una inhibición máxima media de los síntomas) como se determina en el cultivo celular. Tal información puede usarse para determinar más exactamente las dosis útiles en humanos. Los niveles en plasma pueden medirse, por ejemplo, por cromatografía líquida de alta resolución. La vigilancia de la influencia de los agonistas LXR en la expresión del ApoD y/o actividad de agrecanasa y/o la elaboración de citoquinas pro-inflamatorias puede aplicarse no solamente en la separación por exclusión básica, sino también en ensayos clínicos. Por ejemplo, la eficacia de un agonista LXR puede vigilarse en los ensayos clínicos de sujetos que exhiben disminución en la expresión del gen ApoD en los condrocitos y/o actividad de agrecanasa incrementada y/o elaboración incrementada de citoquinas pro-inflamatorias en las lesiones osteoartrí ticas . En tales ensayos clínicos, la expresión del ApoD y/o la actividad de la agrecanasa y/o la elaboración de las citoquinas pro-inflamatorias puede usarse como un "lector" o marcadores del fenotipo de diferentes etapas de osteoart ritis . Así, para estudiar el efecto de los agonistas LXR en la osteoartritis , por ejemplo, en un ensayo clínico, las células pueden aislarse y el ARN se prepara y analiza para los niveles de expresión del ApoD y otros genes que están implicados en la osteoartritis (por ejemplo, TNFa) . Los niveles de la expresión del gen (esto es, un patrón de expresión de genes) pueden cuantificarse por el análisis de inmunotransferencia Northern o RT-PCR, al medir la cantidad de la proteína producida o al medir los niveles de la actividad del ApoD u otros genes, todos por los métodos bien conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica. De esta manera, el patrón de expresión de genes puede servir como un marcador, lo que indica la respuesta fisiológica de las células al agonista LXR. En consecuencia, este estado de respuesta puede determinarse antes, y en diversos puntos durante, el tratamiento del individuo con el agonista LXR. La presente invención también proporciona un método para vigilar la efectividad del tratamiento de un sujeto con un agonista LXR que comprende las etapas de (i) obtener una muestra previa a la administración de un sujeto antes de la administración del agonista LXR; (ii) detectar el nivel de expresión del ApoD y/o el nivel de actividad de agrecanasa y/o el nivel de la elaboración de las citoquinas pro-inflamatorias en la muestra previo a la administración; (iii) obtener una o más muestras posteriores a la administración del sujeto; (iv) detectar el nivel de la expresión o actividad del ApoD y/o el nivel de actividad de agrecanasa y/o el nivel de la elaboración de las citoquinas pro-inflamatorias en las muestras posteriores a la administración; (v) comparar el nivel de expresión del ApoD y/o el nivel de la actividad de la agrecanasa y/o el nivel de elaboración de las citoquinas pro-inflamatorias en la muestra previo a la administración con la expresión ApoD y/o actividad de agrecanasa y/o el nivel de elaboración de las citoquinas pro-inflamatorias en la muestra o muestras posteriores a la administración; y (vi) alterar la administración del agonista LXR al sujeto en consecuencia. Por ejemplo, la administración incrementada del agonista LXR que puede ser deseable para incrementar la expresión ApoD hasta niveles más altos que los detectados y/o reducir la actividad de agrecanasa a niveles más bajos que los detectados y/o reducir la elaboración de las citoquinas pro-inflamatorias hasta niveles más bajos que los detectados, esto es, incrementar la efectividad del agonista LXR. Alternativamente, la administración reducida del agonista LXR pueden ser deseable para expresión ApoD reducida hasta niveles más bajos que los que se detectan o actividad y/o incrementar la actividad de agrecanasa a niveles más altos que los que se detectan y/o incrementar la elaboración de las citoquinas pro-inflamatorias a niveles más altos que los que se detectan, esto es, disminuir la efectividad del agonista LXR. De acuerdo con tal modalidad, la expresión ApoD y/o la actividad de agrecanasa y/o la elaboración de la citoquina pro-inflamatoria puede usarse como un indicador de la efectividad de un agonista LXR, aun en ausencia de una respuesta fenotipica observable. Adicionalmente , en el tratamiento de osteoartritis , las composiciones que contienen los agonistas LXR pueden administrarse exógenamente , y seria más deseable probablemente alcanzar ciertos niveles objetivos del agonista LXR en el suero, en cualquier compartimiento del tejido deseado, y/o en el tejido afectado. Por lo tanto, seria ventajoso ser capaz de vigilar los niveles del agonista LXR en un paciente o en una muestra biológica que incluye una muestra de biopsia de tejido obtenida de un paciente y, en algunos casos, también vigilar los niveles de la expresión ApoD y/o actividad de agrecanasa y/o elaboración de la citoquina pro-inflamatoria. En consecuencia, la presente invención también proporciona métodos para detectar la presencia del agonista LXR en una muestra de un paciente.

