MX2008010992A

MX2008010992A - Composiciones relacionadas con el locus 6 de rasgo cuantitativo (qtl6) en maiz y metodos de uso.

Info

Publication number: MX2008010992A
Application number: MX2008010992A
Authority: MX
Inventors: Mark E Williams; Mitchell C Tarczynski; William B Allen; Bo Shen; Gan-Yuan Zhong; Peizhong Zheng
Original assignee: Pioneer Hi Bred Int
Priority date: 2006-03-01
Filing date: 2007-03-01
Publication date: 2008-11-27
Also published as: WO2007101273A3; WO2007101273A2; BRPI0708492A2; AU2007220007A1; US20110041207A1; US8748576B2; AU2007220007B2; US7812216B2; EP1989314A2; CA2638737A1; US20120102596A1; US8084208B2; US20070266462A1

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones relacionadas con el locus 6 de rasgo cuantitativo (QTL6) en maíz y métodos para su uso. Las composiciones son nuevos loci de marcadores moleculares que están genéticamente ligados con el QTL6 y los cuales están asociados con un contenido incrementado de aceite y/o contenido incrementado de ácido oleico y/o una relación incrementada ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de planta de la misma. Estos nuevos marcadores son caracterizados por la presencia de al menos, un polimorfismo relativo al locus de marcador correspondiente a partir de la región WTL6 de plantas de maíz de ácido oleico no alto, aceite no alto. En algunas modalidades, el nuevo loci marcador comprende la secuencia codificante del mismo, son empleados en métodos de la invención para manipulación del contenido de ácido oleico y/o aceite y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de planta de la misma, para selección asistida por marcador de una planta, por ejemplo, una planta de maíz, o una parte de planta de la misma, que tiene un contenido incrementado de aceite y/o contenido incrementado de ácido oleico y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, y para reproducción asistida por marcador del rasgo de ácido oleico alto y/o aceite alto.

Description

COMPOSICIONES RELACIONADAS CON EL LOCUS 6 DE RASGO CUANTITATIVO (QTL6) EN MAÍZ Y MÉTODOS DE USO CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere al campo de reproducción de plantas y manipulación genética de plantas, particularmente para la modulación de contenido de aceite y contenido oleico en una planta o parte de planta.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Más del 50% del cultivo de grano de maíz producido en los Estados Unidos es usado para animales de forraje animal (Perry (1988) Corn and Corn Improvement, eds. Sprague and Dudley (Madison, WI), pp . 941-963). El grano de maíz con concentración elevada de aceite tiene un contenido calórico superior comparado con el grano de maíz estándar y es ventajoso como una fuente de alimento para animales. La alimentación con granos de maíz alto en aceite en lugar de grano de maíz con niveles estándares de concentración de aceite a cerdos y aves, ha resultado en ganancia de peso acelerada (Han et al. (1987) J. Poult. Scil 66: 103-111 y Gross et al. (1992) Proc. Of the 47th Ann . Corn and Sorghum Res. Conference, pp. 82-92) . De este modo, el desarrollo de germoplasma alto en aceite es un objetivo de algunos programas de reproducción de maíz.

La tecnología de marcador molecular ha permitido la asociación de marcadores de ADN con rasgos agronómicos importantes tales como, rendimiento, altura de planta, resistencia a enfermedad, etc. Los métodos y composiciones que mejoran el contenido de aceite de plantas y también proporcionan nuevos marcadores moleculares que permiten los métodos eficientes de reproducción para identificar plantas altas en aceite, son necesarios en la técnica.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Se proporcionan composiciones relacionadas con el locus 6 de rasgo cuantitativo (QTL6) en maíz y métodos para su uso. Las composiciones son nuevos loci de marcadores moleculares que están genéticamente ligados con QTL6 y los cuales están asociados con el contenido incrementado de aceite y/o contenido incrementado de ácido oleico de una planta o parte de planta de la misma, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico con una planta o parte de planta de la misma. Estos nuevos marcadores están caracterizados por la presencia de al menos, un polimorfismo relativo al locus de marcador correspondiente a partir de la región QTL6 de plantas de maíz de aceite normal. En algunas modalidades, los nuevos loci de marcadores comprenden secuencias codificantes para un polipéptido, en donde al menos un polimorfismo dentro del locus de marcador resulta en la expresión de un polipéptido variante que está asociado con el contenido incrementado de aceite, y/o contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico dentro de la planta o parte de planta de la misma. En una modalidad, el locus del marcador comprende una secuencia codificante para un DGAT1-2 de maíz o una variante de la misma biológicamente activa, particularmente el DGAT1-2 (ASK) de maíz o la variante de la misma biológicamente activa. Los loci marcadores de la invención, y fragmentos adecuados de los mismos, son empleados en la selección asistida por marcador de una planta, por ejemplo, una planta de maíz, o una parte de planta de la misma, que tiene un contenido incrementado de aceite, y/o contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, y para reproducción asistida por marcador del rasgo de aceite alto y/o rasgo de ácido oleico alto, que incluye contenido de ácido oleico incrementado y relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. De esta manera, la presente invención proporciona métodos para identificar una planta de maíz o germoplasma de maiz que tiene un contenido incrementado de aceite, y/o contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, los métodos comprenden detectar en la planta o germoplasma, al menos un polimorfismo dentro de un locus marcador de la invención, que está asociado con el contenido incrementado de aceite, contenido incrementado de ácido oleico, o la relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. En algunas modalidades, la detección comprende el uso de una sonda detectablemente etiquetada que comprende, toda o una porción del locus marcador o un complemento del mismo. Las plantas o germoplasmas identificados por tener el rasgo de aceite alto deseable, y/o el rasgo de ácido oleico alto, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, pueden ser seleccionadas para uso en métodos de reproducción tradicional para introducir el rasgo deseado en cualquier planta adecuada o germoplasma de interés. La presente invención también proporciona métodos para identificar la presencia de un locus QTL6 que está asociado con un contenido incrementado de aceite, un contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico en una planta de maíz o germoplasma de maíz. Los métodos comprenden medir la concentración de ácido oleico de semilla de dicha planta de maíz o germoplasma de maíz, en donde una concentración de ácido oleico de al menos 35%, es predictiva de que la planta de maíz o el germoplasma de maíz probablemente comprenden este locus QTL6. Las plantas o germoplasmas identificados por tener el locus QTL6 de ácido oleico alto/aceite alto deseable, pueden ser seleccionadas para uso en los métodos de reproducción tradicional para introducir este locus deseado en cualquier planta adecuada o germoplasma de interés. Las composiciones de la invención también comprenden polinucleótidos aislados por cinco estructuras lectoras abiertas dentro de una región QTL6 de maíz descrita aquí y los polipéptidos por este medio codificadas. Las cinco estructuras lectoras abiertas que codifican un DGAT de maíz, designadas ZmDGATl-2 (ASK) , una permeasa 1 de aminoácido de maíz, designada ZmAAPl; una proteina del sistema de eflujo de potasio de maíz, designada ZmPESP, una proteina ribosomal S24 de maíz 40S, designada ZmS24, un transportador ABC similar a PDR de maíz, designado ZmABCT, y variantes de los mismos biológicamente activas. También se proporciona la estructura lectora abierta que codifica el ZmDGATl-2 correspondiente a partir de líneas parentales y el polipéptido por este medio codificado. Adicionalmente, la invención proporciona secuencias promotoras aisladas para el gen ZmDGATl-2 (ASK) , para un gen DGAT1-2 de aceite normal correspondiente, designado ZmDAGTI-2 (Mol7 ) , y para el ZmAAPl, el ZmPESP(Mol7) y ZmPESP(ASK), el ZmS24 y los genes ZmABCT de la invención. Estas secuencias promotoras encuentran uso accionando la expresión de polinucleótidos operablemente ligados que codifican polipéptidos de interés, que incluyen los polinucleótidos nativos respectivos que codifican en ZmDGATl-2 (ASK) , ZmDGATl-2(Mol7), ZmAAPl, ZmPESP, ZmS24, y polipéptidos ZmABCT de la invención . Las composiciones de la invención encuentran uso en la manipulación de aceite, y/o contenido de ácido oleico, y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de una planta de interés, o parte de planta de la misma. De esta manera, la presente invención también proporciona casetes de expresión que comprenden, uno o más de los polinucleótidos de la invención, y células de planta transformada, plantas y semillas que comprenden estos casetes de expresión. Los casetes de expresión encuentran uso en los métodos de la invención dirigidos para incrementar el contenido de aceite, incrementar el contenido de ácido oleico, y/o incrementar la relación de ácido oleico/ácido linoleico, dentro de una planta o parte de planta de la misma.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra el mapeo de QTL6 en una población BC2. La Figura 2 muestra un diagrama esquemático que ilustra el mapeo progresivo de QTL6 a partir de una región de 47.2 c en BC2 hacia abajo a un fragmento de aproximadamente 195 kb en BC4S2, el cual corresponde a tres clones BAC traslapantes (bl21c.n3, b33a.k3 y be46c.n5), en el mapa fisico del parental Mol7. La Figura 3 proporciona un mapeo esquemático de la región QTL6, que incluye las cinco Estructuras Lectoras Abiertas (ORF) . Como se describe en la Figura 2, un QTL de ácido oleico/aceite principal ha sido finamente mapeado a una región pequeña en el cromosoma 6 localizado entre los marcadores SNP BAC18 y BAC29. Tres BACS traslapantes que cubren la región QTL6 de la linea de maíz parental Mol7 se secuenciaron . El inserto genómico total en estos tres clones es aproximadamente de 280 kb . El QTL6 puede ser además mapeado a una región de 196 kb que contiene cinco estructuras lectoras abiertas (ORF) que portan homología significante con genes conocidos. Las cinco ORF y marcadores polimórficos estrechamente ligados son etiquetados. Debido a la naturaleza repetitiva del genoma de maíz, algunas aperturas pequeñas y orientación de algunos fragmentos son así resueltas. Dos de las ORF (proteína ribosomal 40S y permeasa de aminoácido) , están localizadas dentro de una apertura de 18 kb. La ORF transportadora ABC está localizada al final de la región secuenciada, y solamente la mitad del extremo 5' de esta ORF larga (más de 1500 AA) para el transportador ABC está localizada dentro de estas tres BACS. La Figura 4 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6 BAC05 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador BAC05-ASK (SEC ID NO:l), está alineado con la secuencia correspondiente de BAC05-EF09B (SEC ID NO : 2 ) . La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 68) y el cebador inverso (SEC ID NO: 69) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 5 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6 BAC17 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador BAC17-ASK (SEC ID NO: 3), está alineado con la secuencia correspondiente de BAC17-EF09B (SEC ID NO : 4 ) . La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 70) y el cebador inverso (SEC ID NO: 71) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 6 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6 BAC18 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador BAC18-ASK (SEC ID NO:5), está alineado con la secuencia correspondiente de BAC18- EF09B (SEC ID NO: 6). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 72) y el cebador inverso (SEC ID NO: 73) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 7 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6 BAC20 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador BAC20-ASK (SEC ID N0:7), está alineado con la secuencia correspondiente de BAC20-EF09B (SEC ID NO : 8 ) . La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 74) y el cebador inverso (SEC ID NO: 75) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 8 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6 BAC22 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador BAC22-ASK (SEC ID NO: 9), está alineado con la secuencia correspondiente de BAC22-EF09B (SEC ID NO: 10). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 76) y el cebador inverso (SEC ID NO: 77) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 9 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6 BAC24 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador BAC24-ASK (SEC ID NO: 11), está alineado con la secuencia correspondiente de BAC24-EF09B (SEC ID NO: 12). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 78) y el cebador inverso (SEC ID NO: 79) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 10 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6 BAC29 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador BAC29-ASK (SEC ID NO: 13), está alineado con la secuencia correspondiente de BAC29-EF09B (SEC ID NO: 14). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 80) y el cebador inverso (SEC ID NO: 81) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 11 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6 BAC32 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC ol7 que cubren la región QTL6. El marcador BAC32-ASK (SEC ID NO: 15), está alineado con la secuencia correspondiente de BAC32-EF09B (SEC ID NO: 16). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 82) y el cebador inverso (SEC ID NO: 83) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 12 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6SNP7 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6SNP7-ASK (SEC ID NO: 17), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6SNP7-EF09B (SEC ID N0:18). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 84) y el cebador inverso (SEC ID NO: 85) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 13 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6SNP8 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6SNP8-ASK (SEC ID NO: 19), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6SNP8-EF09B (SEC ID NO:20). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 86) y el cebador inverso (SEC ID NO: 87) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 14 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6SNP9 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6SNP9-ASK (SEC ID NO:21), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6SNP9-EF09B (SEC ID NO:22). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 88) y el cebador inverso (SEC ID NO: 89) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 15 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6SNP13 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6SNP13-ASK (SEC ID NO:23), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6SNP13-EF09B (SEC ID NO:24). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 90) y el cebador inverso (SEC ID NO: 91) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 16 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6SNP14 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6SNP14-ASK (SEC ID NO:25), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6SNP14-EF09B (SEC ID NO:26). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 92) y el cebador inverso (SEC ID NO: 93) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 17 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6SNP15 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6SNP15-ASK (SEC ID NO:27), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6SNP15-EF09B (SEC ID NO:28). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 94) y el cebador inverso (SEC ID NO: 95) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 18 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6SNP16 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6SNP1 ß-ASK (SEC ID NO:29), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6SNP16-EF09B (SEC ID NO: 30). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 96) y el cebador inverso (SEC ID NO: 97) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 19 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6SNP17 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6SNP17 -ASK (SEC ID NO:31), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6SNP17-EF09B (SEC ID NO: 32). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 98) y el cebador inverso (SEC ID NO: 99) que pueden ser usados para amplificar este marcador . La Figura 20 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6MZA5002 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC ol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6 ZA5002-ASK (SEC ID NO: 33), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6MZA5002-EF09B (SEC ID NO:34). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 100) y el cebador inverso (SEC ID NO: 101) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 21 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6MZA13321 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6MZA1332 l-ASK (SEC ID NO: 35), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6MZA13321-EF09B (SEC ID NO: 36). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 102) y el cebador inverso (SEC ID NO: 103) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 22 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6MZA15785 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6MZA15785-ASK (SEC ID NO: 37), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6MZA15785-EF09B (SEC ID NO:38). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 104) y el cebador inverso (SEC ID NO: 105) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 23 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6MZA13118 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6MZA13118-ASK (SEC ID NO: 39), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6MZA13118-EF09B (SEC ID NO: 40). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 106) y el cebador inverso (SEC ID NO: 107) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 24 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6MZA11771 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6MZA11771-ASK (SEC ID NO: 41), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6MZA11771-EF09B (SEC ID NO: 2). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 108) y el cebador inverso (SEC ID NO: 109) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 25 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6MZA9351 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6MZA9351-ASK (SEC ID NO: 43), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6MZA9351-EF09B (SEC ID NO: 33). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 110) y el cebador inverso (SEC ID NO: 111) que pueden ser usados para amplificar este marcador.

La Figura 26 proporciona una alineación del marcador molecular QTL6MZA8135 desarrollado de las secuencias finales BAC de las tres secuencias BAC Mol7 que cubren la región QTL6. El marcador QTL6 ZA8135-ASK (SEC ID NO: 45), está alineado con la secuencia correspondiente de QTL6 ZA8135-EF09B (SEC ID NO: 46). La alineación también proporciona el cebador delantero (SEC ID NO: 112) y el cebador inverso (SEC ID NO: 113) que pueden ser usados para amplificar este marcador. La Figura 27 también proporciona una alineación de la proteina ZmDGATl-2 (ASK) (SEC ID NO: 8), con la proteina ZmDGATl-2 de las lineas parentales de maíz de aceite normal (comparada con el amarillo #2) EF09B (SEC ID NO:52), Mol7 (SEC ID NO:50), y B73 (SEC ID NO:54). La supresión de glutamina con la proteina ZmDGATl-2 (ASK) , está representada como ocurre en la posición que corresponde a Gln67 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal, aunque la supresión podría ocurrir en la posición que corresponde a Gln6 , Gln65, Gln66 o Gln67 de la proteína ZmDGATI de aceite normal. También, la inserción de fenilalanina dentro de la proteína ZmDGATl-2 (ASK) , está representada como correspondiente a una inserción de fenilalanina entre Phe4e9 y Ser470 de la proteína ZmDGATI de aceite normal. Sin embargo, esta inserción podría corresponder a una inserción de fenilalanina entre Trp467 y P e468 de la proteína ZmDGATI- 2 de aceite normal, una inserción de fenilalanina entre Phe468 y Phe469 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal, o una inserción de fenilalanina entre Phe469 y Ser47o de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal. La Figura 28 proporciona una alineación de la secuencia codificante para la proteina ZmDGATl-2 (ASK) (SEC ID NO: 7), con la secuencia codificante para la proteina ZmDGATl-2 a partir de las lineas parentales de maíz de aceite normal EF09B (SEC ID N0:51), Mol7 (SEC ID NO:49) Y B73 (SEC ID NO: 53). Se nota que en esta alineación, el cambio polimórfico (supresión de un codón CAG con la secuencia codificante ZmDGATl-2 (ASK) expuesta en la SEC ID NO:47), que resulta en una supresión de un residuo de glutamina dentro de la proteina ZmDGATl-2 (ASK) , es representado como ocurre dentro del codón para el residuo de glutamina que corresponde a la posición 67 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal. Sin embargo dado el estiramiento de cuatro residuos de glutamina de repetición dentro de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal, el cambio polimórfico (supresión de un codón CAG) podría ocurrir dentro del codón para el residuo de glutamina que corresponde a la posición 64 del ZmDGATl-2 de aceite normal (es decir, representado por la supresión de nucleótidos (nt) 190-192 de la secuencia codificante para ZmDGATl-2 de aceite normal expuesta en la SEC ID NO: 51, 49 o 53), posición 65 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal (es decir, representada por la supresión de nt 193-195 de la SEC ID NO: 51, 49 o 53), posición 66 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal (es decir, representada por la supresión de nt 196-198 de la SEC ID N0:51, 49 o 53), o posición 67 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal (es decir, representada por la supresión de nt 199-201 de la SEC ID NO: 51, 49 o 53, como se muestra aquí) . También, en esta alineación, el cambio polimórfico (inserción de un codón TTC dentro de la secuencia codificante ZmDGATl-2 (ASK) expuesta en la SEC ID NO: 47) que resulta en una inserción del residuo de fenilalanina dentro de la proteina ZmDGATl-2 (ASK) , es representado como ocurre entre el codón para el residuo fenilalanina que corresponde a la posición 469 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal y el codón para el residuo serina que corresponde a la posición 470 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal. Sin embargo, dado el estiramiento de tres residuos de fenilanalina de repetición dentro de la proteina ZmDGATl-2 (ASK) , el cambio polimórfico (inserción de un codón TCC) , podría ocurrir entre el último nucleótido del codón para el residuo triptofano que corresponde a la posición 467 y el primer nucleótido del codón para el residuo fenilalanina que corresponde a la posición 468 de la proteína ZmDGATl-2 de aceite normal (es decir, entre los nucleótidos (nt) 1401 y 1402 de la secuencia codificante para ZmDGATl-2 de aceite normal, expuesta en la SEC ID NO: 51, 49 o 53), entre el último nucleótido del codón para el residuo fenilalanina que corresponde a la posición 468 y el primer nucleótido del codón para el residuo fenilalanina que corresponde a la posición 469 de la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal (es decir, entre nt 1404 y 1405 de la SEC ID NO:51, 49 o 53), o entre el último nucleótido del codón para el residuo de fenilalanina que corresponde a la posición 469 y el primer nucleótido del codón para el residuo serina que corresponde a la posición 470 de la proteina de aceite normal ZmDGATl-2 (es decir, entre nt 1407 y 1408 de la SEC ID NO:51, 49 o 53, como se muestra aqui) . La Figura 29 muestra los resultados de análisis filogénico de DGATs y secuencias relacionadas. El análisis filogénico se realizó usando el programa PHYLIP (J. Felsenstein, University of Washington) y exhibido usando el programa TreView (Página (1996) Computer App. Biosci. 12:357-358). Los números de acceso son proporcionados para secuencias públicas. Las secuencias propietarias están indicadas por los nombres de clon EST o por nombres de genes Unicorn (PCOs). La Figura 30 muestra la alineación de secuencia de aminoácido de DGATs y aciltransferasas relacionadas. Se usa el programa Vector NT1 para alineaciones múltiples con el método CLUSTALW (Higgins et al., (1994; Nucleic Acid Res. 22:4673-4680). Los cuadros más grandes (numerados 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 y 17) indican dominios de secuencia conservados en todas las plantas DGATI. Los dos cuadros más pequeños (numerados 6 y 18), indican los dominios de secuencia únicos a todos los miembros del subgrupo DGAT1-2. La Figura 31 proporciona una alineación de la proteina ZmAAPl con otras proteínas conocidas. La Figura 32 proporciona una alineación de la proteína ZmPESP con otras proteínas conocidas. La Figura 33 proporciona una alineación de la proteína ZmS24 con otras proteínas conocidas. La Figura 34 proporciona una alineación de la proteína ZmABCT con otras proteínas conocidas. La Figura 35 proporciona una alineación de secuencia de varios miembros de la familia del activador transcripcional HAP3. La alineación proporciona una secuencia consenso y también resume los dominios A, B y C. La Figura 36 proporciona un alineación de secuencia de varios dominios tipo B LEC-1 (sombreado ligero) y dominios tipo B no LEC1 (sombreado oscuro) . La Figura 37 ilustra el mapeo final de QTL6. El QTL6 de ácido oleico alto/aceite alto, fue previamente mapeado a una región de aproximadamente 195 kb, que contiene cinco genes. Para mapear QTL6, además, se desarrollaron ocho nuevos marcadores SNP (QTL6SNP7, 8, 9, 13, 14, 15, 16 y 17) dentro de esta región, basados en las secuencias Mol7 BAC (no se muestran todos los marcadores) . Aproximadamente 4,000 BC5S1 semillas segregadas para QTL6 se plantaron en macetas pequeñas y se hicieron crecer en invernadero. Las plántulas fueron genotipadas por marcadores BAC17 y BAC32 para identificación de recombinantes entre DGAT1-2 y los genes transportadores ABC como PDR. Un total de 90 plantas recombinantes fueron identificadas y fueron además genotipadas por los nuevos marcadores ?SNP para identificar la ubicación precisa de cruzas. Las plantas recombinantes fueron transferidas a macetas regulares y auto-polinizaron para producir semillas BC5S2. Se obtuvieron datos de ácido oleico y aceite a partir de 4 vehículos recombinantes críticos como se describe en los ejemplos aquí abajo. La Figura 38 muestra la concentración de aceite de embrión (A) , concentración de aceite de semilla (B) , concentración de ácido oleico (C) , y concentración de ácido linoleico (D) para plantas de maíz transgénico para el alelo ASKC28IB1 o EF09B de DGAT1-2. Las semillas TI segregadas se clasificaron como granos de maíz nulos o transgénicos usando fluorescencia roja como un marcador.

Los métodos para análisis de aceite y perfilado de ácidos grasos se describen en los ejemplos aquí abajo. El % de cambio se refiere a la diferencia entre las semillas positivas a fluorescencia y semillas negativas a fluorescencia en lineas transgénicas o semillas ASKC21B1 homocigotas contra EF09B homocigotas en los BC4S2 NILs. Los datos transgénicos representan promedios de 10 eventos, 10 transgénicas y 10 semillas nulas analizadas por evento. Los datos BC4S2 representan promedios de 5 ASKC28IB1 homocigotos y 5 EF09B NILs homocigotos, 10 semillas por linea analizadas. La Figura 39 muestra los resultados de un ensayo de actividad DGAT (A) y acumulación TAG en células de levadura (B) . ASK, el alelo original de ADNc DGAT1-2 aislado del precursor ASKC28IB1 ( ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO:47). EF09B, el alelo original de ADNc DGATl-2 aislado de EF09B precursor ( ZmDGATl-2 (EF09B) de la SEC ID NO:51). ASK-F, alelo ASKC28IB1 (SEC ID NO: 7) con el codón para el residuo F469 del polipéptido codificado ( ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO: 48), suprimido. EF09B, alelo EF09B (SEC ID NO: 51) con una inserción de un codón TTC entre el codón para F469 y el codón para S470 de la SEC ID NO: 52 para restaurar el residuo de fenilalanina que corresponde a la inserción F469 en ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO: 48. Los métodos para el ensayo DGAT y medición de cantidad TAG son como se describe en el ejemplo aquí abajo. Los datos de actividad DGAT son los promedios de cuatro repeticiones. Los datos TAG son los promedios de tres repeticiones. La Figura 40 muestra la distribución de alelo DGATl-2 en parentales de maíz seleccionado. Los contenidos de ácido oleico y aceite de embrión para 73 parentales seleccionados, se determinaron como se describe. El ADN se extrajo a partir de discos de hoja usando plántulas de aproximadamente 3 semanas de edad. Los cebadores DGATl-2 (SEC ID NOs:124/125 y 126/127), se usaron para amplificar por PCR fragmentos que abarcan los tres cambios de aminoácido a la región del N-término de DGATl-2 (ASK) (es decir, V45G; P55S; y la supresión Q64, Q65, Q66 o Q67) o la inserción de fenilalanina en la posición 467, 468 o 469 en el C-término de DGATl-2 (ASK) . Los fragmentos de PCR se secuenciaron para determinar los alelos. La Figura 41 demuestra que QTL6 (DGATl-2) y FAD2 son aditivos en incrementar el contenido de ácido oleico. QTL6+/+, alelo ASKC28IB1 homocigoto; QTL6-/-, alelo EF09B 'homocigoto; FAD2 +/+, alelo favorable homocigoto; FAD2-/-, alelo no favorable homocigoto. La concentración de ácido oleico se determinó usando extracción de hexano y GC como se describe en los ejemplos aquí abajo. El residuo de semilla restante a partir de la extracción de hexanos, se usó para el aislamiento de ADN con Kit Mini PLant DNeasy Qiagen's (Catálogo No. 69104). Los alelos DGAT1-2 y FAD2 se determinaron por amplificación de PCR especifica del gen y análisis de marcador CAP.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención será ahora descrita más completamente aquí posteriormente, con referencia a los ejemplos acompañantes en los cuales, algunas pero no todas las modalidades de la invención se muestran. Sin embargo, esta invención puede ser incluida en muchas diferentes formas y no debe ser construida como limitada a las modalidades expuestas en la presente; preferentemente, estas modalidades están propuestas ya que esta descripción satisfacerá requerimientos legales aplicables. Los mismos números se refieren a elementos similares de principio a fin. Muchas modificaciones y otras modalidades de la invención expuesta en la presente, entrarán en mente a un experto en la técnica a la cual pertenece esta invención, teniendo el beneficio de las enseñanzas presentadas en las descripciones mencionadas anteriormente. Por lo tanto, se entiende que la invención no está limitada a las modalidades especificas descritas y que las modificaciones y otras modalidades están propuestas para estar incluidas dentro del campo de las reivindicaciones adjuntas. Aunque términos específicos son empleados en la presente, son usados en un sentido descriptivo y general solamente y no para propósitos de limitación. Los artículos "un" y "uno", son usados en la presente para referirse a uno o más de uno (es decir, al menos uno) de los objetos gramaticales del artículo. Por medio del ejemplo, "un elemento" significa uno o más de un elemento .

I. Revisión Un "locus de rasgo cuantitativo" o "QTL", se refiere a una ubicación genéticamente definida para una colección de uno o más genes (alelos), que contribuyen a una característica observada. La presente invención se ha desarrollado cerca de líneas isogénicas para QTL6, la cual es un QTL6 de aceite prominente, y ha demostrado que el QTL6 es un QTL principal que controla las concentraciones de aceite de embrión y concentraciones de ácido oleico, y de este modo, la relación de ácido oleico/ácido linoleico. Varios métodos y composiciones para la reproducción y manipulación de QTL6 se proporcionan. Se proporcionan composiciones comprenden nuevos loci marcadores que segregan con QTL6, y métodos para emplear estos marcadores en programas de reproducción de maíz asistidos por marcador, para identificar plantas de maíz o germoplasmas que tienen un contenido incrementado de aceite, un contenido incrementado de ácido oleico, o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. La presente invención además mapea el QTL6 a una región de aproximadamente 195 kb que comprende, estructuras lectoras abiertas múltiples, las cuales son caracterizadas en más detalle abajo. Los polinucleótidos y polipéptidos asociados con QTL6 pueden ser usados en varios métodos, para incrementar el contenido de aceite y/o el contenido de ácido oleico en una planta de interés, y/o incrementar el contenido de ácido oleico con relación al contenido de ácido linoleico, y de este modo, proporciona una relación superior de ácido oleico/ácido linoleico. De interés particular a la presente invención, son nuevos loci de marcadores que están asociados con un fenotipo de aceite alto y/o ácido oleico alto y/o ácido oleico alto/ácido linoleico bajo, y los cuales genéticamente segregan con una región de QTL6 que es flanqueada por una primera secuencia de limite que comprende los nucleótidos 1-20 de la SEC ID NO: 2 de la presente (referida como el "limite BAC05") y una secuencia limite que comprende los nucleótidos 477-496 de la SEC ID NO: 46 de la presente (referida como el "limite MZA8135") . También de interés a la presente invención están nuevos marcadores loci mapeados dentro de una región definida adicionalmente dentro de esta región QTL6, en donde la región definida adicionalmente comprende una primera secuencia de limite que comprende los nucleótidos 1-20 de la SEC ID NO: 6 (referida como el "limite izquierdo BAC18 QTL6"; véase Figura 6) y una segunda secuencia limite que comprende los nucleótidos 482-501 de la SEC ID NO: 14 (referida como el "limite derecho BAC29 QTL6"; véase Figura 6) . De interés adicional de la presente invención, está un nuevo locus marcador mapeado dentro de una segunda región definida además dentro de esta región QTL6, en donde la segunda región definida adicional comprende una primera secuencia limite que comprende los nucleótidos 1-20 de la SEC ID NO: 10 (referida como el "limite izquierdo BAC22 QTL6"; véase Figura 8) y una segunda secuencia limite que comprende los nucleótidos 488-507 de la SEC ID NO: 4) (referida como el limite derecho BAC17 QTL6) . Por consiguiente, la presente invención proporciona nuevas técnicas de reproducción, plantas y partes de planta, junto con nuevos polinucleótidos y polipéptidos , cada uno de los cuales puede ser empleado para incrementar el contenido de aceite, incrementar el contenido de ácido oleico, y/o incrementar la relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de una planta o parte de planta. Como se usa en la presente, "incrementar el contenido de aceite", incluye cualquier incremento en el nivel de aceite en la planta o parte de planta, por ejemplo, en la semilla o grano de maíz y/o el embrión o germen, o cualquier combinación de los mismos. En modalidades especificas, el incremento en aceite ocurre en el germen y/o en el grano de maiz. Por ejemplo, el contenido de aceite incrementado puede comprender un incremento en el nivel de aceite total en la planta o parte de planta de aproximadamente 0.1%, 0.5%, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 120%, o mayor, cuando se compara con una planta de control o parte de planta. Alternativamente, el nivel incrementado de aceite puede incluir aproximadamente unas 0.5-veces, 1-vez, 2-veces, 4-veces, 8-veces, 16-veces, 32-veces, o mayor incremento total en el nivel de aceite en la planta o la parte de planta cuando se compara con una planta de control o parte de planta. Los niveles de varios constituyentes en el aceite también pueden ser modulados usando los varios métodos y composiciones de la invención. Por ejemplo, "incrementar el contenido de ácido oleico", incluye cualquier incremento en el nivel de ácido oleico o cualquier alteración en la relación de ácido oleico a otros constituyentes de aceite en una planta o parte de planta, por ejemplo, la semilla o grano de maiz y/o el germen o embrión, o cualquier combinación de los mismos. Por ejemplo, incrementar el contenido de ácido oleico puede comprender un incremento en el nivel de ácido oleico total de aproximadamente 0.1%, 0.5%, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 120%, o mayor, cuando se compara con una planta de control o parte de planta. Alternativamente, el nivel incrementado de ácido oleico puede incluir aproximadamente una 0.5 veces, 1 vez, 2 veces, 4 veces, 8 veces, 16 veces, 32 veces, o mayor incremento en nivel de ácido oleico en la planta o parte de la planta cuando se compara con una planta de control o parte de planta. El enlace único delta-12 de ácido oleico (C18:l), puede ser convertido en un enlace doble conjugado, de este modo produciendo ácido linoleico (C18:2). Por lo tanto, el incremento en contenido de ácido oleico puede además, modular la relación de ácido oleico a ácido linoleico en una planta o parte de planta. De esta manera, los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para incrementar la relación de ácido oleico/ácido linoleico en una planta o parte de planta. Por ejemplo, "incrementar la relación de ácido oleico/ácido linoleico", incluye cualquier incremento aumentado en la relación de ácido oleico a ácido linoleico dentro de una planta o parte de planta, por ejemplo, la semilla o el grano de maíz y/o el embrión o germen, o cualquier combinación de los mismos. De este modo, por ejemplo, la relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de una planta o parte de planta, puede ser incrementada por aproximadamente 0.1%, 0.5%, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 120%, o mayor, cuando se compara con una planta de control o parte de planta. Alternativamente, la relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico puede incluir aproximadamente unas 0.5-veces, 1-vez, 2-veces, 4-veces, 8-veces, 16-veces, 32-veces o mayor incremento en la relación de ácido oleico/ácido linoleico en la planta o parte de planta cuando se compara con una planta de control o parte de planta. Los métodos de ensayo para determinar los niveles de ácido oleico y ácido linoleico son conocidos en la técnica. Véase por ejemplo, Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20050160494, aquí incorporada por referencia en su totalidad. Usando los métodos y composiciones descritos en la presente, la producción total de aceite puede ser incrementada y/o las características del aceite pueden ser modificadas. El aceite y/o constituyentes de aceite, tales como ácido oleico y ácido linoleico, pueden ser medidos por cualquier método conocido en la técnica. Para hacer una determinación de la cantidad de aceite en semillas y/o la cantidad de ácidos grasos específicos presentes en el aceite y sus concentraciones respectivas, semillas maduras pueden ser trituradas (por ejemplo, en una prensa hidráulica) , y el aceite endógeno puede ser fácilmente extraído con hexano o por otras técnicas adecuadas de conformidad con procedimientos conocidos en la técnica. De manera similar, cualquier tejido de planta puede ser molido o triturado y después extraído con hexano para recuperar aceite. El hexano puede ser separado del aceite por evaporación, y la cantidad de aceite restante determinada. Los ácidos grasos pueden ser determinados después de la transmetilación . Los metil ésteres resultantes de los ácidos grasos pueden ser separados, y sus concentraciones determinadas por el uso de cromatografía de gas capilar de conformidad con procedimientos de operación estándares conocidos en la técnica. Además, la cuantificación de contenido de aceite de semillas se puede realizar con métodos convencionales, tales como análisis infrarrojo cercano (NIR) , formación de imágenes por resonancia magnética nuclear (RMN) , extracción de Soxhlet, extracción acelerada de solvente (ASE), extracción de microondas, y extracción de fluido súper crítico. La espectroscopia infrarroja cercana (NIR) , ha llegado a ser un método estándar para selección de muestras de interés, siempre que la muestra de interés haya sido receptiva a esta técnica. Las muestras estudiadas incluyen, trigo, maíz, soya, cañóla, arroz, alfalfa, avena, y otros. Los métodos para medir aceite y constituyentes de aceite en granos de maíz, germen disectado y endosperma, son descritos, por ejemplo, en los documentos O 2005/003312 y WO 06/062129, aquí incorporados por referencia en su totalidad.

