MX2008013156A

MX2008013156A - Laboratorio movil para analisis de agentes patogenos.

Info

Publication number: MX2008013156A
Application number: MX2008013156A
Authority: MX
Inventors: Vladimir Grcevic
Original assignee: Vladimir Grcevic
Priority date: 2006-04-14
Filing date: 2007-04-16
Publication date: 2009-01-09
Also published as: BRPI0709832A2; JP2009533038A; EP2007953A1; US20100304658A1; WO2007119009A1

Abstract

Esta invención se relaciona con un laboratorio móvil para análisis de agentes patógenos. De acuerdo a la invención, el laboratorio (1) consiste en un contenedor móvil transportable, que describe una cámara básica (10). El espacio interior de dicha cámara se encuentra aislado del exterior por medio de una caja sellada insertada en la mencionada cámara y ésta caja está constituida por una zona sellada para el análisis de agentes patógenos (50d, 500d). Dicha zona está ajustada con un dispositivo de presión que mantiene una presión negativa en su interior con respecto al ambiente externo, caracterizado por que la caja sellada (5) incluye una primera esclusa de aire para protección del equipo (500a) y una segunda esclusa de aire sellada (500b)que se comunica con la citada zona sellada para el análisis de los agentes patógenos y con la mencionada primera esclusa de aire, y donde sólo se puede tener acceso a la zona para el análisis de los agentes patógenos a través de la segunda esclusa.

Description

FORMULACIONES DE COMBINACIÓN DE INSULINA DE ACCIÓN RÁPIDA Y ACCIÓN LARGA Antecedentes de la Invención La . presente invención se relaciona generalmente a formulaciones que combinan formulaciones de insulina de acción rápida y acción larga. Esta solicitud reclama la prioridad de U.S.S.N. 60/744,687 intitulada "Rapid Acting and Long Acting Insulin Combination Formulations" presentada el 12 de abril del 2006 por Solomon S. Steiner y Roderike Pohl, U.S.S.N. 11/537,335 intitulada "Rapid Acting and Prolonged Acting Insulin Preparations" presentada el 29 de septiembre del 2006 por Solomon S. Steiner y Roderike Pohl y U.S.S.N. 11/695,562 intitulada "Rapid Acting and Long Acting Insulin Combination Formulations" presentada el 2 de abril del 2007, por Solomon S. Steiner y Roderike Pohl. La terapia de insulina intensiva para diabetes involucra proporcionar una insulina basal, idealmente presente en un nivel uniforme en la sangre durante un periodo de 24 horas y una insulina de bolo o de tiempo de comida (prandial) para cubrir la carga de de carbohidrato adicionada de la digestión concomitante con cada comida. En 1936, Hans Christian Hagedorn y B. Norman Jensen descubrieron que los efectos de la insulina inyectada podrían ser prolongados mediante la adición de protamina obtenida de la "lechaza" o semen de trucha de rio. La insulina se adicionó a la protamina y la solución, se llevo a pH 7 para inyección. En 1946, Nordisk Company fue capaz de formar cristales de protamina e insulina y la comercializó en 1950 como insulina NPH, (Neutral Protamine Hagedorn, "NPH"). La insulina NPH tiene a ventaja de que puede ser mezclada con una insulina que tiene un inicio más rápido para complementar su acción de más larga duración. Eventualmente todas las insulinas de animales se remplazaron por insulina recombinante humana. Hasta muy recientemente, y en muchos lugares actualmente, la insulina basal es usualmente proporcionada por la administración de dos dosis diarias de insulina en NPH, separadas por 12 horas. Un paciente que come tres comidas al día y que usa insulina NPH, la insulina basal requiere cinco inyecciones por día, una con cada de tres comidas y dos inyecciones de insulina NPH, una en la mañana y la otra a la hora de dormir. Para reducir en número, de inyecciones que el paciente debe tomar, la dosis de la mañana de insulina NPH se ha combinado con una insulina de acción corta (insulina humana recombinante) o un análogo de insulina de acción rápida, tal como lispro. Una combinación típica es una mezcla de 70% de NPH a 30% de análogo de insulina de acción rápida. Como resultado, el paciente puede reducir el número de inyecciones de cinco por día a cuatro por día. Ver, por ejemplo, Garber Drugs 66(l):31-49 (2006). Más recientemente la glargina de insulina, (nombre comercial LANTUS®) un análogo de insulina de "acción muy larga" ha llegado hacer disponible. Este inicia al disminuir la glucosa de la sangre alrededor de una hora después de la inyección y se conserva trabajando uniformemente durante 24 horas. J. Rosenstock y colegas encontraron que los pacientes quienes tomaron glargina de insulina tuvieron un riesgo mucho menor de baja glucosa en la sangre (hipoglucemia ) que los pacientes quienes tomaron insulina NPH. La glargina no puede ser mezclada con otras insulinas de acción corta o rápida debido ya que la mezcla causa que la glargina precipite antes de la inyección y la administración de una insulina precipitada la hace virtualmente imposible de administrar como una dosis conocida y confiable. El fabricante de glargina advierte a los usuarios contra el mezclado de glargina con cualquier otra insulina . Es por lo tanto un objetivo de la presente invención proporcionar formulaciones de insulina que puedan ser utilizadas para reducir el número de inyecciones diarias a tres. Es otro objetivo de la presente invención proporcionar una formulación de insulina de bolo basal. Es