V. Ensayos de Separación por Exclusión En una modalidad, los niveles de expresión de los genes que responden a LXR o niveles de actividad de las proteínas de los mismos, pueden usarse para facilitar el diseño y/o identificación de los compuestos que tratan la osteoartritis a través de un mecanismo basado en LXR. En consecuencia, la invención proporciona métodos (también referidos en la presente como "ensayos de separación por exclusión") para identificar los moduladores, esto es, agonistas LXR, que tienen un efecto estimulador o inhibidor en, por ejemplo, la expresión ApoD y/o la actividad de agrecanasa y/o elaboración de citoquina. Los compuestos así identificados pueden usarse en el tratamiento de osteoartritis como se describen en otros lugares en la presente. Los compuestos de prueba pueden obtenerse, por ejemplo, usando cualquiera de los numerosos enfoques en los métodos de colecciones de combinación conocidos en la técnica, incluyendo colecciones de fase en solución o fase sólida paralela espacialmente dirigida; desconvolución que requiere métodos de colección sintéticos; el método de colección de 'un compuesto una perla' ; y los métodos de colección sintéticos que usan selección de cromatografía de afinidad. Los ejemplos de los métodos para la síntesis de las colecciones moleculares pueden encontrarse en, por ejemplo: DeWitt SH et al., Proc. Nati. Acad. Sci . U.S. A. 90:6909-13 (1993) ; Erb E et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91:11422-26 (1994) ; Zuckermann RN et al., J. Med. Chem. 37:2678-85 (1994) ; Cho CY et al., Science 261:1303-05 (1993) ; Carrell et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl . 33:2059 (1994) ; Carrell et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:2061 (1994); Gallop MA et al., J. Med. Chem. 37:1233-51 (1994) . Las colecciones de los compuestos pueden presentarse en solución (por ejemplo, Houghten RA et al., Biotechniques 13:412-21 (1992) ), o en perlas (Houghten RA et al., Nature 354:82-84 (1991) ), hojuelas (Fodor SA et al., Nature 364:555-56 (1993) ), bacterias (Patente de E.U.A. No. 5,223,409), esporas (Patente de E.U.A. No. 5,223,409) , plásmidos (Culi MG et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:1865-69 (1992)) o sobre fago (Scott JK & Smith GP1 Science 249:386-90 (1990) ; Devlin JJ et al., Science 249:404-06 (1990) ; Cwirla SE et al., Proc. Nati. Acad. Sci. 87:6378-82 (1990) ; Felici F et al., J. Mol. Biol. 222:301-10 (1991) ; Patente de E.U.A. No. 5,223,409.) . Un ensayo de separación por exclusión ejemplar es un ensayo basado en células en el cual una célula que expresa LXR se pone en contacto con un compuesto de prueba, y la capacidad del compuesto de prueba para modular la expresión ApoD y/o actividad de agrecanasa y/o elaboración de citoquina a través de un mecanismo basado en LXR. Se determina la habilidad del compuesto de prueba para modular la expresión ApoD y/o actividad de agrecanasa y/o elaboración de la citocina puede completarse al vigilar, por ejemplo, el ADN, mARN, o niveles de proteina, o al medir los niveles de actividad del ApoD, agrecansa y/o TNFa, todos por los métodos bien conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica. La célula, por ejemplo, puede ser de origen mamífero, por ejemplo, humano . Los moduladores novedosos identificados por los ensayos de separación por exclusión descritos arriba pueden usarse para los tratamientos como se describe en la presente.

