MX2008016187A - Tratamiento de tumores en pacientes pediatricos con antagonistas del receptor del factor de crecimiento epidermico. - Google Patents

Abstract

Los métodos de terapia de combinación para tratar tumores pediátricos mediante la administración de un antagonista del EGFR y un agente quimioterapéutico. Los métodos incluyen tratar tumores pediátricos refractarios.

Description

TRATAMIENTO DE TUMORES EN PACIENTES PEDIÁTRICOS CON ANTAGONISTAS DEL RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDÉRMICO Referencia Cruzada a las Solicitudes Relacionadas Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente provisional de E.U.A. No. de Serie 60/833,487, presentada el 27 de Julio de 2006, los contenidos de la cual están aquí incorporados en su totalidad mediante referencia.

Campo de la Invención La presente invención se refiere a tratar tumores en pacientes pediátricos mediante administrar una combinación de un antagonista del EGFR y un agente quimioterapéutico.

Antecedentes de la Invención En los Estados Unidos, 11,900 niños y adolescentes menores de 20 años fueron diagnosticados con cáncer en el 2001 y aproximadamente 2,200 murieron de este padecimiento. Los tumores sólidos suman aproximadamente 30% de los casos de cánceres en niños. Los cánceres del sistema nervioso y el cerebro invasivos suman el 17% de todos los cánceres pediátricos, seguidos solamente por la leucemia linfocítica. Aproximadamente la mitad de los casos diagnosticados de los tumores cerebrales son malignos. Otros cánceres comunes en la infancia incluyen sarcoma de Erwing, leucemia, neuroblastoma , osteosarcoma , rabdomiosarcoma, sarcoma de tejido suave, y tumores de Wilms. Uno de los mayores obstáculos en el tratamiento de los tumores cerebrales en niños es que el cerebro aún está atravesando un desarrollo rápido y es vu lnerable a las toxicidades de los tratamientos tales como la radiación o quimioterapia. Los obstáculos también aparecen en el tratamiento de otros tipos de cánceres de la infancia . Por consig uiente, son necesarias n uevas terapias para tratar tumores en pacientes pediátricos. La familia del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EG F R) está expresada y sobre expresada en varios cánceres y generalmente está involucrada en tumorigénesis. La familia del EG FR incluye el receptor de EG F (el EG FR, también conocido como erbB-1 /H ER1 ), H ER2 (también conocido como cneu/erB-2) , erB-3/H ER3, y erbB-4/H ER4. Por ejemplo el EGFR y H E R2 han jugado un papel crítico en procesos que regulan crecimiento celular de tumor y sobrevivencia . En particular, el EGF R ha estado implicado en varias rutas q ue afectan la sobrevivencia y la protección a partir de la apóptosis, diferenciación y metástasis (incluyendo migración celular e invasión) . Entre esos cánceres que expresan EGER alg unos de los más prevalentes incluyen : cabeza y cuello, colorectal, pancreático, ovárico, de célula renal , de pulmón de célula no pequeña y gliomas. La pronosis para varios de estos cánceres es pobre si no se diagnostica en un estado temprano, y la terapia para u n padecimiento avanzado es limitada .

Comú nmente hay varios i nhibidores de EG FR en pruebas clínicas para el tratamiento de alg unos de estos cánceres. Uno de dichos ejemplos es ERBITUX® (cetuximab) (elaborado por I mClone Systems I nc.) que es un anticuerpo monoclonal quimérico (humano/ratón) que bloquea el ligando que se enlaza al EGFR , previene la activación del receptor, e inhibe el crecimiento de células en cultivo. Otro ejemplo es ABX-EG F, que es un anticuerpo monoclonal completamente humano específico para EG FR que segú n se informa bloq uea el enlace del factor de crecimiento transformante alfa (TGF-a) y el factor de crecimiento epidérmico (EG F) , dos ligandos que son conocidos para enlazar a EG FR. El H ERCEPTI N® (trastuzumab) es un anticuerpo human izado probado para el tratamiento de cáncer de pecho metástico positivo H ER2, que es designado como blanco y bloquea la función de sobre expresión de la proteína H ER2. En suma, las pruebas clínicas han com ú nmente esta conducidas en varios inhibidores del EGFR de molécula pequeña . Un ejemplo de inhibidor de tirosina cinasa es I RESSA™, que es un inhibidor de tirosina cinasa del EG FR de molécula pequeña que según se informa inhibe la actividad de tirosina cinasa del EGFR es citostático hacia un rango de célu las de cáncer humanas que expresan EG FR funcional , y puede inh ibir la proliferación de células de tumor a través de sobre regulación de p27.