II. Caracterización de QTL6 (A) Loci Marcadores para QTL6 Se proporcionan composiciones que comprenden marcadores para el locus LQT6. Como se usa en la presente, un "marcador genético", es cualquier diferencia fenotipica morfológica, bioquímica o a base de ácido nucleico que revela un polimorfismo de ADN. Ejemplos de marcadores genéticos incluyen pero no se limitan a, RFLP (polimorfismos de longitud de fragmento de restricción) , RAPDs (ADN polimórfico amplificado aleatorio) , polimorfismos de nucleótido único (SNPS), alozimas, SSRs (repeticiones de secuencia simple) , y AFLPs (polimorfismos de longitud de fragmento de amplificación) . El término "locus marcador", se refiere a una localización genéticamente definida de un polimorfismo de ADN. Tales loci marcadores pueden ser usados como un punto de referencia cuando se identifican loci genéticamente ligados . Un "mapa genético", es una descripción de las relaciones de enlace genético entre loci en uno o más cromosomas (o grupos de enlace) dentro de especies dadas, en general representadas en una forma diagramática o tabular. " apeado", es el proceso de definir las relaciones de enlace de loci a través del uso de marcadores genéticos, poblaciones que segregan para los marcadores, y principios genéticos estándares de frecuencia de recombinación. Una "ubicación de mapa" es una ubicación asignada en un mapa genético, con relación a los marcadores genéticos ligados, en donde un marcador especificado se puede encontrar dentro de una especie dada. Los métodos y composiciones de la invención requieren detección de al menos, un polimorfismo o cualquier combinación de los polimorfismos dentro de un locus de marcador favorable descrito en la presente. El término "locus de marcador favorable", se refiere a un locus marcador que genéticamente segrega con la región QTL6 descrita en la presente y la cual está asociada con el rasgo fenotipico de planta deseable de contenido alto de aceite, y/o contenido alto de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico dentro de la planta o una o más partes de plantas de la misma. Ejemplos no limitantes de secuencias que corresponden a estos loci marcadores favorables se proporcionan en las SEC ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, y 51, con al menos un polimorfismo contenido ahí. Ejemplos de polimorfismos específicos dentro de cada locus de marcador favorable de la región QTL6 se identifican en la Tabla 2 (loci marcadores no codificantes) y Tabla 3 (locus marcador que comprende la secuencia codificante) en los Ejemplos 2 y 4 aquí posteriormente. Ejemplos no limitantes de secuencias para loci marcador favorable de esta invención se exponen en las SEC ID NOS: , 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, y 47, y el(los) polimorfismo ( s ) respectivo ( s ) que ocurren dentro de estos loci marcadores favorables, se muestran en las Tablas 2 y 3 en la presente posteriormente. Véase también las alineaciones mostradas en las Figuras 7-29 y 31. Como se usa en la presente, un "alelo de locus marcador" es uno de una pluralidad de secuencias de nucleótido polimórfico a un locus marcador. Para propósitos de la presente invención, un "alelo de un locus marcador favorable de la invención", comprende al menos uno de los siguientes cambios polimórficos encontrados en el locus marcador favorable. Por consiguiente, un alelo del locus marcador favorable puede tener al menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o mayor de los nucleótidos polimórficos encontrados en el locus marcador favorable descrito en la presente. De este modo, un alelo de un locus marcador puede tener al menos, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad de secuencia con el locus marcador favorable descrito en la presente. En el contexto de la presente invención, un locus marcador puede ser asociado con otro locus marcador, con algún otro locus genético (por ejemplo, un locus de aceite alto y/o un locus de ácido oleico alto, tal como QTL6) , y/o con un rasgo (es decir, contenido de aceite alto, contenido de ácido oleico alto, y/o relación alta de ácido oleico/ácido linoleico) . Por "asociado con", se pretende que el locus marcador y el segundo locus marcador o el locus marcador y el locus genético, estén en el mismo grupo enlazante y estén en desequilibrio de enlace entre si. "Desequilibrio de enlace", se define como la segregación no aleatoria de alelos en dos o más loci. Desequilibrio de enlace por lo tanto, describe una situación en la cual, la combinación de alelos o marcadores genéticos ocurre más frecuentemente en una población que podría esperarse de una formación aleatoria de haplotipos de alelos basados en sus frecuencias. El término "genéticamente ligado", se refiere a loci genéticos que están en desequilibrio de enlace y han sido estadísticamente determinados por no clasificar independientemente. Los loci genéticamente ligados, se co-segregan más de 50% del tiempo. Como se usa en la presente, un marcador que está genéticamente ligado a otro marcador del locus genético, estará en el mismo grupo enlazante y típicamente dentro de 10 centimorganos (cM) entre sí. Por ejemplo, un locus marcador de la presente invención está asociado con el rasgo de contenido alto de aceite y/o contenido alto de ácido oleico y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico si el marcador y la secuencia que confiere el rasgo fenotípico de alto contenido de aceite y/o alto contenido de ácido oleico y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico no son más de 10 cM, 9 cM, 8 cM, 7 cM, 6 cM, 5 cM, 4 cM, 3 cM, 2 cM, 1 cM, 0.75 cM, 0.5 cM, 0.25 cM o menos, aparte en el mismo grupo enlazante. Esto es, los dos elementos genéticos asociados se someten a recombinación durante la meiosis entre sí, a una frecuencia de menos de o igual a aproximadamente 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.75%, 0.5%, 0.25% o menos. Cada uno de los marcadores identificados se espera esté en proximidad genética o física cercana (que resulta en el enlace físico y/o genético) , a un elemento genético (QTL6) , que contribuye a un contenido incrementado de aceite y/o contenido incrementado de ácido oleico y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. Como se usa en la presente, el término "estrechamente ligado", significa que la recombinación entre dos loci ligados ocurre con una frecuencia de aproximadamente 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.75%, 0.5%, 0.25% o menos. En otras palabras, loci estrechamente ligados co-segregan al menos, aproximadamente 90% del tiempo. De este modo, loci marcadores estrechamente ligados de la presente invención, son suficientemente próximos al rasgo que confiere contenido incrementado de aceite y/o contenido incrementado de ácido oleico y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico que puede ser usada como un indicador para el rasgo mismo. En una modalidad, el locus marcador favorable generalmente ligado a QTL6, comprende los polinucleótidos expuestos en cualquiera de las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, y 45. Los loci marcadores favorables expuestos en las SEC ID NOs : 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, y 45, las cuales están asociadas con el rasgo fenotipico de alto contenido de aceite y/o alto contenido de ácido oleico y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, están alineadas en las Figuras 7-29 con la secuencia para el locus marcador correspondiente para la linea parental de maiz EF09B (aceite normal) . La presente invención además proporciona alelos para el loci marcador genéticamente ligado a QTL6. En otras modalidades, el locus marcador favorable es un ácido nucleico expresado que está asociado con el rasgo fenotipico de alto contenido de aceite deseable y/o alto contenido de ácido oleico y/o relación incrementada de ácido linoleico/ácido oleico. En todavía otras modalidades, el locus marcador favorable está dentro del polinucleotido que codifica DGAT, por ejemplo, dentro del polinucleotido que codifica DGAT1-2. Por ejemplo, el locus marcador favorable puede comprender un polimorfismo en el polinucleotido que codifica ZmDGATl-2 (por ejemplo, la secuencia codificante expuesta en la SEC ID NO: 51), en donde el cambio polimórfico a la secuencia codificante ZmDGATl-2, resulta en una sustitución del residuo glicina para el residuo serina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO: 52; una sustitución del residuo serina para el residuo prolina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 52; una supresión del residuo glutamina que corresponde a aquella en la posición de aminoácido 64, 65, 66 o 67 de la SEC ID NO: 52; y/o una inserción de un residuo de fenilalanina en una posición localizada entre un par de residuos, en donde el par de residuos corresponde a un par de residuos dentro de la SEC ID NO: 52, seleccionado del grupo que consiste de: (a) el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52, (b) el residuo fenilalanina en la posición del aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52, y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52, y (c) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 2. Un ejemplo no limitante de un locus marcador favorable dentro de un polinucleótido que codifica DGAT1-2, es una secuencia que comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 7, la cual codifica la proteina ZmDGATl-2 (ASK) expuesta en la SEC ID NO: 48. Los cambios polimórficos específicos a la secuencia codificante para la proteína ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO: 48, se ejemplifican en la Figura 28 (véase también la descripción para esta figura proporcionada en la presente anteriormente) , y descrita en la Tabla 3 aquí posteriormente. Véase también la alineación de la proteína ZmDGATl-2 (ASK) con la proteína ZmDGATl-2 de tres líneas parentales de maíz de aceite normal (Figura 27) y la descripción para esta figura proporcionada en la presente anteriormente . Uno de habilidad en la técnica, apreciará que los loci marcadores proporcionados y discutidos en la presente, son meramente ejemplares y que numerosos otros loci marcadores ligados, pueden ser identificados basados en el enlace genético y/o proximidad física en un cromosoma al loci marcador proporcionado en la presente. De este modo, las composiciones y métodos de la presente invención descritos en la presente, no están limitados al loci marcador favorable que comprende las SEC ID NOS: , 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, y 51, con al menos un polimorfismo contenido ahi, o a los ejemplos de secuencias para estos loci marcadores favorables como se expone en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, y 47, sino también incluye marcadores adicionales ligados a estos. Adicionalmente , mientras alelos favorables del loci marcador ejemplar están descritos en la presente, será fácilmente apreciado por aquellos expertos en la técnica, que alelos favorables de loci adicionales ligados al loci marcador descrito en la presente, pueden ser determinados sin experimentación indebida y empleados en las composiciones y métodos de la presente invención. Por consiguiente, un locus marcador ligado a loci marcadores descritos aquí, y localizado en un segmento de cromosoma identificado por el loci marcador de 1 invención, puede también ser usado para identificar tal segmento de cromosoma, y definir el genotipo de una planta de interés, o seleccionar formas alélicas favorables de un segmento de cromosoma correlacionado con el rasgo fenotipico de alto contenido de aceite y/o alto contenido de ácido oleico y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. Al menos uno de los polimorfismos presentes en uno o más loci marcadores favorables descritos en la presente, puede ser usado para identificar una primer planta de maíz o un primer germoplasma de maíz que tiene un rasgo fenotipico de contenido incrementado de aceite, y/o contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. De esta manera, la presente invención proporciona tal método de identificación, que comprende detectar en la primera planta de maíz o el primer germoplasma de maiz, al menos un polimorfismo dentro de uno o más de los loci marcadores favorables que están asociados con el rasgo fenotipico de contenido incrementado de aceite, el contenido incrementado de ácido oleico, y/o la relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. En modalidades especificas, los polimorfismos marcadores de más de un locus marcador, pueden ser empleados. De este modo, aspectos de la invención usan una colección de loci marcadores diferentes. El número de loci marcador en tal colección variará y será por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mayor . Se conocen en la técnica varios métodos para detectar el loci marcador favorable de la presente invención. Detectar al menos un polimorfismo del loci marcador favorable puede incluir, pero no se limita a, detectar uno o más de los polimorfismos por polimorfismo de longitud de fragmento de restricción (RFLP) , extensión de base única, electroforesis , alineación de secuencia, hibridización de oligonucleótido especifico alélico (ASO) , RAPD, detección de secuencias variables amplificadas del genoma de planta, detección de repeticiones de secuencia simple (SSRs), y detección de polimorfismos de nucleótidos únicos (SNPs), etc. Los ensayos marcadores incluyen extensión base como se describe en la Patente Estadounidense No. 6,013,431, y discriminación alélica, en donde la actividad de endonucleasa libera un tinte reportero a partir de una sonda de hibridación como se describe en la Patente Estadounidense No. 5,538,848, descripciones de ambas las cuales se incorporan en la presente por referencia. Los cebadores de amplificación para amplificar loci marcadores favorables y sondas marcadoras adecuadas para detectar loci marcadores favorables, se proporcionan. Las Figuras 7-29 y las SEC ID NO: 68-115, proporcionan cebadores específicos que pueden ser usados para amplificar el loci marcador respectivo de la invención. Uno de habilidad en la técnica, reconocerá que otras secuencias en cualquier lado de los cebadores dados, pueden ser usadas en lugar de los cebadores dados, tan pronto como los cebadores puedan amplificar el alelo deseado de un locus marcador favorable de la invención. Además, las sondas marcadoras a estos loci favorables, también se proporcionan. De este modo, la presente invención no está limitada a los cebadores y sondas específicamente mencionados en la presente . En una modalidad, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que comprende, al menos 12 nucleótidos consecutivos, en donde dicha secuencia de 12 nucleótidos consecutivos comprende al menos, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia al complemento de un alelo de un locus marcador favorable que comprende una secuencia expuesta en la SEC ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, o 47, en donde dicho polinucleótido puede detectar un polimorfismo en un locus marcador favorable asociado con alto contenido de aceite, alto contenido de ácido oleico, y/o alta relación de ácido oleico/ácido linoleico. En algunas modalidades, el polinucleótido aislado comprende al menos, 12 nucleótidos consecutivos de la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, o 47. En otras modalidades, el polinucleótido aislado comprende una etiqueta detectable. La etiqueta detectable puede ser, por ejemplo, un elemento radioactivo o un tinte. En algunas modalidades, el cebador o sonda de la invención, además comprende una etiqueta fluorescente y un apagador, por ejemplo, para uso en los ensayos de sonda de hibridización del tipo conocido como análisis Taqman, disponible de Applied Biosystems (Foster City, California) .

(B) Reproducción de Planta El loci marcador favorable de la invención, puede ser usado en una selección asistida por marcador, de plantas que tienen el fenotipo alto en aceite deseado, y/o el fenotipo alto de ácido oleico, y/o el fenotipo de ácido oleico alto/ácido linoleico bajo (es decir, relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico) , y reproducción subsecuente de estas plantas seleccionadas para obtener lineas genéticas de plantas y/variedades de plantas que tienen el fenotipo de aceite alto deseado, y/o el fenotipo de ácido oleico alto, y/o el fenotipo de ácido oleico alto/ácido linoleico bajo. El término "germoplasma" , se refiere a un individuo, un grupo de individuos, o un clon que representa un genotipo, variedad, especies o cultivos, o el material genético del mismo. Un "genotipo", es la constitución genética de un individuo (o grupo de individuos) en uno o más loci genéticos. El genotipo es definido por los alelos de uno o más loci conocidos que el individuo ha heredado de sus progenitores. Un "haplotipo", es el genotipo de un individuo en una pluralidad de loci genéticos. Típicamente, los loci genéticos descritos por un haplotipo, son físicamente y genéticamente ligados, es decir, en el mismo segmento de cromosoma. Un individuo es "homocigoto" , si el individuo tiene solamente un tipo de alelo en un locus dado (por ejemplo, un individuo diploide con dos copias del mismo alelo en un locus) . Un individuo es "heterocigoto" , si más de un tipo de alelo está presente en un locus dado (por ejemplo, un individuo diploide con una copia cada uno de dos alelos diferentes). El término "homogeneidad", indica que miembros de un grupo tienen el mismo genotipo en uno o más loci especificados. Por el contrario, el término "heterogeneidad", es usado para indicar que individuos dentro del grupo, difieren en genotipo en uno o más loci específicos . Una "línea" o "cepa", es un grupo de individuos de linaje idéntico que son en general parentales en algún grado y que son generalmente isogénicos o casi isogénicos. El término líneas "casi isogénicas", se refiere a líneas que son genéticamente similares entre sí, excepto que en uno o un número de loci genéticos (por ejemplo, en 1, 2, o aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10 loci genéticos especificados). Estos pueden ser creados como se describe para sublineas a base de marcador o basados en diferencias por cualquier rasgo cualitativo que pueda servir como un marcador genético efectivo. El porcentaje de similitud entre lineas casi isogénicas, es una función de la similitud de los padres de la cruza original y la generación en la cual se realiza la auto-polinización. En promedio, la relación entre miembros de una linea parental dada incrementa 50% con cada ciclo de consanguinidad, debido a un incremento del 50% en homocigocidad en cada ciclo de consanguinidad. El porcentaje de similitud puede ser más exactamente determinado con marcadores genéticos que recorren el genoma. En algunos casos, las lineas casi isogénicas difieren entre si en un locus genético definido. Una "linea selecta" o "cepa selecta", es una linea agronómicamente superior que ha resultado de muchos ciclos de reproducción y selección para desempeño agronómico superior. De manera similar, un "germoplasma selecto", es un germoplasma agronómicamente superior, típicamente derivado de y/o capaz de dar origen a una planta con desempeño agronómico superior, tal como una línea selecta recientemente desarrollada o superior de maíz . Las líneas de maíz parentales son típicamente desarrolladas para uso en la producción de híbridos de maíz y para uso como germoplasma en poblaciones de reproducción, para la creación de nuevas y distintas líneas de maíz parentales. Las líneas parentales de maíz son a menudo, usadas como objetivos para la introgresión de nuevos rasgos a través de la reproducción tradicional y/o técnicas de introgresión molecular. Las líneas de maíz parentales necesitan ser altamente homogéneas, homocigotas, y reproducibles para ser empleadas como padres de híbridos comerciales. Muchos métodos analíticos están disponibles para determinar la homocigocidad y estabilidad fenotípica de líneas parentales. La frase "plantas híbridas", se refiere a plantas las cuales resultan de una cruza entre individuos genéticamente diferentes. El término "cruzado" o "cruza", en el contexto de esta invención, significa la fusión de gametos, por ejemplo, vía polinización para producir la progenie (es decir, células, semillas o plantas) en el caso de plantas. El término abarca tanto cruzas sexuales (la polinización de una planta por otra) y, en el caso de plantas, autofecundación (auto-polinización, es decir, cuando el polen y óvulo son de la misma panta) . El término "introgresión", se refiere a la transmisión de un alelo deseado de un locus genético de un antecedente genético a otro. En un método, los alelos deseados pueden ser sometidos a introgresión a través de una cruza sexual entre dos padres, en donde al menos, uno de los padres tiene el alelo deseado en su genoma . El alelo deseado puede ser un locus marcador, un QTL, un transgen, o similar. En algunas modalidades de la invención, el alelo deseado es un alelo de un locus marcador favorable descrito en la presente. i. Selección Asistida por Marcador "Selección Asistida por Marcador" o "MAS", se refiere a la práctica de selección para fenotipos deseados entre miembros de una población de reproducción usando marcadores genéticos. La meta última de cualquier programa de reproducción es combinar tantos alelos favorables como sea posible en variedades selectas de germoplasma que son genéticamente superiores (con respecto a uno o más rasgos agronómicos) a sus ancestros. Los marcadores proporcionados en la presente identifican segmentos de cromosoma, es decir, regiones genómicas, y alelos (formas alélicas) de la región QTL6 que están asociadas con el rasgo fenotipico de aceite alto y/o ácido oleico alto y/o ácido oleico alto/ácido linoleico bajo. Por consiguiente, estos marcadores pueden ser usados para selección de plantas asistidas por marcador, por ejemplo, plantas de maíz, con el rasgo fenotipico de aceite alto deseado y/o ácido oleico alto y/o ácido oleico alto/ácido linoleico bajo (es decir, relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico) . Por ejemplo, en una cruza entre padres que complementan alelos favorables en el loci objetivo, la progenie puede ser seleccionada que incluye más alelos favorables que cualquiera de sus padres. La selección asistida por marcador (MAS) , que emplea los marcadores de la presente invención, y los segmentos de cromosoma que identifican, son empleados en el contexto de un programa de reproducción de maíz, para incrementar el contenido de aceite y/o contenido de ácido oleico y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de planta de la misma. La selección fenotipica para un rasgo de interés, tal como alto contenido de aceite, alto contenido de ácido oleico, o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico para grandes números de muestra, puede ser costosa, asi como también consumidora de tiempo. Además, la selección fenotipica sola es a menudo poco fiable debido a los efectos de epistaxis y contribuciones no genéticas (por ejemplo, ambientales), al fenotipo. La MAS ofrece la ventaja sobre la evaluación en campo que puede ser realizada en cualquier tiempo de años con respecto a la estación de crecimiento o etapa de desarrollo. Además, las MAS facilitan la evaluación de organismos que crecen en regiones disparadas o bajo diferentes condiciones. Un obtentor de habilidad ordinaria, que desea reproducir plantas con contenido incrementado de aceite, y/o contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, puede aplicar los métodos para MAS descrita en la presente, usando por ejemplo, los loci marcadores favorables ejemplares proporcionados en la presente o ligados al loci marcador localizado en los segmentos de cromosoma identificados por loci marcadores favorables proporcionados en la presente, para suministrar lineas de plantas con contenido incrementado de aceite, y/o contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. Los alelos marcadores genéticos, por ejemplo, los loci marcadores ejemplares expuestos en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, y 47 y alelos de los mismos, que comprenden uno o más polimorfismos respectivos identificados en las Tablas 2 y 3 aqui abajo, marcadores ligados, y QTL, que identifican los segmentos de cromosoma que abarcan elementos genéticos que son importantes para el alto contenido de aceite, alto contenido de ácido oleico, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, son usados para identificar plantas que contienen un genotipo deseado en uno o más loci, y que se espera, transfieran el genotipo deseado, junto con un fenotipo deseado a su progenie. Los alelos marcadores (o alelos QTL) , pueden ser usados para identificar plantas que contienen un genotipo deseado en un locus, o en varios loci ligados o no ligados (por ejemplo, un haplotipo) , y que podría esperarse transfiera el genotipo deseado, junto con un fenotipo deseado a su progenie. De manera similar, identificando plantas que carecen del alelo deseado, plantas con un fenotipo indeseable, por ejemplo, plantas con un fenotipo de aceite no alto y/o un ácido oleico no alto, o fenotipo de aceite normal (comparado con amarillo #2), pueden ser identificadas, y por ejemplo, eliminadas de cruzas subsecuentes. Se apreciará que para los propósitos de MAS, el término marcador puede abarcar tanto marcador como loci QTL, ya que ambos pueden ser usados para identificar plantas con un fenotipo deseado. Por ejemplo, la MAS puede ser usada para desarrollar líneas o cepas de maíz y germoplasma de maíz con alto contenido de aceite, alto contenido de ácido oleico, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, identificando formas alélicas favorables de segmentos de cromosoma mostrados por ser importantes, por ejemplo, que incluyen un elemento genético, para contenido alto de aceite y/o alto de ácido oleico. De esta manera, los loci marcadores favorables descritos en la presente, pueden ser empleados como indicadores para el rasgo de aceite alto y/o el rasgo de ácido oleico alto, y de este modo, ser indicadores para el rasgo fenotipico de ácido oleico alto/ácido linoleico bajo (es decir, relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico). Brevemente, las plantas de maíz o germoplasma, pueden ser seleccionadas por uno o más loci marcadores favorables o alelos de loci marcadores favorables que se correlacionan positivamente con el contenido alto contenido de aceite, alto contenido de ácido oleico, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, sin actualmente originar maiz a través de su ciclo de vida y realizar evaluaciones fenotipicas (es decir, medir el contenido alto de aceite y/o contenido oleico alto y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico). Como se discute anteriormente, la presente invención proporciona medios para identificar plantas, particularmente plantas de maiz, que tienen un contenido incrementado de aceite, y/o contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico por identificación de plantas que tienen un locus marcador favorable expuesto en las SEC ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, o 51, con al menos un polimorfismo ahí, por ejemplo, el locus marcador favorable descrito en las SEC ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, o 47, o un alelo del mismo que comprende uno o más de los polimorfismos identificados ahí (véase por ejemplo, Tabla 2 y Tabla 3 aquí posteriormente). De manera similar, en otras modalidades, las plantas de maíz pueden ser seleccionadas contra las que tengan uno o más loci marcadores que se correlacionan negativamente con contenido de aceite alto y/o ácido oleico alto y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. Además, estos loci marcadores pueden ser introgresados en cualquier antecedente genómico deseado, germoplasma, linea, variedad, etc., como parte del programa de selección asistida por marcador total, diseñada para incrementar el contenido de aceite y/o contenido de ácido oleico, o incrementar la relación de ácido oleico/ácido linoleico en maíz. En corto, en la selección asistida por marcador, se toma una muestra de tejido a partir de una primera planta de maíz o un primer germoplasma de maíz, y se selecciona para determinar si la primera planta de maíz o el primer germoplasma de maíz comprenden un locus marcador apropiado o alelo del mismo, que se correlaciona con el alto contenido de aceite y/o alto contenido de ácido oleico, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. Las plantas de maíz o germoplasma de maíz que tienen el loci marcador deseado, son seleccionadas y cruzadas con una segunda planta de maíz o germoplasma. En todavía otras modalidades, el loci marcador deseado o alelo del mismo, es introgresado en una segunda planta de maíz o un segundo germoplasma de maíz para producir una planta de maíz introgresada o germoplasma de maíz. En modalidades específicas, la planta de maíz introgresada o germoplasma, exhiben un contenido incrementado de aceite, un contenido incrementado de ácido oleico, o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, cuando se comparan con la segunda planta de maíz o germoplasma. Se apreciará que plantas positivas para uno o más loci marcadores favorables de la invención, pueden ser seleccionadas y cruzadas de conformidad con cualquier protocolo de reproducción relevante al programa de reproducción particular. Por consiguiente, la progenie puede ser generada de una planta seleccionada cruzando la planta seleccionada con una o más plantas adicionales seleccionadas en base al mismo marcador o un marcador diferente, por ejemplo, un marcador diferente que se correlaciona con alto contenido de aceite y/o alto contenido de ácido oleico, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, o un fenotipo diferente de interés, por ejemplo, resistencia a una enfermedad particular. Alternativamente, una planta seleccionada puede ser retrocruzada a uno o ambos padres. El retrocruzamiento es realizado usualmente para propósitos de introgresión de uno o algunos loci de un padre donador, por ejemplo, un padre donador que comprende germoplasma exótico, en un antecedente genético de otro modo deseable, a partir del padre recurrente (típicamente, un selecto) . A más ciclos de retrocruzamiento que se realizan, mayor la contribución genética del padre recurrente a la variedad resultante. Una planta seleccionada pude también ser de cruzamiento externo, por ejemplo, a una planta o línea no presente en su genealogía. Tal planta puede ser seleccionada de entre una población sometida a una ronda previa de análisis, o puede ser introducida en el programa de reproducción de novo. Una planta positiva para un marcador deseado, también puede ser auto-cruzada ("polinizada"), para crear una línea de reproducción verdadera con el mismo genotipo. ii. Uso de contenido de ácido oleico para monitorear y confirmar la presencia de QTL6 Como se indica en los ejemplos aquí abajo, la concentración de ácido oleico muestra un incremento más grande que el contenido de aceite dentro de las plantas de maíz que portan la región QTL6 de aceite alto/ácido oleico alto favorable, descrita en la presente. Este rasgo fenotípico puede ser usado para monitorear y confirmar la presencia de un locus marcador favorable de la invención, y de este modo, predecir si una planta de maíz o germoplasma de maíz tendrá el rasgo de contenido alto de aceite y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico deseable . En algunas modalidades, el locus marcador favorable a ser detectado está dentro del polinucleótido que codifica a DGAT, por ejemplo, dentro del DGAT1-2 que codifica al polinucleótido. De esta manera, el locus marcador favorable a ser detectado, puede comprender un polimorfismo en el polinucleótido que codifica a ZmDGATl-2 (por ejemplo, la secuencia codificante expuesta en la SEC ID NO: 51), en donde el cambio polimórfico a la secuencia codificante ZmDGATl-2, resulta en una sustitución del residuo glicina para el residuo serina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO: 52; una sustitución del residuo serina por el residuo prolina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 52; una supresión del residuo glutamina que corresponde a aquella en la posición de aminoácido 64, 65, 66 o 67 de la SEC ID NO: 52; y/o una inserción de un residuo fenilalanina en una posición localizada entre un par de residuos, en donde el par de residuos corresponde a un par de residuos dentro de la SEC ID NO:52, seleccionada del grupo que consiste de: (a) el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52, (b) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52, y (c) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52. Un ejemplo no limitante de un locus marcador favorable dentro de un polinucleótido que codifica DGAT1-2, es una secuencia que comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 47, la cual codifica la proteina ZmDGATl-2 (ASK) expuesta en la SEC ID NO: 8. De este modo, la presente invención proporciona un método para detectar la presencia de uno o más loci marcadores favorables de la invención, y de este modo, identificar la presencia de la región QTL6 descrita en la presente, dentro de una planta de maíz o germoplasma de maiz, en donde el método comprende determinar la concentración de ácido oleico de la planta o germoplasma, particularmente dentro de la semilla o embrión. De esta manera, una concentración de ácido oleico de semilla o embrión de al menos 35% (es decir, 35% o más del aceite de semilla o embrión es representado por ácido oleico) , podría ser predictivo de que la planta de maíz o germoplasma de maíz, probablemente comprendan uno o más loci marcadores favorables de la invención, y de este modo, la región QTL6 deseada definida en la presente, y así podría ser benéficamente continuada en el proceso de selección y reproducción. Alternativamente, una concentración de ácido oleico de semilla o embrión de menos de 35% (es decir, el ácido oleico representa menos de 35% del aceite de semilla o embrión) , podría ser predictivo de que la planta de maíz o germoplasma de maíz no portan la región QTL6 deseada dentro de su genoma . Esta etapa de selección de ácido oleico podría ser además, suplementada con selecciones genómicas para determinar la presencia de uno o más loci marcadores favorables de la región QTL6 descrita en la presente, y de este modo, la presencia de la región QTL6 desead. En tal ejemplo, la presencia de la región QTL6 deseada es confirmada detectando la presencia de la inserción de codón TTC dentro de la secuencia codificante ZmDGATl-2 que resulta en la inserción de Phc467, Phc468 o Phc469 , dentro de la proteína ZmDGATl-2 (ASK) . Esto se puede lograr, por ejemplo, por amplificación de un fragmento de ADN alrededor de este codón usando las SEC ID NOS: 126 y 127, como se describe en los Ejemplos 3 y 13 aquí abajo.

(C) Polinucleótidos y/o polipéptidos asociados con QTL6 La presente invención proporciona plantas o partes de plantas que tienen establemente incorporado en su genoma, un polinucleótido heterólogo que comprende al menos, una secuencia asociada alta en aceite y/o al menos una secuencia asociada con ácido oleico alto, operablemente ligada a un promotor activo en la planta o parte de planta, en donde la secuencia asociada alta en aceite o la secuencia asociada con ácido oleico alto, se deriva de una secuencia de nucleótido genómico genéticamente ligada con al menos, un alelo de uno o más loci marcadores favorables que están asociados con alto contenido de aceite y/o alto contenido de ácido oleico, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de planta. En algunas modalidades, los loci marcadores favorables son genéticamente ligados con una región QTL6 que es flanqueada por una primera secuencia limite que comprende los nucleótidos 1-20 de la SEC ID NO: 2, y una segunda secuencia limite que comprende los nucleótidos 477-496 de la SEC ID NO: 46. En otras modalidades, los loci marcadores favorables son genéticamente ligados con una región definida adicionalmente de esta región QTL6, en donde la región definida además, es flanqueada por una primera secuencia limite que comprende los nucleotidos 1-20 de la SEC ID NO: 6 y una segunda secuencia limite que comprende los nucleotidos 482-501 de la SEC ID NO: 14. En aún otras modalidades, los loci marcadores favorables son genéticamente ligados con una segunda región definida adicional de esta región QTL6, en donde la segunda región definida adicional es flanqueada por una primera secuencia limite que comprende los nucleotidos 1-20 de la SEC ID NO: 10, y una segunda secuencia limite que comprende los nucleotidos 488-507 de la SEC ID NO: 4. Esta segunda región definida adicionalmente , la cual reside dentro de un gen único, DGAT1-2, controla tanto las concentraciones de ácido oleico como aceite en el embrión. Se reconoce que los loci marcadores favorables de la invención, pueden comprender secuencias que son no codificantes, por ejemplo, el ARN no codificante que funciona sin ser traducido en una proteina, también referida como un ARN pequeño (ARNs), que incluye microARNs (miARNs) , y puede comprender una secuencia codificante, por ejemplo, una estructura lectora abierta, como se nota aquí anteriormente. En algunas modalidades, los loci marcadores comprenden una secuencia seleccionada del grupo que consiste de las secuencias expuestas en las SEC ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, y 51, con al menos, un polimorfismo ahí que confiere o está asociado con el alto contenido de aceite y/o alto contenido de ácido oleico, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de planta de la misma. Ejemplos no limitantes de estos polimorfismos se describen en la Tabla 2 y Tabla 3 aquí abajo. En algunas de estas modalidades, el loci marcador favorable incluye el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 4 con al menos, un polimorfismo que ocurre en una posición de nucleótido (nt) dentro de la SEC ID NO: 4 seleccionada del grupo que consiste de nt 28, 204, 256, 302, 305, 341, 429, 461, y cualquier combinación de los mismos: el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 6 con al menos, un polimorfismo que se origina en una posición de nt dentro de la SEC ID NO: 6 seleccionada del grupo que consiste de nt 43, 74, 208, 224, y cualquier combinación de los mismos: el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 8 con al menos, un polimorfismo que se origina en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 8, seleccionado del grupo que consiste de nt 25, 55, 88, 100, 195, 223, 238, 242, 255, 2779, 306, 307, 345, 399, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 10 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 10 seleccionado de nt 40, 41, 88, 89, 126, 134, 146, 218, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 12 con al menos, un polimorfismo que se origina en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 12 seleccionado de nt 128, 195, 256, 257, 293, 294, 295, 296, 327, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEQ ID NO: 14 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 14 seleccionada de nt 262, 311, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 16 con al menos un polimorfismo que ocurre en nt 428 de la SEC ID NO: 16; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 18 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 18 seleccionada de nt 119, 396, 420, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 20 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 20 seleccionada de nt 194, 258, 259, 260, 365, 366, 489, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 22 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 22 seleccionada de nt 48, 50, 56, 60, 63, 101, 133, 166, 170, 179, 181, 206, 207, 211, 231, 237, 255, 273, 282, 294, 312, 324, 343, 345, 358, 377, 381, 385, 387, 404, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 24 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO:24 seleccionada de nt 358, 359, 371, 421, 422, 423, 425, 426, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 26 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO:26 seleccionada de nt 28, 31, 35, 43, 50, 111, 117, 143, 192, 197, 219, 266, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 28 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 28 seleccionada de nt 41, 62, 92, 158, 182, 194, 200, 226, 229, 349, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 30 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 30 seleccionada de nt 102, 145, 162, 165, 198, 199, 221, 247, 251, 253, 306, 331, 352, 451, 461, 464, y cualquier combinación de los mismos; el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 32 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO:32 seleccionada de nt 61, 73, 87, 143, 199, 208, 209, 210, 211, 225, 327, 328, 335, y cualquier combinación de los mismos; y el locus marcador expuesto en la SEC ID NO: 51 con al menos un polimorfismo que ocurre en una posición nt dentro de la SEC ID NO: 51 seleccionada de: nt 134; nt 163; nt 190-192 o 193-195 o 196-198, 199-201; nt 1401 o 1404 o 1407 ; y cualquier combinación de la misma. Cambios polimórficos ejemplares dentro de estos loci marcadores son expuestos en las Tablas 2 y 3 aquí abajo. En algunas modalidades, el locus marcador favorable comprende la secuencia descrita en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, o 47, o un alelo de la misma que comprende uno o más de los polimorfismos identificados aquí (véase por ejemplo, Tabla 2 y Tabla 3 aquí abajo) . Se reconoce que las plantas establemente transformadas, pueden comprender cualquiera o todos los polinucleótidos del loci marcador favorito identificado aquí. En tales modalidades, la expresión del polinucleótido heterólogo que comprende la secuencia asociada con aceite alto o ácido oleico alto, incrementa el contenido de aceite o el contenido de ácido oleico en la planta o parte de planta, y puede favorablemente, incrementar la relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de la planta o parte de planta . (i) Estructuras Lectoras Abiertas del Locus QTL6 El QTL6 fue finamente mapeado a una región de aproximadamente 195 kb que ha sido caracterizada y se encuentra por contener cinco estructuras lectoras abiertas. Sin ser ligado por teoría, una o más de las proteínas codificadas por etas estructuras lectoras abiertas, están asociadas con un fenotipo alto en aceite, y/o un fenotipo alto de ácido oleico, y/o un fenotipo de ácido oleico alto/ácido linoleico bajo (es decir, relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico) . De este modo, el contenido de aceite y/o contenido de ácido oleico y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de la misma, puede ser manipulado sobre expresando una o más de estas proteínas en la planta o parte de planta de la misma. (a) Diacilglicerol O-Aciltransferasa Tipo 1 (DGAT) La presente invención proporciona una nueva variante de diacilglicerol O-aciltranferasa tipo 1 (DGAT) , que, después de la expresión en una planta o parte de planta, incrementa el contenido de aceite, incrementa el contenido de ácido oleico, y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico dentro de la planta o parte de planta, cuando se compara con la secuencia DGAT tipo 1 a partir de una planta que no exhibe el fenotipo de alto contenido de aceite y/o alto contenido de ácido oleico y/o y/o ácido oleico/ácido linoleico bajo, por ejemplo, la secuencia DGAT1-2 de maíz de aceite normal, expuesta en la SEC ID NO: 52 (designada ZmDGATl-2 (EFO09B) ) . Una secuencia de DGAT variante que incrementa el contenido de aceite, incrementa el contenido de ácido oleico, y/o incrementa la relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de una planta o parte de planta en esta manera, es referida aquí como "una variante de ácido oleico alto/aceite alto" de DGAT, y la secuencia codificante para esta variante representa una secuencia asociada con el ácido oleico alto y aceite alto de la invención. El término "variante", se refiere a una proteina que comprende una secuencia de aminoácido que difiere de la secuencia de aminoácido para la proteina de referencia por las supresiones, sustituciones de aminoácido o ambas. La variante de ácido oleico alto/aceite alto de DGATI de la presente invención, designada ZmDGATl-2 (ASK) , comprende una secuencia de aminoácido que difiere de la secuencia DGAT1-2 de maíz de aceite normal de referencia por tener una sustitución de residuo glicina para el residuo valina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO: 52; una sustitución de residuo serina para el residuo prolina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 52; una supresión del residuo glutamina que corresponde con aquella en la posición de aminoácido 64, 65, 66 o 67 de la SEC ID NO: 52; y/o una inserción de un residuo fenilalanina en una posición localizada entre un par de residuos, en donde el par de residuos corresponde a un par de residuos dentro de la SEC ID NO: 52, seleccionada del grupo que consiste de: (a) el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el resido de fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52, (b) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52, y (c) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52. Véase la secuencia peptidica ZmDGATl-2 (ASK) expuesta en la SEC ID NO: 48. También, véase la alineación del polipéptido ZmDGATl-2 (ASK) con la secuencia de polipéptido ZmDGATl-2 a partir de tres lineas parentales de maíz de aceite normal, EF09B, Mol7, y B73, mostrada en la Figura 27. Una alineación de las secuencias codificantes respectivas se muestra en la Figura 28. La variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto de la invención, puede tener una o más de estas varias modificaciones. Como se usa en la presente, la secuencia de aminoácido de referencia para DGAT1-2 de maíz a partir de lineas parentales de maíz de aceite normal, se muestra en la SEC ID NO: 52 (secuencia para ZmDGATl-2 (EF09B) ) , la cual es codificada por una secuencia de nucleótido, tal como aquella expuesta en la SEC ID NO: 51. Una o más sustituciones particulares descritas en la presente, resultan en una variante DGAT que retiene las actividades deseadas de permitir un incremento en niveles de aceite y/o ácido oleico, y/o un incremento en la relación de ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de planta de la misma, cuando se compara con una planta de control apropiada o parte de planta, como se describe en otra parte aquí. Habiendo identificado las posiciones dentro de la secuencia DGAT de ácido oleico alto/aceite alto (es decir, secuencia ZmDGATl-2 (ASK) y las sustituciones, supresiones e inserciones relevantes, está dentro de la habilidad de uno en la técnica variar otros residuos dentro de la secuencia de variante DGAT para obtener variantes del DGAT de ácido oleico alto/ácido alto descritas en la presente que también retienen la actividad deseada, es decir, incrementar el contenido de aceite y/o incrementar el contenido de ácido oleico, y/o incrementar la relación de ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de planta de la misma. Tales variantes de la variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto descritas en la presente, también están propuestas para ser abarcadas por la presente invención, y son además, definidas abajo. La presente invención también proporciona cualquier secuencia de nucleótido que codifica las variantes DGAT de ácido oleico alto/aceite alto de la invención, por ejemplo, la secuencia codificante expuesta en la SEC ID NO: 47, la cual codifica la variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto ZmDGATl-2 (ASK) (SEC ID NO:48). Las diacilglicerol aciltransferasas (DGAT, EC 2.3.1.20), usan acil CoA graso y diacilglicerol como sustratos para catalizar la etapa realizada en la síntesis de triacilglicerol . El DGATs juega un papel fundamental en el metabolismo de glicerolípidos celulares. Muchos miembros de la familia DGAT han sido identificados en plantas, varios de los cuales se muestran en una alineación en la Figura 30. El DGAT de ácido oleico alto/aceite alto de la presente invención (ZmDGATl-2 (ASK) , también se muestra en la Figura 30. Análisis filogénicos (véase Figura 29) de estos polipéptidos DGAT, se realizó usando el programa PHYLIP (K. Felsenstein, University of Washington) y exhibió usando el programa TreeView (página (1996) Computer App . Biosci. 12:357-358). Las diacilglicerol aciltransferasas tipo I y tipo II de planta, glicerol-3-fosfato aciltransferasas (GPAT) y liosofosfatidil aciltransferasas (LPAT) , se incluyen en el análisis. Los resultados muestran que el DGAT tipo 1 (DGAT1) es distinto del DGAT tipo 2 (DGAT2), GPAT y LPAT. Dentro del DGAT tipo 1, un subgrupo, DGAT1-2 compuesto de varias especies monocotiledóneas , puede ser además, diferenciado. La ORF de DGAT localizada dentro de la región QTL6 de la invención, es un miembro del subgrupo DGAT1-2. También proporcionada en la presente, está el polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal, como se identifica en las lineas parentales de maíz de aceite normal EF09B, Mol7 y B73. Para propósitos de la presente invención, este polipéptido es referido en la presente como ZmDGATl-2 o ZmDGATl-2 (EF09B) , ZmDGATl-2 (Mol7) , o ZmDGATl-2 (B73) de "aceite normal", dependiendo de la linea parenteral de maíz de aceite normal de la cual se derivó el polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal. El polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal, se expone en la SEC ID NO: 50 (referido como ZmDGATl-2 (Mol7) , SEC ID NO: 52 (referida como ZmDGATl-2(EF09B) y SEC ID NO: 54 (referida aquí como ZmDGATl-2(B73)). Los polinucleótidos que codifican el polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal, también están abarcados por la presente invención. Polinucleótidos ejemplares son expuestos en la SEC ID NO: 49 (referida como secuencia codificante ZmDGATl-2 (Mol7) ) , SEC ID NO: 51 (referida como secuencia codificante ZmDGATl-2 (EF09B) , y SEC ID NO: 53 (referida como ZmDGATl-2 (B73 )) . Como se notó anteriormente, para propósitos de comparar cambios polimórficos entre las secuencias de polipéptido y codificantes ZmDGATl-2 (ASK) de ácido oleico alto/aceite alto y las secuencias de polipéptido y codificantes ZmDGATl-2 de aceite normal, ZmDGATl-2 (EF09B) sirve como ZmDGATl-2 de aceite normal de referencia (es decir, la secuencia de aminoácido expuesta en la SEC ID NO: 52, y la secuencia codificante ejemplar expuesta en la SEC ID NO: 51). Variantes del polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal y polinucleótidos que codifican estas variantes, también están abarcadas por la presente invención . El polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal y secuencias que codifican esta proteína, y variantes de la misma que retienen la actividad de la proteína ZmDGATl-2 de aceite normal, y de este modo están involucradas en la biosíntesis de aceite, también encuentran uso en el incremento de aceite y/o contenido de ácido oleico y/o incremento de relación de ácido oleico/ácido linoleico de conformidad con los métodos de la presente invención. De esta manera, la sobreexpresion del polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal, o fragmentos funcionales y variantes de los mismos como se define en otra parte aquí, pueden proporcionar contenido incrementado de aceite, contenido incrementado de ácido oleico, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico en una planta o parte de planta de la misma, como se describe abajo. Véase también, Ejemplo 11 abajo. (b) Permeasa de Amino Acido La presente invención también proporciona la estructura lectora abierta para el polipéptido de permeasa de aminoácido 1 de maíz (AAP1) (SEC ID NO: 56; designada ZmAAPl) y variantes biológicamente activas de la misma como se define aqui abajo. Los polinucleótidos aislados que codifican el polipéptido ZmAAPl están también abarcados por la presente invención. En tal modalidad, el polinucleótido aislado comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 55 o una variante de la misma, que codifica un polipéptido AAP1 biológicamente activo. La Figura 31 muestra una alineación del polipéptido ZmAPPl con otros polipéptidos AAP relacionados de otras especies de plantas. Para una revisión de permeasas de aminoácido en el transporte de aminoácido en general, véase por ejemplo, Wipf et al. (2002) Trends Biochem. Sci. 27 ( 3) : 139-147. (c) Proteína de Sistema de Salida de K+ (PESP) La presente invención también proporciona la estructura lectora abierta para la proteina del sistema de salida de potasio en maíz (SEC ID NO: 58; designado ZmPESP) y variantes de la misma biológicamente activas, como se define aquí abajo. Los polinucleótidos aislados que codifican el polipéptido ZmPESP están también abarcados por la presente invención. En tal modalidad, el polinucleótido aislado comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 57 o variantes de la misma que codifican un polipéptido PESP biológicamente activo. La Figura 32 muestra una alineación del polipéptido ZmPESP con otros polipéptidos PESP relacionados a partir de otras especies de plantas. Para una revisión de polipéptidos PESP, en general, véase por ejemplo, Ferguson et al., (1993) Mol. Microbiol. 9(6): 1297-1303. (d) Proteína Ribosomal S24 40S La presente invención también proporciona la estructura lectora abierta para la proteina ribosomal S24 40S de maíz (SEC ID NO: 60; designada ZmS24) y variantes de la misma biológicamente activas como se define aquí abajo. Los polinucleótidos aislados que codifican el polipéptido ZmS24 también están abarcados por la presente invención. En tal modalidad, el polinucleótido aislado comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 59 o variante de la misma, que codifica una proteina ribosomal S24 40S biológicamente activa. La Figura 33 muestra una alineación del polipéptido ZmS24 con otras proteínas ribosomales relacionadas de otras especies de plantas. Para una revisión de polipéptidos S24 ribosomales, en general, véase por ejemplo, Xu and Roufa (1996) Gene 169:257-262. (e) Transportador ABC La presente invención también proporciona la estructura lectora abierta para un polipéptido transportador ABC similar a PDR (ABCT) (secuencia compuesta mostrada en la SEC ID NO: 64; designada ZmABCT (compuesto) aquí) y variantes de la misma biológicamente activas como se define aquí abajo. Los polinucleótidos aislados que codifican el polipéptido ZmABCT (Compuesto) , también están abarcados por la presente invención. En tal modalidad, el polinucleótido aislado comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 63 o variante de la misma, que codifica un polipéptido ABCT biológicamente activo. La secuencia codificante de longitud completa se construye de la secuencia de ADNc de ORF parcial ZmABCT clonada a partir de la linea de maíz parenteral Mol7 de ácido oleico no alto, aceite no alto (secuencia expuesta en la SEC ID NO: 61, que codifica la secuencia de aminoácido N-terminal expuesta en la SEC ID NO: 62) y la secuencia genómica y EST para la linea de maíz parenteral B73 de ácido oleico no alto, aceite no alto. La Figura 34 muestra una alineación del polipéptido ZmABCT (Compuesto) con otros polipéptidos ABCT relacionados a partir de otras especies de plantas. Para una revisión de polipéptidos ABCT, en general, véase por ejemplo, Van den Brule and Smart (2002) Planta 216:95-106.