todavía otro objetivo de la presente invención proporcionar una formulación de insulina estable que tenga características de liberación inmediata y a largo plazo. Breve Descripción de la Invención Se ha desarrollado una formulación de insulina combinada de acción acelerada o rápida-acción larga en donde el pH _de la insulina de acción acelerada o rápida se ajusta * de modo que ambas insulinas de acción rápida y larga permanecen solubles cuando se mezclan con untamente. Incluida en la modalidad preferida están cualquiera de las formulaciones de insulina de acción muy rápida, rápida o acelerada combinada con cualquier insulina de acción intermedia, larga o muy larga en bajo pH . En otra modalidad, cualquier insulina muy rápida, rápida o acelerada puede ser combinada con cualquier insulina de acción intermedia, larga o muy larga en bajo pH, en la presencia de un agente quelante. En la modalidad más preferida, VIAject™ (una insulina de acción muy rápida) se mezcla con glargina de insulina a pH 4 para producir un pico inicial rápido en la concentración de insulina en la sangre para cubrir los carbohidratos que son absorbidos de la digestión de una comida y continuar con una concentración de insulina en la sangre basal sostenida. Cuando una formulación de insulina de bolo basal inyectable se co-administra con una insulina de acción rápida o muy rápida antes del desayuno, esta proporciona niveles de insulina de bolo adecuados para cubrir la comida, no produce hipoglucemia después de la comida y proporciona insulina basal adecuada durante 24 horas. El almuerzo y la cena se pueden cubrir por dos inyecciones de bolo de una insulina de acción acelerada, o acción rápida o acción muy rápida. Como resultado, un paciente usando la terapia de insulina intensiva solamente se inyectarla tres antes, que cuatro, veces al día. Experimentos se han realizado para demostrar la importancia de la adición de ácidos específicos tales como ácido aspártico, ácido glutámico, maleico, fumárico o ácido succínico a la insulina hexamérica para aumentar la velocidad y la cantidad de absorción y preservar la bioactividad después de la disociación en la forma' dimérica/monomérica . Estos se adicionan además de un agente quelante, de preferencia ácido etilendiaminatetraacético (EDTA) . Los poliácidos se seleccionaron basado en su tamaño molecular y estructura para optimizar la asociación con los sitios de enlace de hidrógeno sobre la superficie de insulina, enmascarando efectivamente los residuos de aminoácidos descargados (Figura 1), sin considerar la fuente (incluyendo insulina nativa, insulina recombinante, insulina de acción larga, porcina, bovina, derivados de insulina y análogos de los mismos) . Los ácidos se utilizaron, a una concentración que proporcionaron el efecto enmascarante de carga óptimo, (como es mostrado por los ejemplo, los ácidos preferidos son ácido aspártico, glutámico, succinico, maleico, fumárico y cítrico) . La combinación de tanto el ácido preferido como el agente quelante de manera conjunta en la formulación de insulina se presenta que es responsable para la absorción de insulina rápida. EDTA no fue efectivo con todos los ácidos. Cuando se utiliza con ácido adípico, ácido oxálico o HCl, no hubo incremento aparente en la velocidad de absorción de la insulina. Estos estudios establecen la importancia de un ácido y agente quelante en ambos de los estudios in vitro (células epiteliales orales humanas) e in vivo (rata, cerdo y humano) . Estos descubrimientos confirman los resultados observados en pacientes con diabetes tratados con la insulina de acción muy rápida (en combinación con ácido cítrico y EDTA) y la glargina de insulina basal. Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1 es una representación esquemática tridimensional de cargas que muestran insulina. La Figura 2 es un diagrama del dispositivo transwell utilizado para medir la absorción de insulina a través de las células epiteliales orales. La Figura 3 es una gráfica de la acumulación de insulina media (µ?) a través del tiempo (minutos) en la cámara inferior de una placa de membrana transwell sembrada con células epiteliales, que compara el efecto de una formulación de insulina que contiene EDTA (?) con una EDTA (¦) , con un control, sin células (A) . La Figura 4 es una gráfica de la insulina acumulativa (U) a través del tiempo en minutos para muestras de ácido cítrico con y sin EDTA contra ácido aspártico 1 con EDTA. La Figura 5 es una gráfica de la permeabilidad aparente de insulina para la insulina con EDTA (sólido) y sin EDTA (sombreado) , para muestras con ácidos cítrico, glutámico, adípico y ácido oxálico, a través del tiempo en minutos . La Figura 6 es una gráfica del por ciento de disminución de glucosa desde la línea de base a través del tiempo en minutos que compara la insulina con el ácido aspártico y EDTA con insulina con HCl y EDTA en ratas. La Figura 7 es una gráfica de los niveles de glucosa medios en cerdos en miniatura a través del tiempo, que compara la insulina con EDTA y ácido cítrico contra insulina con EDTA y HCl. La Figura 8 es una gráfica de los valores de glucosa de la sangre continua a través del tiempo (horas) de un experimento clínico humano, donde la glargina de insulina (Lantus®) y VIAject se administraron por separado (dos inyecciones) o co juntamente, combinadas en una inyección .