Resumen de la I nvención En algunas modalidades, la presente invención proporciona un método para inhibir el crecimiento de un tumor en pacientes pediátricos mediante tratar al paciente pediátrico con una cantidad efectiva de un antagonista de EGFR y un agente quimioterapéutico. En una modalidad preferida, el antagonista del EGFR es un anticuerpo EGFR que específicamente enlaza al dominio extracelular del EGFR y activación neutralizada del mismo. En una modalidad preferida, el agente quimioterapéutico es irinotecan.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención proporciona métodos para tratar tumores en pacientes pediátricos mediante administrar una cantidad efectiva de un antagonista del EGFR y un agente quimioterapéutico. De acuerdo con la presente invención, los pacientes pediátricos son pacientes desde el nacimiento hasta los 18 años de edad. El tratamiento incluye: (1) prevenir que ocurra el padecimiento en un paciente que puede estar predispuesto al padecimiento pero que no ha aún experimentado o mostrado los síntomas del padecimiento; e.j., prevención de la aparición de los síntomas clínicos; (2) inhibir el crecimiento del tumor, e.j., detener su desarrollo; o (3) aliviar el tumor, e.j., causar la regresión de los síntomas del tumor. Inhibir el crecimiento del tumor que incluye hacer más lento o detener el crecimiento, así como también causar la regresión del tumor. Una cantidad efectiva para el tratamiento de un padecimiento significa aquella cantidad que cuando es administrada a un paciente que la necesita , es suficiente para efectuar el tratamiento del padecimiento, como es definido anteriormente. Los tumores que son tratados de acuerdo con la presente invención son cualquiera de los tumores que expresan EG FR. Tales tumores incluyen blastomas, incluyendo hepatoblastomas y neuroblastomas; carcinomas, incluyendo adenocarci nomas; gliomas, incluyendo ependimomas, astricitomas, oligodendrogliomas y g liomas mezclados; sarcomas, incluyendo rabdomiosarcomas y adenosarcomas, y adenomas. Los tumores pueden ocurrir virtualmente en todas las partes del cuerpo, incluyendo, por ejemplo, el pecho, corazón , pulmón , esófago , intestino delgado, colon , recto, estómago, bazo, riñon, vejiga, cabeza y cuello, laringe, ovario, próstata, cerebro, páncreas, piel , h ueso, médula espinal , sangre, timo, útero , testículos, cérvix, o h ígado. En una modalidad preferida los tumores son tumores del sistema nervioso tales como gliomas y neu roblastomas. Los tumores a ser tratados incluyen tumores primarios y metásticos, así como también tumores refractarios. Los tumores refractarios incluyen tumores que fallan a la respuesta o que son resistentes al tratamiento con agentes quimioterapéuticos solos, anticuerpos solos, radiación sola, o combinaciones de los mismos. Los tumores refractarios también abarcan tumores q ue aparentan ser inhibidos con el tratamiento con dichos agentes, pero q ue reaparecen a los cinco años, algunas veces hasta los diez años o más, después de que el tratamiento es descontin uado.

