MX2008009970A - Conjugados de polipeptido-acido nucleico para inmunoprofilaxis o inmunoterapia para desordenes neoplasicos o infecciosos. - Google Patents

Abstract

La presente invención divulga composiciones que inducen la activación cruzada de señalización de muerte mediada inmune y directa en células objetivadas mediante explotar las propiedades de un conjugado de anticuerpo/péptido-ácido nucleico. El conjugado es capaza de activar simultáneamente múltiples mecanismos de señalización de muerte que son específicamente objetivados a células neoplásticas, incluyendo células de tumores. Métodos para usar al conjugado de la presente invención como una modalidad inmunoterápeutica para el tratamiento o prevención de enfermedades neoplásticas u otros desórdenes también se divulgan. Además, métodos se divulgan para identificar tales conjugados mediante ensayar agentes de prueba para varias respuestas citotóxicas, incluyendo la inducción de hiperfusión entre células neoplásticas in vitro.

Description

CONJUGADO DE POLIPÉPTIDO-ÁCIDO NUCLEICO PARA INMUNOPROFILAXIS O INMUNOTERAPIA PARA DESÓRDENES NEOPLÁSICOS O INFECCIOSOS Antecedentes de la Invención Campo de la Invención La presente invención se refiere generalmente a modalidades terapéuticas inmunoestimulantes y, de manera mas específica, a conjugados de anticuerp /péptido-ácido nucleico, que activan de manera cruzada la señalización inmuno-mediada y la señalización de muerte celular dirigida en células objetivadas, y métodos para la prevención o tratamiento de desórdenes neoplásicos y/u otros usando tales conjugados. Información Antecedente La quimioterapia es una piedra angular de la gestión actual de cánceres. La inducción de muerte celular por agentes quimioterapéuticos involucra activación inducida por daño de ADN de una trayectoria de señalización de muerte "intrínseca" que depende de la función del gene de supresión de tumores p53. El mecanismo por el cual p53 induce apóptosis involucra activación de transcripción de genes proapoptósicos tales como la proteína conteniendo dominio Bcl-2 de homología 3 (BH3) , PUMA (modulador de apóptosis regulado hacia arriba p53), y Noxa . Estos genes codifican proteínas que disparan permeabilización de membranas exteriores mitocondrial mediante los miembros de familia Bcl-2 multi-dominio, BAX y BAK. La liberación mitocondrial del citocromo c (cito c) resulta en la transactivación de caspasa-9, y la liberación de Smac/DIABLO (segundo activador derivado de mitocondria de caspasa/proteína de ligadura a IAP directa con bajo pH) facilita la activación de caspasas efectoras (-3 y -7) mediante aliviar el efecto inhibidor del Inhibidor enlazado X de Proteína de Apóptosis (XIAP) . Caspasas activadas ejecutan los eventos terminales de muerte celular mediante separación de sustratos críticos que mantienen integridad de citoesqueleto y ADN. Por lo tanto, la susceptibilidad de células tumorales a apóptosis inducida por quimioterapia se determina mediante un balance dinámico entre señalización de muerte mitocondrial mediada por p53/BAX y expresión de proteínas sobrevivientes que contrarrestan la permeabilización mitocondrial (Bcl-XL) y activación de caspasas efectoras (XIAP) . La gran mayoría de cánceres humanos alojan aberraciones genéticas (pérdida/desactivación de proteínas de señalización de muerte y/o sobre-expresión/activación de señales de supervivencia) que reducen la susceptibilidad celular a apóptosis y limitan la eficacia anti-tumoral de la quimioterapia. La eficacia anti-tumoral de agentes quimioterapéuticos puede limitarse por su extrusión a partir de células de cáncer expresando proteínas de resistencia a fármacos múltiples, así como citotoxicidad limitante de dosis a tejidos normales . Aunque varios enfoques se pueden usar para extraer respuestas inmunes innatas y adaptativas contra células tumora-les, la resistencia intrínseca de células de cáncer a citotoxici-dad inmunológica presenta una limitación significativa a la eficacia de la inmunoterapia . Las células de cáncer mejoran su habilidad para soportar un ataque por células efectoras inmunes citotóxicas mediante la adquisición de alteraciones genéticas específicas que interfieren con la trayectoria de señalización de muerte mitocondrial compartida transportada por Granzima A, Interferón-y, y ligando Apo2/factor de necrosis de tumores relacionado con apóptosis induciendo ligando (Apo2L/TRAIL) , tres mediadores clave de citotoxicidad mediada por células inmunológi -cas. Tanto Granzima A y Apo2L/TRAIL transducen señales de muerte mediante activación proteolítica de caspasas efectoras -3/-7, así como inducción de permeabilización de membrana exterior mitocondrial mediante separación de BID a formas truncadas que activan BAX y BAK. La liberación mitocondrial de Smac/DIABLO facilita la activación de caspasas efectoras -3/-? mediante aliviar el efecto inhibitorio de XIAP. La susceptibilidad de células tumorales a citotoxicidad inmunológica se determina mediante el nivel de expresión de XIAP, así como la habilidad para contrarrestar inhibición mediada por XIAP de caspasas efectoras (-3/-7) mediante liberación mitocondrial de Smac. Como tal, células de cáncer que expresan altos niveles de XIAP también fallan en disparar la liberación mitocondrial de Smac debido a que la coexpresión de Bcl-XL puede no permitir la activación de caspasas efectoras (-3/-?) a un umbral requerido para apóptosis mediada por células inmunes. Dado que la expresión/act ividad de Bcl-XL, así como XIAP se regula hacia arriba por señales inducidas por receptor (NF-tb, Akt , STAT3/5) , la sobre-expresión/activación de señalización de receptor (v.gr., receptor de factor de crecimiento epidérmico [EGFR] , HER2 /neu , receptor-1 de factor de crecimiento similar a insulina [IGF-1R] , citocinas, moléculas co-est imulatorias ) en cánceres puede limitar su susceptibilidad a citotoxicidad inmunológica . La inmunoterapia de cáncer actual también se puede limitar por la falla para activar y reclutar efectores inmunes dentro del micro-ambiente tumoral y/o específicamente apuntar los efectores inmunes a células tumorales. Compendio de la Invención La presente invención se basa en un enfoque unificado para activación cruzada de señalización de muerte mediada inmune y directa en células objetivadas. La presente invención explota las propiedades de un conjugado anticuerpo/polipéptido-ácido nucleico, las cuales incluyen simultáneamente activar múltiples mecanismos de señalización de muerte que son apuntados específicamente a células tumorales y superar la resistencia intrínseca de células de cáncer a modalidades terapéuticas estándar. Además, la presente invención se puede usar para apuntar inmunoterapia e inmunoprofilaxis de enfermedades neoplásicas y otros desórdenes.

En una forma de realización, un conjugado anticuerpo-ácido nucleico péptido-ácido nucleico aislado se divulga, incluyendo un anticuerpo o péptido que se liga de manera específica a un componente celular de una célula de tumor, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-medio ambiente de tumor, y una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias (INAS), donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico incluyen un patrón molecular asociado con patógeno (PA P) u otro motivo que pueden activar células inmunes. En un aspecto, el anticuerpo es un anticuerpo quimérico, un anticuerpo multi -específico , un anticuerpo humanizado, un anticuerpo de una sola cadena, o un fragmento Fab. En otro aspecto, el componente celular incluye receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR, ErbB-1, HERI) , ErbB-2 (HER2/neu) , ErbB-3/HER3 , ErbB-4/HER4, familia de ligandos EGFR; familia del receptor de factor de crecimiento similar a insulina (IGFR) , proteínas de ligadura a IGF (IGFBPs) , familia de ligandos IGFR; familia del receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) , familia de ligandos PDGFR; familia del receptor de factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR) , familia de ligandos FGFR, familia del receptor de factor de crecimiento vascular endotelila (VEGFR) , familia VEGF ; familia del receptor de HGF; familia del receptor de TRK; familia del receptor de efrina (EPH) ; familia del receptor de AXL; familia del receptor de leucocito tirosina quinasa (LTK) ; familia del receptor de TIE, angiopoyetina 1,2; familia del receptor de huérfano similar al receptor de tirosina quinasa (ROR) ; familia del receptor de dominio de discoidina (DDR) ; familia del receptor de RET; familia del receptor de KLG; familia del receptor de RYK; familia del receptor de MuSK; receptores de factor de crecimiento transformante ß (TGF-ß) ; receptores de citocina, receptores Clase I (familia de hematopoyetina) y Clase II (familia de interferón/IL-10) , superfamilia de receptor de factor de necrosis tumoral (TNF) (TNFRSF) , familia del receptor de muerte; antígenos de testes cancerosas (CT) , antígenos específicos de linaje, antígenos de diferenciación, alfa-actinina-4 , ARTC1, productos de fusión de región de racimo de punto de quiebre Abelson (Bcr-abl) , B-RAF, caspasa-5 (CASP-5) , caspasa-8 (CASP-8) , ß-catenina (CTNNB1) , ciclo de división celular 27 (CDC27) , quinasa 4 dependiente de ciclina (CDK4) , CDK 2A, COA-1, proteína de fusión dek-can, EFTUD-2, factor de elongación 2 (ELF2) , proteína de fusión de gene 6 de variante Ets/ETS gene de leucemia mieloide aguda 1 (ETC6-AML1) , fibronectina (FN) , GPNMB, proteína de fusión de receptor de lípidos de baja densidad /GDP-L fucosa r ß -D-galactoasa 2-a-L-fucosiltransferasa (LDLR/FUT) , HLA-A2 , intercambio de arginina a isoleucina en el residuo 170 de la hélice a del dominio a2 en el gene HLA-A2 (HLA-A*201 -R170 I ) , HLA-A11, proteína 70-2 de impacto de calor mutada (HSP70-2M) , KIAA0205, MART2 , melanoma ubicuo mutado 1, 2, 3 ( UM-1, 2, 3) , fosfatasa de ácido prostático (PAP) , neo-PAP, Miosina clase I, NFYC , OGT , OS-9, proteína de fusión pml-RARalfa, PRDX5, PTPRK, K-ras (KRAS2 ) , N-ras (NRAS ) , HRAS, RBAF600 , SIRT2, SNRPDl, proteína de fusión SYT-SSXl o SSX2 , Triosefosfato Isomerasas, BAGE, BAGE-1, BAGE-2, 3, 4, 5, GAGE-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, GnT-V (N-actil glucosaminil transferasa V aberrante, MGAT5) , HERV-K-MEL, KK-LC, KM-HN-1, LAGE, LAGE-1, antígeno reconocido por CTL en melanoma (CAMEL) , MAGE-A1 (MAGE-1), MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, AGE-A5, AGE-A6, MAGE-A8 , MAGE-A9, MAGE-AIO, MAGE-All, MAGE-A12, MAGE-3, MAGE-B1, MAGE-B2, MAGE-B5, MAGE-B6, MAGE-C1, MAGE-C2, mucina 1 (MUC1), MART- l/Melan-A (MLANA) , gplOO, gpl00/Pmell7 (SILV) , tirosinasa (TYR) , TRP-1, HAGE, NA-88, NY-ESO-1, NY-ESO- l/LAGE-2 , SAGE, Spl7, SSX-1, 2, 3, 4, TRP2-INT2, antígeno carcino-embriónico (CEA), Kallikreína 4, mamaglobina-A, OA1 , antígeno específico de próstata (PSA) , TRP-l/gp75, TRP-2, adipofilina, proteína inducible por interferón ausente en melanoma 2 (AIM-2) , BING-4, CPSF, ciclina DI, molécula de adhesión a células epiteliales (Ep-CAM) , EphA3 , factor-5 de crecimiento de fibroblastos (FGF-5) , glicoproteína 250 (gp250) , EGFR (ERBB1) , HER-2/neu (ERBB2), cadena 2 del receptor de interleucina 13 ( IL13Ralfa2 ) , receptor de IL-6, carboxil esterasa intestinal (iCE), alfa-feto proteína (AFP) , M-CSF, mdm-2, MUC1, p53 (TP53) , PBF, PRAME, PSMA, RAGE-1, RNF43, RU2AS, SOX10, STEAP1, survivina (BIRC5), telomerasa transcriptasa inversa humana (hTERT) , telomerasa, gene de tumor de Wilms (WT1) , SYCP1, BRDT, SPANX, XAGE, ADAM2 , PAGE-5, LIP1, CTAGE-1, CSAGE, MMA1 , CAGE, BORIS, HOM-TES-85, AF15ql4, HCA661, LDHC , MORC, SGY-1, SP011, TPX1, NY-SAR-35, FTHL17, NXF2 , TDRD1 , TEX15 , FATE , TPTE, idiotipos de inmunoglobulina , proteína de Bence-Jones, receptores de estrógeno (ER) , receptores de andrógeno (AR) , CD40, CD30, CD20, CD19, CD33, antígeno de cáncer 72-4 (CA 72-4), antígeno de cáncer 15-3 (CA 15-3) , antígeno de cáncer 27-29 (CA 27-29) , antígeno de cáncer 125 (CA 125) , antígeno de cáncer 19-9 (CA 19-9) , gonadotropina coriónica humana ß, antígeno de carcinoma de células escuamosas, enolasa específica de neuronas, proteína de impacto de calor gp96, GM2 , sargramostima , CTLA-4, alanina prolina 707 (707-AP) , antígeno de adenocarcinoma reconocido por células T 4 (ART-4), péptido 1 de antígeno carciembriogénico (CAP-1), canal de cloruro 2 activado por calcio (CLCA2), ciclofilina B (Cyp-B) , tumor 2 de aro de sígnete humano (HST-2) , proteínas de virus de papiloma humano (HPV) (HPV-E6, HPV-E7, antígenos de cápside mayores o menores, otros), proteínas de virus de Epstein-Barr (EBV) (proteínas de membrana latentes EBV -LMP1 , LMP2 ; otras), proteínas de virus de Hepatitis B o C, y proteínas de VIH. En otro aspecto, la "secuencia de ácido nucleico inmuno-estimulatoria" (INAS) es un patrón molecular asociado a patógeno (PAMP) u otro motivo que puede activar células inmunes, incluyendo, pero no limitado a, ADN CpG (CpG) , ADN de virus de herpes simplex (HSV) , ARN de doble cadena (ARNds) , y ARN de una sola cadena (ARNss) . Además, INAS pueden incluir una o mas secuencias de ácido nucleico que silencian la expresión de genes o inducen señalización de muerte intracelular, incluyendo pero no limitado a, ARN de doble cadena (ARNds) , ARN de interferencia corto (ARNsi) , ARN de horquilla corta (ARNsh) , o micro ARN. En un aspecto relacionado, INAS puede ser una secuencia de codificación o no de codificación. Por ejemplo, una INAS puede ser la SEQ ID NO : 1 , en un ejemplo ilustrativo. En un aspecto relacionado, el conjugado incluye un anticuerpo que se liga específicamente a EGFR o HER2 /neu en una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico incluyen una secuencia de ADN CpG como se señala en la SEQ ID NO : 1. En una forma de realización, un conjugado péptido-ácido nucleico aislado se divulga incluyendo un péptido que se liga a un componente celular de una célula de tumor objetivada, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-ambiente de tumor, y una o mas INAS, donde la una o mas secuencias de ácido nucleico incluyen un patrón molecular asociado a patógeno (PAMP) u otro motivo que pueda activar células inmunes. En un aspecto, el péptido que se conjuga a secuencias de ácido nucleico se deriva de despliegue de fagos u otras fuentes, incluyendo integrina a?ß? (CRRETAWAC (SEQ ID NO:5)), integrina a?ß3 (CDCRGDCFC (SEQ ID NO : 6 ) /RGD- C ; RGDWXE (SEQ ID NO:7)), integrina a?ß5 (TRGDTF (SEQ ID NO : 8 ) ) , a?ß6 (RGDLxxL (SEQ ID NO:9) o xxDLxxL (SEQ ID NO: 10)), ??ß3 (SRGDM (SEQ ID NO: 11)), mímico de anexina V para a?