MX2008015723A - Dipeptidos de pseudo-prolina. - Google Patents

Abstract

Se da a conocer un proceso de tres pasos para la manufactura de dipéptidos de pseudo-prolina de la fórmula (I) en donde R1 es una cadena lateral de un aminoácido alfa, R2 es un grupo protector de amino y R3 y R4 se seleccionan independientemente de hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R5 es hidrógeno o metilo partiendo de un derivado de aminoácido de la fórmula (II) en donde R1 y R2 son como se describiera anteriormente. Los dipéptidos de pseudo-prolina se pueden utilizar como grupos protectores reversibles para Ser, Thr y Cys y de esta manera son herramientas versátiles en la química de péptidos.

Description

DIPEPTIDOS DE PSEUDO-PROLINA DESCRIPCION DE LA INVENCION La invención se refiere a un proceso novedoso para la manufactura de un compuesto de la fórmula Los dipéptidos de pseudo-prolina de la fórmula I se pueden utilizar como grupos protectores reversibles para Ser, Thr y Cys y han demostrado ser herramientas versátiles para superar algunos problemas intrínsecos en el campo de la química de péptidos [JACS 1996, 118, 9218-9227] . La presencia de v Pro dentro de una secuencia de péptidos da por resultado la alteración de estructuras en hoja-ß consideradas como una fuente de agregación intermolecular. La solvatación incrementada y cinética de acoplamiento resultante en el ensamble de péptidos tal como la síntesis de péptidos en fase sólida Fmoc facilita el alargamiento de cadenas especialmente para péptidos que contienen "secuencias difíciles". El objetivo de la presente invención es proporcionar una síntesis corta y técnicamente factible de dipéptidos de pseudo-prolina de la fórmula I la cual permite obtener el producto con un alto rendimiento y sin ningún paso REF: 198744 de purificación cromatográfica . El objetivo ha sido alcanzado con el proceso resumido a continuación. El proceso para la manufactura de un compuesto de la fórmula en donde R1 es una cadena lateral de un aminoácido alfa, R2 es un grupo protector amino y R3 y R4 se seleccionan independientemente de hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R5 es hidrógeno o metilo, comprende a) convertir un derivado de aminoácido de la fórmula en donde R1 y R2 son como se describiera anteriormente, con serina o treonina y cristalizar el dipéptido resultante como una sal de amonio de la fórmula en donde R1, R2 y R5 son como se describiera anteriormente y R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que R6, R7 y R no son todos hidrógeno, en un paso subsecuente b) liberar el ácido libre de la sal de amonio de la fórmula III en presencia de un ácido y retirar la amina por medio de la extracción y c) efectuar el cierre de anillos con un compuesto seleccionado de en donde R3 y R4 se seleccionan independientemente de hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con la condición de que R3 y R4 no son ambos hidrógeno, R9a y R9b son independientemente alquilo de 1 a 4 átomo de carbono, R10 tiene el significado de alquilo de 1 a 4 átomo de carbono, alcanoilo de 1 a 4 átomo de carbono o arilo y R11 es hidrógeno o alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, en presencia de un catalizador ácido. Se entiende además que la serina o treonina se puede utilizar ya sea en su configuración L o en su configuración D, como racemato o en varias mezclas de sus isómeros. Preferiblemente, se utiliza la configuración L.

