MX2008016540A

MX2008016540A - Formulas para lactantes enriquecidas.

Info

Publication number: MX2008016540A
Application number: MX2008016540A
Authority: MX
Inventors: Ricardo Rueda-Cabrera; Alejandro Barranco; Maria Ramirez; Enrique Vazquez; Eduardo Valverde; Pedro Prieto; Margaret Dohnalek
Original assignee: Abbott Lab
Priority date: 2006-06-30
Filing date: 2007-06-29
Publication date: 2009-01-19
Also published as: US20080003329A1; HK1123946A1; EP2046149B1; WO2008005862A2; BRPI0713778A2; DE602007010302D1; EP2046149A2; CR10539A; WO2008005032A1; RU2009103065A; WO2008005862A3; DK2046149T3; IL195719A0; JP2009542226A; CA2656174A1; ATE486499T1; CN101484024A; ECSP089021A; HN2008001946A; AU2007269248A1

Abstract

Se describen fórmulas para lactantes que comprenden, sobre una base de ración (A) al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliósidos, (B) al menos aproximadamente 150 mg/L de fosfolípidos, (C) lactoferrina y (D) al menos aproximadamente 70 mg/L de ácido siálico, con al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico como ácido siálico unido a lípidos. Desde aproximadamente 50% hasta 100% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico es proporcionado por un concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una base por ración. También se describen métodos para utilizar la fórmula a fin de reducir el riesgo de lactantes con diarrea y producir un perfil de microflora intestinal similar al de los lactantes alimentados con leche materna.

Description

FÓRM ULAS PARA LACTANTES ENRIQUECIDAS" Campo de la invención La presente invención se refiere a fórmulas para lactantes enriquecidas con y que comprenden combinaciones selectas de fosfolípidos, lactoferrina, gangliósidos y ácido siálico que se proporciona en su totalidad o en parte por un concentrado proteico de suero enriquecido para asimilar mejor la composición y el rendimiento naturales de la leche materna.

Discusión de antecedentes Las fórmulas para lactantes comerciales se utilizan comúnmente hoy en día para proporcionar una nutrición complementaria o como única fuente nutrimental en los primeros años de vida. Estas fórmulas comprenden una amplia gama de nutrientes que cumplen las necesidades nutrimentales del lactante en desarrollo, y típicamente incluyen grasas, carbohidratos, proteínas, vitaminas, minerales y otros nutrientes útiles para el óptimo desarrollo y crecimiento del lactante Las fórmulas para lactantes comerciales se encuentran diseñadas para asimilar, tan estrechamente como sea posible, la composición y función de la leche materna. En los Estados Unidos, el Acta Federal de Alimentos, Fármacos y Cosméticos (FFDCA - Federal Food, Drug, and Cosmetic Act) define fórmula para lactantes como "un alimento que pretende ser o que se encuentra representado para un uso alimenticio especial únicamente como alimento para lactantes en razón de su simulación de la leche materna o de su conveniencia como un sustituto parcial o completo de la leche materna". (FFDCA 201 (Z)). Las fórmulas para lactantes comerciales, bajo las reglas del FFDCA, se definen por nutrientes básicos que deben formularse en fórmulas para lactantes no exentas en los Estados Unidos. Estos nutrientes incluyen, por 100 kcal de fórmula: proteína (1 .8-4.5 g de al menos un equivalente nutricional a la caseína), grasa (3.3-6.0 g), ácido linoléico (al menos 300 mg), vitamina A como equivalentes de retinol (75-225 mcg) , vitamina D (40-100 I U ) , vitamina K (al menos 4.0 mcg), vitamina E (al menos 0.7 U l/g de ácido linoléico), ácido ascórbico (al menos 8.0 mg) , tiamina (al menos 40 mcg) , riboflavina (al menos 60 mcg) , piridoxina (al menos 35.0 mcg con 15 mcg/g de proteína en fórmula), vitamina B12 (al menos 0.15 mcg) , niacina (al menos 250 mcg), ácido fólico (al menos 4.0 mcg), ácido pantoténico (al menos 300.0 mcg), biotina (al menos 1 .5 mcg), colina (al menos 7.0 mg), inositol (al menos 4.0 mg), calcio (al menos 50.0 mg) , fósforo (al menos 25.0 mg con una relación de calcio a fósforo de 1 . 1 -2.0) , magnesio (al menos 6.0 mg), hierro (al menos 0.15 mg) , yodo (al menos 5.0 mcg), zinc (al menos 0.5 mg), cobre (al menos 60.0 mcg) , manganeso (al menos 5.0 mcg) , sodio (20.0-60.0 mg), potasio (80.0-200.0 mg), y cloro (55.0- 1 50.0 mg) . No obstante los fuertes controles regulatorios, las fórmulas para lactantes comerciales aún no son idénticas, ya sea en composición o en función, a la leche materna. Se han identificado casi 200 compuestos diferentes en la leche materna, de los cuales más de 100 aún no se encuentran típicamente en cantidades significativas, o en absoluto, en las fórmulas comerciales. Tales compuestos incluyen diversas inmunoglobulinas, enzimas, hormonas, algunas proteínas, lactoferrinas, gangliósidos, fosfolípidos (esfingomielina, etanolamina de fosfatidilo, colina de fosfatidilo, serina de fosfatidilo e inositol de fosfatidilo), etcétera. Muchas de estas sustancias son únicas en la leche materna, o bien, se encuentran presentes únicamente en bajas concentraciones en la leche de vaca u otras fuentes proteicas utilizadas en la preparación de una fórmula comercial para lactantes. Por lo tanto, existe una continua necesidad de nuevas fórmulas para lactantes que contengan incluso más ingredientes naturales encontrados en la leche materna, para así proporcionar potencialmente más beneficios nutrimentales disfrutados actualmente por los lactantes alimentados con leche materna. La presente invención se refiere a fórmulas para lactantes con concentraciones y tipos selectos de aquellos compuestos encontrados inherentemente en la leche materna, incluyendo ácido docosahexaenóico, ácido arquidónico, fosfolípidos, gangliósidos y ácido siálico. En virtud de estos ingredientes seleccionados y de sus concentraciones correspondientes a las fórmulas para lactantes, los perfiles nutrimentales de las fórmulas para lactantes descritas en la presente son más similares a la leche materna de lo que son las fórmulas para lactantes convencionales. Se descubrió que, además de asimilar algunos de los ingredientes encontrados en la leche materna, las fórmulas para lactantes de la presente invención también reducen el riesgo de diarrea como se demuestra en un estudio animal descrito en la presente. El estudio muestra una duración reducida de la diarrea en un modelo animal que compara la fórmula para lactantes de la presente invención con una fórmula para lactantes comercial que contiene poca o nada de lactoferrina, fosfolípidos y gangliósidos. También se descubrió que las fórmulas para lactantes de la presente invención mejoran el desarrollo de un perfil de microflora intestinal similar al encontrado en lactantes alimentados con la fórmula, como se demuestra utilizando un sistema de modelo in-vitro dinámico validado del intestino grueso desarrollado por TNO Quality of Life (TNO Invitro Model o TI M-2). Es bien sabido que los lactantes alimentados con leche materna y alimentados con fórmulas tienen perfiles de microflora intestinal significativamente diferentes, pues se considera que el actante alimentado con leche materna el más saludable de los dos.

Breve descripción de la invención Una primera modalidad de la presente invención se refiere a fórmulas para lactantes que comprenden, sobre una base por ración (A) al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliósidos, (B) al menos aproximadamente 1 50 mg/L de fosfolípidos, (C) lactoferrina y (D) al menos aproximadamente 70 mg/L de ácido siálico, con al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico como ácido siálico unido a lípidos. Desde aproximadamente 50% hasta 1 00% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico es proporcionado por un concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una base por ración. Una segunda modalidad de la presente invención se refiere a un método para reducir el riesgo de diarrea en un lactante, incluyendo un método la reducción de la duración de la diarrea en lactantes afectados por la misma. El método comprende la administración a un lactante con necesidad de una fórmula que comprende, sobre una base por ración (A) al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliósidos, (B) al menos aproximadamente 150 mg/L de fosfolípidos, (C) lactoferrina y (D) al menos aproximadamente 70 mg/L de ácido siálico, con al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico unido a lípidos. Desde aproximadamente 50% hasta 100% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico es proporcionado por un concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una base por ración . Una tercera modalidad de la presente invención se refiere a un método para mejorar la microflora intestinal similar al encontrado en lactantes alimentados con leche materna. El método comprende la administración a un lactante con necesidad de una fórmula que comprende, sobre una base por ración (A) al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliósidos, (B) al menos aproximadamente 150 mg/L de fosfolípidos, (C) lactoferrina y (D) al menos aproximadamente 70 mg/L de ácido siálico, con al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico unido a lípidos. Desde aproximadamente 50% hasta 100% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico es proporcionado por un concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una base por ración. Se descubrió que, además de asimilar algunos de los ingredientes encontrados en la leche materna, las fórmulas para lactantes de la presente invención reducen también el riesgo de diarrea como se demuestra en un estudio animal descrito a continuación . El estudio muestra una duración reducida de la diarrea en un modelo animal que compara la fórmula para lactantes de la presente invención con una fórmula para lactantes comercial. También se descubrió que las fórmulas para lactantes de la presente invención mejoran el desarrollo de un perfil de microflora intestinal similar al encontrado en lactantes alimentados con la fórmula, como se demostró utilizando un modelo del Sistema TI M-2. Es bien sabido que los lactantes alimentados con leche materna y los alimentados con la fórmula tienen perfiles de microflora intestinal significativamente diferentes, considerándose al lactante alimentado con leche materna el más saludable de los dos.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 es un diagrama de pastel que resume el perfil de ácido graso de cadena corta para una fórmula para lactantes convencional con 0.5 g/L de FOS de cadena corta después de 72 horas de fermentación de flora alimentada con leche materna (Experimento I). La Figura 2 es una gráfica circular que resume el perfil de ácido graso de cadena corta para una fórmula para lactantes convencional con 2.0 g/L de FOS de cadena corta después de 72 horas de fermentación de flora alimentada con leche materna (Experimento 1 ). La Figura 3 es una gráfica circular que resume el perfil de ácido graso de cadena corta para una fórmula para lactantes convencional con 2.0 g/L de FOS de cadena corta después de 72 horas de fermentación de flora alimentada con leche materna (Experimento 1 ) . La Figura 4 es una gráfica circular que resume el perfil de ácido graso de cadena corta para una modalidad de la fórmula para lactantes con 0.8 g/L de FOS de cadena corta después de 72 horas de fermentación de flora alimentada con leche materna (Experimento 1 ). La Figura 5 es una gráfica circular que resume el perfil de ácido graso de cadena corta típica para lactantes alimentados con leche materna, resultante de la fermentación por la microflora en el intestino (Experimento 1 ) . La Figura 6 es una gráfica circular que resume el perfil de ácido graso de cadena corta típica para una fórmula para lactantes convencional después de 72 horas de fermentación de flora alimentada con leche materna (Experimento 1 ) . La Figura 7 es una gráfica de barras que muestra la duración (días) de la diarrea en lechones alimentados ya sea con la Dieta A (fórmula para lactantes comercial con concentrado proteico de suero convencional) o las Dietas B y C (fórmula para lactantes con concentrado proteico de suero enriquecido a un nivel de 7. 1 g/L de fórmula sobre una base por ración) . Los datos son la Media±SE . (*) significativamente diferentes del grupo A (p<0.05) (Experimento 2) . La Figura 8 es una gráfica de barras que muestra la duración (días) de la diarrea en lechones alimentados ya sea con la Dieta A y C (fórmulas para lactantes comerciales con concentrado proteico de suero convencional) o la Dieta B (fórmula para lactantes con concentrado proteico de suero enriquecido a un nivel de 6.4 g/L de fórmula sobre una base por ración). (Experimento 3) .

Descripción detallada de la invención Las composiciones de la presente invención comprenden gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico, cada uno de los cuales se proporciona en su totalidad o en parte por un concentrado proteico de suero enriquecido, cada uno de los cuales se describe detalladamente a continuación. El término "lactante" como se utiliza en la presente se refiere a personas no mayores a aproximadamente un año de edad, e incluye lactantes de 0 a aproximadamente 4 meses de edad , lactantes de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 meses de edad, lactantes de aproximadamente 8 a aproximadamente 12 meses de edad , lactantes con bajo peso de nacimiento menores a los 2500 gramos al momento del nacimiento, y lactantes prematuros nacidos antes de las 37 semanas de edad gestacional, típicamente desde aproximadamente 26 semanas hasta aproximadamente 34 semanas de edad gestacional.