(C) Variantes y Fragmentos La invención abarca composiciones de proteina o polinucleótidos sustancialmente purificados. Un "polinucleótido o proteína "aislada" o "purificada", o porción de la misma biológicamente activa, está sustancialmente o esencialmente libre de componentes que normalmente acompañan o interactúan con el polinucleótido o proteína como se encuentra en su ambiente que se origina naturalmente. De este modo, un polinucleótido o proteína purificado o aislado está sustancialmente libre de otro material celular, o medio de cultivo cuando se produce por técnicas recombinantes, o sustancialmente libre de precursores químicos u otros químicos cuando es químicamente sintetizado. Óptimamente, un polinucleótido "aislado", está libre de secuencias (secuencias que codifican proteínas óptimamente) , que naturalmente flanquean el polinucleótido (es decir, secuencias localizadas en los extremos 5' y 3' del polinucleótido) en el ADN genómico del organismo del cual se deriva el polinucleótido. Por ejemplo, en varias modalidades, el polinucleótido aislado puede contener menos de aproximadamente 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0.5 kb o 0.1 kb de la secuencia de nucleótido que flanquea naturalmente el polinucleótido en el ADN genómico de la célula a partir de la cual se deriva el polinucleótido. Una proteína que está sustancialmente libre de material celular incluye preparaciones de proteína que tienen menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5%, o 1% (en peso seco) de contaminantes de proteina. Cuando la proteina de la invención o porción de la misma biológicamente activa es producida recombinantemente , el medio de cultivo óptimamente representa menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5%, o 1% (en peso seco) de precursores químicos o químicos sin proteína de interés. Los fragmentos y variantes de los polinucleótidos descritos y cualquiera de las proteínas codificadas, por este medio también están abarcadas por la presente invención. Por "fragmento", se pretende una porción del polinucleótido, por ejemplo, una porción del polinucleótido para el locus marcador que comprende la secuencia expuesta en las SEC ID NO: , 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, o, en el caso de una proteína de la invención, una porción de la secuencia de aminoácido y por lo tanto, la proteína codificada por este medio. En donde el polinucleótido de la invención comprende una estructura lectora abierta, por ejemplo, un polinucleótido que codifica un polipéptido ZmDGATl-2 (ASK) de ácido oleico alto/aceite alto, ZmDGATl-2 de aceite normal, ZmAAPl, ZmAAPl, ZmPESP, ZmS24, o ZmABCT (Compuesto) , tal como por ejemplo, el polinucleótido expuesto en la SEC ID NO:47, 51, 55, 57, 59, o 63, respectivamente, un fragmento del polinucleótido puede codificar fragmentos de proteina que retienen la actividad biológica del polipéptido de longitud completa y por lo tanto, incrementar el contenido de aceite y/o incrementar el contenido de ácido oleico y/o incrementar la relación de ácido oleico/ácido linoleico en una planta o parte de planta de la misma, cuando se compara con una planta de control apropiada o parte de planta de la misma. Alternativamente, los fragmentos de un polinucleótido que comprenden una secuencia codificante y los cuales son empleados como sondas de hibridación en general, no codifican fragmentos de proteina que retienen la actividad biológica. De este modo, fragmentos de una secuencia de nucleótido pueden variar de al menos, aproximadamente 10 nucleótidos, aproximadamente 20 nucleótidos, aproximadamente 50 nucleótidos, aproximadamente 100 nucleótidos, y hasta el polinucleótido de longitud completa descrito en la presente, dependiendo del uso propuesto del polinucleótido . De este modo, por ejemplo, en donde el polinucleótido representa secuencias no codificantes, por ejemplo, un locus marcador que comprende la secuencia expuesta en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, o 45, un fragmento del polinucleótido puede comprender al menos, 12, 16, 20, 50, 75, 100, 150, 200, o 250 nucleótidos contiguos, o hasta el número de nucleótidos presentes en una secuencia de nucleótido de longitud completa para un locus marcador favorable descrito en la presente (por ejemplo, 523, 507, 257, 511, 241, 371, 510, 592, 550, 520, 464, 514, 505, 410, 522, 507, 553, 972, 469, 413, 457, 762, o 499 nucleótidos para las SEC ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, o 45, respectivamente). Fragmentos de locus marcador favorable que tienen una secuencia que es una secuencia no codificante, comprenderán al menos, uno de los polimorfismos identificados en la presente. De este modo, por ejemplo, un fragmento de un locus marcador que comprende la secuencia expuesta en las SEC ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, o 45, comprende una porción de la secuencia de nucleótido que comprende al menos, uno de los polimorfismo identificados aquí; véase por ejemplo, Tabla 2 abajo y las alineaciones proporcionadas en las Figuras 7-29 aquí . Un fragmento de un polinucleótido que codifica una porción biológicamente activa de un DGAT de ácido oleico alto/aceite alto (por ejemplo, ZmDGATl-2 (ASK) ) , un DGAT de aceite normal (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) ) , una permeasa de aminoácido, un PESP, una proteina ribosomal, o una proteina transportadora ABC de la invención, codificará al menos, 15, 25, 30, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 650, 700, aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos presentes en un DGAT de ácido oleico alto/aceite alto de longitud completa, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteina ribosomal, o proteina transportadora ABC de la invención. Fragmentos de un polinucleótido que son empleados como sondas de hibridización o cebadores PCR, en general, no necesitan codificar una porción biológicamente activa de un DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, una permeasa de aminoácido, un PESP, una proteina ribosomal, o una proteina transportadora ABC. De este modo, un fragmento de un polinucleótido de la invención, puede codificar una porción biológicamente activa de un DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, una permeasa de aminoácido, un PESP, una proteina ribosomal, o una proteina transportadora ABC, o puede ser un fragmento que puede ser usado como una sonda de hibridación o cebador PCR usando los métodos descritos abajo. Una porción biológicamente activa de un DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, una permeasa de aminoácido, un PESP, una proteina ribosomal, o una proteina transportadora ABC, pueden ser preparados aislando una porción de uno de los polinucleótidos respectivos que codifican estas proteínas, que expresan la porción codificada del DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, el DGAT de aceite normal, la permeasa de aminoácido, el PESP, la proteina ribosomal, o la proteina transportadora ABC (por ejemplo, por expresión recombinante in vitro) , y valorando la actividad de la porción codificada de la proteina respectiva. Los polinucleótidos que son fragmentos de una secuencia nucleótida que codifica un DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, una permeasa de aminoácido, un PESP, una proteina ribosomal, o una proteina transportadora ABC que comprende al menos, 16, 20, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350 o 400 nucleótidos contiguos, o hasta el número de nucleótidos presentes en una secuencia de nucleótido de longitud completa que codifica un DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, una permeasa de aminoácido, un PESP, una proteina ribosomal, o una proteina transportadora ABC descrita en la presente (por ejemplo, 1485, 1485, 1389, 1896, 414 y 4710 nucleótidos para las SEC ID NOS: 47, 51, 55, 57, 59 y 63, respectivamente) . En algunas modalidades, el polinucleótido codifica un fragmento del polipéptido ZmDGATl-2 (ASK) expuesto en la SEC ID NO: 48, en donde el fragmento comprende al menos, un residuo de glicina en la posición de aminoácido 45 de la SEC ID NO: 48, el residuo serina en la posición de aminoácido 55 de la SEC ID NO: 48, y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 467, 468 o 469 de la SEC ID NO: 48, en donde la expresión del fragmento de polipéptido codificado en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de ácido oleico, y/o incrementa la relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de la planta o parte de planta de la misma. En otras modalidades, el polinucleótido codifica un fragmento del polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal expuesto en la SEC ID NO: 52 con al menos, una alteración seleccionada del grupo que consiste de: (a) una sustitución de un residuo glicina por el residuo valina en la posición de aminoácido 45 de la SEC ID NO: 52; (b) un residuo serina para el residuo prolina en la posición de aminoácido 55 de la SEC ID NO: 52; (c) una supresión del residuo glutamina que corresponde a aquella de la posición de aminoácido 64, 65, 66 o 67 de la SEC ID NO: 52; y (d) una inserción de un residuo fenilalanina en una posición localizada entre un par de residuos, en donde el par de residuos corresponde a un par de residuos dentro de la SEC ID NO: 52 seleccionada del grupo que consiste de: (i) el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52, (ii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52, y (iii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52; en donde la expresión del fragmento de polipéptido codificado en una planta o parte de planta de la misma, incrementa el contenido de aceite, incrementa el contenido de ácido oleico, y/o incrementa la relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de la planta o parte de planta de la misma. En aún otras modalidades, el fragmento de un polinucleótido codifica un fragmento del polipéptido ZmDGATl-2 de aceite normal expuesto en la SEC ID NO: 52 (partiendo de ZmDGATl-2 (EF09B) , la cual tiene la misma secuencia como el polipéptido ZmDGATl-2 (Mol7 ) y ZmDGATl-2(B73) respectivamente, expuesta en las SEC ID NOS: 50 y 54), en donde la sobre expresión del fragmento de polipéptido codificado en una planta o parte de la planta de la misma incrementa el contenido de aceite, incrementa el contenido de ácido oleico, y/o incrementa la relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de la planta o parte de planta de la misma. "Variantes", se pretende por significar secuencias sustancialmente similares. Para polinucleótidos , una variante comprende una supresión y/o adición de uno o más nucleótidos en uno o más sitios internos dentro del polinucleótido nativo y/o una sustitución de uno o más nucleótidos en uno o más sitios en el polinucleótido nativo. Como se usa en la presente, un polinucleótido o polipéptido "nativo" comprende una secuencia de nucleótido que se origina naturalmente o secuencia de aminoácido, respectivamente. En donde el polinucleótido representa secuencias no codificantes, por ejemplo, un locus marcador favorable que comprende la secuencia expuesta en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 o 45, una variante del locus marcador favorable comprenderá una secuencia de nucleótido que comprende al menos, uno de los polimorfismos identificados dentro de la secuencia para el locus marcador respectivo (véase por ejemplo, Tabla 2 y las alineaciones presentadas en las Figuras 7-29 en la presente) , y retendrán las características de estar asociadas con el rasgo fenotipico de aceite alto y/o ácido oleico alto y/o ácido oleico alto/ácido linoleico bajo (es decir, relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico) . Para polinucleótidos que codifican una proteina de la invención, variantes conservativas incluyen aquellas secuencias que, debido a la degeneración del código genético, codifican la secuencia de aminoácido del DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteína ribosomal, o proteína transportadora ABC de la invención.

Las variantes alélicas que se originan naturalmente, tales como estas, pueden ser identificadas con el uso de técnicas de biología molecular bien conocidas, como, por ejemplo, con técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) e hibridización como se resume posteriormente. Los polinucleótidos variantes también incluyen polinucleótidos sintéticamente derivados, tales como aquellos generados, por ejemplo, usando mutagénesis dirigida al sitio y, por secuencias codificantes, todavía codifican la secuencia de aminoácido del DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteína ribosomal, o proteína transportadora ABC de la invención. En general, variantes de un polinucleótido particular de la invención, tendrán al menos, aproximadamente 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más identidad de secuencia con tal polinucleótido particular, como se determina por el programa de alineación de secuencia y parámetros descritos en otra parte aquí. Variantes de un polinucleótido particular de la invención (es decir, el polinucleótido de referencia) que codifican un polipéptido de la invención, pueden también ser evaluadas por comparación del porcentaje de identidad de secuencia entre el polipéptido codificado por un polinucleótido variante y el polipéptido codificado por el polinucleótido de referencia. De este modo, por ejemplo, se describe un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido con un porcentaje de identidad de secuencia dado al polipéptido de las SEC ID NOS: 48, 52, 56, 58, 60 y 64. El porcentaje de identidad de secuencia entre cualquiera de dos polipéptidos , puede ser calculado usando los programas de alineación de secuencia y parámetros descritos en otra parte en la presente. En donde cualquier par dado de polinucleótidos de la invención es evaluado por comparación del porcentaje de identidad de secuencia portado por los dos polipéptidos que codifican, el porcentaje de identidad de secuencia entre los dos polipéptidos codificados es al menos, aproximadamente 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o más identidad de secuencia . Proteina "variante", está propuesto por significar una proteina derivada de la proteina nativa por supresión o adición de uno o más aminoácidos en uno o más sitios internos en la proteina nativa y/o substitución de uno o más aminoácidos en uno o más sitios en la proteina nativa. Las proteínas variantes abarcadas por la presente invención, son biológicamente activas, esto es, continúan poseyendo la actividad biológica deseada de la proteína que se origina naturalmente, esto es, la actividad biológica deseada de la proteína ZmDGATl-2 (ASK) , la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) , la proteína ZmAAPl, la ZmPESP, la proteína ZmS24, y la proteína ZmABCT como se describe en la presente. Tales variantes pueden resultar de por ejemplo, uno o más polimorfismos genéticos o de manipulación humana. Variantes biológicamente activas de un DGAT de ácido oleico alto/aceite alto que se origina naturalmente de la invención, tal como ZmDGATl-2 (ASK) , DGAT de aceite normal de la invención, tal como ZmDGATl-2 (EF09B) , permeasa de aminoácido de la invención, tal como ZmAAPl, PEPS de la invención, tal como ZmPESP, proteína ribosomal de la invención, tal como ZmSP4, o proteína transportadora ABC de la invención, tal como ZmABCT, tendrán al menos, aproximadamente 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más identidad de secuencia a la secuencia de aminoácido para la proteína nativa como se determina por los programas de alineación de secuencia y parámetros descritos en otra parte en la presente. Una variante biológicamente activa de una proteína de la invención, puede diferir de tal proteína tan pocos como 1-15 residuos de aminoácido, tan pocos como 1-10, tal como 6-10, tan pocos como 5, tan pocos como 4, 3, 2 o aún 1 residuo de aminoácido. Las proteínas de la invención pueden ser alteradas en varias formas que incluyen, sustituciones, supresiones, truncaciones e inserciones de aminoácido. Los métodos para tales manipulaciones son en general, conocidos en la técnica. Por ejemplo, las variantes de secuencia de aminoácido y fragmentos de la proteina ZmDGATl-2 (ASK) , la proteina ZmDGATl-2 de aceite normal (por ejemplo, ZmDGATl-2(EF09B)), la proteina ZmAPPl, la ZmPESP, la proteina ZmS24 y la proteina ZmABCT, pueden ser preparadas por mutaciones en el ADN . Los métodos para mutagénesis y alteraciones de polinucleótido, son bien conocidos en la técnica. Véase por ejemplo, Kunkel (1985) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82:488-492; Kunkel et al (1987) Methods in Enzymol 154:367-382; Patente Estadounidense No. 4,873,192; Walker and Gaastra, eds . (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York) y las referencias citadas ahí. Las guias para sustituciones de aminoácido apropiadas que no afectan la actividad biológica de la proteina de interés, se pueden encontrar en el modelo de Dayhoff et al. (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Nati. Biomed. Res. Found. , Washington, D. C) , aquí incorporada por referencia. Las sustituciones conservativas, tales como intercambiar un aminoácido con otro que tiene propiedades similares, pueden ser óptimas. De este modo, los genes y polinucleótidos de la invención incluyen tanto las secuencias que se originan naturalmente, asi como también formas mutantes. Del mismo modo, las proteínas de la invención abarcan tanto proteínas que se originan naturalmente, como también variaciones y formas modificadas de las mismas. Tales variantes continuarán poseyendo la actividad deseada. De este modo, por ejemplo, variantes de la proteína ZmDGATl-2 (ASK) , continuarán confiriendo el fenotipo de ácido oleico alto/ácido alto en una planta o parte de una planta de la misma. Variantes de la proteína ZmDGATl-2 de aceite normal (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) ) , continuarán poseyendo la actividad deseada de estar involucrada en la biosíntesis de aceite, y de este modo, cuando se sobreexpresa en una planta o parte de planta, resultará en un incremento en el contenido de aceite, el contenido de ácido oleico y/o la relación de ácido oleico/ácido linoleico de tal planta o parte de planta. Obviamente, las mutaciones que se harán en el ADN que codifica la variante, no deben colocar la secuencia fuera de la estructura lectora abierta y óptimamente, no crearán regiones complementarias que podrían producir la estructura secundaria de ARNm. Véase, Publicación de Patente EP No. 75,444. Las supresiones, inserciones y sustituciones de las secuencias de proteínas abarcadas en la presente, no se espera produzcan cambios radicales en las características de la proteína. Sin embargo, cuando es difícil predecir el efecto exacto de la sustitución, supresión o inserción con anticipación de hacerlo, un experto en la técnica apreciará que el efecto será evaluado por ensayos de selección de rutina . Las variantes de polinucleótidos y proteínas también abarcan secuencias y proteínas derivadas de un procedimiento recombinogénico y mutagénico tal como lanzadera ADN . Con tal procedimiento, una o más secuencias codificantes diferentes para la proteína ZmDGATl-2 (ASK) , la proteína ZmDGATl-2 de aceite normal (por ejemplo, ZmDGATl-2(EF09B)), la proteína ZmAAPl, la ZmPESP, la proteína ZmS24, o las secuencias codificantes de proteína ZmABCT, pueden ser manipuladas para crear una nueva proteína DGAT1-2, proteína AAP1, PESP, proteína S24 ribosomal 40S, o proteína ABCT que poseen las propiedades deseadas. De esta manera, bibliotecas de polinucleótidos recombinantes son generadas de una población de polinucleótidos de secuencia relacionada que comprenden regiones de secuencia que tienen identidad de secuencia sustancial y pueden ser homólogamente recombinados in vitro o in vivo. Por ejemplo, usando este procedimiento, porciones de secuencia que codifican un dominio de interés, pueden ser lanzadas entre la secuencia codificante para la proteína ZmDGATl-2 (ASK) , la ZmDGATl-2 de aceite normal (por ejemplo, ZmDGATl-2(EF09B)), ZmAAPl, ZmPESP, ZmS24, o ZmABCT de la invención y secuencias codificantes para otras proteínas respectivas conocidas, DGAT1-2 , AAP1, PESP, S24, ABCT, para obtener un nuevo gen que codifica para una proteína con una propiedad de interés mejorada. Estrategias para tal lanzadera de ADN se conocen en la técnica. Véase por ejemplo, Stemmer (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91: 10747-10751; Stemmer (1994) Nature 370:389- 391; Crameri et al. (1997) Nature Biotech. 15:436-438; Moore et al. (1997) J. Mol. Blol. 272:336-347; Zhang et al. (1997) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 94:4504-4509; Crameri et al. (1998) Nature 391:288-291; y Patentes Estadounidenses Nos. 5,605,793 y 5,837,458. Las composiciones de la invención también incluyen moléculas de ácido nucleico aislado que comprenden, la secuencia de nucleótido promotor ZmDGATl-2(Mol7) (hebra complementaria expuesta en la en la SEC ID NO: 119) ; la secuencia de nucleótido promotor ZmDGATl-2 (ASK) (hebra complementaria expuesta en la SEC ID NO: 130); la secuencia de nucleótido promotor ZmAAPl (expuesta en la SEC ID NO: 120); la secuencia de nucleótido promotor ZmPESP (Mol7 ) (expuesta en la SEC ID NO: 121); la secuencia de nucleótido promotor ZmPESP (ASK) (expuesta en la SEC ID NO: 129); la secuencia de nucleótido promotor ZmS24 (expuesta en la SEC ID NO: 122) ; y la secuencia promotora ZmABCT (expuesta en la SEC ID NO: 123) . Por "promotor", se pretende una región reguladora de ADN que comprende usualmente un cuadro TATA capaz de dirigir la polimerasa II de ARN para iniciar la síntesis de ARN, en el sitio de iniciación de transcripción apropiado para una secuencia codificante particular. Un promotor puede adicionalmente , comprender otras secuencias de reconocimiento en general, posicionadas corriente arriba o 5' al cuadro TATA, referido como elementos promotores corriente arriba, los cuales influencian la relación de iniciación de transcripción. Se reconoce que habiendo identificado la secuencia de nucleótido para las regiones promotoras respectivas descritas en la presente, está dentro del estado de la técnica aislar e identificar elementos reguladores adicionales en la región no traducida al 5' corriente arriba a partir de la región promotora particular definida en la presente. De este modo, por ejemplo, las regiones promotoras respectivas descritas en la presente, pueden además, comprender elementos reguladores corriente arriba que confieren expresión preferida de tejido de secuencias de nucleótido heterologas, operablemente ligadas a la secuencia promotora descrita. Véase particularmente, Patente Australiana No. AU-A-77751/94 y Patentes Estadounidenses Nos. 5,466,785 y 5,635,618. Los fragmentos y variantes de las secuencias promotoras de nucleótidos ZmDGATl-2 (Mol 7) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7 ) , ZmPESP(ASK), ZmS24, o ZmABCT descritas, pueden codificar una porción biológicamente activa del promotor respectivo, o pueden ser un fragmento que puede ser usado como una sonda de hibridi zación o cebador de PCR usando métodos descritos abajo. Una porción biológicamente activa del promotor ZmDGATl-2 (Mol7 ) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7 ) , ZmPESP (ASK), ZmS24, o ZmABC descritos, pueden ser preparados aislando una porción de la secuencia de nucleótido del promotor respectivo de la invención, y valorar la actividad de la porción del promotor respectivo. Las moléculas de ácido nucleico que son fragmentos de una secuencia de nucleótido promotor ZmDGATl-2 (Mol7) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7 ) , ZmPESP (ASK), ZmS24, o ZmABCT, comprenden al menos 16, 20, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 nucleótidos, o hasta el número de nucleótidos presentes en una secuencia de nucleótido promotor ZmDGATl-2 (Mol7 ) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7) , ZmPESP(ASK), ZmS24, o ZmABC descrita en la presente (por ejemplo, hasta 3000 nucleótidos para el promotor MmDGATl-2 (Mol7 ) , la secuencia complementaria de la cual se muestra en la SEC ID NO: 119; hasta 3000 nucleótidos para el promotor AmDGATl-2 (ASK) , la secuencia complementaria la cual se muestra en la SEC ID NO: 130; hasta 278 nucleótidos para el promotor ZmAAPl mostrado en la SEC ID NO: 120; hasta 3000 nucleótidos para el promotor ZmPESP(Mol7) mostrado en la SEC ID NO: 121); hasta 3000 nucleótidos para el promotor ZmPESP(ASK) mostrado en la SEC ID NO: 129); hasta 3000 pb para el promotor ZmS24 mostrado en la SEC ID NO: 122) ; y hasta 728 nucleótidos para el promotor ZmABCT mostrado en la SEC ID NO: 123). Ensayos para determinar la actividad de una secuencia promotora son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, un fragmento promotor ZmDGATl-2 (Moll7 ) o variante, puede ser operablemente ligado a la secuencia de nucleótido que codifica cualquier proteina reportera, tal como la proteina ß-glucuronidasa (reportero GUS) o la proteina luciferasa. El constructo de ADN es insertado en el genoma de una planta o célula de planta, y se determina el nivel de proteina o ARNm de la secuencia reportera. Véase por ejemplo, Eulgem et al. (1999) EMBO Journal 18: 4689-4699. Los polinucleótidos de la invención pueden ser usados para aislar las secuencias correspondientes de otros organismos, particularmente otras plantas, más particularmente otras monocotiledóneas . De esta manera, métodos tales como PCR, hibridización, y similares, pueden ser usados para identificar tales secuencias basadas en su homología se secuencia a las secuencias expuestas en la presente. Las secuencias aisladas basadas en su identidad de secuencia a la secuencia completa de un locus marcador descrito en la presente, que incluyen las cinco estructuras lectoras abiertas para la región QTL6 descrita en la presente, a un DGAT de aceite normal descrito en la presente (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) ) o a variantes y fragmentos de los mismos, están abarcadas por la presente invención. Tales secuencias incluyen secuencias que son ortólogos de las secuencias descritas. "Ortólogos", se pretende por significar genes derivados de un gen ancestral común y los cuales se encuentran en diferentes especies como un resultado de la especiación. Los genes encontrados en diferentes especies son considerados ortólogos cuando sus secuencias de nucleótidos y/o sus secuencias de proteínas codificadas portan al menos, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o mayor identidad de secuencia. Las funciones de ortólogos son a menudo altamente conservadas entre especies. De este modo, polinucleótidos aislados que codifican para una proteína DGAT-2 , proteína APP1, un PESP, una proteína S24 ribosomal 40S, o una proteína ABCT, y las cuales hibridizan bajo condiciones rigurosas a las secuencias respectivas descritas en la presente como SEC ID NOS: 74 o 51 (ZmDGATl-2(ASK) y ZmDGATl-2 (EF09B) , respectivamente, 55, 57, 59, y 63, o a variantes y fragmentos de las mismas, o cualquier complemento de las mismas, están abarcadas por la presente invención. De manera similar, los polinucleótidos aislados que confieren actividad promotora, y los cuales hibridizan bajo condiciones rigurosas al complemento de las secuencias promotoras respectivas descritas en la presente como SEC ID NOS:120, 121, 122, 123, 129 y el complemento de la SEC ID NO: 119 o el complemento de la SEC ID NO: 130 a variantes o fragmentos de las mismas, o a cualquier complemento de las mismas, están abarcadas por la presente invención. En un procedimiento de PCR, los cebadores de oligonucleótido pueden ser designados para uso en reacciones de PCR para amplificar secuencias de ADN correspondientes a partir de ADNc o ADN genómico extraído de cualquier planta de interés. Los métodos para designar cebadores de PCR y clonación de PCR son en general, conocidos en la técnica y se describen en Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York) . Véase también, Innis et al, eds . (1990) PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Academic Press, New York) ; Innis and Gelfand, eds. (1995) PCR Strategies (Academic Press, New York); and Innis and Gelfand, eds. (1999) PCR Methods Manual (Academic Press, New York). Métodos conocidos de PCR incluyen pero no se limitan a, métodos para usar cebadores apareados, cebadores anidados, cebadores específicos únicos, cebadores degenerados, cebadores específicos del gen, cebadores específicos del vector, cebadores parcialmente desapareados, y similares. En técnicas de hibridización, se usa todo o parte de un polinucleótido conocido como una sonda que hibridiza selectivamente a otros polinucleótidos correspondientes presentes en una población de fragmentos de ADN genómico clonados o fragmentos de ADNc (es decir, bibliotecas de ADNc o genómicas) de un organismo elegido. Las sondas de hibridización pueden ser fragmentos de ADN genómicos, fragmentos de ADNc, fragmentos de ARN u otros oligonucleótidos, y pueden ser etiquetados con un grupo detectable tal como 32P, o cualquier otro marcador detectable. De este modo por ejemplo, las sondas para hibridización pueden hacerse etiquetando oligonucleótidos sintéticos basados en los polinucleótidos del loci marcador favorable de la invención, que incluyen las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, y 45, asi como también, las estructuras lectoras abiertas expuestas en las SEC ID NOS: 47, 51, 55, 57, 59 y 63. Métodos para preparación de sondas para hibridización y para construcción de ADNc y bibliotecas genómicas son en general, conocidas en la técnica y se describen en Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York). Por ejemplo, el polinucleótido ZmDGATl-2 (ASK) completo descrito en la presente como SEC ID NO: 47, o una o más porciones del mismo, o el polinucleótido ZmDGATl- 2 (EF09B) completo descrito en la presente como SEC ID NO: 51, o una o más porciones de la misma, pueden ser usados como una sonda capaz de hibridizar específicamente, a polinucleótidos DGATl-2 correspondientes, y ARN mensajeros. Para lograr la hibridización específica bajo una variedad de condiciones, tales sondas incluyen secuencias que son únicas entre las secuencias de polinucleótido DGATI-2 y son óptimamente al menos, de aproximadamente 10 nucleótidos de longitud, y más óptimamente, de al menos aproximadamente 20 nucleótidos de longitud. Tales sondas pueden ser usadas para amplificar polinucleótidos DGATl-2 correspondientes, particularmente polinucleótidos DGATl-2 que tienen uno o más de los polimorfismos identificados en la SEC ID NO: 47, o polinucleótidos DGAT-12 que codifican variantes de la proteína DGAT-12 de aceite normal de la invención, a partir de una planta elegida por PCR. Esta técnica puede ser usada para aislar secuencias codificantes adicionales a partir de una planta deseada, o como un ensayo de diagnóstico para determinar la presencia de secuencias codificantes en una planta. Las técnicas de hibridización incluyen, selección de hibridación de bibliotecas de ADN plaqueadas (ya sea placas o colonias; véase por ejemplo, Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York). La hibridización de tales secuencias se puede realizar bajo condiciones rigurosas. Por "condiciones rigurosas" o "condiciones de hibridi zación rigurosas"; se pretenden condiciones bajo las cuales una sonda hibridizará a su secuencia objetivo a un grado detectablemente mayor que a otras secuencias (por ejemplo, al menos 2 veces sobre el antecedentes) . Las condiciones rigurosas son dependientes de la secuencia y serán diferentes en circunstancias diferentes. Controlando la rigurosidad de la hibridización y/o condiciones de lavado, secuencias objetivo que son 100% complementarias a la sonda, pueden ser identificadas (sondeo homólogo) . Alternativamente, las condiciones rigurosas pueden ser ajustadas para permitir algún desapareamiento en secuencias ya que los grados más bajos de similitud son detectados (sondeo heterólogo) . En general, una sonda es de menos de aproximadamente 1000 nucleótidos de longitud, óptimamente, menos de 500 nucleótidos de longitud. Típicamente, las condiciones rigurosas serán aquellas en las cuales, la concentración de sal es menos de aproximadamente 1.5 M de iones de Na, típicamente concentración de aproximadamente 0.01 hasta 1.0 M de iones de Na (u otras sales), a pH 7.0 a 8.3 y la temperatura terapéutica es al menos, aproximadamente 30°C para sondas cortas (por ejemplo, 10 a 50 nucleótidos) y al menos aproximadamente 60°C para sondas largas (por ejemplo, mayor de 50 nucleótidos) . Las condiciones rigurosas pueden también lograrse con la adición de agentes desestabilizantes tales como formamida. Condiciones de baja rigurosidad ejemplares incluyen, hibridización con una solución amortiguadora de formamida de 30 a 35%, 1 de NaCl, 1% de SDS (dodecilsulfato de sodio) a 37°C, y un lavado en IX a 2X SSC (20X SSC =3.0 M de NaCl/0.3 M de citrato trisódico) , a 50 a 55°C. Condiciones de rigurosidad moderada ejemplares incluyen, hibridización en 40 a 45% de formamida, 1.0 M de NaCl, 1% de SDS a 37°C y un lavado en 0.5X a IX SSC a 55 a 60°C. Condiciones de alta rigurosidad ejemplares incluyen, hibridización en 50% de formamida. 1M NaCl, 1% de SDS a 37°C, y un lavado en 0. IX SSC a 60 a 65°C. Opcionalmente, los amortiguadores de lavado pueden comprender aproximadamente 0.1% hasta aproximadamente 1% de SDS. La duración de la hibridización es en general, menos de aproximadamente 24 horas, usualmente aproximadamente4 hasta aproximadamente 12 horas. La duración del tiempo de lavado será al menos, una longitud de tiempo suficiente para alcanzar el equilibrio. La especificidad es típicamente la función de lavados post-hibridización, los factores críticos son la intensidad iónica y temperatura de la solución de lavado final. Para híbridos de ADN-ADN, la Tm puede ser aproximadamente de la ecuación de Meinkoth y ahl (1984) Anal. Biochem. 138:267-284: Tm = 81.5°C + 16.6 (log M) + 0.41 (%GC) - 0.61 (% de forma) - 500/1; en donde M es la molaridad de cationes monovalentes, %GC es el porcentaje de nucleósidos de citosina y guanosina en el ADN, % de forma es el porcentaje de formamida en la solución de hibridización, y L es la longitud del híbrido en pares base. La Tm es la temperatura (bajo la intensidad iónica definida y pH) en la cual, 50% de la secuencia objetivo complementaria hibridiza a una sonda perfectamente igualada. La Tm se reduce por aproximadamente 1°C para cada 1% de desapareamiento; de este modo, Tm, hibridización y/o condiciones de lavado, pueden ser ajustadas para hibridizar secuencias de la identidad deseada. Por ejemplo, si secuencias con >90% de identidad son buscadas, la Tm puede ser reducida 10°C. En general, se seleccionan condiciones rigurosas por ser aproximadamente de 5°C inferior que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia específica y es complemento a una intensidad iónica definida y pH . Sin embargo, condiciones severamente rigurosas pueden utilizar una hibridización y/o lavado a 1, 2, 3 o 4°C inferior que el punto de fusión térmico (Tm) ; condiciones moderadamente rigurosas pueden utilizar una hibridización y/o lavado a 6, 7, 8 9 ó 10°C inferior que el punto de fusión término (Tm) ; condiciones de baja rigurosidad pueden utilizar una hibridización y/o lavado a 11, 12, 13, 14, 15 o 20°C inferior que el punto de fusión térmico (Tm) . Usando la ecuación, hibridización y composiciones de lavado, y Tm deseado, aquellos de habilidad ordinaria entenderán que variaciones en la rigurosidad de hibridización y/o soluciones de lavado son inherentemente descritas. Si se desea, el grado de desapareamiento resulta en una Tm de menos de 45°C (solución acuosa) o 32°C (solución de formamida) , es óptimo incrementar la concentración SSC ya que una temperatura superior puede ser usada. Una guia extensiva a la hibridización de ácidos nucleicos se encuentra en Tijssen (1993) Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology—Hybridization with Nucleic Acid Probes, Part I, Chapter 2 (Elsevier, New York); y Ausubel et ah, eds . (1995) Current Protocols in Molecular Biology, Chapter 2 (Greene Publishing and Wiley-Interscience , New York). Véase Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York) . Los siguientes términos son usados para describir las relaciones de secuencia entre dos o más polinucleótidos o polipéptidos : (a) "secuencia de referencia", (b) "ventana de comparación", (c) "identidad de secuencia", y (d) "porcentaje de identidad de secuencia. (a) Como se usa en la presente, "secuencia de referencia es una secuencia definida usada como una base para comparación de secuencia. Una secuencia de referencia puede ser una subserie o la totalidad de una secuencia especificada; por ejemplo, como un segmento de un ADNc de longitud completa o secuencia de gen, o el ADNc completo o secuencia de gen. (b) Como se usa en la presente, "ventana de comparación" hace referencia a un segmento especificado y contiguo de una secuencia de polinucleótido, en donde la secuencia de polinucleótido en la ventana de comparación puede comprender adiciones o supresiones (es decir, aperturas), comparadas con la secuencia de referencia (la cual no comprende adiciones o supresiones) para alineaciones óptimas de los dos polinucleótidos . En general, la ventana de comparación es al menos, 20 nucleótidos en longitud, y opcionalmente, puede ser de 30, 40, 50, 100 o más larga. Aquellos de habilidad en la técnica entienden que, para evitar una alta similitud a una secuencia de referencia debido a la inclusión de aperturas en la secuencia de polinucleótido, una falta de apertura es típicamente introducida y es sustraída del número de apareamientos . Métodos de alineación de secuencias para comparación son bien conocidos en la técnica. De este modo, la determinación del porcentaje de identidad de secuencia entre cualquiera de las dos secuencias puede ser realizado usando un algoritmo matemático. Ejemplos no limitantes de tales algoritmos matemáticos son el algoritmo de Myers and Miller (1988) CABIOS 4:11- 17; el algoritmo de alineación local de Smith et a 1. (1981) Adv. Appl . Math. 2:482; el algoritmo de alineación global de Needleman and unsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443-453; el método de alineación de búsqueda local de Pearson and Lipman (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. 85:2444-2448; el algoritmo de Karlin and Altschul (1990) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 872264, modificado como en Karlin and Altschul (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:5873-5877. Las implementaciones de computadora de estos algoritmos matemáticos pueden ser utilizadas para comparación de secuencias para determinar la identidad de secuencia. Tales implementaciones incluyen, pero no se limitan a: CLUSTAL en el programa PC/Gene (disponible de Intelligenetics , Mountain View, California); el programa ALIGN (Versión 2.0) y GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA, y TFASTA en el Paquete de Softare GCG Wisconsin Genetics, Versión 10 (disponible de Accelrys Inc., 9685 Scranton Road, San Diego, California, USA) . Las alineaciones usando estos programas pueden ser realizadas usando los parámetros de omisión. El programa CLUSTAL es bien descrito por Higgins et al. (1988) Gene 73:237-244 (1988); Higgins et al. (1989) CABIOS 8: 151-153; Corpet et al (1988) Nucleic Acids Res. 16: 10881-90; Huang et al (1992) CABIOS 8: 155-65; y Pearson et al. (1994) Meth. Mol. Biol. 24:307-331. El programa ALIGN se basa en el algoritmo de Myers and Miller (1988) supra. Una tabla de residuos en peso PAM120, una falta de longitud de apertura de 12, y una falta de apertura de 4, pueden ser usadas con el programa ALIGN cuando se comparan las secuencias de aminoácido. Los programas BLAST de Altschul et al (1990) J. Mol. Biol. 215:403, se basan en el algoritmo de Karlin and Altschul (1990) supra. Se puede realizar búsquedas de nucleótidos BLAST con el programa BLASTN, registro =100, longitud de palabra = 12, para obtener secuencias de nucleótidos homologas a una secuencia de nucleótido que codifica una proteina de la invención. Las búsquedas de proteina BLAST pueden ser realizadas con el programa BLASTX, registro = 50, longitud de palabra = 3, para obtener secuencias de aminoácido homologas a una proteina o polipéptido de la invención. Para obtener alineaciones de apertura con propósitos de comparación, Gapped BLAST (en BALST 2.0), puede ser utilizado como se describe en Altschul et al (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389. Alternativamente, PSI-BLAST (en BLAST 2.0) puede ser usado para realizar una búsqueda iterada que detecta relaciones distantes entre moléculas. Véase Altschul et al. (1997) supra. Cuando se utiliza BLAST, Gapped BLAST, PSI-BLAST, los parámetros de omisión de los programas respectivos (por ejemplo BLASTN para secuencias de nucleótidos, BASTX para proteínas), pueden ser usados. Véase www.ncbi.nlm.nih.gov. La alineación puede también ser realizada manualmente por inspección. A menos que se declare de otro modo, los valores de identidad/similitud de secuencia proporcionados en la presente, se refiere al valor obtenido usando el GAP Versión 10 usando los siguientes parámetros: % de identidad y % de similitud para una secuencia de nucleótido usando Peso GAP de 50 y Peso de longitud de 3, y la matriz de registro nwsgapdna . cmp; % de identidad y % de similitud para una secuencia de aminoácido usando Peso GAP de 8 y Peso de Longitud de 2, y la matriz de registro BLOSUM62. Por "gramo equivalente", se pretende cualquier programa de comparación de secuencia que, para cualquiera de las dos secuencias en cuestión, genera una alineación que tiene nucleótido idéntico o residuo de aminoácido apareados y un porcentaje de identidad de secuencia idéntico, cuando se compara con la alineación correspondiente generada por el GAP Versión 10. El GAP usa el algoritmo de Needleman and unsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443-453, para encontrar la alineación de dos secuencias completas que maximizan el número de apareamientos y minimizan el número de aperturas.