ß5 (WISYSMPD (SEQ ID NO: 12)), E-selectina (IELLQAR (SEQ ID NO : 13)), mitocondria celular endotelial (CNGRC-GG- (KLAKLAK) 2 (SEQ ID NO : 14)), Efrina-A2 y Efrina-A4 (CVSNPRWKC (SEQ IDNO: 15), CHVLWSTRC (SEQ IDNO: 16)), Fibronectina (C DDGWLC (SEQ ID NO : 17)), ICAM-I o factor de von Willebrand factor (CPCFLLGCC (SEQ ID NO: 18) /LLG-4C) , lamina-1 (DFKLFAVY (SEQ ID NO: 19)), P-selectina (EWVDV (SEQ ID NO:20)), complejo MMP- 9 : integrina (D/E) (D/E) (G/L)W (SEQ ID NO:21), MMP-9 y MMP-2 (gelatinasas) (CTTHWGFTLC (SEQ ID NO: 22) ) , cadherina Tipo I en endotelio (N-Ac-CHA VC-NH2) , región Flt-Ide VEGF NxxEIExYxxWxxxxxY (SEQ ID NO: 23) , región KDR de VEGF (HTMYYHHYQHHL (SEQ ID NO: 24) , AT LPPR (SÉQ ID NO: 25) ) , receptor de VEGF (WHSDMEWWYLLG (SEQ ID NO: 26), RRKRRR (SEQ ID NO: 27), Aminopeptidasa N/CD13 (NGR) , NG2 proteoglicano (TAASGVRSMH (SEQ ID NO:28), LTLRWVGLMS (SEQ ID NO:29)), péptido derivado de glándula adrenal (LMLPRAD (SEQ ID NO:30)), péptido derivado de tejido adiposo (CKGGRAKDC SEQ ID NO:31)), péptido derivado del cerebro (SR1) , péptido derivado de endotelio cerebral (CLSSRLDAC (SEQ ID NO:32)), péptido derivado de célula de glioma (VGLPEHTQ (SEQ ID NO:33)), péptido derivado de neuroblastoma (VPWMEPAYQRFL (SEQ ID NO:34)), péptido derivado de médula de hueso (GGG, GFS, L S) , péptido derivado de cáncer de seno (HER2/neu) (LTVxPWx (SEQ ID NO: 35) , LTVxPWY (SEQ ID NO: 36) , mimótope HER2 Ab/Trastuzumab -LLGPYELWELSH (SEQ ID NO:37)), péptido derivado de colon (RPMC (SEQ ID NO:38)), péptido derivado de intestino (YSGKWGW (SEQ ID NO: 39)), péptido derivado de cáncer de células escuamosas de cabeza y cuello (TSPLNIHNGQKL (SEQ ID NO:40)), péptido derivado de vasculatura pulmonar (CGFELETC (SEQ ID N0:41)), péptido derivado de endotelio de arterias coronarias (NSVRDL(G/S) (SEQ ID NO:42), NSVSSx(S/A) (SEQ ID NO:43)), péptido derivado de vasos linfáticos (CGNKRTRGC (SEQ ID NO: 44)/ Lyp-1) , péptido derivado de órganos múltiples (GVL, EGRx (SEQ ID NO:45), xFG(G/V) (SEQ ID NO:46)), péptido derivado de islotes pancreáticos (CVSSNPRWKC (SEQ ID NO: 47), CHVLWSTRC (SEQ ID NO:48)), péptido derivado de páncreas (SWCEPGWCR (SEQ ID NO: 49) ) , péptido derivado de próstata (AGG, DPRATPGS (SEQ ID NO:50) , SMSIARL (SEQ ID N0:51), CGRRAGGSC (SEQ ID NO:52), GVL), péptido derivado de retina (RDV, CSCFRDVCC (SEQ ID NO:53)), péptido derivado de ligando de teratógeno (TPKTSVT (SEQ ID NO:54)), y péptido derivado del útero (GLSGGRS (SEQ ID NO: 55) ) . En otra forma de realización, un método para prevenir o tratar una enfermedad neoplásica se divulga incluyendo administrar a un sujeto en necesidad de ello, una composición que incluye un conjugado de polipéptido/péptido-ácido nucleico, donde el conjugado incluye un polipéptido/péptido que se liga específicamente a un componente celular de una célula de tumor, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-ambiente de tumor y una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico incluyen un patrón molecular asociado con patógeno (PAMP) . En un aspecto, el método además incluye remover células inmunes del sujeto, poner en contacto las células con el conjugado ex vivo, y re-introducir las células dentro del sujeto. En un aspecto adicional, el método incluye administrar otros agentes incluyendo agentes quimioterapéuticos , radiación ionizante, terapia hormonal, inmunoterapia celular, vacunas, anticuerpos monoclonales , terapia biológica, terapia anti-angiogénica, o terapia dirigida a moléculas pequeñas. En otro aspecto, el desorden neoplásico incluye, pero no se limita a, cánceres de cabeza y cuello, cánceres aero-digestivos, cánceres gastro- intestinales , cánceres del esófago, cánceres del estómago-gástricos, cánceres del páncreas, cánceres hepatobiliares/del hígado, cánceres colorrectales , cánceres anales, cánceres del intestino delgado, cánceres genito-urina-rios, cánceres urológicos, cánceres renales/del riñon, cánceres de la uretra, cánceres de los testículos, cánceres de la uretra/pene, cánceres ginecológicos, cánceres de los ovarios/trompas de Falopio, cánceres del peritoneo, cánceres del útero/endometrio , cánceres cervicales/de vagina/de vulva, enfermedad trofoblástica gestacional, cánceres de próstata, cánceres de hueso, sarcoma (tejido suave/hueso) , cánceres de pulmón, mesotelioma, cánceres del mediastino, cánceres de seno, cánceres del sistema nervioso central, cánceres de cerebro, melanoma, leucemia, linfoma (enfermedad de Hodgkin y linfoma no de Hodgkin) , neoplasmas de células de plasma, mieloma, síndrome mielodisplástico, tumores endocrinos, cánceres de piel, melanoma, cánceres tiroideos, cánceres paratiroideos , adrenal , cánceres endocrinos pancreáticos, carcinoide; neoplasia endocrina múltiple, malignidades relacionadas con SIDA, cáncer de sitio primario desconocido, y varios cánceres de la niñez. De preferencia, el sujeto es un humano. En otra forma de realización, un método para identificar un conjugado de ácido nucleico que induce activación/madura-ción de células inmunes y apunta a muerte celular se divulga incluyendo poner en contacto una o mas células ín vitro con un conjugado de ácido nucleico de prueba conteniendo un anticuerpo o péptido que se liga específicamente con un componente celular de una célula de tumor, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-ambiente de tumor, donde el anticuerpo o péptido se conjuga con un ácido nucleico que comprende una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias (INAS) , y donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico incluyen un patrón molecular asociado con patógeno (PAMP) , y determinar inducción de un marcador o un cambio fenotípico en una o mas células en la presencia o ausencia de células inmunes, donde la inducción o cambio determinados en la presencia del conjugado anticuerpo/péptido-ácido nucleico de prueba es indicativo de activación/maduración de células inmunes, modulación de señalización de células objetivo, y apuntar a muerte celular. En otra forma de realización, un conjugado de anticuerpo/ácido nucleico aislado se divulga, incluyendo un anticuerpo que se liga a un componente celular de una célula inmune, tal como una célula dendrítica (DC) , y una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias (INAS) , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico incluyen un patrón molecular asociado con patógeno (PA P) u otro motivo que puede activar las células inmunes. En un aspecto, el anticuerpo se liga a un componente celular de células dendríticas (DCs) incluyendo, pero no limitados a, receptores de captación de antígeno de DC, receptores similares a lectina tipo C, nointegrina de atrape de ICAM-3 específica de células dendríticas (DC-SIGN, CD209) , receptor de mañosa de macrófagos (MMR, MRC1) , DEC-205 (LY75) y FLT3. En un aspecto, el método incluye administrar un conjugado anticuerpo/péptido-ácido nucleico, donde las secuencias de ácido nucleico silencian la expresión de genes o inducen señalización de muerte intracelular . En otro aspecto, el conjugado anticuerpo-ácido nucleico es además conjugado con un antígeno derivado de células de tumor. En otro aspecto, el conjugado anticuerpo-ácido nucleico es además conjugado con un antígeno derivado de un microbio infeccioso o microorganismo patógeno incluyendo virus, bacterias, micobacterias , espiroquetas, hongos, rickettsia, micoplasma, clamidia, protozoarios y parásitos metazooarios , o helminto. En otra forma de realización, un método para prevenir o tratar una enfermedad neoplásica o infecciosa se divulga incluyendo administrar a un sujeto en necesidad de ello, una composición que incluye un conjugado anticuerpo/péptido-ácido nucleico, donde el conjugado incluye un anticuerpo que se liga a una célula dendrítica, un péptido antigénico derivado de una célula de tumor o microbio/organismo patógeno, y una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias (INAS) , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico incluye un patrón molecular asociado a patógeno (PAMP) u otro motivo que puede activar células inmunes. Métodos y composiciones ejemplares de acuerdo con esta invención se describen en detalle. Breve Descripción de los Dibujos La figura 1 ilustra anticuerpos conjugados con (ADN/ARN) nucleótidos. La figura 2 ilustra péptidos apuntados a tumores conjugados con (ADN/ARN) nucleótidos. La figura 3 ilustra el mecanismo de acción de un anticuerpo de ADN. La figura 4 muestra inmuno-blots demostrando anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG y anticuerpo anti-HER2. La figura 5 es un inmuno-blot demostrando la inhibición de fosforilación de EGFR (Tyr 1068) mediante ya sea anticuerpo anti-EGFR (EGFR Ab) o anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG (EGFR Ab-CpG A/C) . La figura 6 es una muestra de análisis de citometría de flujo de la expansión de PMBCs CD56+ siguiendo tratamiento con conjugado anticuerpo EGFR-ADN CpG (EGFR Ab-CpG A) pero no con anticuerpo EGFR conjugado con ADN de control (control) . La figura 7 es una muestra de análisis FACS , la cual demuestra la maduración de células dendríticas por anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG. La figura 8 es una gráfica demostrando la inducción de muerte de células de tumor HT-29 mediante anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG como una función de la relación PBMC: células de tumor. La figura 9 es una gráfica demostrando la inducción de muerte de células de tumor HTP-29 por anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG como una función del tiempo. La figura 10 muestra gráficas de barras demostrando los efectos de anticuerpos conjugados con ADN CpG sobre la expresión de Interferón ? (IFN-?) y Apo2L/TRAIL en PBMCs . A) muestra la cuantificación de IFN-? (pg/ml) por ELISA en sobrenadantes de PBMCs tratados con ya sea anticuerpo anti-EGFR (anti-EGFR Ab) 5 pg/ml, anticuerpo anti-HER2 humano (anti-HER2 Ab) 5 pg/ml, CpG A ODN (ADN CpG) 5 pg/ml, anti-EGFR AB-CpG ADN 5 pg/ml, anti-HER2 Ab-CpG ADN 5 pg/ml, o dejado sin tratar (control) . B) muestra la cuantificación de Apo2L/TRAIL (pg/ml) por ELISA en sobrenadantes de PBMCs tratados con ya sea anticuerpo anti-EGFR (anti-EGFR Ab) 5 pg/ml, anticuerpo anti-HER2 humano (anti-HER2 Ab) 5 pg/ml, CpG A ODN (ADN CpG) 5 pg/ml, anti-EGFR AB-CpG ADN 5 pg/ml, anti-HER2 Ab-CpG ADN 5 µ?/t??, o dejado sin tratar (control) . Las figuras 11A y 11B son gráficas mostrando la inhibición de crecimiento de tumor y reducción de volumen de tumor en respuesta a administración intratumoral o sistémica de anticuerpo anti-neu conjugado con ADN CpG a ratones transgénicos (neu-N) . (A) controles sin tratar. (B) células tratadas con anticuerpo conjugado con ADN CpG. La figura 12 es una gráfica mostrando la inhibición de crecimiento de tumor HT-29 EGFR+ siguiendo la administración de anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG. Descripción Detallada de la Invención Antes de las presentes composición, métodos, y metodologías se describan, se debe entender que la invención no se limita a composiciones, métodos, y condiciones experimentales particulares descritas, pues tales composiciones, métodos, y condiciones pueden variar. Se debe entender también que la terminología usada en la presente es para propósitos de describir formas de realización particulares solamente, y no pretende ser limitante, dado que el alcance de la presente invención será limitado solamente en las reivindicaciones anexas. Como se usa en esta especificación y las reivindicaciones anexas, las formas singulares "uno", "una", y "el", "la", incluyen referencias plurales a menos de que el contexto claramente lo dicte de otra manera. Así, por ejemplo, referencias a "un ácido nucleico" incluyen uno o mas ácidos nucleicos, y/o composiciones del tipo descrito en la presente que serán aparentes a los técnicos en la materia ante lectura de esta divulgación y así sucesivamente. A menos de que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado como se entiende de manera común por un técnico en la materia al cual pertenece esta invención. Cualquier método y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente se pueden usar en la práctica o prueba de la invención, como será entendido que modificaciones y variaciones son abarcadas dentro del espíritu y alcance de la divulgación presente . La introducción de anticuerpos/péptidos conjugados con ADN o conjugados con ARN activa la señalización de muerte en células objetivadas (v.gr., células neoplásicas) (figura 1 y figura 2) . Aunque no se está limitado por teoría, y en contraste a los efectos de agentes quimioterapéuticos genotóxicos, el uso de anticuerpos/péptidos conjugados con ADN o conjugados con ARN permite la activación de señalización de muerte en células objetivadas sin efectos correspondientes en tejidos normales que no expresan la molécula objetivada o expresan niveles significativamente menores de la molécula comparados con células neoplásticas (figura 3 ) . Además, anticuerpos conjugados con ADN o conjugados con ARN pueden activar de manera simultánea al sistema inmune, reclutar células efectoras inmunes a las células objetivadas, y sensibilizar células de tumores con citotoxicidad inmunológica (v.gr. , mediante bloqueo simultáneo de señalización mediada por factor de crecimiento) . Las células efectoras inmunes cooperan con señalización de muerte inducida por ADN o ARN para inducir apóptosis de células de tumor. También, los antígenos de tumor liberados por células de tumor apoptósicas, por ejemplo, se presentan en células dendríticas (DCs) para generar respuestas inmunes anti -tumores adaptativas de larga duración. Este enfoque puede permitir la objetivación selectiva y eliminación inmunológica de células de tumor sin toxicidad a células normales, mediante activar señalización de muerte intracelular en tales células . Tratamiento de células de cáncer expresando EGFR con anticuerpo anti -EGFR conjugado con ADN CpG o células de cáncer expresando HER2/neu con anticuerpos anti -HER2/neu conjugados con ADN CpG resulta en muerte específica de receptor objetivo directa en ausencia de PBMCs. La fusión célula-célula desregulada en respuesta a tratamiento con anticuerpos conjugados con nucleóti-dos resulta en la formación de células conglutinadas (híbridas o multinucleadas) con un lapso de vida limitado y habilidad de replicación deteriorada. Esta forma novedosa de muerte celular objetivada (hiperfusión celular) no se observa en respuesta a tratamiento con anticuerpos padre no conjugados (anticuerpo anti-EGFR o anticuerpos anti-HER2/neu) o ADN CpG libre.