El término "fórmula para lactantes" como se utiliza en la presente, a menos que se especifique de otra manera, se refiere a formulaciones que comprenden grasas, proteínas, carbohidratos, vitaminas y minerales, y que son adecuadas para la administración oral a lactantes como fuentes nutrimentales complementarias, primarias o únicas, sin limitarse a ejemplos que incluyen polvos reconstituibles, concentrados diluibles y líquidos listos para administrar. El término "por ración" como se utiliza en la presente, a menos que se especifique de otra manera, se refiere a fórmulas líquidas adecuadas para la administración oral directa a un lactante, en las que las fórmulas son líquidos listos para administrar, polvos reconstituidos o concentrados diluidos. Todos los rangos de ingredientes como se utilizan en la presente, a menos que se especifique de otra manera, caracterizan las fórmulas para lactantes de la presente invención se brindan en peso de la fórmula para lactantes sobre una base de ración. Todos los porcentajes, partes y relaciones en la presente se determinan en peso de la composición total , a menos que se especifique de otra manera. Todos esos pesos dado que pertenecen a los ingredientes listados se basan en el nivel activo y, por lo tanto, no incluyen solventes o derivados que puedan incluirse en las sustancias comercialmente disponibles, a menos que se especifique de otra manera. Las fórmulas para lactantes de la presente invención también pueden estar sustancialmente libres de cualquier ingrediente o característica esencial opcional o seleccionado descrito(a) en la presente, visto que la fórmula restante aún contiene todos los ingredientes o características requeridos(as) descritos(as) en la presente. En este contexto y a menos que se especifique de otra manera, el término "sustancialmente libre" se refiere a que la composición seleccionada contiene menos de una cantidad funcional del ingrediente opcional, típicamente menos de 0.1 % en peso, y que incluye también cero por ciento en peso de tal ingrediente esencial opcional o seleccionado. Todas las referencias a características o limitantes singulares de la presente invención incluyen la característica o limitante plural correspondiente, y viceversa, a menos que se especifique de otra manera o que esté claramente implícito lo contrario por el contexto en el cual se hace referencia a la referencia. Todas las combinaciones de los pasos del método o proceso como se utiliza en la presente pueden realizarse en cualquier orden, a menos que se especifique de otra manera o que esté claramente impl ícito lo contrario por el contexto o en el cual se elabora la combinación referida. Los métodos y composiciones de la presente invención, incluyendo los componentes de la misma, pueden comprender, consistir en, o consistir esencialmente en los elementos y limitantes esenciales de la invención descrita en la presente, así como también cualesquier ingredientes adicionales u opcionales, componentes o limitantes descritos(as) en la presente, o bien, útiles en aplicaciones de fórmulas nutrimentales.

Concentrado proteico de suero enriquecido Las fórmulas para lactantes de la presente invención comprenden niveles seleccionados de concentrados proteicos de suero enriquecido que proporcionan, en su totalidad o en parte, componentes de gangliósido, lactoferrina, fosfolípido y ácido siálico en la fórmula. El concentrado proteico de suero enriquecido puede proporcionar desde aproximadamente 10% hasta 100%, incluyendo desde aproximadamente 50% hasta aproximadamente 100%, incluyendo también desde aproximadamente 50% hasta aproximadamente 90% e incluyendo también desde aproximadamente 60% hasta aproximadamente 85% , en peso de cada uno de los niveles totales de fosfolípido, gangliósido, lactoferrina y ácido siálico en la fórmula para lactantes. Aunque éstos compuestos pueden añadirse individualmente y separadamente, como compuestos aislados derivados de la leche mamífera u otras fuentes adecuadas, se prefiere que la mayoría si no todos esos compuestos se proporcionan por el concentrado proteico de suero enriquecido. El nivel de concentrado proteico de suero enriquecido en la fórmula infantil debe exceder aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula, sobre una base por ración. Tales concentraciones también pueden oscilar desde aproximadamente 6.5 hasta aproximadamente 10.9 g/L, incluyendo desde aproximadamente 6.6 hasta aproximadamente 8.5 g/L, e incluyendo también desde aproximadamente 6.7 hasta aproximadamente 7.3 g/L, de la fórmula, sobre una base por ración .

Los concentrados proteicos de suero enriquecido para su uso en las fórmulas para lactantes de la presente invención son aquellos que tienen una alta concentración de sustancias de membrana de glóbulos de grasa de leche. Las sustancias de membrana de glóbulos de grasa de leche son las sustancias de membrana y asociados a membrana que rodean a los glóbulos de grasa de leche ricos en triacilglicerol en leche bovina o de otros mamíferos. Muchos de los compuestos identificados en las sustancias de membrana de glóbulos de grasa de leche se encuentran presentes en concentraciones mucho más elevadas en la leche materna que en las fórmulas para lactantes comerciales. Al añadir concentrados proteicos de suero enriquecidos con tales sustancias para una fórmula de lactantes, la fórmula resultante es más similar en composición a la lecha materna, especialmente con respecto a concentraciones de leche materna de gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico. El término "concentrado proteico de suero enriquecido" como se utiliza en la presente, a menos que se especifique de otra manera, se refiere en términos generales a cualquier concentrado proteico de suero que tenga al menos aproximadamente 3%, más típicamente al menos aproximadamente 5% en peso de fosfolípidos, de los cuales al menos aproximadamente 20% en peso de esfingomielina; al menos aproximadamente 0.5%, típicamente al menos aproximadamente 1 .2% en peso de un ácido siálico; y al menos aproximadamente 0.05%, típicamente al menos aproximadamente 0.1 % en peso de gangliósidos. Al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico derivado del concentrado es unido a lípido. Las fuentes adecuadas de concentrado proteico de suero enriquecido para su uso en la presente incluyen cualquier concentrado proteico de suero que tenga los niveles descritos con anterioridad de ingredientes enriquecidos, ejemplos no limitantes de los cuales incluyen LACPRODAN® MFG -10, Concentrado Proteico de Suero, disponible por Arla Food I ngredients, Dinamarca, el cual contiene 6.5% de fosfolípidos, 0.2% de gangliósidos, 1 .80% de ácido siálico (al menos 2.5% en peso de ácido siálico unido a lípidos del ácido siálico total) , y 1 .5% de lactoferrina en peso del concentrado. Ácido siálico Las fórmulas para lactantes de la presente invención pueden comprender ácido siálico en una concentración, sobre una base por ración, de al menos 70 mg/L, incluyendo desde aproximadamente 90 mg/L hasta aproximadamente 4000 mg/L, incluyendo también desde aproximadamente 190 mg/litros hasta aproximadamente 2000 mg/L, incluyendo también desde aproximadamente 300 mg/L hasta aproximadamente 900 mg/L, donde al menos 2.5%, incluyendo desde aproximadamente 2.6% hasta aproximadamente 10% , incluyendo desde aproximadamente 2.7% hasta aproximadamente 5% en peso del ácido siálico se encuentra unido a lípidos. Una parte o todo el ácido siálico puede proporcionarse por el concentrado proteico de suero enriquecido como se describe la presente. El componente de ácido siálico unido a lípidos de la fórmula para lactantes se encuentra muy típicamente en forma de gangliósido, el cual contiene inherentemente ácido siálico unido a lípidos. El componente de gangliósido de la presente invención, como se describe a continuación, puede ser por ende una fuente primaria o única del componente de ácido siálico unido a lípidos de la presente invención. El término "ácido siálico" como se utiliza en la presente, a menos que se especifique de otra manera, se refiere a todas las formas conjugadas y no conjugadas de ácido siálico, incluyendo derivados de ácido siálico. Por lo tanto, el ácido siálico en la fórmula para lactantes de la presente invención puede incluir ácido siálico libre, ácido siálico unido a proteínas, ácido siálico unido a lípidos (incluyendo gangliósidos) , ácido siálico unido a carbohidratos, y combinaciones o derivados de los mismos. Todas las concentraciones de ácido siálico descritas en la presente se basan en el porcentaje en peso del compuesto o mitad de ácido siálico, menos la proteína, lípido, carbohidrato, u otros conjugados unidos a la estructura del ácido siálico. Las fuentes de ácido siálico para su uso en las fórmulas para lactantes pueden añadirse u obtenerse como ingrediente separados. Sin embargo, más típicamente, el ácido siálico se proporciona básicamente como un ingrediente inherente derivado de un componente de concentrado proteico de suero, preferentemente derivado de un concentrado proteico de suero enriquecido como se describe en la presente. Aunque es menos preferido, el ácido siálico puede obtenerse a partir de y añadirse como un ingrediente separado a la fórmula para lactantes, en cuyo caso el ácido siálico añadido se combina con ácido siálico inherente derivado de otros ingredientes a fin de proporcionar el contenido de ácido siálico total de la fórmula para lactantes. Como compuesto individual o mitad, el ácido siálico es un azúcar amino de 9 carbono, cuya estructura se describe fácilmente en la literatura química. Otros nombres generalmente aceptados para el ácido N-acetilneuram ínico incluyen ácido siálico; ácido o-Siálico; ácido 5-acetamido-3, 5-dideoxi-D-glicero-D-galacto-2-nonulosónico; ácido 5-acetamido-3,5-dideox¡-D-gl ¡cero- D-galactonulosón ico; ácido aceneurámico; N-acetil-neuraminato; ácido N-acetilneuramínico; NANA; NANA, Neu5Ac; y Neu5Ac. Las fuentes adecuadas de ácido siálico pueden ser naturales o sintéticas, e incluir cualquiera de los más de 40 derivados de ácido siálico de generación natural y actualmente identificados, las cuales incluyen ácido siálico libre, conjugados oligosacáridos (por ejemplo, sialiloligosacáridos), conjugados lípidos (es decir, glucolípidos) , conjugados proteicos (es decir glucoproteínas), y combinaciones de los mismos. El ácido siálico adecuado para su uso en la presente incluye sialiloligosacáridos encontrados comúnmente en la leche materna, ya sean naturales o sintéticos, los dos más abundantes de los cuales son 3'sialollactosa (3'SL, NeuNAca2-3Galactosapi -4Glucosa) y 6'sialillactosa (6'SL, NeuNAca2-6GalactosaG1 -4Glucosa). Otros sialiloligosacáridos adecuados incluyen aquellos que contienen una o más moléculas de ácido siálico conjugadas en oligosacáridos más grandes de leche materna u otros oligosacáridos más complejos. Otros ácidos siálicos adecuados para su uso en la presente incluyen cualquier glucolípido correspondiente que también sea adecuado para su uso en una fórmula para lactantes, incluyendo gangliósidos tales como glucolípidos con contenido de ácido siálico que comprenden un ácido graso, esfingosina, glucosa, galactosa, N-acetilgalactosamina, N-acetilglucosamina y moléculas de ácido N-acetilneuramínico. Estos compuestos de ácido siálico también pueden incluir uno o más de las diversas glucoproteínas comúnmente encontrados en la leche materna que son conocidos por ser sialilados (por ejemplo, K-caseína, a-lactalbúmina, lactoferrina) . Las fuentes adecuadas de ácido siálico para su uso en la presente incluyen aislados, concentrados, o extractos de leche de mamíferos o productos lácteos, incluyendo leche materna y bovina. La leche bovina es una fuente preferida para su uso en la presente, incluyendo concentrados proteicos de suero enriquecido como se describe en la presente. Las fuentes individuales de ácido siálico adecuadas para su uso en la presente incluyen Lacprodan CGMP-10 (caseino gluco macropéptido con 4.2% de ácido siálico) , disponible por Arla Food Ingredients, Dinamarca; y glucomacropéptido Biopure (con 7-8% de ácido siálico) , disponible por Davisco Foods International, Edén Prairie, Minnesota, EUA. Aunque las fórmulas para lactantes pueden comprender glucomacropéptidos como fuente de ácido siálico, preferentemente las fórmulas se reducen sustancialmente en contenido glucomacropéptido. El glucomacropéptido es parte de la molécula de caseína de proteína de leche bovina. Únicamente se encuentran cantidades muy pequeñas de glucomacropéptido libre en la leche descremada, pero el concentrado proteico de suero contiene cantidades más elevadas de glucomacropéptido libre. Se ha descubierto que los glucomacropéptidos no son tolerados por los lactantes así como también otras fuentes de ácido siálico. Consecuentemente, las fórmulas para lactantes elaboradas con concentrado proteico de suero tienen un contenido de glucomacropéptido libre más alto, pero también podrían ser menos tolerados por el lactante. En este contexto, el término "sustancialmente reducido" significa que la fórmulas para lactantes contienen preferentemente menos del 0.5%, incluyendo menos del 0.4% e incluyendo también menos del 0.35%, e incluyendo también cero por ciento, en peso de la fórmula como glucomacropéptido libre sobre una base por ración. Típicamente, las fórmulas para lactantes convencionales contienen desde 0.6 hasta 0.8% de glucomacropéptidos como un- ingrediente inherente derivado de un concentrado proteico de suero típico derivado del suero de queso.

Gangliósidos Las fórmulas para lactantes de la presente invención comprenden también concentraciones enriquecidas de uno o más gangliósidos, un grupo de compuestos elaborados con un glucoesfingolípido (ceramida y oligosacárido) con uno o más ácidos siálicos (ácido n-acetilneuramínico) vinculado a la cadena de oligosacáridos. Algunos o todos los oligosacáridos pueden ser proporcionados por el concentrado proteico de suero enriquecido descrito en la presente. Los gangliosidos son componentes normales de membranas de plasma de células mamíferas y son particularmente abundantes en membranas neuronales. Son glucoesfingolípidos acídicos que comprenden una porción hidrofóbica, la ceramida, y una porción hidrofílica, una cadena de oligosacáridos que contienen una o más moléculas de ácido siálico. Las mitades de oligosacárido de los gangliosidos tienen estructuras químicas diferentes que constituyen la base de referencia para la separación de gangliosidos y su reconocimiento como entidades individuales. La mitad de ceramida de los gangliosidos más comunes tiene una composición de ácido graso heterogéneo con una prevalencia de derivados de C 1 8 y C20. Los gangliosidos son nombrados muy comúnmente utilizando designaciones M, D y T, las cuales se refieren a mono-, di- y trisialogangliósidos, respectivamente, y los números 1 , 2, 3, etc. se refieren al orden de migración de los gangliosidos en cromatografía de capa delgada. Por ejemplo, el orden de migración de los monosialogangliósidos es GM3 > GM2 > GM 1 . Para indicar las variaciones en las estructuras básicas, se añaden subíndices adicionales, por ejemplo, GM 1 a, GD1 b, etc. Las fórmulas infantiles de la presente invención pueden comprender al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliosidos, incluyendo desde aproximadamente 7 mg/L hasta 50 mg/L, incluyendo también desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 30 mg/L. Estas concentraciones de gangliósidos son similares a las encontradas en leche materna, las cuales contienen típicamente al menos aproximadamente 3 mg/L de gangliósidos, más típicamente desde aproximadamente 3 mg/L hasta aproximadamente 30 mg/L de gangliósidos. Estos gangliósidos para su uso en las fórmulas para lactantes comprenden típicamente uno o más de, más típicamente todos, los gangliósidos GD3, 0-Acetil-FD3 y GM3. Estos gangliósidos representan en términos generales al menos aproximadamente 80%, más típicamente al menos aproximadamente 90% en peso de los gangliósidos totales en la fórmula para lactantes de la presente. Las fuentes adecuadas de gangliósidos para su uso en la presente incluyen aislados, concentrados o extractos de leche materna o productos lácteos, incluyendo leche materna y leche bovina. La leche bovina es una fuente de gangliósidos preferida para su uso en la presente, incluyendo concentrado proteico de suero enriquecido como se describe en la presente. Las fuentes individuales de gangliósidos adecuados para su uso en la presente incluyen Ganglioside 500 (>0.5% de GM3 y < 1 .0% de GD3) y Ganglioside 600 (> 1 .2% GD3), disponible de Fonterra, Nueva Zelandia. Las concentraciones de gangliósidos para propósitos de definición de las fórmulas para lactantes de la presente invención se miden de acuerdo con el método de gangliósido descrito en lo sucesivo.