EJEMPLOS La presente invención se define además en los siguientes Ejemplos. Se deberá entender que estos Ejemplos, aunque indican modalidades preferidas de la invención, se dan a modo de ilustración solamente. A partir de la discusión anterior y estos Ejemplos, un experto en la técnica puede determinar las características preferidas de esta invención, y sin apartarse del espíritu y alcance de la misma, pueden hacer diversos cambios y modificación de la invención para adaptarla a diversos usos y condiciones.

Ejemplo 1 Para identificar transcriptos expresados en cartílagos articulares ya sea artríticos o normales, las muestras de tejido se obtuvieron de pacientes con artritis con remplazo de rodilla en fase terminal e individuos amputados no artríticos. La presencia o ausencia de artritis se confirmó por histología . La Configuración GeneChip® de Genoma Humano U95Av2 (HG-U95Av2) (Affymetrix, Santa Clara, CA) se usó para perfiles de expresión. El chip HG-U95Av2 contiene sondas de oligonucleótido de 25-mer que representan -12,000 secuencias principalmente de longitud completa (-16 pares de sonda/secuencia) derivadas del genoma humano. Para cada sonda diseñada para ser perfectamente complementaria a una secuencia objetivo, una sonda compañero se genera que es idéntica excepto para una incompatibilidad de base sencilla en su centro. Estos pares de sonda permiten la cuantificación y substracción de señal de ruido no específico. El ARN se extrajo del tejido de cartílago articular individual, convertido a cARN biotinilado, y fragmentado de acuerdo con el protocolo Affymetrix. Los cARN fragmentados se diluyeron en solución amortiguadora lx MES que contiene 100 g/ml de ADN de esperma de arenque y 500 yg/ml de BSA acetilado y desnaturalizado durante 5 min a 99°C seguido inmediatamente por 5 min a 45°C. El material insoluble se removió de las mezclas de hibridación por una centrifugación breve, y la mezcla de hibridación se agregó a cada configuración e incubó a 45°C durante 16 hr con rotación continua a 60 rpm. Después de la incubación, la mezcla de hibridación se removió y los chips se lavaron extensivamente con 6x SSPET y tiñeron con solución SAPE como se describe en el protocolo Affymetrix. El valor de intensidad fluorescente neto de cada transcripto se midió a una resolución de 6 mm con un Explorador de Configuración de Genes Hewlett-Packard. El software 3.2 GeneChip® (Affymetrix), que usa un algoritmo para determinar si un gen está "presente" o "ausente", asi como los valores de intensidad de hibridación específicos o "diferencias promedio" de cada gen en la configuración, se usó para evaluar los datos fluorescentes. La diferencia promedio para cada gen se normalizó hasta valores de frecuencia por remisión a las diferencias promedio de 11 transcriptos de control de abundancia conocida que se aseguraron en cada mezcla de hibridación de acuerdo con el procedimiento de Hill AA et al., Science 290: 809-12 (2000). La frecuencia de cada gen se calculó y representa un valor igual al número total de transcriptos de gen individuales por transcriptos totales 106.

La Figura 1A describe los niveles de mARN en diversos cartílagos osteoartríticos (expresados como partes por millón (ppm) ) para 19 miembros diferentes de la superfamilia del receptor de hormona nuclear (LXRa, LXRp, Rev-erba, Rev-erbß, GR, EAR2, COUP TF-I, COUP TF-II, CAR, PXR, MR, SF-1, TR-2, TR-4, NOR-1, Nurrl, Nur77, SHP, FXR) . El límite cuantitativo inferior de detección para estos estudios de chips de gen se determinó para ser aproximadamente 5 ppm. Los datos mostrados en la Figura 1 proporcionan evidencia de que LXRß, Rev-erba, y GR parecen expresarse por cartílago articular en el nivel de sensibilidad de los chips de genes. En la Figura IB, los niveles de expresión de los seis miembros de la familia del receptor retinoide (Receptores de Ácido Retinoico (RAR) y Receptores de Retinoide X (RXR) ) se muestran. Estos datos muestran que RXRa se expresa en el tejido de cartílago articular en niveles que son fácilmente detectables. El RXRa es un compañero heterodimérico de LXR y la unidad biológicamente activa de acción de ligando LXR es Heterodímero LXR-RXR. Estos datos proporcionan un impulso para ver en los efectos funcionales de expresión LXR en cartílago articular.