El término "alquilo de 1 a 4 átoirtos de carbono" se refiere a un radical de hidrocarburo alifático, saturado, monovalente, de cadena recta o ramificada de uno a cuatro átomos de carbono. Este término es ejemplificado adicionalmente por radicales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, s-butilo y t-butilo. El término "cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono" se refiere a un grupo cicloalquilo que contiene de 3 a 7 átomos de carbono, tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo . El término "arilo" se refiere al grupo fenilo o naftilo, preferiblemente el grupo fenilo, el cual puede ser opcionalmente mono-sustituido o sustituido múltiples veces por halógeno, hidroxi, CN, CF3, N02, NH2, N (H, alquilo) , N (alquilo) 2, carboxi, aminocarbonilo, alquilo, alcoxi, arilo y/o ariloxi. El grupo arilo preferido es fenilo. El término "alcanoilo" se refiere a un grupo alquil-carbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como a acetilo, n-propanoilo, isopropanoilo, n-butanoilo, s-butanoilo y t-butanoilo, preferiblemente acetilo. El término "cadena lateral de un aminoácido" utilizado para R1 se refiere particularmente a cadenas laterales de los aminoácidos alfa seleccionados de valina, leucina, isoleucina, metionina, fenilalanina , asparagina, glutamina, ácido glutámico, histidina, lisina, arginina, ácido aspártico, alanina, serina, treonina, tirosina, triptófano, cisteína, glicina, ácido aminoisobutirico y prolina . Se entiende que en las cadenas laterales de aminoácidos las cuales llevan un grupo hidroxi, el grupo hidroxi es protegido opcionalmente por un grupo protector hidroxi definido posteriormente. En las cadenas laterales que llevan grupos amino adicionales, el grupo amino es protegido opcionalmente por un grupo protector amino definido posteriormente. R1 representa preferiblemente una cadena lateral de valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, asparagina, glutamina, ácido glutámico, lisina, ácido aspártico, alanina, serina, treonina, tirosina y triptófano. Serina y treonina son más preferidas. El término "grupo protector amino" se refiere a cualquier sustituyente utilizado convencionalmente para obstaculizar la reactividad del grupo amino. Los grupos protectores amino adecuados se describen en Green T., "Protective Groups in Organic Synthesis", Capitulo 7, John Wiley and Sons, Inc., 1991, 309-385. Los grupos protectores amino adecuados son Fmoc, Cbz, Moz, Boc, Troc, Teoc o Voc. El grupo protector amino preferido es Fmoc. El término "grupo protector hidroxi" se refiere a cualquier sustituyente utilizado convencionalmente para obstaculizar la reactividad del grupo hidroxi. Los grupos protectores hidroxi adecuados se describen en Green T., "Protective Groups in Organic Synthesis", Capitulo 1, John Wiley and Sons, Inc., 1991, 10-142. Los grupos protectores hidroxi adecuados son t-butilo, bencilo, TBDMS o TBDPS . El grupo protector hidroxi preferido es t-butilo. El significado de las abreviaturas utilizadas en la descripción y las reivindicaciones es como se resume en la siguiente tabla: Fmoc 9-Fluorenilmetoxicarbonil- Boc t-Butoxicarbonil- Cbz Carbobenciloxi Z Benciloxicarbonilo tBU t-Butilo Moz p-Metoxibenciloxicarbonilo Troc 2,2, 2-Tricloroetoxicarbonilo Teoc 2- (Trimetilsilil ) etoxicarbonilo Voc Viniloxicarbonilo TBDMS Eter t-butildimetilsililico TBDPS Eter t-butildifenilsililico HBTU N, N, N' , ' -tetrametil-uronio-hexafluoro- fosfato de O-benzotriazol HOBt 1-Hidroxibenzotriazol HOSu N-Hidroxisuccinimida EDC ( 3-Dimetilamino-propil ) -etil-carbodiimida (clorhidrato) DIC N, N' -Diisopropilcarbodiimida DCC N, ' -Diciclohexilcarbodiimida Paso a) En el primer paso a) , un derivado de aminoácido la fórmula en donde R1 y R2 son como se describiera anteriormente se hace reaccionar con serina o treonina y el dipéptido resultante se cristaliza como una sal de amonio de la fórmula en donde R1, R2, R5, R6, R7 y R8 son como se describiera