Fosfolípidos Las fórmulas para lactantes de la presente invención comprenden concentraciones enriquecidas de fosfolípidos. Tales concentraciones son más elevadas que las encontradas en las fórmulas para lactantes convencionales pero similares a las encontradas en la leche materna. Algunos o todos los fosfolípidos pueden proporcionarse por el concentrado proteico de suero enriquecido como se describe en la presente. Los fosfolípidos adecuados para su uso en la presente incluyen aquellos encontrados comúnmente en leche bovina y otra leche materna. Los fosfolípidos preferidos incluyen esfingomielina, etanolamina de fosfatidilo, colina de fosfatidilo, inositol de fosfatidilo, serina de fosfatidilo y combinaciones de los mismos. Las combinaciones más preferidas de los cinco fosfolípidos, especialmente tales combinaciones en las cuales la esfingomielina representa al menos 20% en peso de los fosfolípidos totales. Las concentraciones de fosfolípidos en las fórmulas para lactantes de la presente invención pueden ser al menos aproximadamente 150 mg/L, incluyendo desde aproximadamente 200 mg/L hasta aproximadamente 600 mg/L, incluyendo también desde aproximadamente 250 hasta aproximadamente 450 mg/L. La leche materna, por comparación, contiene generalmente desde aproximadamente 163 hasta aproximadamente 404 mg/L de fosfolípidos, representando la esfingomielina aproximadamente 51 % de los fosfolípidos totales.

Las fuentes adecuadas de fosfolípidos para su uso en la presente incluyen aislados, concentrados o extractos de leche materna o productos lácteos, incluyendo leche materna y leche bovina. La leche bovina es una fuente de fosfolípidos preferida para su uso en la presente, incluyendo concentrados proteicos de suero enriquecido como se describe en la presente. Otras fuentes de fosfolípidos adecuados incluyen soja, tal como lecitina de soja. Sin embargo, preferentemente las fórmulas para lactantes de la presente invención se encuentran sustancialmente libres de fosfolípidos provenientes de fuentes de soja. Preferentemente, las fórmulas para lactantes se encuentran sustancialmente libres de fosfolípidos de huevo. En este contexto, el término "sustancialmente libre" significa que las fórmulas para lactantes contienen menos de 0.5%, más preferentemente menos de 0.1 % , incluyendo cero por ciento en peso de los fosfolípidos de soja o huevo. Las fuentes individuales de fosfolípidos adecuados para su uso en la presente incluyen fuentes derivadas de la leche tales como Concéntrate 600 de fosfolípidos (> 18.0% de esfingomielina, >36.0% de colina de fosfatidilo, >9.0% de etanolamina de fosfatidilo, 4.0% de fosfatidilserina), disponible por Fonterra, Nueva Zelandia.

Lactoferrina Las fórmulas para lactantes de la presente invención comprenden lactoferrina, una proteína de transporte de hierro encontrada en la leche materna. Estas fórmulas contienen concentraciones enriquecidas de lactoferrina a niveles superiores que los encontrados en las fórmulas para lactantes convencionales. Una parte o toda la lactoferrina puede proporcionarse por un concentrado proteico de suero enriquecido como se describen la presente. El término "lactoferrina" como se utiliza en la presente incluye tanto lactoferrina desnaturalizada como fragmentos grandes y biológicamente activos de lactoferrina (por ejemplo, fragmentos de lactoferrina) y lactoferrina no desnaturalizada o natural. La lactoferrina es una glicoproteína que pertenece al transportador de hierro o a la familia de la transferrína. Se encuentra en la leche bovina otros mamíferos como un componente proteico menor de proteínas de suero. La lactoferrina contiene 703 aminoácidos, tiene un peso molecular de 800 kilodaltones y también se encuentra en la leche materna. El término "lactoferrina nativa" como se utiliza en la presente se refiere a lactoferrina de que no se encuentra agregada con otras proteínas o lípidos. Sin embargo, la lactoferrina nativa puede unirse al hierro o a otros minerales. Las concentraciones de lactoferrina en las fórmulas para lactantes de la presente invención son preferentemente al menos aproximadamente 50 mg/L, incluyendo desde aproximadamente 50 mg/L hasta aproximadamente 2000 mg/L, incluyendo desde aproximadamente 100 mg/L hasta aproximadamente 1 500 mg/L, con preferentemente al menos aproximadamente 6% en peso, incluyendo desde aproximadamente 6 hasta aproximadamente 30% , e incluyendo también desde aproximadamente 7 hasta 14% de la lactoferrina como lactoferrina nativa. La leche materna, en comparación, generalmente contiene desde aproximadamente 1390 hasta aproximadamente 1940 mg/L de lactoferrina. Las fuentes adecuadas de lactoferrina para su uso en la presente incluyen aislados, concentrados o extractos de leche de mamífero o productos lácteos, incluyendo leche materna y leche bovina. La leche bovina es una fuente de lactoferrina preferida para su uso en la presente, incluyendo concentrados proteicos de suero enriquecido como se describen la presente. Las fuentes individuales de lactoferrina adecuadas para su uso en la presente incluyen Lactoferrina FD (Lactoferrina al 80%), disponibles por DMV International, Veghel, Holanda.

Otros nutrientes Las fórmulas para lactantes de la presente invención comprenden grasas, proteínas, carbohidratos, vitaminas y minerales, todos los cuales se seleccionan en tipo y cantidad para cumplir las necesidades nutrimentales del lactante seleccionado como objetivo o de la población de lactantes definida. Son conocidas muchas fuentes y tipos diferentes de carbohidratos, grasas, proteínas, minerales y vitaminas y pueden utilizarse en las fórmulas base en la presente, visto que tales nutrientes son compatibles con los ingredientes añadidos en la formulación seleccionada y son, más bien , adecuados para su uso en una fórmula para lactantes. Los carbohidratos adecuados para su uso en las fórmulas en la presente pueden ser sencillas o complejas con contenido de lactosa o sin lactosa, o combinaciones de las mismas, ejemplos no limitantes de las cuales incluyen almidón de maíz hidrolizado, intacto, modificado químicamente y/o por medios naturales, maltodextrina, polímeros de glucosa, sacarosa, jarabe de maíz, sólidos de jarabe de maíz, carbohidratos derivados de arroz o papa, glucosa, fructosa, lactosa, jarabe de maíz de alta fructosa y oligosacáridos indigestibles tales como fructooligosacáridos (FOS) , galactooligosacáridos (GOS) y combinaciones de los mismos. Las proteínas adecuadas para su uso en las fórmulas en la presente incluyen proteínas o fuentes proteicas hidrolizadas, parcialmente hidrolizadas y no hidrolizadas o intactas, y pueden derivarse de cualquier fuente conocida, o bien, adecuada tal como leche (por ejemplo, caseína, suero, proteína de leche materna), animales (por ejemplo, carne de res, pescado) , cereales (por ejemplo, arroz, maíz) , vegetales (por ejemplo, soja) o combinaciones de los mismos. Las proteínas para su uso en la presente pueden incluir, o reemplazarse completamente o parcialmente, por aminoácidos libres conocidos por ser adecuados para su uso en fórmulas para lactantes, cuyos ejemplos no limitantes incluyen alanina, arginina, asparagina, carnitina, ácido aspártico, cistina, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, Usina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, taurina, treonina, triptofan, taurina, tirosina, valina y combinaciones de los mismos. Estos aminoácidos se utilizan muy típicamente en sus formas L, aunque los isómeros D correspondientes también pueden utilizarse cuando son nutrimentalmente equivalentes. También pueden utilizarse mezclas racémicas o isoméricas. Las grasas adecuadas para su uso en las fórmulas de la presente incluyen aceite de coco, aceite maíz, aceite de olivo, aceite de cártamo, aceite de cártamo altamente oléico, aceite algal, aceite de MCT (médium chain triglycerides - triglicéridos de cadena media) , aceite de girasol, aceite de girasol altamente oléico, aceites de palma y grano de palma, oleína de palma, aceite de cánola, aceites marinos, aceites de semilla de algodón, y combinaciones de los mismos. Las fórmulas para lactantes de la presente invención incluyen aquellas modalidades que comprenden menos de aproximadamente 1 % incluyendo menos de aproximadamente 0.2%, incluyendo también cero por ciento en peso de grasa de leche sobre una base por ración. Las vitaminas y otros ingredientes similares adecuados para su uso en las fórmulas incluyen vitamina A, vitamina D, vitamina E, vitamina K, tiamina, riboflavina, piridoxina, vitamina B 12, niacina, ácido fólico, ácido pantoténico, biotina, vitamina C, colina, inositol, sales y derivados de los mismos y combinaciones de los mismos. Los minerales adecuados para su uso en las fórmulas base incluyen calcio, fósforo, magnesio, hierro, cinc, manganeso, cobre, cromo, yodo, sodio, potasio, cloro y combinaciones de los mismos. Las fórmulas nutrimentales para lactantes de la presente invención comprenden preferentemente nutrientes de acuerdo con las instrucciones relevantes de la fórmula para lactantes para el consumidor o población de usuarios seleccionada como objetivo, un ejemplo de lo cual sería el Acta de Fórmulas para Lactantes, 21 U.S.C. Sección 350(a). Las concentraciones preferidas de carbohidratos, lípidos y proteínas para su uso en las fórmulas se exponen en la siguiente tabla.

Tabla 1: Rangos de macronutrientes Todos los valores numéricos se modifican preferentemente por el término aproximadamente" Las fórmulas para lactantes también pueden incluir por 100 kcal de fórmula una o más de las siguientes: vitamina A (desde aproximadamente 250 hasta aproximadamente 750 Ul), vitamina D (desde aproximadamente 40 hasta aproximadamente 100 Ul), vitamina K (más de aproximadamente 4 pm), vitamina E (al menos aproximadamente 0.3 Ul), vitamina C (al menos aproximadamente 8 mg), tiamina (al menos aproximadamente 8 pg), vitamina B12 (al menos aproximadamente 0.15 pg), niacina (al menos aproximadamente 250 pg), ácido fólico (al menos aproximadamente 4 pg), ácido pantoténico (al menos aproximadamente 300 pg), biotina (al menos aproximadamente 1 .5 pg), colina (al menos aproximadamente 7 mg) e inositol (al menos aproximadamente 2 mg). Las fórmulas para lactantes también pueden incluir por 100 kcal de fórmula uno o más de los siguientes: calcio (al menos aproximadamente 50 mg), fósforo (al menos aproximadamente 25 mg), magnesio (al menos aproximadamente 6 mg) , hierro (al menos aproximadamente 0.1 5 mg) , yodo (al menos aproximadamente 5 pg) , cinc (al menos aproximadamente 0.5 mg), cobre (al menos aproximadamente 60 pg), manganeso (al menos aproximadamente 5 pg), sodio (desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 60 mg), potasio (desde aproximadamente 80 mg hasta aproximadamente 200 mg), cloro (desde aproximadamente 55 hasta aproximadamente 150 mg) y selenio (al menos aproximadamente 0.5 mcg) . Las fórmulas para lactantes pueden comprender además fructopolisacáridos, cuyas concentraciones pueden oscilar hasta aproximadamente 5% en peso de la fórmula, sobre una base por ración, incluyendo desde aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 3% y que incluye también desde aproximadamente 0.1 % hasta aproximadamente 2%. Estos fructopolisacáridos pueden ser de cadena larga (por ejemplo, inulina) , cadena corta (por ejemplo, FOS o fructooligosacáridos) o combinaciones de los mismos, con mezclas que comprenden estructuras de longitud de cadena variable, la mayoría de las cuales tiene un DP (degree polimerization) de desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 60.