Hiperfusión celular se puede observar por métodos los cuales ensayan para supervivencia/proliferación celular incluyendo, pero no limitado a microscopía de contraste de fase, exclusión de tripano azul, manchado con violeta cristal, detección de cuerpos celulares conglutinados y/o detección de formación de cuerpos celulares multinucleados . En un aspecto, polipéptidos/péptidos conjugados con ADN o conjugados con ARN activan simultáneamente respuestas inmunes anti -tumor en el medio de las células de tumor e inhiben angiogénesis de tumores. En un aspecto relacionado, polipéptidos/péptidos objetivando la célula de tumor, vasculatura de tumor, o micro-ambiente de tumor ayudan en la entrega de ADN/ARN inmuno-estimulatorio al tumor, y también inhiben angiogénesis de tumores . En un aspecto, los conjugados de la presente invención se usan solos o en combinación con, otro anti-cáncer tal como agentes quimioterapéuticos , radiación ionizante, terapia hormonal, citocinas, inmunoterapia , terapia celular, vacunas, anticuerpos monoclonales , agentes antiangiogénicos , terapéuticos objetivados (fármacos de moléculas pequeñas), o terapias biológicas. Por ejemplo, agentes quimioterapéuticos incluyen, pero no se limitan a, agentes alquilantes anti-tumores tales como mostazas (mecloretamina HC1 , melfalano, clorambucilo , ciclofosfa-mida, ifosfamida, busulfano) , nitrosoureas (BCNU/carmustina , CCNU/lomustina, MeCCNU/semustina , fotemustina, estreptozotocina) , tetrazinas (dacarbazina, mitozolomida , temozolomida) , aziridinas (tiotepa, mitomicina C, J AZQ/diazicuona) , procarbazina HCl , hexametilmelamina , adozelesina ; cisplatina y sus análogos, cisplatina, carboplatina , oxaliplatina ; antimetabolitos , metotrexato, otros antifolatos, 5 - fluoropirimidinas (5-fluorouracilo/5 -FU) , citarabina, azacitidina, gemcitabina , 6-tiopurinas ( 6 -mercaptopurina , tioguanina) , hidroxiurea ; agentes interactivos con topoisomerasa , epipodofilotoxinas (etoposida, teniposida) , análogos de camptottecina (topotecano HCl , irinote-cano, 9-aminocamptotecina) , antraciclinas y compuestos relacionados (doxorubicina HCl , doxorubicina liposomal , daunorubicina HCl , citrato de daunorubicina HCl liposomal, epirubicina, idarubici-na) , mitoxantrona , losoxantrona , actinomicina-D, amsacrina, pirazoloacridina ; agentes anti -microtúbulos , alcaloides Vinca (vindesina, vincristina, vinblastina, vinorelbina) , los taxanos (paclitaxel, docetaxel), estramustina ; fludarabina, 2-clorodeso-xiadenosina, 21 -desoxicoformicina , homoharringtonina , suramina, bleomicina, L-asparaginasa, floxuridina, capecitabina , cladribi-na, leucovorina, pentostatina , retinoides (todos los ácidos retinoicos trans, 13-cis ácido retinoico, ácido retinoico 9-cis, isotretinoína , tretinoína) , pamidronato, talidomida, ciclospori-na; anti -estrogenos de terapias hormonales (tamoxifeno, toremife-no, acetato de medroxiprogesterona , acetato de megestrol) , inhibidores de aromatasa (aminoglutetimida , letrozola/femara , anastrozola/arimidex, exemestano, aromasina, vorozola) , análogos de hormonas liberadores de gonadotropina , anti-andrógenos (flutamida, casodex) , fluoximeterona, dietilestilbestrol , octreotida, acetato de leuprolida, zoladex; agentes antiinflamatorios esteroidales y no esteroidales (dexametasona, prednisona) ; anticuerpos monoclonales incluyendo, pero no limitados a, anticuerpo anti-HER2/neu (herceptina/trastuzumab) , anticuerpo anti-EGFR (cetuximab/erbitux, ABX-EGF/panitumumab, nimotuzumab) , anticuerpo anti-CD20 (rituxan/retuximab, ibritumo-mab/Zevalin, tositumomab/Bexxar) , anticuerpo anti-CD33 (gemtuzu-mab/MyloTarg) , alemtuzumab, Campath, bevacizumab/Avastin; e inhibidores de moléculas pequeñas. Como se usan en la presente "células efectoras inmunes" incluyen células T, células NK, células B, macrófagos, y células dendríticas (DC) . Como se usa en la presente, "un péptido que apunta a tumores" incluye polímero conteniendo menos de 100 aminoácidos, donde el polímero se liga específicamente a un componente celular de una célula de tumor, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-ambiente de tumor. Como se usa en la presente, "neoplasma", incluyendo variaciones gramaticales del mismo, significa crecimiento nuevo y anormal de tejido, el cual puede ser benigno o canceroso. En un aspecto relacionado, el neoplasma es indicativo de una enfermedad o desorden neoplásico, incluyendo pero no limitado a, varios cánceres. Por ejemplo, tales cánceres pueden incluir cáncer de próstata, de páncreas, de vesícula biliar, de colon, melanoma, sarcoma, de hígado, de riñon, de pulmón, de testículos, de senos, de ovarios, de páncreas, de cerebro, de cabeza y cuello, melanoma, leucemia, linfoma, y similares. Como se usa en la presente, "sujeto", incluyendo variaciones gramaticales del mismo, significa un humano o animal vertebrado incluyendo un perro, gato, caballo, vaca, cerdo, oveja, cabra, pollo, mono, rata, y ratón. Como se usa en la presente, "conjugación", incluyendo variaciones gramaticales del mismo, significa enlazar, acoplar, ligar y similares, directamente al ADN foráneo con anticuerpos y/o péptidos específicos de objetivo, ya sea químicamente, electrostáticamente, no covalentemente , o por otras técnicas. Por ejemplo, un conjugado de anticuerpo-ácido nucleico aislado o péptido-ácido nucleico como se divulgan en la presente caerían bajo esta definición. Una "secuencia de ácido nucleico inmuno-estimulatoria" (INAS) se refiere a una molécula de ácido nucleico que es un patrón molecular asociado a patógeno (PAMP) u otro motivo que puede activar células inmunes, incluyendo, pero no limitado a ADN CpG (CpG) , ADN de virus de herpes simples (HSV) , ARN de doble cadena (ARNds) , y ARN de una sola cadena (ARNss) . En un aspecto relacionado, las INAS pueden ser una secuencia de codificación o no de codificación. Por ejemplo, un CpG puede ser SEQ ID NO : 1 , en un ejemplo ilustrativo.

En un aspecto, tal una molécula de ácido nucleico inmuno-estimulatoria es CpG (es decir, "ADN CpG" o ADN conteniendo una citosina seguida por guanosina y enlazado por un enlace de fosfato) y se liga a receptores similares a Toll (TLRs) en células efectoras inmunes (v.gr. , células T, células NK, células B, y células dendríticas (DC) ) . En un aspecto relacionado, TLRs detectan patógenos en la base de motivos denominados patrones moleculares asociados a patógeno (PAMPs) desplegados en un organismo invasor. En una forma de realización, la invención proporciona una secuencia de ácido nucleico inmuno-estimulatoria conteniendo un motivo CpG representado por la fórmula: 5 ' iXiCGXa aS ' donde por lo menos un nucleotido separa CpGs consecutivos; Xx es adenina, guanina, o timina; X2 es citosina o timina; N es cualquier nucleotido y N1 + N2 es de alrededor de 0-26 bases con la provisión de que Nx y N2 no contienen un tetrámero CCGG o mas de un trímero CCG o CGG; y la secuencia de ácido nucleico es de alrededor de 8-30 bases de longitud. donde por lo menos un nucleotido separa CpGs consecutivos; Xx X2 incluyen GpT, GpG, GpA, ApT y ApA; X3 X4 incluyen TpT o CpT; N es cualquier nucleotido y + N2 es de alrededor de 0-26 bases con la provisión de que Nx y N2 no contienen un tetrámero CCGG o mas de un trímero CCG o CGG; y la secuencia de ácido nucleio es de alrededor de 8-30 bases de longitud. En un aspecto relacionado, las secuencias de ácido nucleico inmuno-est imulatorias de la invención incluyen X1 X2 seleccionado de GpT, GpG, GpA y ApA; y X3 X4 son seleccionados de TpT, CpT y GpT. Para facilitar captación en células, CpG conteniendo moléculas de ácido nucleico inmuno-est imulatorias pueden estar en el rango de 8 a 30 bases de longitud. Sin embargo, ácidos nucleicos de cualquier tamaño (aun muchos kb de longitud) son inmunoestimulatorios si suficientes motivos inmunoestimulatorios están presentes, dado que tales ácidos nucleicos mas grandes son degradados hacia oligonucleótidos dentro de las células. En otro aspecto, oligonucleótidos sintéticos no incluyen un tetrámero CGG o mas de un trímero CCG o CGG en o cerca de las terminales 5' y/o 3' y/o el motivo CpG mitógeno de consenso no es un palíndromo. Inmunoestimulación prolongada se puede obtener usando oligonucléotidos estabilizados, donde el oligonucleótido incorpora una modificación de esqueleto de fosfato. Por ejemplo, la modificación es una modificación de fosforotioato o fosforodit ioato . Mas particularmente, la modificación de esqueleto de fosfato ocurre en el extremo 5' del ácido nucleico, por ejemplo, en los primeros dos nucleótidos del extremo 5' del ácido nucleico. Además, la modificación de esqueleto de fosfato puede ocurrir en el extremo 3' del ácido nucleico, por ejemplo, en los últimos cinco nucleótidos del extremo 3' del ácido nucleico.

En un aspecto, el ADN CpG está en el rango de entre 8 y 30 bases en tamaño cuando es un oligonucleótido . Alternativamente, dinucleótidos CpG pueden producirse en una gran escala en plásmidos, los cuales después de ser administrados a un sujeto se degradan hacia oligonucleótidos . En otro aspecto, moléculas de ácido nucleico tienen un índice de estimulación relativamente alto con respecto a respuestas de células B, monocitos y otras células asesinas naturales (v.gr., respuestas de citocina, proliferativas , líticas, u otras) . Secuencias ejemplares incluyen: 5' gsgsGGACGACGTCGTG-gsgsgsgsgsG 3' (SEQ ID NO: 1) y 5' gsgsGGGAGCATGCTGgsgsgsgsgsG 3' (SEQ ID NO: 2) . Una "molécula de ácido nucleico estabilizada" deberá significar una molécula de ácido nucleico que es relativamente resistente a degradación in vivo (v.gr., mediante una exo- o endo-nucleasa) . La estabilización puede ser una función de longitud o estructura secundaria. Moléculas de ácido nucleico conteniendo CpG no metiladas que son de cientos de kbs de longitud son relativamente resistentes a degradación in vivo. Para moléculas de ácido nucleico inmuno-estimulatorias mas cortas, la estructura secundaria puede estabilizar e incrementar su efecto. Por ejemplo, si el extremo 3' de una molécula de ácido nucleico tiene auto-complementariedad a una región corriente arriba, tal que se pueda plegar de regreso y formar un¾ estructura de tallo-espira, luego la molécula de ácido nucleico se vuelve estabilizada y por lo tanto exhibe mas actividad. En un aspecto, moléculas de ácido nucleico estabilizadas de la invención presente tienen un esqueleto modificado. Para uso en estimulación inmune, moléculas de ácido nucleico estabilizadas pueden incluir moléculas de ácido nucleico modificadas con fosforotioato (es decir, por lo menos uno de los oxígenos de fosfato de las moléculas de ácido nucleico es reemplazado por azufre) o fosforoditioato . Mas particularmente, la modificación de esqueleto de fosfato ocurre en el extremo 5 ' del ácido nucleico, por ejemplo, en los primeros dos nucleótidos del extremo 5' del ácido nucleico. Además, la modificación de esqueleto de fosfato puede ocurrir en el extremo 3 ' del ácido nucleico, por ejemplo, en los últimos cinco nucleótidos del extremo 3' del ácido nucleico. Además de estabilizar moléculas de ácido nucleico, como se reporta adicionalmente en la presente, moléculas de ácido nucleico modificadas con fosforotioato (incluyendo modificadas con fosforoditioato) pueden incrementar el grado de estimulación inmune de la molécula de ácido nucleico. Por ejemplo, moléculas de ácido nucleico conteniendo CpG no metiladas teniendo un esqueleto de fosforotioato han sido encontradas activando actividad de células B, mientra que moléculas de ácido nucleico conteniendo CpG no metiladas teniendo un esqueleto de fosfodiéster han sido encontradas activando células monocíticas (macrófagos, células dendríticas y monocitos) y NK. Oligonucleótidos de CpG fosforotioato con motivos humanos también son activadores fuertes de células monocíticas y NK. Otras moléculas de ácido nucleico estabilizadas incluyen: análogos de ADN no iónicos, tales como alquil- y aril-fosfonatos (en los cuales el oxígeno de fosfonato cargado se reemplaza por un grupo alquilo o arilo) , fosfodiéster y alquil-fosfotriésteres , en los cuales la fracción de oxígeno cargada es alquilada. Moléculas de ácido nucleico que contienen un diol, tales como tetraetilenglicol o hexaetilenogliclo, en cualquiera o ambos términos han también sido mostrados siendo sustancialmen-te resistentes a degradación de nucleasa. En un aspecto, las moléculas de ácido nucleico contienen enlaces de péptido (es decir, ácidos nucleicos de péptido: PNAs) . Para moléculas de ácido nucleico inmuno-estimulatorias (INAS) de la presente invención, las INAS pueden acoplarse con un péptido o polipéptido en un número de maneras incluyendo, pero no limitadas a, conjugación (enlace) . La porción de polinucleótido se puede acoplar con la porción de péptido o polipéptido de un conjugado involucrando interacciones covalentes y/o no covalentes. Generalmente, una INAS y péptido o polipéptido se enlazan en una manera que permite captación acrecentada o facilitada del conjugado por una célula de tumor u objetivada. El enlace entre el péptido o polipéptido e INAS puede hacerse en el extremo 3' o 5' de la INAS, o en una base modificada de manera adecuada en una posición interna en la INAS. Si el péptido o polipéptido contiene un grupo reactivo adecuado (v.gr, un N-hidroxuccinimida éster) puede hacerse reaccionar con el grupo amino N4 de residuos de citosina. Dependiendo del número y la ubicación de residuos de citosina en la INAS, acoplamiento específico en uno o mas residuos pueden lograrse. La molécula de polipéptido del conjugado puede ser una inmunoglobulina . Como se usa en la presente, el término "inmuno-globulina" incluye anticuerpos mono- o poli-valentes naturales o artificiales incluyendo, pero no limitados a, anticuerpos policlonales , monoclonales , multiespecífieos , humanos, humanízados o quiméricos, anticuerpos de una sola cadena, fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), fragmentos producidos por una biblioteca de expresión Fab, anticuerpos anti - idiotípicos (anti-Id) (incluyendo, v.gr., anticuerpos anti-Id a anticuerpos de la invención) , y fragmentos de ligadura a epítope de cualquiera de los anteriores. El término "anticuerpo", como se usa en la presente, se refiere a moléculas de inmunoglobulina y porciones' inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulina, es decir, moléculas que contienen un sitio de ligadura de antigeno que se liga inmunoes-pecificamente a un antígeno. Las moléculas de inmunoglobulina de la invención pueden ser de cualquier tipo (v.gr., IgG, IgE, Ig , IgD, IgA, e IgY) , clase (v.gr., IgGl, IgG2 , IgG3 , IgG4 , IgAl, e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina. Anticuerpos de la invención incluyen fragmentos de anticuerpo que incluyen, pero no se limitan a, Fab, Fab' y F(ab')2, Fd, Fvs de una sola cadena (scFv) , anticuerpos de una sola cadena, Fvs enlazados a disulfuro (sdFv) y fragmentos comprendiendo un dominio ya sea VL o VH . Fragmentos de anticuerpo de ligadura a antígeno, incluyendo anticuerpos de una sola cadena, pueden comprender las regiones variables solas o en combinación con la totalidad o una porción de las siguientes: región de articulación, dominios CH1, CH2 , y CH3. También incluidos en la invención están fragmentos de ligadura a antígeno también comprendiendo cualquier combinación de regiones variables con una región de articulación, dominios CH1, CH2 , y CH3. Los anticuerpos de la invención pueden ser a partir de cualquier origen animal incluyendo aves y mamíferos. En un aspecto, los anticuerpos son humanos, murinos (v.gr. , ratón y rata) , de burro, de oveja, de conejo, de cabra, de cochinillo de Indias, de camello, de caballo, o de pollo. Además, tales anticuerpos pueden ser versiones humanizadas de anticuerpos animales. Los anticuerpos de la invención pueden ser monoespecífieos , biespecífieos , triespecífieos , o de mayor multiespecificidad . Los anticuerpos de la invención se pueden generar por cualquier método adecuado conocido en la materia. Anticuerpos policlonales a un antígeno de interés pueden producirse por varios procedimientos bien conocidos en la materia. Por ejemplo, un polipéptido de la invención se puede administrar a varios animales hospederos incluyendo, pero no limitados a, conejos, ratones, ratas, etc., para inducir la producción de sueros conteniendo anticuerpos policlonales específicos para el antígeno. Varios adyuvantes pueden usarse para incrementar la respuesta inmunológica , dependiendo de la especie hospedera, e incluyen pero no se limitan a, de Freund (completo e incompleto) , geles minerales tales como hidróxido de aluminio, sustancias de