anteriormente. Los derivados de aminoácidos de la fórmula II son como regla general compuestos comercialmente disponibles. Los derivados de aminoácidos adecuados de la fórmula II de acuerdo con las preferencias proporcionadas para R1 y R2 son Fmoc-L-Ser (tBu) -OH o Fmoc-L-Thr ( tBu) -OH . Antes del acoplamiento con serina o treonina, el derivado de aminoácido de la fórmula II se activa de manera conveniente con un reactivo de activación. Los reactivos de activación adecuados se pueden seleccionar de DIC/HOSu, DIC/Pentafluorofenol , DIC/HOBt, DCC/HOSu, DCC/Pentafluorofenol, DCC/HOBt, EDC (xHCl ) /HOSu o HBTU/HOBt. Un agente de acoplamiento preferido es DIC/HOSu. El DIC se utiliza usualmente en una cantidad de 1.0 a 1.4 equivalentes y el HOSu se utiliza usualmente en una cantidad de 1.0 a 1.8 equivalentes con relación a un equivalente del derivado de aminoácido de la fórmula I. Como regla general, la reacción de activación se realiza en presencia de un solvente orgánico adecuado, tal como acetato de etilo, N, N-dimetilformamida, acetona o tetrahidrofurano, preferiblemente acetato de etilo a una temperatura de -5°C a 25°C. El acoplamiento con serina o treonina, preferiblemente con L-serina o L-treonina, se puede realizar entonces a una temperatura de 10°C a 30°C en presencia de un solvente orgánico, tal como en acetato de etilo, acetona o tetrahidrofurano o mezclas de los mismos con agua. El solvente preferido es una mezcla de acetona y agua. La relación de serina o treonina con respecto al derivado de aminoácido de la fórmula II se selecciona usualmente en el intervalo de 1.5 a 3.0 a 1, preferiblemente de 2.0 a 1. El pH de la mezcla de reacción se ajusta de manera conveniente a un valor de 7.5 a 9.0. La formación de la sal de amonio de la fórmula III sucede al agregar al dipéptido formado previamente una amina de la fórmula R\ N V R7/ V en donde R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que R6, R7 y R8 no son todos hidrógeno. Las aminas adecuadas de la fórmula V son aquellas en donde R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente de hidrógeno, etilo o ciclohexilo, con la condición de que R6, R7 y R8 no son todos hidrógeno. Ciclohexilamina, diciclohexilamina y trietilamina son las aminas preferidas; diciclohexilamina es la amina más preferida de la fórmula V utilizada. La cristalización se efectúa comúnmente en solventes orgánicos adecuados tal como en alcoholes inferiores como metanol, etanol, n-propanol o i-propanol o en acetato de etilo o tetrahidrofurano . El solvente preferido es etanol . Las sales de amonio de la fórmula III no han sido descritas previamente y de esta manera son una modalidad adicional de la presente invención. Las sales de amonio preferidas son las sales de diciclohexilamonio de la fórmula III en donde R1 y R2 son como se describiera anteriormente, R5 es hidrógeno o metilo, R6 es hidrógeno y R7 y R8 son ciclohexilo. Los compuestos de la fórmula III son más preferidos, en donde: a) R1 representa la cadena lateral de L-serina con protección de O-tBu, R2 es Fmoc, R5 es H, R6 es hidrógeno y R7 y R8 son ciclohexilo. b) R1 representa la cadena lateral de L-serina con protección de O-tBu, R2 es Fmoc, R5 es metilo, R6 es hidrógeno y R7 y R8 son ciclohexilo. c) R1 representa la cadena lateral de L-treonina con protección de 0-tBu, R2 es Fmoc, R5 es H, R6 es hidrógeno y R7 y R8 son ciclohexilo. d) R1 representa la cadena lateral de L-treonina con protección de O-tBu, R2 es Fmoc, R5 es metilo, R6 es hidrógeno y R7 y R8 son ciclohexilo. Paso b) En el paso subsecuente b) , el ácido libre del dipéptido se libera en presencia de un ácido y la amina protonada de la fórmula V se retira por medio de la extracción. Particularmente, el ácido libre de la sal de amonio de la fórmula III se libera en presencia de un ácido mineral, tomado en un solvente orgánico mientras que la amina se retira por medio de la extracción con agua y/o una solución acuosa de una sal mineral.

