MX2008008021A

MX2008008021A - Formulaciones de proteina con viscosidad reductiva y sus usos

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Publication number: MX2008008021A
Application number: MX/A/2008/008021A
Authority: MX
Inventors: William Warne Nicholas; Elizabeth Louise Nichols Pilarin; Jorge Loureiro Paulo
Original assignee: Loureiro Paulo J; Nichols Pilarin E; Warne Nicholas W; Wyeth
Priority date: 2005-12-21
Filing date: 2008-06-19
Publication date: 2008-09-26

Abstract

Se proporcionan formulaciones de proteína y métodos para reducir la viscosidad de una formulación de proteína. El método para reducir la viscosidad de una formulación de proteína comprende agregar un agente reductor de viscosidad, tal como cloruro de calcio o cloruro de magnesio a la formulación de la proteína.

Description

FORMULACIONES DE PROTEINA CON VISCOSIDAD REDUCIDA Y SUS USOS CAMPO DE LA INVENCIÓN El campo se refiere a formulaciones de proteína y, más particularmente a formulaciones de proteína con viscosidad reducida. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se estima que más de 371 nuevas medicinas basadas en biotecnología están el trayecto industrial. Las medicinas basadas en biotecnología incluyen proteínas terapéuticas tales como enzimas, receptores solubles, ligandos, proteínas sanguíneas y anticuerpos monoclonales. La terapia basada en proteína, especialmente la terapia basada en anticuerpo monoclonal, se ha convertido en un método importante para tratar enfermedades tales como el cáncer, enfermedades alérgicas, asma y transplante de órgano. A finales del 2003 se han aprobado 14 terapias basadas en anticuerpos a través de la administración de alimentos y fármacos para tratar diferentes enfermedades humanas. La terapia basada en anticuerpo usualmente se administra sobre dosis regulares y requiere varias dosificaciones de mg/kg por inyección. La inyección subcutánea es una ruta típica de administración de estas terapias. Debido a los pequeños volúmenes utilizados para la inyección subcutánea (usualmente 1.0 ml-1.2 ml) , para las Ref. 194178 terapias con altas dosis de anticuerpo, esta ruta de administración requiere formulaciones de proteínas con concentraciones altas (por ejemplo, 50 mg/ml-300 mg/ml) . Las concentraciones altas en proteína poseen retos relacionados con estabilidad física y química de la proteína, y la dificultad con la fabricación, almacenamiento y distribución de la formulación de proteína. Un problema es la tendencia de las proteínas para formar partículas durante el procesamiento y/o almacenamiento, que hace difícil la manipulación durante el procesamiento adicional. Para intentar obviar este problema, los agentes tensioactivos y/o azúcares han sido agregados a las formulaciones de proteína. Aunque los agentes tensioactivos y los azúcares pueden reducir el grado de formación de partícula de la proteína, no cubren otro problema asociado con la manipulación y administración de formulaciones de proteína concentradas, es decir, viscosidad incrementada. De hecho, los azúcares pueden mejorar las interacciones intermoleculares dentro de una proteína o entre proteínas e incrementar la viscosidad de la formulación de proteína. La viscosidad incrementada de las formulaciones de proteína tiene ramificaciones negativas a partir del procesamiento mediante la distribución del fármaco al paciente. Por consiguiente, existe una necesidad en la técnica para desarrollar formulaciones de proteína con concentraciones relativamente altas con viscosidades adecuadamente bajas que son adecuadas para la fabricación, almacenamiento, y administración. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente solicitud se refiere a formulaciones de proteína que tienen viscosidad reducida comparada con formulación de proteína correspondiente que no incluye un agente reductor de viscosidad en una concentración adecuada, y métodos para hacer las formulaciones de proteína teniendo viscosidad reducida (formulaciones de viscosidad reducida) . En un aspecto, la invención se refiere a métodos para reducir la viscosidad de una formulación de proteína a través de la adición de un agente reductor de viscosidad o una formulación de proteína, por lo tanto reduciendo la viscosidad de la formulación de proteína comparado con una formulación de proteína que carece de agente reductor de viscosidad. En una modalidad, el método involucra la determinación