superficie activa tales como lisolecitina, polioles plurónicos, polianiones, péptidos, emulsiones de aceite, hemocianinas de 1 impete de cerradura, dinitrofenol , y adyuvantes humanos potencialmente útiles tales como BCG (bacilo Calmette-Guerin) , y Corynebacterium parvum. Tales adyuvantes son también bien conocidos en la materia. Además, anticuerpos y proteínas de ligadura similares a anticuerpo pueden hacerse por despliegue de fagos . Anticuerpos monoclonales se pueden preparar usando una amplia variedad de técnicas conocidas en la materia incluyendo el uso de tecnologías de hibridoma, recombinantes , y de despliegue de fagos, o una combinación de los mismos. Por ejemplo, anticuerpos monoclonales se pueden producir usando técnicas de hibridoma incluyendo aquellas conocidas en la materia y enseñadas, por ejemplo, en Harlow y colaboradores, Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2da . edición, 1988) ; Hammerling y colaboradores en: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N. Y., 1981) . El término "anticuerpo monoclonal" como se usa en la presente no se limita a anticuerpos producidos a través de tecnología de hibridoma. El término "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo que se deriva de un solo clon, incluyendo cualquier clon eucarióntico , procarióntico, o de fago, y no al método por el cual se produce. En una forma de realización, un conjugado de anticuerpo-ácido nucleico se divulga incluyendo un anticuerpo que se liga de manera específica a un componente celular de una célula de tumor, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-ambiente de tumor. Un micro-ambiente de tumor puede contener células epiteliales, membrana de sótano, fibroblastos, células estromales, y/o miofibroblastos , los cuales rodean al tumor. En un aspecto relacionado adicional, tales células que rodean al tumor pueden expresar CLIC4 funcional. Además, el conjugado tiene una afinidad de ligadura de por lo menos 1 nM a 20 nM, incluyendo que tal conjugado dispara hiperfusión celular entre células de tumor in vitro subsecuente a ligadura del componente celular de las células de tumor. En otro aspecto, los componentes celulares incluyen, pero no se limitan a, receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR, ErbB-1, HERI), ErbB-2 (HER2 /neu) , ErbB- 3 /HER3 , ErbB-4/HER4, familia de ligandos EGFR; familia del receptor de factor de crecimiento similar a insulina (IGFR) , proteínas de ligadura a IGF (IGFBPs) , familia de ligandos IGFR; familia del receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) , familia de ligandos PDGFR; familia del receptor de factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR) , familia de ligandos FGFR, familia del receptor de factor de crecimiento vascular endotelila (VEGFR) , familia VEGF; familia del receptor de HGF; familia del receptor de TRK; familia del receptor de efrina (EPH) ; familia del receptor de AXL; familia del receptor de leucocito tirosina quinasa (LTK) ; familia del receptor de TIE, angiopoyetina 1,2; familia del receptor de huérfano similar al receptor de tirosina quinasa (ROR) ; familia del receptor de dominio de discoidina (DDR) ; familia del receptor de RET; familia del receptor de KLG; familia del receptor de RYK; familia del receptor de MuSK; receptores de factor de crecimiento transformante ß (TGF-ß); receptores de citocina, receptores Clase I (familia de hematopo-yetina) y Clase II (familia de interferón/lL- 10 ) , superfamilia de receptor de factor de necrosis tumoral (TNF) (TNFRSF) , familia del receptor de muerte; antígenos de testes cancerosas (CT) , antígenos específicos de linaje, antígenos de diferenciación, alfa-actinina-4 , ARTC1, productos de fusión de región de racimo de punto de quiebre Abelson (Bcr-abl) , B-RAF, caspasa-5 (CASP-5) , caspasa-8 (CASP-8) , ß-catenina (CT B1) , ciclo de división celular 27 (CDC27) , quinasa 4 dependiente de ciclina (CDK4) , CDK 2A, COA-1, proteína de fusión dek-can, EFTUD-2 , factor de elongación 2 (ELF2), proteína de fusión de gene 6 de variante Ets/ETS gene de leucemia mieloide aguda 1 (ETC6-AML1) , fibronec-tina (FN) , GPNMB, proteína de fusión de receptor de lípidos de baja densidad /GDP-L fucosa: ß-D-galactoasa 2 - -L- fucosiltransfe-rasa (LDLR/FUT) , HLA-A2 , intercambio de arginina a isoleucina en el residuo 170 de la hélice a del dominio a2 en el gene HLA-A2 (HLA-A*201-R170I) , HLA-A11 , proteína 70-2 de impacto de calor mutada (HSP70-2M) , KIAA0205, MART2 , melanoma ubicuo mutado 1, 2, 3 (MUM-1, 2, 3), fosfatasa de ácido prostático (PAP) , neo-PAP, Miosina clase I, NFYC, OGT, OS-9, proteína de fusión pml-RARalfa, PRDX5 , PTPRK, K-ras (KRAS2), N-ras (NRAS) , HRAS , RBAF600 , SIRT2 , SNRPD1, proteína de fusión SYT-SSX1 o SSX2 , Triosefosfato Isomerasas, BAGE, BAGE-1, BAGE-2, 3, 4, 5, GAGE-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, GnT-V (N-actil glucosaminil transferasa V aberrante, MGAT5 ) , HERV-K-MEL, KK-LC, K -HN- 1 , LAGE, LAGE-1, antígeno reconocido por CTL en melanoma (CAMEL) , MAGE-Al (MAGE- 1 ) , MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6, MAGE-A8 , MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-All, MAGE-Al2 , MAGE-3, MAGE-Bl, MAGE-B2, MAGE-B5, MAGE-B6, MAGE-C1, MAGE-C2, mucina 1 (MUC1), MART- l/Melan-A (MLA A) , gplOO, gpl00/Pmell7 (SILV) , tirosinasa (TYR) , TRP-1, HAGE, NA-88, NY-ESO-1, NY-ESO-l/LAGE-2, SAGE, Spl7, SSX-1, 2, 3, 4, TRP2 - INT2 , antígeno carcino-embriónico (CEA), Kallikreína 4, mamaglobina-A, OA1, antígeno específico de próstata (PSA) , TRP-l/gp75, TRP-2, adipofilina, proteína inducible por interferón ausente en melanoma 2 (AIM-2), BING-4, CPSF, ciclina DI, molécula de adhesión a células epiteliales (Ep-CAM) , EphA3 , factor-5 de crecimiento de fibroblastos (FGF-5) , glicoproteína 250 (gp250) , EGFR (ERBB1) , HER-2/neu (ERBB2) , cadena a2 del receptor de interleucina 13 (IL13Ralfa2) , receptor de IL-6, carboxil esterasa intestinal (iCE) , alfa-feto proteína (AFP) , M-CSF, mdm-2, MUC1, p53 (TP53) , PBF, PRAME, PSMA, RAGE-1, RNF43, RU2AS , SOX10, STEAP1, survivina (BIRC5) , telomerasa transcriptasa inversa humana (hTERT) , telomerasa, gene de tumor de Wilms' ( T1) , SYCP1 , BRDT , SPANX, XAGE , ADAM2 , PAGE-5, LIP1, CTAGE-1, CSAGE , MMA1 , CAGE, BORIS, HOM-TES-85, AF15ql4, HCA661, LDHC, MORC, SGY-1, SPOll, TPX1, NY-SAR-35, FTHL17 , NXF2 , TDRD1 , TEX15 , FATE, TPTE , idiotipos de inmunoglobulina , proteína de Bence-Jones, receptores de estrógeno (ER) , receptores de andrógeno (AR) , CD40, CD30, CD20, CD19, CD33, antígeno de cáncer 72-4 (CA 72-4), antígeno de cáncer 15-3 (CA 15-3) , antígeno de cáncer 27-29 (CA 27-29) , antígeno de cáncer 125 (CA 125) , antígeno de cáncer 19-9 (CA 19-9), gonadotropina coriónica humana ß, antígeno de carcinoma de células escuamosas, enolasa específica de neuronas, proteína de impacto de calor gp96, GM2 , sargramostima , CTLA-4, alanina prolina 707 (707-AP) , antígeno de adenocarcinoma reconocido por células T 4 (ART-4) , péptido 1 de antígeno carciembriogénico (CAP-1), canal de cloruro 2 activado por calcio (CLCA2), ciclofilina B (Cyp-B) , tumor 2 de aro de sígnete humano (HST-2) , proteínas de virus de papiloma humano (HPV) (HPV-E6, HPV-E7, antígenos de cápside mayores o menores, otros), proteínas de virus de Epstein-Barr (EBV) (proteínas de membrana latentes EBV -LMP1, LMP2 ; otras), proteínas de virus de Hepatitis B o C, y proteínas de VIH. En una forma de realización, conjugados comprenden péptidos que incluyen, pero no se limitan a, péptidos que se ligan a un componente celular de una célula de tumor, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-ambiente de tumor. Conjugados pueden comprender péptidos derivados de despliegue de fagos u otras fuentes, incluyendo, pero no limitadas a, integrina a?ß? (CRRETAWAC (SEQ IDN0:5)), integrina a?ß3 (CDCRGDCFC (SEQ ID NO: 6) /RGD-4C; RGDWXE (SEQ ID 0:7)), integrina a?ß5 (TRGDTF (SEQ ID N0:8)), a?ß6 (RGDLxxL (SEQ ID N0:9) o xxDLxxL (SEQ ID NO: 10)), a??ß3 (SRGDM (SEQ ID NO: 11)), mímico de anexina V para ?ß5 (WISYSMPD (SEQ ID NO: 12)), E-selectina (IELLQAR (SEQ ID NO: 13)), mitocondria celular endotelial (CNGRC-GG- (KLAKLAK) 2 (SEQ ID NO: 14)), Efrina-A2 y Efrina-A4 (CVSNPR KC (SEQ ID NO: 15), CHVLWSTRC (SEQ ID NO: 16)), Fibronectina (CWDDGWLC (SEQ ID NO: 17)), ICAM-I o factor de von Willebrand factor (CPCFLLGCC (SEQ ID NO: 18)/LLG-4C), lamina- 1 (DFKLFAVY (SEQ ID NO: 19)), P-selectina (EWVDV (SEQ ID NO:20)), complejo MMP- 9 : integrina (D/E) (D/E) (G/L) (SEQ ID NO:21), MMP-9 y MMP-2 (gelatinasas) (CTTHWGFTLC (SEQ ID NO:22)) , cadherina Tipo I en endotelio (N-Ac-CHA VC-NH2) , región Flt-Ide VEGF NxxEIExYxxWxxxxxY (SEQ ID NO:23), región KDR de VEGF (HTMYYHHYQHHL (SEQ ID NO:24), AT LPPR (SEQ ID NO:25)), receptor de VEGF (WHSDMEWWYLLG (SEQ ID NO:26), RRKRRR (SEQ ID NO:27), Aminopeptidasa N/CD13 (NGR) , NG2 proteoglicano (TAASGVRSMH (SEQ ID NO:28), LTLRWVGLMS (SEQ ID NO:29)), péptido derivado de glándula adrenal (LMLPRAD (SEQ ID NO:30)), péptido derivado de tejido adiposo (CKGGRAKDC SEQ ID NO: 31) ) , péptido derivado del cerebro (SR1) , péptido derivado de endotelio cerebral (CLSSRLDAC (SEQ ID NO:32)), péptido derivado de célula de glioma (VGLPEHTQ (SEQ ID NO-.33)), péptido derivado de neuroblastoma (VPWMEPAYQRFL (SEQ ID NO:34)), péptido derivado de médula de hueso (GGG, GFS , LWS) , péptido derivado de cáncer de seno (HER2/neu) (LTVxPWx (SEQ ID NO:35), LTVxPWY (SEQ ID NO:36), mimótope HER2 Ab/Trastuzumab - LLGPYELWELSH (SEQ ID NO:37)), péptido derivado de colon (RPMC (SEQ ID NO: 38) ) , péptido derivado de intestino (YSGKWGW (SEQ ID NO: 39)), péptido derivado de cáncer de células escuamosas de cabeza y cuello (TSPLNIHNGQKL (SEQ ID NO:40)), péptido derivado de vasculatura pulmonar (CGFELETC (SEQ ID N0:41)), péptido derivado de endotelio de arterias coronarias (NSVRDL(G/S) (SEQ ID NO : 42 ) , NSVSSx(S/A) (SEQ ID NO:43)), péptido derivado de vasos linfáticos (CGNKRTRGC (SEQ ID NO:44)/ Lyp-1), péptido derivado de órganos múltiples (GVL, EGRx (SEQ ID N0:45), xFG(G/V) (SEQ ID NO:46))( péptido derivado de islotes pancreáticos (CVSSNPRWKC (SEQ ID NO:47), CHVL STRC (SEQ ID NO:48)), péptido derivado de páncreas (SWCEPGWCR (SEQ ID NO:49)), péptido derivado de próstata (AGG, DPRATPGS (SEQ ID NO:50), SMSIARL (SEQ ID N0:51), CGRRAGGSC (SEQ ID NO:52), GVL), péptido derivado de retina (RDV, CSCFRDVCC (SEQ ID NO:53)), péptido derivado de ligando de teratógeno (TPKTSVT (SEQ ID NO:54)), y péptido derivado del útero (GLSGGRS (SEQ ID NO: 55)) . En un aspecto, un péptido a?ß3 puede tener las características de secuencia de ya sea el ligando natural de a?ß3 o el propio a?ß3 en la región involucrada en la interacción de ligando a?ß3. En un aspecto, un péptido a?ß3 contiene un tripéptido RGD y corresponde en secuencia al ligando natural en la región conteniendo RGD. En un aspecto, péptidos conteniendo RGD tienen una secuencia que corresponde a la secuencia de residuos de aminoáci-do de la región conteniendo RGD de un ligando natural de a?ß3 tal como fibrinógeno, vitronectina , factor de von Willebrand, laminina, trombospondina , y ligandos similares. La secuencia de estos ligandos a?ß3 es bien conocida. Así, un péptido ?ß3 puede derivarse de cualquiera de los ligandos naturales. En otro aspecto, un péptido ?ß3 de preferencia inhibe ligadura de a?ß3 a sus ligandos naturales cuando se compara con otras integrinas . La identificación de péptidos a?ß3 teniendo selectividad para a?ß3 puede identificarse rápidamente en una inhibición típica de ensayo de ligadura, tal como el ensayo ELISA. Un péptido de la presente invención típicamente comprende no mas de alrededor de 100 residuos de aminoácidos, de preferencia no mas de alrededor de 60 residuos, mas preferentemente no mas de alrededor de 30 residuos. Péptidos de la invención pueden ser lineales o cíclicos. Deberá entenderse que un péptido sujeto no necesita ser idéntico a la secuencia de residuos de aminoácidos de un ligando ?ß3 natural. Secuencias ejemplares incluyen: CDCRGDCFC (SEQ ID NO: 3) y GGCDGRCG (SEQ ID NO : 4 ) . Un péptido de la invención incluye cualquier análogo, fragmento o derivado químico de un péptido cuya secuencia de residuos de aminoácidos se muestra en la presente. Por lo tanto, un péptido presente puede someterse a varios cambios, sustituciones, inserciones, y supresiones donde tales cambios proporcionan para ciertas ventajas en su uso. En este respecto, un péptido a?ß3 de esta invención corresponde a, en lugar de ser idéntico a, la secuencia de un péptido recitado donde uno o mas cambios se hacen y retiene la habilidad para funcionar como un péptido a?ß3 en uno o mas ensayos. El término "análogo" incluye cualquier péptido teniendo una secuencia de residuos de aminoácidos sustancialmente idéntica a una secuencia específicamente mostrada en la presente en la cual uno o mas residuos han sido sustituidos de manera conserva-dora con un residuo funcionalmente similar y que despliegan la actividad de a?ß3 como se describe en la presente. Ejemplos de sustituciones conservadoras incluyen la sustitución de un residuo no polar (hidrófobo) tal como isoleucina, valina, leucina o metionina por otro, la sustitución de un residuo polar (hidrófilo) por otro tal como entre arginina y lisina, entre glutamina y asparagina, entre glicina y serina, la sustitución de un residuo básico tal como lisina, arginina o histidina por otro, o la sustitución de un residuo ácido, tal como ácido aspártico o ácido glutámico por otro. El término "fragmento" se refiere a cualquier polipép-tido sujeto teniendo una secuencia de residuos de aminoácidos mas corta que aquella de un polipeptido cuya secuencia de residuos de aminoácidos se divulga en la presente. Un péptido de la presente invención se puede sintetizar por cualquiera de las técnicas que son conocidas a los técnicos en la materia de polipéptidos , incluyendo técnicas de ADN recombinante . Técnicas químicas sintéticas, tales como una síntesis de tipo Merrifield de fase sólida, se prefieren por razones de purezas, especificidad de antígeno, libertad de productos secundarios no deseados, facilidad de producción y similares. Un resumen excelente de las muchas técnicas disponibles se puede encontrar en Steward y colaboradores, "Solid Phase Peptide Synthesis" , W. H. Freeman Co . , San Francisco, 1969; Bodanszky y colaboradores, "Peptide Synthesis", John iley & Sons, segunda edición, 1976; J. Meienhofer, "Hormonal Proteins and Peptides" , Vol . 2, p.46, Academic Press (New York), 1983; Merrifield, Adv. Enzymol . , 32:221-96, 1969; Fields y colaboradores, Int. J. Peptide Protein Res. , 35:161-214, 1990; y la patente US 4,244,946 para síntesis de péptidos en fase sólida, y Schroder y colaboradores, "The Peptides", Vol. 1 , Academic Press (New York) , 1965 para síntesis en solución clásica. Grupos protectores apropiados útiles en tales síntesis se describen en los textos anteriores y en J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry" , Plenum Press, New York, 1973. Los métodos de la presente invención pueden emplearse de manera general para enlazar una INAS a una variedad de polímeros de aminoácido, incluyendo péptidos y anticuerpos. Tales métodos incluyen, pero no se limitan a, activación de una fracción de ácido carboxílico en un péptido o anticuerpo por la adición de un agente activador. Agentes activadores incluyen HATU (hexafluorofosfato de O- (7-azabenzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio) ; HBTU (hexa-fluorofosfato de 0- (benzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio) ; TBTU (hexafluorofosfato de 2 - ( ??