GAP considera todas las alineaciones posibles y posiciones de gap y crea la alineación con el número más grande de bases apareadas y las aperturas en menor número. Se permite para la provisión de una falta de creación de apertura y una falta de extensión de apertura en unidades de bases apareadas. El GAP debe hacer un perfil de número de falta de creación de apertura de apareamientos para que cada apertura se inserte. Si una falta de extensión de apertura mayor de cero se elige, el GAP debe, además, hacer un perfil para cada apertura insertada de la longitud de las veces de apertura de la falta de extensión de apertura. Los valores de falta de creación de apertura por omisión y valores de falta de extensión de apertura en la Versión 10 del Paquete de Software GCG Wisconsin Genetics, para secuencias de proteina son 8 y 2, respectivamente. Para secuencias de nucleótido, la falta de creación de apertura de omisión es 50, mientras la falta de extensión de apertura de omisión es 3. Las faltas de extensión de apertura y creación de hendidura, pueden ser expresadas como un número entero seleccionado del grupo de números enteros que consisten desde 0 hasta 200. De este modo, por ejemplo, las faltas de extensión de apertura y creación de apertura pueden ser, , 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 o mayor. GAP presenta un miembro de la familia de las mejores alineaciones. Puede haber cualquiera de los miembros de esta familia, pero no otros miembros tienen una mejor calidad. El GAP exhibe cuatro figuras de mérito para alineaciones: Calidad, Relación, Identidad y Similitud. La calidad es la métrica maximizada para alinear las secuencias. La relación es la calidad dividida por el número de bases en el segmento más corto. El porcentaje de identidad es el porcentaje de los símbolos que actualmente se aparean. El porcentaje de similitud es el porcentaje de los símbolos que son similares. Los símbolos que cruzan arcos que forman aperturas, son ignorados. Una similitud es registrada cuando el valor de matriz de registro para un par de símbolos es mayor que o igual a 0.50, del umbral de similitud. La matriz de registro usada en la Versión 10 del Paquete de Software GCG isconsin Genetics es BLOSUM62 (véase Henikoff and Henikoff (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 10915) . (c) Como se usa en la presente, "identidad de secuencia" o "identidad", en el contexto de dos polinucleótidos o secuencias de polipéptido, hace referencia a los residuos en las dos secuencias que son las mismas cuando se alinean para una máxima correspondencia sobre una ventana de comparación especificada. Cuando el porcentaje de identidad de secuencia se usa con referencia a proteínas, se reconoce que las posiciones de residuo las cuales no son idénticas, a menudo difieren por sustituciones conservativas de aminoácido, en donde los residuos de aminoácido son sustituidos por otros residuos de aminoácido con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad) y por lo tanto, no cambian las propiedades funcionales de la molécula. Cuando las secuencias difieren en sustitución conservativa, el porcentaje de identidad de secuencia puede ser ajustado ascendentemente para corregir la naturaleza conservativa de la sustitución. Secuencias que difieren por tal sustitución conservativa se dice, tienen "similitud de secuencia" o "similitud". Medios para hacer este ajuste son bien conocidos por aquellos de habilidad en la técnica. Típicamente, esto involucra registrar una sustitución conservativa como un parcial, en lugar de un desapareamiento completo, con ello, incrementando el porcentaje de identidad de secuencia. De este modo, por ejemplo, en donde un aminoácido idéntico es dado un registro de 1 y una sustitución no conservativa es dada un registro de cero, una sustitución conservativa es dada un registro entre cero y 1. El registro de sustituciones conservativas es calculado, por ejemplo, como se implementa en el programa PC/GENE ( Intelligenetics, Mountain View, California) . (d) Como se usa en la presente, "porcentaje de identidad de secuencia", significa el valor determinado comparando dos secuencias óptimamente alineadas sobre una ventana de comparación, en donde la porción de la secuencia de polinucleótido en la ventana de comparación puede comprender adiciones o supresiones (es decir, aperturas) , comparadas con la secuencia de referencia (la cual no comprende adiciones o supresiones), para la alineación óptima de las dos secuencias. El porcentaje es calculado determinando el número de posiciones en las cuales la base de ácido nucleico idéntica o residuo de aminoácido ocurre en ambas secuencias para proporcionar el número de posiciones apareadas, dividiendo el número de posiciones apareadas por el número total de posiciones en la ventana de comparación, y multiplicando el resultado por 100 para proporcionar el porcentaje de identidad de secuencia.

(D) Cásete de Expresión El uso del término "polinucleótido", no está propuesto para limitar la presente invención a polinucleótidos que comprenden ADN . Aquellos de habilidad ordinaria en la técnica, reconocerán que polinucleótidos , pueden comprender ribonucleótidos y combinaciones de ribonucleótidos y desoxirribonucleótidos . Tales desoxirribonucleótidos y ribonucleótidos incluyen, tanto moléculas que se originan naturalmente como análogos sintéticos. Los polinucleótidos de la invención también abarcan todas las formas de secuencias que incluyen, pero no se limitan a, formas de hebra única, formas de doble hebra, hairpinas, estructuras troncales y de bucle, y similares. Cualquiera de las secuencias de polinucleótidos asociadas a ácido oleico alto o aceite alto dentro de la región QTL6 que confiere el rasgo fenotipico de aceite alto y/o ácido oleico alto y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, que incluyen las secuencias loci marcadoras expuestas en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, y 45, y las secuencias codificantes expuestas en las SEC ID NOS:47, 55, 57, 59 y 63, asi como también variantes y fragmentos de las mismas, pueden ser incluidos como parte de un cásete de expresión. De este modo, por ejemplo, los polinucleótidos que codifican el DGAT de ácido oleico alto/aceite alto (es decir, ZmDGATl-2 (ASK) , permeasa de aminoácido, PESP, proteina ribosomal, o proteina transportadora ABC de la invención, pueden ser proporcionados en casetes de expresión por expresión en la planta de interés. Alternativamente, o además de una o más de estas secuencias loci marcadoras, el polinucleótido que codifica el DGAT de aceite normal de la invención (por ejemplo, SEC ID NO: 51 que codifica ZmDGATl-2 (EF09B) de la SEC ID NO: 52), así como también, variantes y fragmentos de las mismas, pueden ser incluidos en el mismo o diferente cásete de expresión, para proporcionar sobre expresión del DGAT de aceite normal. De esta manera, el cásete incluirá las secuencias reguladoras 5' y 3' operablemente ligadas a un polinucleótido que codifica el DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, el DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteína ribosoma, o proteína transportadora ABC de la invención, del polinucleótido de la invención. "Operablemente ligado" se pretende significar un enlace funcional entre dos o más elementos. Por ejemplo, un enlace operable entre un polinucleótido de interés y una secuencia reguladora (es decir, un promotor) , es enlace funcional que permite la expresión del polinucleótido de interés. Elementos operablemente ligados pueden ser contiguos o no contiguos. Cuando se usan para referirse a la unión de las dos regiones que codifican la proteína, por operablemente ligado se pretende que las regiones codificantes estén en la misma estructura lectora. El cásete puede adicionalmente contener al menos, un gen adicional a ser cotransformado en el organismo. Alternativamente, los genes adicionales pueden ser proporcionados en casetes de expresión múltiples. Tal cásete de expresión se proporciona con una pluralidad de sitios de restricción y/o sitios de recombinación para inserción del polinucleótido de interés, por ejemplo, polinucleótidos que codifican el DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteina ribosomal, o proteina transportadora ABC de la invención, para estar bajo regulación transcripcional de las regiones reguladoras. El cásete de expresión puede contener adicionalmente, genes marcadores seleccionables . El cásete de expresión incluirá en la dirección 5' -3' de transcripción, una región de inicio de traducción y transcripcional (es decir, un promotor) , un polinucleótido de la invención, por ejemplo, un polinucleótido que codifica el DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteina ribosomal o proteina transportadora ABC de la invención, y una región de terminación traduccional y transcripcional (es decir, región de terminación) funcional en plantas. Las regiones reguladoras (es decir, promotores, regiones reguladoras transcripcionales y regiones de terminación de traducción) y/o el polinucleótido de la invención, pueden ser nativas/análogas a la célula hospedera o entre si. Alternativamente, las regiones reguladoras y/o el polinucleótido de la invención puede ser heterólogo a la célula hospedera o entre si. Como se usa en la presente, "heterólogo" con referencia a una secuencia, es una secuencia que se origina de especies extrañas, o a partir de las mismas especies, es sustancialmente modificada de su forma nativa en composición y/o locus genómico por intervención humana deliberada. Por ejemplo, un promotor operablemente ligado a un polinucleótido heterólogo es de una especie diferente a partir de las especies de las cuales se deriva el polinucleótido, o, si es a partir de las mismas/análogas especies, una o ambas son sustancialmente modificadas de su forma original y/o locus genómico, o el promotor no es el promotor nativo para el polinucleótido operablemente ligado. Como se usa en la presente, un gen quimérico comprende una secuencia codificante operablemente ligada a una región de iniciación de transcripción que es heteróloga a la secuencia codificante . Mientras puede ser óptimo expresar las secuencias usando promotores heterólogos, las secuencias promotoras nativas pueden ser usadas. Tales constructos pueden cambiar los niveles de expresión del DGAT de ácido oleico alto/ácido alto, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteina ribosomal, o proteina transportadora ABC de la invención en la planta o célula de planta. De este modo, el fenotipo de la planta o célula de planta puede ser alterado.

De estada manera, la expresión de DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, por ejemplo, el ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO: 48, codificado, por ejemplo, por el polinucléotido ZmDGATl-2 (ASK) expuesto en la SEC ID NO: 7, puede ser accionado por su secuencia promotora nativa (hebra complementaria al promotor ZmDGATI-2 (ASK) , es expuesta en la SEC ID NO: 130), o una secuencia promotora para un polipéptido DGAT relacionado, por ejemplo, la secuencia promotora ZmDGATl-2 (Mol7 ) (hebra complementaria al promotor ZmDGATl-2 (Mol7 ) , es expuesta en la SEC ID NO:119), o variantes de la misma biológicamente activas. De manera similar, la expresión de un DGAT de aceite normal, por ejemplo, el ZmDGATl-2 (Mol7 ) de la SEC ID NO: 50, codificado, por ejemplo, por el polinucléotido ZmDGATl-2 (Mol7 ) expuesto en la SEC ID NO: 9, puede ser accionado por su secuencia promotora nativa (hebra complementaria al promotor ZmDGATl-2 (Mol7 ) , es establecida en la SEC ID NO-.119), o una secuencia promotora para un polipéptido DGAT relacionado, por ejemplo, la secuencia promotora ZmDGATl-2 (ASK) (hebra complementaria al promotor ZmDGATl-2 (ASK) es expuesta en la SEC ID NO: 130), o variantes de la misma biológicamente activas. De manera similar, la expresión de ZmAAPl de la SEC ID NO: 56, codificada por ejemplo, por el polinucléotido ZmAAPl expuesto en la SEC ID NO: 55, puede ser accionado por su secuencia promotora nativa, expuesta como nucleótidos 6161-6888 de la SEC ID NO: 117 (véase también SEC ID NO: (20), o una variante de la misma biológicamente activa. La expresión de ZmPESP de la SEC ID NO: 58, codificada, por ejemplo, por el polinucleótido ZmPESP expuesto en la SEC ID NO: 57, puede ser accionada por su secuencia promotora nativa, expuesta como nucleótidos 153888-156887 de la SEC ID NO: 116 (véase también SEC ID NO: 121) o una variante de la misma biológicamente activa (véase por ejemplo, la secuencia promotora ZmPESP (ASK) expuesta en la SEC ID NO: 129). La expresión del ZmS24 de la SEC ID NO: 60, codificada por ejemplo, por el polinucleótido ZmS24 de la SEC ID NO: 59, puede ser accionada por su secuencia promotora nativa, como se expone como nucleótidos 1824-4823 de la SEC ID NO: 117 (véase también, SEC ID NO: 122), o una variante de la misma biológicamente activa. La expresión de la ZmABCT de la SEC ID NO: 64, codificada por ejemplo, por el polinucleótido ZmABCT de la SEC ID NO: 63, puede ser accionado por su secuencia promotora nativa, como se expone como nucleótidos 254826-257825 de la SEC ID NO: 116 (véase también, SEC ID NO: 123), o una variante de la misma biológicamente activa. La región de terminación puede ser nativa con la región de iniciación transcripcional , puede ser nativa con el polinucleótido operablemente ligado de interés, puede ser nativa con la planta hospedera, o puede ser derivada de otra fuente (es decir, extraña o heteróloga) al promotor, el polinucleótido de interés, la planta hospedera, o cualquier combinación de la misma. Las regiones de terminación convenientes son disponibles del plásmido Ti de A. turnefasciens, tal como las regiones de terminación de sintasa nopalina y sintasa octopina. Véase también, Guerineau et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 262: 141-144; Proudfoot (1991) Cell 64:671-674; Sanfacon et al., (1991) Genes Dev. 5:141-149; Mogen et al (1990) Plant Cell 2: 1261-1272; Monroe et al (1990) Gene 91: 151-158; Bailas et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:7891-7903; y Joshi et al. (1987) Nucleic Acids Res. 15:9627-9639. En donde sea apropiado, el polinucleótido puede ser optimizado para expresión incrementada en la planta transformada. Esto es, los polinucleótidos pueden ser sintetizados usando codones preferidos de planta para expresión mejorada. Véase por ejemplo, Campbell and Gowri (1990) Plant Physiol. 92: 1-11, para una discusión del empleo de codón preferido de hospedero. Los métodos son disponibles en la técnica para sintetizar genes preferidos de plantas. Véase por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 5,380,831, y 5,436,391, y Murray et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:477-498, aquí incorporado por referencia. Modificaciones de secuencia adicional se conocen por mejorar la expresión del gen en un hospedero celular. Esta incluyen eliminación de señales de poliadenilación espuria que codifican secuencias, señales de sitio de empalme exón-intrón, repeticiones similares a transposon, y otras de tales secuencias bien caracterizadas que pueden ser deletéreas a la expresión del gen. El contenido G-C de la secuencia puede ser ajustado a niveles promedio para un hospedero celular dado, como se calcula por la referencia a genes conocidos expresados en la célula hospedera. Cuando es posible, la secuencia es modificada para evitar las estructuras pronosticadas de ARNm secundario de hairpina. Los casetes de expresión pueden contener adicionalmente , secuencias líderes al 5' . Tales secuencias líderes pueden actuar para mejorar la traducción. Los líderes de traducción se conocen en la técnica e incluyen: líderes picornavirus, por ejemplo, líder E CV (región no codificante al 5' Encefalomiocarditis ) (Elroy-Stein et al. (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86:6126-6130); líderes potivirus, por ejemplo, líder TEV (virus Etch del Tabaco) (Gallie et al. (1995) Gene 165 ( 2 ) : 233-238 ) , líder MDMV (Virus del Mosaico del Maíz Enano) (Virology 154:9-20), y proteína de enlace de cadena pesada de inmunoglobulina humana (BiP) (Macejak et al. (1991) Wature 353:90-94); líder no traducido del ARNm de proteína revestida del virus del mosaico de la alfalfa (AMV RNA 4) (Jobling et al. (1987) Nature 325:622-625); líder del virus (TMV) del mosaico del tabaco (Gallie et al. (1989) en Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, New York), pp . 237-256); u líder del virus moteado clorótico del maíz (MCMV) (Lommel et al. (1991) Virology 81:382-385). Véase también, Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968. En la preparación del cásete de expresión, los varios fragmentos de ADN pueden ser manipulados, para proporcionar para las secuencias de ADN en la orientación apropiada y, cuando sea apropiada, en la estructura lectora apropiada. Hacia este extremo, adaptadores o enlazadores pueden ser empleados para unir los fragmentos de ADN u otras manipulaciones pueden estar involucradas para proporcionar sitos de restricción convenientes, remoción de ADN superfluo, remoción de sitios de restricción o similares. Para este propósito, la mutagénesis in vitro, reparación de cebador, restricción, templado, resubstituciones, por ejemplo, transiciones y transversiones, pueden estar involucradas. Un número de promotores pueden ser usados en la práctica de la invención, que incluyen el promotor nativo de la secuencia de polinucleótido de interés. Los promotores pueden ser seleccionados basados en el resultado deseado. Los ácidos nucleicos pueden ser combinados con promotores constitutivos, preferidos de tejido, u otros, para la expresión en plantas. Tales promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, el promotor de núcleo del promotor Rsyn7 y otros promotores constitutivos descritos en el documento WO 99/43838 y Patente Estadounidense No. 6,072,050; el promotor CaMV 35S de núcleo (Odell et al. (1985) Nature 313:810-812); actina de arroz (McElroy et al. (1990) Plant Cell 2:163-171); ubiquitina (Christensen et al. (1989) Plant Mol. Biol. 12:619-632 y Christensen et al. (1992) Plant Mol. Biol. 18:675-689); pEMU (Last et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 81:581- 588); MAS (Velten et al. (1984) EMBO J. 3:2723-2730); promotor ALS (Patente Estadounidense No. 5,659,026), y similares. Otros promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 5,608,149; 5,608,144; 5,604,121; 5,569,597; 5,466,785; 5,399,680; 5,268,463; 5,608,142; y 6,177,611. Los promotores regulados químicos, pueden ser usados para modular la expresión de un gen en una planta a través de la aplicación de un regulador químico exógeno. Dependiendo del objetivo, el promotor puede ser un promotor inducible químico, en donde la aplicación del químico induce expresión del gen, o un promotor represible químico, en donde la aplicación del químico reprime la expresión del gen. Los promotores inducibles químicos son conocidos en la técnica e incluyen, pero no se limitan a, el promotor In2-2 de maíz, el cual es activado por asegurador de herbicida de bencensulfonamida, el promotor GST de maíz, el cual es activado por compuestos electrofílieos hidrofóbicos que son usados como herbicidas pre-emergentes , y el promotor PR-la de tabaco, el cual es activado por ácido salicílico. Otros promotores regulados químicos de interés incluyen, promotores sensibles a esteroides (véase por ejemplo, el promotor inducible glucocorticoide en Schena et al. (1991) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88: 10421-10425 y McNellis et al. (1998) Plant J. 14 (2) : 247-257 ) y promotores represivos de tetraciclina e inducibles de tetraciclina (véase, por ejemplo Gatz et al. (1991) Mol. Gen. Genet . 227:229-237, y Patentes Estadounidenses Nos. 5,814,618 y 5,789,156), en la presente incorporada por referencia. Los promotores preferidos de tejido pueden ser utilizados para dirigir la expresión mejorada de la secuencia de interés, por ejemplo, el DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteína ribosomal y/o la proteína transportadora ABC de la invención, dentro de un tejido de planta particular. Los promotores preferidos de tejido incluyen Yamamoto et al. (1997) Plant J. 12 (2) : 255-265; Kawamata et al. (1997) Plant Cell Physiol. 38 (7 ): 792-803; Hansen et al. (1997) Mol. Gen Genet. 254 (3) : 337-343; Russell et al. (1997) Transgenic Res. 6 (2) : 157-168 ; Rinehart et al. (1996) Plant Physiol. 112 (3) : 1331-1341 ; Van Camp et al. (1996) Plant Physiol. 112 ( 2 ): 525-535 ; Canevascini et al. (1996) Plant Physiol. 112 (2) : 513-524 ; Yamamoto et al. (1994) Plant Cell Physiol. 35 ( 5 ): 773-778 ; Lam (1994) Results Probl . Cell Differ. 20: 181- 196; Orozco et al. (1993) Plant Mol Biol. 23(6): 1129-1138; Matsuoka et al. (1993) Proc Nati. Acad. Sci. USA 90 ( 20 ): 9586-9590 ; y Guevara-García et al. (1993) Plant J. 4 ( 3 ) : 495-505. Tales promotores pueden ser modificados, si es necesario, para expresión débil. Promotores "preferidos de semilla" incluyen tanto promotores "específicos de semilla" (aquellos promotores activos durante el desarrollo de semilla tales como promotores de proteínas de almacenamiento de semilla) , así como también, promotores "germinadores de semilla" (estos promotores se activan durante la germinación de semilla) . Véase, Thompson et al. (1989) BioEssays 10:108, en la presente incorporada por referencia. Tales promotores preferidos de semilla incluyen, pero no se limitan a, Ciml (mensaje inducido por citoquinina) ; cZ19Bl (zeína de 19 kDa de maíz); milpas (fosfato sintasa de mio-inositol-1 ) (véase O 00/11177 y Patente Estadounidense No. 6,225,529; en la presente incorporada por referencia). La gama-zeína es un promotor específico de la endosperma. La globulina 1 (Glb-1) es un promotor específico del embrión representativo.

Para dicotiledóneas, promotores específicos de la semilla incluyen, pero no se limitan a, ß-faseolina de frijol, napina, ß-conglicinina, lecitina de soya, cruciferina, y similares. Para monocotiledóneas , promotores específicos de la semilla incluyen, pero no se limitan a, zeína de 15kDa de maíz, zeína de 22 kDa, zeína de 27 kDa, gama-zeína, cerosa, crispado 1, crispado 2, Globulina 1, etc. Véase también el documento WO 00/12733, en donde los promotores preferidos de la semilla a partir de genes endl y end2 se describen; aquí incorporada por referencia. El cásete de expresión puede también comprender un gen marcador seleccionable para la selección de células transformadas. Genes marcadores seleccionables son utilizados para la selección de células o tejidos transformados. Genes marcadores incluyen que codifican resistencia a antibiótico, tal como aquellas que codifican fosfotransferasa II de neomisina (NEO) y fosfotransferasa higromicina (HPT) , así como también genes que confieren resistencia a compuestos herbicidas, tales como glufosinato de amonio, bromoxinilo, imidazolinonas , y 2,4-diclorofenoxiacetato (2, 4-D) . Marcadores seleccionables adicionales incluyen, marcadores fenotípicos tales como ß-galactosidasa y proteínas fluorescentes tales como proteína fluorescente verde (GFP) (Su et al. (2004) Biotechnol Bioeng 55:610-9 y Fetter et al. (2004) Plant Cell 76:215- 28), proteina fluorescente cian (CYP) (Bolte et al. (2004) J. Cell Science 117:943-54 y Kato et al. (2002) Plant Physiol 129:913-42), y proteína fluorescente amarilla (PhiYFP™ de Evrogen, véase, Bolte et al. (2004) J. Cell Science 117:943-54). Para marcadores seleccionables adicionales, véase en general, Yarranton (1992) Curr. Opin . Biotech. 3:506-511; Christopherson et al. (1992) Proc . Nati. Acad. Sci . USA 89:6314-6318; Yao et al. (1992) Cell 71:63-72; Reznikoff (1992) Mol. Microbiol. 6:2419-2422; Barkley et al. (1980) in The Operon, pp . 177-220; Hu et al. (1987) Cell 48:555-566; Brown et al. (1987) Cell 49:603- " 612; Figge et al. (1988) Cell 52:713-722; Deuschle et al. (1989) Proc. Nati. Acad. Aci . USA 86:5400-5404; Fuerst et al. (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86:2549-2553; Deuschle et al. (1990) Science 248:480-483; Gossen (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Reines et al. (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 1917-1921; Labow et all. (1990) Mol. Cell. Biol. 10:3343-3356; Zambretti et al. (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:3952-3956; Bairn et al. (1991) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:5072-5076; yborski et al. (1991) Nucleic Acids Res. 19:4647-4653; Hillenand-Wissman (1989) Topics Mol. Struc. Biol. 10:143-162; Degenkolb et al. (1991) Antimicrob. Agents Chemother. 35:1591-1595; Kleinschnidt et al. (1988) Biochemistry 27: 1094-1104; Bonin (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Gossen et al. (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:5547-5551; Oliva et al. (1992) Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919; Hlavka et al. (1985) Handbook of Experimental Pharmacology, Vol . 78 ( Springer-Verlag, Berlín); Gilí et al. (1988) Nature 334:721-724. Tales descripciones están incorporadas en la presente por referencia . La lista anterior de genes marcadores seleccionables no significa ser limitante. Cualquier gen marcador seleccionable puede ser usado en la presente invención .

(E) Métodos para Introducir Polinucleótido Recombínante en una Plante o Parte de la Misma Los métodos de la invención involucran, introducir un polipéptido o polinucleótido en una planta. "Introducir", se pretende por significar presentar a la planta el polinucleótido o polipéptido en tal manera que la secuencia gana acceso al interior de una célula de la planta. Los métodos de la invención no dependen de un método particular para introducir una secuencia en una planta, solamente que el polinucleótido o polipéptido gana acceso al interior de al menos, una célula de la planta. Los métodos para introducir polinucleótido o polipéptidos en plantas son conocidos en la técnica e incluyen, pero no se limitan a, métodos de transformación estable, métodos de transformación temporal, y métodos mediados por virus. "Transformación estable", está propuesto por significar que el constructo de nucleótido introducido en una planta se integra en el genoma de la planta y es capaz de ser heredado por la progenie del mismo. "Transformación temporal", está propuesto por significar que un polinucleótido es introducido en la planta y no se integra en el genoma de la planta o un polipéptido es introducido en una planta. Los protocolos de transformación, asi como también protocolos para introducir polipéptidos o secuencias de polinucleótido en plantas, pueden variar dependiendo del tipo de planta o célula de planta, es decir, monocotiledónea o dicotiledónea, dirigida para transformación. Métodos adecuados de introducir polipéptidos y polinucleótidos en células de planta incluyen, microinyección (Crossway et al. (1986) Biotechniques 4:320-334), electroporación (Riggs et al. (1986) Proc. Nati. Acad. Sci . USA 83:5602-5606, transformación mediada por Agrobacterium (Patente Estadounidense No. 5,563,055 y Patente Estadounidense No. 5,981,840), transferencia de gen directa (Paszkowski et al. (1984) EMBO J. 3 : 2717 -2722) , y aceleración de partículas balísticas (véase, por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 4,945,050; Patente Estadounidense No. 5,879,918; Patente Estadounidense No. 5,886,244; y, 5,932,782; Tomes et al. (1995) in Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg and Phillips (Springer-Verlag, Berlín); McCabe et al. (1988) Biotechnology 6:923-926); y transformación Lecl (documento WO 00/28058). Véase también, Weissinger et al. (1988) Ann . Rev. Genet. 22:421-477; Sanford et al. (1987) Particulate Science and Technology 5:27-37 (cebolla); Christou et al. (1988) Plant Physiol. 87:671-674 (soya); McCabe et al. (1988) Bio/Technology 6:923-926 (soya); Finer and McMullen (1991) In Mitro Cell Dev. Biol. 27P: 175-182 (soya); Singh et al. (1998) Theor. Appl . Genet. 96:319-324 (soya); Datta et al. (1990) Biotechnology 8 : 736-740 (arroz); Klein et al. (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:4305-4309 (maíz); Klein et al. (1988) Biotechnology 6:559-563 (maíz); Patentes Estadounidenses Nos. 5,240,855; 5,322,783; y, 5,324,646; Klein et al. (1988) Plant Physiol. 91:440-444 (maíz); Fromm et al. (1990) Biotechnology 8:833-839 (maíz); Hooykaas-Van Slogteren et al. (1984) Nature (Londres) 311:763-764; Patente Estadounidense No. 5,736,369 (cereales); Bytebier et al. (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84:5345-5349 (Liliáceas); De Wet et al. (1985) en The Experimental Manipulation of Ovule Tissues, ed. Chapman et al. (Longman, New York), pp . 197-209 (polen); Kaeppler et al. (1990) Plant Cell Reports 9:415-418 y Kaeppler et al. (1992) Theor. Appl. Genet. 84:560-566 (transformación mediada por filamento); D'Halluin et al. (1992) Plant Cell 4: 1495-1505 (electroporación) ; Li et al. (1993) Plant Cell Reports 12:250-255 y Christou and Ford (1995) Annals of Botany 75:407-413 (rice); Osjoda et al. (1996) Nature Biotechnology 14:745-750 (maiz vía Agrobacterium turnefaciens) ; todas las cuales están en la presente incorporadas por referencia. En modalidades especificas, uno o más de los polinucleótidos de la invención por ejemplo, las secuencias loci marcadoras expuestas en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, y 45, y las secuencias codificantes expuestas en las SEC ID NOs:47, 51, 55, 57, 59, y 63, asi como también variantes y fragmentos de las mismas, pueden ser proporcionadas a una planta usando una variedad de métodos de transformación temporal. Tales métodos de transformación temporal incluyen, pero no se limitan a, la introducción de DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteina ribosomal, o proteina transportadora ABC de la invención o variantes y fragmentos de las mismas, directamente en la planta o la introducción en la planta de un polinucleotido que codifica estas proteínas respectivas. Tales métodos incluyen, por ejemplo, microinyección o bombardeo de partículas. Véase por ejemplo, Crossway et al. (1986) Mol Gen. Genet. 202: 179-185; Nomura et al. (1986) Plant Sci. 44:53-58; Hepler et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. 91: 2176-2180 y Hush et al. (1994) The Journal of Cell Science 107:115-184, todas las cuales están en la presente incorporadas por referencia. Alternativamente, el polinucleót ido de interés, que incluye las secuencias loci marcadoras expuestas en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, y 45, y las secuencias codificantes expuestas en las SEC ID NOs:47, 51, 55, 57, 59, y 63, así como también variantes y fragmentos de las mismas, pueden ser temporalmente transformadas en la planta usando técnicas conocidas en el arte. Tales técnicas incluyen sistema vector viral y la precipitación del polinucleótido en una manera que evita la liberación subsecuente del ADN. De este modo, la transcripción del ADN unido a la partícula puede ocurrir, pero la frecuencia con la cual es liberada para llegar a integrarse en el genoma es mayormente reducida. Tales métodos incluyen, el uso de partículas revestidas con polietilimina (PEI; Sigma #P3143) . En otras modalidades, el polinucleótido de la invención puede ser introducido en plantas contactando plantas con un virus o ácidos nucleicos virales. En general, tales métodos involucran incorporar un constructo de nucleótido de la invención dentro de una molécula de ADN o ARN viral. Se reconoce que un polipéptido de la invención, por ejemplo, el DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, DGAT de aceite normal, permeasa de aminoácido, PESP, proteina ribosomal o proteina transportadora ABC de la invención, puede ser inicialmente sintetizada como parte de una poliproteina viral, la cual después, puede ser procesada por proteólisis in vivo o in vitro, para producir la proteina recombinante deseada. Además, se reconoce que promotores de la invención también abarcan promotores utilizados por transcripción por polimerasa de ARN viral. Métodos para introducir polinucleótidos en plantas y expresar una proteina codificada aquí, que involucran moléculas de ADN o ARN viral, se conocen en la técnica. Véase por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 5,889,191, 5,889,190, 5,866,785, 5,589,367, 5,316,931, y Porta et al. (1996) Molecular Biotechnology 5:209-221; aquí incorporada por referencia. Se conocen métodos en la técnica para la inserción dirigida de un polinucleótido en una ubicación especifica en el genoma de la planta. En una modalidad, la inserción del polinucleótido en una ubicación genómica deseada se logra usando un sistema de recombinación especifico del sitio. Véase por ejemplo, documentos W099/25821, W099/25854, WO99/25840, W099/25855, y W099/25853, los cuales todos están incorporados en la presente por referencia. Brevemente, el polinucleótido de la invención puede ser contenido en un cásete de transferencia flanqueado por dos sitios de recombinación no recombinogénicos . El cásete de transferencia es introducido en una planta que tiene establemente incorporado en su genoma, un sitio objetivo el cual es flanqueado por dos sitios de recombinación no recombinogénicos que corresponden a los sitios del cásete de transferencia. Una recombinasa apropiada se proporciona y el cásete de transferencia se integra en el sitio objetivo. El polinucleótido de interés está con ello, integrado en una posición cromosomal especifica en el genoma de la planta. Las células que han sido transformadas pueden hacerse crecer en plantas, de conformidad con las formas convencionales. Véase por ejemplo, McCormick et al. (1986) Plant Cell Reports 5:81-84. Estas plantas pueden entonces hacerse crecer, y ya sea polinizadas con la misma cepa transformada o cepas diferentes, y se identifica la progenie resultante que tiene expresión constitutiva de las características fenotípicas deseadas. Dos o más generaciones pueden hacerse crecer para asegurar que la expresión de la característica fenotípica deseada es establemente mantenida y heredada y después, las semillas cosechadas para asegurar que se ha logrado la expresión de las características fenotípicas deseadas. De esta manera, la presente invención proporciona semilla transformada (también referida como "semilla transgénica") , que tiene un polinucleótido de la invención, por ejemplo, un cásete de expresión de la invención, establemente incorporado en su genoma .