Los ácidos minerales adecuados son ácido sulfúrico acuoso o HC1 acuoso, preferiblemente ácido sulfúrico acuoso. El solvente orgánico adecuado para tomar el ácido libre se puede seleccionar de acetato de etilo, éter t-butil-metílico o cloruro de metileno. Se ha descubierto que el éter t-butil-metílico es el solvente preferido. Como regla general, la fase orgánica que contiene el ácido libre se lava varias veces con agua y/o una solución acuosa de una sal mineral, como cloruro de sodio a fin de retirar completamente la amina. Paso c) En el paso c) , el cierre de anillos del ácido libre del dipéptido obtenido en el paso b) se efectúa con un compuesto seleccionado de en donde R3 y R4 se seleccionan independientemente de hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con la condición de que R3 y R4 no son ambos hidrógeno, R9a y R9b son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R10 tiene el significado de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcanoilo de 1 a 4 átomos de carbono o arilo y R11 es hidrógeno o alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, en presencia de un catalizador ácido. Preferiblemente, el cierre de anillos se efectúa con compuestos de la fórmula IVa y IVc, más preferiblemente los compuestos se seleccionan de 2 , 2-dimetoxipropano, 2-metoxipropeno o 2-acetoxipropeno, con lo cual 2,2-dimetoxipropano es el compuesto más preferido. Idealmente, los compuestos de la fórmula IV se utilizan en una cantidad de 6.0 a 16.0 equivalentes, preferiblemente de 7.0 a 10.0 equivalentes con relación al dipéptido obtenido en el paso b) . Los catalizadores ácidos adecuados se seleccionan de ácido metano-sulfónico, ácido (+) canfor-10-sulfónico, ácido p-toluensulfónico o p-toluensulfonato de piridinio, mientras que se prefiere el ácido metano-sulfónico . El catalizador ácido se aplica usualmente en una cantidad de 0.05 a 0.30 equivalentes, preferiblemente de 0.10 a 0.20 equivalentes con relación al dipéptido obtenido en el paso b) . El cierre de anillos se efectúa en presencia de un solvente orgánico, tal como en tetrahidrofurano, cloruro de metileno o tolueno, preferiblemente en tetrahidrofurano a temperatura de reflujo. El aislamiento y desarrollo del producto objetivo se puede realizar al utilizar métodos los cuales son conocidos para la persona experta en el campo. Los siguientes ejemplos ilustran la invención sin limitarla.

Ej emplos Ejemplo 1 Un reactor de vidrio de doble pared con capacidad para 1000 mL equipado con un agitador mecánico, termómetro, Pt-100, condensador de reflujo, embudo de goteo y entrada de nitrógeno se cargó con 25 g (64.9 mmol) de Fmoc-L-Ser ( tBu) -OH (1), 9.66 g (83.1 mmol) de N-hidroxisuccinimida y 180 mL de acetato de etilo. La suspensión resultante se enfrió a 0°C. Una solución de 10.49 g (83.1 mmol) de diisopropil-carbodiimida en 20 mL de acetato de etilo se agregó en 15 minutos. La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 2 horas y luego durante otra hora a temperatura ambiente y se tomaron muestras. El solvente se retiró completamente bajo presión reducida (aproximadamente 220 mbares) a una temperatura de pared de máximo 50°C. El residuo se trató con 250 mL de acetona a una temperatura interna de 35°C a 40°C, se enfrió a 20°C y se trató con 13.5 mL de agua. El pH se ajustó con 1.0 mL de HC1 l M a pH 2 - 3 y la mezcla resultante se agitó durante 12 horas a 20°C y se tomaron muestras. La suspensión entonces se enfrió de -5°C a 0°C y se agitó durante 1 hora a esta temperatura. El producto precipitado se filtró y el reactor y el filtro se enjuagaron con 50 mL de acetona fría (0°C) . El producto filtrado claro e incoloro se agregó a 20°C en 60 minutos a una solución de 13.57 g (127.8 mmol) de L-serina y de 13.63 g (257 mmol) de carbonato de sodio en 122.5 mi de agua. La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a 20°C y se tomaron muestras. El pH se ajustó con 28 g de HC1 (37%) a pH 2 - 3 y el solvente orgánico se retiró bajo presión reducida (< 250 mbares) a una temperatura de pared de máximo 50°C. La suspensión resultante se trató de 35°C a 40°C con 125 mL de acetato de etilo y la solución bifásica, clara, resultante se enfrió a 20°C. Las fases se separaron y la fase orgánica se extrajo dos veces con en total 250 mL de acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron tres veces con en total 225 mL de NaCl acuoso (10% en p/p) . La solución orgánica resultante se concentró y el solvente se retiró casi completamente bajo presión