Descripción Detallada de la Invención I . Composiciones A. Insulina La composición incluye una insulina de acción acelerada, rápida o muy rápida y una insulina de acción intermedia o larga. La insulina de acción rápida se proporciona a un bajo pH, en el cual la insulina de acción larga no precipita cuando se mezcla con untamente, aun durante un amplio intervalo de relaciones de insulina de acción rápida a acción larga. Existen diferentes tipos de insulina comercial disponibles para pacientes con diabetes . Estos tipos de insulina varían de acuerdo con (I) cuanto tiempo toman para alcanzar la corriente sanguínea e iniciar a reducir los niveles de glucosa de la sangre (2) cuanto tiempo la insulina opera en concentración máxima; y (3) cuanto tiempo la insulina continua tendiendo un efecto sobre el azúcar- de la sangre. Insulina de Acción Acelerada Las insulinas de acción acelerada se proponen para responder . a la glucosa derivada de la ingestión de carbohidratos durante una comida. Las insulinas de acción acelerada comienzan a trabajar dentro de uno a 20 minutos, alcanzando un máximo aproximadamente una hora después y durando de tres a cinco, horas. La insulina de acción acelerada toma aproximadamente dos horas para absorberse completamente en la .circulación sistémica. Las insulinas de acción acelerada incluyen insulina humana recombinante regular (tal como Humulin®, comercializada por Lilly, y Novalin®, comercializada por NovoNordisk) que se administran en una solución isotónica a pH 7. Las insulinas bovinas y porcinas, que difieren en varios aminoácidos a la insulina humana, pero son bioactivas en humanos, también son insulinas de acción acelerada. Insulina de Acción Rápida Algunos pacientes con diabetes usan insulina de acción rápida en tiempos de comida, y la insulina de acción larga para la insulina continua de "fondo". Este grupo incluye insulinas que se han modificado o han alterado ubicaciones de aminoácidos con el fin de aumentar su velocidad de absorción. Actualmente existen tres tipos de análogos de insulina comerciales de acción rápida disponibles; insulina lispro (insulina Lisina-Prolina, vendida por Eli Lilly como HUMALOG®) , insulina glulisina (vendida por Sanofi-Aventis , APIDRAC®) y insulina asparto (vendida por Novo Nordisk como NOVOLOG®) . Insulina de Acción muy Rápida Biodel tiene una formulación de insulina patentada de insulina humana regular que es aun más rápida que los análogos de insulina de acción rápida, VIAJECT™. Esto es una formulación que combina la insulina humana regular con EDTA y ácido cítrico, a un pH de . Insulina de Acción Intermedia La insulina de acción intermedia tienen un lapso de vida más largo que la insulina de acción corta pero es más lenta para comenzar a trabajar y toma más tiempo alcanzar su concentración máxima. La insulina de acción intermedia usualmente comienza a trabajar dentro de 2-4 horas después de la inyección, alcanza un máximo un poco entre 4-14 horas, y permanece efectiva hasta 24 horas. Los tipos de insulina de acción intermedia incluyen NPH (Neutral Protamina Hagedorn) e insulina lente. La insulina NPH contiene protamina que hace lenta la velocidad de absorción de modo que la insulina toma más tiempo para alcanzar la corriente sanguínea pero tiene un máximo más largo y lapso de vida. Las insulinas de acción intermedia pueden ser combinadas con insulinas de acción rápida en pH neutro, para reducir el número total de inyecciones por día. Insulina de Acción Larga LANTUS™ (glargina de insulina) es un análogo de insulina humana recombinante que puede tener hasta 24 horas de duración. Este difiere de la insulina humana por tener una glicina en lugar de · asparagina en la posición 21 y dos argininas adicionadas en el carboxi-terminal de la cadena beta. LANTUS™ consiste de glargina de insulina disuelta en un fluido acuoso claro (100 IU, 3.6378 mg de glargina de insulina, 30 microgramos de zinc, 2.7 mg de m-cresol, 20 mg de glicerol al 85% y agua a 1 mi) . El pH se ajusta con HC1 a 4. El tiempo medio entre la inyección y el final del efecto farmacológico es un máximo de 24 horas después de la inyección. El tiempo medio entre la inyección y el final del efecto farmacológico fue de 24 horas para la glargina de insulina y 14.5 horas para la insulina humana NPH. El inserto del paquete dice no mezclar LANTUS™ con cualquiera de otros tipos de insulina, distinto a las insulinas de acción más rápida y acción intermedia, debido a la precipitación de las insulinas en el mezclado. En el caso de la glargina de insulina, no hay precipitado formado en el mezclado con Viaject™ que también tiene un pH de 4, igualado a aquel de la glargina de insulina. Finalmente, esta combinación proporciona insulina de acción muy rápida para llevar al .paciente a través de una comida con menos insulina de bolo, puesto que es muy rápidamente absorbida y eliminada en poco tiempo después de la digestión de la comida, para de esta manera reducir la oportunidad de hipoglucemia y proporcionar insulina basal de larga duración de 24 horas. Esto finalmente reduce el número de inyecciones requeridas por día de cuatro a tres.