-benzotriazo- lil ) - 1 , 1 , 3 , 3 -tetrametiluronio); TFFH (2-fluoro-hexafluorofosfato de N, N' , " , " ' -tetrametiluronio) ; BOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris (dimetilamino) fosfonio) ; PyBOP (hexafluo-rofosfato de benzotriazol-l-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio) ; EEDQ (2-etoxi-l-etoxicarbonil-l, 2 -dihidroquinolina) ; DCC (diciclohexilcarbodiimida) ; DIPCDI (diisopropilcarbodiimida) ; HOBt ( 1 -hidroxibenzotriazola) ; N-hidroxisuccinimida ; MSNT (1- (mesitileno-2-sulfonil) -3-nitro-lH-l , 2 , 4-triazola) ; haluros de aril sulfonilo, v.gr. , cloruro de triisopropilbencenosulfonilo . En un aspecto, agentes activadores son hidrocloruro de l-etil-3- (3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) y/o l-ciclohexil-3- (2-morfolinoetil ) carbodiimida (CDC) . La fracción de ácido carboxílico activado como se describe anteriormente reacciona con la fracción nucleófila en la INAS, bajo condiciones conocidas a los técnicos en la materia como suficientes para promover la reacción de la fracción de ácido carboxílico activado con la fracción nucleófila. Bajo condiciones apropiadas, un pH relativamente bajo se mantiene, es decir, un pH menor que alrededor de 6.5. Bajo métodos tradicionales (es decir, a niveles de pH mas altos) se cree que el ácido carboxílico activado y/o el agente activador se hidrolizan rápidamente, reduciendo la eficiencia de la reacción de conjugación . Los métodos de la presente invención se pueden usar para preparar una variedad de conjugados. En un aspecto, conjugados de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, conjugados ADN-anticuerpo, conjugados ADN-péptido, conjugados ARN-anticuerpo , y conjugados ARN-péptido. Siguiendo a la reacción de conjugación, el conjugado puede aislarse por una variedad de métodos familiares a los técnicos en la materia. Por ejemplo, la mezcla de reacción se puede aplicar a un sistema de cromatografía en columna y separarse por exclusión de tamaño. En una forma de realización, un método para identificar un conjugado de la presente invención el cual induce señalización dependiente de muerte celular, maduración celular, y/o ligando NKG2D se divulga incluyendo poner en contacto una o mas células in vi tro con un conjugado de prueba conteniendo un anticuerpo que se liga de manera específica a un componente celular de una célula de tumor, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-ambiente de tumor o un péptido derivado de integrina conteniendo un motivo RGD o un motivo CDGRC, donde el anticuerpo o péptido se conjuga a un ácido nucleico comprendiendo una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias , y donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden un patrón molecular asociado a patógeno (PA P) y determinan inducción de un marcador o un cambio fenotípico en una o mas células en la presencia o ausencia de células inmunes, donde la inducción determinada o cambio en la presencia de un conjugado de ácido nucleico de prueba en una o mas células es indicativa de señalización de muerte celular, maduración celular, y/o señalización dependiente de ligando NKG2D. La inducción de marcadores expresados puede lograrse por selección celular. Además, células se obtienen a partir de la médula de hueso de un animal no fetal, incluyendo, pero no limitadas a, células humanas. Células fetales también se pueden usar . La selección celular puede ser por cualquier método conocido en la materia para seleccionar células, incluyendo seleccionar mediante selección de células activadas fluorescentes (FACS) y selección de células de perlas magnéticas (MACS) . Para seleccionar células por MACS, se marbetan células con perlas magnéticas y se pasan las células a través de una columna de separación paramagnética . La columna de separación se coloca en un imán permanente fuerte, con ello creando un campo magnético dentro de la columna. Las células que son marbetadas de manera magnética son atrapadas en la columna; las células que no pasan a su través. Entonces se extraen las células atrapadas de la columna . La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden por lo menos un compuesto capaz de tratar un desorden en una cantidad efectiva para ello, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Las composiciones de la presente invención pueden contener otros agentes terapéuticos como se describe, y pueden formularse, por ejemplo, mediante emplear vehículos o diluyentes sólidos o líquidos convencionales, así como aditivos farmacéuticos de un tipo apropiado al modo de administración deseado (por ejemplo, excipientes, aglutinantes, conservadores, estabilizantes, sabores, etc.) de acuerdo con técnicas tales como aquellas bien conocidas en la materia de formulación farmacéutica. Composiciones farmacéuticas empleadas como un componente de la invención, artículos de manufactura se pueden usar en la forma de un sólido, una solución, una emulsión, una dispersión, una micela, un liposoma, y similares, donde la composición resultante contiene uno o mas de los compuestos descritos anteriormente como un ingrediente activo, en mezcla con un vehículo o excipiente orgánico o inorgánico adecuado para aplicaciones entéricas o parentéricas . Compuestos empleados para uso como un componente de la invención, artículos de manufactura se pueden combinar, por ejemplo, con los vehículos farmacéuticamente aceptables no tóxicos usuales para tabletas, pelotillas, cápsulas, supositorios, soluciones, emulsiones, suspensiones, y cualquier otra forma adecuada para uso. Los vehículos que se pueden usar incluyen glucosa, lactosa, goma acacia, gelatina, manitol, pasta de almidón, trisilicato de magnesio, talco, almidón de maíz, queratina, sílice coloidal, papa, almidón, urea, triglicéridos de longitud de cadena media, dextranos, y otros vehículos adecuados para uso en fabricar preparaciones, en forma sólida, semisólida, o líquida. Además agentes auxiliares, estabilizantes, espesantes y colorantes y perfumes se pueden usar . Composiciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar por cualquier medio adecuado, por ejemplo, oralmente, tal como en la forma de tabletas, cápsulas, gránulos o polvos; sublingualmente ; bucalmente; parentéricamente , tal como por técnicas de inyección o infusión subcutáneas, intradérmicas , intravenosas, intramusculares, o intracisternales (v.gr., como soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas inyectables estériles) ; nasalmente tal como por rocío de inhalación; tópicamente, tal como en la forma de una crema o ungüento; o rectalmente tal como en la forma de supositorios; en formulaciones de dosis unitaria conteniendo vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables, no tóxicos. Los presentes compuestos pueden, por ejemplo, administrarse en una forma adecuada para liberación inmediata o liberación extendida. Liberación inmediata o liberación extendida se puede lograr por el uso de composicio-nes farmacéuticas adecuadas comprendiendo los presentes compuestos, o, particularmente en el caso de liberación extendida, por el uso de dispositivos tales como implantes subcutáneos o -bombas osmóticas. Los presentes conjugados también se pueden administrar de manera liposomal. En un aspecto, la composición se puede administrar sistemáticamente, intratumoralmente , o peritumoral-mente . Además de primates, tales como humanos, una variedad de otros mamíferos pueden ser tratados de acuerdo con el método de la presente invención. Por ejemplo, mamíferos incluyendo, pero no limitados a, vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, cochinillos de Indias, ratas u otras especies bovinas, ovinas, equinas, caninas, felinas, de roedores o murinas se pueden tratar. Sin embargo, el método también se puede practicar en otras especies, tales como especies de aves (v.gr., pollos) . Los sujetos tratados en los métodos anteriores, en los cuales células objetivadas para modulación se desean, incluyendo, pero no limitados a, vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, cochinillos de Indias, ratas u otras especies bovinas, ovinas, equinas, caninas, felinas, de roedores o murinas, y de preferencia un humano siendo, macho o hembra. El término "cantidad terapéuticamente efectiva" significa la cantidad del compuesto sujeto que producirá la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o humano que está siendo buscada por el investigador, veterinario, doctor médico u otro clínico. El término "composición" como se usa en la presente tiene la intención de abarcar un producto que comprende los ingredientes específicos en las cantidades específicas, así como cualquier producto que resulta, directamente o indirectamente, de combinación de los ingredientes específicos en las cantidades específicas. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que el vehículo, diluyente o excipiente debe ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial al recipiente de la misma. Los términos "administración de" y/o "administrar un" compuesto deberán entenderse significando proporcionar un compuesto de la invención al individuo en necesidad de tratamiento . Las composiciones farmacéuticas para la administración de los compuestos de esta invención puede presentarse de manera conveniente en forma de dosis unitaria y pueden prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en la materia de farmacia. Todos los métodos incluyen el paso de llevar el ingrediente activo hacia asociación con el vehículo que constituye uno o mas ingredientes accesorios. En general, las composiciones farmacéuticas se preparan mediante llevar de manera uniforme y de manera íntima al ingrediente activo hacia asociación con un vehículo líquido o un vehículo sólido finamente dividido o ambos, y luego, si es necesario, configurar al producto hacia la formulación deseada. En la composición farmacéutica el compuesto objetivo activo se incluye en una cantidad suficiente para producir el efecto deseado sobre el proceso o condición de enfermedades . Las composiciones farmacéuticas conteniendo al ingrediente activo pueden estar en una forma adecuada para uso oral, por ejemplo, como tabletas, tronches, pastillas, suspensiones acuosas o aceitosas, polvos o gránulos dispersables , emulsiones, cápsulas duras o suaves, o siropes o elíxires. Composiciones pretendidas para uso oral se pueden preparar de acuerdo con cualquier método conocido en la materia para la fabricación de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener uno o mas agentes seleccionados a partir del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes saborizantes , agentes colorantes y agentes conservadores para proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y paladeables. Tabletas contienen al ingrediente activo en mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos los cuales son adecuados para la manufactura de tabletas. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes granulantes y desintegrantes, por ejemplo, almidón de maíz, o ácido algínico; agentes de ligadura, por ejemplo, almidón, gelatina o acacia, y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden ser no recubiertas o pueden ser recubiertas por técnicas conocidas para retrasar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal y con ello proporcionar una acción sostenida sobre un periodo mas largo. Por ejemplo, un material de retraso de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo se puede emplear. También pueden recubrirse para formar tabletas terapéuticas osmóticas para liberación de control. Formulaciones para uso oral pueden presentarse también como cápsulas de gelatina dura donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina suaves donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio de aceite, por ejemplo, aceite de maní, parafina líquida, o aceite de oliva. Suspensiones acuosas contienen a los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la manufactura de suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa , hidroxi-propilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinil-pirrolidona, goma de tragacanto y goma de acacia; agentes de dispersión o humedecimiento pueden ser una fosfatida de ocurrencia natural, por ejemplo, lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo, poli (estearato de oxietileno) , o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenooxicetanol , o productos de condensación de óxido de etileno con ásteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como poli (monooleato de oxietileno sorbitol), o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo poli (monooleato de etileno sorbitano) . Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o mas conservadores, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o mas agentes colorantes, uno mas agentes saborizantes , y uno o mas agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina. Suspensiones acuosas pueden formularse mediante suspender al ingrediente activo en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de maní, aceite de oliva, aceite de ajonjolí o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones aceitosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Agentes edulcorantes tales como aquellos mencionados anteriormente, y agentes saborizantes pueden añadirse para proporcionar una preparación oral paladeable. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico . Polvos y gránulos dispersables adecuados para preparación de una suspensión acuosa por la adición de agua proporcionan al ingrediente activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o mas conservadores. Agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados son ejemplificados por aquellos ya mencionados anteriormente. Excipientes adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes, también pueden estar presentes . Siropes y elíxires se pueden formular con agentes edulcorantes, por ejemplo glicerol, propileno glicol, sorbitol o sacarosa. Tales formulaciones también pueden contener un ablandador, un conservador y agentes saborizantes y colorantes. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril . Esta suspensión se puede formular de acuerdo con el estado de la técnica usando aquellos agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados los cuales han sido mencionados anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente aceptable de manera parentérica no tóxico, por ejemplo como una solución en 1,3 -butano diol . Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden emplear están agua, solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónica. Además, aceites estériles, fijos, son empleados convencionalmente como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito cualquier aceite fijo blando puede emplearse incluyendo mono- o di-glicéridos sintéticos. Además, ácidos grasos tales como ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables. Los compuestos de la presente invención también pueden ser administrados en la forma de supositorios para administración rectal del fármaco. Estas composiciones se pueden preparar mediante mezclar al fármaco con un excipiente no irritante adecuado el cual es sólido a temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura rectal y por lo tanto se derretirá en el recto para liberar al fármaco. Tales materiales son mantequilla de cacao y polietileno glicoles. Para uso tópico, cremas, ungüentos, jaleas, soluciones o suspensiones, etc., conteniendo a los compuestos de la presente invención se emplean. (Para propósitos de esta solicitud, aplicación tópica deberá incluir lavados bucales y gárgaras) . En el tratamiento de un sujeto donde células son objetivadas para modulación, un nivel de dosis apropiado generalmente será de alrededor de 0.01 a 500 mg por kg de peso corporal de paciente por día el cual puede administrarse en una sola o múltiples dosis. De preferencia, el nivel de dosis será de alrededor de 0.1 a alrededor de 250 mg/kg por día; mas preferentemente alrededor de 0.5 a alrededor de 100 mg/kg por día. Un nivel de dosis adecuado puede ser de alrededor de 0.01 a 250 mg/kg por día, alrededor de 0.05 a 100 mg/kg por día, o alrededor de 0.1 a 50 mg/kg por día. Dentro de este rango la dosis puede ser 0.05 a 0.5, 0.5 a 5 o 5 a 50 mg/kg por día. Para administración oral, las composiciones son provistas preferentemente en la forma de tabletas conteniendo 1.0 a 1,000 miligramos del ingrediente activo, particularmente. 1.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 25.0, 50.0, 75.0, 100.0, 150.0, 200.0, 250.0, 300.0, 400.0, 500.0, 600.0, 750.0, 800.0, 900.0, y 1,000.0 miligramos del ingrediente activo para el ajuste sintomático de la dosis al paciente a ser tratado. Los compuestos pueden administrarse en un régimen de 1 a 4 veces por día, de preferencia una vez o dos veces por día. Se entenderá, sin embargo, que el nivel de dosis específico y la frecuencia de dosis para cualquier paciente particular puede variarse y dependerá de la variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabolica y longitud de acción de ese compuesto, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, modo y tiempo de administración, tasa de excreción, combinación de fármacos, la severidad de la condición particular, y el hospedero sometido a terapia . En una forma de realización, una alícuota de sangre se extrae a partir de un sujeto mamífero, de preferencia un humano, y la alícuota de sangre es tratada ex vivo con el conjugado de la presente invención. El efecto del conjugado es modular la actividad de células efectoras inmunes en la sangre que se contiene en la alícuota. La alícuota modificada es entonces re-introducida dentro del cuerpo del sujeto por cualquier ruta adecuada para vacunación.