Un antagonista del EGFR, de acuerdo con la presente invención puede ser un antagonista extracelular o un antagonista intracelular y puede ser empleado más de un antagonista. Los antagonista extracelulares incluyen, pero no están limitados a, proteínas u otras moléculas biológicas que enlazan al EGFR. En algunas modalidades de la invención, un antagonista extracelular enlaza al dominio extracelular del EGFR e inhibe el enlace del EGFR a uno o más de sus ligandos y/o neutraliza la activación inducida de ligando de EGFR. Los ligandos del EGRF incluyen EGF, TFG-a, anfiregulina, EGFR enlazando heparina (HB-EGF y betacelulina. Los antagonistas del EGFR extracelular pueden también incluir sustancias que inhiben la dimerización del EGFR con otras subunidades del receptor del EGFR (i.e., homodímeros de EGFR) o heterodimerización con otros receptores del factor de crecimiento (e.j. HER2) En una modalidad preferida, el antagonista del EGFR es un anticuerpo que enlaza al EGFR y bloquea el enlace del ligando. Un ejemplo de un anticuerpo EGFR es cetuximab (IMC-C225) (No. de acceso del Banco de Genes No. INQLA), que es un anticuerpo monoclonal IgG quimérico (humano/ratón). Ver e.j., la Patente de E.U. No. 4,943,533 (Mendelson et al.); No de Patente de Estados Unidos 6,217,866 (Schlessinger et al.); Nos de Solicitud de Estados Unidos 08/973,065 (Goldstein et al.) y 09/635,974 (Teufel); WO 99/60023 (Waksal et al.) y WO 00/69459, de los cuales todos están aquí incorporados mediante referencia. El cetuximab específicamente enlaza al EGFR y bloquea el enlace de un ligando tal como EGF. El Fab del cetuximab contiene el fragmento Fab del Cetuximab, i.e., las secuencias de región variable de cadena ligera y pesada del anticuerpo murino M225 (No. de Serie de la Solicitud de los Estados Unidos 2004/0006212, incorporada aquí mediante referencia) con la IgG 1 CH1 humana y dominios constantes de cadena ligera kappa (el cetuximab incluye todos los tres dominios constantes de cadena pesada de la IgG 1 ). Las regiones CDR de la cadena pesada del cetuximab tienen las siguientes secuencias: una región CDR1 con una secuencia de N Y G V H (SEQ ID NO:1), una región CDR2 con una secuencia de V I W S G G N T D Y N T P F T S (SEQ ID NO. 2), y una región CDR3 con una secuencia de A L T Y Y D Y E F A Y (SEQ ID NO.3). Las regiones CDR de la cadena ligera del cetuximab tienen las siguientes secuencias: una región CDR1 con una secuencia de R A S Q S I G T N I H (SEQ ID NO. 4), una región CDR2 con un secuencia de Y A S E S I S (SEQ ID NO. 5), y una región CDR3 con una secuencia de Q Q N N N W P T T (SEQ ID NO.6). Otro ejemplo de un anticuerpo EGFR es ABX-EGF, que es un anticuerpo monoclonal de lgG2 completamente humano específico para EGFR. El ABX-EGF enlaza EGFR con alta especificidad, bloqueando el enlace de EGFR a ambos de sus ligandos, EGF y TGF-a. Ver por e.j. Figlin et al., Resumen 1102 presentado en la Reunión Anual 37a de ASCO, San Francisco, CA, del 12 al 15 de Mayo del 2001, el cual está aquí incorporado mediante referencia. La secuencia y la caracterización del ABX-EGF- que fue anteriormente conocido como clon E7.6.3, están descritas en la Patente de los Estados Unidos No. 6,235,883 (Abgenix, Inc) en la col. 28, línea 62 hasta la columna 29, línea 36 y en las Figuras 29 a 34, la cuál está aquí incorporada medíante referencia. (Ver también Yang et al., Critica! Rev. Oncol./Hematol., 38(1):17-23,2001 , que está aquí incorporada mediante referencia). Otro ejemplo de un anticuerpo EGFR es HERCEPTIN® (trastuzumab), que es un anticuerpo monoclonal humanizado derivado de AND recombinante que enlaza selectivamente con alta afinidad en un ensayo basado en célula (Kd de 5nM) al dominio extracelular de la proteína del EGFR2 humana, HER2. El anticuerpo es una IgGi kappa que contiene regiones variables con las regiones que determinan complementarídad de un anticuerpo murino (4D5) que enlaza al HER2. Ver por e.j., la Publicación de Patente Internacional No. WO 01/89566 (Mass), que es aquí incorporada mediante referencia. Otros anticuerpos EGFR incluyen EMD 72000 (Merck KGaA), que son una versión humanizada del anticuerpo monoclonal anti-EGFR murino EMD 55900; h-R3 (Thera CIM), que es un anticuerpo monoclonal anti-EGF humanizado; Y10, que es un anticuerpo monoclonal murino y que fue desarrollado contra un homólogo murino de la mutación EGFRvIll humano; y MDX-447 (Maderex). Ver las Patentes de Estados Unidos Números 5,558,864 (Bending et al.), 5, 884,093 (Kettleborough et al.), y 5,891,996 (Mateo de Acosta del Río et al.), todas ellas se encuentran aquí incorporadas mediante referencia. Los antagonistas del EGFR intracelulares pueden ser moléculas biológicas, pero son usualmente moléculas pequeñas, tales como inhibidores sintéticos de cinasa que actúan directamente en el dominio citoplásmico del EGFR para inhibir la transducción de señal mediadas por el EGFR. Un ejemplo de un antagonista del EGFR de molécula pequeña es IRESSA™ (ZD1939), que es un derivado de quinozalina que funciona como un ATP-mimético para inhibir EGFR. Ver Patente de Estados Unidos Nú. 5,616,582 (Zeneca Limited); WO 96/33980 (Zeneca Limited) en la Pág. 4; ver también, Rowinsky et al., Resumen 5 presentado en la Reunión Anual 37a de ASCO, San Francisco, CA, del 12 al 15 de Mayo del 2001; Anido et al., Resumen 1712 presentado en la Reunión Anual 37a de ASCO, San Francisco, CA, del 12 al 15 de Mayo del 2001. Otros ejemplos de un antagonista del EGFR de molécula pequeña es TARCEVA® (OSI-774), que es un inhibidor de EGFR derivado de 4-(fenilamino sustituido)quinozalina hidrocloruro de [6,7-Bis(2-metoxi-etoxi)-quinazolin-4-il]-(3-etinil-fenil)amina. Ver WO 96/30347 (Pfiezer Inc.) en, por ejemplo, la pag. 2, línea 12 hasta la página 4, línea 34 y la página 19 líneas 14 a 17. Ver también Moyer et al., Cáncer Res, 57:4838-48 (1997); Pollack et al., J. Pharmacol., 291: 739-48 (1999). El TARCEVA® puede funcionar mediante la inhibición de fosforilación del EGFR y bajar su corriente P13/Akt y sus caminos de transducción de señal de cinasa MAP (proteína