(F) Plantas y Partes de las Mismas Las composiciones de la invención además incluyen plantas, partes de plantas, y células de planta que tienen uno o más de los polinucleótidos recombinantes de la invención. En modalidades específicas, el (los) polinucleótido ( s ) recombinante (s) es (son) establemente integrados en el genoma de la planta, parte de la planta o célula de planta. Como se usa en la presente, el término planta incluye células de plantas, protoplastos de planta, cultivos de tejidos de células de planta a partir de los cuales las plantas pueden ser regeneradas, callo de planta, brotes de planta y células de planta, que están intactas en plantas o partes de plantas tales como embriones (germen) , polen, óvulos, semillas, hojas, flores, ramas, frutos, granos, espigas, mazorcas, cáscaras, tallos, raíces, puntas de raíces, anteras y similares. El grano está propuesto por significar la semilla madura producida por productores comerciales para propósitos distintos del crecimiento o reproducción de las especies. Las progenies, variantes y mutantes de las plantas regeneradas, también están incluidas dentro del campo de la invención, siempre que estas partes comprendan los polinucleótidos introducidos. La presente invención puede ser usada para transformación de cualquiera de las especies de plantas, que incluyen pero no se limitan a, monocotiledóneas y dicotiledóneas. Ejemplos de especies de plantas de interés incluyen, pero no se limitan a, maíz (Zea mays) , Brassica sp. (por ejemplo, B. napus, B. rapa, B. júncea), particularmente aquellas especies de Brassica empleadas como fuentes de aceite de semilla, alfalfa {Medicago sativa), arroz (Oryza sativa), centeno (Sécale cereale) , sorgo (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare) , mijo (por ejemplo, mijo perlado ( Pennisetum glaucum) , mijo poroso (Panicum miliaceum) , mijo cola de zorro {Setaria itálica) , mijo dedo (Eleusine coracana) ) , girasol {Helíanthus annuus) , cártamo (Carthamus tinctorius) , trigo (Triticum aestivum) , soya (Glycine max) , tabaco (Nicotiana tabacum) , papa (Solanum tuberosum) , maní (Arachis hypogaea) , algodón (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum) , papa dulce (Ipomoea batatus) , yuca (Manihot esculenta) , café (Coffea spp. ) , coco (Cocos nucífera) , pina (Ananas comosus) , árboles cítricos {Citrus spp.), cacao {Theobroma cacao), té [Camellia sinensis) , plátano {Musa spp.), aguacate (Persea americana) , ficus (Ficus casica) , guayava {Psidium guajava) , mango {Mangifera indica), oliva (Olea europaea) , papaya {Carica papaya) , anacardo (ñnacardium occidentale) , macadamia (Macadamia integrifolia) , almendra {Prunus amygdalus) , remolacha azucarera (Beta vulgaris) , caña de azúcar ( Saccharujn spp.), avena, cebada, vegetales, ornamentales y coniferas. Los vegetales incluyen tomates (Lycopersicon esculentum) , lechuga (por ejemplo, Lactuca sativa) , frijol (Phaseolus vulgaris) , haba lima (Phaseolus limensis) , guisantes (Lathyrus spp.), y miembros del género Cucumis tales como, pepino (C. sativus) , melón cantaloupe (C. cantalupensis) , y melón dulce (C. meló). Ornamentales incluyen azalea (Rhododendron spp. ) , hortensia (Macrophylla hydrangea) , malváceas (Hibiscus rosasanensis) , rosas (Rosa spp.), tulipanes (Tulipa spp.), narcisos (Narcissus spp.), petunias (Petunia hybrida) , claveles (Dianthus caryophyllus) , euforbias (Euphorbia pulcherrima) , y crisantemos . Las coniferas que pueden ser empleadas en la práctica de la presente invención incluyen, por ejemplo, pinos tales como pino de incienso (Pinus taeda) , pino antillano (Pinus elliotii) , pino ponderosa (Pinus ponderosa) , pino torcido (Pinus contorta) , y pino Monterrey (Pinus radiata) ; Pino Oregón {Pseudotsuga menziesii) ; tsuga del Pacifico (Tsuga canadensis) ; abeto Sitka (Picea glauca); madera roja (Sequoia sempervirens ) ; abetos verdaderos tales como abeto del Colorado (Abies amabilis) y abeto balsámico (Abies balsamea) ; y cedros tales como cedro rojo del Oeste (Thuja plicata) y cedro amarillo de Alaska (Chamaecyparis nootkatensis) . En modalidades especificas, plantas de la presente invención son plantas de cultivos (por ejemplo, maíz, alfalfa, girasol, Brassica, soya, algodón, cártamo, maíz, sorgo, trigo, mijo, tabaco, etc.). En otras modalidades, las plantas de maíz y soya son óptimas, y en aún otras modalidades, las plantas de maíz son óptimas. Otras plantas de interés incluyen, granos de plantas que proporcionan semillas de interés, plantas de semilla de aceite, y plantas de leguminosas. Semillas de interés incluyen, semillas de grano, tales como maíz, trigo, cebada, arroz, sorgo, centeno, etc. Las plantas de semilla de aceite incluyen, algodón, soya, cártamo, girasol, Brassica, maíz, alfalfa, palma, coco, etc. Las plantas de leguminosas incluyen, frijol y guisantes. Los frijoles incluyen, guar, locus de frijol, heno, soya, frijoles de jardín, chícharo, judía, frijol lima, haba, lenteja, garbanzo, etc.

En algunas modalidades, las plantas de la invención comprenden un polinucleótido heterólogo que está genéticamente ligado a la región QTL6 identificada en la presente y la cual confiere el rasgo fenotipico de aceite alto y/o ácido oleico alto, y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico a una planta o parte de planta de la misma. De esta manera, plantas de la invención pueden comprender incorporado establemente en su genoma, un polinucleótido heterólogo que comprende al menos, una secuencia asociada al aceite alto o al menos, una secuencia asociada al ácido oleico alto, operablemente ligada a un promotor activo en la planta o parte de la planta, en donde la secuencia asociada al aceite alto o la secuencia asociada al ácido oleico alto, se deriva de una secuencia de nucleótido genómico genéticamente ligada al menos, a un locus marcador favorable que está asociado con contenido de aceite alto o ácido oleico alto, en donde el locus marcador se selecciona del grupo que consiste de las SEC ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, y 51, con al menos un polimorfismo ahi. La expresión del polinucleótido heterólogo que comprende la secuencia asociada con aceite alto o la secuencia asociada con ácido oleico alto, incrementa el contenido de aceite o el contenido de ácido oleico en la planta o parte de la planta. En algunas modalidades, el polinucleótido heterólogo comprende al menos, una secuencia seleccionada del grupo que consiste de las secuencias expuestas en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, y 47, o una variante o fragmento de las mismas que comprende al menos, uno de los polimorfismos identificados en estas secuencias respectivas, en donde la expresión del polinucleótido heterólogo incrementa el contenido de aceite y/o el contenido de ácido oleico en la planta o parte de la planta. En otras modalidades, las plantas comprenden un constructo de expresión que comprende un polinucleótido que codifica el polipéptido DGAT de aceite normal de la invención (por ejemplo, ZmDGAT12-2 (EF09B) , o una variante biológicamente activa o fragmento del mismo, operablemente ligado a un promotor que es funcional en una célula de planta. Este constructo de expresión proporciona la sobre expresión del polipéptido DGAT de aceite normal, o un fragmento o variante del mismo biológicamente activo. Como el DGAT de aceite normal está involucrado en la biosintesis de aceite, la sobre expresión de esta proteina, o la sobre expresión de una variante biológicamente activa o fragmento de la misma, dentro de una planta o parte de planta, puede conducir a un incremento en el contenido de aceite, contenido de ácido oleico y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de tal planta o parte de planta. Véase por ejemplo, los métodos descritos en el Ejemplo 11 aqui abajo. En ciertas modalidades, los polinucleótidos de la invención pueden ser apilados con cualquier combinación de secuencias de polinucleótidos de interés, para crear plantas con un rasgo deseado. Un rasgo, como se usa en la presente, se refiere al fenotipo derivado de una secuencia particular o grupos de secuencias. Por ejemplo, uno o más de los polinucleótidos de la presente invención, los cuales confieren el fenotipo de aceite alto y/o ácido oleico alto, pueden ser apilados con cualquiera de otros polinucleótidos que codifican polipéptidos que tienen actividad pesticida y/o insecticida, tal como otras proteínas tóxicas de Bacillus thuringiensis (descrito en las Patentes Estadounidenses Nos. 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881; y Geiser et al. (1986) Gene 48: 109), lectinas (Van Damme et al. (1994) Plant Mol. Biol. 24:825, pentina (descrita en la Patente Estadounidense No. 5,981,722), y similares. Las combinaciones generadas pueden también incluir copias múltiples de cualquiera de los polinucleótidos de interés. Los polinucleótidos de la presente invención pueden también ser apilados con cualquier otro gen o combinación de genes para producir plantas con una variedad de combinaciones de rasgos deseados, que incluyen pero no se limitan a, rasgos deseables para alimentación animal, tales como genes de aceite alto (por ejemplo, Patente Estadounidense No. 6,232,529) o genes que están involucrados en la biosintesis de aceite, que incluyen el DGAT de aceite normal descrito en la presente (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) ; aminoácidos balanceados (por ejemplo, hordot ioninas (Patentes Estadounidenses Nos. 5,990,389; 5,885,801; 5,885,802; y 5,703,409); lisina alta en cebada (Williamson et al. (1987) Eur. J. Biochem. 165:99-106; y documento WO 98/20122) y proteínas de metionina alta (Pedersen et al. (1986) J. Biol. Chem. 261:6279; Kirihara et al. (1988) Gene 71:359; y Musumura et al. (1989) Plant Mol. Biol. 12: 123)); digestibilidad incrementada (por ejemplo, proteínas de almacenaje modificadas (Solicitud Estadounidense Serie No. 10/053,410, presentada en Noviembre 7, 2001); y tioredoxinas (Solicitud Estadounidense Serie No. 10/005,429, presentada en Diciembre 3, 2001)); las descripciones de las cuales están incorporadas en la presente por referencia. Los polinucleótidos de la presente invención pueden también ser apilados con rasgos deseables para resistencia a enfermedad o herbicidas (por ejemplo, genes de destoxificación de fumosinina (Patente Estadounidense No. 5,792,931); genes de resistencia a la enfermedad y avirulencia (Jones et al. (1994) Science 266:789; Martin et al. (1993) Science 262: 1432; Mindrinos et al. (1994) Cell 78: 1089); mutantes de acetolactato sintasa (ALS) que conducen a resistencia de herbicida tales como las mutaciones S4 y/o Hra; inhibidores de glutamina sintasa tales como fosfinotricina o basta (por ejemplo, el gen bar) ; y resistencia a glifosfato (gen EPSPS) ) ; y rasgos deseables para procesamiento o productos de proceso tales como aceite alto (por ejemplo, Patente Estadounidense No. 6,232,529); aceites modificados (por ejemplo, genes desaturasa de ácido graso (patente Estadounidense No. 5,952,544; documento WO 94/11516)); almidones modificados (por ejemplo, pirofosforilasa ADPG (AGPase) , sintasas de almidón (SS) , enzimas de ramificación de almidón (SBE) , y enzimas de desramificación de almidón (SDBE) ) ; y polímeros o bioblásticos (por ejemplo, Patente Estadounidense No. 5.602,321; beta-cetotiolasa , polihidroxibutirato sintasa, y acetoacetil-CoA reductasa (Schubert et al. (1988) J. Bacteriol. 170:5837-5847), facilitan la expresión de polihidroxialcanoatos (PHAs) ) ; descripciones las cuales están en la presente incorporadas por referencia. También se podrían combinar los polinucleótidos de la presente invención con polinucleótidos que proporcionan rasgos agronómicos tales como esterilidad masculina (por ejemplo, véase Patente Estadounidense No. 5.583,210), resistencia de tallo, tiempo de floración o rasgos de tecnología de transformación, tales como regulación del ciclo celular o gen objetivo (por ejemplo, documentos O 99/61619, WO 00/17364, y WO 99/25821); descripciones de los cuales están incorporados aquí por referencia. Estas combinaciones apiladas pueden ser creadas por cualquier método que incluye pero no se limita a, plantas de reproducción cruzada, cualquier metodología de Cruza superior o convencional, o transformación genética. Si las secuencias son apiladas transformando genéticamente las plantas, las secuencias de polinucleótidos de interés, pueden ser combinadas en cualquier tiempo y en cualquier orden. Por ejemplo, una planta transgénica que comprende uno o más rasgos deseados, puede ser usada como el objetivo para introducir rasgos adicionales por transformación subsecuente. Los rasgos pueden ser introducidos simultáneamente en un protocolo de co-transformación con los polinucleótidos de interés proporcionados por cualquier combinación de casetes de transformación. Por ejemplo, si dos secuencias serán introducidas, las dos secuencias pueden ser contenidas en casetes de transformación separados (trans) o combinados con el mismo cásete de transformación (cis). La expresión de las secuencias puede ser accionada por el mismo promotor o por promotores diferentes. En ciertos casos, puede ser deseable introducir un cásete de transformación que suprimirá la expresión de otro polinucleótido de interés. Esto puede ser combinado con cualquier combinación de otros casetes de supresión, o casetes de sobre expresión para generar la combinación deseada de rasgos en la planta. Se reconoce además, que las secuencias de polinucleótido pueden ser apiladas en una ubicación genómica deseada usando un sistema de recombinación especifico del sitio. Véase por ejemplo, documentos W099/25821, W099/25854, WO99/25840, 099/25855, y 099/25853, todas las cuales están incorporadas en la presente por referencia. En tal modalidad, uno o más de los polinucleótidos alto en aceite y/o ácido oleico alto asociados de la invención (por ejemplo, ZmDGATI-2 (ASK) de la SEC ID NO: 7), o un polinucleótido DGAT de aceite normal de la invención (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) de la SEC ID NO: 51), o cualquier combinación de los mismos, es apilada con un polinucleótido heterólogo que codifica un domino tipo B del activador transcripcional del Cotiledón de Hoja 1 (LEC1), o una variante o fragmento del mismo biológicamente activo, el cual proporciona la modulación adicional del nivel de aceite en una planta. El activador transcripcional del Cotiledón 1 de hoja (LEC1), es un miembro de la familia del activador de la transcripción HAP 3 (proteina heme-activada ) , cuyos miembros están caracterizados por tener tres regiones: los dominios A, B y C. El dominio central B es conservado entre los miembros de la familia y comprende la porción enlazante de caja CCAAT enlazante al ADN conservada. La Figura 30 proporciona una alineación de secuencia de varios miembros de la familia del activador transcripcional HAP3 y denota las posiciones del dominio A, B y C y además, muestra la caja CCAAT conservada. Basados en tanto identidad y función de secuencia, miembros de la familia HAP3 han sido divididos en dos clases : miembros que tienen un dominio LEC1 tipo B y miembros qug tienen un dominio tipo B no LEC1. La sobre expresión de un polipéptido que comprende un dominio LEC1 tipo B en una planta o parte de planta de la misma, que benéficamente incrementa la producción de aceite en una planta o parte de planta del mismo. Véase por ejemplo, Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20050160494, aquí incorporada por referencia en su totalidad . Los dominios B de varios miembros de la familia del activador transcripcional HAP3, están alineados en la Figura 31. El dominio B para el LEC1 de Arabidopsis, a partir del residuo de aminoácido 28 al residuo 117, portan entre 55% y 63% de identidad (75-85% de similitud) a otros miembros de la familia HAP3, que incluyen maíz (HAP3) , pollo, lamprea, Xenopus, humano, ratón, Emericella nidulens, Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae y Kluuyveromyces lactis (Lotan et al. (1998) Cell 93: 1193-1205). Las secuencias ligeramente sombreadas, superiores, son miembros representativos del dominio LECl tipo B, mientras las secuencias oscuramente sombreadas, inferiores, son representativos de miembros del dominio tipo no LECl. En general, el dominio tipo LECl comprende 16 residuos conservados que difieren de los residuos conservados en posiciones equivalentes dentro de los dominios tipo B no LECl (Lee et al. (2003) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 100:2152-2156, en la presente incorporada por referencia en su totalidad) . Estos residuos residen dentro de una porción del dominio LECl tipo B, que es representado por la secuencia consenso expuesta en la SEC ID NO: 49. Se reconoce sin embargo, que los 16 residuos conservados expuestos en la secuencia consenso para esta porción de un dominio LECl tipo B, pueden ser alterados y el polipéptido LECl todavía retiene la actividad LECl. El aminoácido D28 de la SEC ID NO: 49, se encontró por jugar un papel importante en la retención de la actividad LECl. En una modalidad, un dominio LECl tipo B, comprende el dominio LEC-1 tipo B expuesto en los residuos 36-126 de la SEC ID NO: 51, el cual expone el polipéptido LECl de maíz. El dominio LEC-1 tipo B del polipéptido LECl de maíz, es codificado por nucleótidos 106-378 de la SEC ID NO: 50, el cual expone la secuencia codificante para el polipéptido LEC1 de maíz. Varios polinucleótidos y polipéptidos que tienen dominios LEC1 tipo B, se exponen en las Publicaciones de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20030126638 y 20030204870, ambas las cuales están incorporadas en la presente por referencia en su totalidad. Como se resume en detalle en otra parte aqui, las variantes y fragmentos de la misma biológicamente activos del dominio LEC1 tipo B, también pueden ser empleadas en los métodos de la invención dirigidos al apilamiento de uno o más de los polinucleótidos asociados al ácido oleico alto/aceite alto de la presente invención, un polinucleótido DGAT de aceite normal de la invención, o cualquier combinación de los mismos, con un polinucleótido heterólogo que codifica un dominio LEC1 tipo B, con ello confiriendo un fenotipo alto en aceite y/o ácido oleico alto y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico en una planta o parte de planta de la misma. Tales variantes y fragmentos se conocen en la técnica. Véase por ejemplo, Figura 31 y también, Lee et al. (2003) PNAS 2152-2156 y Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20050034193. Los fragmentos y variantes biológicamente activos del domino LEC1 tipo B, continuarán reteniendo la actividad LEC1 cuando el dominio es colocado dentro del contexto de un dominio funcional A y/o funcional C de un activador transcripcional HAP3. Como se usa en la presente, "actividad LECl", se define como la capacidad de un polipéptido para mejorar la síntesis lípida como se refleja en la producción incrementada de aceite. En una modalidad, el polinucleótido o polipéptido LECl empleado en la invención comprende, el polinucleótido y polipéptido expuesto en la SEC ID NO: 50 y SEC ID NO: 51, respectivamente. Como se resume en detalle en otra parte en la presente, variantes biológicamente activas y fragmentos del polinucleótido y polipéptido LECl, también pueden ser empleados en los métodos de la invención. Tales variantes y fragmentos se conocen en la técnica. Véase por ejemplo, Figuras 33 y 34 y también, Lee et al. (2003) PNAS 2152-2156; Kwong et al. (2003) The Plant Cell 15:5-18; Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20030126638; WO 02/57439, Patente Estadounidense No. 6,825,397; Patente Estadounidense No. 6,781,035; Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20050034193; y documento WO 98/37184, cada uno de los cuales está incorporado en la presente por referencia. Como se usa en la presente, un "activador transcripcional HAP3", comprende un miembro de la familia HAP3. Esta familia de activadores transcripcionales está estructuralmente bien estructurada. Véase, Li et al. (1992) Nucleic Acid Research 20:1087-1091; Xing et al. (1993) EMBO J. 12:4647-4655; Kim et al. (1996) Mol. Cell Biol . 16:4003-4013; Sinha et al. (1996) Mol Cell Biol 16:328-337; y, Lotan et al. (1998) Cell 93: 1195- 1205, cada una de las cuales está en la presente incorporada por referencia. En los métodos y composiciones de la invención, el activador transcripcional HAP3 comprende, un dominio LEC1 tipo B. Por consiguiente, un activador transcripcional HAP3 empleado en la presente invención, puede comprender un polipéptido quimérico que tiene un dominio funcional A y/o un dominio funcional B a partir del activador transcripcional HAP3 el cual, en su forma nativa, puede o no puede tener un dominio LEC1 tipo B. Véase por ejemplo, Lee et al. (2003) PNAS 2152-2156. En una modalidad, un polinucleótido heterólogo que codifica una variante de ácido oleico alto/aceite alto de DGAT, por ejemplo, el polipéptido ZmDGATl-2 (ASK) o variante o fragmento del mismo biológicamente que confiere el fenotipo de aceite alto/ácido oleico alto, es apilado con un polinucleótido heterólogo que codifica un polipéptido que comprende, un dominio LEC1 tipo B que tiene una secuencia de aminoácido expuesta en la SEC ID N:65, o una variante o fragmento del mismo biológicamente activo de la SEC ID NO: 65, en donde la variante biológicamente activa comprende al menos 80% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 65, en donde el polipéptido o la variante o fragmento de la misma biológicamente activo tiene actividad LECl. En algunas modalidades, el polinucleótido heterólogo que codifica la variante alta de aceite/ácido oleico alto de DGAT, comprende la secuencia de polinucleótido expuesta en la SEC ID NO: 47, o una variante o fragmento de la misma y el polinucleótido que codifica el dominio LECl tipo B que comprende la secuencia de polinucleótido expuesta en la SEC ID NO: 66 o una variante o fragmento del mismo. En aún otras modalidades, un polinucleótido heterólogo que codifica un DGAT de aceite normal, por ejemplo, el polipéptido ZmDGATl-2/EF09B) , o un fragmento o variante del mismo biológicamente activo, capaz de incrementar el contenido de aceite y/o contenido de ácido oleico cuando se sobre expresa en una planta o parte de planta de la misma, es apilado con un polinucleótido heterólogo que codifica un polipéptido que comprende un dominio LECl tipo B que tiene una secuencia de aminoácido expuesta en la SEC ID NO: 65 o una variante biológicamente activa o un fragmento de la SEC ID NO: 65, en donde la variante biológicamente activa comprende al menos, 80% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 65, en donde el polipéptido o la variante biológicamente activa o fragmento de la misma, tiene actividad LECl. En algunas modalidades, el polinucleotido heterologo que codifica el DGAT de aceite normal, comprende el polinucleótido expuesto en la SEC ID NO: 51 o variante o fragmento del mismo y el polinucleótido que codifica el dominio LEC1 tipo B, comprende la secuencia de polinucleótido expuesta en la SEC ID NO: 66, o una variante o fragmento de la misma. Se reconoce que en donde · uno o más polinucleotidos de la invención son apilados con un polinucleótido heterologo que codifica un polipéptido que comprende un dominio LEC1 tipo B, estas secuencias pueden también ser apiladas con uno o más polinucleotidos que proporcionan inhibición de la expresión o función de un producto de gen que está involucrado en la biosintesis del almidón, con ello, además mejorando la producción de aceite y alteraciones en la calidad del aceite. De esta manera, un decremento en la síntesis de almidón puede lograrse a través de la expresión reducida de genes que codifican proteínas que normalmente sirven como proteínas nucleantes de almidón, catalizadores enzimáticos, o transportadores asimilados involucrados en la biosintesis del almidón. Cualquiera de los mecanismos conocidos en la técnica para efectuar la inhibición de la expresión del gen puede ser usado para interferir óptimamente con los genes de biosintesis del almidón que incluyen, pero no se limitan a, genes que codifican sintasa sucrosa, heoxicinasa ( s ) , fosfoglucomutasa, fosfoglucoisomerasa, ADP-glucosa purofosforilasa (AGP) , amilogenina (un cebador de proteina de biogénesis de almidón) , sintasa de almidón unida y soluble y enzimas de ramificación de almidón, enzimas de desramificación de almidón, enzimas isoamilasa, fosforilasas de almidón y la proteina de transporte Frágil-1. Véase por ejemplo, Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20050160494, titulada "Alteration of Oil Traits in Plants", incorporada en la presente por referencia en su totalidad. En otras modalidades, uno o más de los polinucleótidos asociados de aceite alto y/o ácido oleico alto de la invención, o un polinucleótido DGAT de aceite normal de la invención (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) de la SEC ID NO:51), o cualquier combinación de los mismos, es apilada con un polinucleótido heterólogo que proporciona alteración de la calidad del aceite incrementada producida dentro de la planta alterando la expresión o función de proteínas o enzimas que están involucradas en la modificación lípida. Ejemplos de proteínas y enzimas que modifican las características del aceite dentro de una planta incluyen, pero no se limitan, a cualquiera de las desaturasas de ácido graso, por ejemplo, desaturasa de proteína portadora de estearoil acilo (Fadl; véase Patente Estadounidense No. 6,117,677), desaturasa delta-15 (omega- 3) (Fad3; Shah et al. (1997) Plant Physiol. 114: 1533-1539), (trans) desaturasa delta-4 (Fad4; Xiao et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:31561-31566), desaturasa delta-7, (Fad5; véase Patente Estadounidense No. 6,635,451), desaturasa de ácido graso omega-6 (Fad6; véase Patente Estadounidense No. 6,635,451), desaturasa de ácido graso omega-3 (Fad7; Iba et al. (1993) J. Biol. Chem. 268:24099-24105), desaturasa delta-5 (véase Patente Estadounidense No. 6,589,767), desaturasa delta-9 (véase Patente Estadounidense No. 5,723,595), acilo graso-COA: aciltransferasa de alcohol graso (sintasa cerosa; véase Patente Estadounidense No. 6,492,509), sintasa beta-cetoacilo-ACP en una orientación sentido o antisentido (véase Patente Estadounidense No. 6,483,008), y desaturasa de ácido graso delta-12 (FAD2), una enzima que convierte ácido oleico a ácido linoleico introduciendo un doble enlace en la posición delta-12 (Okuley et al. (1994) Plant Cell 6: 147-58). Ejemplos de FAD2 y secuencias codificantes correspondientes, son bien conocidos en la técnica. Véase por ejemplo, Acceso a GenBank No. NM_112047; Acceso a GenBank No. AF243045; Patente Europea No. EP0668919 Bl; Patente Estadounidense No. 6,291,742; Patente Estadounidense No. 6,310,194; Patente Estadounidense No. 6,323,392; Patente Estadounidense No. 6,372,965; Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20030033633; y Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20030140372; todas las cuales se incorporan en su totalidad aquí por referencia. Las proteínas FAD2 en maíz, han sido identificadas. Una de tales proteínas FAD2 es la llamada ZmFAD2-l (secuencia de nucleótido expuesta en la SEC ID NO: 131, secuencia de aminoácido expuesta en la SEC ID NO: 132) y la otra es llamada ZmFAD2-2 (Kinney et al. (2001) Biochem. Soc. Trans. 30: 1099-1103; y Mikkilineni et al. (2003) Theor. Appl . Genet. 106: 1326-1332). La supresión o deleción de ambos genes incrementa la concentración relativa de ácido oleico por 75%. De este modo, interfiriendo con la actividad de desaturasa de ácido graso, por ejemplo, inhibiendo la expresión o función de FAD2 , la conversión de ácido oleico en ácido linoleico puede ser prevenida, y de este modo, el ácido oleico se acumula en la planta o parte de planta de la misma tal como semilla, que incluye embriones de semillas . En algunas modalidades, uno o más de los polinucleótidos asociado de ácido oleico alto y/o aceite alto de la invención, o un polinucleótido DGAT de aceite normal de la invención (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) de la SEC ID NO: 51), o cualquier combinación de los mismos, es apilado dentro de una antecedente de germoplasma de planta que tiene un alelo favorable para FAD2 que normalmente confiere un fenotipo de ácido oleico alto a tal planta. Por "fenotipo de ácido oleico alto", en el contexto de un alelo favorable para FAD2 , se pretende que la planta o parte de planta de la misma, por ejemplo, la semilla o embrión, tenga una concentración de ácido oleico de aproximadamente 30% o mayor. De este modo, por ejemplo, en maíz, las lineas convencionales que no tienen un alelo FAD2 favorable, tienen una concentración de ácido oleico en semilla o embrión de aproximadamente 25% o menos. Véase por ejemplo, la concentración de ácido oleico en el embrión de la linea parental de maíz de aceite normal, EF09B, en la Figura 4. Tal apilamiento puede ser realizado introduciendo los polinucleótidos asociados de ácido oleico alto y/o aceite alto de la invención (por ejemplo, ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO: 7), o el polinucleótido DGAT de aceite normal de la invención (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) de la SEC ID NO: 51), o cualquier combinación de los mismos, en este antecedente de germoplasma favorable, ya sea vía métodos de transformación o a través de métodos de reproducción conocidos en la técnica y descritos en otra parte en la presente. Véase por ejemplo, los métodos descritos en el Ejemplo 14 aquí posteriormente. En otras modalidades, uno o más de los polinucleótidos asociados de ácido oleico alto y/o aceite alto de la invención (por ejemplo, ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO:47), o un polinucleótido DGAT de aceite normal de la invención (por ejemplo, ZmDGATl-2 (EF09B) de la SEC ID N0:51), o cualquier combinación del mismo, es apilada con un polinucleótido heterólogo que comprende una secuencia inhibidora FAD2 diseñada para silenciar la expresión de un FAD2. Los métodos para silenciar la expresión de FAD2 se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20050160494 y documento O 2005/063988, aquí incorporada por referencia en su totalidad. Suprimiendo la expresión o función de un FAD2 , el incremento adicional en el contenido de ácido oleico y/o la relación de ácido oleico/ácido linoleico, se puede lograr más allá de aquella conferida por la expresión de los polinucleótidos asociados de ácido oleico alto y/o aceite alto de la invención, o la sobre expresión del polinucleótido DGAT de aceite normal de la invención. Una "secuencia inhibidora FAD2", podría referirse a una secuencia inhibidora que es capaz de inhibir la expresión de un FAD2 (por ejemplo, una secuencia inhibidora FAD2 que dirige a ZmFAD2-l), al nivel de transcripción y/o traducción, o la cual es capaz de inhibir la función de un FAD2. Cuando la frase "capaz de inhibir" se usa en el contexto de una secuencia inhibidora de polinucleótido, se pretende significar que la secuencia inhibidora misma ejerce el efecto inhibidor; o, en donde la secuencia inhibidora codifica una molécula de nucleótido inhibidora (por ejemplo, hairpina, ARNmi, o polinucleótidos de ARN de doble hebra) , o codifica un polipéptido inhibidor (es decir, un polipéptido que inhibe la expresión o función del producto de gen objetivo), después de su transcripción (por ejemplo, en el caso de una secuencia inhibidora que codifica un ARN de hairpina, ARNmi o polinucleótido de ARN de doble hebra) , o su transcripción y traducción (en el caso de una secuencia inhibidora que codifica un polipéptido inhibidor) , el producto traducido o transcrito, respectivamente, ejerce el efecto inhibidor en el producto de gen objetivo (es decir, inhibe la expresión o función del producto de gen objetivo) . Cualquier secuencia de nucleótido que codifica un FAD2 conocido en la técnica, puede ser usada en los métodos de la invención que usan un procedimiento transgénico para apilar los polinucleótidos de la invención asociados con ácido oleico alto y/o aceite alto, o el DGAT1-2 de aceite normal de la invención, o cualquier combinación de los mismos, con un polinucleótido heterólogo que es diseñado para inhibir la expresión o función de un FAD2. En algunas modalidades, el polinucleótido heterólogo comprende una secuencia de nucleótido FAD2, tal como ZmFAD2-l (SEC ID NO: 131), una secuencia de nucleótido que codifica a ZmFAD2- 1 de la SEC ID NO: 132, una secuencia de nucleótido ZmFAD2-2, combinaciones de ambos, y similares. Véase por ejemplo, las secuencias descritas en Mikkilineni et al. (2003) Theor. Appl. Genet. 106:1326-1332. El algunas modalidades, la secuencia FAD2 se selecciona de, pero no se limita a, aquellas descritas en el Acceso a GenBank No. NM_112047, Acceso a GenBank No. AF243045, Patente Estadounidense No. 6,323,392, Patente Estadounidense No. 6,372,965, Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20030033633, y Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20030140372, todas las cuales se incorporan aquí en su totalidad por referencia. En otras modalidades, el polinucleótido heterólogo comprende regiones truncadas de la secuencia de nucleótido ZmFAD2, por ejemplo, ZmFAD2-l de la SEC ID NO: 131, en la orientación sentido y orientación antisentido; véase por ejemplo, la SEC ID NO: 133. Por ejemplo, en algunas modalidades, el polinucleótido heterólogo comprende una secuencia inhibidora FAD2 que es expresada en la orientación sentido. En algunas modalidades, los transcriptos orientados en sentido causa co-supresión . En otras modalidades, la expresión orientada en sentido de los transcriptos FAD2 truncados, causa que las proteínas no funcionales sean expresadas y de este modo, inhibe la actividad FAD2.

Alternativamente, la secuencia o secuencias inhibidoras FAD2, pueden ser expresadas en la orientación antisentido y de este modo, inhibir la expresión o actividad FAD2 endógena por los mecanismos antisentido. En aún otras modalidades, la secuencia o secuencias inhibidoras FAD2 dentro del polinucleótido heterólogo, son expresadas como un ARN de hairpina, el cual tiene tanto una secuencia sentido como un componente de secuencia antisentido. En modalidades que comprenden una estructura de hairpina, la estructura de bucle puede comprender cualquier secuencia de nucleótido adecuada que incluye por ejemplo, las regiones 5' no traducidas del gen a ser suprimido, tal como la 5' UTR de FAD2, las secuencias de nucleótidos de intrón de deshidrogenasa de alcohol (adhl) , nucleótidos aleatorios, espaciadores polinucleótido, y similares (véase también, Bailey-Serres and Dawe (1996) Plant Physiol. 112:685) . En algunas modalidades, la secuencia inhibidora FAD2 o secuencias expresadas como una hairpina, son codificadas por una región invertida de las secuencias de nucleótido que codifican a FAD2 , tales como la secuencia de nucleótido ZmFAD2-l (SEC ID NO: 131), la secuencia de nucleótido ZmFAD2-2, o una combinación de las mismas. En aún otras modalidades, las secuencias inhibidoras son expresadas como ARN de doble hebra, en donde la secuencia FAD2 inhibidora es expresada en la orientación sentido y otra secuencia complementaria es expresada en la orientación antisentido. Véase por ejemplo, la secuencia inhibidora de polinucleótido FAD2 expuesta en la SEC ID NO: 133, ARN de doble hebra, estructuras de hairpina y combinaciones de las mismas, que comprenden secuencias FAD2, pueden operar por interferencia de ARN, cosupresión, mecanismos antisentido, cualquier combinación de los mismos, o por medio de cualquier otro mecanismo que causa inhibición de la expresión o función FAD2. En otras modalidades, uno o más polinucleótidos asociados de aceite alto y/o ácido oleico alto de la invención, es apilado con un polinucleótido heterologo que codifica un polipéptido involucrado en la alteración de rasgos de aceite en plantas, en donde el polipéptido es uno descrito en la Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20030304870, titulada "Alteration of Oil Traits in Plants" , en la presente incorporada por referencia en su totalidad. En tal modalidad, el polinucleótido codifica un aintegumento CKC tipo 2 (SEC ID NO: 320 de la Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20030204870, la secuencia codificante SEC ID NO: 319 de esta publicación de solicitud de patente), la cual proporciona la modulación adicional del nivel de aceite en una planta.

En otras modalidades de la invención, uno o más de los polinucleótidos de la invención asociados a aceite alto y/o ácido oleico alto, es apilado con un antecedente genético "TUSC27". Las plantas que comprenden el antecedente genético TUSC27, comprenden la inserción Mu TUSC heredable del alelo en el gen gama-zeína de 27 kD que contribuye a la calidad de grano mejorada, particularmente digestabilidad mejorada del grano. Véase por ejemplo, Publicación de Solicitud de Patente Estadounidense No. 20050204418, titulada "Grain Quality through Altered Expression of Seed Proteins" , aquí incorporada por referencia en su totalidad.

III. Métodos (A) Modulación del Nivel de una Secuencia de la Invención La introducción y expresión de uno o más de los polinucleótidos de la invención asociados de aceite alto y/o ácido oleico alto, o un polinucleótido de la invención DGAT de aceite normal, en una planta, permite un incremento en el nivel del polipéptido codificado, por ejemplo, una variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, un AAP1, un PESP, una proteina S24 ribosomal 40S, y/o una proteina transportadora ABC. Un "nivel modulado" o "que modula el nivel" de un polinucleótido o un polipéptido en el contesto de los métodos de la presente invención, se refiere a cualquier incremento en la expresión, concentración y/o actividad de un producto gene (es decir, polipéptido o polinucleótido) , que incluye cualquier incremento relativo en la expresión, concentración y/o actividad. El término "expresión", como se describe en la presente en el contexto de un producto de gen, se refiere a la biosintesis de tal producto que incluye, la transcripción o traducción del producto de gen. En general, el nivel del polipéptido o el polinucleótido se incrementa por al menos, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 120%, o mayor, con relación a una planta de control nativo, parte de planta o célula. La modulación en la presente invención puede ocurrir durante y/o subsecuente al crecimiento de la planta al nivel de desarrollo deseado. En modalidades especificas, los polinucleótidos o los polipéptidos de la presente invención, son modulados en monocotiledóneas , particularmente maíz. El nivel de expresión de una variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, un AAP1, un PESP, una proteina S24 ribosomal 40S, y/o una proteina transportadora ABC del polipéptido de la invención, puede ser medida directamente, por ejemplo, ensayando para determinar el nivel del polipéptido respectivo en la planta, o indirectamente, por ejemplo, midiendo la actividad del polipéptido respectivo en la planta. Los métodos para determinar si la expresión de una variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un AAP1, un PESP, una proteina S24 ribosomal 40S, y/o una proteina transportadora ABC, o variante o fragmento del mismo biológicamente activo, confiere el fenotipo de aceite alto y/o ácido oleico alto y/o ácido oleico/ácido linoleico incrementado en una planta o parte de planta de la misma, se conocen en la técnica y se describen en otra parte en la presente. De manera similar, los métodos para determinar si la sobre expresión de un DGAT de aceite normal de la invención, o una variante o fragmento del mismo biológicamente activo, también se conocen en la técnica y se describen en otra parte aquí. En modalidades especificas, el polipéptido o polinucleótido de la invención es introducido en la célula de planta. Subsecuentemente, una célula de planta que tiene la secuencia introducida de la invención, se selecciona usando métodos conocidos por aquellos de habilidad en la técnica tales como, pero no limitados a, análisis de manchado Southern, secuenciamiento de ADN, análisis de PCR, o análisis fenotipico. Una planta o parte de planta alterada o modificada por las modalidades mencionadas anteriormente, se hace crecer bajo condiciones de formación de planta por un tiempo suficiente para modular la concentración y/o actividad de polipéptidos de la presente invención en la planta. Las condiciones de formación de planta, son bien conocidas en la técnica y se discuten brevemente en otra parte en la presente. En modalidades especificas, el polipéptido o polinucleótido de la invención es introducido en la célula de la planta. Subsecuentemente, una célula de planta que tiene la secuencia de la invención introducida, se selecciona usando métodos conocidos por aquellos de habilidad en la técnica, tales como, pero no limitado a, análisis de manchado Southern, secuenciamiento de ADN, análisis de PCR, o análisis fenotipico. Una planta o parte de planta alterada o modificada por las modalidades mencionadas anteriormente, se hace crecer bajo condiciones de formación de planta por un tiempo suficiente para modular la concentración y/o actividad de polipéptidos de la presente invención en la planta. Las condiciones de formación de planta son bien conocidas en la técnica y se discuten brevemente en otra parte en la presente. También se reconoce que el nivel y/o actividad del polipéptido puede ser modulada empleando un polinucleótido que no es capaz de dirigir, en una planta transformada, la expresión de una proteina o un ARN . Por ejemplo, los polinucleótidos de la invención pueden ser usados para diseñar constructos de polinucleot ido que pueden ser empleados en métodos para alterar o mutar una secuencia nucleótida genómica en un organismo. Tales constructos de polinucleótidos incluyen, pero no se limitan a, vectores de ARN:ADN, vectores mutacionales de ARNrADN, vectores de reparación de ARN:ADN, oligonucleótidos duplos mezclados, oligonucleótidos auto-complementarios de ARN:ADN, y oligonucleobases recombinogénicas . Tales constructos nucleótidos y métodos de uso se conocen en la técnica. Véase, Patentes Estadounidenses Nos. 5,565,350; 5,731,181; 5,756,325; 5,760,012; 5,795,972; y 5,871,984; las cuales todas se incorporan en la presente por referencia. Véase también, documentos, WO 98/49350, WO 99/07865, WO 99/25821, y Beetham et al (1999) Proc . Nati Acad. Sci . USA 96:8774-8778; en la presente incorporada por referencia . Por lo tanto, se reconoce que métodos de la presente invención no dependen de la incorporación del polinucleotido completo en el genoma, solamente que la planta o célula de la misma es alterada como un resultado de la introducción del polinucleotido en una célula. En una modalidad de la invención, el genoma puede ser alterado después de la introducción del polinucleotido en una célula. Por ejemplo, el polinucleótido, o cualquier parte del mismo, pueden incorporarse en el genoma de la planta.