En un aspecto, un método se divulga incluyendo remover células inmunes de un sujeto, poner en contacto las células con el conjugado ex vivo, y re-introducir las células dentro del suj eto . En un aspecto, el volumen de la alícuota es hasta alrededor de 400 mi, de alrededor de 0.1 a alrededor de 100 mi, de alrededor de 5 a alrededor de 15 mi, de alrededor de 8 a alrededor de 12 mi, o alrededor de 10 mi, junto con un anti-coagulante (v.gr. , 2 mi de citrato de sodio) . En un aspecto, el sujeto es sometido a un curso de tratamientos, tales tratamientos individuales comprendiendo remoción de una alícuota de sangre, tratamiento de la misma como se describe anteriormente y re-administración de la alícuota tratada al sujeto. Un curso de tales tratamientos puede comprender administración diaria de alícuotas de sangre tratadas por un número de días consecutivos, o puede comprender un primer curso de tratamientos diarios por un periodo de tiempo designado, seguido por un intervalo y luego uno o mas cursos adicionales de tratamientos diarios. En un aspecto relacionado, el sujeto es dado un curso inicial de tratamientos comprendiendo la administración de 4 a 6 alícuotas de sangre tratada. En otra forma de realización preferida, el sujeto es dado un curso inicial de terapia comprendiendo la administración de 2 a 4 alícuotas de sangre tratada, con la administración de cualquier par de alícuotas consecutivas estando ya sean en días consecutivos, o estando separadas por un periodo de descanso de 1 a 21 días en el cual no se administran alícuotas al paciente, el periodo de descanso separando un par seleccionado de alícuotas consecutivas siendo de alrededor de 3 a 15 días. En otro aspecto relacionado, el régimen de dosis del curso inicial de tratamientos comprende un total de tres alícuotas, con las primera y segunda alícuotas siendo administradas en días consecutivos y un periodo de descanso de 11 días siendo provisto entre la administración de las segunda y tercera alícuotas. En un aspecto relacionado adicional, cursos adicionales de tratamiento siguen a los cursos iniciales de tratamiento. Por ejemplo, cursos subsecuentes de tratamientos se administran por lo menos alrededor de tres semanas después del fin del curso inicial de tratamientos. En un aspecto, el sujeto recibe un segundo curso de tratamiento comprendiendo la administración de una alícuota de sangre tratada cada 30 días siguientes al fin del curso inicial de tratamientos, por un periodo de 6 meses. Se apreciará que la separación entre cursos sucesivos de tratamientos deberá ser tal que los efectos positivos del tratamiento de la invención se mantengan, y puede determinarse en la base de la respuesta observada de sujetos individuales. Los siguientes ejemplos se pretenden para ilustrar pero no limitar la invención. Ejemplos Ejemplo 1: Generación de Anticuerpos o Péptidos Conjugados Anticuerpo anti-EGFR humano, anticuerpo anti-HER2 humano, y anticuerpo anti-neu de rata -ADN CpG [Oligodesoxinucleótidos CpG (ODN) ] -A ODN CpG, 21.92 µ?; C ODN CpG, 18.34 µ? -A ODN CpG: Secuencia: 5 ' gsgsGGACGACGTCGTGgsgsgsgsgsG 3' (Fosfato) (SEQ ID NO: 1) Tipo = ADN-PS; Tamaño = 21 ; Epsilon 1/ (mMcm) = 208; MW (g/mole) = 6842 -C ODN CpG: Secuencia: 5 ' gsgsGGGAGCATGCTGgsgsgsgsgsG 3 ' (Fosfato) (SEQ ID NO: 2) Tipo = ADN-PS; Tamaño = 20; Epsilon 1/ (mMcm) = 197.6; MW (g/mole) = 6553 -Secuencias de péptido que objetivan a tumores: -CDCRGDCFC (péptido RGD-4C) (SEQ ID NO: 3); GGCDGRCG (SEQ ID NO: 4) (péptido CDGRC, SEQ ID NO: 5) 500 µ? de solución de anticuerpo péptido se transfirieron a tubos Eppendorf , a los cuales 540 µ? de imidazola 0.1 M se añadieron (es decir, imidazola 3 M diluida en PBS a 0.1 M) . 5 mg de hidrocloruro de 1 -etil -3 - [3 -dimetilaminopropil] carbodiimida (EDC) se mezclaron con ADN CpG (ODN) en un tubo separado, y se mezclaron inmediatamente con ya sea solución de anticuerpo imidazola o péptido imidazola (relación molar Ab:ODN = 1:30.6) . Los tubos se sometieron a vórtice hasta que los contenidos se disolvieron, y la solución se centrifugó brevemente. Unos 250 µ? adicionales de imidazola 0.1 M se añadieron subsecuentemente a centrifugaciones, y la solución resultante se incubaron a 50°C, por 2 horas. El EDC no reaccionado, sus sub-productos , e imidazola se removieron por filtración CENTRICON (Millipore Corporation, Billerica, assachusetts , Estados Unidos) . Las muestras se ensayaron entonces por geles SDS-PAGE y espectrometría de masas para determinar conjugación del nucleótido con el anticuerpo y/o péptido. Un ensayo de proteínas se llevó a cabo para cuantificar concentración de anticuerpo o péptido. SDS-PAGE/inmunoblot demostraron que los anticuerpos monoclonales conjugados con ADN fueron de hecho generados (figura 4) . Ejemplo 2: Inhibición de Actividad EGFR por Anticuerpo Anti-EGFR conjugado con ADN CpG Células de carcinoma de colon HT-29 se cultivaron en 0.5% de suero bovino fetal en presencia de ya sea anticuerpo anti-EGFR o anticuerpo anti-EGFR conjugado con CpG (Anti-EGFR Ab-CpG) y luego estimulado con EGF (5 ng/ml) por 20 minutos a 37 °C.

Las células entonces se lavaron con PBS helado conteniendo ortovanadato de sodio 1 mM, y lisados celulares se sometieron a análisis Western blot usando anticuerpos que detectan EGFR fosfo-específica (tirosina 1068; Cell Signaling) . Tratamiento de células HT-29 con anticuerpo anti-EGFR o anticuerpo conjugado con ADN CpG inhibieron fosforilación estimulada con EGF (figura 5) . Ejemplo 3: Activación de Células Asesinas Naturales por Anticuerpo Anti-EGFR conjugado con ADN CpG Células mononucleares de sangre periférica normal (PBMCs) (Unidad de leucoféresis Johns Hopkins) se trataron con anticuerpos conjugados ya sea EGFR Ab-ADN CpG o EGFR Ab-ADN Control (4 µ9/p?1) por 3 días o se dejaron sin tratar. Células se marbetaron con ficoeritrina anti-CD56 (CD56 PE) y FITC anti-CD8 (CD8 FITC) y luego se analizaron por citometría de flujo. PBMCs mostraron números incrementados de células CD56+ después de estimulación con conjugado EGFR Ab-CpG, pero no después de tratamiento con conjugado EGFR Ab-ADN de control (figura 6) . Ejemplo 4: Maduración de Células Dendríticas por Anticuerpo Anti-EGFR conjugado con ADN CpG Monocitos humanos se aislaron de células mononucleares de médula de hueso y se cultivaron por 6 días en medio AIM5 (con suero AB humano al 10%) y cualquiera de los siguientes: (1) combinación de las siguientes citocinas: RANKL 1 µ9/p?1 + TNF-a 20 ng/ml + GM-CSF 800 U/ml + IL-4 500 U/ml ; (2) oligonucleótido CpG (CpG A ODN) (5 µ9/p?1) (sin citocinas) ; (3) anticuerpo anti-EGFR conjugado con CpG ODN (EGFR Ab-CpG ODN) (5 µ9/?t?1) (sin citocinas) . Las células se cosecharon en el día 7 y se mancharon con anticuerpos a PE MHC clase I, FITC MHC clase II, y CD86-PE. La maduración de células dendríticas (DCs) se evaluó por análisis de citometría de flujo de expresión de superficie celular incremen-tada del marcador de maduración CD86. Anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG indujo la expresión CD86 (es decir, maduración de Des) que fue similar a aquella observada en respuesta al coctel de citocinas (figura 7) . Ejemplo 5: Efecto de Anticuerpo Anti-EGFR conjugado con ADN CpG en Células de Tumor expresando EGFR Células de carcinoma de colon HT-29 se marbetaron con timidina 3H (2.5 Ci/ml), tripsinizaron, se lavaron con PBS, y se trataron con ya sea EGFR-Ab, EGFR Ab-ADN CpG, o EGFR Ab-ADN de control (4 g/ml) , se co-cultivaron en triplicado en placas de 96 pozos (5 x 103 células/pozo) con PBMCs (pre-tratadas con ya sea anticuerpos conjugados EGFR Ab-ADN CpG o EGFR Ab-ADN de control o se dejaron sin tratar) a relaciones E:T variables a 37°C por 4 horas. Las células se cosecharon sobre un papel filtro y la muerte/supervivencia celular se cuantificó por liberación de timidina 3H específica porcentual. En contraste con el tratamiento con EGFR-Ab (en presencia de PBMCs no tratadas) o EGFR Ab-ADN de control (en presencia de EGFR Ab-ADN de control tratado con PBMCs) , tratamiento de células HT-29 con EGFR Ab-ADN CpG (en la presencia de EGFR Ab-ADN CpG estimulado con PBMCs) resultó en muerte rápida de HT-29 (figura 8) . Células HT-29 se cultivaron con ya sea (1) EGFR-Ab (4 g/ml) (con PBMCs no estimuladas) ; (2) EGFR Ab-ADN CpG (4 ug/ml) (con PBMCs pre-tratadas por 48 horas con EGFR Ab-ADN CpG) ; o (3) PBMCs pre-tratadas por 48 horas con ADN CpG (relación PBMC:célu-las de tumor = 25) . En contraste al tratamiento de células HT-29 con ya sea EGFR-Ab (en presencia de PBMCs no estimuladas) o ADN CpG-PBMCs estimuladas (en ausencia de EGFR Ab) , cultivo de células HT-29 con EGFR Ab-ADN CpG (en presencia de EGFR Ab-ADN CpG-PBMCs estimuladas) resultó en eliminación de células HT-29 sobre 72 horas (figura 9) . Ejemplo 6: Anticuerpos Conjugados con ADN CpG [Anticuerpo Anti-EGFR Conjugado con ADN CpG o Anticuerpo Anti-HER2 Conjugado con ADN CpGl Inducen Expresión de Citocinas Interferón-v (INF-?) y Apo2L/TRIAL por Células Mononucleares de Sangre Periférica (PBMCs) Humanas Células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) humanas se trataron con ya sea anticuerpo anti-EGFR humano (anti EGFR Ab) 5 µg/ l , anticuerpo anti-HER2 humano (anti-HER2 Ab) 5 pg/ml, CpG A ODN (ADN CpG) 5 µg/m\ , anticuerpos conjugados con nucleótido [anticuerpo anti -EGFR-ADN CpG (anti-EGFR Ab-ADN CpG) o anticuerpo anti -HER2 -ADN CpG (anti-HER2 Ab-ADN CpG) 5 µ9/p?1] . Niveles de citocinas (INF-? o Apo2L/TRAIL) en sobrenadantes de PBMCs se evaluaron después de 24 horas por ELISA (pg/ml) . Tratamiento de PBMCs con ya sea ADN CpG o anticuerpos conjugados con ADN CpG incrementaron la expresión de INF-? soluble . o Apo2L/TRAIL en sobrenadante celular (figura 10) . Ejemplo 7: Anticuerpos Conjugados con ADN Inducen una Forma Novedosa de Muerte Celular Objetivada - Hiperfusión Celular - que No se Observa en Respuesta a Cualquier Clase Conocida de Agentes Anti-cáncer Células de cáncer de colon humanas (HT-29) expresando EGFR se colocaron en placas (5 x 104 células/ml) en presencia de ya sea anticuerpo anti-EGFR (anti-EGFR Ab) o anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG (anti-EGFR Ab-CpG) (5 µ9 ??1) . Células fueron seguidas por contraste de fase y microscopía de lapso de tiempo por 96 horas. Tratamiento con anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG indujo fusión de células HT-29 y resultó en la formación de células conglutinadas- (híbridas o multinucleadas) con un lapso de vida mas corto y habilidad de replicación dañada (hiperfusión) comparadas con células que se trataron con anticuerpo anti-EGFR no conjugado. Células de cáncer de seno humanas expresando EGFR (MCF-7 o MDA-MB-468) se colocaron en placas (5 x 104 células/ml) en la presencia de ya sea anticuerpo anti-EGFR (anti-EGFR Ab) (2-8 µ9 p?1) o anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG (anti-EGFR Ab-CpG) (2-4 }ig/ml) . Tratamiento con anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG indujo hiperfusión de células de cáncer de seno y formó cuerpos celulares conglutinados con un lapso de vida mas corto y habilidad de replicación comparados con células que se trataron con el anticuerpo anti-EGFR (sin conjugar) parentéri-co . Células de cáncer de seno humano expresando HER2/neu (SKBr o MCF-7) se colocaron en placas (5 x 104 células/ml) en la presencia de ya sea anticuerpo anti-HER2/neu humano (anti-HER2/neu Ab) o anticuerpo anti -HER2 /neu conjugado con ADN CpG (anti-HER2/neu Ab-ADN CpG o anti -HER2 /neu Ab-ADN CpG C) (5 yg/ml) . Supervivencia/proliferación celular se evaluó por microscopía de contraste de fase. Tratamiento con cualquier anticuerpo anti -HER2/neu conjugado con ADN CpG indujo hiperfusión de células de cáncer de seno y formó cuerpos celulares conglutinados con un lapso de vida mas corto y habilidades de replica-ción, lo cual no se observó con células tratadas por anticuerpo anti-HER2/neu parentérico. Células de cáncer de seno expresando neu de ratón (células NT2 ) se colocaron en placas (5 x 104 células/ml) en la presencia de ya sea anticuerpo anti-neu humano (anti-neu Ab) o anticuerpo anti-neu conjugado con ADN CpG (anti-neu Ab-ADN CpG A) (5 yg/ml) . Supervivencia/proliferación celular se evaluó por microscopía de contraste de fase y ensayo de exclusión de pigmento triptano azul. Tratamiento con cualquier anticuerpo anti-neu conjugado con ADN CpG indujo hiperfusión de células de cáncer de seno expresando neu de ratón (NT2) y formó cuerpos celulares conglutinados con un lapso de vida mas corto y habilidades de replicación. De nuevo, tal hiperfusión y muerte celular pronunciada no se indujo con anticuerpo no conjugado. Ejemplo 8: Anticuerpo Anti-neu Conjugado con CpG Inhibe el Crecimiento de Tumores Espontáneos en Ratones Transgénicos HER2 /neu Se administró a ratones transgénicos HER2/neu (neu/N) portando carcinomas mamarios espontáneos anticuerpo anti-neu conjugado con ADN CpG (100 µg i. p. dos veces por semana por dos semanas o 50 µg intratumoral dos veces por semana por dos semanas) , o se dejó sin tratar. Análisis de tamaño y volumen de tumor demostró inhibición marcada de crecimiento tumoral y reducción de volumen de tumor siguiendo a la administración de anticuerpo anti-neu conjugado con ADN CpG (figuras 11A y 11B) . Ejemplo 9: Anticuerpo Anti-EGFR Conjugado con ADN CpG Inhibe Crecimiento de Xeno- inj ertos de Cáncer de Colon EGFR+ Humanos en Ratones Desnudos Se inyectaron de manera subcutánea a ratones desnudos BALB/c células de cáncer de colon humano HT-29 (4 x 106) . Cinco días después de inoculación de tumor, se administró a los ratones ya sea anticuerpo anti-EGFR o anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG (20 yg peri-tumoral dos veces por semana por tres semanas) , o se dejó sin tratar. Análisis de tamaño y volumen de tumor demostraron inhibición marcada de crecimiento de tumor después de administración de anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG (figura 12) . La inhibición de crecimiento de tumores en respuesta a tratamiento con anticuerpo anti-EGFR conjugado con ADN CpG fue significativamente mayor que aquella del anticuerpo anti-EGFR padre no conjugado. Aunque la invención ha sido descrita con referencia a los ejemplos anteriores, se entenderá que modificaciones y variaciones son abarcadas dentro del espíritu y alcance de la invención. De manera acorde, la invención se limita solamente por las siguientes reivindicaciones.