activada mitogen) que resultan en la detención del ciclo celular mediado por p27. Ver Hidalgo et al., Resumen 281 presentado en la Reunión Anual 37a de ASCO, San Francisco, CA, del 12 al 15 de Mayo del 2001. Otras moléculas pequeñas son también reportadas para inhibir el EGFR, varias de las cuales son específicas para el dominio de tirosina cinasa de un EGFR. Algunos ejemplos de dichos antagonistas del EGFR de molécula pequeña están descritos en WO 91/116051, WO 96/30347, WO 96/33980, WO 97/27199 (Zeneca Limited). WO 97/30034 (Zeneca Limited), WO 97/42187 (Zeneca Limited), WO 97/49688 (Pfizer Inc.), WO 98/33798 (Warner Lambert Company), WO 00/18761 (American Cyanamid Company), y WO 00/31048 (Warner Lambert Company). Ejemplos de antagonistas del EGFR de molécula pequeña incluyen C1-1033 (Pfizer), que es un inhibidor de quinozalin (N-[4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)-7-(3-morfolin-4-il-propoxi)-quinazolin-6-il]-acrilamida) de tirosinas cinasas, particularmente el EGFR está descrito en WO 00/31048 en la página 8, líneas 22-6; PK1166 (Novartis), el cual es un inhibidor de pirrolopirimidina del EGFR y está descrito en WO 97/27199 en las páginas 10-12; GW2016 (GlaxoSmithKIine), que es un inhibidor del EGFR y HER2; EKB569 (Wyeth), que está reportado para inhibir el crecimiento de células de tumor que sobreexpresan el EGFR o HER2 in vitro e in vivo; AG-1478 (Tryphostin), que es una molécula pequeña de quinazolina que inhibe la señalización de tanto el EGFR y erbB-2; AG-1478 (Sugen), que es un inhibidor bisubstrato que también inhibe proteína cinasa CK2; PD 153035 (Parke-Davis) que se reporta inhibe la actividad de cinasa del EG FR y crecimiento de tumor, induce apóptosis en célu las en cultivo, e intensifica la citotoxicidad de agentes quimioterapéuticos citotóxicos; SPM-924 (Schwarz Pharma), que es un inhibidor de tirosina cinasa señalado para tratamiento de cáncer de próstata ; CP-546,989 (OS I Pharmaceuticals) que se reporta inhibe angiogénesis para tratamiento de tumores sólidos; AD L-681 , que es u n in hibidor de cinasa del EGFR señalado para tratamiento de cáncer, PD 1 58780, que es piridopirimid ina que se reporta i nhibe el g rado de crecimiento de tumor de xenógrafos A4431 en ratones; C P-358,774, que es una quinazolina que se reporta inhibe autofosforilación en xenóg rafos H N5 en ratones; ZD1 839, que es una quinazolina q ue se reporta tiene actividad anti-tumor en modelos de xenógrafo de ratón incluyendo cánceres de vulva , NSCLC , próstata, ovario y colorectal ; CGP 59326A, q ue es una pirrolopirimidina que se reporta inhibe el crecimiento de xenógrafos EGF R positivos en ratones; PD 1 65557 (Pfizer); CGP5421 1 y CGP53353 (Novartis) , que son dianilnoftalimidas. Los inhibidores de tirosina cinasa del EGF R derivados naturalmente incluyen genisteina , herbimicina A, quercetina y erbstatina. Las moléculas pequeñas adicionales reportadas para inhibir el EG FR, y que están de este modo dentro del campo de la presente invención , son compuestos tricíclicos tales como los compuestos descritos en la Patente de los Estados U nidos No. 5,679,683; derivados de q uinazolina tales como los derivados descritos en la Patente de Estados Unidos No. 5,616,582; y compuestos indolo tales como los compuestos descritos en la Patente de los Estados Unidos No.5,196,446. Se aprecia que las moléculas pequeñas útiles a ser usadas en la invención son inhibidores de EGFR, pero no necesitan ser completamente específicas para EGFR. En una modalidad preferida, el antagonista del EGFR es un anticuerpo anti-EGFR que exhibe una o más de las siguientes propiedades: 1) El anticuerpo enlaza al dominio externo del EGFR e inhibe enlace de ligando. La inhibición puede ser determinada por ejemplo mediante una prueba de enlace directo utilizando receptor enlazado a membrana o purificado. En esta modalidad, los anticuerpos de la presente invención o fragmentos de los mismos, de preferencia enlazan EGFR al menos tan fuertemente como lo hacen los ligandos naturales el EGFR (EGF, TFG-a). 2) Los anticuerpos neutralizan el EGFR. El enlace de un ligando a un dominio extracelular externo del EGFR estimula la actividad de la tirosina cinasa y la fosforilación del receptor y/o la fosforilación de otras proteínas involucradas en los diferentes modos de señalización. La neutralización del EGFR incluye inhibición, disminución, inactivación y/o interrupción de una o más de las actividades normalmente asociadas con la transducción de señal. La neutralización puede estar determinada in vivo, ex vivo o in vitro utilizando por ejemplo tejidos , células cultivadas, o componentes celulares purificados. U na medida de la neutralización del EG FR es la inhibición de la actividad del receptor tirosina cinasa. La inhibición de la tirosina cinasa puede estar determinada utilizando métodos bien conocidos; por ejemplo mediante medir el n ivel de autofosforilación del receptor de la cinasa recombinante, y/o la fosforilación de substratos naturales o sintéticos. De esta manera , en el contexto de la presente invención las pruebas de fosforilación son útiles para determinar la neutralización de anticuerpos. La fosforilación pude ser detectada por ejemplo utilizando un anticuerpo específico para fosfotirosina en u na prueba de ELISA o en un western blot. Algu nas pruebas para la actividad de la tirosina cinasa son descritas en Panek et al . , J. Pharmacol. Exp. Thera. 283: 1433-44 ( 1 997) y Batley et al., Life Sci 62: 1 43-50 (1 998) . Los anticuerpos de la invención provocan una disminución en la fosforilación de la tirosina del EGFR de al menos 75% , de preferencia de al menos 85% y con mayor preferencia de al menos 90% en célu las que responden al ligando. Otra medida de la neutralización del EG FR es la in hibición de la fosforilación de substratos de corriente abajo del EG FR . Por consiguiente , el nivel de fosforilación del M EK y ERK puede ser medido. La disminución en la fosforilación es de al menos aproximadamente 40% y puede ser al menos de aproximadamente 60% o al menos de aproximadamente 80% .