Las fórmulas para lactantes de la presente invención pueden comprender además ácidos grasos poliinsaturados tales como ácido docosahexaenóico, ácido araquidónico o combinaciones de los mismos. Cualquier fuente de tales ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga es adecuada para su uso en la presente, visto que tales fuentes son seguras y eficaces para su uso en lactantes, y son compatibles con el otro ingrediente seleccionado en la fórmula para lactantes. Las concentraciones de ácido araquidónico en las fórmulas para lactantes de la presente invención pueden oscilar hasta aproximadamente 2.0% , más preferentemente desde aproximadamente 0. 1 % hasta aproximadamente 1 .0% , incluso más preferentemente hasta aproximadamente 0.1 5% hasta aproximadamente 0.7%, incluyendo desde aproximadamente 0.2% hasta aproximadamente 0.45%, incluyendo también desde aproximadamente aO.38% hasta aproximadamente 0.43% en peso de los ácidos grasos totales en la fórmula. Las concentraciones de ácido docosahexaenóico en las fórmulas para lactantes de la presente invención pueden oscilar hasta aproximadamente 1 .0% , incluyendo desde aproximadamente 0.09% hasta aproximadamente 1 .0% , incluyendo también desde aproximadamente 0.1 % hasta aproximadamente 0.36%, en peso de los ácidos grasos totales en la fórmula. Los ejemplos no limitantes de algunas fuentes adecuadas de ácido araquidónico, y/o ácido docosahexaenóico incluyen aceite marino, aceites derivados del huevo, aceite fúngico, aceite algal, otros aceites monocelulares y combinaciones de los mismos. Las fórmulas para lactantes pueden comprender además otros ingredientes opcionales que pueden modificar las características físicas, químicas estéticas o de procesamiento de las composiciones o sirven como componentes nutrimentales farmacéuticos o adicionales cuando son utilizados en el lactante seleccionado como objetivo o en la población de lactantes. Muchos de tales ingredientes opcionales son conocidos, o bien, adecuados para su uso en productos nutrimentales y también pueden utilizarse en las fórmulas para lactantes de la presente invención , visto que tales sustancias opcionales son compatibles con las sustancias esenciales descritas en la presente y son adecuadas para su uso en una fórmula para lactantes. Los ejemplos no limitantes de tales ingredientes opcionales incluyen antioxidantes adicionales, agentes emulsores, reguladores, colorantes, saborizantes, nucleótidos y nucleósidos, probióticos, prebióticos, y derivados relacionados, agentes espesantes y estabilizadores, etc.

Método de uso La presente invención se refiere también a un método para reducir el riesgo de diarrea en un lactante, incluyendo la reducción de tal riesgo el reducir la duración de la diarrea en un lactante propenso al desarrollo de o afectado por la diarrea, preparar y después administrar o darle instrucciones a la persona que cuidará al lactante para que le administre fórmulas para lactantes al lactante como fuente nutrimental única, primaria o complementaria. Se prefiere la fuente nutrimental única.

La presente invención se refiere también a un método para producir un perfil de microflora intestinal similar al encontrado en lactantes alimentados con leche materna, preparar las fórmulas para lactantes como se describe en la presente y después administrar o darle instrucciones a la persona que cuidará al lactante para que le administre la fórmula para lactantes al lactante como fuente nutrimental única, primaria o complementaria. Se prefiere la fuente nutrimental única. La presente invención se refiere también a un método para brindarle nutrición a un lactante al preparar las fórmulas para lactantes como se describe en la presente y después administrar o darle instrucciones a la persona que cuidará al lactante para que le administre la fórmula para lactantes al lactante como fuente nutrimental única, primaria o complementaria. Se prefiere la fuente nutrimental única. En el contexto de los métodos de la presente invención, las fórmulas para lactantes puedan proporcionarles a los lactantes una nutrición única, primaria o complementaria. Para las modalidades en polvo, cada método puede incluir también el paso para reconstituir el polvo con un vehículo acuoso, muy típicamente agua o leche materna, para formar la densidad calórica deseada, la cual se administra después oralmente o enteralmente al lactante para proporcionar la nutrición deseada. El polvo se reconstituye con una cantidad de agua, u otro fluido adecuado tal como leche materna, para producir un volumen y perfil nutrimental adecuado para aproximadamente una administración. Las fórmulas para lactantes de la presente invención muy típicamente tendrán una densidad calórica de desde aproximadamente 19 hasta aproximadamente 24 kcal/oz. líquida, más típicamente desde aproximadamente dos 20 hasta aproximadamente 21 kcal/oz. líquida, sobre una base por ración .

Método analítico de gangliósidos Las concentraciones de gangliósidos para su uso en la presente se determinan de acuerdo con el siguiente método analítico. Los lípidos totales se extraen de las muestras de Lacprodan MFGM- 0 o de la fórmula para lactantes con una mezcla de cloroformo: metanol:agua. Los gangliósidos se purifican a partir del extracto de lipido total por una combinación de éter de diisopropilo (DI PE)/1 -butanol/partición de fase acuosa y extracción de la fase sólida a través de cartuchos de C- 1 8. El ácido siálico unido a l ípidos (LBSA -lipid-bound sialic acid) en los gangliósidos purificados se mide espectrofotométricamente por la reacción con resorcinol. La cantidad de gangliósidos en las muestras se obtiene al multiplicar el LBSA por un factor de conversión. Este factor se obtiene a partir de la relación de peso molecular de las unidades de gangliósidos y ácido siálico. Debido a que los gangliósidos son una familia de compuestos con diferentes pesos moleculares y el número de residuos de ácido siálico, la preparación de H PLC se utiliza para medir la distribución de gangliósidos individuales con objeto de calcular este factor de conversión con mayor precisión.

Normas • Disialogangliósido G D1 a, de cerebro bovino, mín. 95% (TLC) SIG MA, ref G-2392. • Monosialogangliósido GM 1 a, de cerebro bovino, mín. 95% (TLC) SIGMA, ref G-7641 . • Sal de amonio de disialogangliósido GD3, de suero de leche bovina, mín . 98% (TLC) Calbiochem, ref 345752 o Matreya, ref. 1 503. • Sal de amonio de monosialogangliósido GM3, de suero de leche bovina, mín. 98% (TLC) Calbiochem, ref 345753 o Matreya, ref. 1504. • Ácido de N-acetilneuramínico, (ácido siálico, NANA) de Escherichia coli, mín. 98% SIGMA, ref. A-2388. Las normas de gangliósidos no se consideran como normas verdaderas dado que los proveedores típicamente no garantizan sus concentraciones. Por esta razón, las concentraciones se calculan como LBSA medido por el procedimiento de resorcinol. Las normas se diluyen con cloroformo: metanol (C: M) 1 : 1 (v:v) a una concentración teórica de 1 -2.5 mg/ml dependiendo del tipo de gangliósidos. Se toman alícuotas de 10, 20 y 40 µ?, se llevan hasta la sequedad bajo un flujo de N2 y se mide como se explica a continuación (medición de LBSA). Una concentración promedio de los tres alícuotas se considera como una concentración de LBSA. La concentración de gangliósidos se obtiene al multiplicar el LBSA por un factor de conversión obtenido a partir de las relaciones de peso molecular (Factor de conversión: Gangiiósido MW donde n = número de unidades de ácido n X Acido siálico MW siálico) .

Reactivos Cloroformo, grado HPLC, • Fosfato dibásico de sodio, PA, Prolabo Panreac • Metanol , grado H PLC, Merck • Ácido hidroclórico 35%, PA, Panreac. • Éter de diisopropilo, grado • Sulfato de cobre, PA, Panreac H PLC, Prolabo • Acetato de butilo, PA, Merck • Resorcinol, 99% , Merck. • 1 -butanol , PA, Merck. • Cloruro de sodio, PA, Panreac.

Equipo • Equilibrio analítico, con una · Centrífugo precisión de 0.1 mg . Frascos de H PLC, tapones de · Baño ultrasónico rosca e insertos de Waters • Microjeringas Hamilton (50, 100, · Múltiples de vacío SPE modelo 250, 500, 1000 µ?) de 24 puertos • HPLC: Alliance 2690 de Waters · Bomba de vacío de diafragma • Detector UV H PLC, número de • Triple-Block Reacti-Therm I I I referencia 2487, de Waters (Pierce) • Integrador de H PLC: Waters • Bomba al vacío de agua Millenium 32.

• Retenedor de filtro Solvac • Pipeta de vidrio Pasteur (polipropileno), No. de ref. 4020.

• Filtros de membrana Durapore Distribuidor de solvente de 0.45 µ?? orgánico (2.5-25 mi) • Vórtice multi-reax (Heidolph) ·· Vórtice (heidolph) • Pipetas digitales (2-20, 5-50, • Baño de agua 40-100°C 40-200, 200-1 000 µ?) ·· Tubo centrífugo de 1 0 mi de • Pipetas de vidrio (5, 10, 25 mi). vidrio de fondo redondo ·· Tubo centrífugo de 50 mi de • Espectrofotómetro vidrio de fondo redondo (ThermoSpectronic UV500) ·· Tubo centrífugo de 40 mi de vidrio de fondo cónico • 500 mg de cartuchos de C-18 (5ml, ref 53604-U , Supelco) Evaporador Reacti-Vap modelo de 27 puertos (Pierce) Procedimiento Extracción de lípidos: los extractos de lípidos se preparan de la siguiente manera: las muestras de 1 g de la fórmula o 100 mg de lacprodan MFGM-10 se pesan en tubos centrífugos de vidrio de fondo redondo (tubos de 50 mi para la fórmula y tubos de 10 mi para lacprodan MFGM-10). Se añaden veinticinco mi de cloroformo:metanol:agua (C:M:W) 50:50:10 (v/v) por g de muestra, dispersándose completamente las muestras al revolver alternativamente y someter a sonificación durante 1 min. Los tubos se incuban durante 45 minutos a temperatura ambiente revolviendo continuamente (2000 rpm) con impulsos de sonificación de baño de 1 min. cada 15 minutos. Las muestras se centrifugan (1500 * g, 10 min., 15 °C). Los sobrenadantes se transfieren a tubos centrífugos de vidrio de fondo cónico de 40 mi y comienzan a llevarse a la sequedad bajo N2 a 37°C. Mientras tanto, los comprimidos se vuelven a extraer con 12.5 mi de C:M:W por g durante 15 minutos a temperatura ambiente revolviendo continuamente (2000 rpm) y con impulsos de sonificación de baño de 1 min. cada 7.5 minutos. Después de la centrifugación, los sobrenadantes se depositan con los primeros en los tubos de 40 mi y la evaporación continúa. Los comprimidos se enjuagan con C:M 1:1 (v/v) y se incuban 10 min. en las mismas condiciones que antes, con impulsos de sonificación cada 5 min. Después de la centrifugación, los sobrenadantes se añaden también a los tubos de 40 mi y se evaporan. La fracción de gangliósidos se purifica a partir del extracto de lípido total por una combinación del éter de diisopropilo (DIPE)/1-butanol/partición de fase acuosa descrita por Ladisch S. y Gillard B. (1985). A solvent partition method for microscale ganglioside purification (Un método de partición de solvente para la purificación de gangliósidos a microescala), Anal. Biochem. , 146:220-231 . Esto es seguido por extracción de fase sólida mediante cartuchos de C-18 como se describe por Williams M y McCIuer ( 1 980), The use of Sep-PakTM C 18 cartridges during the isolation of ganglosides (El uso de cartuchos C 18 de Sep-PakTM durante el aislamiento de gangliósidos) , J . Neurochem, 35:266-269 con modificaciones. Partición de éter de diisopropilo/1 -butanol/NaCI acuoso: se añaden 4 mi de DI PE/1 -butanol 60:40 (v/v) al extracto de lípido seco. Las muestras se revuelven y se sonifican para alcanzar la suspensión fina del extracto de lípidos. Se añaden dos mi de NaCI acuoso al 0.1 %, y los tubos se revuelven y sonifican alternativamente con impulsos de 15 segundos durante 2 minutos, y después se centrifugan (1500 * g , 10 min. , 15°C) . La fase orgánica superior (que contiene los lípidos neutrales y fosfolípidos) se elimina cuidadosamente utilizando una pipeta Pasteur teniendo cuidado de no eliminar la interfase. La fase acuosa inferior que contiene gangliósidos se extrae dos veces con el volumen original de solvente orgánico fresco. Las muestras se evaporan parcialmente bajo un flujo de N2 a 37°C durante 30-45 min. hasta que el volumen (prácticamente 2 mi) se reduce aproximadamente a la mitad del volumen original . Extracción de Fase Sólida (SPE - Solid Phase Extraction) mediante los cartuchos de C-18 de fase inversa: Los cartuchos de C-18 de 500 mg se ajustan a un múltiple de vacío SPE de recubrimiento de veinticuatro puertos y se activan con tres enjuagues consecutivos de 5 mi de metanol , 5 mi de C: M 2: 1 (v/y) y 2.5 mi de metanol. Después, los cartuchos se equilibran con 2.5 mi de NaCI: metanol acuoso al 0.1 % 60:40 (v/v). Se miden los volúmenes de fases inferiores evaporadas parcialmente, se llevan a 1 .2 mi con agua, y se añaden con 0.8 mi de metanol . Después, se centrifugan (1500 * g , 10 min.) para eliminar cualquier material insoluble y ubicado dos veces en cartuchos de C-18. Los cartuchos de SPE se blanden con 1 0 mi de agua destilada para eliminar sales y contaminantes solubles al agua y después, se seca 30 segundos al vacío. Los gangliósidos se eluden con 5 mi de etanol y 5 mi de C: M 2: 1 (v/v), se secan bajo un flujo de N2 y se vuelven a disolver en 2 mi de C : M 1 : 1 (v/v) . Las muestras y solventes se pasan por los cartuchos por gravedad o son forzados por un leve vacío con una tasa de flujo de 1 - 1 .5 ml/min. Los gangliósidos se almacenan a -30°C hasta el análisis. Los gangliósidos totales se miden como LBSA. Un alícuota de 500 pl se coloca en un tubo centrífugo de vidrio de 10 mi, se seca bajo N2 y se mide por una prueba de resorcinol (3). Medición de LBSA: 1 mi del reactivo resorcinol y se añaden 1 mi de agua. Los tubos se hacen convexos y calientan durante 1 5 minutos a 100°C en un baño de agua hirviendo. Después de calentar, los tubos se enfrían en un baño de agua helada, se añaden 2 mi de acetato de butilo: butanol 85: 1 5, los tubos se agitan vigorosamente durante 1 minuto y después se configuran a 750 * g durante 10 minutos. Las fases superiores se toman y miden a 580 nm en un espectrofotómetro convencional y las soluciones de NANA (0, 2, 4, 8, 16, 32 y 64 pg/ml) se tratan de la misma manera y se utilizan para calcular la concentración de ácido siálico en las muestras.