Las alteraciones al genoma de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, adiciones, supresiones y sustituciones de nucleótidos en el genoma. Mientras los métodos de la presente invención no dependen de adiciones supresiones y sustituciones de cualquier número particular de nucleótidos, se reconoce que tales adiciones, supresiones o sustituciones comprenden al menos un nucleótido . En una modalidad, se incrementa la actividad y/o nivel de la variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, DGAT de aceite normal, un AAP1, un PESP, una proteina S24 ribosomal 40s, y/o una proteina transportadora ABC de la invención. Un incremento en el nivel y/o actividad del polipéptido respectivo de la presente invención se puede lograr proporcionando a la planta, una variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, un AAP1, un PESP, una proteina S24 ribosomal 40S, y/o una proteina transportadora ABC. Como se discute en otra parte en la presente, muchos métodos se conocen en la técnica para proporcionar un polipéptido a una planta que incluye, pero no se limita a, introducción directa del polipéptido en la planta, y la introducción en la planta (temporalmente o establemente) de un constructo de polinucleótido que codifica el polipéptido respectivo. También se reconoce que los métodos de la invención pueden emplear un polinucleótido que no es capaz de dirigir, en la planta transformada, la expresión de una proteina o un ARN . De este modo, el nivel y/o actividad de una variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, un AAP1, un PESP, una proteina S24 ribosomal 40S, y/o proteina transportadora ABC, puede ser incrementado alterando el gen que codifica el polipéptido respectivo o su promotor. Véase por ejemplo, Kmiec, Patente Estadounidense 5,565,350; Zarling et al, PCT/US93/03868. Por lo tanto, se proporcionan plantas mutagenizadas que portan mutaciones en el gen que codifica una variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto, un DGAT de aceite normal, un AAP1, un PESP, una proteina S24 ribosomal 40S, y/o una proteina transportadora ABC, en donde las mutaciones incrementan la expresión del gen respectivo o incrementan la actividad de la variante DGAT de ácido oleico alto/aceite alto codificado, DGAT de aceite normal, AAP1, PESP, proteina S24 ribosomal 40S, y/o una proteina transportadora ABC. Una "célula de planta o planta sujeto", es una en la cual, la alteración genética, tal como transformación, ha sido efectuada como a un gen de interés, o es una planta o célula de planta la cual desciende de una planta o célula asi alterada y la cual comprende la alteración. Un "control" o "planta de control" o "célula de planta de control", proporcionan un punto de referencia para medir cambios en el fenotipo de la planta sujeto o célula de planta . Una planta de control o célula de planta puede comprender, por ejemplo: (a) una planta o célula de tipo nativa, es decir, el mismo genotipo como el material de partida para la alteración genética, la cual resulta en la planta sujeto o célula; (b) una planta o célula de planta del mismo genotipo como el material de partida, pero la cual ha sido transformada con un constructo nulo (es decir, con un constructo el cual no tiene efecto conocido en el rasgo de interés, tal como un constructo que comprende un gen marcador) ; (c) una planta o célula de planta la cal es un segregante no transformado entre la progenie de una planta sujeto o célula de planta; (d) una planta o célula de planta genéticamente idéntica a la planta sujeto o célula de planta, pero la cual no está expuesta a condiciones o estímulos que podrían inducir la expresión del gen de interés; o (c) la planta sujeto o célula de planta misma, bajo condiciones en las cuales el gen de interés no está expresado. El nivel de expresión de un polipéptido y/o un ARN puede ser medido directamente, por ejemplo, ensayando el nivel del polipéptido o el ARN en la planta, o indirectamente, por ejemplo, midiendo la actividad del polipéptido o el ARN en la planta.

En modalidades específicas, el polinucleótido recombinante de la invención se introduce en la célula de planta. Subsecuentemente, una célula de planta que tiene la secuencia introducida de la invención, se selecciona usando métodos conocidos por aquellos de habilidad en la técnica, tales como, pero no limitados a, análisis de manchado Southern, secuenciamiento de ADN, análisis de PCR, o análisis fenotípico. Una planta o parte de planta alterada o modificada por las modalidades mencionadas anteriormente, se hace crecer bajo condiciones de formación de planta por un tiempo suficiente para modular la concentración y/o actividad de polipéptidos de la presente invención en la planta. Las condiciones de formación de planta son bien conocidas en la técnica y se discuten brevemente en otra parte en la presente.

(B) Modulación de Contenido de Aceite y/o Contenido Oleico de una Planta o Parte de Planta Los métodos de la invención también se proporcionan para modulación del contenido de aceite y/o contenido de ácido y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico de una planta o parte de planta de la misma. De esta manera, una o más de las secuencias asociadas de aceite alto y/o ácido oleico alto, genéticamente ligadas a una región QTL6 que está flanqueada por una primera secuencia limite que comprende los nucleótidos 1-20 de la SEC ID NO: 2 aquí, y una segunda secuencia limite que comprende los nucleótidos 477-496 de la SEC ID NO: 6 de la presente, o una región QTL6 que es flanqueada por una primera secuencia limite que comprende los nucleótidos 1-20 de la SEC ID NO: 6 aquí, y una segunda secuencia limite que comprende nucleótidos 482-501 de la SEC ID NO: 14 aquí, o una región QTL6 que es flanqueada por una primera secuencia limite que comprende los nucleótidos 1-20 de la SEC ID NO: 10 aquí, y una segunda secuencia limite que comprende los nucleótidos 488-507 de la SEC ID NO: 4 aquí, pueden ser introducidos en una planta o parte de planta de la misma para conferir el fenotipo de aceite alto y/o ácido oleico alto y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico en la planta o parte de planta de la misma. De este modo en algunas modalidades, uno o más de los loci marcadores favorables identificados en la presente, son introducidos en la planta o parte de planta de la misma por métodos bien conocidos en la técnica, que incluyen la transformación y métodos de reproducción discutidos anteriormente. En algunas modalidades, el loci marcador favorable comprende las secuencias expuestas en las SEC ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, y 51, con al menos un polimorfismo contenido ahi . Ejemplos de polimorfismos dentro de cada locus marcador favorable de la región QTL6 son identificados en la Tabla 2 (loci marcador no codificante) y Tabla 3 (locus marcador que comprende la secuencia codificante) en los Ejemplos 2 y 4 aquí posteriormente. Ejemplos no limitantes de secuencias para loci marcador favorable de la invención se exponen en las SEC ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, y 47, y el(los) polimorfismo ( s ) respectivos que se originan dentro de estos loci marcadores favorables se muestran en las Tablas 2 y 3 aquí abajo. Véase también las alineaciones mostradas en las Figuras 7-29 y 31. La introducción de una o más de estas secuencias asociadas de aceite alto y/o ácido oleico alto asociado en una planta o parte de planta de la misma, puede conferir el fenotipo deseado de contenido de aceite alto y/o contenido de ácido oleico alto y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico. En otras modalidades, los métodos de la invención proporcionan modulación del contenido de aceite y/o el contenido de ácido oleico y/o la relación de ácido oleico/ácido linoleico en una planta o parte de planta de la misma, sobreexpresando un DGAT de aceite normal de la presente invención, por ejemplo, el polinucleótido ZmDGATl-2(EF09B) de la SEC ID NO: 51, que codifica el ZmDGATl-2(EF09B) de la SEC ID NO: 52, para proporcionar la sobre expresión de este polipéptido, con ello, incrementando el contenido de aceite y/o contenido de ácido oleico, y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico dentro de la planta o parte de planta de la misma. De este modo en algunas modalidades, un cásete de expresión que comprende la SEC ID NO: 51 o un polipéptido que codifica la SEC ID NO: 52 o una variante o fragmento biológicamente activo de este polipéptido, se introduce en la planta o parte de planta de la misma por métodos bien conocidos en la técnica, que incluyen, la transformación y métodos de reproducción discutidos aquí anteriormente. En modalidades especificas, las plantas o partes de plantas de la invención que tienen el contenido incrementado de aceite, encuentran uso en la industria de molido en húmedo. En los procesos de molido en húmedo, el propósito es dividir el grano de maíz y aislar los constituyentes químicos de valor económico en sus partes componentes. El proceso permite la división de almidón en una forma altamente purificada, así como también, el aislamiento de formas crudas de otros materiales que incluyen, por ejemplo, aceite no refinado, o como una mezcla amplia de materiales los cuales comúnmente reciben poco o ningún procesamiento adicional más allá del secado. Por lo tanto, en el proceso de molido en húmedo, el grano es ablandado remojando y aplastando por trituración para liberar el germen de los granos de maíz. El germen es separado de la mezcla de densidad más pesada de almidón, cáscaras y fibras "que flotan" en los segmentos de germen libres de las otras sustancias en un proceso de centrifugación. Esto permite una separación limpia de la fracción que porta el aceite de grano a partir de los fragmentos de tejido que contienen el volumen del almidón. Puesto que no es económico extraer aceite a escala menor, muchas plantas de molido en húmedo embarcan su germen en instalaciones de producción de aceite centralizadas, grandes. El aceite es expelido o extraído con solventes de germen seco y la harina de germen restante es comúnmente mezclada en alimento de gluten de maíz (CGF) , un coproducto del molido en húmedo. Por lo tanto, el almidón contenido dentro de este germen no es recuperado como tal en el proceso de molido en húmedo y es canalizado a CGF. Véase por ejemplo, Anderson et al. (1982) "The Corn Milling Industry" ; CRC Handbook of Processing and Utilízation in Agriculture, A. Wolff, Boca Ratón, FL, CRC Press., Inc., Vol. 11, Part 1, Plant Products: 31-61 y Eckhoff (Junio 24-26, 1992) Proceedings of the 4th Corn Utilízation Conference, St. Louis, MO, impresa por el National Corn Growers Association, CIBA-GEIGY Seed División, y la USDA, ambos de los cuales se incorporan en la presente por referencia.

(C) Métodos para Mejorar la Calidad de Alimento Se proporcionan métodos para mejorar la calidad de tejido de un animal alimentando a un animal de una dieta que comprende una planta o parte de planta de la presente invención, que tiene un contenido incrementado de aceite y/o un contenido oleico incrementado. Tales métodos comprenden, alimentar al animal de una dieta que comprende una cantidad suficiente de un grano o aceite de la invención el cual comprende el contenido incrementado de aceite y/o el contenido oleico incrementado. El alimento empleado en la dieta puede comprender aproximadamente, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, o 100% del grano de la invención (es decir, un grano que comprende una variante de aceite alto/oleica alta de DGAT, un grano que comprende un cásete de expresión que proporciona la sobre-expresión en un DGAT de aceite normal descrito aquí, combinaciones de los mismos, y similares) . En otras modalidades, el alimento empleado en la dieta puede comprender aproximadamente 1 hasta aproximadamente 15%, aproximadamente 10 hasta aproximadamente 25*6 , aproximadamente 20 hasta aproximadamente 35%, aproximadamente 30 hasta aproximadamente 45%, aproximadamente 40% hasta aproximadamente 55% ^ aproximadamente 50 hasta aproximadamente 65%, aproximadamente 60 hasta aproximadamente 75%, aproximadamente 70 hasta aproximadamente 85%, aproximadamente 80% hasta aproximadamente 95% o aproximadamente 90% hasta 100% del grano de la invención. La calidad de tejido de cualquier animal puede ser mejorada. Animales de interés incluyen, pero no se limitan a, animales rumiantes que incluyen pero no se limitan a, vacas, bisontes o corderos, asi como también animales no rumiantes que incluyen pero no se limitan a, cerdos, aves (es decir, pollos, gallinas ponedoras, pavos, avestruces y emús) o peces. En modalidades especificas, la planta, parte de planta, semilla, grano o aceite, es un constituyente de alimento animal o un producto alimenticio. Las plantas o partes de la misma de la presente invención, pueden ser utilizadas en métodos, por ejemplo sin limitación, para obtener una semilla, harina, material alimenticio u aceite. Plantas utilizadas en tales métodos pueden ser procesadas. Por consiguiente, la presente invención proporciona semilla, grano, alimento y/o aceite que son producidas de una planta o parte de planta que tiene un contenido incrementado de aceite y/o un contenido incrementado oleico y/o una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico como se describe en la presente. Los métodos para producir alimento, harina, proteina y preparaciones de aceite a partir de varias partes de planta se conocen en la técnica. Véase por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 4,957,748, 5,100,679, 5,219,596, 5,936,069, 6, 005,076, 6,146,669, y 6,156,227. Además se proporciona carne producida a partir de animales siendo alimentados de la planta, parte de planta, grano y/o aceite que tiene el contenido incrementado de aceite y/o contenido incrementado oleico y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, como se describe en otra parte en la presente.

(D) Métodos de uso para secuencias promotoras ZmDGATl -2, ZmAAPl , ZmPESP, ZmS24, y ZmABCT La secuencia de nucleótido para el promotor ZmDGATl-2 (Mol7) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7 ) , ZmPESP (ASK), ZmS24, o ZmABCT descrito en la presente invención, asi como también variantes y fragmentos de la misma, son empleadas en la manipulación genética de cualquier planta cuando se ensambla con un constructo de ADN de manera tal que la secuencia promotora es operablemente ligada a una secuencia de nucleótido heteróloga que codifica una proteina de interés. De esta manera, la secuencia de nucleótido del promotor ZmDGATl-2(Mol7), ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7 ) , ZmPESP (ASK), ZmS24, o ZmABCT de la invención, se proporciona en un cásete de expresión junto con secuencias de nucleótido heterologas para expresión en la planta de interés.

Las regiones promotores híbridas sintéticas se conocen en la técnica. Tales regiones comprenden elementos promotores corriente arriba de una secuencia de nucleótido operablemente ligada al elemento promotor de otra secuencia de nucleótido. En una modalidad de la invención, la expresión del gen heterólogo se controla por un promotor híbrido sintético que comprende la secuencia promotora ZmDGATl-2 (Mol7) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP ( ol7 ) , ZmPESP(ASK), ZmS24, o ZmABCT de la invención, o una variante o fragmento de la misma, operablemente ligada a elemento (s) promotor (es) corriente arriba de un promotor heterólogo. Los elementos promotores corriente arriba han sido identificados y pueden ser usados para generar un promotor sintético. Véase por ejemplo, Rushton et al. (1998) Curr. Opin. Plant Biol. 7:311-315. Alternativamente, una secuencia promotora sintética ZmDGATl-2 (Mol7 ) , ZmDGATl-2 (ASK), ZmAAPl, ZmPESP (Mol7 ) , ZmPESP (ASK), ZmS24, o ZmABCT, puede comprender duplicados de los elementos promotores corriente arriba encontrados dentro de la secuencia promotora ZmDGATl-2 (Mol7 ) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7) , ZmPESP (ASK) , ZmS24, o ZmABCT. Se reconoce que la secuencia promotora ZmDGATl-2 (Mol7 ) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7) , ZmPESP (ASK) , ZmS24, o ZmABCT de la invención puede ser usada con su secuencia codificante nativa ZmDGATl-2 (Mol7 ) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP, ZmS24, o ZmABCT. El constructo de ADN que comprende el promotor ZmDGATl-2 (Mol ) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7) , ZmPESP (ASK) , ZmS24, o ZmABCT operablemente ligado a su secuencia codificante nativa ZmDGATl-2 (Mol7 ) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP, ZmS24, o ZmABCT, puede ser usado para transformar cualquier planta de interés para llevar aproximadamente un cambio fenotipico deseado. En donde el promotor y su gen nativo están ocurriendo naturalmente dentro de la planta, es decir, en maíz, la transformación de la planta con estas secuencias operablemente ligadas, también resulta en ya sea un cambio en fenotipo, tal como contenido incrementado de aceite, contenido incrementado de ácido oleico y/o relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, o la inserción de secuencias operablemente ligadas dentro de una región diferente del cromosoma con ello, alterando el genoma de la planta. En otra modalidad de la invención, los casetes de expresión comprenderán una región de inicio transcripcional que comprende, la secuencia de nucleótido del promotor ZmDGATl-2 (Mol7) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7 ) , ZmPESP (ASK), ZmS24, o ZmABCT descrita en la presente, o una variante o fragmento de la misma, operablemente ligada a la secuencia de nucleótido heteróloga cuya expresión es controlada por el promotor ZmDGATl-2 (Mol7 ) , ZmDGATl-2 (ASK) , ZmAAPl, ZmPESP (Mol7 ) , ZmPESP (ASK) , ZmS24, o ZmABCT de la invención . La secuencia de nucleótido de promotor y métodos descritos en la presente, son empleados en la regulación de la expresión de cualquier secuencia de nucleótido heteróloga en una planta hospedera, para variar el fenotipo de una planta. Varios cambios en el fenotipo son de interés, que incluyen, modificar la composición de ácido graso en la planta, alterar el contenido de aminoácido de una planta, alterar un mecanismo de defensa de patógeno y similares. Estos resultados se pueden lograr proporcionando la expresión de productos heterólogos, o expresión incrementada de productos endógenos en plantas. Alternativamente, los resultados pueden ser logrados proporcionando una reducción de la expresión de uno o más productos endógenos, particularmente enzimas o cofactores en la planta. Estos cambios resultan en un cambio en el fenotipo de la planta transformada. Los siguientes ejemplos son ofrecidos por medio de ilustración y no por medio de limitación.

EXPERIMENTAL Ejemplo 1: Mapeo QTL6 de Ácido Oleico/Aceite e Información de Secuencia El ASKC28IB1, una linea parental derivada del ciclo 28 de población sintética de grano único Alexho (ASK) , se usó como un donador de aceite alto y EF09B como un parental recurrente en una serie de poblaciones de retrocruzamientos continuos. Por mapeo QTL de aceite inicial, se plantaron 300 granos de maíz BC1, discos de hoja se colectaron de cada plántula y se extrajo el ADN. Se realizó genotipeo amplio de genoma con todas las plántulas individuales usando 100 marcadores SSR uniformemente distribuidos en 10 cromosomas de maíz. Todas las 300 plantas BC1 fueron de retrocruzamiento con EF09B para proporcionar semillas BC2. Diez a 20 granos de maíz de cada espiga madura BC2 se analizaron por RMN, para determinar la cantidad de aceite, asi como también la concentración de aceite por grano de maíz o por base de embrión. Para aceite de semilla, se usaron granos de maíz secados con aire para mediciones directas de RMN. Para aceite de embrión, los granos de maiz se remojaron en agua durante la noche. Los embriones se disectaron de endospermas, se secaron a vacio y sometieron a análisis de RMN. Se realizó mapeo usando datos marcadores de plántulas de BC1 y datos de aceite de espigas BC2. El mapeo de intervalo compuesto de rasgos de aceite se realizó usando programa de Cartografía QTL de Windows (Wang et al. North Carolina State University) . El nivel de significancia de QTL de cada rasgo de determinó por 300 permutas a p <0.05. Un aceite de embrión significante y QTL de aceite de grano de maíz se detectó en seis cromosomas (QTL6) . Los resultados del mapeo derivados de concentración de aceite de embrión se muestran en la Figura 1. El QTL6 está localizado entre los marcadores PH1077 (51.2cM, IBM2+, mapeo de meiosis única), y EST723482 (98.4 cM) y con un valor máximo de aproximadamente UMC1918 (Figura 1) . Estos resultados son consistentes con aquellos de Zhong and Williams (2003, datos no mostrados), obtenidos de un estudio de mapeo en una población F2 derivada de una cruza entre ASKC28IB1 y H31 parental. El mapeo fino de QTL6 se logró usando lineas casi isogénicas traslapantes desarrolladas alrededor de la región QTL6 (Figura 2). Los eventos recombinantes entre PHI077 y EST723482, se identificaron de varias etapas y se auto-polinizaron por dos o más generaciones para producir lineas casi isogénicas (NILs) . Series de traslapantes cercanos a NIL, se desarrollaron en BC3S2, BC3S3 y BC4S2. En el retrocruzamiento subsecuente y generaciones auto-polinizadas, la selección asistida por marcador de genoma amplio (MAS) , se aplicó a cada generación para acelerar la selección de individuos que solamente contiene el genoma ASKC28IB1 en la región QTL6. Se estima que muchos individuos seleccionados para el desarrollo de NIL contienen más de 97.5% y 99% de sus genomas a partir del parental EF09B para BC3 y BC4 respectivamente.

Para mapear QTL6 a una resolución muy superior, marcadores SSR o SNP alrededor de la región QTL6 también se desarrollaron, usando información de secuencia propietaria o información de secuencia final BAC pública. Los marcadores usados en este proyecto y algunos marcadores alrededor de esta región usados y publicados por varios autores, se muestran en la Tabla 1 siguiente.

Tabla 1. Marcadores usados para QTL6 oleico/aceite de mapa fino. Los marcadores en negro son marcadores Peineros SSR o SNP usados en el mapeo QTL6. Son ya sea desarrollados a partir de secuencias propietarias Colonizadoras (Y) o de secuencias públicas (N) . Si se conoce, las posiciones de mapa se dan en tres diferentes mapas, meiosis única IBM2+ (VI.5); Diversidad Colonizadora (VI.4) y Vecina (VI.6) IBM2+. Los marcadores en varios colores son citados de referencias dadas abajo: 1. Mangolin et al, 2004. Mapping QTLs for kernel oil content in a tropical maize population. Euphytica. 137:251-259. 2. Song et al, 2004. QTL mapping of kernel oil concentration with high-oil maize by SSR markers. Maydica. 49:41-48. 3. Alrefai et al, 1995. Quantitative trait locus analysis of fatty acid concentration in maize. Genome 38:894-901. 4. Johnson & Rocheford, 2003. Evaluation of Near-Isogenic Lines for QTL for kernel concentration in maize. Illinois Corn Breeder's School páginas 126-149.

Los datos relacionados con aceite se obtuvieron de NILs traslapantes y se clasificaron de conformidad con diferentes clases de marcadores. Paraca cada par NIL, los datos de aceite y perfiles de ácido graso se obtuvieron de cinco vehículos homocigotos para el alelo ASK (QTL6+/+) y cinco vehículos homocigotos para el alelo EF09B (QTL6-/-) . Los datos de la clase QTL6+/+ y clase QTL6-/- se compararon y una diferencia significante a p<0.01 entre la clase homocigota ASK (QTL6+/+) y clase homocigota EF09B (QTL6-/-), sugiere la presencia de QTL6. En BC3S2 , el QTL6 se mapeo a una región de 10.8 cM (entre marcadores EST450983 y MZA5002) . En BC3S3 y BC4S2 , el QTL6 se mapeo además, a una región menor entre los marcadores BAC18 y BAC29 (Figura 2). Esta región corresponde a tres clones BAC traslapantes (bl21c.n3, b33a.k3 y be46c.n5) en el mapa físico de parentales Mol7. Las secuencias de estos tres BACS se determinaron y el inserto genómico total en los tres clones es aproximadamente de 280 kb. Los insertos genómicos en los 3 clones BAC Mol7 son presentados en tres fragmentos genómicos separados, SEC ID NO: 116, SEC ID NO: 117, y SEC ID NO: 118 debido a algunas aperturas no resueltas . El fragmento más grande, SEC ID NO: 116, es de 263762 -bp de longitud y contiene ORFs para la Proteína del Sistema de Salida de K+ (ZmPESP; proteína mostrada en la SEC ID NO: 57, secuencia codificante (ADNc) mostrada en la SEC ID NO: 56), ZmDGATl-2 (Mol7 ) proteina mostrada en la SEC ID NO: 50, secuencia codificante (ADNc) mostrada en la SEC ID NO: 49), y transportador ABC similar a PDR (ZmABCT; proteina mostrada en la SEC ID NO: 64, secuencia codificante (ADNc) mostrada en la SEC ID NO: 63). Estos nucleótidos (nt) 153888-156887 de la SEC ID NO: 116 representan el promotor ZmPESP(MoH) (expuesto en la SEC ID NO: 121); nt 156888-165958 de la SEC ID NO: 116 representan la secuencia codificante (secuencias de exón más intrón) para ZmPESP; nt 165959- 166382 de la SEC ID NO: 116 representan la secuencia ZmPESP 3 ' -UTR; la hebra complementaria a nt 173344-176343 de la SEC ID NO: 116 representa el promotor ZmDGATl-2 (Mol7 ) (hebra complementaria a este promotor se expone en la SEC ID NO: 119) ; la hebra complementaria a nt 167385-173343 de la SEC ID NO: 116 representa la secuencia codificante (secuencias de exón más intrón) para ZmDGATl-2 (Mo 17); la hebra complementaria a nt 167035-167384 de la SEC ID NO: 116 representa la secuencia ZmDGATl-2 (Mo 17) 3'-UTR; nt 254826-257825 de la SEC ID NO: 116 representa el promotor ZmABCT (expuesto en la SEC ID NO: 124); nt 257826-263762 de la SEC ID NO: 116 representa la secuencia parcial codificante (secuencias exón más intrón) para ZmABCT; y nt 167035-167384 de la SEC ID NO: 116 representa la secuencia ZmABCT 3' -UTR.

El segundo fragmento (SEC ID NO: 117) es de 11915 bp y contiene ORFs para la proteina ribosomal 40S (ZmS24; proteina mostrada en la SEC ID NO: 60, secuencia codificante (ADNc) mostrada en la SEC ID NO: 59) y permeasa de aminoácido (ZmAAPl; proteina mostrada en la SEC ID NO: 56, secuencia codificante (ADNc) mostrada en la SEC ID NO: 55). De este modo, nt 1824-4823 de la SEC ID NO: 117 representa el promotor ZmS24 (expuesto en la SEC ID NO: 123); nt 4824-5994 de la SEC ID NO: 117 representa la secuencia codificante ZmS24 (secuencias exón más intrón) ; nt 5995-6160 de la SEC ID NO: 117 representa la secuencia ZmS24 3'UTR; nt 6161-6888 de la SEC ID NO: 117 representa el promotor ZmAAPl (expuesto en la SEC ID NO: 120); nt 6889-8556 de la SEC ID NO: 117 representa la secuencia codificante ZmAAPl (secuencias exón más intrón); y nt 8557-8822 de la SEC ID NO: 117 representa la secuencia ZmAAPl 3 ' UTR. El tercer fragmento (SEC ID NO: 118) es de 6368 bp y no contiene ORFs. La secuencia genómica ASKC28IB1 para la región QTL6 también se obtuvo. Una biblioteca BAC se construyó usando el ADN aislado a partir de hojas ASKC28IB1 y se seleccionó usando la secuencia BAC17 (SEC ID NO: 3) como una sonda. Uno de los clones BAC positivo (ASKBAC clon F4 ) , fue secuenciado y anotado. El inserto en este clon es de 82725 pares base (SEC ID NO: 128) y contiene dos genes, PESP y DGATI-2. Los otros genes (S24, AAP, y ABCT) encontrados en el BAC Mol7 están fuera de la región cubierta por el clon F4. Las posiciones de nucleótidos para el promotor, codificante y 3 ' UTR para genes tanto PESP como DGAT1-2 en el clon ASKC28IB1 BAC, son descritas abaj o . La secuencia genómica ASKC28IB1 (ASK) de 82725-bp (SEC ID NO:128), contiene la ORF para la proteina ZmPESP mostrada en la SEC ID NO: 57 (secuencia codificante (ADNc) mostrada en la SEC ID NO: 56) y la proteina ZmDGATl-2 (ASK) mostrada en la SEC ID NO: 48 (secuencia codificante (ADNc) mostrada en la SEC ID NO: 47) . De este modo, nucleótidos (nt) 9306-12305 de la SEC ID NO: 128 representan el promotor ZmPESP(ASK) (expuesto en la SEC ID NO: 129); nt 12306-21370 de la SEC ID NO: 128 representa el secuencia codificante (secuencias exón más intrón) para ZmPESP; nt 21371-21794 de la SEC ID NO: 128 representa la secuencia ZmPESP 3 ' -UTR; la hebra complementaria a nt 29472- 32471 de la SEC ID NO: 128 representa el promotor ZmDGATl-2 (ASK) (la hebra complementaria a este promotor es expuesta en la SEC ID NO: 130); la hebra complementaria a nt 22774-29471 de la SEC ID NO: 128 representa the secuencia codificante (secuencias exón más intrón) para ZmDGATl-2 (ASK) ; y la hebra complementaria a nt 22365-22773 de la SEC ID NO: 128 representa la secuencia ZmDGATl-2 (ASK) 3' -UTR.

El QTL6 puede ser además, definido a un fragmento de aproximadamente 195 kb, entre BAC18 y BAC29 (Figura 2) . Los datos de aceite a partir de estos NILs muestran que el QTL6 consistentemente incrementa las concentraciones de aceite de semilla y embriónico en generaciones múltiples. Datos de aceite BC3S2 y BC4S2 son resumidos en la Figura 3. El QTL6 incrementa la concentración de aceite embrional de 31.6 a 35.8% (un incremento de 13%) en BC3S2 y desde 28.7 hasta 33.3% (un incremento de 16%) en BC4S2. También se incrementa la concentración de aceite de semilla desde 4.4 hasta 5.1% (un incremento de 17%) en BC3S2 y desde 3.7 hasta 4.4% (un incremento de 19%) en BC4S2. En general, se cree que el maíz de aceite alto también contiene nivel incrementado de ácido oleico (18:1). Además, un QTL principal que controla la relación de ácido oleico (18:1) y linoleico (18:2), se mapeó en el cromosoma 6 por diferentes grupos (Alrefai et al., (1995) Genome 38:894-901; Poneleit et al (1976) Agron. Abs. 8:59). El presente estudio investiga si el NILs desarrollado para QTL6 también contiene niveles incrementados de ácido oleico. Se obtuvieron perfiles de ácido graso para ASK homocigoto y clases EF09B en semillas BC3S2, BC3S2 y BC4S2. Los datos de BC3S2 y BC4S2 están resumidos en la Figura 4. Sin embargo, el QTL6 también incrementa consistentemente la concentración de ácido oleico en semillas en generaciones múltiples. En BC3S2, el QTL6 incrementa la concentración de ácido oleico desde 24.6 hasta 36.2% (un incremento de 47%) y reduce la concentración de ácido linoleico desde 58.5 hasta 46.4% (una reducción de 21%) . En BC4S2, el QTL6 incrementa la concentración de ácido oleico desde 23.6 hasta 37.9% (un incremento del 61%) y reduce la concentración de ácido linoleico desde 59.8 hasta 45.4% (una reducción del 24%). Aunque las concentraciones de ácido graso en los embriones no fueron directamente medidas, es razonable asumir que la mayoría de los cambios observados son debidos a cambios en los embriones ya que el aceite de embrión cuenta por aproximadamente 90% del total del aceite de semilla. A los 195 kb de resolución de mapeo, los fenotipos de ácido oleico incrementado y aceite incrementado, no se segregan, sugiriendo que los genes responsables de ambos fenotipos están ambos localizados dentro de la región de 195 kb . En teoría, maíz con contenido de aceite superior más allá de QTL6, puede ser producido por QTL6 genéticamente o molecularmente apilado con el otro QTL de aceite u otros genes conocidos por incrementar el aceite. El cotiledón de hoja de maíz 1 (LEC1) , es un factor de transcripción de dominio B (véase Figuras 38 y 39) , previamente mostradas por incrementar el aceite de embrión (véase Figura 5) . Para determinar si el LEC1 puede incrementar el aceite de embrión, además, se cruzó una linea homocigota BC2S2 para QTL6 derivada de la población ASKC28 IBlxEF09B, con plantas homocigotas que contienen el transgen LEC1 de maíz. El embrión y aceite de semilla de las plantas Fl resultantes, se analizaron y los datos se compararon con aquellos obtenidos de plantas que portan QTL6 o LEC1 solo. Los resultados indican que QTL6 y LEC1 tienen efectos aditivos en las concentraciones de aceite de semilla asi como embrión y los LEC1 y QTL6 genéticamente apilados pueden elevar la concentración de aceite de embrión a aproximadamente 40% y la concentración de aceite de semilla a aproximadamente 6% aún en plantas heterocigotas (figura 5). Para identificar los genes responsables del aceite y ácido oleico incrementado en QTL6, los tres clones Mol7 BAC (bl21c.n3, b33a.k3 y be46c.n5) se secuenciaron y anotaron. El Programa FGENESH (Softberry, Inc.116 Radio Circle, Suite 400 Mount Kisco, NY 10549) se utilizó para predecir los genes ubicados dentro de los tres clones BAC. En la región entre BAC18 y BAC29 (aproximadamente 195 kb) , fueron identificadas cinco estructuras lectoras abiertas (ORFs) que comparten homología significativa con los genes conocidos. Codifican una Proteína de Sistema de salida de K+ (PESP), una diacilglicerol O-aciltransferasa tipo 1 (DGAT 1-2), una proteina S24 ribosomal 40S, un aminoácido permeasa (AAP) y un transportador ABC tipo PDR (ABCT) . Los cinco ORFs y algunos marcadores estrechamente enlazados se muestran en la figura 6. Es bien conocido que DGAT se involucra en la última etapa de biosintesis de triaciglicerol (TAG) . Se obtuvieron las secuencias de ADNc para el gen DGAT (GGAT1-2) ubicado en la región QTL6 de varios parentales diferentes, incluyendo ASKC28IB1, EF09B, Mol7, y B73. La secuencia de alelo B73 se derivó de los clones Colonizadores EST existentes. La secuencia del alelo Mol7 se dedujo de las secuencias de clon BAC descritas anteriormente. Las secuencias de alelo ASKC28IB1 y EF09B se clonaron de embriones inmaduros por RT-PCR. Brevemente, el ARN total se extrajo de los pares BC4S2 NIL homocigotas para ASK (QTL6+/+ ) o EF09B (QTL6-/-) . El ADNc de primera hebra se sintetizó usando cebadores poli(dT). El ADNc de longitud completa se amplificó por PCR del ADNc de primera hebra usando los siguientes cebadores: cebador delantero, 5 ' -ctggaaccttcctcgcatggccccg (94784) (SEC ID NO: 114); cebador inverso 5 ' -ctatctacttgcctgggcctgcctgttc (94785) (SEC ID NO: 115). La alineación de secuencia de ADN de estos cuatro alelos se muestra en la figura 28. Al nivel de nucleótido, los alelos ASK y normales tienen cambios en nueve ubicaciones y los cambios en cuatro de estas ubicaciones conducen a cambios en aminoácidos (figura 27). Los análisis más detallados de estos cambios se presentan en el ejemplo 4 posteriormente aquí. o Ejemplo 2: Información de Cebador y Marcador Marcadores polimórficos de nucleótido único (SNP) se desarrollaron de secuencias de extremo BAC de las tres secuencias Mol7 BAC que cubren la región QTL6. Los ejemplos no limitantes de los marcadores polimórficos entre los alelos ASKC28IB1 (ASK; una línea de alto ácido oleico, de alto aceite) y EF09B (línea de aceite normal) se describen en las figuras 11-25. La tabla 2 posterior muestra el polimorfismo único a los marcadores QTL6 de ASK que no se encuentran en las ubicaciones de marcador correspondientes dentro de la región QTL6 de las líneas de aceite normal (la SEC ID NO para EF09B se usa como la secuencia de referencia) .

Tabla 2. Ubicación de polimorfismos dentro de los loci marcadores de la región QTL6 de maíz. El identificador de secuencia se refiere a la secuencia de de locus marcador específico para EF09B (línea consanguínea de maíz de aceite normal) . NT, la posición de nucleótido dentro del identificador de secuencia para EF09B donde un polimorfismo se ha identificado en el locus marcador correspondiente para ASK (línea consanguínea de maíz de alto ácido oleico, alto aceite) ; "cambio polimórfico" se refiere a la sustitución, inserción, o supresión específica que ocurre dentro del locus marcador correspondiente para ASK. 210 supresión de T 211 supresión de G 225 A?C 327 supresión de T 328 supresión de C 335 inserción de T MZA5002 34 60 G?C 63 C?G 138 G?C 192 G?C 315 C?G 353 supresión de C 354 supresión de G 355 supresión de G 356 supresión de C 357 supresión de G 358 supresión de G 359 supresión de C 360 supresión de C 361 supresión de G 377 A?C 378 G?C 383 C ? A 386 A?C 387 G?C 389 A?C 427 T? A 428 C?G 430 G?T 431 G?T 433 supresión de G 434 supresión de C 522 T?C MZA13321 36 17 A?C 25 Y?C 32 Y?C 110 G?C MZA15785 38 326 G? A 402 T? A MZA13118 40 34 A ? C 169 A ? G MZA11771 42 164 T?C 268 G? A 435 T?G Los cebadores adecuados para detectar la presencia de estos loci marcadores en una planta o tejido de planta son descritos en las figuras 7-29 y SEC ID NOs:68-115, y 124-127.

Ejemplo 3: Reproducción Asistida por Marcador para QTL6 Este ejemplo describe el uso de los polimorfismos en los diversos marcadores moleculares de QTL6 para acelerar la incorporación de rasgo de alto ácido oleico y/o alto aceite en otro germoplasma de maíz con el resultado de incremento de ácido oleico y/o aceite en el embrión y grano . La presente invención proporciona una planta de maíz con contenido incrementado de embrión y/o aceite de grano y/o ácido oleico seleccionada para el uso de reproducción asistida por marcador en donde una población de plantas se seleccionan para la presencia de al menos una de las secuencias polimórficas descritas en el ejemplo 2, tabla 2. La selección de plantas que tienen al menos una de las secuencias polimórficas asociadas con rasgos de alto ácido oleico y/o alto aceite comprende probar el ADN genómico de la planta resultante, a través del proceso de selección, para la presencia del polimorfismo. Las plantas que contiene el locus marcador deseado continúan en la reproducción y proceso de selección.

Además, debido a que la concentración de ácido oleico muestra un mayor incremento que el contenido de aceite dentro de las plantas que portan el locus de marcador QTL6 de alto aceite/alto ácido oleico favorable y se puede medir con exactitud, se puede usar para monitorear y confirmar la presencia de QTL6 durante el proceso de reproducción asistida por marcador. Por consiguiente, por ejemplo, cualquier planta de maiz dada o la descendencia resultante de cruces y/o retro-cruces entre plantas de maiz se puede seleccionar para la presencia del locus de marcador QTL6 examinando su contenido de ácido oleico, particularmente dentro del embrión o grano entero. De esta manera, una concentración de ácido oleico de embrión o semilla de al menos 35% (es decir, 35% o más del aceite de embrión o semilla se representa por ácido oleico) se podría predecir que la planta probablemente comprende el locus de marcador QTL6 deseado, y por consiguiente podrá continuar benéficamente en la reproducción y proceso de selección. Alternativamente, una concentración de ácido oleico de embrión o semilla de menos de 35% (es decir, el ácido oleico representa menos de 35% del aceite de embrión o semilla) se podría predecir que la fuente de planta no porta el locus QTL6 deseado dentro de su genoma . Esta etapa de selección de ácido oleico podrá ser adicionalmente complementada con tamices genómicos para la presencia del locus QTL6. En un ejemplo, la presencia del locus QTL6 deseado se confirma detectando la presencia de la inserción de codón TTC dentro de la secuencia codificante ZmDGATl-2 que resulta en la inserción Phe467, Phe468 , o Phe469 dentro de la proteina ZmDGAT 1-2 (ASK) . Esto se puede lograr, por ejemplo, por amplificación de un fragmento de ADN alrededor de su codón usando las SEC ID NOs : 126 y 127, como se describe en el Ejemplo 13 posteriormente en la presente.