Claims (36)

1. REIVINDICACIONES 1. Un -conjugado de anticuerpo-ácido nucleico o péptido-ácido nucleico aislado que comprende: i) un anticuerpo o péptido que se liga de manera específica a un componente celular de: a) una célula de tumor; b) vasculatura de tumor; y/o c) un componente de un micro-ambiente de tumor; y ii) una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias (INAS) , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden un patrón molecular asociado a patógeno (PAMP) .
2. 2. El conjugado de la reivindicación 1, donde el anticuerpo se selecciona a partir del grupo que consiste en un anticuerpo multi -específicos , un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo de una sola cadena, un fragmento Fab, un fragmento F(ab')/ y un anticuerpo anti-idiotípico (anti-Id) .
3. 3. El conjugado de la reivindicación 1, donde el componente celular es un tumor asociado con antígeno o molécula de superficie celular.
4. 4. El conjugado de la reivindicación 1, donde el componente celular se selecciona a partir del grupo que consiste en receptores de factor de crecimiento, moléculas co-estimulato-rias, receptores de hormonas, receptores de citocinas.
5. 5. El conjugado de la reivindicación 1, donde el componente celular se selecciona a partir del grupo que consiste en receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR, ErbB-1, HERI), ErbB-2 (HER2/neu) , ErbB- 3 /HER3 , ErbB-4/HER4 , familia de ligandos EGFR; familia del receptor de factor de crecimiento similar a insulina (IGFR) , proteínas de ligadura a IGF (IGFBPs) , familia de ligandos IGFR; familia del receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) , familia de ligandos PDGFR; familia del receptor de factor de crecimiento de fibro-blastos (FGFR) , familia de ligandos FGFR, familia del receptor de factor de crecimiento vascular endotelila (VEGFR) , familia VEGF; familia del receptor de HGF; familia del receptor de TRK; familia del receptor de efrina (EPH) ; familia del receptor de AXL; familia del receptor de leucocito tirosina quinasa (LTK) ; familia del receptor de TIE, angiopoyetina 1,2; familia del receptor de huérfano similar al receptor de tirosina quinasa (ROR) ; familia del receptor de dominio de discoidina (DDR) ; familia del receptor de RET; familia del receptor de KLG; familia del receptor de RYK; familia del receptor de MuSK; receptores de factor de crecimiento transformante ß (TGF-ß) ; receptores de citocina, receptores Clase I (familia de hematopoyetina) y Clase II (familia de interferón/IL- 10 ) , superfamilia de receptor de factor de necrosis tumoral (TNF) (TNFRSF) , familia del receptor de muerte; antígenos de testes cancerosas (CT) , antígenos específicos de linaje, antígenos de diferenciación, alfa-actinina- , ARTC1, productos de fusión de región de racimo de punto de quiebre Abelson (Bcr-abl) , B-RAF, caspasa-5 (CASP-5) , caspasa-8 (CASP-8) , ß-catenina (CT NB1) , ciclo de división celular 27 (CDC27) , quinasa 4 dependiente de ciclina (CDK4) , CDK 2A, COA-1, proteína de fusión dek-can, EFTUD-2, factor de elongación 2 (ELF2), proteína de fusión de gene 6 de variante Ets/ETS gene de leucemia mieloide aguda 1 (ETC6-AML1) , fibronectina (FN) , GPNMB, proteína de fusión de receptor de lípidos de baja densidad /GDP-L fucosa: ß-D-galactoasa 2 -OÍ-L- fucosiltransferasa (LDLR/FUT) , HLA-A2 , intercam-bio de arginina a isoleucina en el residuo 170 de la hélice a del dominio OÍ2 en el gene HLA-A2 (HLA-A*201-R170I ) , HLA-A11, proteína 70-2 de impacto de calor mutada (HSP70-2M), KIAA0205, MART2 , melanoma ubicuo mutado 1, 2, 3 (MUM-1, 2, 3), fosfatasa de ácido prostético (PAP) , neo-PAP, Miosina clase I, NFYC, OGT, OS-9, proteína de fusión pml-RARalfa, PRDX5 , PTPRK, K-ras (KRAS2) , N-ras (NRAS) , HRAS, RBAF600, SIRT2, SNRPD1, proteína de fusión SYT-SSX1 o SSX2 , Triosefosfato Isomerasas, BAGE, BAGE-1, BAGE-2, 3, 4, 5, GAGE-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, GnT-V (N-actil glucosaminil transferasa V aberrante, MGAT5) , HERV-K-MEL, KK-LC, K -HN-1, LAGE, LAGE-1, antígeno reconocido por CTL en melanoma (CAMEL) , MAGE-A1 (MAGE-1) , MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6, MAGE-A8, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-A11, MAGE-A12, MAGE-3, MAGE-B1, MAGE-B2, MAGE-B5, MAGE-B6, MAGE-C1, MAGE-C2, mucina 1 (MUC1), MART-l/Melan-A (MLANA) , gplOO, gpl00/Pmell7 (SILV) , tirosinasa (TYR) , TRP-1, HAGE, NA-88, NY-ESO-1, NY-ESO- l/LAGE- 2 , SAGE , Spl7 , - 68 - SSX-1, 2, 3, 4, TRP2-INT2, antígeno carcino-embriónico (CEA) , Kallikreina 4, mamaglobina-A, 0A1 , antígeno específico de próstata (PSA) , TRP-l/gp75, TRP-2, adipofilina, proteína inducible por interferón ausente en melanoma 2 (AIM-2), BING-4, CPSF, ciclina DI, molécula de adhesión a células epiteliales (Ep-CA ) , EphA3 , factor-5 de crecimiento de fibroblastos (FGF-5) , glicoproteína 250 (gp250) , EGFR (ERBB1) , HER-2/neu (ERBB2) , cadena a2 del receptor de interleucina 13 ( IL13Ralfa2 ) , receptor de IL-6, carboxil esterasa intestinal (iCE), alfa-feto proteína (AFP) , M-CSF, mdm-2, UC1, p53 (TP53), PBF , PRAME, PSMA, RAGE-1, RNF43, RU2AS , SOX10, STEAP1, survivina (BIRC5 ) , telomerasa transcriptasa inversa humana (hTERT) , telomerasa, gene de tumor de Wilms' (WT1) , SYCP1, BRDT, SPA X, XAGE , ADAM2 , PAGE-5, LIP1, CTAGE-1, CSAGE , MMA1 , CAGE, BORIS, HOM-TES-85, AF15ql4 , HCA661, LDHC, MORC, SGY-1, SPOll, TPX1, NY-SAR-35, FTHL17, NXF2 , TDRD1 , TEX15, FATE, TPTE, idiotipos de inmunoglobulina, proteína de Bence-Jones, receptores de estrógeno (ER) , receptores de andrógeno (AR) , CD40, CD30, CD20, CD19, CD33, antígeno de cáncer 72-4 (CA 72-4) , antígeno de cáncer 15-3 (CA 15-3) , antígeno de cáncer 27-29 (CA 27-29) , antígeno de cáncer 125 (CA 125) , antígeno de cáncer 19-9 (CA 19-9) , gonadotropina coriónica humana ß, antígeno de carcinoma de células escuamosas, enolasa específica de neuronas, proteína de impacto de calor gp96, GM2 , sargra-mostima, CTLA-4, alanina prolina 707 (707-AP) , antígeno de adenocarcinoma reconocido por células T 4 (ART-4), péptido 1 de antígeno carciembriogénico (CAP-1) , canal de cloruro 2 activado por calcio (CLCA2), ciclofilina B (Cyp-B) , tumor 2 de aro de sígnete humano (HST-2) , proteínas de virus de papiloma humano (HPV) (HPV-E6, HPV-E7, antígenos de cápside mayores o menores, otros) , proteínas de virus de Epstein-Barr (EBV) (proteínas de membrana latentes EBV - L P1, LMP2 ; otras), proteínas de virus de Hepatitis B o C, y proteínas de VIH.
6. 6. El conjugado de la reivindicación 5, donde el componente celular es EGFR o HER2/neu.
7. 7. El conjugado de la reivindicación 3, donde el péptido se selecciona a partir del grupo que consiste en integrina a?ß? (CRRETAWAC (SEQ ID NO : 5 ) ) , integrina a?ß3 (CDCRGDCFC (SEQ ID NO : 6 ) /RGD-4C ; RGDWXE (SEQ ID 0:7)), integrina ?ß5 (TRGDTF (SEQ ID NO : 8 ) ) , a?ß6 (RGDLxxL (SEQ ID N0:9) o xxDLxxL (SEQ ID NO: 10)), a??ß3 (SRGDM (SEQ ID NO: 11)), mímico de anexina V para a?ß5 (WISYSMPD (SEQ ID NO: 12)), E-selectina (IELLQAR (SEQ ID NO: 13)), mitocondria celular endotelial (CNGRC-GG- (KLAKLAK) 2 (SEQ ID NO: 14)), Efrina-A2 y Efrina-A4 (CVSNPRWKC (SEQ ID NO: 15), CHVLWSTRC (SEQ ID NO: 16)), Fibronectina (CWDDGWLC (SEQ ID NO: 17)), ICAM-I o factor de von Willebrand factor (CPCFLLGCC (SEQ ID NO: 18) /LLG-4C) , lamina-1 (DFKLFAVY (SEQ ID NO: 19)), P-selectina (EWVDV (SEQ ID NO:20)), complejo MMP-9 : integrina (D/E) (D/E) (G/L) W (SEQ ID NO:21), MMP-9 y MMP-2 (gelatinasas) (CTTHWGFTLC (SEQ ID NO:22)), cadherina Tipo I en endotelio (N-Ac-CHA VC-NH2) , región Flt-Ide VEGF NxxEIExYxxWxxxxxY (SEQ ID NO: 23), región KDR de VEGF (HTMYYHHYQHHL (SEQ ID NO: 24) , AT LPPR ( SEQ ID NO: 25) ) , receptor de VEGF (WHSDME WYLLG (SEQ ID NO:26), RRKRRR (SEQ ID NO:27), Aminopeptidasa N/CD13 (NGR) , NG2 proteoglicano (TAASGVRSMH (SEQ ID NO:28), LTLRWVGLMS (SEQ ID NO:29)), péptido derivado de glándula adrenal (LMLPRAD (SEQ ID NO:30)), péptido derivado de tejido adiposo (CKGGRAKDC SEQ ID NO:31)), péptido derivado del cerebro (SR1) , .péptido derivado de endotelio cerebral (CLSSRLDAC (SEQ ID NO:32)), péptido derivado de célula de glioma (VGLPEHTQ (SEQ ID NO:33)), péptido derivado de neuroblastoma (VPWMEPAYQRFL (SEQ ID NO:34)), péptido derivado de médula de hueso (GGG, GFS , LWS) , péptido derivado de cáncer de seno (HER2 /neu) (LTVxPWx (SEQ ID NO: 35) , LTVxPWY (SEQ ID NO: 36) , mimótope HER2 Ab/Trastuzumab -LLGPYELWELSH (SEQ ID NO:37)), péptido derivado de colon (RPMC (SEQ ID NO:38)), péptido derivado de intestino (YSGKWGW (SEQ ID NO: 39)), péptido derivado de cáncer de células escuamosas de cabeza y cuello (TSPLNIHNGQKL (SEQ ID NO:40)), péptido derivado de vasculatura pulmonar (CGFELETC (SEQ ID NO:41)), péptido derivado de endotelio de arterias coronarias (NSVRDL(G/S) (SEQ ID NO:42), NSVSSx(S/A) (SEQ ID NO:43)), péptido derivado de vasos linfáticos (CGNKRTRGC (SEQ ID NO:44)/ Lyp-1) , péptido derivado de órganos múltiples (GVL, EGRx (SEQ ID NO:45), xFG(G/V) (SEQ ID NO:46)), péptido derivado de islotes pancreáticos (CVSSNPRWKC (SEQ ID NO: 47), CHVLWSTRC (SEQ ID NO:48)), péptido derivado de páncreas (SWCEPGWCR (SEQ ID NO: 49) ) , péptido derivado de próstata (AGG, DPRATPGS (SEQ ID NO:50), SMSIARL (SEQ ID N0:51), CGRRAGGSC (SEQ ID NO:52), GVL) , péptido derivado de retina (RDV, CSCFRDVCC (SEQ ID NO:53)), péptido derivado de ligando de teratógeno (TPKTSVT (SEQ ID N0:54)), y péptido derivado del útero (GLSGGRS (SEQ ID NO: 55) ) .
8. 8. El conjugado de la reivindicación 1, donde las INAS comprende un ácido nucleico de codificación o no de codificación.