de la viscosidad de una formulación de proteína antes de la adición de un agente reductor de viscosidad. En otra modalidad, el método involucra la determinación de la viscosidad de una formulación de proteína después de la adición de un agente reductor de viscosidad. En aún otra modalidad, el método involucra determinar la viscosidad de una formulación de proteína antes y después de la adición del agente reductor de viscosidad. En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad reduce la viscosidad de la formación de proteína en por lo menos 5% comparado con la viscosidad de la formulación formulada sin el agente reductor de viscosidad. En algunas modalidades, el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio o cloruro de magnesio. El agente reductor de viscosidad se agrega a bajas concentraciones para así no tener impacto negativo en la formulación de proteína. El agente reductor de viscosidad generalmente se adiciona a la formulación de proteína a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM. En algunas modalidades, el agente reductor de viscosidad se agrega a una formulación de proteína a una concentración final de entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 25 mM. En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de proteína a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM. En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de proteína a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y 14 mM . En otra modalidad, la proteína es un anticuerpo, una proteína de fusión Ig, un receptor, un ligando, un factor de trascripción, un enzima, o un fragmento biológicamente activo del mismo. En algunas modalidades, la proteína es un anticuerpo anti-mioestatina, un anticuerpo anti-IL-12, o un anticuerpo anti-IL-13. En otro aspecto, la invención se refiere a una formulación de proteína con viscosidad reducida. La formulación de proteína con viscosidad reducida incluye una proteína, un agente reductor de viscosidad, y un amortiguador de pH. En algunas modalidades, el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio o cloruro de magnesio. El agente reductor de viscosidad generalmente se adiciona una formulación de proteína a una concentración general de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM. En algunas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a la formulación de proteína a una concentración final de entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 25 mM . En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona en la formulación de la proteína a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y aproximadamente 15 mM. En ciertas otras modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de proteína a una concentración final de entre 0.5 mM y 14 mM. Cuando el agente de reducción de viscosidad se adiciona a una formulación de proteína a una concentración de entre aproximadamente 0.5 mM a aproximadamente 50 mM, no se utiliza el cloruro de sodio o el bifosfato de sodio como agentes reductores de viscosidad. El pH de la formulación de proteína generalmente es de entre aproximadamente 5.5 y aproximadamente 6.5. En ciertas modalidades, la proteína es un anticuerpo, una proteína de fusión Ig, un receptor, un ligando, un factor de trascripción, una enzima, o un fragmento biológicamente activo del mismo. En ciertas modalidades, la formulación de proteína es provista como kits. Los kits pueden incluir instrucciones para el uso de la formulación de proteína. En ciertas modalidades, la formulación de proteína con viscosidad reducida es una formulación de anticuerpo anti-mioestatina de viscosidad reducida. En una modalidad, el anticuerpo anti-mioestatina es un anticuerpo monoclonal. En otra modalidad, el anticuerpo anti-mioestatina es un anticuerpo monoclonal humanizado (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal parcialmente humanizado o completamente humanizado) . En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-mioestatina es MYO-022, MYO-028 o MYO-029. Los anticuerpos anti-mioestatina generalmente se utilizan a una concentración de entre aproximadamente 25 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml . El agente reductor de viscosidad generalmente se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-mioestatina con viscosidad reducida a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM. En