B. Estabilizadores de ácido y agentes que1antes Estabilizadores de ácido Los ácidos que efectivamente ' solubilizan . la insulina cristalina hexamérica se seleccionan en base a su tamaño molecular y pKa, y se predicen' que son más efectivos en enmascarar las cargas sobre la molécula de insulina que se exponen en la disociación con la forma monomérica o dimérica (Figura 1). Los ácidos específicos preservan la bioactividad, enmascaran efectivamente la carga e. incrementan la velocidad de absorción después de la disociación de la insulina hexamérica en la forma monomérica. Los ejemplos establecen la importancia del ácido en tanto ín vitro (células epiteliales orales humanas) e in vivo (rata, cerdos y humano) . La insulina humana regular (Humulin®) se solubiliza con HC1, se formula a pH fisiológico. Los perfiles fármacocinéticos de esta insulina muestran que la insulina no es absorbida muy rápidamente, teniendo una concentración de insulina máxima en aproximadamente dos horas de post dosis. Los ácidos preferidos son "poliacídicos" es decir, tienen múltiples residuos acídicos. Los poliácidos preferidos incluyen ácido aspártico, glutámico, succínico, fumárico, maleico y cítrico. El intervalo de concentración útil es de 0.1 a 3 mg/ml de ácido, para soluciones que contienen 0.5 <a 4 mg de insulina/ml. El intervalo de pH es 3.0 a 4.2, mientras que el intervalo preferido es 3.8-4.1. Estos ácidos se pueden utilizar en conjunción con cualquier insulina de acción rápida para reducir el pH y hacerlos solubles después del mezclado con Lantus. Agentes quelantes En la modalidad preferida, un agente quelante se mezcla con el agente activo. El agente quelante, además de su función primaria en la quelación, también se cree que enlaza hidrógeno con insulina, para de esta manera enmascarar la carga y facilitar la absorción de la insulina. Se cree que el agente quelante más el zinc lejos de la insulina, para de esta manera favorecer la forma monomérica de la insulina sobre la forma hexamérica después de la inyección en el tejido subcutáneo (por ejemplo, mucosa o tejido graso). Esto facilita la absorción de la insulina al conservarla monomérica. Además, el agente quelante además ayuda en la absorción al cubrir o enmascarar la carga de las cargas de superficie expuestas sobre la molécula de insulina. El agente quelante puede ser iónico o no iónico. Los agente quelantes adecuados incluyen ácido etilendiaminatetraacético (EDTA) , ácido cítrico, dimercaprol (BAL) , penicilamina, ácido algínico, clórela, cilantro, ácido alfa lipoico, ácido dimercaptosuccínico (DMSA), sulfonato de dimercaptopropano (DMPS) y ácido oxálico. En la modalidad preferida, el agente quelante es EDTA. Los iones pueden ser parte del agente activo, adicionados al agente estabilizante, mezclados con el agente quelante y/o incluidos en el recubrimiento. Los iones representativos incluyen zinc, calcio, hierro, manganeso, magnesio, aluminio, cobalto, cobre, o cualquier metal divalente o ión metal de transición. Zn+2 tiene un enlace más fuerte de preferencia para EDTA que Ca+2. C . Formulaciones Los compuestos activos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se puede administrar en la forma de una composición farmacéutica en donde el (los) compuesto (s) activo (s) en una mezcla o en mezcla con uno o más portadores excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables. En una modalidad preferida, la insulina se administra mediante inyección. Alternativamente, las composiciones se pueden administrar mediante administración oral bucal, sublingual, vaginal, rectal o nasal. Formulaciones líquidas Las formulaciones liquidas se pueden inyectar (s.c, i.m., i.p.) o rosear para la administración nasal, sublingual, vaginal o bucal. La formulación para inyección típicamente será suspendida en agua estéril, solución salina regulada con fosfato, solución salina o glicerina. Otros agentes farmacéuticamente aceptables adecuados son conocidos. Estos típicamente serán adicionados a la insulina en forma liofilizada o seca inmediatamente antes del uso, pero se pueden adicionar previos al uso. Los agentes solubilizantes incluyen agentes humectantes tales como polisorbatos y poloxámeros, surfactantes no iónicos e iónicos, ácidos y bases alimenticias (por ejemplo, bicarbonato de sodio) y alcoholes, y ácidos o sales reguladores para el control del pH. La Figura 8 muestra datos sobre experimentos clínicos humanos sobre la mezcla inyectable de Viaject y glargina de insulina . Formulaciones Sólidas Los geles sólidos o semisólidos se pueden formular para la inyección s.c. (geles de baja viscosidad aplicables con jeringa) o secar en una película para la administración bucal, sublingual, oral, rectal o vaginal de la insulina de acción doble. Ellas se pueden formular al mezclar uno o más polímeros hidrofílicos en solución, que gelifican o solidifican mediante el enlace iónico y/o covalente. Los materiales adecuados incluyen, pero no están limitados a, almidón, almidón pregelatini zado , gelatina, azúcares (incluyendo sacarosas, glucosa, dextrosa, lactosa y sorbitol) , quitosan (varias formas) , dextrina, maltodextrina, polietilenglicol , ceras, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, goma de guar, tragacanto, alginato, alginato de sodio, celulosas, incluyendo hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, hidroxipropilcelulosa, hidroxietilcelulosa, etilcelulosa , metilcelulosa y begumm, aceite vegetal hidrogenado, tipo I, silicato de magnesio aluminio y polímeros sintéticos tales como ácido acrílico y copolímeros de ácido metacrílico, carbomero, copolímeros de ácido metacrílico, copolímeros de metacrilato de metilo, copolímeros de metacrilato de aminoalquilo, ácido