9. 9. El conjugado de la reivindicación 8, donde la secuencia no de codificación se selecciona a partir del grupo que consiste en ADN de doble cadena, ADN de una sola cadena, ADN CpG (CpG) , ADN de virus de herpes simplex (HSV) , ARN de doble cadena (ARNds) , ADN CpG (CpG) , y ARN de una sola cadena (ARNss) .
10. 10. El conjugado de la reivindicación 9, donde la secuencia no de codificación es CpG.
11. 11. El conjugado de la reivindicación 10, donde la CpG comprende la SEQ ID NO: 1.
12. 12. El conjugado de la reivindicación 1, que comprende: i) un anticuerpo que se liga específicamente a EGFR o HER2/ eu ; y ii) una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden una secuencia de ADN CpG como se señala en la SEQ ID NO: 1.
13. 13. El conjugado de la reivindicación 1, que compren-de: i) un péptido que contiene un motivo RGD o un motivo CDGRC; y ii) una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden una secuencia de ADN CpG como se señala en la SEQ ID NO: 1.
14. 14. Un método para tratar una enfermedad neoplásica que comprende administrar a un sujeto en necesidad de ello, una composición que comprende un conjugado anticuerpo-ácido nucleico o un conjugado péptido-ácido nucleico, donde el conjugado comprende : i) un anticuerpo o péptido que se liga de manera específica a un componente celular de: a) una célula de tumor; b) vasculatura de tumor; y/o c) un componente de un micro-ambiente de tumor; y ii) una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias (INAS) , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden un patrón molecular asociado a patógeno (PAMP) .
15. 15. El método de la reivindicación 14, donde el conjugado se administra de manera sistemática, intratumoral , o peritumoral .
16. 16. El método de la reivindicación 14, comprendiendo además : i) remover células inmunes del sujeto; ii) poner en contacto las células del paso (i) con el conjugado ex vivo; y iii) re- introducir las células del paso (ii) hacia el suj eto .
17. 17. El método de la reivindicación 14, comprendiendo además administrar una terapia anti -cáncer seleccionada a partir del grupo que consiste en radiación ionizante, terapia hormonal, citocinas, inmunoterapia , terapia celular, vacunas, anticuerpos monoclonales , agentes anti-angiogénicos , y fármacos quimiotera-péuticos de moléculas pequeñas.
18. 18. El método de la reivindicación 14, donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico silencian la expresión de genes o inducen señalización de muerte intracelular .
19. 19. El método de la reivindicación 18, donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico es ARN de doble cadena (ARNds) , ARN de interferencia corta (ARNsi) , ARN de horquilla corta (ARNsh) , o micro ARN.
20. 20. El método de la reivindicación 18, donde por lo menos una secuencia de ácido nucleico codifica un péptido, un polipéptido, o una proteína.
21. 21. El método de la reivindicación 14, donde el componente celular se selecciona a partir del grupo que consiste en receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) , HER2/neu, familia del receptor de factor de crecimiento similar a insulina, receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas, receptor de interleucina- 6 , factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , receptor de VEGF) , CD40, CD28, receptores de estrógenos, receptores de citocina, CD20, CD19, CD33, MART- l/Melan-A, gplOO, tirosinasa, TRP-1, MAGE-1, MAGE-3, MAGE-B1 , MAGE-B2, BAGE, BAGE-1, GAGE-2, HAGE, LAGE, melanoma ubicuo mutado 1, 2, 3 (MUM-1, 2, 3), ß-catenina, antígeno carcino-embriónico (CEA), HPV-E6, HPV-E7, mucina 1, antígeno específico de próstata (PSA) , virus de Epstein-Barr , proteína de feto alfa (AFP) , antígeno de cáncer 72-4 (CA 72-4) , antígeno de cáncer 15-3 (CA 15-3) , antígeno de cáncer 27-29 (CA 27-29) , antígeno de cáncer 125 (CA 125) , antígeno de cáncer 19-9 (CA 19-9) , gonadotropina coriónica humana ß, antígeno de carcinoma de células escuamosas, próteína de Bence-Jones, enolasa específica de neuronas, proteína de impacto de calor gp96, proteína de impacto de calor 70-2 mutada (HSP70-2M) , GM2 , sargramostim, CTLA-4, fosfatasa de ácido prostático (PAP) , NY-ESO-1, alanina prolina 707 (707-AP) , proteína inducible por interferón ausente en melanoma 2 (AIM-2) , antígeno de adenocarcinoma reconocido por células T 4 (ART-4 ) , región de racimo de punto de quiebre Abelson (Bcr-abl) , antígeno reconocido por CTL en melanoma (CAMEL) , péptido 1 de antígeno carcinoembrio-génico (CAP-1) , caspasa-8 (CASP-8) , ciclo de división celular 27 (CDC27) , quinasa dependiente de ciclina 4 (CDK4) , canal de cloruro activado por calcio 2 (CLCA2), antígeno de cáncer/testes (CT) , ciclofilina B (Cyp-B) , factor de elongación 2 (ELF2) , molécula de adhesión de células epiteliales (Ep-CAM) , receptor de efrina tipo A 2, 3 (EphA2, 3) , gene 6 variante de Ets/gene ETS de leucemia mieloide aguda 1 (ETC6-AML1) , fibronectina (FN) de factor de crecimiento de fibroblastos 5 (FGF-5) , glicoproteína 250 (gp250) , N-acetilglucosaminiltransferasa V (GnT-V) , intercambio de arginina a isoleucina en el residuo 170 de la hélice del dominio ot2 en el gene HLA-A2 ¦ (HLA-A*201-R170I) , tumor de aro de sígnete humano 2 (HST-2) , transcriptasa inversa de telomerasa humana (hTERT) , carboxil esterasa intestinal (iCE) , cadena a2 del receptor de interleucina 13 (IL-13Ra2) , KIAA0205, receptor de lípidos de baja densidad/GDP-L fucosa : ß-Dgalactosa 2 - -Lfucosil -transferasa (LDLR/FUT) , y gene de tumor de Wilms (WT1) .
22. 22. El método de la reivindicación 14, donde el conjugado comprende un anticuerpo que se liga específicamente a EGFR o HER2/neu y una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias , donde la una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden una secuencia de ADN CpG como se señala en la SEQ ID NO : 1.
23. 23. El método de la reivindicación 14, donde el péptido se selecciona a partir del grupo que consiste en integrina a?ß? (CRRETAWAC (SEQ ID N0:5)) , integrina a?ß3 (CDCRGDCFC (SEQ ID NO : 6) /RGD-4C; RGDWXE ( SEQ ID NO : 7 ) ) , integrina a?ß5 (TRGDTF (SEQ ID NO:8)) , ?ßd (RGDLxxL (SEQ ID NO:9) o xxDLxxL (SEQ ID NO: 10)) , a??ß3 (SRGDM (SEQ ID NO: 11)) , mímico de anexina V para a?ß5 (WISYSMPD (SEQ ID NO: 12)), E-selectina (IELLQAR (SEQ ID NO: 13)), mitocondria celular endotelial (CNGRC-GG- (KLAKLAK) 2 (SEQ ID NO: 14)), Efrina-A2 y Efrina-A4 (CVSNPRWKC (SEQ ID NO: 15), CHVLWSTRC (SEQ ID NO: 16)), Fibronectina (C DDGWLC (SEQ ID NO: 17)), ICA -I o factor de von Willebrand factor (CPCFLLGCC (SEQ ID NO: 18)/LLG-4C), lamina-1 (DFKLFAVY (SEQ ID NO: 19)), P-selectina (E VDV (SEQ ID NO:20)), complejo MMP-9 : integrina (D/E) (D/E) (G/L) W (SEQ ID N0:21), MMP-9 y MP-2 (gelatinasas) (CTTH GFTLC (SEQ ID NO:22)), cadherina Tipo I en endotelio (N-Ac-CHA VC-NH2) , región Flt-Ide VEGF NxxEIExYxxWxxxxxY (SEQ ID NO: 23), región KDR de VEGF (HTMYYHHYQHHL (SEQ ID NO: 24) , ATWLPPR (SEQ ID NO: 25) ) , receptor de VEGF (WHSDMEW YLLG (SEQ ID NO: 26), RRKRRR (SEQ ID NO: 27), Aminopeptidasa N/CD13 (NGR) , NG2 proteoglicano (TAASGVRSMH (SEQ ID NO: 28), LTLRWVGL S (SEQ ID NO:29)), péptido derivado de glándula adrenal (L LPRAD (SEQ ID NO:30)), péptido derivado de tejido adiposo (CKGGRAKDC SEQ ID NO:31)), péptido derivado del cerebro (SR1) , péptido derivado de endotelio cerebral (CLSSRLDAC (SEQ ID NO:32)), péptido derivado de célula de glioma (VGLPEHTQ (SEQ ID NO:33)), péptido derivado de neuroblastoma (VPWMEPAYQRFL (SEQ ID NO:34)), péptido derivado de médula de hueso (GGG, GFS, LWS) , péptido derivado de cáncer de seno (HER2/neu) (LTVxPWx (SEQ ID NO: 35) , LTVxP Y (SEQ ID NO: 36) , mimótope HER2 Ab/Trastuzumab -LLGPYEL ELSH (SEQ ID NO:37)), péptido derivado de colon (RPMC (SEQ ID NO:38)), péptido derivado de intestino (YSGKWGW (SEQ ID NO : 39)), péptido derivado de cáncer de células escuamosas de cabeza y cuello (TSPLNIHNGQKL (SEQ ID NO:40)), péptido derivado de vasculatura pulmonar (CGFELETC (SEQ ID N0:41)), péptido derivado de endotelio de arterias coronarias (NSVRDL (G/S) (SEQ ID NO:42), NSVSSx(S/A) (SEQ ID NO:43)), péptido derivado de vasos linfáticos (CGNKRTRGC (SEQ ID N0:44)/ Lyp-1) , péptido derivado de órganos múltiples (GVL, EGRx (SEQ ID NO:45), xFG(G/V) (SEQ ID NO:46)), péptido derivado de islotes pancreáticos (CVSSNPRWKC (SEQ ID NO: 47), CHVLWSTRC (SEQ ID NO:48)), péptido derivado de páncreas (S CEPGWCR (SEQ ID NO: 49) ) , péptido derivado de próstata (AGG, DPRATPGS (SEQ ID NO:50), SMSIARL (SEQ ID N0:51), CGRRAGGSC (SEQ ID NO:52), GVL), péptido derivado de retina (RDV, CSCFRDVCC (SEQ ID NO:53)), péptido derivado de ligando de teratógeno (TPKTSVT (SEQ ID NO:54)), y péptido derivado del útero (GLSGGRS (SEQ ID NO: 55) ) .
24. 24. El método de la reivindicación 14, donde el conjugado comprende un péptido conteniendo un motivo RGD o un motivo CDGRC y una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias , donde la una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden una secuencia de ADN CpG como se señala en la SEQ ID NO : 1.
25. 25. El método de la reivindicación 14, donde la enfermedad neoplásica es cáncer.
26. 26. El método de la reivindicación 25, donde el cáncer se selecciona a partir del grupo que consiste en cánceres de cabeza y cuello, cánceres aero-digestivos, cánceres gastrointestinales, cánceres del esófago, cánceres del estómago-gástricos, cánceres del páncreas, cánceres hepatobiliares/del hígado, cánceres colorrectales , cánceres anales, cánceres del intestino delgado, cánceres genito-urinarios , cánceres urológicos, cánceres renales/del riñon, cánceres de la uretra, cánceres de los testículos, cánceres de la uretra/pene, cánceres ginecológicos, cánceres de los ovarios/trompas de Falopio, cánceres del peritoneo, cánceres del útero/endometrio , cánceres cervicales/de vagina/de vulva, enfermedad trofoblástica gestacional, cánceres de próstata, cánceres de hueso, sarcoma (tejido suave/hueso), cánceres de pulmón, mesotelioma, cánceres del mediastino, cánceres de seno, cánceres del sistema nervioso central, cánceres de cerebro, melanoma, leucemia, linfoma (enfermedad de Hodgkin y linfoma no de Hodgkin) , neoplasmas de células de plasma, mieloma, síndrome mielodisplástico , tumores endocrinos, cánceres de piel, melanoma, cánceres tiroideos, cánceres paratiroideos , adrenal , cánceres endocrinos pancreáticos, carcinoide, neoplasia endocrina múltiple, malignidades relacionadas con SIDA, cáncer de sitio primario desconocido, y varios cánceres de la niñez.
27. 27. El método de la reivindicación 14, donde el sujeto es un humano.
28. 28. Un método para identificar un conjugado de ácido nucleico que induce muerte celular, maduración celular, y/o señalización dependiente de ligando NKG2D que comprende: i) poner en contacto una o mas células in vitro con un conjugado de ácido nucleico de prueba conteniendo un anticuerpo que se liga específicamente a un componente celular de una célula de tumor, vasculatura de tumor, y/o un componente de un micro-ambiente de tumor o un péptido derivado de integrina conteniendo un motivo RGD o un motivo CDGRC, donde el anticuerpo o péptido se conjuga con un ácido nucleico que comprende una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias , y donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden un patrón molecular asociado con patógeno (PAMP) ; y ii) determinar la inducción de un marcador o un cambio fenotípico en la una o mas células del paso (i) en la presencia o ausencia de células inmunes, donde la inducción o el cambio determinados en la presencia del conjugado de ácido nucleico de prueba en una o mas células del paso (i) es indicativo de señalización de muerte celular, maduración celular, y/o señalización dependiente de ligando NKG2D.
29. 29. El método de la reivindicación 28, donde si las células en el paso (i) son células de tumor, y en la ausencia de células inmunes la puesta en contacto ocasiona que las células se fusionen, el conjugado de ácido nucleico de prueba se asocia con la inducción de señalización de muerte celular.
30. 30. El método de la reivindicación 28, donde si las células en el paso (i) comprenden una mezcla de células inmunes y células de tumor, y la puesta en contacto ocasiona que las células de tumor se lisen, el conjugado de ácido nucleico de prueba se asocia con la inducción de maduración celular y/o señalización dependiente de ligando NKG2D.
31. 31. El método de la reivindicación 28, donde si las células en el paso (i) son células PB C o células dendríticas (DC) , y la puesta en contacto ocasiona la expresión de uno o mas marcadores seleccionados del grupo que consiste en CD86, IFN-?, y/o Apo2L/TRAIL, el conjugado de ácido nucleico de prueba se asocia con la inducción de maduración celular.
32. 32. Un método para prevenir o tratar una enfermedad neoplásica o enfermedad infecciosa que comprende administrar a un sujeto en necesidad de ello una composición que comprende un conjugado de anticuerpo-ácido nucleico, donde el conjugado comprende : i) un anticuerpo que se liga específicamente a un componente celular de una célula inmune o una célula dendrítica (DC) ; ii) una o mas secuencias de ácido nucleico inmuno-estimulatorias (INAS) , donde una o mas de las secuencias de ácido nucleico comprenden un patrón molecular asociado a patógeno (PAMP) ; y iii) uno o mas antígenos de tumor o antígenos a partir de un microorganismo infeccioso o patógeno.
33. 33. El método de la reivindicación 32, comprendiendo además : i) remover células inmunes del sujeto; ii) poner en contacto a las células del paso (i) con el conjugado ex vivo; y iii) re-introducir las células del paso (ii) hacia el suj eto .
34. 34. El método de la reivindicación 32, comprendiendo además administrar una terapia anti-cáncer seleccionada a partir del grupo que consiste en radiación ionizante, terapia hormonal, citocinas, inmunoterapia , terapia celular, vacunas, anticuerpos monoclonales , agentes anti -angiogénicos , y fármacos quimiotera-péuticos de moléculas pequeñas.
35. 35. El método de la reivindicación 32, donde la enfermedad infecciosa es ocasionada por una infección seleccionada a partir del grupo que consiste en una infección microbiana, infección fungal, infección parasítica, e infección viral.
36. 36. El método de la reivindicación 32, donde el sujeto es un humano.