Ejemplo 4. Caracterización de Secuencia de Estructuras lectoras abiertas en QTL6 A . DGAT La figura 28 muestra la alineación de secuencia de ácido nucleico de la variante de alto aceite/alto ácido oleico de ZmDGAT 1-2 (derivada de la linea consanguínea ASK; SEC ID NO: 48, codificada por la SEC ID NO: 47) comparada con la secuencia de ZmDGATl-2 obtenida de las líneas consanguíneas de maíz de aceite normal Mol7 (SEC ID NO: 50, codificada por la SEC ID NO: 49), EF09B (SEC ID NO:52, codificada por la SEC ID NO:51), y B73 (SEC ID NO: 54, codificada por la SEC ID NO: 53). La alineación de las secuencias de aminoácido respectivas para estas proteínas se muestra en la figura 27. La alineación de secuencia de ácido nucleico muestra que existen los siguientes polimorfismos únicos al alelo de alto aceite/alto ácido nucleico de ZmDGATl-2 que no se encuentran en la secuencia correspondiente de las lineas consanguíneas de maíz de aceite normal. La tabla 3 posterior resume los polimorfismos identificados en la variante de alto aceite/alto oleico de ZmDGATl-2 (es decir, ZmDGATl-2 (ASK) ) que conducen a los cambios de residuo dentro de ZmDGATl-2 (ASK) . Como se puede ver de la alineación de la proteína ZmDGATl-2 (ASK) con aquella de la proteína DGATl-2 de las líneas consanguíneas de maíz de aceite normal (es decir, EF09B, Mol7, y B73), la proteína ZmDGATl-2 (ASK) tiene una supresión de glutamina e inserción de fenilalanina con relación a la proteína DGATl-2 de aceite normal. Nótese que debido a que la supresión de glutamina e inserción de fenilalanina mostradas en la figura 27 ocurren dentro de las regiones de la proteína DGATl-2 que comprenden residuos de glutamina repetidos y fenilalanina repetidos, respectivamente, la supresión e inserción podrían ocurrir en cualquiera de los residuos repetidos respectivos. Por consiguiente, aunque la supresión de glutamina mostrada en la figura 27 aparece en la posición correspondiente a Gln67 de la proteína DGATl-2 de aceite normal, en la actualidad, la supresión de glutamina podrá representar una supresión del residuo correspondiente a Gln64, Gln65, Gln66, o Gln67 de la DGAT1-2 de aceite normal (por ejemplo, EF09B de SEC ID NO: 52). De manera similar, aunque la inserción de fenilalanina dentro de DGAT1-2 (ASK) mostrada en la figura 27 se representa por Phe469 de esta proteina, en la actualidad, la inserción de fenilalanina con relación a la DGAT1-2 se podrá representar por la fenilalanina en la posición 467, 468, ó 469 de DGAT1-2 (ASK) (véase SEC ID NO: 48) .

Tabla 3. Ubicación de polimorfismos dentro del ORF de ZmDGATl-2 de la región QTL6 de maíz. El identificador de secuencia se refiere al ORF de ZmDGATl-2 para EF09B (linea consanguínea de maíz de aceite normal; SEC ID NO: 51). NT, la posición de nucleótido dentro del identificador de secuencia para EF09B donde un polimorfismo se ha identificado en el ORF de ZmDGATl-2 correspondiente para ASK (línea consanguínea de maíz de alto ácido oleico, alto aceite) ; "cambio polimorfico" se refiere a la sustitución, inserción, o supresión específica que ocurre dentro del ORF de ZmDGATl-2 correspondiente para ASK (SEC ID NO:47); "cambio de residuo" se refiere a la sustitución, supresión, o inserción de aminoácido dentro de la proteína ZmDGATl-2 correspondiente para ASK (SEC ID NO: 48) cuando se compara con la secuencia de referencia EF09B (SEC ID NO: 52) como un resultado del cambio polimorfico dentro del ORF de ZmDGATl- 2 para ASK (SEC ID NO:47).

*La proteína ZmDGATl-2 para ASK (SEC ID NO: 8) está ausente del residuo glutamina correspondiente a aquel en la posición 64, 65, 66, ó 67 de la proteína ZmDGATl-2 para EF09B (SEC ID NO:52), dependiendo de si la supresión de los tres nucleótidos CAG dentro de la secuencia codificante correspondiente para la proteína ZmDGATl-2 para EF09B (SEC ID NO:51) ocurre en los nucleótidos 190-192, 193-195, 196- 198, ó 199-201. **E1 residuo fenilalanina en la posición 467, 468, ó 469 de la proteína ZmDGATl-2 para ASK (SEC ID NO: 48) representa una inserción dentro de esta proteína con relación a la ubicación correspondiente dentro de la proteína ZmDGATl-2 para EF09B (SEC ID NO: 52). Por consiguiente Phe467 dentro de la secuencia ASK podría corresponder a una inserción de este residuo entre Trp4e7 y Phe4e8 de la proteina ZmDGATl-2 para EF09B (SEC ID NO: 52). Phe 68 de la secuencia ASK podría corresponder a una inserción de este residuo entre Phe468 y Phe469 de la proteína ZmDGATl-2 para EF09B. Phe 6g de la secuencia ASK podría corresponder a una inserción de este residuo entre Phe46g y Ser470 de la proteína ZmDGATl-2 para EF09B. La ubicación de la inserción de residuo fenilalanina dentro de la secuencia ASK podría depender de si el cambio polimórfico observado en la secuencia codificante ASK (es decir, la inserción TTC) ocurre en la posición correspondiente a nt 1401, 1404, ó 1407 de la secuencia codificante para la proteína EF09B ZmDGATl-2 de aceite normal (es decir, SEC ID NO:51). Estos polimorfismos dentro del ORF de ZmDGATl-2 para AS se puede caracterizar por el cambio de residuo que ocurre dentro de la proteína ZmDGATl-2 codificada para ASK (SEC ID NO: 48) con respecto al residuo correspondiente para la proteína ZmDGATl-2 para EF09B (SEC ID NO: 52) como sigue: 1. Polimorfismos de Nucleótido Único a. la valina en la posición 45 de la SEC ID NO: 52 es sustituida con una glicina en la posición 45 de la SEC ID NO: 48 b. la prolina en la posición 55 de la SEC ID NO: 52 es sustituida con una serina en la posición 55 de la SEC ID NO: 48 2. Supresiones El residuo glutamina correspondiente al residuo glutamina en la posición de aminoácido 64, 6, 66, ó 67 de la SEC ID NO: 52 se suprime dentro de la SEC ID NO: 48. 3. Inserciones La proteina ZmDGATl-2 (ASK) tiene una inserción de un residuo fenilalanina en una posición ubicada entre un par de residuos correspondientes a un par de residuos dentro de la SEC ID NO: 52 seleccionados de: a. el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52; o b. el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52; o c. el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52. La proteina ZmDGATl-2 (ASK) (SEC ID NO: 48) comprende todos los cuatro de estos cambios de residuo. El polimorfismo único al ORF de ZmDGATl-2 (SEC ID NO: 47, que codifica el polipéptido ZmDGATl-2 (ASK) en la SEC ID NO: 8) de la linea consanguínea de alto ácido oleico, alto aceite ASK también se puede usar en la selección asistida por marcador y reproducción como se describe en el ejemplo 5 posterior . B. Aminoácido Permeasa 1 (APP1) La presente invención también proporciona el marco de lectura abierta para el polipéptido de aminoácido permeasa 1 (AAP1) de maíz (SEC ID NO: 56; designada ZmAAPl) y variantes biológicamente activas del mismo como se define posteriormente en la presente. Los polinucleótidos aislados que codifican el polipéptido ZmAAPl también se abarcan por la presente invención. En tal modalidad, el polinucleótido aislado comprende la secuencia descrita en la SEC ID NO: 55 o variante del mismo que codifica un polipéptido de AAP1 biológicamente activo. La figura 31 muestra una alineación del polipéptido de ZmAAPl con otros polipéptidos de AAP relacionados de otras especies de plantas. C. Proteina de Sistema de salida de K+ (PESP) La presente invención también proporciona el marco de lectura abierta para la proteina de Sistema de salida de potasio de maíz (SEC ID NO: 58; designada ZmPESP) y variantes biológicamente activas de la misma como se define posteriormente en la presente. Los polinucleótidos aislados que codifican el polipéptido ZmPESP también se abarcan por la presente invención. En tal modalidad, el polinucleótido aislado comprende la secuencia descrita en la SEC ID NO: 57 o variante de la misma que codifica un polipéptido de PESP biológicamente activo. La figura 32 muestra una alineación del polipéptido de ZmPESP con otros polipéptidos de PESP relacionados de otras especies de plantas . D. Proteina S24 Ribosomal 40S La presente invención también proporciona el marco de lectura abierta para la proteina S24 ribosomal 40S de maiz (SEC ID NO: 60; designada ZmS24) y variantes biológicamente activas de la misma como se define posteriormente en la presente. Los polinucleótidos que codifican el polipéptido ZmS24 también se abarcan por la presente invención. En tal modalidad, el polinucleótido aislado comprende la secuencia descrita en la SEC ID NO: 59 o variante de la misma que codifica una proteina S24 ribosomal 40S biológicamente activa. La figura 33 muestra una alineación del polipéptido ZmS24 con otras proteínas ribosomales relacionadas de otras especies de plantas . E. Transportador ABC La presente invención también proporciona el marco de lectura abierta para un polipéptido de transportador ABC tipo PDR de maíz (ABCT) (secuencia compuesta mostrada en la SEC ID NO: 64; designada ZmABCT (Compuesta) en la presente) y variantes biológicamente activas de la misma como se define posteriormente en la presente. Los polinucleótidos aislados que codifican el polipéptido de ZmABCT (Compuesta) también se abarcan por la presente invención. En tal modalidad, el polinucleótido aislado comprende la secuencia descrita en la SEC ID NO: 63 o variante de la misma que codifica un polipéptido de AAPl biológicamente activo. La secuencia codificante de longitud completa se construyó de la secuencia de ADNc de ORF parcial de ZmABCT clonada de la linea de maíz consanguínea Mol7 de aceite normal (secuencia descrita en la SEC ID NO: 61, que codifica la secuencia de aminoácido N-terminal descrita en la SEC ID NO: 62) y la secuencia genómica y EST para la línea de maíz consanguínea B73 de aceite normal. La figura 34 muestra una alineación del polipéptido de ZmABCT (Compuesta) con otros polipéptidos de ABCT relacionados de otras especies de plantas .

Ejemplo 5. Reproducción Asistida por Marcador para QTL6 Este ejemplo describe el uso de los polimorfismos en la variante de alto aceite/alto ácido oleico de DGAT, por ejemplo, ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO: 47, como marcadores moleculares para acelerar la incorporación de rasgo de alto aceite y/o alto ácido oleico en otro germoplasma de maíz con el resultado de incremento de aceite y/u oleico en el grano, y/o incremento de la relación de ácido oleico/ácido linoleico en el grano. La presente invención proporciona una planta de maíz con contenido de aceite y/o ácido oleico de grano seleccionado por el uso de reproducción asistida por marcador en donde una población de plantas se selecciona para la presencia de al menos una de las secuencias polimórficas únicas a la variante de alto aceite/alto ácido oleico de DGAT . El ejemplo 4, tabla 3 anterior, lista los polimorfismos únicos a la DGAT de alto aceite/alto oleico. La selección de plantas que tienen al menos una de las secuencias polimórficas de la variante de alto aceite/alto ácido oleico de DGAT, que se asocia con el rasgo de alto aceite y/o alto oleico, comprende probar el ADN genómico de la planta resultante, a través del proceso de selección, para la presencia del polimorfismo. Los cebadores adecuados para detectar la presencia de la variante de alto aceite/alto ácido oleico se describen en las SEC ID NOS:114, 115, y 124-127. Por ejemplo, el par de cebadores descrito como SEC ID NOS: 124 y 125 amplificarán un fragmento que abarca los primeros tres cambios en el N-término de la proteína DGAT1-2 ASK (nt 134, 163, 199-201 en la tabla 3 anterior) . El par de cebadores descrito como SEC ID NOS: 126 y 127 amplificarán un fragmento que incluye el cambio en el C-término de DGAT1-2 ASK (nt 1408-1410 en la tabla 3 anterior) . Las plantas que contienen DGAT de alto aceite/alto ácido oleico continúan en la reproducción y proceso de selección.

Ejemplo 6. Transformación y Regeneración de Plantas de Maíz Transgénicas Los embriones de maíz inmaduros de plantas donadoras de invernadero se bombardearon con un plásmido que contiene la secuencia ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO: 7, o la secuencia ZmDGATl-2 (EF09B) de SEC ID NO: 51, operativamente enlazada a un promotor de interés y el gen marcador seleccionable PAT (Wohlleben et al. (1988) Gene 70:25-37), el cual confiere resistencia al herbicida Bialafos. Alternativamente, el gen marcador seleccionable se proporciona en un plásmido separado. La transformación se realizó como sigue. Las recetas de medios continúan posteriormente .

Preparación de Tejido Objetivo Las mazorcas son descascaradas y la superficie se esterilizó en 30% blanqueador Clorox más 0.5% Micro detergente por 20 minutos, y se enjuagó dos veces con agua estéril. Los embriones inmaduros se cortaron y el eje de embrión se colocó con el lado hacia abajo (lado de escutelo hacia arriba), 25 embriones por placa, en columna 560Y por 4 horas y luego se alinearon dentro de la zona objetivo de 2.5 cm en preparación para bombardeo. Se hizo un vector de plásmido que comprende la secuencia ZmDGATl-2 (ASK) de la SEC ID NO: 47, o la secuencia ZmDGATl-2 (EF09B) de la SEC ID NO: 51, operativamente enlazada a un promotor de interés. Este ADN de plásmido más ADN de plásmido que contiene un marcador seleccionable PAT se precipitó sobre pelotillas de tungsteno de 1.1 pm (diámetro promedio) usando un procedimiento de precipitación de CaCl2 como sigue: 100 µ? de partículas de tungsteno preparadas en agua; 10 µ? (1 de ADN en amortiguador Tris EDTA (1 pg de ADN total); 100 µ? de CaCl2 2.5 M; y 10 µ? de espermidina 0.1 M. Cada reactivo se agregó consecutivamente a la suspensión de partículas de tungsteno, mientras se mantuvo en el dispositivo de vórtices de tubos múltiples. La mezcla final se sometió a sonicación brevemente y se dejó incubar bajo vórtice constante por 10 minutos. Después del período de precipitación, los tubos se centrifugaron brevemente, se removió el líquido, se lavó con 500 mi de etanol al 100%, y se centrifugó por 30 segundos. De nuevo el líquido se removió, y 150 µ? de etanol al 100% se agregaron a la pelotilla de partícula de tungsteno final. Para el bombardero con pistola de partículas, las partículas de tungsteno/ADN son brevemente sometidas a sonicación y 10 µ? se colocaron sobre el centro de cada macro-portador y se dejaron secar aproximadamente 2 minutos antes del bombardeo . Las placas de muestra se bombardearon a nivel #4 en una pistola de partículas. Todas las muestras recibieron un disparo único a 650 PSI, con un total de diez alícuotas tomadas de cada tubo de partículas/ADN preparadas. Después del bombardeo, los embriones se mantuvieron en medio 560Y por 2 días, luego se transfirieron al medio de selección 560R que contiene 3 mg/litro de Bialafos, y se sub-cultivaron cada 2 semanas. Después de aproximadamente 10 semanas de selección, los clones callo resistentes a la selección se transfirieron al medio 288J para iniciar la generación de planta. Después de la maduración de embrión somática (2-4 semanas) , los embriones somáticos bien desarrollados se transfirieron a medio para germinación y se transfirieron al cuarto de cultivo iluminado. Aproximadamente 7-10 días después, las plántulas desarrolladas se transfirieron a medio libre de hormonas 272V en tubos por 7-10 días hasta que las plántulas se establecieron bien. Las plantas luego se transfirieron a insertos en cajas (equivalente a crisol de 2.5") que contienen tierra para maceta y crecieron por 1 semana en una cámara de crecimiento, posteriormente crecieron unas 1-2 semanas adicionales en el invernadero, luego se transfirieron a crisoles clásicos (1.6 galones) y crecieron hasta madurez. Las plantas se monitorearon y registraron para contenido de aceite y contenido de ácido oleico . El medio de bombardeo (560Y) comprende 4.0g/l N6 sales básales (SIGMA C-1416), 1.0 ml/Mezcla de Vitamina de Eriksson (1000X SIGMA-1511) , 0.5 mg/1 de HC1 de tiamina, 120.0 g/1 de sucrosa, 1.0 mg/2,4-D, y 2.88 g/1 de L-prolina (conducida a volumen con D-I H20 después del ajuste a pH 5.8 con KOH) ; 2.0 g/1 de Gelrita (agregada después de hacer llegar a volumen con D-I H20) ; y 8.5 mg/1 de nitrato de plata (agregado después de la esterilización del medio y enfriamiento a temperatura ambiente) . El medio de selección (560R) comprende 4.0 g/1 de sales básales N6 (SIGMA C-1416), 1.0 ml/1 de Mezcla de Vitamina de Eriksson (1000X SIGMA-1511), 0.5 mg/1 de HC1 de tiamina, 30.0 g/1 de sucrosa, y 2.0 mg/1 de 2,4-D (hecha llegar a volumen con D-I H20 después del ajuste a pH 5.8 con KOH); 3.0 g/1 de Gelrita (agregada después de hacer llegar a volumen con D-I H20) ; y 0.85 mg/1 de nitrato de plata y 3.0 mg/1 de bialafos (agregado después de esterilizar el medio y enfriar a temperatura ambiente) . El medio de regeneración de plantas (288J) comprende 4.3 g/1 de sales de MS (GIBCO 11117-074), 5.0 ml/1 de solución madre de vitaminas MS (0.100 g de ácido nicotinico, 0.02 g/1 de HC1 de tiamina, 0.10 g/1 de HC1 de piridoxina, y 0.40 g/1 de glicina hecha llegar a volumen con D-I H20 pulido (Murashige and Skoog (1962) Physiol. Plant. 15:473), 100 rag/1 de mioinositol, 0.5 mg/1 de zeatina, 60 g/1 sucrosa, y 1.0 ml/1 de ácido abscisico 0.1 mM (hecho llegar a volumen con D-I H20 pulido después de ajustar a pH 5.6); 3.0 g/1 de Gelrita (agregada después de hacer llegar a volumen con D-I H20) ; y 1.0 mg/1 de ácido indol acético y 3.0 mg/1 de bialafos (agregado después de esterilizar el medio y enfriamiento a 60°C) . El medio libre de hormonas (272V) comprende 4.3 g/1 de sales MS (GIBCO 11117-074), 5.0 ml/1 de solución madre de vitaminas MS (0.100 g/1 de ácido nicotinico, 0.02 g/1 de HCl de tiamina, 0.10 g/1 de HCl de piridoxina, y 0.40 g/1 de glicina hecha llegar a volumen con D-I H20 pulido), 0.1 g/1 de mio-inositol, y 40.0 g/1 de sucrosa (hecha llegar a volumen con D-I H20 pulido después de ajustar el pH a 5.6); y 6 g/1 de bacto-agar (agregado después de hacer llegar a volumen con D-I H20 pulido), esterilizado y enfriado a 60°C.

Ejemplo 7. Transformación de Maíz mediada por Agrobacterium Para la transformación de maíz mediada por Agrobacterium con una secuencia ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO: 47, o una secuencia ZmDGATl-2 (EF09B) de SEC ID NO: 51, el método de Zhao se empleó (Patente de Estados Unidos No. 5,981,840, y solicitud de patente PCT 098/32326; los contenidos de la cual se incorporan para referencia) . brevemente, los embriones inmaduros se aislaron del maíz y los embriones se pusieron en contacto con una suspensión de Agrobacterium, donde las bacterias son capaces de transferir la secuencia ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO: 47, o secuencia ZmDGATl-2 (EF09B) de SEC ID NO: 51, operativamente enlazada a un promotor de interés a al menos una célula de al menos uno de los embriones inmaduros (etapa 1: la etapa de infección) . En esta etapa los embriones inmaduros son sumergidos en una suspensión de Agrobacterium para el inicio de inoculación. Los embriones son co-cultivados por un tiempo con el Agrobacterium (etapa 2: la etapa de co-cultivación) . Los embriones inmaduros son cultivados en medio sólido después de la etapa de infección. Después de este período de co-cultivación se contempló una etapa "latente" opcional. En esta etapa latente, los embriones son incubados en la presencia de al menos un antibiótico conocido por inhibir el crecimiento de Agrobacterium sin la adición de un agente selectivo para transformadores de planta (etapa 3: etapa latente). Los embriones inmaduros son cultivados en medio sólido con antibiótico, pero sin un agente de selección, para eliminación de Agrobacterium y para una fase latente para las células infectadas. Luego, los embriones inoculados son cultivados en medio que contiene un agente selectivo y el callo transformado crecido se recupero (etapa 4: la etapa de selección) . Los embriones inmaduros se cultivaron en medio sólido con un agente selectivo resultante en el crecimiento selectivo de células transformadas. El callo luego es regenerado en plantas (etapa 5: la etapa de regeneración), y los callos crecidos en medio selectivo son cultivados en medio sólido para regenerar las plantas.

Ejemplo 8. Transformación de Embrión de Soya A. Condiciones de Cultivo Los cultivos de suspensión embriogénica de soya (cv. Jack) se mantuvieron en 35 mi de medio liquido SB196 (véase recetas posteriores) en sacudidor giratorio, 150 rpm, 26°C con luces fluorescentes blancas frías en fotoperíodo de día/noche de 16:8 horas a intensidad de luz de 60-85 E/m2/s. Los cultivos son sub-cultivados cada 7 días a dos semanas inoculando aproximadamente 35 mg de tejido en 35 mi de líquido fresco SB196 (el intervalo de sub-cultivo preferido es cada 7 días) . Los cultivos de suspensión embriogénica de soya se transformaron con los plásmidos y los fragmentos de ADN se describen en los siguientes ejemplos por el método de bombardeo con pistola de partículas (Klein et al. (1987) Nature, 327 : 70) .

B. Inicio de Cultivo de Suspensión Embriogénica de Soya Los cultivos de soya se iniciaron dos veces cada mes con 5-7 días entre cada inicio. Las vainas con semillas inmaduras de plantas de soya disponibles 45-55 después de la plantación son escogidas, removidas de sus cáscaras y colocadas en una caja magenta esterilizada. Las semillas de soya se esterilizaron sacudiéndolas por 15 minutos en una solución de Clorox al 15% con 1 gota de jabón ivory (95 mi de agua destilada en autoclave más 5 mi de Clorox y 1 gota de jabón). Mezclar bien. Las semillas se enjuagaron usando botellas de 2 litros de agua destilada estéril y aquellas de menos de 4 mm se colocaron en portaobjetos de microscopio individuales. El extremo menor de la semilla se cortó y los cotiledones se exprimieron de la capa de semilla. Los cotiledones se transfirieron a placas que contienen medio SB1 (25-30 cotiledones por placa) . Las placas se envolvieron con cinta de fibra y se almacenaron por 8 semanas. Después de este tiempo los embriones secundarios se cortaron y colocaron en medio liquido SB196 por 7 días.

C. Preparación de ADN para Bombardeo Ya sea un plásmido intacto o un fragmento de plásmido de ADN que contiene los genes de interés y el gen marcador seleccionable se usaron para bombardeo. El ADN de plásmido para bombardeo se preparó rutinariamente y se purificó usando el método descrito en Promega™ Protocols and Applications Guide, Segunda Edición (página 106) . Los fragmentos de los plásmidos que portan la secuencia ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO: 47, o secuencia ZmDGATl-2(EF09B) de SEC ID NO: 51, operativamente enlazada a un promotor de interés se obtuvieron por aislamiento con gel de plásmidos digeridos dobles. En cada caso, 100 ug de ADN de plásmido se digirieron en 0.5 mi de la mezcla de enzima especifica que es apropiada para el plásmido de interés. Los fragmentos de ADN resultantes se separaron por electroforesis de gel en 1% de agarosa ScaPlaque GTG (BioWhitaker Molecular Applications) y los fragmentos de ADN que contienen secuencia ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO: 7, o secuencia ZmDGATl-2 (EF09B) de SEC ID NO: 51, operativamente enlazada a un promotor de interés se cortaron del gel agarosa. El ADN se purificó de la agarosa usando la enzima de digestión GELasa siguiendo el protocolo del fabricante. Se agregó un alícuota de 50 µ? de agua destilada estéril que contiene 3 mg de partículas de oro (3 mg de oro) a 5 µ? de una solución 1 yg/yl de ADN (ya sea plásmido intacto o fragmento de ADN preparado como se describió anteriormente), 50 µ? de CaCl2 2.5M y 20 µ? de espermidina 0.1 M. La mezcla se sacudió 3 min en el nivel 3 de un sacudidor de vórtice y la pistola por 10 seg en una microfuga de banca. Después de un lavado con 400 µ?, la pelotilla de etanol al 100% se suspendió por sonicación en 40 µ? de etanol al 100%. Cinco µ? de suspensión de ADN se distribuyeron a cada disco de vuelo del disco de instrumentos Biolistic PDS1000/HE. Cada alícuota de 5 µ? contiene aproximadamente 0.375 mg de oro por bombardeo (es decir, por disco) .

D. Preparación de Tejido y Bombardeo con ADN Aproximadamente 150-200 mg de cultivos de suspensión embriónica de 7 días de edad se colocaron en un plato de petri de 60 x 15 mm estéril vacio y el plato se cubrió con la malla de plástico. El tejido se bombardeo 1 ó 2 disparos por placa con presión de ruptura de membrana ajustada a 1100 PSI y la cámara se evacuó a un vacio de 27-28 pulgadas de mercurio. El tejido se colocó aproximadamente 3.5 pulgadas del tamiz de retención/paro.

E. Selección de Embriones Transformados Los embriones transformados se seleccionaron ya sea usando higromicina (cuando el gen higromicina fosfotransferasa , HPT, se utilizó como el marcador seleccionable ) o clorsulfuron (cuando el gen de acetolactato sintasa, ALS, se utilizó como el marcador selecciónatele ) .

F. Selección de Higromicina (HPT) Después del bombardeo, el tejido se colocó en medio SB196 fresco y se cultivó como se describió anteriormente. Seis días post-bombardeo, la SB196 se intercambió con SB196 fresca que contiene un agente de selección de 30 mg/l de higromicina. El medio de selección se refrescó cada semana. Cuatro a seis semanas post selección, tejido transformado verde se puede observar creciendo de los grupos embriogénicos necróticos, no transformados. El tejido verde aislado se removió e inoculó en placas de cavidades múltiples para generar nuevos cultivos de suspensión embriogénica transformados, clonalmente propagados.

G. Selección de Clorsulfuron (ALS) Después del bombardeo, el tejido se dividió entre 2 matraces con medio SB196 y se cultivó como se describió anteriormente. Seis a siete días post-bombardeo, el SB196 se intercambió con SB196 fresco que contiene agente de selección de 100 ng/ml de clorsulfuron. El medio de selección se refrescó semanalmente . Cuatro a seis semanas post-selección, el tejido verde transformado se puede observar creciendo de grupos embriogénicos necróticos no transformados. El tejido verde aislado se removió e inoculó en placas de cavidades múltiples que contienen SB196 para generar nuevos cultivos de suspensión embriogénica transformados, clonalmente propagados.

H. Regeneración de Embriones Somáticos de Soya en Plantas Para obtener plantas completas de cultivos de suspensión embriogénica, el tejido se debe regenerar.

I . Maduración de Embrión Los embriones se cultivaron por 4-6 semanas a 26°C en SB196 bajo focos fluorescentes blancos fríos (Econowatt blanco frío Phillips F40/C /RS/E ) y Agro (Phillips F40 Agro) (40 watt) en un fotoperíodo de 16:8 hr con intensidad de luz de 90-120 uE/m2s. Después de este tiempo los grupos de embriones se removieron a un medio agar sólido, SB166, por 1-2 semanas. Los grupos luego se subcultivaron a medio SB103 por 3 semanas. Durante este período, los embriones individuales se pueden remover de los grupos y seleccionar para el fenotipo de alto aceite/alto ácido oleico asociado con la presencia de ZmDGATl-2 (ASK) , o contenido de aceite incrementado, y/o contenido de ácido oleico incrementado, y/o relación de ácido oleico/ácido linoleico incrementada debido a la sobre-expresión de ZmDGATl-2 de aceite normal. Se deberá señalar que cualquier fenotipo detectable, resultante de la expresión de los genes de interés, se podrá seleccionar en esta etapa.

J. Desecación y Germinación de Embrión Los embriones individuales maduros se disecaron colocándolos en un plato de petri pequeño vacio (35 x 10 mm) por aproximadamente 4-7 días. Las placas se clasificaron con cinta de fibra (creando una pequeña cámara de humedad) . Los embriones disecados se plantaron en medio SB71-4 donde se dejaron germinar bajo las mismas condiciones de cultivo descritas anteriormente. Las plántulas germinadas se removieron del medio de germinación y se enjuagaron completamente con agua y luego se plantaron en Tierra Redi en bandeja de paquete de 24 celdas, cubierta con domo de plástico claro. Después de 2 semanas el domo se removió y las plantas se fortalecieron por una semana adicional. Si las plántulas parecieron fuertes se transplantaron a crisoles de 10" de Tierra Redi con hasta 3 plántulas por crisol. Después de 10 a 16 semanas, las semillas maduras se recolectaron, cortaron y analizaron para proteínas.

K. Recetas de Medio 1. Medio de proliferación liquido SB 196 - FN Lite (por litro) - MS FcEDTA - lOOx Solución Madre 1 10 mi MS Sulfato - lOOx Solución Madre 2 10 mi Haluros de FN Lite - lOOx Solución Madre 3 10 mi FN Lite ?,?,?? - lOOx Solución Madre 4 10 mi Vitaminas B5 (1 ml/L) 1.0 mi 2,4-D (10mg/L concentración final) 1.0 mi KN03 2.83 gm (NH4) 2S04 0.463 gm Asparagina 1.0 gm Sucrosa (1%) 10 gm pH 5.8 Soluciones Madre de FN Lite Solución Madre # 1000 mi 500 mi 1 Solución Madre MS Fe EDTA lOOx Na2 EDTA* 3.724 g 1.862 g FeS04 - 7H20 2.784 g 1.392 g *Agregar primero, disolver en botella oscura mientras se agita 2 Solución Madre de Sulfato de MS lOOx MgS04 - 7H20 37.0 g 18.5 g MnS04 - H20 1.69 g 0.845 g ZnS04 - 7H20 0.86 g 0.43 g CuS0 - 5H20 0.0025 g 0.00125 g Solución Madre de Haluros de FN Lite 100x CaCl2 - 2H20 30.0 g 15.0 g KI 0.083 g 0.0715 g CoCl2 - 6H20 0.0025 g 0.00125 g Solución Madre de FN Lite ?,?,?? 100x KH2P04 18.5 g 9.25 g H3BO3 0.62 g 0.31 g Na2Mo04 - 2H20 0.025 g 0.0125 Medio sólido SBl (por litro) comprende: 1 pkg. de sales de MS (Gibco/ BRL - Cat# 11117-066) ; 1 mi de solución madre de vitaminas B5 1000X; 31.5 g de sucrosa; 2 mi de 2,4-D (20 mg/L concentración final); pH 5.7; y, 8 g de agar TC. Medio sólido SB 166 (por litro) comprende: 1 pkg. de sales de MS (Gibco/BRL - Cat# 11117-066) ; 1 mi de solución madre de vitaminas B5 1000X; 60 g de maltosa; 750 mg de hexahidrato de MgC12; 5 g de carbón activado; pH 5.7; y, 2 g de gelrita. Medio sólido SB 103 (por litro) comprende: 1 pkg. de sales de MS (Gibco/BRL - Cat# 11117-066) ; 1 mi de solución madre de vitaminas B5 1000X; 60 g de maltosa; 750 mg de hexahidrato de MgC12; pH 5.7; y, 2 g de gelrita. Medio sólido SB71-4 (por litro) comprende: 1 botella de sales B5 de Gamborg con sucrosa (Gibco/BRL -Cat# 2115 3-036); pH 5.7; y, 5 g de agar TC . La solución madre de 2,4-D se obtuvo de pre-hecha de Phytotech cat# D 295 - la concentración es 1 mg/ml. La solución madre de vitaminas B5 (por 100 mi) la cual se almacenó en alícuotas a -20C comprende: 10 g de mio-inositol; 100 mg de ácido nicotínico; 100 mg de HC1 de piridoxina; y 1 g de tiamina. Si la solución no se disuelve lo suficientemente rápido, aplicar un bajo nivel de calor vía la placa de agitación caliente. La solución madre de clorsulfuron comprende 1 mg/ml en Hidróxido de Amonio 0.01 N.

Ejemplo 9. Identificadores de Secuencia La tabla 4 proporciona un resumen de los identificadores de secuencia para los loci marcadores y secuencias asociadas referidas en la presente.

Tabla 4. Resumen de Identificadores de Secuencia SEC ID NO Descripción 1 Secuencia de Marcador para BAC05-ASK 2 Secuencia de Marcador para BAC05-EF09B 3 Secuencia de Marcador para BAC17-AS 4 Secuencia de Marcador para BAC17-EF09B 5 Secuencia de Marcador para BAC18-ASK 6 Secuencia de Marcador para BAC18-EF09B 7 Secuencia de Marcador para BAC20-AS 8 Secuencia de Marcador para BAC20-EF09B 9 Secuencia de Marcador para BAC22-ASK 10 Secuencia de Marcador para BAC22-EF09B 1 1 Secuencia de Marcador para BAC24-ASK 12 Secuencia de Marcador para BAC24-EF09B 13 Secuencia de Marcador para BAC29-ASK 14 Secuencia de Marcador para BAC29-EF09B 15 Secuencia de Marcador para BAC32-ASK 16 Secuencia de Marcador para BAC32-EF09B 17 Secuencia de Marcador para QTL6SNP7-ASK 18 Secuencia de Marcador para QTL6SNP7-EF09B 19 Secuencia de Marcador para QTL6SNP8-ASK 20 Secuencia de Marcador para QTL6SNP8-EF09B 21 Secuencia de Marcador para QTL6SNP9-ASK 22 Secuencia de Marcador para QTL6SNP9-EF09B SEC ID NO Descripción 23 Secuencia de Marcador para QTL6SNP13-ASK 24 Secuencia de Marcador para QTL6SNP 13-EF09B 25 Secuencia de Marcador para QTL6SNP14-AS 26 Secuencia de Marcador para QTL6SNP 14-EF09B 27 Secuencia de Marcador para QTL6SNP15-ASK 28 Secuencia de Marcador para QTL6SNP 15-EF09B 29 Secuencia de Marcador para QTL6SNP16-AS 30 Secuencia de Marcador para QTL6SNP 16-EF09B 31 Secuencia de Marcador para QTL6SNP17-ASK 32 Secuencia de Marcador para QTL6SNP 17-EF09B 33 Secuencia de Marcador para MZA5002-ASK 34 Secuencia de Marcador para MZA5002-EF09B 35 Secuencia de Marcador para MZA13321 -ASK 36 Secuencia de Marcador para MZA 13321 -EF09B (parcial) 37 Secuencia de Marcador para MZA15785-ASK 38 Secuencia de Marcador para MZA15785-EF09B 39 Secuencia de Marcador para MZA131 18- ASK 40 Secuencia de Marcador para MZA 131 18-EF09B 41 Secuencia de Marcador para MZA1 1771 -ASK 42 Secuencia de Marcador para MZA 1 1771 -EF09B 43 Secuencia de Marcador para MZA9351-ASK 44 Secuencia de Marcador para MZA935 1 -EF09B (parcial) 45 Secuencia de Marcador para MZA8135-ASK 46 Secuencia de Marcador para MZA8135-EF09B 47 ZmDGATl -2 ADNc ASK-secuencia de nucleótido 48 ZmDGATl-2 ASK-secuencia de aminoácido 49 ZmDGATl-2 ADNc Mo 17-secuencia de nucleótido 50 ZmDGATl -2 Mol 7-secuencia de nucleótido 51 ZmDGATl-2 ADNc EF09B-secuencia de nucleótido 52 ZmDGATl -2 EF09B-secuencia de nucleótido SEC ID NO Descripción 53 ZmDGATl -2 ADNc B73-secuencia de nucleótido 54 ZmDGATl-2 B73-secuencia de aminoácido 55 ZmAAP 1 (Aminoácido Permeasa)(Mo 17)-secuencia de nucleótido 56 ZmAAPl (Aminoácido Permeasa)(Mol7)-secuencia de aminoácido 57 ZmPESP (proteína de sistema de flujo de K+)(Mo 17)-secuencia de nucleótido 58 ZmPESP (proteína de sistema de flujo de K+) (Mol 7)-secuencia de aminoácido ZmS24 (Proteína S24 Ribosomal 40S)(Mol7)-secuencia de 59 nucleótido ZmS24 (Proteína S24 Ribosomal 40S) (Mol 7)-secuencia de 60 aminoácido 61 ZmABCT (transportador ABC tipo PDR)(Mol7)-secuencia de nucleótido parcial de extremo 5' 62 ZmABCT (transportador ABC tipo PDR) (Mol 7)-secuencia de aminoácido N-término 63 ZmABCT (transportador ABC tipo PDR) compuesta de Mol 7, B73 genómico y EST-secuencia de nucleótido 64 ZmABCT (transportador ABC tipo PDR) compuesta de Mol 7, B73 genómico y EST-secuencia de aminoácido 65 Lee 1 con-aminoácido 66 Lee 1 maíz-nucleótido 67 Lee 1 maíz-aminoácido 68 BAC05 cebador delantero (86488) 69 BAC05 cebador inverso (86489) 70 BAC 17 cebador delantero 86512 71 BAC17 cebador inverso 86513 SEC ID NO Descripción 72 BAC18 cebador delantero (86514) 73 BAC18 cebador inverso (86515) 74 BAC20 cebador delantero (86518) 75 BAC20 cebador inverso (86519) 76 BAC22 cebador delantero (86522) 77 BAC22 cebador inverso (86523) 78 BAC24 cebador delantero (86526) 79 BAC24 cebador inverso (86527) 80 BAC29 cebador delantero (86536) 81 BAC29 cebador inverso (86537) 82 BAC32 cebador delantero (86542) 83 BAC32 cebador inverso (86543) 84 QTL6SNP7 cebador delantero (96066) 85 QTL6SNP7 cebador inverso (96067) 86 QTL6SNP8 cebador delantero (96068) 87 QTL6SNP8 cebador inverso (96069) 88 QTL6SNP9 cebador delantero (96070) 89 QTL6SNP9 cebador inverso (96071) 90 QTL6SNP13 cebador delantero (96080) 91 QTL6SNP13 cebador inverso (96081) 92 QTL6SNP14 cebador delantero (96082) 93 QTL6SNP14 cebador inverso (96083) 94 QTL6SNP15 cebador delantero (96084) 95 QTL6SNP15 cebador inverso (96085) 96 QTL6SNP16 cebador delantero (96086) 97 QTL6SNP16 cebador inverso (96087) 98 QTL6SNP17 cebador delantero (96088) 99 QTL6SNP17 cebador inverso (96089) 100 MZA5002 cebador delantero (82263) 101 MZA5002 cebador inverso (82264) SEC ID NO Descripción 102 MZA13321 cebador delantero (82328) 103 MZA13321 cebador inverso (82329) 104 MZA15785 cebador delantero (82326) 105 MZA 15785 cebador inverso (82327) 106 MZA131 18 cebador delantero (82324) 107 MZA131 18 cebador inverso (82325) 108 MZA 1 1771 cebador delantero (82314) 109 MZA1 1771 cebador inverso (82315) 1 10 MZA9351 cebador delantero (82334) 1 1 1 MZA9351 cebador inverso (82335) 1 12 MZA8135 cebador delantero (82336) 1 13 MZA8135 cebador inverso (82337) 1 14 DGAT1 -2 ASK cebador delantero (94784) 1 15 DGAT1-2 ASK cebador inverso (94785) 1 16 263762-bp fragmento genómico (Mol 7) 1 17 1 1915-bp fragmento genómico (Mol 7) 1 18 6369-bp fragmento genómico (Mol 7) 1 19 Cadena complementaria a promotor ZmDGATl -2( ol 7) 120 promotor ZmAAPl 121 promotor ZmPESP(Mol 7) 122 promotor ZmS24 123 promotor ZmABCT 124 DGAT1 -2 ASK cebador delantero 125 DGAT1 -2 ASK cebador inverso 126 DGAT1-2 ASK cebador delantero 127 DGAT1-2 ASK cebador inverso 128 82725-bp ASKC281B1 secuencia genómica 129 promotor ZmPESP(ASK) 130 Cadena complementaria a promotor ZmDGATl -2(AS ) 131 secuencia codificante ZmFAD2-l SEC ID NO Descripción 132 secuencia de aminoácido ZmFAD2-l 133 secuencia de polinucleótido inhibidora FAD2 Ejemplo 10. Mapeo Final de QTL6 a un Gen Único ( DGAT1-2 ) Para trazar QTL6 adicionalmente a un gen único, nuevos marcadores SNP se desarrollaron de las secuencias de clon 3 BAC y se usaron para genotipar aproximadamente 4,000 plántulas BC5S1 que segregan QTL6. Los datos de aceite y oleico se obtuvieron de 14 recombinantes críticos. Los datos muestran que QTL6 se ubica entre BAC17 y BAC22, una región de aproximadamente 5.0 kb, que contiene secuencia codificante para la mitad C-terminal de DGAT1-2 (4050 bp; aminoácidos codificantes 196 a 495), el 3 ' -UTR (409 bp) , y posiblemente la región terminadora (542 bp) de DGAT1-2 (figura 34). Por lo tanto, QTL6 se ha trazado a una región dentro de un gen único, DGAT1-2. Los datos también muestran que esta región controla tanto concentraciones de ácido oleico como aceite de embrión cuando ninguna segregación de fenotipos de alto aceite y alto ácido oleico se observó dentro de este intervalo.