poliacrílico/ácido polimetacrilico y polivinilpirrolidona. El mezclado o copoli'meri zación suficiente para proporcionar una cierta cantidad de carácter hidrofílico puede ser útil para mejorar la humectabilidad y mucoadhesión de los materiales. Por ejemplo, aproximadamente 5% a aproximadamente 20%· de monómeros pueden ser monómeros hidrofí lieos . Los monómeros hidrofílicos tales como hidroxipropilcelulosa (HPC) , hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , carboximet ilcelulosa (CMC) son comúnmente utilizados para este propósito. De preferencia, los polímeros son bioerosionables , con pesos moleculares preferidos que varían de 1000 a 15,000 Da, y mucho más de preferencia 2000 a 5000 Da. Estos también pueden ser polímeros no iónicos tales como monoestearato de etilenglicol, miristato de propilenglicol , monoestearato de glicérico, estearato de glicerilo, poligliceril-4-oleato, acrilato de sorbitan, acrilato de sacarosa, PEG-150 laurato, PEG-400 monolaurato, monolaurato de polioxietileno, polisorbatos, polioxietileno octilfeniléter , PEG-1000 éter etílico, éter tridecílico de polioxietileno, éter butílico de propilenglicol, Poloxamer® 401, estearoil monoisopropanolamida y amida de cebo hidrogenada de polioxietileno . Ejemplos de surfactantes anfotéricos incluyen N-dodecil^-alanina de sodio, N-lauril- -iminodipropionato de sodio, miristoamfoacetato , lauril betaina y laüril sulfobetaina . , En una modalidad, la formulación es una formula'ción sólida sublingual que contienen excipientes, tal como poli (alcohol vinilico) , glicerina, carboximetilcelulosa (CMC), quitosan y opcionalmente poli ( etilenglicol ) y agua. La composición puede estar en la forma de un material delgado, flexible, claro u opaco. Los espesores, típicos varían de 0.01 a 4 mm. La película puede tener cualquier forma adecuada, incluyendo redonda, ovalada, rectangular o cuadrada. La película puede ser una película monocapa, bicapa o tricapa. En la modalidad preferida, la película se diseña para ser adecuada para la administración sublingual. La película monocapa contiene un agente activo y uno o más excipientes. La película bicapa contiene uno o más excipientes, tal como •un agente solubilizante y/o un agente quelante de metal,- en una primera capa, y un agente activo en la segunda capa. Esta configuración permite que el agente activo sea almacenado 1 por separado de los excipientes, y puede incrementar ¦ la estabilidad del agente activo, y opcionalmente incrementa la vida de anaquel de la composición comparada si 'los excipientes y el agente activo fueran contenidos en una sola capa. La película tricapa contiene tres capas de película. Cada una de las capas pueden ser diferentes, o dos de las capas, tal como las capas de fondo y superior, pueden tener sustancialmente la misma composición. En una modalidad, las capas de fondo y superior circundan una capa de núcleo que contiene el agente activo. Las capas de fondo y superior pueden contener uno o más excipientes, tal como un agente solubilizante y un agente quelante de metal. De preferencia, las capas de fondo y superior tienen la misma composición. Alternativamente, las capas de fondo y superior pueden contener diferentes excipientes o diferentes cantidades , del mismo excipiente ( s ) . La capa de núcleo típicamente contiene la insulina, opcionalmente con uno o más excipientes. En una modalidad, la película es una película bicapa que contiene EDTA y ácido cítrico en una capa e insulina en la segunda capa. Cada capa puede contener excipientes adicionales, ¡tal como glicerina, alcohol poliviní lico, carboximetilcelulosa y opcionalmente PEG (tal como .PEG-400 o PEG 1600) . En '; una modalidad, una tercera capa puede ser ubicada entre la capa de insulina y la capa que contiene los otros ingredientes para proteger adicionalmente el agente 'activo de ingredientes degradantes ubicados en la otra capa durante , el almacenamiento. Los materiales adecuados para la capa protectora incluyen carboximetilcelulosa sódica, cera · de carnauba, ftalato de acetato de celulosa, alcohol cetílico, azúcar de confitería, etilcelulosa , gelatina, hidroxietil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa , glucosa líquida, maltodextriña , metilcelulosa, cera microcristalina , polimetacrilatos , alcohol polivinílico, laca, sacarosa, talco, dióxido de titanio y zeína. Al alterar la composición de los excipientes, la película puede ser diseñada para disolverse rápidamente (menos que 30 segundos) o lentamente (hasta 15 minutos) con el fin de lograr el perfil de absorción deseado y el efecto subsecuente. La película puede disolverse .en un período de tiempo que varía de 3 a 5 minutos, 5 a 8 minutos u 8 a 15 minutos. De preferencia, la película se disuelve en un período de tiempo que varía de 2-10 minutos. Existen un número de colorantes y saborizantes que son comercialmente disponibles. Los saborizantes incluyen menta, limón, cereza, chicle de burbuja y otros sabores estándares. Los edulcorantes pueden ser adicionados, incluyendo edulcorante no de glucosa, que son particularmente ventajosos para la administración de insulina. Los colorantes pueden ser rojo, azul, verde, amarillo, naranja o cualquier otro color aprobado por la FDC estándar. Los estabilizadores se utilizan para inhibir o retardar las reacciones de descomposición de fármaco que incluyen, a manera de ejemplo, reacciones oxidantes. Un número estabilizadores pueden ser estabilizados. Los estabilizadores adecuados incluyen polisacáridos , tales como celulosa y derivados de celulosa, y alcoholes simples, tal como glicerol; agentes bacteriostáticos tal como fenol, m-cresol y metilparabeno; agentes isotónicos, tales como cloruro de sodio, glicerol