algunas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a un anticuerpo anti-mioestatina a una concentración final de entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 25 mM. En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a la formulación de anticuerpo anti-mioestatina a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 15 mM. En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-mioestatina a una concentración final de entre aproximadamente 0 mM y 14 mM. Cuando el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-mioestatina a una concentración de entre aproximadamente 0.5 mM a aproximadamente 50 mM, no se utiliza el cloruro de sodio o el bifosfato de sodio como agentes reductores de viscosidad. Las formulaciones de anticuerpo anti-mioestatina de viscosidad reducida generalmente tienen un pH de entre aproximadamente 5.5 y aproximadamente 6.5. En una modalidad, se utiliza histidina para regular el pH de una formulación de anticuerpo miostatina de viscosidad reducida. Una formulación de anticuerpo de miostatina de viscosidad reducida también puede incluir uno o más crioprotectores, uno o más agentes tensioactivos, uno o más anti-oxidantes, o una combinación de éstos. En algunas modalidades, la formulación anti-mioestatina con viscosidad reducida es una formulación reconstituida. Los anticuerpos de miostatina se pueden formular como se describe en la presente como composiciones farmacéuticas y se utilizan para tratar trastornos tales como, pero no limitándose a, distrofia muscular, sarcopenia, caquexia, y diabetes de tipo II. En ciertas modalidades, una formulación de anticuerpo anti-mioestatina de viscosidad reducida es provista como un kit. Los kits pueden incluir instrucciones para el uso de la formulación de anticuerpo. En ciertas modalidades, la formulación de proteína de viscosidad reducida es una formulación de anticuerpo anti-IL-12 de viscosidad reducida. En una modalidad, el anticuerpo anti-IL-12 es un anticuerpo monoclonal. En otra modalidad, el anticuerpo anti -IL- 12 es un anticuerpo monoclonal humanizado (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal parcialmente humanizado o completamente humanizado) . En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-IL-12 es J695. Los anticuerpos anti-IL-12 generalmente se utilizan en una formulación o una concentración de entre aproximadamente 25 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml. Un agente reductor de viscosidad generalmente se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-IL-12 a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM. En algunas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-IL- 12 a una concentración final de entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 25 mM. En ciertas modalidades, el agente reductor se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-IL-12 a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 15 mM. En ciertas otras modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de anticuerpo anti- IL-12 a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y aproximadamente 14 M. Cuando el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-IL-12 a una concentración de entre aproximadamente 0.5 mM a aproximadamente 50 mM, no se utiliza cloruro de sodio y bifosfato de sodio como agentes reductores de viscosidad. Las formulaciones de anticuerpo anti- IL- 12 con viscosidad reducida generalmente tienen un pH de entre aproximadamente 5.5 y aproximadamente 6.5. En ciertas modalidades, se utiliza histidina como amortiguador de pH en una formulación de anticuerpo IL-12 con viscosidad reducida. Las formulaciones de anticuerpo anti- IL- 12 con viscosidad reducida también pueden incluir uno o más crioprotectores, uno o más agentes tensioactivos, uno o más anti-oxidantes , o combinaciones de éstos. En ciertas modalidades, la formulación anti-IL-12 de viscosidad reducida es una formulación reconstituida. Los anticuerpos anti-IL- 12 además se pueden formular como se describe en la presente para uso como composiciones farmacéuticas y se utilizan para tratar trastornos tales como, pero no limitándose a, artritis reumatoides, enfermedad de Crohn, psoriasis, y artritis psoriátíca. En ciertas modalidades, la formulación del anticuerpo anti-IL-12 de viscosidad reducida es provista como parte de un kit. Los kits pueden incluir instrucciones para uso en la formulación del anticuerpo anti-IL-12.