En suma, los métodos para detección de expresión de proteína pueden ser utilizados para determinar la neutralización del EGFR, en donde las proteínas que son medidas están reguladas por la actividad de la tirosina cinasa del EGFR. Estos métodos incluyen inmunohistoquímica (IHC) para detección de la expresión de proteína, hibridación in situ fluorescente (FISH) para detección de amplificación de genes, pruebas de enlace de radioligando competitivo, técnicas de separación de matriz sólida, tales como Northern y Southern Blot, reacción de cadena de polimerasa transcriptasa reversa (RT-PCR) y ELISA. Ver, e.g; Grandis et al., Cáncer 78:1284-92 (1996); Shimizu et al., Japan J. Cáncer Res., 85:567-71 (1994); Sauter et al., Am J. Path., 148:1047-53 (1996); Collins, Glia 15:289-96 (1995); Radinsky et al., Clin. Cáncer Res. 1:19-31 (1995); Petrides et al., Cáncer Res 50:3934-39 (1990); Hoffmann et al., Anticancer Res 17:4419-26 (1997); Wikstrand et al., Cáncer Res. 55:3140-48 (1995). Las pruebas ex vivo también pueden ser utilizadas para determinar al neutraliziación del EGFR. Por ejemplo, la inhibición del receptor tirosina cinasa puede ser observado mediante pruebas mitogénicas utilizando líneas de células estimuladas con ell ligando del receptor en la presencia y ausencia de inhibidor. Un ejemplo de tal prueba mitogénica son células de prueba mitogénica de células (3T3 (clon A31-714)) de la Colección de Cutiv de Tip Americano (Manassas, VA)). Otro método involucra probar para inhibición de crecimiento de células de tumor que expresan EGFR transfectadas para expresar EG FR. La inhibición puede también ser observada utilizando modelos de tumor, por ejemplo, células de tumor humano inyectadas en un ratón . Los anticuerpos de la presente invención no están limitados a ningún mecanismo en particu lar de neutralización del EG FR . Los anticuerpos anti-EG FR de la presente invención pueden en lazar externamente al receptor de superficie de células del EG FR, bloquear el enlace del ligando y la transducción de señal subsigu iente mediada a través del receptor asociado con tirosina cinasa; y prevenir la fosforilación del EG FR y otras proteínas corriente abajo en la cascada de transducción de señal . 3) Los anticuerpos inferiores modulan el EG FR. La cantidad del EG FR presente en la superficie de una célula depende de la producción de proteína del receptor, la internalización y deg radación . La cantidad del EG FR presente en a superficie de una célula puede ser medida indirectamente, med iante detectar la internalización del receptor o una molécula enlazada al receptor. Por ejemplo, la internalización del receptor puede se med ida mediante contactar células que expresan el EGFR con un anticuerpo etiquetado. El anticuerpo enlazado a membrana es luego descubierto, recolectado y contado. El anticuerpo internalizado es determinado mediante lisar las células y detectar etiq uetas en los lisatos. Otra manera es medir directamente la cantidad del receptor presente en la célula siguiendo el tratamiento con un anticuerpo anti-EG FR u otra sustancia, por ejemplo, mediante análisis al azar de células activadas fluorescente de células teñidas para expresión de superficie de EGFR. Las células teñidas son incubadas a 37°C y la intensidad de la fluorescencia medida durante el tiempo. Como u n control , parte de la población teñida puede ser incubada a 4°C (condiciones bajo las cuales la internalización del receptor es detenida). Otra medida de modulación inferior es la reducción de la proteína total del receptor presente en u na célula , y reflejar deg radación de receptores internos. Por consig uiente, el tratamiento de células (particularmente células de cáncer) con anticuerpos de la invención resulta en una reducción en el EG FR total cel u lar. En una modalidad preferida, la reducción es de al menos 70% , con mayor preferencia de al menos 80% y aún con mayor preferencia de al menos 90% . Para el tratamiento de sujetos humanos, los anticuerpos de acuerdo con la invención son de preferencia humanos. Alternativamente , los anticuerpos pueden ser de primates no humanos u otros mam íferos, o ser anticuerpos h umanizados o quiméricos. Los fragmentos de anticuerpo de acuerdo con la invención pueden ser producidos mediante partir u n anticuerpo completo, o mediante expresar el ADN que codifica el fragmento. Los fragmentos de los anticuerpos pueden ser preparados mediante métodos descritos por Lamoy et al . , J. Immunol. Methods, 56: 253-243 (1 983) y por Parham , J. Immunol. 1 31 : 2895-2902 ( 1 983) . Tales fragmentos pueden contener uno o ambos fragmentos Fab o el fragmento F8ab ')2. Tales frag mentos pueden también contener anticuerpos de región variable de fragmento de cadena sencilla , i .e. scFv, diacuerpos, u otros fragmentos de anticuerpo. Los métodos para producir tales equivalentes fu ncionales están descritos en la Solicitud PCT WO 93/21 31 9, la Solicitud de Patente Europea No. EP 239400; la Solicitud PCT WO 89/09622 ; la Solicitud de Patente Europea EP 338745; y la Solicitud de Patente Europea EP 332424. Las células hospederas preferidas para transformación de vectores y expresión de anticuerpos de la presente invención son células de mamífero, e.j . , células COS-7, células de ovario de hámster chi no (CHO) , y líneas de célula de origen linfoide tales como linfoma, mieloma (e.j . NSO) , o células hibridoma. Otras hospederos eucaríóticos, tales como levadu ras, pueden ser alternativamente utilizadas . Las células hospederas transformadas y cultivadas mediante métodos conocidos en el arte en un medio l íquido que contienen fuentes asimilables de carbono (carbohidratos tales como glucosa o lactosa), nitrógeno (aminoácidos, péptidos, proteínas o sus productos de degradación tales como peptones, sales de amonio o similares) , y sales inorgánicas. El med io además contiene, por ejemplo, sustancias que promueven el crecimiento, tales como elementos traza , por ejemplo, hierro, zinc, manganeso y similares. Los anticuerpos anti-EG FR de alta afinidad de acuerdo con la presente invención pueden ser aislados a partir de una librería mostrada de fago construida a partir de genes humanos de región variable de cadena ligera y pesada . Por ejemplo, u n domin io variable de la invención puede ser obtenido a partir de u n linfocito de sangre periférica q ue contiene u n gen de región variable arreglado. Alternativamente, las porciones del dominio variable, tales como regiones CDR y FW, pueden ser obtenidas a partir de diferentes fuentes y recombinadas. Adicionalmente, las porciones de los dominios variables (e .j . , regiones FW) pueden ser secuencias de consenso sintéticas. Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos de la presente invención pueden ser obtenidos, por ejemplo, a partir de anticuerpos ocurridos naturalmente, o librerías expuestas de Fab o scFv. Está entendido que para hacer un anticuerpo de domino individual a partir de un anticuerpo que comprende un dominio VH y VL, pueden ser deseadas ciertas sustituciones de am inoácido fuera de los CDRs para intensificar en lace, expresión o solubilidad . Por ejemplo, puede ser deseado para modificar residuos de aminoácido q ue pudieron de otra manera ser quemados en la interface VH-VL. Además, los anticuerpos y fragmentos de anticuerpo de la invención pueden ser obtenidos mediante tecnolog ía hibridoma estándar (Harlow & Lañe, ed . , Anticuerpos: Un Manual de Laboratorio, Cold Spring Harbor, 21 1 -21 3 (1 998), que está incorporado aquí mediante referencia) utilizando ratones transgénicos (e.j . , ratones KM de Medarex, San José, Californ ia) que producen cadenas ligeras kappa y pesadas gamma de inmuno-globulina humana . En una modalidad preferida, una porción sustancial del anticuerpo humano que prod uce el genoma es insertado en el genoma del ratón , y es deficiente al azar en la producción de anticuerpos murino endógenos. Tales ratones pueden ser inmu nizados subcutáneamente (s .c.) con PDG RFa (usualmente en adyuvante de Freund completo) con estímulos segú n se necesite. Los métodos de inmu nización son bien conocidos en el arte. Los anticuerpos pueden ser utilizados de acuerdo con la invención incluyendo inmunoglobulinas completas, fragmentos que enlazan antígeno de inmunoglobulinas, así como también proteínas que enlazan antígeno que comprenden dominios de inm unglogulina que enlazan antígeno. Los fragmentos de ¡nmunoglobulina que enlazan antígeno incluyen , por ejemplo, Fab, Fab ', y F(ab ')2. Otros formatos de anticuerpo han sido desarrollados con especificidad de enlace retenida, pero tienen otras características que pueden ser deseables, incluyendo por ejemplo, la bioespecificidad , m u ltivalencia (más de dos sitios de enlace) tamaño compacto (e.j . dominios de enlace solos) Los anticuerpos de cadena sencilla carecen de algunos o todos