El reactivo de resorcinol se prepara de la siguiente manera: 10 mi de resorcinol al 2% en agua desionizada, 0.25 mi de 0.1 de sulfato de cobre, 80 mi de ácido hídroclórico concentrado, completando hasta 100 mi con agua. El reactivo se prepara diariamente protegido de la luz. Separación de gangliósidos por HPLC: Los gangliósidos se separan por HPLC en un equipo Alliance 2690 con un Detector de Absorbencia Dual, de Waters utilizando una columna Luna-NH2, 5 µ?t?, 100 Á, 250 * 4.6 mm de Phenomenex, ref. 00G-4378-EO. Se eluden a temperatura ambiente con el siguiente sistema de solventes: regulador de acetonitrilo-fosfato a diferentes proporciones de volumen y resistencias iónicas de acuerdo con el método de Gazzottí G., Sonnion, S., Ghidonia R (1985), Normal-phase high-performance liquid chromatographic separation of non-derivatized ganglioside mixtures (Separación cromatográfica líquida de alto rendimiento de fase normal de mezclas de gangliósidos no derivados). J Chromatogr. 348:371-378. Se utiliza un gradiente con dos fases móviles: Solvente A - Acetonitrilo - 5 mM de regulador de fosfato, pH de 5.6 (83:17). Este regulador se prepara con 0.6899 g de NaH2P04 en 1L de agua, ajustado el pH en 5.6. Solvente B - Acetonitrilo - 20 mM de regulador de fosfato, pH de 5.6 (1:1). Este regulador se prepara con 2.7560 g de NaH2P04 en 1L de agua, ajustado el pH en 5.6. Se utiliza el siguiente programa de elución de gradiente: Tiempo (mín.) Flujo (ml/min) % A % B 0 1 100 0 7 1 100 0 60 1 66 34 61 1 0 100 71 1 0 100 72 1 1 00 0 85 1 100 0 Las muestras se extraen por fase líquida se particionan y se extraen por fase sólida se explican con anterioridad. Una alícuota de 0.5 mi derivada de la muestra de 2 mi en la C: 1 : 1 se evapora bajo nitrógeno y se vuelve a disolver en 0.150 mi de agua. Para una reconstitución perfecta, la muestra se revuelve y se sonifica. La solución final se transfiere a un frasco de HPLC. El volumen de inyección es de 30 µ? para muestras y normas. Las normas G D3 y G 3 se miden por el procedimiento de resorcinol y las concentraciones verdaderas se calculan como se explicó con anterioridad. Se preparan cuatro soluciones convencionales con contenido de GD3 y G N 3 y una en blanco en agua. Las concentraciones de las normas de calibración oscilan aproximadamente entre 0-0.5 mg/ml para GD3 y 0-0.2 mg/ml para GM3. La concentración de extractos de cada conjunto de normas puede variar dependiendo de la pureza de las normas. Se inyecta un conjunto de normas cada vez que se configura el sistema, para una nueva columna. El rendimiento apropiado del sistema se verifica la inyectar una norma de concentración de intermediarios cada diez pruebas. Si la concentración interpolada no se encuentra entre 95%- 105% de la concentración teórica, se inyecta una nueva calibración y se utiliza para cálculos subsecuentes.

Método analítico de lactoferrina nativa Las concentraciones de lactoferrina nativa para su uso en la presente se determinan de acuerdo con el método de HPLC descrito en la presente (cromatografía de exclusión de tamaño) . Los parámetros de prueba son, por ejemplo, los siguientes: • Columnas (2 en serie): Shodex KW-804 (Waters #36613) y Shodex KW-803 (Waters #35946) • Fase Móvíl: 525 mL de Milli-Q-Plus H20, 475 mL de acetonitrilo, 0.5 mL de ácido trifluoroacético • Tasa de flujo: 0.2 m L/minuto • Temperatura: 40C • Detección: UV a 205 nm, 214 nm, 280 nm • Inyección: 2.0 uL · Tiempo de prueba: 1 50 minutos • Rango Convencional de LF: 20-80 mg/L • Prep. de Muestra WPC: ~1 .0 mg/mL en fase móvil Método de elaboración Las fórmulas para lactantes de la presente invención pueden prepararse por cualquier técnica conocida, o bien, eficaz, adecuada para elaborar y formular fórmulas para lactantes o similares. Tales técnicas y variaciones de las mismas para cualquier fórmula dada se determinan y aplican fácilmente por el experto en la materia en la fórmula nutrimental para lactantes o en la elaboración de técnicas en la preparación de las fórmulas descritas en la presente. Los métodos para elaborar las fórmulas para lactantes de la presente invención pueden incluir fórmulas de pasta aguada a partir de una o más soluciones que pueden contener agua y uno o más de los siguientes: carbohidratos, proteínas, lípidos, estabilizadores, vitaminas y minerales. Esta pasta aguada emulsiona, homogeniza y enfría. Otras diversas soluciones, mezclas u otras sustancias pueden añadirse a la emulsión resultante antes, durante o después del procesamiento adicional. Después, esta emulsión puede diluirse adicionalmente, esterilizarse, y envasarse para formar un líquido listo para administrar o concentrado, o puede esterilizarse y procesarse y envasarse subsecuentemente como un polvo reconstituible (por ejemplo, seco por atomización, mezcla seca, aglomerado). Otros métodos adecuados para elaborar fórmulas para lactantes se describen, por ejemplo, en la Patente de E. U . 6, 365,218 (Borschel) y la Solicitud de Patente de E. U . 200301 18703 A 1 (Nguyen et al.) , cuyas descripciones se incorporan en la presente para referencia.

Experimento I El propósito de este experimento es evaluar los efectos de las fórmulas para lactantes de la presente invención en la microflora intestinal , y comparar esos efectos con los producidos por la leche materna. Esto se realiza midiendo concentraciones de ácido graso de cadena corta resultantes de la leche materna y fórmulas para lactantes que utilizan un sistema de modelo validado de intestino grueso. Es bien sabido que el perfil de microflora intestinal de lactantes alimentados con leche materna es diferente del de los lactantes alimentados con la fórmula. Y dado que la microflora intestinal es responsable por afectar la producción de ácidos grasos de cadena corta en el intestino, la diferencia entre el perfil de microflora intestinal de lactantes alimentados con leche materna y lactantes alimentados con la fórmula pueden evaluarse al medir sus concentraciones respectivas de ácidos grasos de cadena corta en el colon. Típicamente, los lactantes alimentados con leche materna producen cantidades más grandes de acetato y cantidades menores de propionato y butirato, en comparación con los lactantes alimentados con la fórmula. U n sistema de modelo validado de intestino grueso se utiliza para realizar las evaluaciones (Sistema TIM-2, TNO Quality of Life, Zeist, Holanda) . En este sistema particular, la microflora colónica de un lactante alimentado con leche materna se introduce en una fórmula de prueba para lactantes y los cambios observados dado que ocurren en los perfiles de ácido graso de cadena corta. Cada fórmula para lactantes a evaluarse se digiere previamente de manera tal que su adición al sistema TIM-2 es representativa de las características químicas de una fórmula para lactantes que pasa por el intestino grueso después de pasar por el estómago y el intestino delgado del lactante. El sistema TIM-2 contiene flora bacteriana representativa cultivada a partir de muestras fecales de lactantes alimentados exclusivamente con leche materna, típicamente desde lactantes con 2-4 meses de edad. Dado que la microflora alimentada con leche materna es fórmula para lactantes digerida previamente, en el transcurso de un periodo de fermentación de 72 horas, los productos finales de fermentación (ácidos grasos de cadena corta) cambian como lo reflejan los cambios en las proporciones relativas de los ácidos grasos de cadena corta definida (acetato, propionato, butirato). El perfil de SCFA a 72 horas para cada fórmula de prueba se compara después con el de un perfil de SC FA conocido derivado de la leche materna (Figura 5) y el de una fórmula convencional para lactantes (Figura 6). Este experimento evalúa y compara el perfil de SCFA de las siguientes fórmulas para lactantes (Fórmulas 1 -4): Tabla 2 En las Figuras 1 -4, se muestran un resumen de los perfiles de SCFA después de 72 horas para cada una de las Fórmulas 1 -4, respectivamente. Para propósitos de comparación , un perfil de SCFA típica en el colon de un lactante alimentado con leche materna de 2-4 meses de edad se muestra en la Figura 5 (Gibson , G. R. y M. B . Roberfroid , 1 995 , Dietary modulation of the human colonic microbiota: introduci'ng the concept of prebíotics (Modulación de dieta de la flora bacteriana colónica humana: presentación del concepto de prebiótica), Journal of Nutrition (Gaceta de Nutrición), 125; 1401-1412) mientras que el perfil de SCFA típico después de 72 horas cuando se introduce una fórmula para lactantes basada en leche digerida previamente (fórmula convencional para lactantes) como una única fuente de nutrición, se observa en la Figura 6 (Knol, J., Scholtens, P., Kafka, C, Steenbakkers, J., Gross, S., Helm, K., Klarczyk, M., Schopfer H., Bockler, H. M. y Wells, J., 2004, Colon microflora in infants fed formula with galacto- and fructo-oligosaccharides: more like breast-féd infants (Microflora colónica en lactantes alimentados con la fórmula para lactantes con galacto- y fructo-oligosacáridos: lactantes alimentados con leche materna), Journal Pediatric Gastroenterology (Gaceta de Gastroenterología Pediátrica), 40(1): 36-42). A partir de los resultados resumidos con anterioridad, puede desde la presente invención (Fórmula 4) da como resultado un perfil de actividad metabólica, como se refleja por las concentraciones relativas de SCFA de n-butirato, propionato y acetato, similares a las del lactante alimentado con leche materna (Figura 5), y significativamente diferentes del perfil asociado con una fórmula convencional para lactantes (Figura 6). Este perfil actividad metabólica similar al del lactante alimentado con leche materna ayudará a producir un ambiente intestinal que puede inhibir el desarrollo de patógenos potenciales, tales como C. difficile, y consecuentemente, evitar la probabilidad de presentar diarrea infecciosa (Marleen H.M.C. van Nuenen, P. Diederick Meyer, y Koen Venema, 2003. The effects of various inulins and Clostridium diifficile on the metabolic activity of the human colonic microbiota in vitro (Los efectos de diversas inulinas y Clostridium difficile en la flora bacteriana colonica humana in vitro), icrobial Ecology in Health Disease (Ecología Microbiana en Enfermedades), 15: 137-144). Debe observarse que cada una de las Fórmulas 1-4 contuvieron FOS, un ingrediente bien conocido por su efecto probiótico en el perfil de microflora en el intestino. Las Fórmulas 2 y 3 contuvieron 2 g/L de FOS y produjeron predeciblemente un perfil de SCFA similar al de la leche materna, mientras que una fórmula idéntica con solamente 0.5 g/L de FOS (Fórmula 1) dio como resultado un perfil de SCFA similar al de una fórmula convencional para lactantes. Interesantemente, la Fórmula 4 produjo un perfil de SCFA similar al de la leche materna, incluso a pesar de que contuvo solamente 0.8 g/L de FOS. Se considera que la concentración y combinación seleccionadas de lactoferrina, ácido siálica, fosfolípidos y gangliósidos de la Fórmula 4 son responsables para el perfil de SCFA similar al de la leche materna.

Experimento II El propósito de este estudio es comparar los beneficios del rendimiento en cerdos neonatales alimentados ya sea con una fórmula de control o una de las dos modalidades diferentes de fórmulas de la presente invención con concentraciones enriquecidas de gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico.

Antecedentes El cerdo neonatal constituye un modelo apropiado para evaluar la intervención nutrimental antes del diseño e implementación de pruebas clínicas humanas. Su conveniencia se basa en las similitudes de la fisiología gastrointestinal del lechón con las del neonato humano. El modelo es una herramienta útil para predecir la tolerancia de las fórmulas para lactantes (Miller, E.R., Ullrey, The pig as model for human nutrition (El cerdo como modelo para la nutrición humana), Annu Rev. Nutr. 1987; 7; 361-82). El presente el presente estudio se encuentra diseñado para proporcionar una evaluación biológica de los efectos de dos modalidades de fórmulas de la presente invención.

Diseño experimental El estudio es longitudinal e incluye 3 grupos de lechones alimentados con las dietas experimentales A, B o C (ver la Tabla 3) con tres momentos de sacrificio después de 8-9, 15-16 y 29-30 días de la alimentación. Un grupo adicional, sacrificado al inicio del estudio, se utiliza como referencia. El estudio se divide en dos experimentos. Los lechones en el estudio cerdo recién nacido son proporcionados por una granja certificada. En el primero de los dos experimentos en el estudio, se alojan 33 lechones domésticos macho (de 4-5 días de edad) en jaulas de acero inoxidable (2 animales por caja) en un cuarto acondicionado a 27-30°C. Los animales se alimentan 4 veces al día con una dieta adaptada para cerdos, de acuerdo con sus requisitos nutrimentales. Después de un periodo de adaptación de 3 días, se sacrifican 3 lechones. El momento del cual se sacrifican estos animales es considerado "Tiempo Cero" en el estudio. El resto de los lechones es colocado por parejas por peso y carnadas, y se dividen en 3 grupos (n=10, n= 10 y n= 10, respectivamente) que son alimentados también 4 veces al día con las siguientes dietas: • Dieta A: Similar a la fórmula para lactantes Similac® Advanc®, disponible de Abbott Laboratories, Columbus, Ohio EUA con concentrado proteico de suero convencional. · Dietas B y C: La modalidad de fórmula para lactantes de la presente invención con concentrado proteico de suero enriquecido a un nivel de 7. 1 g/L de la fórmula sobre una base por ración. Las dietas A, B y C se adaptan en términos de micronutrientes (minerales y vitaminas) a los requisitos especiales de los lechones neonatales. La siguiente tabla muestra la composición de las dietas A , B y C y de la dieta convencional para cerdos.