E emplo 2 La Figura 2A muestra la comparación de niveles de mARN ApoD en cartílago normal y cartílago obtenido de pacientes con o s t e oa r t r i t i s media y severa (expresados como partes por millón (ppm) ) . El límite cuantitativo inferior de detección para estos estudios de chips de gen se determinó para ser aproximadamente 5 ppm. Los datos mostrados en la Figura 2A proporcionan evidencia de que la expresión del mensaje ApoD se reduce dramáticamente en el cartílago o s t e oa r t r i t i co medio y severo cuando se compara con el cartílago normal. La Figura 2B muestra la comparación de niveles de mARN TNFa en cartílago normal y cartílago obtenido de pacientes con o s t e oa r t r i t i s media y severa (expresado como partes por millón (ppm) ) . El límite cuantitativo inferior de detección para estos estudios de chips de gen se determinó para ser aproximadamente 5 ppm. Los datos mostrado en la Figura 2B proporcionan evidencia de que la expresión de TNFa se induce significativamente en cartílago o s t e oa r t r i t i c o medio y severo cuando se compara con el cartílago normal.

E j emp 1 o 3 Los explantes de cartílago fresco (~20 piezas, un total de -200 mg/pozo) de un donante OA humano (#154, de National Disease Research Interchange) se cultivaron durante 10 días en 1 mi de DMEM/F12 que contiene Nutridoma© al 1% (Roche Applied Science, I ndi anapo 1 i s , IN) . Durante los 10 días, los explantes se expusieron a citoquinas (1 ng/ml ILi más 5 ng/ml Oncostatina M) con o sin agonistas LXR (2 µ? G 3965, un agonista LXR reportero, o 2 µ? de la Fórmula I abajo, un agonista LXR) Cada 2 días el medio de cultivo se reemplazó con citoquinas y agonistas LXR frescos. La liberación acumulada de proteoglicanos se midió en estos cultivos después de usar ensayo DM B (dimetilmetileno azul). Los explantes al final del tratamiento de 10 días se digirieron luego con proteinasa K y evaluaron para contenido de proteoglicanos total. Los agonistas LXR reducen significativamente la liberación inducida por citoquina de proteoglicano en el medio de cultivo; en consecuencia, un tratamiento de 10 días de explantes de cartílago OA con agonista LXR incrementa significativamente el contenido de proteoglicanos total en los explantes (Fig 3) . Ya que tanto 11,1$ como Oncostatin M se presentan en articulaciones con OA y se cree que juegan un papel en el progreso de la enfermedad OA, estos datos sugieren que el agonista LXR puede tener un efecto que modifica la estructura en cartílago OA.