y glucosa; lecitinas, tales como lecitinas naturales de ejemplo (por ejemplo, lecitina de yema de huevo o lecitina de semilla de soya) y lecitinas sintéticas o semisintéticas (por ejemplo, dimiristoilfosfatidilcolina , dipalmitoilfosfatidilcolina o diestearoil-fosfatidilcolina ; ácidos fosfatidicos ; fosfatidiletanolaminas ; fosfatidilserinas tal como diestearoil-fosfatidilserina, dipalmitoilfosfatidilserina y diaraquidoilfosfatidilserina; fosfatidilgliceroles; fosfatidilinositoles ; cardiolipinas ; esfingomielinas y detergente sintéticos, tal como dioctanoilfosfatidilcolina y polietilen-polipropilenglicol). Otros estabilizadores adecuados incluyen acacia, albúmina, ácido alginico, bentonita, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio, ciclodextrinas , monoestearato de glicerilo, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa , silicato .de magnesio aluminio, propilenglicol, alginato de propilenglicol , alginato de sodio, cera blanca, cera de xantano y cera amarilla. En la modalidad preferida, el agente sin insulina y el estabilizador puede ser una combinación de uno o más 2.1 polisacáridos y glicerol, agentes bacteriostáticos , agentes isotónicos, lecitinas o detergentes sintéticos. II. Métodos para hacer las formulaciones Las composiciones farmacéuticas se pueden formular de una manera convencional utilizando uno o más portadores fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden ser utilizadas farmacéuticamente. La formulación de fármacos se discute, por ejemplo, Hoover, John E, Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania (1975), y Liberman, H. A, y Lachman, L, Eds . Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York. N. Y. (1980). La formulación apropiada es dependiente de la ruta de administración elegida. III . Métodos Para Utilizar las Formulaciones Las formulaciones se pueden administrar en una variedad de maneras, incluyendo por inyección, de preferencia subcutáneamente, o tópicamente a una superficie de la mucosa tal como oral, bucal, nasal, sublingual, rectal, vaginal, pulmonar o administración ocular. Se prefiere la administración subcutánea, bucal o sublingual. Después de la administración, la forma de dosificación se disuelve rápidamente liberando el fármaco o formando partículas pequeñas que contienen fármaco, que contiene opcionalmente uno o más excipientes. La formulación se diseña para ser absorbida rápidamente y transportada al plasma para el suministro sistémico. En la modalidad preferida, la formulación se forma al mezclar un agente activo en polvo con un diluyente líquido que contiene un portador líquido farmacéuticamente aceptable y uno o más agentes solubili zantes . En la modalidad mucho más preferida, el agente activo es insulina, y el diluyente contiene solución salina o glicerina, EDTA y ácido cítrico. Previo a la administración el polvo y el diluyente se mezclan conjuntamente para formar una composición inyectable. La presente invención será además entendida por referencia a los siguientes ejemplos no limitativos. E emplo 1 : Efecto del EDTA Sobre la Absorción de Insulina a Través de una Multicapa de Células Epiteliales Propósito : Para demostrar el efecto in vitro del EDTA en la presencia de ácido cítrico sobre la absorción de la insulina a través de una multicapas de células epiteliales. Materiales y Métodos : Se mezclaron dos soluciones salinas que contienen 1 mg/ml de insulina, 2 mg/ml de EDTA y 2 mg/ml de ácido cítrico ("solución 1") o 1 mg/ml de insulina y 2 mg/ml de ácido cítrico ("solución 2"). El control (sin células) contuvo EDTA, ácido cítrico e insulina. Los cultivos de líneas> de células epiteliales humanas inmortalizadas se sembraron sobre placas transwell (Figura 2). Las células se cultivaron a confluencia y se probaron para la integridad de membrana utilizando la resistencia trans-epitelial . En el tiempo cero, el fluido en las cámaras superiores de las placas transwell se remplazó con 0.5 mi de solución de insulina (es decir solución 1 o solución 2) . Dos placas con solución 1, dos placas con solución 2 y una placa con la solución de control (sin células) se probaron simultáneamente. La cámara inferior de cada placa contuvo 1.5 mi de la solución salina. En cada punto de tiempo, 100 L de fluido de cámara inferior se removió y se analizó con el Ensayo Inmunosorbente Enlazado a Enzima (ELISA) de insulina. 100 yL de solución salina se adicionó a la cámara inferior para mantener un volumen constante de 1.5 mi por todo el estudio. La cantidad de insulina removida de la cámara inferior en cada punto de tiempo se adicionó a la cantidad removida en el punto (s) de tiempo previo para determinar la cantidad acumulativa, de insulina recuperada en la cámara inferior. Las células se mancharon para verificar la viabilidad antes y después del experimento. No hubo diferencia estadística en la viabilidad celular para cada una de las placas. Resultados : La Figura 3 es una gráfica de la acumulación de insulina media (yU) a través del tiempo (minutos) en la cámara inferior de la placa transwell sembrada con células epiteliales, que compara el efecto de una formulación de insulina que contiene EDTA (?) con una sin EDTA (¦) con un control, sin células (A) . La solución 1, que contuvo EDTA, se movió a través de la multicapa de células epiteliales más efectivamente que la solución 2, que contuvo EDTA. Por lo tanto, el efecto de combinar EDTA con ácido cítrico es promover la velocidad y cantidad de absorción. Ejemplo 2: Efecto del Ácido Aspártico y Ácido Cítrico sobre la Absorción de Insulina a Través de una Multicapa con Células Epiteliales . Propósitos: Demostrar que los poliácidos tienen diferentes afinidades para la insulina con EDTA como