Tabla 3: Dietas Experimentales Dieta Dieta Dietas A, Dietas A, convencional convencional B, C por B, C por para cerdos para cerdos 100g 100 mi por 100 g por 100 mi Proteína 25.5 4.79 10.9 1.40 Grasa 36.3 6.82 28.9 3.71 Carbohidratos 31 5.83 53 6.81 Ceniza 5.2 0.98 5.2 0.67 Humedad 2 0.38 2 0.38 Minerales Na (mg) 201.9 37.96 201.9 25.94 K (mg) 800 150.40 800 102.80 Cl (mg) 300 56.40 300 38.55 Fe (mg) 32.7 6.15 32.7 4.20 Zn (mg) 13 2.44 13 1.67 Cu (mg) 0.8 0.15 0.8 0.10 Mg (mg) 61.4 11.54 61.4 7.89 Mn (mg) 0.5 0.09 0.5 0.06 Ca (mg) 1069 200.97 1069 137.37 P (mg) 792 148.90 792 101.77 I (mcg) 61.7 11.60 61.7 7.93 Se (mcg) 20 3.76 20 2.57 Dieta Dieta Dietas Dietas convencional convencional A, B, C A, B, C para cerdos para cerdos por por 100 por 100 g por 100 mi 100g mi Vitaminas Vitamina A (U l) 400 75.20 400 51 .40 Vitamina D (U l) 53 9.96 53 6.81 Vitamina E (U l) 5 0.94 5 0.64 Vitamina K (mcg) 21 .5 4.04 21 .5 2.76 Tiamina (mg) 0.2 0.04 0.2 0.03 Riboflavina (mg) 0.5 0.09 0.5 0.06 Piridoxina (mg) 0.317 0.06 0.317 0.04 Cianocobalamina 3.5 0.66 3.5 0.45 (mcg) Acido pantoténico 2 0.38 2 0.26 (mg) Acido fólico (mcg) 100 1 8.80 100 12.85 Biotina (mcg) 26.5 4.98 26.5 3.41 Niacina (mg) 3 0.56 3 0.39 Vitamina C (mg) 71 .25 1 3.40 71 .25 9.16 Colina (mg) 170 31 .96 170 21 .85 Otros gcleótidos (mg) - - 56. 14 7.21 Energ ía 552.7 103.91 515.7 66.27 Tabla 4 1 ilacteal-75, concentrado proteico de suero. Dairy Specialties, Inc., MILEI GmbH. Alemania; contiene 2 Lacprodan MFGM10, concentrado proteico de suero enriquecido, Arla Food Ingredients, Dinamarca Todas las dietas, una vez preparadas, se utilizan inmediatamente o se almacenan en latas con una atmósfera inerte a 4°C y a las 24 horas. Las dietas se encuentran en forma de polvo y se reconstituyen con agua al 18.8% en peso para la dieta adaptada para cerdos y al 12.85% en peso para las dietas a A, B y C. Las dietas líquidas reconstituidas se vierten en los alimentadores de la jaula. El líquido remanente se extrae y mide, y los alimentadores son limpiados antes de las subsecuentes administraciones. Para cada grupo, se sacrifican 3 o 4 lechones con edades de 8-9, 15- 16 y 29-30 días de dar después del inicio de la alimentación con las fórmulas de control (Dieta A) o Experimentales (Dietas B y C). En el segundo experimento del estudio, se alojan individualmente 44 lechones domésticos macho (con edades de 4-5 días) mismo tipo de cajas y en el mismo cuarto descrito para el primer experimento. El protocolo de alimentación es el mismo y se sacrifican 4 lechones, después del período de adaptación , a fin de completar el grupo de referencia. El resto de los lechones son manejados por parejas por peso y cámara y se dividen en 3 grupos (n= 13, n= 13 y n=14, respectivamente) que son alimentados con las dietas A, B y C. Se incluyen uno o dos lechones más en cada grupo para remplazar los abandonos. La ingesta de dieta y la ganancia de peso son monitoreadas 4 veces al d ía , dos veces a la semana, respectivamente, para cada lechón . La incidencia y duración de la diarrea se registran y evalúan. La diarrea se define como la consistencia de heces fecales acuosas (puntuación de 5) durante 2 días o más con un bajo desarrollo de recuperación concomitante. Una vez que se confirmara la diarrea persistente, los lechones afectados son tratados con antibióticos siguiendo protocolos convencionales para cerdos neonatales.

Resultados Abandonos Experimento 1 : Un lechón del grupo A es muy pequeño al momento del nacimiento y no se recupera con respecto al resto de lechones. Un cerdo del grupo C se muere 10 días después del inicio del tratamiento . Otro cerdo del grupo C es hembra, lo que se confirma al final del experimento. Consecuentemente, n para el grupo A a los 29-30 días es 3 en lugar de 4, y n del grupo C a la misma edad es 2 en lugar de 4. Experimento 2 : Un lechón se muere durante el periodo de adaptación . Otro lechón del grupo B se muere 6 días después del inicio del tratamiento. Dos cerdos del grupo A y uno en el grupo B se excluyen del estudio, porque son muy pequeños al momento del nacimiento y no crecen tanto como el resto de lechones. Consecuentemente , el objetivo del estudio completo de 7 lechones para cada momento y el grupo se cumplen en todos los grupos excepto para el grupo A a los 29-30 días (n=6) .

Peso corporal e ingesta de dieta La evolución del peso corporal y la ingesta de dieta es muy similar para los 3 diferentes grupos de dietas. No existen diferencias en evolución de peso corporal entre los grupos para la duración del experimento. La ingesta de dieta es significativamente mayor en el grupo C que en los grupos A y B, únicamente para el intervalo de tiempo entre 16 y 28 días. Para el resto del tiempo no hay diferencias entre los grupos. Cuando la ingesta se representa como ingesta de dieta acumulada no existen diferencias entre grupos. De manera similar, la evolución de la eficiencia alimenticia, calculada como gramos de peso corporal / 100 kcal de ingesta es similar para los 3 grupos. No hay diferencias entre los grupos cuando se consideran los diferentes intervalos de tiempo o para todo el todo periodo del estudio.

Diarrea El número de cerdos que padecieron diarrea durante el estudio es similar para los tres grupos de dieta (no se observó una diferencia significativa) . Sin embargo, cuando se analiza la duración de los episodios de diarrea (Figura 7), es posible detectar diferencias significativas entre los grupos. La duración de la diarrea a es significativamente menor en el grupo C que en el grupo A, y el grupo B mostró una tendencia (p=0. 1512) a ser menor que el grupo A para este parámetro. De hecho, si no se utiliza la corrección de Bonferronis para esta última comparación, se encuentra una tendencia más fuerte, con un valor p de 0.0504.

Conclusiones La duración de la diarrea es significativamente menor en el grupo C que en el grupo A, y el grupo B mostró una tendencia (p=0.1 512) a ser menor que la del grupo A para este parámetro. De hecho, si no se utiliza la corrección de Bonferronis para esta última comparacjón, se encuentra una tendencia más fuerte, con un valor p de 0.0504. La duración reducida de la diarrea parece ser el resultado de utilizar un concentrado proteico de suero con niveles enriquecidos de lactoferrina , fosfolípidos, ácidos siálico y gangliósidos (PSN U 2900 WPC para las Muestras B y C) en comparación con una aislado proteico de suero convencional (Fórmula para Lactantes SI MI LAC ADVANCE ®, Abbot Labs. , Columbus Ohio , modificada para la Muestra A) .

Experimento I I I Este segundo estudio animal se realiza, similar en protocolo al utilizado en el Experimento I I , excepto que este estudio compara los beneficios de rendimientos de las siguientes alimentaciones: • Dieta A: Modalidad de fórmula para lactantes de la presente invención con concentrado proteico de suero enriquecido a un nivel de 6.4 g/L de la fórmula sobre una base por ración. • Dieta B: Fórmula para Lactantes Similac® Advance®, disponible por Abbott Laboratories, Columbus, Ohio, EUA con concentrado proteico de suero convencional. · Dieta C: Fórmula para Lactantes Enfalac DHA+ARA ™ , disponible por Bristol-Meyers Squibb (Tailandia) , con concentrado proteico de suero convencional .

Diseño experimental El estudio es longitudinal e incluye tres grupos de lechones alimentados con las dietas experimentales A, B o C (ver la Tabla 4) con dos momentos de sacrificio después de 7-8 y 14- 1 5 de la alimentación. Un grupo adicional de lechones alimentados con leche de cerda es incluido en el estudio como referencia. Los animales en el grupo alimentado con leche de cerda se agrupan por edad para coincidir con los momentos de sacrificio de los animales alimentados con dietas experimentales. Los animales del grupo alimentados con leche de cerda son sacrificados al inicio del estudio, después de los 14-16 días de edad, y después de los 23-24 días de edad. Una granja certificada suministra sesenta lechones domésticos (3-4 días de edad) . Son sacrificados ocho lechones provenientes del grupo de referencia de leche de cerda. Cuarenta y ocho de los lechones son agrupados por peso, carnada y sexo, y se dividen en 3 grupos (n = 16, y n= 16, respectivamente) . Cuatro de los lechones restantes se asignan aleatoriamente a los 3 grupos (1 al Grupo A, 1 al Grupo B, y 2 al Grupo C). Los lechones son alojados en jaulas de acero inoxidable en un cuarto acondicionado a 27°C. Los animales son alimentados cuatro veces al día con una dieta adaptada para cerdos, de acuerdo con sus requisitos nutrimentales durante un periodo de tres días . Después del periodo de adaptación de tres días, los lechones son alimentados cuatro veces al día con una de las tres dietas experimentales. El momento en el cual son alimentados por primera vez los animales, la dieta experimental es considerada "Tiempo Cero" en el estudio. Las siguientes tablas muestran la composición de la dieta convencional para cerdos y las dietas A, B y C : Tabla 5: Dietas Experimentales Dieta Dieta Dietas Dietas Dieta Dieta convencional convencional A y B A y B C por C por para cerdos para cerdos por por 100 g 100 por 100 g por 100 mi 100 g 100 mi mi Proteína 25.5 4.79 10.9 1.40 12 1.5 Grasa 36.3 6.82 28.9 3.71 30 3.9 Carbohidratos 31 5.83 55.3 7.1 52 6.7 Ceniza 5.2 0.98 2.9 0.37 3.5 0.45 Minerales Na (mg) 201.9 37.96 126 16 147 19 K (mg) 800 150.40 552 71 620 80 Cl (mg) 300 56.40 342 44 390 50 Fe (mg) 32.7 6.15 9.5 1 9.4 1 Zn (mg) 13 2.44 3.94 1 5.8 1 Cu (mg) 0.8 0.15 0.473 0.061 .370 .048 Mg (mg) 61.4 11.54 32 4 47 6 Mn (mg) 0.5 0.09 0.05 0.006 .076 .01 Ca (mg) 1069 200.97 410 53 390 50 P (mg) 792 148.90 221 28 260 33 I (mcg) 61.7 11.60 32 4 79 10 Se (mcg) 20 3.76 12 2 17.3 2 Vitaminas Vitamina A 400 75.20 1577 203 470 60 (Ul) Vitamina D 53 9.96 315 41 310 40 (Ul) Dieta Dieta Dietas Dietas Dieta Dieta convencional convencional A y B A y B C por C por para cerdos para cerdos por por 100 100 por 100 g por 100 mi 100 g 100 g mi mi Vitamina E (Ul) 5 0.94 16 2 9.4 1 Vitamina K 21.5 4.04 42 5 50 6 (mcg) Tiamina (mg) 0.2 0.04 0.53 .07 0.39 .05 Riboflavina (mg) 0.5 0.09 0.79 0.1 0.85 0.1 Piridoxina (mg) 0.317 0.06 0.32 0.04 0.35 0.05 Cianocobalamina 3.5 0.66 1.31 0.17 2.1 0.27 (mcg) Ácido 2 0.38 2365 304 3000 386 pantoténico (mcg) Ácido fólico 100 18.80 79 10 84 11 (mcg) Biotina (mcg) 26.5 4.98 23 3 14.7 2 Niacina (mg) 3 0.56 5.5 1 6.3 1 Vitamina C (mg) 71.25 13.40 47 6 120 15 Otros Nucléotidos (mg) - - 56 7 17 2 Energía 552.7 103.91 525 68 523 67 Tabla 6 Lacprodan M F G M 10 , concentrado proteico de suero enriquecido, Arla Food Ingredients, Dinamarca Todas las dietas, una vez preparadas, se utilizan inmediatamente o se almacenan en latas de atmósfera inerte a 4°C y se utiliza a las 24 horas. Las dietas se encuentran en forma de polvo y se reconstituyen con agua al 12.85% en peso para las Dietas A, B y C. Las dietas líquidas reconstituidas se vierten en los alimentadores de la caja. El líquido remanente se extrae y mide y los alimentadores se limpian antes de las subsecuentes administraciones. Para cada grupo, se sacrifican 8 lechones los días 7-8 y 14-1 5 después del inicio de la alimentación con las fórmulas de control (Dietas B y C) por las fórmulas experimentales (Dieta A) .