los dominios constantes de los anticuerpos completos de los cuales están derivados. De este modo , ellos pueden superar algunos de los problemas asociados con la utilización de anticuerpos completos . Por ejemplo, los anticuerpos de cadena sencilla tienden a estar libres de ciertas interacciones no deseadas entre regiones constantes de cadena pesada y otras moléculas biológicas. Adicionalmente, los anticuerpos de cadena sencilla son considerablemente más pequeños que los anticuerpos completos y pueden tener mayor permeabilidad que los anticuerpos completos, permitiendo a los anticuerpos de cadena sencilla localizar y unirse más eficientemente a los sitios de enlace de antígeno objetivo . Además, el tamaño relativamente más pequeño de los anticuerpos de cadena sencilla hace a estos menos propensos de provocar una respuesta inmu ne no deseada en un receptor q ue en los anticuerpos completos. Los anticuerpos de cadena sencilla múltiple, cada cadena sencilla tiene un dominio VH y un dominio VL covalentemente unidos por u n primer enlazante péptido, pueden ser u nidos por al menos u no o más enlazantes péptido para formar anticuerpos de cadena sencilla, que pueden ser monoespecíficos o multiespecíficos. Cada anticuerpo de cadena sencilla multivalente incluye u n fragmento de cadena ligera variable y un fragmento de cadena pesada variable, y está enlazado por un enlazante péptido o al menos alguna otra cadena . El enlazante péptido está compuesto de al menos quince resid uos de aminoácido. El número máximo de resid uos es de aproximadamente cien . Dos anticuerpos de cadena sencilla pueden ser combinados para formar u n diacuerpo, también conocido como un d ímero bivalente. Los diacuerpos tienen dos cadenas y dos sitios de enlace , y pueden ser monoespecíficos o bispecíficos. Cada cadena de los diacuerpos incluye un dominio VH conectado al domin io VL. Los dominios son conectados con enlazantes que son suficientemente cortos para preven ir emparejamiento entre dominios de la misma cadena, dirigiendo de este modo el emparejamiento entre dominios complementarios en diferentes cadenas para recrear los dos sitios de enlace de antígeno. Estos anticuerpos de cadena sencilla pueden ser combinados para formar triacuerpos, también conocidos como trímeros trivalentes. Los triacuerpos son construidos con el término aminoácido de un dominio VL o VH fusionado di rectamente al término carboxilo de un dominio VL o VH, i .e. , sin ning una secuencia enlazante. El triacuerpo tiene tres cabezas Fv con los polipéptidos arreglados de una manera cabeza a tallo cíclica . Una conformación posible del triacuerpo es plana con los tres sitios de enlace localizados en un plano en un ángulo de 1 20 grados de uno y otro. Los triacuerpos pueden ser monoespecíficos , bioespecíficos o triespecíficos. De este modo, los anticuerpos de la invención y fragmentos de los mismos incluyen , pero no están limitados a, anticuerpos que ocurren natu ralmente, fragmentos bivalentes tales como (Fab ')2 , fragmentos monovalentes tales como Fab, triacuerpos de cadena sencilla , Fv (scFv) de cadena sencilla, anticuerpos de dominio sencillos, anticuerpos de cadena sencilla multivante. diacuerpos, triacuerpos, y similares q ue se enlazan específicamente en antígenos. De acuerdo con la presente invención , un antagonista del EGFR es administrado en una combinación con uno o más de los agentes anti-neoplásticos. Puede ser utilizado cualquier agente antineoplástico adecuado tal como un agente quimioterapéutico, radiación, o combinaciones de los mismos. El agente anti-neoplástico puede ser un agente alquilante o un anti-metabolito. Los ejemplos de agentes alquilante incluyen, pero no están limitados a, diplastina, ciclofosfamida, melfalan y dacarbazina. Ejemplos de anti-metabolitos incluyen, pero no están limitados a doxorubicina, dunorubicina, paclitaxel y gemcitabina. En una modalidad preferida, el agente anti-neoplástico es un agente quimioterapéutico. Los agentes quimioterapéuticos preferidos incluyen amifostina (etiol), cisplatina, decarbazina (DTIC), dactinomicina, meclorotmina (mostaza de nitrógeno), estreptozocina, ciclofosfamida, carmustina (BCNU), lomustina (CCNU), doxirubicina (adriamicina), doxorubicina lipo (doxil), gemcitabina (gemzar), daunorubicina, daunorubicina lipo (daunoxoma), procarbizina, mitomicina, citarabina, etoposida,, tetotrexato, 5-fluoroacil, vinblastina, vincristina, bleomicina, paclitaxel (taxol), docetaxel (taxotero), eldesleukin, asparaginasa, busulfan, carboplatin, cladribina, camtotecina, CPT-11, 10-hidroxi-7-etil-camptotecin (SN38), dacarbazina, fluoxoridina, fludarabina, hiddroxiurea, ifosfamida, idarubicin, mesna, interferón alfa, interferón beta, irinotecan, mitoxantrona, topotecan, leuprolido, megestrol, melfalan, mercaptopurina, plicamicina, mitotano, pegaspargaso, pentostatina, pipobroman, plicamicina, estreptozocin, tamoxifen, teniposida, testolactona, tioguanina, tiotepa, mostaza de uracilo, vinorelbina, clorambucil y combinaciones de los mismos. En una modalidad más preferida , el agente quimioterapéutico es irinotecan . U n agente anti-neoplástico, que incluye un agente quimioterapéutico y/o u n anti-metabolito, es administrado en una dosis y en un horario de acuerdo con las direcciones del empaq ue y/o la respuesta clínica del paciente. Tales dosis son aparentes para alguien calificado en el arte y no requieren experimentación . Por ejemplo, el ironotecan es de preferencia administrado en un rango de dosis recomendada de desde aproximadamente 50 a aproximadamente 350 mg/m2, si bien , la dosis puede ser más alta o más baja , depend iendo de la respuesta clín ica del paciente . Otros agentes tienen rangos de dosificación de desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 1 ,000 mg/m2 por administración y/o régimen de tratamiento. El tratamiento de radiación es administrado basado en los protocolos de tratamiento clínicos apropiados y/o la experiencia clínica de alguien calificado en el arte. En una terapia de combinación , el antagonista del EG FR es administrado antes, durante o después de que la terapia inicie con otro agente, así como también cualqu ier combinación de la misma, i .e. , antes y du rante, antes y después, du rante y después, o antes, durante y después de de comenzar la terapia del agente anti-neoplastico. Por ejemplo, u n anticuerpo EG FR puede ser administrado entre 1 y 30 d ías, de preferencia 3 y 20 d ías, con mayor preferencia entre 5 y 1 2 d ías antes de comenzar la terapia de radiación . En una modalidad preferida de la invención la quimioterapia es administrada concu rrentemente con o, con mayor preferencia, subsiguiente con la terapia de anticuerpo. En la presente invención cualq uier método o ruta adecuada puede ser utilizada para administrar antagonistas de la i nvención , y opcionalmente para co-administrar agentes anti-neoplásticos y/o antagonistas de la invención , y antagonistas de otros receptores. Los reg ímenes de agente anti-neoplástico utilizados de acuerdo con la invención incluyen cualquier régimen que se considera ser adecuadamente óptimo para el tratamiento de tumores de pacientes. Los diferentes tumores pueden req uerir utilizar anticuerpos antitumor específicos y agentes anti-neoplásticos específicos que serán determinados en un paciente para bases del paciente. Las rutas de administración incluyen por ejemplo admin istración , oral, intravenosa, intraperitoneal , subcutánea o intramuscular. La dosis del antagonista administrado depende de n umerosos factores incluyendo por ejemplo, el tipo de antagonistas , el tipo y severidad del tumor a ser tratado y la ruta de administración de los antagonistas. Debe hacerse énfasis de que la presente invención no está limitada a ning ún método particular o ruta de administración. Alguna persona calificada en el arte puede entender que las dosificaciones y la frecuencia del tratamiento dependerán de la tolerancia individual del paciente y de las propiedades farmacológicas y farmacocinéticas de bloqueo o inh ibición del agente utilizado. Idealmente, se busca alcanzar farmacocinéticas saturables para el agente utilizado. Una dosis de carga para u n anticuerpo anti- EGFR puede tener un rango, por ejemplo, de aproximadamente 10 a 1000 mg/m2, de preferencia de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 mg/m2. Esto puede ser seguido por dosificaciones diarias o semanales en un rango, de por ejemplo de desde aproximadamente 200 a aproximadamente 400 mg/m2. El paciente es monitoreado para efectos colaterales y el tratamiento es detenido cuando dichos efectos colaterales son severos. Alguien calificado en el arte puede también conocer como monitorear el progreso del tratamiento con la finalidad de determinar la dosis efectiva. Por ejemplo, una manera es MRI, CT monitoreo u otros escaneos del cerebro.