En ciertas modalidades, la formulación de proteína de viscosidad reducida es una formulación de anticuerpo anti-IL-13 de viscosidad reducida. En una modalidad, el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo monoclonal. En otra modalidad, el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo monoclonal humanizado (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal parcialmente humanizado o completamente humanizado) . En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-IL-13 es IMA-638. Los anticuerpos anti-IL-13 generalmente se utilizan en una formulación o una concentración de entre aproximadamente 25 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml. Un agente reductor de viscosidad generalmente se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-IL-13 a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM. En algunas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-IL-13 a una concentración final de entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 25 mM. En ciertas modalidades, el agente reductor se adiciona a una formulación de anticuerpo anti -IL- 13 a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 15 mM. En ciertas otras modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de anticuerpo anti-IL-13 a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y aproximadamente 14 mM. Cuando el agente reductor de viscosidad se adiciona a una formulación de anticuerpo anti- IL-13 a una concentración de entre aproximadamente 0.5 mM a aproximadamente 50 mM, no se utiliza cloruro de sodio y bifosfato de sodio como agentes reductores de viscosidad. Las formulaciones de anticuerpo anti- IL- 13 con viscosidad reducida generalmente tienen un pH de entre aproximadamente 5.5 y aproximadamente 6.5. En una modalidad, se utiliza histidina como amortiguador de pH en una formulación de anticuerpo IL-13 con viscosidad reducida. Las formulaciones de anticuerpo anti-IL-13 con viscosidad reducida también pueden incluir uno o más crioprotectores, uno o más agentes tensioactivos, uno o más anti-oxidantes , o combinaciones de éstos. En ciertas modalidades, la formulación anti- IL- 13 de viscosidad reducida es una formulación reconstituida. Los anticuerpos anti-IL- 13 se pueden formular en una formulación de viscosidad reducida como composiciones farmacéuticas y se utilizan para tratar trastornos tales como, pero no limitándose a, trastornos respiratorios (por ejemplo, asma); trastornos atópicos (por ejemplo, rinitis alérgica); condiciones inflamatorias y/o autoinmunitarias de la piel (por ejemplo, dermatitis atópica), órganos gastrointestinales (por ejemplo, enfermedades el intestino inflamatorias (IBD) ) , así como trastornos fibróticos y cancerígenos. En ciertas modalidades, la formulación del anticuerpo anti-IL-13 de viscosidad reducida es provista como un kit. Los kits pueden incluir instrucciones para uso en la formulación del anticuerpo anti-IL-13 de viscosidad reducida. A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado como se entiende comúnmente por un experto en la técnica al cual pertenece esta invención. Aunque los métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos descritos en la presente se pueden utilizar en la práctica o probar la presente invención, los métodos y materiales adecuados se describen a continuación. Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y otras referencias mencionadas en la presente se incorporan por referencia en su totalidad. Además, los materiales, métodos y ejemplos son ilustrativos solamente y no pretenden ser limitantes . Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la descripción detallada, las figuras y las reivindicaciones. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 es una gráfica que describe los resultados de los experimentos conducidos para determinar el efecto de incrementar las concentraciones de varias sales en la viscosidad de la formulación del anticuerpo anti-mioestatina (MYO-029) . La Figura 2 es una gráfica de barras que describe los resultados de los experimentos conducidos para determinar el efecto de incrementar las concentraciones de cloruro de calcio en la viscosidad de una formulación del anticuerpo de anti-mioestatina (MYO-028) . La Figura 3 es una gráfica que describe los resultados de los experimentos conducidos para determinar el efecto de incrementar las concentraciones de cloruro de calcio en la viscosidad de una formulación de anticuerpo anti-IL-13 (IMA-638) . La Figura 4A es una gráfica de barras que describe los resultados de los experimentos conducidos para probar el efecto de la degradación inducida por la congelación-descongelación del anticuerpo anti-mioestatina (MYO-029) en la presencia o ausencia de cloruro de calcio. La degradación se evaluó a través de la recuperación de la proteína como se determina a través de la medición de la absorbancia a 280 nm. La Figura 4B es una gráfica de barras que describe los resultados de los experimentos conducidos para probar el efecto de la degradación inducida por congelación-descongelación del anticuerpo anti-mioestatina (MYO-029) en la presencia o ausencia de cloruro de calcio. La degradación se evaluó a través del porcentaje de la formación de especies de alto peso molecular (% HMW) determinado por cromatografía de líquido de alto rendimiento-exclusión de tamaño (SEC-HPLC) . La Figura 5A es una gráfica de barras que describe los resultados de los experimentos conducidos para probar el efecto de la presencia o ausencia (control) de cloruro de calcio en la estabilidad líquida del anticuerpo anti-mioestatina (MYO-029) sometido a almacenamiento a 40°C hasta por siete días. La estabilidad líquida del anticuerpo MYO-029 se determinó a través de la medición de la absorbancia a 280 nm. La Figura 5B es una gráfica de barras que describe los resultados de los experimentos conducidos para probar el efecto de la presencia o ausencia (control) de cloruro de calcio en la estabilidad líquida del anticuerpo anti-mioestatina (MYO-029) sometido a almacenamiento a 40°C hasta por siete días. La estabilidad líquida del anticuerpo MYO-029 se determinó a través de la medición de la formación HMW determinado por SEC-HPLC. La Figura 6 es una representación de la secuencia de aminoácido del anticuerpo MYO-028 de cadena pesada (SEC ID NO:l) y la cadena ligera (SEC ID NO: 2). La Figura 7 es una representación de la secuencia de aminoácido del anticuerpo MYO-029 de cadena pesada (SEC ID NO: 3) y la cadena ligera (SEC ID NO : 4 ) . La Figura 8 es una representación de la secuencia de aminoácido del anticuerpo J695 de cadena pesada (SEC ID NO: 5) y de cadena ligera (SEC ID NO: 6) . La Figura 9 es una representación de la secuencia de aminoácido del anticuerpo IMA-638 de cadena pesada (SEC ID N0:7) y de cadena ligera (SEC ID N0:8). El último residuo de aminoácido codificado por la secuencia de ADN de cadena pesada, Lys448, se observa en forma secretada, madura de IMA-638 solamente pequeñas cantidades y presumiblemente se remueve del volumen del anticuerpo monoclonal durante el procesamiento intracelular a través de proteasas celulares CHO. Por consiguiente, el término carboxi del IMA- 638 de cadena pesada es Gly447. El procesamiento de lisina del término carboxi ha sido observado en los anticuerpos recombinantes y derivados de plasma y no parece que tenga impacto sobre sus funciones. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La viscosidad de la formulación de proteína tiene implicaciones para la estabilidad, procesamiento, almacenamiento, y, para aquellos utilizados como fármacos, distribución de fármacos de la formulación de proteína a un paciente. Las implicaciones incluyen, pero no se limitan a la concentración del intercambio de amortiguador de pH a través de ultrafiltración y diafiltración (el flujo a través de la membrana puede disminuir con una viscosidad incrementada por lo tanto dando como resultado tiempos de procesamiento más largos) , filtración estéril (tomó más tiempo filtrar soluciones viscosas estériles, y en algunos casos una solución muy viscosa no pasará a través de las membranas con muy pequeños poros, por ejemplo, membranas de 0.22 µm) , manejo de las muestras (por ejemplo, dificultad con la medición con pipetas y la habilidad de extraerla en una jeringa) , recuperación del almacenamiento del frasco después de la reconstitución, estabilidad, y paso a través de agujas para administración subcutánea o intramuscular. Se proporciona en la presente métodos para reducir la viscosidad de una formulación de proteína que ha sido identificada. Los métodos son