Resultados Abandonos Cuatro lechones de cada grupo mueren . Tres de los lechones al grupo A y uno de los lechones en el grupo B mueren durante el periodo de adaptación . U n lechón del grupo B es excluido del estudio, debido a que el lechón es muy pequeño y no creció como el resto de lechones. Consecuentemente, a los 7-8 días, n para el grupo A es 7, n para el grupo B es 8, y n para el grupo C es 8. A los 14- 15 días, n para el grupo A es 6, n para el grupo B es 4, y n para el grupo C es 6.

Peso corporal e ingesta de dieta La evolución del peso corporal y la ingesta de dieta es muy similar para los tres diferentes grupos de dieta. No existen diferencias en la evolución de peso corporal entre los grupos para la duración del experimento. Cuando la ingesta se representa como una ingesta de dieta acumulada no existen diferencias entre los grupos. La evolución de la eficiencia alimenticia, calculada como gramos de peso corporal/100 kcal de ingesta, es mayor pero no significativamente diferente, en el grupo C que en los grupos A y B, únicamente para del intervalo entre los días 7 y 14. Se observa una alta variabilidad para el intervalo de tiempo entre los días 0 y 6, pero no existen diferencias entre los grupos.

Diarrea El número de cerdos que padecen diarrea durante el estudio es similar para los tres grupos de dieta (no se observa una diferencia significativa). Tampoco hubo diferencias significativas en la duración de la diarrea entre los grupos (Figura 8) .

Conclusiones El Experimento I muestra que las fórmulas para lactantes que comprenden aislado proteico de suero convencional (Dieta A) no reducen la duración de la diarrea. El Experimento 1 muestra también que las fórmulas para lactantes (Dietas B y C) que comprenden niveles enriquecidos de lactoferrina, fosfolípidos, ácidos siálico y gangliósidos, cada uno de los cuales es proporcionado en su totalidad o en parte por un concentrado proteico de suero enriquecido (PSN U 2900 WPC a 7.1 g/L de la fórmula sobre una base por ración) reducida la duración de la diarrea. El Experimento 2 muestra que las fórmulas para lactantes (Dieta A) que comprende niveles enriquecidos de lactoferrina, fosfolípidos, ácido siálico, y gangliósidos, pero niveles menores de concentrado proteico de suero enriquecido (PSN U 2900 WPC a 6.4 g/L de la fórmula sobre una base por ración) no reducen la duración de la diarrea. Por lo tanto, los resultados de ambos experimentos sugieren que las presentes fórmulas que comprenden niveles enriquecidos de lactoferrina, fosfolípidos, ácido siálico y gangliósidos, reducen la duración de la diarrea, visto que la fórmula incluye un nivel de umbral mínimo de concentrado proteico enriquecido como se define la presente.

Ejemplos Los siguientes ejemplos representan modalidades específicas dentro del alcance de la presente invención, cada una de los cuales se brinda únicamente para propósitos de ilustración y no pretenden erigirse como limitantes de la presente invención , dado que son posibles muchas variaciones de las mismas sin aislarse del espíritu y alcance de la invención . Todas las cantidades ejemplificadas son porcentajes en peso con base en el peso total de la composición, a menos que se indique de otra manera.

Fórmulas para lactante en polvo Lo que se presenta a continuación son modalidades de fórmula en polvo de la presente invención, incluyendo métodos para utilizar las fórmulas para lactantes. Los ingredientes para cada fórmula se alistan a continuación en la tabla.

Tabla 5: Ejemplos 1-4 EJEMPLO EJEMPLO 2 EJEMPLO EJEMPLO Ingredientes 1 3 4 CANTIDAD POR 1000kg DE FÓRMULA LACTOSA 428.76 kg 428.76 kg 428.76 kg 525.02 kg LECHE DESCREMADA EN 200.62 kg 197.62 kg 197.62 kg ND kg POLVO SIN GRASA BAJA EN CALORÍAS ACEITE DE GIRASOL 106.53 kg 106.53 kg 106.53 kg 102.97 kg OLÉICO ALTO ACEITE DE COCO 90.74 kg 91.09 kg 92.87 kg 87.57 kg ACEITE DE SOJA 86.37 kg 86.37 kg 86.37 kg 83.49 kg LACPRODAN MFGM-10 51.00 kg 53.96 kg 53.96 kg 154.18 kg CITRATO DE POTASIO 7.20 kg 7.20 kg 7.20 kg 7.20 kg OLIGOFRUCTOSA (FRUCTO- 7.04 kg 7.04 kg 7.04 kg 7.04 kg OLIGOSACÁRIDO) CARBONATO DE CALCIO 4.018 kg 4.02 kg 4.02 kg 9.563 kg ÁCIDO ARAQUIDONICO (AA) 2.87 kg 2.87 kg 1.44 kg 2.87 kg CLORURO DE POTASIO 1.614 kg 1.61 kg 1.61 kg 1.717 kg ÁCIDO 1.40 kg 1.05 kg 0.70 kg 1.40 kg DOCOSAHEXAENÓICO (DHA) CLORURO DE SODIO 1.303 kg 1.30 kg 1.30 kg 3.280 kg CLORURO DE COLINA 1.04 kg 1.04 kg 1.04 kg 1.04 kg ÁCIDO ASCÓRBICO 766.88 g 766.88 G 766.88 g 766.88 g PREMEZCLA VITAMÍNICA 746.460 g 746.46 G 746.46 g 746.460 g 25913 EJEMPLO EJEMPLO 2 EJEMPLO EJEMPLO 1 3 4 Ingredientes CANTIDAD POR 1000kg DE FÓRMULA CLORURO DE MAGNESIO 641.63 g 641.63 G 641.63 g 2.18 g SULFATO FERROSO 511.98 g 511.98 G 511.98 g 508.79 g TAURINA 373.84 g 373.84 G 373.84 g 373.84 g PALMITATO DE 349.22 g 349.22 G 349.22 g 349.22 g ASCORBILO VITAMINA A, D, RRR-E, 345.00 g 345.00 G 345.00 g 345.00 g PREMEZCLA K M-INOSITOL 254.64 g 254.64 G 254.64 g 254.64 g CITIDINA 5'- 243.188 g 243.19 G 243.19 g 243.188 g MONOFOSFATO URIDINA DE DISODIO 5'- 192.286 g 192.29 g 192.29 g 192.286 g MONOF.25% GUANOSINA DE DISODIO 175.452 g 175.45 g 175.45 g 175.452 g 5'-MONOF. ANTIOXIDANTE DE 166.37 g 166.37 g 166.37 g 166.37 g GRADO ALIMENTICIO DE TOCOFEROL 2 SULFATO DE CINC 165.70 g 165.70 g 165.70 g 206.02 g ADENOSINA 5'- 92.043 g 92.04 g 92.04 g 92.043 g MONOFOSFATO SULFATO DE COBRE 26.136 g 26.14 g 26.14 g 27.691 g ENCAPSULADO BETA CAROTENO 30% 11.64 g 11.64 g 11.64 g 11.64 g FOSFATO DE TRICALCIO 3.000 g 3.00 g 3.00 g 3.000 g SULFATO DE 1.00 g LOO g 1.00 g 1.00 g MANGANESO EJ EM PLO EJ EMPLO 2 EJ EMPLO EJEMPLO I ngredientes 1 3 4 CANTI DAD POR 1 000kg DE FÓRMULA SELENATO DE SOD IO 232.03 232.03 mg 232.03 232.03 mg mg mg Cada uno de los ingredientes ejemplificados puede prepararse de manera similar al elaborar al menos dos pastas aguadas separadas que se combinan con posterioridad, tratadas térmicamente, estandarizadas, evaporadas, secas y envasadas. Inicialmente, en un tanque de mezcla de aceite, bajo condiciones de nitrógeno, se prepara una pasta de aceite al combinar aceite de girasol oléico alto, aceite de soja y aceite de coco, seguido de la adición de palmitato de ascorbilo, beta caroteno, vitamina ADEK y tocoferoles mixtos. Después, el tanque se agita durante 20 minutos y el análisis QA . Después del despeje de QA e inmediatamente antes del procesamiento del aceite ARA, se añade aceite DHA al tanque de mezcla de aceite. La pasta de aceite resultante se mantiene bajo agitación moderada a temperatura ambiente (<30°C) hasta que se combina posteriormente con la otra pasta preparada. La pasta de leche descremada-aceite la pasta de vitamina se prepara al combinar la pasta de mezcla de aceites en aproximadamente 40% de la leche descremada fluida en 35-45% en un proceso de agitación continuo seguido por la adición de un concentrado proteico de suero enriquecido. Esta pasta proteica de aceite se calienta a 65-70°C , se homogenizan dos etapas a 1 54- 1 90/25-45 bars, se enfría a 3-6°C y se almacena en el silo de proceso. La pasta de carbohidratos-leche descremada se prepara disolviendo lactosa y leche descremada en polvo en aproximadamente 60% de la leche descremada fluida a 60-75°C. Esta pasta se mantiene bajo agitación en el tanque de solubilización durante aproximadamente 2 minutos antes de bombear al intercambiador de placas donde se enfría a 3-6°C y se transporta al silo de proceso donde se combina con la pasta de aceite de leche descremada. La pasta mineral 1 se prepara al disolver cloruro de magnesio, cloruro de sodio, cloruro de potasio y citrato de potasio en agua a temperatura ambiente y se mantiene bajo agitación durante un mínimo de 5 minutos. La pasta mineral 1 se añade al silo de proceso. La pasta mineral 2 se prepara al disolver fosfato de tricalcio y carbonato de calcio en agua, a 40-60°C y se mantiene bajo agitación durante un mínimo de 5 minutos. La pasta mineral 2 se añade al silo de proceso. La pasta de oligofructosa se prepara al disolver oligofructosa en agua a 40-60°C y se mantiene bajo agitación durante un mínimo de 5 minutos. La pasta de oligofructosa se añade al silo de proceso. El lote se agita en el silo de proceso durante un mínimo de 45 minutos antes de tomar una muestra para las pruebas analíticas. Con base en los resultados analíticos de las pruebas de control de calidad , se realiza un proceso de estandarización apropiado.

La pasta de vitamina C se prepara al disolver citrato de potasio y ácido ascórbico en agua a temperatura ambiente y se mantiene bajo agitación durante un mínimo de 5 minutos. La pasta de vitamina C se añade al silo de proceso. La pasta de vitaminas-inositol soluble al agua se prepara al disolver citrato de potasio, una premezcla vitamínica soluble al agua e inositol en agua a 40-60°C y se mantiene bajo agitación durante un míni mo de 5 minutos. La pasta de vitaminas-inositol soluble al agua se añade al silo de proceso. La pasta de sulfato ferroso se prepara al disolver citrato de potasio y sulfato ferroso en agua a temperatura ambiente y se mantiene bajo agitación durante un m ínimo de 5 minutos. La pasta de nucleótidos-colina se prepara al disolver una premezcla de nucleótidos-colina en agua a temperatura ambiente y se mantiene bajo agitación durante un mínimo de 5 minutos. La pasta de nucleótidos-colina se añade al silo de proceso. El lote final se agita en el silo de proceso durante un mínimo de 60 minutos antes de tomar una muestra para su prueba analítica.

Con base en los resultados analíticos de las pruebas de control de calidad, podría llevarse a cabo una corrección apropiada de la vitamina C y del pH . El lote final se mantiene bajo agitación moderada a 3-6°C. Después de esperar durante un periodo no mayor a 7 días, la combinación resultante se precalienta a 90-96°C, se calienta a 1 10- 1 30°C durante 3 segundos. La combinación calentada se pasa por un enfriador instantáneo a fin de reducir la temperatura a 93-97°C y después por un evaporador a fin de alcanzar los sólidos deseados. Después, el producto se calienta a 75-78°C y se bombea a hacia la torre de secado por atomización . El producto en polvo resultante se recoge y almacenar en silos para polvo a granel y se realizan pruebas de calidad. A continuación, el producto terminado se coloca en recipientes adecuados. Se toman muestras para su uso pruebas microbiológicas y analíticas tanto durante el proceso como una vez con el producto terminado.