Ejemplos Ejemplo 1. El siguiente ejemplo describe un método para tratar tumores sólidos refractarios mediante la administración de una combinación de irinotecan y un anticuerpo EGFR. De Agosto del 2005 a Marzo del 2006, fue administrado ironotecan y diferentes niveles de dosis de cetuximab a 20 pacientes pediátricos con tumores sólidos refractarios y esperanza de vida de al menos 8 semanas. Los pacientes fueron divididos en dos grupos (edades 1-12= Arm A, y 13-18= Arm B) con los siguientes tipos de tumores: glioma del tallo cerebral/ astrocitoma (10), hepatoblastoma, osteosarcoma (1), ependimoma (1), neuroblastoma (1), rabdomiosarcoma (1) y otros (5). El irinotecan fue administrado a una dosis de 20 mg/m2/día como una infusión de 60 minutos por 5 días por 2 semanas, cada 21 días. Los horarios de dosis y el número de sujetos con dosis tóxicas limitantes (DLTs) son proporcionados enla Tabla 1. TABLA 1 Debido a los DLTs experimentados por dos pacientes externos de los seis pacientes en Arm A, nivel de dosis 2, que se estimó estaban relacionados con el irinotecan, éste fue reducido a 16 mg/m2. Un sujeto en ARm B experimentó una reacción de infusión de Grado 3 y el tratamiento fue descontinuado. Otro observó toxicidades que incluyeron comezón de grado 1. Un sujeto con un glioma de grado alto negativo de EGFR (grupo A nivel de dosis 1) alcanzó una respuesta parcial y está actualmente en el ciclo13. Un sujeto con Neuroblastoma (grupo A nivel de dosis 1) ha experimentado una respuesta menor y está actualmente recibiendo el ciclo 9. Siete sujetos tuvieron una mejor respuesta de padecimiento estable por un promedio de 3.4 meses (rango de 2-7+meses).