es mostrado con un incremento en la absorción a través de la células. Métodos y Materiales : Las células epiteliales, orales que se han sembrado sobre placas transwell se utilizaron para determinar la velocidad de absorción a través de la multicapa de células, como es descrito en el ejemplo 1. Insulina (1 mg/ml) se disolvió en ya sea ácido aspártico (0.2 mg/ml) o ácido cítrico (2 mg/ml) y EDTA (2 mg/ml) se adicionó a ambos. La insulina con ácido cítrico (sin EDTA) se- utilizó como un control. El pH de la solución fue de aproximadamente 3.5 a 4, y la solución salina fisiológica estuvo presente para proporcionar un ambiente isotónico para las células (ÑaCl al 0.85%), suficiente para producir en un intervalo de 280-310 mOsm como es medido por la depresión del punto de congelación, Microsmette, Precisión Systems, Natick, MA) . Las muestras se tomaron de la cámara receptora y se analizaron por ELISA (Lineo Corp.) para la insulina recombinante humana (µ?/mL) . Resultados : La absorción de insulina/ácido cítrico a través de las capas de células se aumento mediante la adición de EDTA, como es mostrado por el ejemplo 2. Sin embargo, el ácido aspártico fue aun más potente en aumentar el transporte de insulina en la presencia de EDTA, como es mostrado por la Figura 4. Conclusión : Diferentes poliácidos en la presencia de EDTA tienen efectos variables sobre la absorción de insulina, posiblemente debido a los grados variables de enmascaramiento de carga. Ejemplo 3: Comparación del Efecto del Ácido Cítrico, Ácido Glutámico, Ácido Adipico y Ácido Oxálico Sobre la Absorción de Insulina a Través de una Multicapa de Células Epiteliales Materiales y Métodos : Placas transwell sembradas con células epiteliales orales se utilizaron para estos experimentos. El efecto, de EDTA se monitoreó por la cantidad de insulina que llegó a través de la cámara inferior de la placa transwell. Células epiteliales orales se cultivaron sobre insertos transwell durante 2. semanas hasta que se han formado múltiples capas de células (4-5). Los estudios de transporte se condujeron al adicionar la solución apropiada (todos contuvieron 1 mg/ml de insulina humana) a la cavidad donadora que al remover las muestras de la cavidad receptora después de 10 minutos. Las cantidades de insulina en las cavidades receptoras se analizaron utilizando ELISA. La permeabilidad aparente se calculó utilizando la formula: permeabilidad aparente=Q/A (C) t donde Q=cantidad total permeada durante el tiempo de incubación en yg, A=área de inserto en cm2, C=concentración inicial en la cavidad donadora en yg/cm3 y t=tiempo total del experimento en observación. La concentración de EDTA es 0.45 mg/ml en todos los casos y las concentraciones de ácidos son como sigue: ácido Cítrico 0.57 mg/ml, ácido Glutámico 0.74 mg/ml, ácido Adípico 0.47 mg/m, ácido Oxálico 0.32 mg/ml. El pH de las soluciones fue 3.6 en todos los casos. Resultados : La Figura 5 muestra el cambio en la permeabilidad aparente de que resulta de diferentes poliácidos orgánicos que se han probado, con o sin EDTA. Los resultados muestran que hay un incremento en la cantidad acumulativa de la permeabilidad aparente de insulina cuando el EDTA se adiciona al ácido/insulina en el caso de ácido cítrico y glutámico. Esto no se mantuvo verdadero para todos los poliácidos orgánicos. Los ácidos atipico y oxálico no mostraron tal respuesta. Ejemplo 4: Efecto del Ácido Sobre la Absorción de Insulina del Gel Polimérico Administrado Rectamente a Ratas . Propósitos : Observar el efecto de los ácidos EDTA en un modelo in vivo. Materiales y Métodos : Muestras Insulina de incorporó en un gel que consiste de PVA (0.5%), Carbopol (2.7%), CMC (0.005%) y PEG 400 (0, 14%), glicerina (0.14%) y EDTA (0.005%) al mezclar. con insulina/ácido aspártico o insulina/HCl . La concentración final de insulina en el gel de insulina/ácido aspártico fue 0.7 y la concentración de insulina en el gel de insulina/HCl fue 1.7 mg/g. Estudio Rectal en Rata: Las ratas se mantuvieron en ayunas durante la noche y se evacuaron de toda la materia fecal con un enema de agua caliente. Luego la formulación de gel se insertó en el recto y la glucosa de la sangre de las ratas se monitoreó durante un periodo de tiempo de 8 horas. Resultados : Los resultados se muestra en la Figura 6 como un por ciento de disminución de glucosa de la linea de base que compara la insulina con el ácido aspártico y EDTA a insulina con HCl y EDTA. . Los resultados muestran disminución significativamente mejor de glucosa para la insulina que contiene ácido aspártico como es comparado con la insulina que contiene HCl. Ejemplo 5: Comparación del Efecto del HCl y Ácido Cítrico Sobre la Absorción de Insulina con EDTA en Cerdos Diabéticos de Miniatura Propósito : Estimar la sincronización de respuesta de glucosa cuando la insulina se inyecta con un poliácido o ácido orgánico en conjunción con EDTA. Materiales y Métodos Para demostrar adicionalmente que el tipo de ácido es importante pa a la acción rápida de la insulina disociada, una comparación del ácido cítrico a HCl se realizó en cerdos diabéticos de miniatura. La insulina (0.9 mg/ml) se preparó como una solución isotónica clara que contiene ácido cítrico (1.8 mg/mL) , EDTA (1.8 mg/mL) y m-cresol como un conservador, pH~4. El comparador se preparó de la misma manera, sustituyendo HCl (0.001N) por ácido cítrico y al ajusfar el pH con NaOH a aproximadamente 4. 1 Los mini-cerdos diabéticos no se alimentaron en 'día del estudio y se dosificaron con 0.08 U/kg en tres ocasiones con la formulación de HCl. Para comparación, la formulación de ácido cítricos se utilizó en dos ocasiones con esta dosis, y otras cuatro ocasiones a una dosis más alta de 0.125 U/kg.