Como se muestra en la tabla 3 anterior, existen solamente cuatro cambios de aminoácido dentro de la DGAT1-2 del alelo de alto ácido oleico, alto aceite de ASK (es decir, ZmDGATl-2 (ASK) mostrada en la SEC ID NO: 48) cuando se compara con la DGAT1-2 del alelo de aceite normal EF09B (es decir, ZmDGATl-2 (EF09B) mostrada en la SEC ID NO: 52). Estos cambios incluyen la sustitución Val45 ? Gly45; la sustitución Pross ? Ser55; supresión del residuo glutamina correspondiente a Gln64 o Gln65 o Gln66 o Gln67 de la DGAT1-2 del alelo EF09B; e inserción de Phe467 o Phe468 o Phe46g dentro de la DGAT1-2 del alelo de alto aceite ASK. Dentro de la posición de mapa QTL6 final (entre BAC17-BAC22 ) , la inserción de Phe467 o Phe468 o Phe469 en la DGAT1-2 del alelo ASK está el único cambio de aminoácido entre los dos orígenes de mapeo (representados como la inserción de Phe469 (/469F) en la figura 34). Esto sugiere que el polimorfismo dentro del alelo de alto ácido oleico, alto aceite ASK que resulta en la inserción de Phe467 o Phe468 o Phe469 en la DGAT1-2 del alelo ASK juega un papel crucial en el incremento de contenidos de aceite y ácido oleico.

Ejemplo 11. Confirmación de QTL6 en Maíz Transgénico El resultado de mapeo fino descrito en el ejemplo 10 anterior se confirmó en maíz transgénico. Los constructos que contienen promotor oleosina 16-kD de embrión preferido que impulsa la expresión del alelo ASKC28IB1 (referido como ASK; SEC ID NO: 47) o EF09B (SEC ID NO: 51) de ADNc de DGAT1-2 se transformaron en maíz por infección de Agrobacterium. Los constructos también contuvieron un DS-RED impulsado por un promotor de proteina 2 de transferencia de lipidos especifica de aleurona (LTP2) para facilitar la segregación de granos transgénicos y nulos para análisis de fenotipo. Los datos de aceite y perfiles de ácido graso se obtuvieron de los granos TI segregados . En promedio, la sobre-expresión del alelo ASK condujo a un 27%, 26%, y 80% de incremento en concentración de aceite de embrión, concentración de aceite de semilla, y concentración de ácido oleico, y una disminución de 28% en concentraciones de linoleico, aproximadamente 2-3 veces los efectos causados por el alelo EF09B (figura 38). Los incrementos causados por la sobre-expresión del alelo ASK también fueron más significativos que aquellos causados por el alelo ASKC28IB1 nativo observado en BC4S2 NILs (figura 38). Los granos transgénicos que sobre-expresan el alelo EF09B de DGAT1-2 también muestran cambios en todos los cuatro rasgos. La DGAT cataliza la etapa final en la biosintesis de aceite y se ha implicado como la etapa limitante de velocidad. Sin que se una por cualquier teoría o mecanismo de acción, la sobre-expresión del alelo EF09B de DGAT1-2 probablemente supera esta etapa limitante de velocidad conduciendo a los cambios en estos cuatro rasgos de aceite. Conjuntamente, estos datos indican que la DGATl-2 es el gen causal para QTL6 y es responsable de los contenidos incrementados de aceite y ácido oleico en el maíz .

Ejemplo 12: DGAT1-2 e Inserción de Residuo de Fenilalanina Critica Confirmada con Gen QTL6 en Levadura Como se señaló anteriormente, el residuo fenilalanina extra ubicado en la posición 469 de la proteina DGAT1-2 para el alelo ASKC28IB1 (es decir, Phe469 de SEC ID NO: 48, también referido como F469) cuando se alineó con la proteina DGATl-2 de aceite normal para el alelo EF09B (véase figura 27B) podrá representar el resultado de una inserción de este residuo entre los siguientes pares de residuos en la proteina DGATl-2 de aceite normal (SEC ID NO: 52) para el alelo EF09B: entre Trp467 y Phe468 de la SEC ID NO: 52, entre Phe468 y Phe469 de la SEC ID NO: 2, o entre Phe46g y Ser470 de la SEC ID NO: 2. Para determinar si la inserción representada por la posición de residuo 467, 468, ó 469 de la proteina DGATl-2 para el alelo ASKC28IB1 es responsable de los fenotipos de alto aceite/alto ácido oleico, las actividades enzimáticas de DGATl-2 de diferentes alelos DGATl-2 se midieron en levadura . Una cepa de supresión Saecharomyees cerevisiae DGA1 (DGAT) (Clon ID: 12501) se adquirió de Invitrogen y se utilizó para crear un mutando doble (AyDGAT, AyPDAT) deficiente en TAG-biosintesis removiendo el gen LR01 ( fosfolipido : diacilglicerol aciltransferasa , o PDAT) usando recombinación homologa. El alelo ASKC28IB1 o EF09B (ORF de ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO: 47 y ORF de ZmDGATl-2 (EF09B) de SEC ID NO: 51, respectivamente) o sus formas mutantes (ORF de ZmDGATl-2 (ASK) con el codón TTC en posiciones nt 1405-1407 suprimidas, que codifican la ZmDGATl-2 (ASK) mutante que tiene la secuencia descrita en la SEC ID NO: 48 con el residuo Phe469 suprimido; y ORF de ZmDGATl-2 (EF09B) con un codón TTC insertado 'inmediatamente después de nt 1407 de SEC ID NO: 51, que codifica la ZmDGATl-2 (EF09B) mutante que tiene la secuencia descrita en SEC ID NO: 52 con una inserción de residuo fenilalanina entre Phe469 y Ser47o de SEC ID NO: 52) se clonaron en PTS416 (Stratagene) que contiene un promotor de 1.0-kb y un terminador de 0.5-kb de S. cerevisiae 3-fosfoglicerato cinasa (PGK1). Los plásmidos resultantes y vector solamente se utilizaron para transformar el mutante doble de levadura. La cantidad de TAG en las células transformadas se determinó. Brevemente, 20 mi de cultivo de levadura crecido por 54 hr se recolectaron. Las lipasas se inactivaron por calentamiento a 80°C por 10 min en la presencia de 1 mi de isopropanol. Las células se sometieron a lisis por vórtice en la presencia de 0.5 mi de perlas de vidrio y 0.5 mi de ácido acético 0.15 . Como un control interno, 50 g de TAG (C17:0) se agregaron a cada muestra. Los lipidos totales se extrajeron con 3 mi de amortiguador de extracción ( cloroformo : metanol=2 : 1 ) , se lavaron con 1.5 mi de cloroformo. La fase orgánica se combinó y se secó bajo corriente de nitrógeno, luego se disolvió en 100 µ? de cloroformo. Una mitad de las muestras (50 µ?) se cargaron sobre las placas TLC, se desarrollaron con hexano/éter/ácido acético (70:30:1) y se siguieron por un breve manchado con vapor de yodo. Las bandas correspondientes se rasparon para análisis de CG similar a aquel descrito anteriormente. Los contenidos de TAG totales se calcularon basado en la suma de los valores experimentales para C16:0, C16:l, C18:0, y C18:l. El método de Milcamps et al. (2005) J. Biol.

Chem. 280:5370-5377 fue seguido con cambios menores para la preparación de proteina microsomal. Los cultivos de levadura crecieron a fase estacionaria temprana en medio SC menos uracil. Después de la recolección, las pelotillas de levadura se resuspendieron en 4 mi de 20 mM Tris-HCl, pH 8, 10 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 5% glicerol, 1 mM DTT, y 0.3 M (NH4)2S04. Dos mi de perlas de vidrio se agregaron, y las células se sometieron a lisis por vórtice por 5 min. El lisado se centrifugó por 15 min a 1500 g a 6°C. El sobrenadante luego se centrifugó a 100,000 g por 1.5 h a 6°C. La pelotilla microsomal se resuspendió en 500 µ? de 100 mM fosfato de potasio, pH 7.2 que contiene 10% glicerol y se congeló en nitrógeno liquido previo a almacenamiento a -80°C. Las concentraciones de proteina se determinaron por el método de Bradford, usando el reactivo Coomassie Plus (Pierce), con albúmina de suero bovino como un estándar. Los ensayos de DGAT se hicieron por 1 min a 25°C, con 50 mM fosfato de potasio, pH 7.2, 10 µ? oleoil-coenzima A etiquetada con 1-14C (50mCi/mmol, Perkin Elmer) , y 20 µg de proteina microsomal en un volumen de reacción total de 100 µ? de volumen. La reacción se inició agregando proteina microsomal. El ensayo se detuvo y los lipidos se extrajeron con 2 mi of hexano : isopropanol (3:2) (Hará and Radin (1978) Anal. Biochem. 90:420-426) que contiene 4 µ? de triacilglicerol no etiquetado (triolein, Sigma) . Después del vórtice por 10 seg, las fases se separaron con 1 mi de 50 mM sulfato de sodio y el vórtice se hizo de nuevo por 10 seg. Después de 10 min, la fase superior se transfirió a otro tubo y se secó con gas nitrógeno. El lipido se resolubilizó en un pequeño volumen de hexano (aproximadamente 100 a 150 µ?) y se aplicó a placas TLC de sílice K6, las cuales se desarrollaron en 80:20:1 (v/v) hexano : dietiléter : ácido acético. El triacilglicerol se visualizó y se marco por manchado con vapor de yodo. Después que la mancha se decoloró, el triacilglicerol se raspó, y la reactividad se determinó por conteo de escintilación liquida. Las células de levadura que contienen el alelo ASKC28IB1 DGAT1-2 (ORF de ZmDGATl-2 (ASK) mostrado en SEC ID NO: 47) tuvieron 2-3 veces mayores actividades de enzima DGAT que aquellas que contienen el alelo EF09B DGAT1-2 (ORF de ZmDGATl-2 (EF09B) mostrado en SEC ID NO: 51). De manera más importante, cuando Phe469 se suprimió de la DGATl-2 del alelo ASKC28IB1 (usando el mutante ORF de ZmDGATl-2 (ASK) donde nt 1405-1407 (codón TTC) de SEC ID NO: 47 fueron suprimidos), la actividad de enzima DGAT dentro de estas células de levadura se redujo a un nivel similar a aquel observado para células de levadura que contienen el alelo EF09B DGATl-2. La inserción de un residuo fenilalanina entre Phe46g y Ser47o de la DGATl-2 de aceite normal (usando el mutante ORF de ZmDGATl-2 (EF09B) con un codón TTC insertado inmediatamente después de nt 1407 de SEC ID NO: 51), lo cual resulta en un mutante ZmDGATl-2 (EF09B) con el residuo fenilalanina correspondiente al Phe 69 de la proteina ZmDGATl-2 (ASK) , restaura la actividad de enzima al nivel observado para las células de levadura que comprenden el alelo ASKC28IB1 (es decir, ORF de ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO:47). Véase Figura 39A. La cantidad de TAG acumulada en estas células se correlaciona con el nivel de actividades de DGAT (Figura 39B) . Estos resultados de nuevo indican que la DGAT1-2 es el gen responsable para QTL6 y que un residuo aminoácido único, Phe469 dentro de la proteina ZmDGATl-2 (ASK) es responsable de la actividad de enzima DGAT incrementada y acumulación de TAG en levadura.

Ejemplo 13: El Alelo ASKC28IB1 de DGAT1-2 Está Asociado con Germoplasma de Alto Aceite/Alto Acido Oleico Como se muestra en la figura 30, el residuo Phe469 (F469) parece que está presente en todas las DGATs de tipo 1 de planta y solamente está ausente de ciertos parentales de maíz con contenidos de aceite normales. Para determinar cual alelo es ancestral en el maíz, un fragmento de ADN que rodea la ubicación del codón para F469 se amplificó de 50 accesos de linea Teosinte usando la SEC ID NOs:126 y 127 como cebadores, y los productos de PCR resultantes se secuenciaron . Los resultados de secuenciación muestran que todas las 50 lineas de Teosinte contiene F469, que tiene el mismo alelo como el consanguíneo ASKC28IB1 de maíz, sugiriendo que el alelo ASKC28IB1 con F469 es ancestral y que el alelo EF09B es una mutación por supresión. El mismo fragmento de ADN de 73 parentales de maíz públicos y propietarios con varios niveles de concentraciones de ácido oleico y aceite de embrión se amplificó y secuenció. Los resultados muestran que el alelo ASKC28IB1 con F469 se encuentra exclusivamente en parentales de maíz con contenido de alto aceite y alto ácido oleico (figura 40A). Como una comparación, un fragmento de ADN en el extremo 5' del gen DGAT1-2 gene, que abarca la región que comprende todos los tres cambios de aminoácido descritos antes (la sustitución Val45 ? Gly^s (también referida como V45G) ; la sustitución Pross ? Ser55 (también referida como P55S) ; y la supresión del residuo glutamina correspondiente a Gln64 o Gln65 o Gln66 o Gln67 de la DGAT1-2 del alelo EF09B (también referido como Q64 o Q65 o Q66 o Q67) se amplificó y secuenció (usando SEC ID NOs : 124 y 125). En contraste con F469, los alelos ASKC28IB1 para estos tres aminoácidos no están exclusivamente asociados con parentales de maíz de alto aceite y alto ácido oleico. Por ejemplo, Gly4s (también referido como G45) encontrado en ASKC28IB1 también se encuentra en parentales de maíz con niveles normales a bajos de contenidos de aceite y ácido oleico, no exclusivamente en el grupo de alto aceite y alto ácido oleico (figura 40B) . Estos datos son consistentes con el mapeo fino de QTL6 y resultados de expresión de levadura.

Ejemplo 14: QTL6 (DGAT1-2) y FAD2 Tienen Efectos Aditivos en la Concentración Incrementada de Acido Oleico El gen FAD2 de maíz codifica una delta-12 ácido graso desaturasa que cataliza la desaturación de ácido oleico para formar ácido linoleico. La variación de alelo en el gen FAD2 es un contribuyente principal a los niveles de ácido oleico en el germoplasma de maíz. El consanguíneo propietario GR1B5 contiene un alelo favorable para el contenido de ácido oleico y tiene un nivel de ácido oleico de aproximadamente 40%. Para determinar si QTL6 y el FAD2 en GR1B5 son aditivos, se hizo un cruce entre GR1B5 y una línea de QTL6 BC3S2 (en EF09B antecedente) que contiene los alelos ASKC28IB1 homocigotas para el gen DGAT1-2, y semillas F2 fueron posteriormente producidas. Los genotipos DGAT1-2 y FAD2 se determinaron en 200 semillas F2 segregadas de una mazorca. La concentración de ácido oleico para cada semilla también se determinó. Los niveles de ácido oleico en diferentes grupos de genotipo se compararon. Los datos muestran que los genes QTL6 (DGAT1-2) y FAD2 tienen efectos aditivos en la concentración incrementada de ácido oleico (Figura 41). Las semillas F2 que contienen alelos ASKC28IB1 homocigotas de DGAT1-2 y alelos no favorables homocigotas de FAD2 tienen un nivel de ácido oleico de aproximadamente 38%, mientras que las semillas que contienen alelos favorables homocigotas de FAD2 solo tienen aproximadamente 40% de ácido oleico. Por otra parte, los niveles de ácido oleico de semilla son mayores que 50%, cuando los alelos favorables homocigotas tanto para DGAT1-2 como FAD2 están presentes.

El efecto aditivo para incrementar la concentración de ácido oleico apilando el alelo DGATl-2 (ASK) de alto aceite/alto ácido oleico con alelos FAD2 favorables también se puede lograr por procedimientos transgénicos . Por ejemplo, las lineas de maíz deseables transgénicas para la secuencia de ORF de ZmDGATl-2 (ASK) y una secuencia inhibidora que se dirige a la expresión de FAD2 se producen. Cualquier secuencia inhibidora que reduce o vuelve agónica la expresión de FAD2 se produce. Cualquier secuencia inhibidora que reduce o vuelve agónica la expresión de FAD2 se puede usar para disminuir la actividad/expresión de FAD2 de modo que la conversión de ácido oleico a ácido linoleico es inhibida, favoreciendo la acumulación de ácido oleico. Los ejemplos de secuencias de polinucleótido inhibidoras de FAD2 y constructos inhibidores incluyen, pero no se limitan a, aquellos descritos en la Publicación de Solicitud de Patente U.S. No. 2005-0160494 y WO 2005/063988, incorporadas en la presente para referencia en su totalidad. De esta manera, las plantas transgénicas que comprenden el ORF de ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO: 47 y un cásete de expresión que comprende la secuencia inhibidora de FAD2 descrita en la SEC ID NO: 133 se producen para conferir el efecto aditivo de concentración incrementada de ácido oleico en semillas de estas plantas transgénicas más allá que lo asociado con la presencia del ORF de ZmDGATl-2 (ASK) . Estas plantas transgénicas se obtienen apilando la secuencia de ORF de ZmDGATl-2 (ASK) con esta secuencia inhibidora de FAD2 , por ejemplo, por reproducción tradicional de una linea de planta transgénica que comprende un cásete de expresión que comprende la secuencia inhibidora de FAD2 con una linea de planta que comprende el locus de marcador ZmDGATl-2 favorable definido por ZmDGATl-2 (ASK) de SEC ID NO: 47. Con este procedimiento de apilado, la linea de planta que porta el locus de marcador ZmDGATl-2 favorable se obtiene a través de métodos de reproducción tradicionales, o se obtiene via un procedimiento transgénico, por ejemplo, via transformación con un cásete de expresión que comprende este locus de marcador favorable. Alternativamente, el apilado se logra por procedimientos transgénicos , donde una linea de planta se transforma con el ORF de ZmDGATl-2 (ASK) operativamente enlazado a un promotor que es funcional en una célula de planta, y un cásete de expresión que comprende la secuencia inhibidora de FAD2. El ORF de ZmDGATl-2 (ASK) y promotor operativamente enlazado se introducen en la planta en un cásete de expresión separado, en el mismo o diferente vector, o en el mismo cásete de expresión que comprende la secuencia inhibidora de FAD2.

Todas las publicaciones y solicitudes de patente mencionadas en la especificación son indicativas del nivel de aquellos expertos- en la técnica a la cual pertenece esta invención. Todas las publicaciones y solicitudes de patente se incorporan en la presente para referencia al mismo grado como si cada publicación o solicitud de patente individual fue específicamente e individualmente indicada para ser incorporada para referencia. Aunque la invención anterior se ha descrito en algún detalle por vía de ilustración y ejemplo para propósitos de claridad de entendimiento, ciertos cambios y modificaciones se pueden practicar dentro del alcance de las reivindicaciones anexas.

BC3S2 NILs BC4S2 NILs % aceite Emb. % aceite de semilla % aceite Emb. % aceite de semilla QTL6+/+ 35.8 5.1 QTL6+/+ 33.3 4.4 QTL6 -/- 31.6 4.4 QTL6-/- 28.7 3.7 Cambio 4.1 0.8 ; Cambio 4.7 0.7 % de Cambio lo. i ? 1 ? 1 .* A* % de Cambio 16.2 19.

Valor p 1.9E-07 1.3E-04 Valor p 2.1 E-11 BC3S2 NILs BC4S2 NILs R18:1(%) R18:2(%] R18:1 (%) R18:2(%) QTL6+/+ 36.2 46.4 QTL6+/+ 37.9 45.4 QTL6-/- 24.6 58.5 QTL6-/- 23.6 59.8 Cambio 11.6 -12.1 Cambio 14.4 -14.4 I % de Cambio 47.0 -20.6 ; % de Cambio 61.0 -24.1 valor P 4.0E-11 9.0E-11 valor P 1.4E-07 3.0E-07

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiéndose descrito la presente se considera como novedad, y por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Un polipéptido aislado, caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: a) una secuencia de aminoácido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 48, en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta; y b) una secuencia de aminoácido que comprende, un fragmento de la SEC ID NO: 48 o variante de la misma que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a dicho fragmento de la SEC ID NO: 48, en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

2. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicha secuencia de aminoácido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 8, comprende al menos uno de: a) un residuo glicina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO : 48 ; b) un residuo serina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 48; y c) un residuo fenilalanina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 469 de la SEC ID NO : 48 ; en donde la expresión de dicho polipéptido en dicha planta o parte de planta, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

3. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque dicho polipéptido comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 48.

4. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicha secuencia de aminoácido que comprende un fragmento de la SEC ID NO: 48 comprende al menos uno de: a) el residuo glicina en la posición de aminoácido 45 de la SEC ID NO: 48; b) el residuo serina en la posición de aminoácido 55 de la SEC ID NO: 8; y c) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 48; en donde la expresión de dicho polipéptido en dicha planta o parte de planta, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

5. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicho polipéptido es una variante o fragmento del polipéptido expuesto en la SEC ID NO: 52, en donde dicha secuencia de aminoácido se selecciona del grupo que consiste de: a) una secuencia de aminoácido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 52, en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta; y, b) una secuencia de aminoácido que comprende, un fragmento de la SEC ID NO: 52; en donde la expresión de dicho polipéptido en dicha planta o parte de planta, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

6. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque dicha secuencia de aminoácido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 52 comprende al menos, una alteración seleccionada del grupo que consiste de: a) una sustitución de un residuo glicina por el residuo valina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO: 52; b) una sustitución de un residuo serina por el residuo prolina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 52; c) una supresión del residuo glutamina que corresponde al residuo glutamina en la posición de aminoácido 64, 65, 66, o 67 o SEC ID NO: 52; y d) una inserción de un residuo fenilalanina en una posición localizada entre un par de residuos, en donde el par de residuos corresponde a un par de residuos dentro de la SEC ID NO: 52 seleccionada del grupo que consiste de: i) el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52; ii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52; y iii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52; en donde la expresión de dicho polipéptido en dicha planta o parte de planta, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

7. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque dicha secuencia de aminoácido se expone en la SEC ID NO: 8.

8. El polipéptido aislado de conformidad con la rei indicación 5, caracterizado porque dicha secuencia de aminoácido que comprende un fragmento de la SEC ID NO: 52 comprende al menos, una alteración seleccionada del grupo que consiste de: a) una sustitución de un residuo glicina por el residuo valina en la posición de aminoácido 45 de la SEC ID NO: 52; b) una sustitución de un residuo serina por el residuo prolina en la posición de aminoácido 55 de la SEC ID NO:52; c) una supresión del residuo glutamina que corresponde al residuo glutamina en la posición de aminoácido 64, 65, 66, o 67 o SEC ID NO: 52; y d) una inserción de un residuo fenilalanina en una posición localizada entre un par de residuos, en donde el par de residuos corresponde a un par de residuos dentro de la SEC ID NO: 52 seleccionada del grupo que consiste de: i) el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52; ii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52; y iii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52; en donde la expresión de dicho polipéptido en dicha planta o parte de planta, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

9. Un polinucleótido aislado, caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótido seleccionada del grupo que consiste de: a) una secuencia de nucleótido que comprende al menos, 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 47, en donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que cuando se expresa en una planta o parte de la misma, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta; b) una secuencia de nucleótido que comprende al menos, 50 nucleótidos consecutivos de la SEC ID NO: 47, en donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que cuando se expresa en una planta o parte de la misma, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico en dicha planta o parte de planta; c) una secuencia de nucleótido que codifica una secuencia de aminoácido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 48, en donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que cuando se expresa en una planta o parte de la misma, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta; d) una secuencia de nucleótido que comprende al menos, 12 nucleótidos consecutivos, en donde dicha secuencia de al menos, 12 nucleótidos consecutivos comprende al menos, 90% de identidad de secuencia a una porción de la SEC ID NO: 7 o un complemento de la misma, en donde dicho polinucleótido puede detectar un polimorfismo en un locus marcador asociado con contenido de aceite alto y/o contenido alto de ácido oleico; (e) una secuencia de nucleótido que comprende al menos, 12 nucleótidos consecutivos de la SEC ID NO: 47 o un complemento de la misma, en donde dicho polinucleótido puede detectar un polimorfismo en un locus marcador asociado con contenido de aceite alto y/o contenido alto de ácido oleico.

10. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque dicha secuencia de polinucleótido codifica un polipéptido que comprende al menos, uno de: a) un residuo glicina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO : 48 ; b) un residuo serina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 8; y c) un residuo fenilalanina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 469 de la SEC ID NO : 48 ; en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

11. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque dicha secuencia se expone en la SEC ID NO: 7.

12. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque dicho polinucleótido codifica un fragmento de la SEC ID NO: 48, en donde dicho fragmento comprende al menos uno de: a) el residuo glicina en la posición de aminoácido 45 de la SEC IDNO:48; b) el residuo serina en la posición de aminoácido 55 de la SEC ID NO: 48; y c) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 8; en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

13. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque dicho polinucleótido codifica una variante del polipéptido expuesto en la SEC ID NO: 52, en donde dicha variante comprende la secuencia de aminoácido expuesta en la SEC ID NO: 52 con al menos, una alteración seleccionada del grupo que consiste de: a) una sustitución de un residuo glicina por el residuo valina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO: 52; b) una sustitución de un residuo serina por el residuo prolina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 52; c) una supresión del residuo glutamina que corresponde al residuo glutamina en la posición de aminoácido 64, 65, 66, o 67 o SEC ID NO: 52; y d) una inserción de un residuo fenilalanina en una posición localizada entre un par de residuos, en donde el par de residuos corresponde a un par de residuos dentro de la SEC ID NO: 52 seleccionada del grupo que consiste de: i) el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52; ii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52; y iii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52; en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

14. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque dicho polinucleótido codifica un fragmento de la SEC ID NO: 52 con al menos, una alteración seleccionada del grupo que consiste de: a) una sustitución de un residuo glicina por el residuo valina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO: 52; b) una sustitución de un residuo serina por el residuo prolina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 52; c) una supresión del residuo glutamina que corresponde al residuo glutamina en la posición de aminoácido 64, 65, 66, o 67 o SEC ID NO: 52; y d) una inserción de un residuo fenilalanina en una posición localizada entre un par de residuos, en donde el par de residuos corresponde a un par de residuos dentro de la SEC ID NO: 52 seleccionada del grupo que consiste de: i) el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52; ii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52; y iii) el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52; en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

15. Un polinucleótido aislado, caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótido seleccionada del grupo que consiste de: a) una secuencia de nucleótido que comprende al menos, 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 51, en donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que cuando se sobre expresa en una planta o parte de la misma, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta; b) una secuencia de nucleótido que comprende al menos, 50 nucleótidos consecutivos de la SEC ID NO: 51, en donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que cuando se sobre expresa en una planta o parte de la misma, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico en dicha planta o parte de planta; c) una secuencia de nucleótido que codifica una secuencia de aminoácido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 52, en donde dicho polinucleótido codifica un polipéptido que cuando se sobre expresa en una planta o parte de la misma, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

16. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque dicha secuencia de polinucleótido codifica el polipéptido expuesto en la SEC ID NO: 52 o una variante biológicamente activa o fragmento de la misma, en donde dicha variante tiene al menos, 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 52, y en donde dicha variante o fragmento biológicamente activo, incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico en una planta o parte de la misma, cuando se sobre expresa en dicha planta o parte de planta, .

17. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque dicha secuencia que codifica SEC ID NO: 52 se expone en la SEC ID NO: 51.

18. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 16 o 17, caracterizado porque dicha variante del polipéptido expuesto en la SEC ID NO: 52 comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 52 con una inserción de fenilalanina entre el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52, o una inserción de fenilalanina entre el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52, o una inserción de fenilalanina entre el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52.

19. El polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque dicha secuencia que codifica dicha variante comprende la secuencia codificante expuesta en la SEC ID NO: 51 con un codón TTC insertado inmediatamente después del nucleótido (nt) 1401, 1404, o 1407 de la SEC ID NO:51.

20. Un cásete de expresión, caracterizado porque comprende el polinucleótido de conformidad con una de las reivindicaciones 9 hasta 19.

21. El cásete de expresión de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque dicho polinucleótido está operablemente ligado a un promotor que acciona la expresión en una célula de planta.

22. Una planta o parte de planta de la misma, caracterizada porque comprende un polinucleótido operablemente ligado a un promotor que acciona la expresión en dicha planta o parte de planta, en donde dicho polinucleótido comprende una secuencia de nucleótido de conformidad con una de las reivindicaciones 9 hasta 19.

23. La parte de planta de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque dicha parte de planta comprende una célula.

24. La planta de conformidad con la reivindicación 22 o 23, caracterizada porque dicha planta es una monocotiledónea .

25. La planta de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada porque dicha monocotiledónea es maíz, trigo, arroz, cebada, sorgo, o centeno .

26. La planta de conformidad con la reivindicación 22 o 23, caracterizada porque dicha planta es una dicotiledónea.

27. La planta de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada porque la dicotiledónea es soya, Brassica, girasol, algodón, o alfalfa.

28. La planta de conformidad con una de las reivindicaciones 22 hasta 27, caracterizada porque dicho polinucleótido es establemente incorporado en el genoma de dicha planta o parte de planta.

29. Una semilla transgénica a partir de la planta, caracterizada porque es de conformidad con una de las reivindicaciones 20 hasta 28.

30. Un grano transgénico, caracterizado porque es producido a partir de la planta de conformidad con una de las reivindicaciones 20 hasta 28.

31. Un método para incrementar el nivel de un polipéptido en una planta o parte de la misma, caracterizado porque comprende introducir en dicha planta o parte de planta un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótido de conformidad con una de las reivindicaciones 9 hasta 19.

32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque dicho polinucleótido es establemente integrado en el genoma de la planta o parte de planta.

33. El método de conformidad con la reivindicación 31 o 32, caracterizado porque dicha planta es una dicotiledónea.

34. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque dicha dicotiledónea es soya, Brassica, girasol, algodón, o alfalfa.

35. El método de conformidad con la reivindicación 31 o 32, caracterizado porque dicha planta es una monocotiledónea .

36. El método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque dicha monocotiledónea es maíz, trigo, arroz, cebada, sorgo, o centeno .

37. Un método para identificar una primera planta de maíz o un primer germoplasma de maíz que tiene un fenotipo seleccionado del grupo que consiste de un contenido incrementado de aceite, un contenido incrementado oleico, una relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, y cualquier combinación de los mismos, caracterizado porque comprende detectar en la primera planta de maíz o el primer germoplasma de maíz al menos, un polimorfismo de un locus marcador que está asociado con dicho fenotipo, en donde el locus marcador codifica un polipéptido de conformidad con una de las reivindicaciones 1 hasta 8.

38. El método de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque dicho incremento en el contenido de aceite comprende un incremento de aceite de grano, un incremento de aceite de germen, o tanto un incremento de aceite de grano como un incremento de aceite de germen.

39. El método de conformidad con la reivindicación 37 o 38, caracterizado porque dicho incremento en el contenido de ácido oleico comprende un incremento en la concentración de ácido oleico del grano, un incremento en la concentración de ácido oleico del germen, o tanto un incremento en la concentración de ácido oleico del grano como concentración de ácido oleico del germen .

40. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque dicho incremento en la relación de ácido oleico/ácido linoleico comprende un incremento en dicha relación en grano de maíz, un incremento en dicha relación en dicho germen, o tanto un incremento en dicha relación en grano de maíz como en germen .

41. El método de conformidad con una de las reivindicaciones 37 hasta 40, caracterizado porque dicho primer germoplasma es una linea de maíz o una variedad de mai z .

42. El método de conformidad con una de las reivindicaciones 37 hasta 41, caracterizado porque el método además comprende seleccionar la primer planta de maíz o una progenie de la misma o el primer germoplasma de maíz o una progenie del mismo.

43. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque además comprende cruzar la primer planta de maíz o germoplasma seleccionado, con una segunda planta de maíz o germoplasma.

44. El método de conformidad con una de las reivindicaciones 37 hasta 41, caracterizado porque el método además comprende introgresar dicho locus marcador que comprende al menos, uno de dichos polimorfismos en una segunda planta de maíz o un segundo germoplasma de maiz, para producir una planta de maiz o germoplasma de maiz introgresados .

45. El método de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque la introgresión de dicho locus marcador comprende, introgresar un locus QTL6 que comprende dicho locus marcador en dicha segunda planta de maíz o dicho segundo germoplasma de maíz.

46. El método de conformidad con la reivindicación 44 o reivindicación 45, caracterizado porque la planta o germoplasma de maíz introgresado, exhibe un contenido incrementado de aceite o un contenido incrementado de ácido oleico cuando se compara con la segunda planta de maíz o germoplasma.

47. Una planta introgresada, caracterizada porque se produce por el método de conformidad con la reivindicación 46.

48. Un polipéptido DGAT1-2 aislado, caracterizado porque comprende al menos, una secuencia de dominio de aminoácido, seleccionada del grupo que consiste de los dominios numerados 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, y 18 de la figura 30 y al menos, uno de : a) un residuo glicina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 45 de la SEC ID NO : 48 ; b) un residuo serina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 55 de la SEC ID NO: 48; y c) un residuo fenilalanina en la posición de aminoácido que corresponde al residuo 469 de la SEC ID NO : 48 ; en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

49. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque dicho polipéptido comprende al menos uno de la secuencia de dominios de aminoácido numerados 6 y 18 en la Figura 30.

50. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque dicho polipéptido comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: a) una secuencia de aminoácido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 48, en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite y contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta; y b) una secuencia de aminoácido que comprende, un fragmento de la SEC ID NO: 48 o variante de la misma que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a dicho fragmento de la SEC ID NO: 48, en donde la expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite y contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

51. Un polipéptido aislado, caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de: a) una secuencia de aminoácido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia a la SEC ID NO: 52, en donde la sobre expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta; y b) una secuencia de aminoácido que comprende, un fragmento de la SEC ID NO: 52 o variante de la misma que tiene al . menos 90% de identidad de secuencia a dicho fragmento de la SEC ID NO: 52, en donde la sobre expresión de dicho polipéptido en una planta o parte de planta de la misma incrementa el contenido de aceite o contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta.

52. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque dicho polipéptido comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 52.

53. El polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque dicha variante del polipéptido expuesto en la SEC ID NO: 52 comprende la secuencia expuesta en la SEC ID NO: 52 con una inserción de fenilalanina entre el residuo triptofano en la posición de aminoácido 467 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52, o una inserción de fenilalanina entre el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 468 de la SEC ID NO: 52 y el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52, o una inserción de fenilalanina entre el residuo fenilalanina en la posición de aminoácido 469 de la SEC ID NO: 52 y el residuo serina en la posición de aminoácido 470 de la SEC ID NO: 52.

54. Un polinucleótido aislado, caracterizado porque codifica el polipéptido de conformidad con una de las reivindicaciones 48 hasta 53.

55. Un cásete de expresión, caracterizado porque comprende el polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 54, en donde dicho polinucleótido está operablemente ligado a un promotor que acciona la expresión en una célula de planta.

56. Un método para producir una planta o parte de planta de la misma que tiene un fenotipo seleccionado del grupo que consiste de contenido incrementado de aceite, contenido incrementado de ácido oleico, relación incrementada de ácido oleico/ácido linoleico, y cualquier combinación de los mismos, caracterizado porque dicho método comprende, introducir en dicha planta o parte de planta déla misma el cásete de expresión de conformidad con la reivindicación 21 o 53, en donde la expresión o sobre expresión de dicho polipéptido codificado por el polinucleótido dentro de dicha planta o parte de planta de la misma, incrementa el contenido de aceite de dicha planta o parte de planta, incrementa el contenido de ácido oleico de dicha planta o parte de planta, incrementa la relación de ácido oleico/ácido linoleico de dicha planta o parte de planta, o cualquier combinación de los mismos.

57. El método de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque dicho polinucleótido es establemente integrado en el genoma de la planta o parte de planta.

58. El método de conformidad con la reivindicación 56 o 57, caracterizado porque dicha planta es una dicotiledónea.

59. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque dicha dicotiledónea es soya, Brassica, girasol, algodón, o alfalfa.

60. El método de conformidad con la reivindicación 56 o 57, caracterizado porque dicha planta es una monocotiledónea .

61. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque dicha monocotiledónea es maíz, trigo, arroz, cebada, sorgo, o centeno .