En conclusión , la combinación del cetuximab y el irinotecan muestra prometer actividad anti-cáncer en tumores sólidos pediátricos. La descripción precedente y el ejemplo han sido expuestos ún icamente para ilustrar la invención y no intentan ser limitantes. Cada uno de los aspectos y modalidades descritas de la presente invención pueden ser consideradas individualmente o en combinación con otros aspectos, la presente invención puede mostrar solo ciertas figu ras, tales características pueden ser incorporadas a la invención . En suma, a menos q ue se especifiq ue algo diferente, ning uno de los pasos de los métodos de la presente invención está limitado a cualq uier ningú n orden particular de realización . Las modificaciones de las modalidades expuestas incorporan el espíritu y la sustancia de la invención para quienes están calificados en el arte y tales modificaciones están dentro del alcance de la presente invención . Además, todas las referencias aquí citadas están incorporadas mediante referencia en su totalidad .

Claims (14)

REIVI N DICACIONES

1 . un método para inhibir el crecimiento de un tumor en un paciente pediátrico que comprende tratar al paciente pediátrico con una cantidad efectiva de un antagonista del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y u n agente q uimioterapéutico.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde el tumor es u n tumor refractario.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde el tumor es u n glioma.

4. El método de acuerdo con la reivind icación 1 en donde el tumor es u n neuroblastoma.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde el antagonista es u n anticuerpo o fragmento del mismo.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo enlaza al dominio extracelular del EG FR.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo inhibe el enlace de un ligando EG FR y un EG FR y neutraliza la activación del mismo.

8. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el anticuerpo es cetuximab.

9. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo es monoclonal

10. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo es quimérico.

11. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo es humanizado.

12. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el anticuerpo o fragmento del mismo es humano.

13. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente quimioterapéutico es irinotecan.

14. El método de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además administrar radiación al paciente pediátrico. RESUM EN Los métodos de terapia de combinación para tratar tumores pediátricos mediante la administración de un antagonista del EG FR y un agente q u imioterapéutico. Los métodos incluyen tratar tumores pediátricos refractarios.