La sangre se retiró para la determinación de insulina y glucosa durante el periodo de estudio de 8 horas. Resultados : Los resultados mostrados en la Figura 7 comparan el tiempo para alcanzar el nivel de glucosa más bajo (nadir) después de la administración de insulina a mini-cerdos diabéticos. La formulación de ácido cítrico fue consistentemente más rápida en alcanzar el nadir que una formulación idéntica hecha con HC1. Ejemplo 6: Glargina de Insulina y Viajec™ Administrados Conjuntamente y por Separado a Pacientes con Diabetes : Métodos y Materiales : Glucosa de la sangre ("BG") de 9 pacientes (5 hombres y 4 mujeres; edad 40 ± 10 años, índice de masa corporal ("B I") 24.0 ± 2.0 kg/m2) se estabilizaron mediante grapas de glucosa (BG objetivo 120 mg/dl) . Previo a la dosificación, la infusión de glucosa se apagó. Utilizando un diseño cruzado con orden de tratamiento aleatorio, la misma dosis específica de paciente de VIAject™ y Lantus se inyectó s.c. inmediatamente antes de la comida. En una ocasión, las dosis estuvieron conjuntamente en la misma inyección. En otra ocasión la dosis idéntica de cada insulina se administró por separado en dos inyecciones. La glucosa de la sangre se monitoreo continuamente durante 8 horas y la infusión de glucosa se reinició si la BG fue menor que 60 mg/dl. Los niveles de insulina del plasma se determinaron por todo el estudio. Resultados : Los datos de glucosa de la sangre medios durante las primeras tres horas se muestran, en la Figura 8. Las primeras tres horas tienen un perfil muy similar, que es típico a la acción rápida del Viaject™ después de una comida.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una formulación inyectable, caracterizada porque comprende: (a) insulina de acción acelerada o insulina de acción rápida, (b) insulina de acción larga, y (c) una formulación inyectable que comprende1 un agente quelante de zinc y un agente acidificante en una cantidad efectiva para aumentar la velocidad o cantidad de captación de la insulina por un paciente, la formulación que tiene un pH de entre 3.0 y 4.2, de preferencia entre 3.8 y 4.1.
2. La formulación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende una insulina de acción rápida en combinación con una insulina de acción larga.
3. La formulación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente quelante es ácido etilendiaminatetraacético (EDTA) . .
La formulación de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque el ácido es ácido cítrico.
5. La formulación de conformidad con ¦ la reivindicación 1, caracterizada porque el agente acidificante es un compuesto cargado y en donde el agente quelante y el agente acidificante están presentes en cantidades efectivas para enmascarar las cargas sobre la insulina.
6. La formulación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente acidificante es un ácido seleccionado del grupo que consiste de ácido aspártico, ácido glutámico, ácido succinico, ácido maleico, ácido fumárico y ácido cítrico.
7. La formulación de conformidad con , la reivindicación 1, caracterizada porque la insulina de acción acelerada es una insulina humana natural o recombinante .
8. La formulación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es adecuada para administración pulmonar.
9. Un método para administrar insulina a un paciente en necesidad del mismo, caracterizado porque comprende administrar la formulación de cualquiera de · las reivindicaciones 1 a 8 al paciente. 1
10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque comprende administrar la formulación de la reivindicación 8 a la región pulmonar de un paciente.
11. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la formulación de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 se administra mediante inyección. RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se ha desarrollado una formulación de insulina de acción rápida-acción larga combinada en donde el pH de la insulina de acción rápida se -ajusta de modo que la glargina de acción larga permanece soluble cuando se mezclan conjuntamente. En la modalidad preferida, esta insulina de bolo basal inyectable, se administra antes del desayuno, esto proporciona niveles de insulina de bolo adecuados para cubrir la comida, no produce hipoglucemia después de la comida y proporciona insulina basal adecuada durante 24 horas. El almuerzo y la cena se pueden cubrir por 2 inyecciones de bolo de una insulina de acción acelerada, o acción rápida o acción muy rápida. Como resultado, un paciente que usa terapia de insulina intensiva debe solamente inyectarse tres, antes que cuatro, veces al día. Experimentos se han realizado para demostrar la importancia de la adición de ácidos específicos a la insulina hexamérica para aumentar la velocidad y cantidad de absorción y preservar la bioactividad después de la disociación en la forma monomérica mediante la adición de un agente quelante tal como EDTA. Como es mostrado por los ejemplos, los ácidos preferidos son ácido aspártico, maleico, succínico, glutámico y cítrico. Estos se adicionan además de un agente quelante, de preferencia ácido etilendiaminatetraacético (EDTA) . Los resultados muestran que la formulación de ácido cítrico fue más efectiva en descender la glucosa de la sangre rápidamente que la formulación de acción rápida idéntica preparada con HC1 en cerdos. El enmascaramiento de la carga por el poliácido se presenta 1 que es responsable para la absorción de insulina rápida, el EDTA no fue efectivo cuando se usa con ácido adípico, ácido oxálico o HC1 en acelerar la absorción de insulina. Estos resultados confirman los resultados observadores en sujetos clínicos y pacientes con diabetes ' tratados con la insulina de acción rápida en combinación con ácido cítrico y EDTA.