reducida a una temperatura de pared de máximo 50°C. El residuo se disolvió en 250 mL de etanol donde después una parte del solvente (75 mL) se retiró nuevamente bajo presión reducida (aproximadamente 170 mbares) a una temperatura de pared de máximo 50°C. La solución resultante se trató con 462.5 mL de etanol y se enfrió a 20°C. Se agregó aproximadamente 20% (aproximadamente 29.5 mL) de una solución de 11.83 g (63.9 mmol) de diciclohexilamina en 118 mL de etanol. La mezcla se sembró después de lo cual el producto comenzó a precipitarse. La suspensión se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y subsecuentemente, el resto de la solución de diciclohexilamina se agregó lentamente en por lo menos 2 horas. El embudo de goteo se enjuagó con 25 mL de etanol. La temperatura interna se disminuyó a 0°C en 4 horas donde después la suspensión se agitó durante toda la noche a esta temperatura. El producto precipitado se filtró con succión, la torta de filtro se lavó con 117.5 mL de etanol frío (0°C) y se secó bajo vacio (50°C, 20 mbares) para proporcionar 35.7 g (rendimiento del 82% partiendo del ácido (S) -3-terc-butoxi-2- (9H-f luoren-9-ilmetoxicarbonil-amino) -propiónico, pureza del 96.8% (p/p) basada en HPLC) de la sal de diciclohexil-amonio del ácido (S,S) -2- [3- terc-butoxi-2- (9H-f luoren-9-ilmetoxicarbonilamino) -propionil-amino] -3-hidroxi -propiónico (3) como un sólido incoloro. El análisis de HPLC se realizó utilizando un estándar externo de sal de diciclohexil-amonio del ácido (S,S) -2- [3- erc-butoxi-2- ( 9H-f luoren-9-ilmetoxicarbonil-amino) -propionil-amino] -3-hidroxi-propiónico (3) . Condiciones para HPLC: Columna XBridgeMR C18 (Waters) , 4.6 x 150 mm, 3.5 µp?; detección ultravioleta 206 nm; soluciones para gradiente : agua (A) , amortiguador de KH2P04 20 m , pH 2.5 (B) , acetonitrilo (C) ; flujo 1.0 mL/minuto; 20°C. Gradiente : Tfminuto] A[%] B[%] C[%] 0 45 15 40 2 45 15 40 14 5 15 80 25 5 15 80 Tiempos de Retención: Sal de diciclohexil-amonio del ácido (S,S)-2-[3-terc-butoxi-2- ( 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino) -propionil-amino] -3-hidroxi-propiónico (3) 8.4 minutos. Fmoc-L-Ser (tBu) -OH (1) 11.6 minutos Este método de HPLC da por resultado un valor para el ensayo del ácido libre de (3) . A partir de este valor, el ensayo de la sal de diciclohexilamonio correspondiente se calcula, asumiendo una relación estequiométrica de 1:1 de ácido libre y diciclohexil-amonio. Un análisis de cromatografía de gases (GC, por sus siglas en inglés) utilizando un estándar interno de dodecano se utiliza para medir el contenido de diciclohexil-amina . Condiciones para la GC : Sílice fusionada a la columna, polidimetilsiloxano al 100%, 1 µ?t?, L = 15 m, ID=0.25 mm; gas portador hidrógeno, presión: 53 kPa,0.54 kg 1 cm2 velocidad lin. : 73 cm/s, relación de división: 1:100. Programa de temperatura: Velocidad de Temperatura Duración del paso calentamiento final [°C] isotérmico a la temperatura [°C/minuto] final [minuto] 0.0 40 1 50 240 5 0.0 320 10 Tiempos de Retención: Dodecano 4.10 minutos Diciclohexilamina 4.90 minutos Ejemplo 2 Un reactor de vidrio de doble pared con capacidad para 500 mL equipado con un agitador mecánico, termómetro Pt-100, condensador de reflujo, embudo de goteo con filtro de algodón y entrada de nitrógeno se cargó con 25.0 g (37.0 mmol) de sal de diciclohexilamonio del ácido ( S, S) -2- [ 3- tercbutoxi-2- ( 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino) propionil-amino] -3-hidroxi-propiónico (3), 100 mL de éter terc-butilmetílico y una solución de 4.70 g de ácido sulfúrico (96%) en 44.3 mL de agua. La mezcla se agitó durante 90 minutos a temperatura ambiente. La fase acuosa se separó y la fase orgánica se lavó dos veces con un total de 76 mi de cloruro de sodio acuoso (0.5%-p/p) y nuevamente con 38 mL de agua. El solvente orgánico se retiró completamente bajo presión reducida (500 - 100 mbares) a una temperatura de pared de 50°C. El residuo espumoso se disolvió en 100 mL de tetrahidrofurano y el solvente se retiró completamente de nuevo bajo presión reducida (500 - 100 mbares) y a una temperatura de pared de 50°C. El residuo se disolvió en 450 mi de tetrahidrofurano y la solución clara resultante se trató con 35.4 g (333 mmol) de 2 , 2-dimetoxi-propano y 0.65 g (6.7 mmol) de ácido metanosulfónico . La mezcla se calentó bajo reflujo a una temperatura de pared de 85°C mientras que se conducía nuevamente el producto destilado sobre 73 g de tamiz molecular (0.4 nm) . Después de 16 