Proceso alternativo Cada uno de estos ejemplos puede prepararse de manera similar al elaborar al menos dos pastas separadas que se combinan posteriormente, se tratan térmicamente, se estandarizan , se secan, se combinan en seco y se envasan. Inicial mente, se prepara una pasta de leche descremada-mineral al disolver aproximadamente 80% de la leche descremada en polvo en agua desmineralizada a 60-65°C, seguida por la adición de citrato de potasio e hidróxido de potasio. El pH de la mezcla resultante se ajusta a 7.7-8.7 con hidróxido de potasio o ácido cítrico. El resto de la leche descremada en polvo y cloruro de magnesio se añade a la combinación anterior. El pH de la combinación resultante se ajusta a 6.7-7.2 con hidróxido de potasio o ácido cítrico. En un tanque separado, se prepara una nueva pasta al disolver cloruro de colina e inositol en agua desmineralizada a temperatura ambiente. La pasta resultante se combina con la pasta de leche descremada-mineral y se mantiene bajo agitación moderada a 60-65°C durante no más de 1 hora hasta que se combina con posterioridad con los ingredientes adicionales. En un tanque separado se prepara una nueva pasta al disolver esta taurina en agua desmineralizada a 70°C. La pasta resultante se combina con la leche descremada-mineral y se mantiene bajo agitación moderada a 60-65°C durante no más de 1 hora hasta que se combina posteriormente con los ingredientes adicionales. U n concentrado proteico de suero enriquecido se añade a la pasta de leche descremada-mineral seguido por lactosa y oligofructosa. La pasta se agita en el silo de proceso durante un mínimo de 30 minutos antes de tomar una muestra para su prueba analítica . El pH de la combinación resultante se ajusta a 6.5-7. 1 con hidróxido de potasio o ácido cítrico. En un tanque de proceso de aceite, bajo condición de nitrógeno, se prepara una pasta de aceite al combinar aceite de girasol oléico alto, aceite de soja y aceite de coco, seguido por la adición de vitamina ADEK, beta caroteno, tocoferoles mixtos, palmitato de ascorbilo, aceite de ARA y aceite de DHA. La pasta de aceite resultante se mantiene bajo agitación moderada a temperatura ambiente durante no más de seis horas hasta que se combina a posteriormente con la pasta de proteína-carbohidrato-mineral . Después de esperar durante un período no menor a 30 minutos mi mayor a 6 horas, la pasta de proteína-carbohidrato-mineral se desairea a 70-80°C y se calienta adicionalmente a 84-86°C. En este momento del proceso, se inyecta la pasta de aceite en línea a 50-80°C. La combinación final se enfría a 68-72°C y emulsiona a través de un homogenízador de doble etapa a 145-155 bars en la primera etapa y a 30-40 bars en la segunda etapa. La combinación calentada pasa por un enfriador de placas a fin de reducir la temperatura a 3-5°C y se almacena en un silo de proceso. Una solución mineral y una solución de ácido ascórbico se preparan separadamente al añadir los siguientes ingredientes a la combinación procesada. La solución mineral se prepara añadiendo los siguientes ingredientes a la cantidad suficiente de agua desmineralizada con agitación : ácido cítrico, sulfato de manganeso, selenato de sodio y sulfato de cinc. La solución de ácido ascórbico se prepara al añadir ácido ascórbico en una cantidad suficiente de agua desmineralizada para disolver el ingrediente. La combinación procesada se mantiene bajo agitación moderada a 3-5°C durante no más de 48 horas. Se toman muestras para su prueba analítica. La combinación enfriada se calienta después a 69-73°C y se homogeniza a 60-70/30-40 bars y se envía a la torre de secado por atomización . El producto en polvo base se recoge y almacena en recipientes para polvo a granel. Se toman muestras para su uso pruebas microbiológicas y analíticas. Después de que se completan las pruebas analíticas y microbiológicas correspondientes, el producto en polvo base se libera para la combinación en seco del resto de ingredientes . Las cantidades de los ingredientes restantes requeridos para obtener el producto en polvo final se determinan e ingresan en el sistema automático de peso. El sistema pesa cada componente de la premezcla de combinación en seco (lactosa , carbonato de calcio, cloruro de potasio, cloruro de sodio, premezcla soluble al agua , citidina 5-monofasto nucleótido, uridina 5-monofosfato de disodio nucleótido, guanosina 5-monofosfato de disodio nucleótido, adenosina 5-monofosfato nucleótido, sulfato de cobre y fosfato tribásico de calcio. El producto en polvo base y la premezcla de combinación en seco se transportan a la mezcladora. La combinación se mantiene bajo agitación durante un periodo no menor a 20 minutos. Después de que se completa la combinación , el producto terminado se transporta a la máquina de envase y se coloca en recipientes adecuados. Se toman muestras para sus pruebas microbiológicas y analíticas. Las fórmulas ejemplificadas (Ejemplos 1 -4) no son ejemplos limitantes de las modalidades de la fórmula en polvo de la presente invención. Cada fórmula se reconstituye con agua antes de su uso a una densidad calórica que oscila desde aproximadamente 1 9 hasta aproximadamente 24 kcal/oz. líquida, y después se le administra al lactante como única fuente nutrimental durante los primeros 9 meses de vida, incluyendo los primeros 4 meses de vida. Los lactantes que utilizan la fórmula experimentan un riesgo reducido de diarrea y enfermedades menos severas en forma de una duración reducida de diarrea cuando se presenta. Estos lactantes también desarrollan una microflora intestinal similar a la de otros lactantes alimentados con leche materna.

Fórmulas para lactante líquidas Los Ejemplos 1 -4 se modifican por medios convencionales a fin de formar modalidades de fórmulas líquidas l istas para su administración (Ejemplos 5-8) de la presente invención. Los ingredientes para los Ejemplos 5-8 corresponden a los dictados de ingredientes recitados en los Ejemplos 1 -4, respectivamente. Las fórmulas ejemplificadas (Ejemplos 5-8) son ejemplos no limitantes de las modalidades de fórmula l íquida de la presente invención. Cada fórmula se ajusta a una densidad calórica que oscila desde aproximadamente 19 hasta aproximadamente 24 kcal/oz. líquida. La fórmula se administra a un lactante como única fuente nutrimental durante los primeros 9 meses de vida, incluyendo los primeros 4 meses de vida. Los lactantes que utilizan la fórmula experimentan un riesgo reducido de diarrea en forma de una duración reducida de diarrea cuando se presenta. Estos lactantes también desarrollan una microflora intestinal similar a la de otros lactantes alimentados con leche materna.

Claims

REIVINDICACIONES 1 . Fórmula para lactantes que comprende, sobre una base por ración: (A) al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliósidos, (B) al menos aproximadamente 1 50 mg/L de fosfolípidos, (C) lactoferrina, y (D) al menos aproximadamente 70 mg/L de ácido siálico, con al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico como ácido siálico unido a lípidos; donde desde aproximadamente 50% hasta 1 00% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico se proporcionan por un concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una base por ración. 2. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , donde el ácido siálico unido a lípidos representa desde aproximadamente 2.7% hasta aproximadamente 5% en peso del ácido siálico total. 3. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , que comprende, sobre una base por ración, (A) desde aproximadamente 7 mg/L hasta aproximadamente 50 mg/L de gangliósidos, (B) desde aproximadamente 200 mg/L hasta aproximadamente 600 mg/L de fosfolípidos, y (C) desde aproximadamente 90 mg/L hasta aproximadamente 250 mg/L de ácido siálico. 4. U na fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , que comprende, sobre una base por ración, desde aproximadamente 50 mg/L hasta aproximadamente 2000 mg/L de lactoferrina, con al menos aproximadamente 6% en peso de la lactoferrina como lactoferrina nativa. 5. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , donde el fosfolípido total comprende al menos 20% en peso de esfingomielina. 6. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 5, donde el fosfolípido comprende esfingomielina , etanolamina de fosfatidilo, colina de fosfatidilo, inositol de fosfatidilo y serina de fosfatidilo. 7. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 que comprende además desde aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 5% de un fructopolisacárido. 8. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , donde la fórmula contiene menos que aproximadamente 0.5% de glucomacropéptidos libre, sobre una base por ración. 9. U na fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , donde la fórmula para lactantes se encuentra sustancialmente libre de fosfolípidos , fosfolípidos de huevo y combinaciones de los mismos. 1 0. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , donde la fórmula para lactantes comprende al menos de aproximadamente 0.2% en peso de grasa de leche sobre una base por ración . 1 1 . Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , donde la fórmula para lactantes es un polvo. 12. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , donde la fórmula para lactantes es un líquido listo para administrar. 1 3. Una fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , que comprende, sobre una base por ración , desde aproximadamente 6.5 g/L hasta aproximadamente 10.9 g/L de concentrado proteico de suero enriquecido. 14. U na fórmula para lactantes según la reivindicación 1 , donde desde aproximadamente 60% hasta aproximadamente 90% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, y ácido siálico son proporcionados por el concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una pase por ración. 1 5. Un método para reducir el riesgo de diarrea en un lactante, que comprende (I) preparar una fórmula para lactantes que comprende, sobre una base por ración : (A) al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliósidos, (B) al menos aproximadamente 150 mg/L de fosfolípidos, y (C) lactoferrina, (D) al menos aproximadamente 70 mg/L de ácido siálico total con al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico como ácido siálico unido a lípidos; donde desde aproximadamente 50% hasta aproximadamente 1 00% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfol ípidos, lactoferrina, y ácido siálico se proporcionan por un concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una base por ración, (I I) administrar o darle instrucciones a la persona que cuidará al lactante de administrarle la fórmula al lactante 16. Un método según la reivindicación 1 5, donde la fórmula se administra como una única fuente nutrimental . 1 7. Un método según la reivindicación 15, donde la fórmula para lactantes comprende, sobre una base por ración, desde aproximadamente 50 mg/L hasta aproximadamente 2000 mg/L de lactoferrina, con al menos aproximadamente 6% en peso de la lactoferrina como lactoferrina nativa. 1 8. U n método según la reivindicación 1 5, donde el ácido siálico unido a l ípidos representa desde aproximadamente 2.7% hasta aproximadamente 5% en peso del ácido siálico total . 1 9. Un método según la reivindicación 15 , donde la fórmula para lactantes comprende, sobre una base por ración , (A) desde aproximadamente 7 mg/L hasta aproximadamente 50 mg/L de gangliósidos, (B) desde aproximadamente 200 mg/L hasta aproximadamente 600 mg/L de fosfolípidos y (C) desde aproximadamente 90 mg/L hasta aproximadamente 250 mg/L de ácido siálico. 20. U n método según la reivindicación 15, donde el fosfolípido total comprende al menos 20% en peso de esfingomielina. 21 . U n método según la reivindicación 15, donde la fórmula contiene menos de aproximadamente 0.2% en peso de leche descremada sobre una base por ración . 22. Un método según la reivindicación 15, donde la fórmula comprende menos de aproximadamente 0.5% en peso de glucomacropéptidos libre sobre una base por ración. 23. Un método según la reivindicación 15, donde la fórmula para lactantes comprende, sobre una base por ración desde aproximadamente 6.5 g/L hasta aproximadamente 10.9 g/L de concentrado proteico de suero enriquecido. 24. Un método según la reivindicación 1 5, donde desde aproximadamente 90% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico se proporcionan por el concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 mg/L de la fórmula sobre una base por ración. 25. U n método para producir un perfil de microflora intestinal similar al de los lactantes alimentados con leche materna, comprendiendo el método: (I) preparar una fórmula para lactantes que comprende, sobre una base por ración: (A) al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliósidos, (B) al menos aproximadamente 150 mg/L de fosfol ípidos, y (C) lactoferrina, (D) al menos aproximadamente 70 mg/L de ácido siálico total con al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico como ácido siálico unido a lípidos; donde desde aproximadamente 50% hasta aproximadamente 100% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina , y ácido siálico se proporcionan por un concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula para lactantes sobre una base por ración, (I I) administrar o darle instrucciones a la persona que cuidará al lactante de administrarle la fórmula al lactante 26. U n método según la reivindicación 25, caracterizado porque la fórmula comprende, sobre una base por ración, desde aproximadamente 50 mg/L hasta aproximadamente 2000 mg/L de lactoferrina , con al menos aproximadamente 6% en peso de la lactoferrina como lactoferrina nativa. 27. U n método según la reivindicación 25, donde la fórmula para lactantes comprende, sobre una base por ración , desde aproximadamente 6.5 g/L hasta aproximadamente 10.9 g/L de concentrado proteico de suero enriquecido. 28. U n método según la reivindicación 25, donde desde aproximadamente 60% hasta aproximadamente 90% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico se proporcionan por el concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una base por ración. 29. U n método según la reivindicación 25, donde desde aproximadamente 50% hasta aproximadamente 100% en peso de la combinación de gangliósidos, fosfol ípidos, y ácido siálico se deriva de un concentrado proteico de suero enriquecido. 30. U n método según la reivindicación 25, donde el ácido siálico representa desde aproximadamente 2.7% hasta aproximadamente 5% en peso del ácido siálico total. 31 . Un método según la reivindicación 25, donde la fórmula comprende, sobre una base por ración, (A) desde aproximadamente 7 mg/L hasta aproximadamente 50 mg/L de gangliósidos, (B) desde aproximadamente 200 mg/L hasta aproximadamente 600 mg/L de fosfolípidos, y (C) desde aproximadamente 90 mg/L hasta aproximadamente 250 mg/L de ácido siálico. 32. Un método según la reivindicación 25, donde el fosfolípido total comprende al menos 20% en peso de esfingomielina. 33. Un método según la reivindicación 25, donde la fórmula comprende menos de aproximadamente 0.2% en peso de grasa de leche sobre una base por ración . 34. U n método según la reivindicación 25, donde la fórmula comprende menos de 0.5% en peso de glucomacropéptidos libres sobre una base por ración. 35. Un método según la reivindicación 25, donde la fórmula comprende además desde aproximadamente 0.05% hasta aproximadamente 5% de un fructopolisacárido. RESU MEN Se describen fórmulas para lactantes que comprenden, sobre una base de ración (A) al menos aproximadamente 5 mg/L de gangliósidos, (B) al menos aproximadamente 1 50 mg/L de fosfolípidos, (C) lactoferrina y (D) al menos aproximadamente 70 mg/L de ácido siálico, con al menos aproximadamente 2.5% en peso del ácido siálico como ácido siálico unido a lípidos. Desde aproximadamente 50% hasta 100% en peso de cada uno de los gangliósidos, fosfolípidos, lactoferrina y ácido siálico es proporcionado por un concentrado proteico de suero enriquecido, representando el concentrado al menos aproximadamente 6.5 g/L de la fórmula sobre una base por ración. También se describen métodos para utilizar la fórmula a fin de reducir el riesgo de lactantes con diarrea y producir un perfil de microflora intestinal similar al de los lactantes alimentados con leche materna.