Ejemplo 4 El cartílago fresco de donantes OA humanos se cortó en piezas (-10 mg/pieza, -2x2x2 mm) . Los explantes de cartílago se colocaron aleatoriamente en placas de 24 pozos (~250 mg peso húmedo/pozo) . Tres pozos de explantes se incluyeron para cada grupo de tratamiento. Los explantes se cultivaron en 1 mi de DMEM/F-12 con FBS al 10% durante 3 días, luego el medio completo se reemplazó con medio libre de suero. Doce horas más tarde, el medio se removió y se agregó medio libre de suero fresco (1 mi), seguido por tratamiento de agonista LXR T0901317 (2 µ?) . Se agregaron IL^/Oncostatina M (10 ng/ml cada uno) 8 horas más tarde. Los explantes se cultivaron luego en la presencia o ausencia de agonista LXR T0901317 y ILi /Oncostatina M durante 20 horas adicionales. 180 µ? del medio de cultivo agrupado de cada grupo de tratamiento se desglicosaron con condroitinasa ABC, queratanasa, queratanasa II en la presencia de EDTA 50 mM a 37°C durante 3 hrs. Las muestras se concentraron luego y separaron en un gel SDS-PAGE al 4-12%. El análisis Western se realizó usando ya sea anticuerpo neoepítopo BC3 de ratón (1:1500) , o anticuerpo anti-AGEG de conejo (1:1000) como el anticuerpo primario, y anticuerpo IgG anti-ratón o anti-conejo conjugado con peroxidada alcalina (1:5000) como el anticuerpo secundario. La Figura 4A muestra el resultado usando anticuerpo BC3, y la Figura 4B muestra el resultado usando anticuerpo AGEG. En el experimento usando cartílago de donador #259, el tratamiento de citoquina induce la liberación de tanto BC3 como AGEG que contiene fragmentos de agrecano en el medio de cultivo. El tratamiento con T0901317 bloquea la inducción de liberación de BC3 y AEEG por citoquinas. En el experimento usando donante #261, los fragmentos de agrecano que contienen BC3 y AEGE se liberaron en el medio de cultivo de explantes de cartílago no tratados. El tratamiento T0901317 reduce la cantidad de estos fragmentos en el medio de cultivo. La liberación de fragmento que contiene AGEG de los explantes se indujo también por tratamiento con citoquina, y se bloqueó por tratamiento T0901317.

Ejemplo 5 Los explantes de cartílago fresco (-20 piezas, un total de -200 mg/pozo) de un donante OA humano (proporcionado por National Disease Research Interchange) se cultivaron durante 21 días en 1 mi de DMEM/F12 que contiene Nutridoma® al 1% (Roche Applied Science, Indianapolis , IN) . Durante los 21 días, los explantes se expusieron a citoquinas (10 ng/ml ILi más 10 ng/ml Oncostatina M) con o sin agonistas LXR (2 µ G 3965 o Fórmula I) . Cada 2-3 días el medio de cultivo se reemplazó con citoquinas y agonistas LXR frescos. Las cantidades totales de prostaglandina E2 (PGE2) en las muestras de medio de cultivo colectadas en el día 7, 14, 21 se midieron usando un ensayo EIA (Cayman) . La Fig. 5 muestra que ambos agonistas LXR inhiben fuertemente la síntesis de PGE2 inducida por citoquina (IL1 ß/Oncostatina M) en los 3 puntos de tiempo. Los resultados del análisis de perfiles de lípidos (Lipomics Inc. ) muestran que las cantidades de dos formas de fosfolípidos de membrana donde la mayoría del ácido araquidónico (AA) está, se reducen por activación LXR, lo que sugiere que la disminución de PGE2 total está mediada al menos parcialmente por el contenido de AA total reducido en cartílago OA. La expresión de enzimas implicada en síntesis PGE2 también se puede inhibir por actividad LXR. El PGE2 es el prostanoide pro-inflamatorio principal encontrado en articulaciones con artritis reumatoide (RA, por sus siglas en inglés) u OA. El PGE2 incrementado en el cartílago puede también jugar un papel en daños estructurales mediados por inflamación que caracterizan las enfermedades artríticas. Más importantemente, PGE2 contribuye a una de las características claves de la inflamación, hipersensibilidad al dolor. Por lo tanto, los antagonistas LXR tienen un gran potencial para ser terapéuticos OA que aliviarán el dolor al bloquear la producción de PGE2 en articulaciones OA, así como prevenir el progreso de enfermedad al bloquear la degradación de matriz de cartílago. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Un método para el tratamiento de un mamífero que padece de osteoartritis caracterizado porque comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad que modula la expresión de gen que responde a LXR de un agonista LXR. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agonista LXR es un oxiesterol natural, un oxiesterol sintético, un no oxiesterol sintético, o un no oxiesterol natural. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1 ó reivindicación 2, caracterizado porque el agonista LXR es 20 (S) hidroxicolesterol, 22 (R) hidroxicolesterol , 2 (S) hidroxicolesterol , 25-hidroxicolesterol , 24(S) ,25 epoxicolesterol , 27-hidroxicolesterol , N, N-dimet il-3 ß-hidroxicolenamida , sulfonamida de N- ( 2 , 2 , 2-trifluoroetil ) -N-{4-[2,2,2-trifluoro-l-hidroxi-l- ( trifluorometil ) etil ] fenil } benceno, [ácido 3- ( 3- ( 2-cloro-trifluorometilbencil-2 , 2-di feni leti lamino ) propoxi ) fenilacético] , N-metil-N- [ 4 - ( 2 , 2 , 2-trifluoro-l-hidroxi-l-trifluorometil-l-etil ) -fenil] - bencensulfonamida, 4, 5-dihidro-l- (3- ( 3-trifluorometil-7-propil-benzisoxazol-6-iloxi ) propil ) -2 , 6-pirimidindiona , ácido 3-cloro-4- (3- ( 7-propil-3-trifluorometil-6- (4,5)-isoxazolil ) propiltio) -fenil acético, dimero de acetil-podocárpico, paxilina, desmosterol , o estigmasterol . 4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el agonista LXR es N-(2,2,2-trifluoroetil ) -N- [4- (2, 2, 2-trifluoro-l-hidroxi-1-trifluorometil-l-etil ) -fenil] -bencensulfonamida . 5. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 4, caracterizado porque el tratamiento con el agonista LXR inhibe la degradación del cartílago e induce la regeneración del cartílago. 6. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 5, caracterizado porque el agonista LXR inhibe la actividad de agrecanasa. . El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 6, caracterizado porque el agonista LXR inhibe la elaboración de citoquinas pro-inflamatorias y/o mediadores inflamatorios en articulaciones osteoartrít icas . 8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el mediador inflamatorio es prostaglandina E2. 9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 8, caracterizado porque el tratamiento con el agonista LXR proporciona alivio del dolor en articulaciones osteoartriticas . 10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 9, caracterizado porque el gen de respuesta LXR es apolipoproteina D. 11. Un método para inducir la expresión de apolipoproteina D en un mamífero que tiene cartílago osteoartrítico, caracterizado porque comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad efectiva de un agonista LXR. 12. Un método para prevenir osteoartritis , caracterizado porque comprende: (a) determinar el nivel de expresión de apolipoproteina D de línea base en cartílago normal de un sujeto; y (b) mantener el nivel de expresión de apolipoproteina D de línea base en el cartílago del sujeto por medio de tratamiento con un agonista LXR. 13. Un método para el tratamiento de un mamífero que padece de osteoartritis, caracterizado porque comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad que inhibe la actividad de agrecanasa de un agonista LXR. 14. Un método para inhibir actividad de agrecanasa en un mamífero que tiene cartílago osteoartrítico, caracterizado porque comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad efectiva de un agonista LXR. 15. Un método para el tratamiento de un mamífero que padece de osteoartritis , caracterizado porque comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad efectiva de un agonista LXR para inhibir la elaboración de citoquinas y lípidos pro-inflamatorios en articulaciones osteoartríticas . 16. Un método para el tratamiento de un mamífero que padece de osteoartritis, caracterizado porque comprende administrar al mamífero que necesita del mismo una cantidad efectiva de un agonista LXR para aliviar el dolor en articulaciones osteoartríticas . 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agonista LXR inhibe la expresión de T Fa . 18. Un método para detectar un fenotipo osteoartrítico en un sujeto, caracterizado porque comprende: (a) determinar un nivel de expresión de apolipoproteína D de línea base en cartílago normal; (b) obtener una muestra de cartílago de un sujeto que sospecha que tiene osteoartritis; y (c) detectar el nivel de expresión de apolipoproteína D en la muestra; en donde una cantidad más baja de expresión de apolipoproteína D en la muestra comparada con la expresión de apolipoproteína D de línea base es indicativa de osteoartritis. 19. Un método para identificar un ligando LXR capaz de reducir un efecto osteoartritico en cartílago, caracterizado porque comprende: (a) proporcionar una muestra que contiene un LXR; (b) poner en contacto la muestra con un compuesto de prueba; y (c) determinar si el compuesto de prueba induce expresión de apolipoproteína D, inhibe actividad de agrecanasa, inhibe elaboración de citoquinas pro-inflamatorias, o una combinación de los mismos. 20. El uso de un agonista LXR en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de osteoartritis .