horas, la solución ligeramente amarillenta se enfrió a 20°C y se tomaron muestras y la mezcla se trató con 0.828 g (8.14 mmol) de trietilamina y se agitó durante 10 minutos. El solvente se retiró completamente bajo presión reducida (350 - 100 mbares) y a una temperatura de pared de 50°C. El residuo se trató con 100 mL de éter terc-butilmetílico y se concentró completamente de nuevo bajo presión reducida (350 - 100 mbares) y a una temperatura de pared de 50°C. El residuo se disolvió en 175 mL de éter terc-butilmetílico y se enfrió de 20°C a 25°C. La solución se trató con 87.5 mL de agua y se agitó durante 10 minutos. Las fases se separaron y la fase orgánica se concentró completamente bajo presión reducida (350 - 100 mbares) y a una temperatura de pared de 50°C. El residuo espumoso se disolvió en 100 mL de éter terc-butilmetílico y se concentró completamente bajo presión reducida (350 - 100 mbares) y a una temperatura de pared de 50°C. Este paso se repitió dos veces con un total de 200 mL de éter terc-butilmetílico . El residuo se disolvió en 45.2 mL de éter terc-butilmetílico de 20°C a 25°C y se trató con 22.6 mL de isopropanol. A esta temperatura, la solución se trató con 175 mL de pentano, se sembró, luego se mantuvo la agitación durante por lo menos 15 minutos y de nuevo se trató lentamente con 200 mL de pentano en 1 hora. La solución resultante se agitó durante 4 a 16 horas y luego se enfrió a 0°C en 1 - 2 horas y se agitó nuevamente durante otras 2 horas a esta temperatura. El producto precipitado se filtró con succión, la torta de filtro se lavó en dos porciones con un total de 60 mi de pentano frió (0°C) y se secó bajo vacio (50°C, 20 mbares) para proporcionar 14.3 g (rendimiento del 75% partiendo de la sal de diciclohexil-amonio del ácido (S,S) -2- [3-terc-butoxi-2- (9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonil-amino) -propionilamino] -3-hidroxi-propiónico, pureza de 98.7% (p/p) basada en HPLC) del ácido {S,S) -3- [3-terc-butoxi-2- (9H-fluoren-9-il-metoxicarbonilamino) -propionil] -2, 2-dimetil-oxazolidin-4-carboxilico (4) como un sólido incoloro. El análisis de HPLC se realizó utilizando un estándar externo de ácido (S,S) -3- [3-terc-butoxi-2- (9H-fluoren-9-il-metoxicarbonilamino) -propionil] -2, 2-dimetil- oxazolidin-4-carboxilico puro (4). Condiciones para HPLC: Columna XBridge^ C18 (Waters) , 4.6 x 150 mm, 3.5 µt?; detección ultravioleta 206 nm; soluciones para el gradiente: agua (A), amortiguador de KH2P04 20 mM, pH 2.5 (B) , acetonitrilo (C) ; flujo 1.0 mL/minuto; 20°C. Gradiente: T[m¡nuto] A[%] B[%] C[%] 0 27 15 58 1 27 15 58 6 20 15 65 10 5 15 80 20 5 15 80 20.1 70 15 15 25 70 15 15 Tiempos de Retención: Acido {S,S) -3- [3-terc-butoxi-2- (9H-fluoren-9-il-metoxicarbonilamino ) -propionil] -2, 2-dimetil-oxazolidin-4-carboxilico (4) 7.3 minutos Sal de diciclohexilamonio del ácido (S,S)-2-[3-terc-butoxi-2- ( 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino ) -propionil-amino] -3-hidroxi-propiónico (3) 3.0 minutos Fmoc-L-Ser (tBu) -OH (1) 5.6 minutos Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (18)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un proceso para la manufactura de un compuesto de la fórmula en donde R1 es una cadena lateral de un aminoácido alfa, R2 es un grupo protector amino y R3 y R4 se seleccionan independientemente de hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R5 es hidrógeno o metilo, caracterizado porque comprende a) convertir un derivado de aminoácido de la fórmula en donde R1 y R2 son como se describiera anteriormente, con serina o treonina y cristalizar el dipéptido resultante como una sal de amonio de la fórmula en donde R1, R2 y R5 son como se describiera anteriormente y R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que R6, R7 y R8 no son todos hidrógeno, en un paso subsecuente b) liberar el ácido libre de la sal de amonio de la fórmula III en presencia de un ácido y retirar la amina por medio de la extracción y c) efectuar el cierre de anillos con un compuesto seleccionado de en donde R3 y R4 se seleccionan independientemente de hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con la condición de que R3 y R4 no son ambos hidrógeno, R9a y R9b son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R10 tiene el significado de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcanoilo de 1 a 4 átomos de carbono o arilo y R11 es hidrógeno o alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, en presencia de un catalizador ácido.
2. 2. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es una cadena lateral seleccionada de valina, leucina, isoleucina, metionina, fenilalanina , asparagina, glutamina, ácido glutámico, histidina, lisina, arginina, ácido aspártico, alanina, serina, treonina, tirosina, triptófano, cisteina, glicina, ácido aminoisobutírico y prolina.
3. 3. El proceso de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque R2 se selecciona de Fmoc, Cbz, Moz, Boc, Troc, Teoc y Voc.
4. 4. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el derivado de aminoácido de la fórmula II es activado antes de su acoplamiento con serina o treonina con un reactivo de activación .
5. 5. El proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el reactivo de activación se selecciona de DIC/HOSu, DIC/Pentafluorofenol , DIC/HOBt, DCC/HOSu, DCC/Pentafluorofenol , DCC/HOBt, EDC (xHCl)/HOSu o HBTU/HOBt.
6. 6. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 4 y 5, caracterizado porque el reactivo de activación es DIC/HOSu.
7. 7. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la relación de serina o treonina con respecto al derivado de aminoácido de la fórmula I se selecciona en el intervalo de 1.5 a 3.0 a 1.
8. 8. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la sal de amonio de la fórmula III se forma al agregar al dipéptido una amina de la fórmula N V R7/ V en donde R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que R6, R7 y R8 no son todos hidrógeno.
9. 9. El proceso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente de hidrógeno, etilo o ciclohexilo, con la condición de que R6, R7 y R8 no son todos hidrógeno .
10. 10. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 8 a 9, caracterizado porque se agrega diciclohexilamina .
11. 11. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado porque la cristalización toma lugar en un solvente orgánico seleccionado de metanol, etanol, n-propanol, i-propanol, acetato de etilo o tetrahidrofurano .
12. 12. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque el ácido libre de la sal de amonio de la fórmula III se libera en presencia de un ácido mineral, tomado en un solvente orgánico mientras que la amina se retira por medio de la extracción con agua y/o una solución acuosa de una sal mineral.
13. 13. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque el cierre de anillos se efectúa con 2 , 2-dimetoxipropano, 2-metoxipropeno o 2-acetoxipropeno .
14. 14. El proceso de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el cierre de anillos se efectúa con 2 , 2-dimetoxipropano .
15. 15. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque el catalizador ácido para el cierre de anillos se selecciona de ácido metano-sulfónico, ácido (+) alcanfor-10-sulfónico, ácido p-toluensulfónico, p-toluensulfonato de piridinio.
16. 16. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 y 13 a 15, caracterizado porque el cierre de anillos se efectúa en presencia de un solvente orgánico.
17. 17. Un compuesto de la fórmula caracterizado porque R es una cadena lateral de un aminoácido alfa y R2 es un grupo protector de amino y R5 es hidrógeno o metilo, R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono o cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, con la condición de que R6, R7 y R8 no son todos hidrógeno.
18. 18. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque R1 y R2 son como se describiera anteriormente, R6 es hidrógeno y R7 y R8 son ciclohexilo .