adecuados para preparar formulaciones de proteína que tienen una viscosidad reducida ("formulaciones de viscosidad reducida" o "formulaciones de proteína de viscosidad reducida" ) . Estas formulaciones de proteína de viscosidad reducida incluyen una proteína de interés y un agente reductor de viscosidad. Métodos para Reducir la Viscosidad de una Formulación de Proteína El término "viscosidad" como se utiliza en la presente, puede ser "viscosidad cinemática" o "viscosidad absoluta" . "Viscosidad cinemática" es una medición del flujo resistivo del fluido bajo influencia de la gravedad. Cuando se colocan dos fluidos de igual volumen en viscómetros capilares idénticos y se deja fluir a través de gravedad, el fluido viscoso toma más tiempo que el fluido viscoso para fluir a través del capilar. Si uno de los fluidos toma 100 segundos completar su flujo y otro fluido toma 200 segundos, el segundo fluido es dos veces más viscoso que el primero en una escala de viscosidad cinemática. "Viscosidad absoluta" algunas veces denominada "viscosidad dinámica" o "viscosidad simple", son un producto de la viscosidad cinemática y la densidad del fluido. La dimensión de la viscosidad cinemática es L2/T en donde L es una longitud y T es un tiempo. Comúnmente, la viscosidad cinemática se expresa en centistokes (cSt) . La unidad SI de la viscosidad cinemática es mm2/s, en donde es 1 cSt. La viscosidad absoluta se expresa en una unidad de centipoises (cP) . La unidad SI de la viscosidad absoluta es el miliPascal-segundo (mPa-s) , en donde 1 CP=1 mPa-s. La viscosidad de una formulación de proteína se puede reducir a través de la adición de un agente reductor de viscosidad de la formulación. En algunos casos, el agente reductor de viscosidad se adiciona a una concentración relativamente baja. La viscosidad de una formulación que comprende un agente reductor de viscosidad se reduce comparado con la viscosidad de una formulación que carece de agente reductor de viscosidad. Cuando la adición del agente reductor de viscosidad da como resultado la disminución de la viscosidad de la formulación comparado con una formulación correspondiente que no incluye el agente reductor de viscosidad o comparado con una formulación que no incluye el agente reductor de viscosidad a una concentración seleccionada, la formulación que contiene el agente reductor de viscosidad (por ejemplo, en una concentración seleccionada) , la formulación es una formulación con viscosidad reducida. En ciertas formulaciones de viscosidad reducida, el agente reductor de viscosidad generalmente reduce la viscosidad de la formulación de proteína en aproximadamente 5%, aproximadamente 10%, aproximadamente 15%, aproximadamente 20%, aproximadamente 25%, aproximadamente 30%, aproximadamente 35%, aproximadamente 40%, aproximadamente 45%, aproximadamente 50%, aproximadamente 55%, aproximadamente 60%, aproximadamente 65%, aproximadamente 70%, aproximadamente 75%, aproximadamente 80%, aproximadamente 85%, y aproximadamente 90% comparado con la viscosidad de una formulación de proteína sin, o conteniendo cantidades inferiores del agente reductor de viscosidad. En algunos casos, el agente reductor de viscosidad reduce la viscosidad de una formulación de proteína en al menos 5%, al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, y al menos 90% comparado con la viscosidad de una formulación de proteína, sin o conteniendo cantidades inferiores del agente reductor de viscosidad. En ciertas modalidades, la viscosidad de la formulación de proteína se mide antes de la adición del agente reductor de viscosidad. En otras modalidades, la viscosidad de la formulación de proteína se mide después de la adición del agente reductor de viscosidad. Las mediciones se pueden hacer en horas (por ejemplo, 1-23 horas) , días (por ejemplo, 1-10 días) , semanas (por ejemplo, 1-5 semanas) , o meses (por ejemplo, 1-12 meses), o años (por ejemplo, 1-2 años, 1-3 años) después de la adición del agente reductor de viscosidad a una formulación de proteína. Aún en otras modalidades, la viscosidad de la formulación de proteína se mide antes y después de la adición del agente reductor de viscosidad. Los métodos para medir la viscosidad son bien conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, utilizar un viscómetro capilar, o un reómetro con placa de cono. En una modalidad, el agente reductor de viscosidad es una sal tal como cloruro de calcio, cloruro de magnesio, fosfato de sodio o clorhidrato de argininas . En el método descrito en la presente, el agente reductor de viscosidad se adiciona a la formulación de la proteína a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y aproximadamente 100 mM. En una modalidad, el agente reductor de viscosidad se adiciona la formulación de proteína a una concentración final de entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 20 mM. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad se adiciona a la formulación de la proteína a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y 14 mM . En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a la formulación de la proteína a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y no más de 20 mM, o 19 mM, o 18 mM, o 17 mM, o 16 mM, o 15 mM, o 14 mM, o 13 mM, o 12 mM, o 11 mM, o 10 mM. En general, cuando el agente reductor de viscosidad se adiciona a la formulación de proteína a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y aproximadamente 25 mM, el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio o cloruro de magnesio pero no cloruro de sodio, o bifosfato de sodio. En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a concentraciones bajas para así no impactar negativamente la formulación de proteína. Por ejemplo, a concentraciones de cloruro de calcio o cloruro de magnesio de 20 mM o mayor, las proteínas pueden formar un gel a bajas temperaturas en almacenamiento (por ejemplo, 2-8 °C) . Por consiguiente, una concentración de un agente reductor de viscosidad generalmente se selecciona para el cual la viscosidad se reduce al a temperatura de almacenamiento prevista de la formulación de viscosidad reducida. Formulaciones La composición de una formulación de proteína de viscosidad reducida se determina a través de la consideración de varios factores. Estos factores incluyen, pero no se limitan a: la naturaleza de la proteína (por ejemplo, receptor, anticuerpo, proteínas de fusión Ig, enzimas) ; la concentración de la proteína; el intervalo de pH deseado; como se va a almacenar la formulación de la proteína (por ejemplo, temperatura) ; el período de tiempo sobre el cual la formulación de proteína se va a almacenar; y cómo la formulación se va a administrar a un paciente. La selección de un agente reductor de viscosidad apropiado se hace con base, en parte, en los requerimientos para la proteína en la formulación. Proteínas La proteína de interés que se va a formular incluye, pero no se limita a, proteínas tales como, mioestatina/GDF-8 ; interleucinas (ILs), por ejemplo, IL-1 a IL-15; hormonas de crecimiento tales como la hormona de crecimiento humana y la hormona de crecimiento de bovino; factor de liberación de la hormona de crecimiento; hormona paratiroides; hormona estimuladora de la tiroides; uricasa, bicunina, oxidasa de bilirrubina, subtilisina; lipoproteínas a-1-antitripsina; cadena de insulina A; cadena de insulina B proinsulina; hormona estimuladora de folículos; calcitonina hormona leutinizante; glucagon; Factor Vlla; Factor VIII, Factor VIIIC; Factor IX; factor tisular, factor von Willebrand; factores anti-coagulación tales como la proteína C; factor natriuréctico atrial; agente tensioactivo de pulmón; un activador de plasminógeno; tal como urocinasa o activador de plasminógeno de tipo tisular (t-PA) ; bombazina; trombina; plasmita; miniplasmina; microplasmina; factor de necrosis de tumor a y ß; encefalinasa; RANTES (Regulada sobre la Activación Normalmente de célula T Expresada y Secretada) ; proteína inflamatoria de macrófago humano (MIP-1-a) ; albúmina de suero tal como albúmina de suero humano; sustancia inhibidora de Mulerian; cadena de relaxina A; cadena de relaxina B; pro-relaxina; péptido asociado con gonadotropina de ratón; DNase; inhibina; activita; factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF, por sus siglas en inglés) ; factor de crecimiento de placenta (PIFG, por sus siglas en inglés) ; receptores para hormonas o factores de crecimiento; una integrina; proteína A o proteína D; factores reumatoides; un factor neurotrófico tal como el factor neurotrófico derivado del hueso (BDNF), neutrofina-3 , -4, -5, o -6 (NT-3, NT-4, NT-5, o NT- 6) , o un factor de crecimiento de nervios tal como NGF-ß; factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGF, por sus siglas en inglés) ; factor de crecimiento de fibroblasto tal como FGF y bFGF; factor de crecimiento epidérmico (EGF, por sus siglas en inglés) ; factor de crecimiento de transformación (TGF, por sus siglas en inglés) tal como TGF-a y TGF-ß, incluyendo TGF-ß 1, TGF-ß 2, TGF-ß 3, TGF-ß 4, o TGF-ß 5; factor de crecimiento de tipo insulina-I y II (IGF-I y IGF-II) ; des (1-3) -IGF-I (cerebro IGF-I); proteínas de enlace al factor de crecimiento de tipo insulina; proteínas CD tales como: CD2 , CD3 , CD4 , CD8 , CD9, CDl9, CD20, CD22, CD28, CD34, y CD45; eritropoyetina (EPO) ; trombopoyetina (TPO); factores osteoinductores ; inmunotoxinas ; una proteína morfogenética ósea (BMP) ; un interferón tal como interferón a, ß y ?; un factor estimulante de colonia (CSF, por sus siglas en inglés) , por ejemplo, M-CSF, GM-CSF, y G-CSF; dismutasa superóxida; receptores de célula T; miembros de la familia receptora HER tal como el receptor EGF, HER2 , HER3 o HER4 ; moléculas de adhesión celular tal como LFA-1, VLA-4, ICAM-l, y VCAM; IgE; antígenos del grupo sanguíneo; el receptor flk2/flt3; receptor de obesidad (OB, por sus siglas en inglés) ; factor de aceleración de decaimiento (DAF, por sus siglas en inglés) ; un antígeno viral tal como HIV gag, env, pol, tat, o proteínas rev; receptores de habitat; adresinas; inmunoadhesinas; y fragmentos biológicamente activos o variantes de cualquiera de los polipéptidos antes mencionados. En algunas formulaciones, se incluye más de un tipo de proteína o fragmento a la formulación. El término "fragmento biológicamente activo" significa un fragmento de una proteína que retiene por lo menos una de las funciones de la proteína de la cual se deriva. Un fragmento biológicamente activo de un anticuerpo que incluye un fragmento de unión antígeno de anticuerpo; un fragmento biológicamente activo de un receptor incluye un fragmento del receptor que aún se une a su ligando; un fragmento biológicamente activo de un ligando incluye esa porción de ligando que aún se puede unir a su receptor, y un fragmento biológicamente activo de una enzima incluye esa porción de la enzima que aún puede catalizar una reacción catalizada por la enzima de longitud completa. En una modalidad, un fragmento biológicamente activo retiene por lo menos 5% de la función de la proteína a partir de la cual se deriva. La función de una proteína se puede ensayar a través de métodos conocidos en la técnica (por ejemplo, probar las interacciones anticuerpo-antígeno, probar las interacciones ligando-receptor, probar la actividad enzimática, probar la actividad de trascripción, o probar las interacciones de ADN-proteína) . En algunos casos, el fragmento es un fragmento terapéuticamente útil el cual puede, por ejemplo, retener ciertas características de la proteína a partir de la cual se deriva (por ejemplo, unión a un ligando específico) pero no causa la respuesta celular producida por la proteína a partir de la cual se deriva. En ciertas modalidades, la proteína a formularse es un anticuerpo. El anticuerpo puede ser uno que se une a una de las proteínas antes mencionadas. El término "anticuerpo" como se utiliza en la presente, incluye anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales, composiciones de anticuerpo con especificidades de poliepítopo, anticuerpos bioespecíficos , diacuerpos, u otras preparaciones purificadas de anticuerpos y anticuerpos recombinantes. Los anticuerpos pueden ser anticuerpos completos, por ejemplo, cualquier isotipo (IgG, IgA, IgE, IgM, etc.), o fragmento del mismo, que se une al antígeno de interés. En un ejemplo específico de un anticuerpo utilizado en la presente invención, el anticuerpo a ser formulado es un anticuerpo que tiene el isotipo IgG. Los anticuerpos se pueden fragmentar utilizando técnicas convencionales u otras y los fragmentos clasificarse para la unión a un antígeno de interés. Generalmente, un fragmento de anticuerpo comprende el enlace del antígeno y/o la reacción variable de un anticuerpo intacto. De esta forma, el término fragmento de anticuerpo incluye segmentos de porciones proteolíticamente divididas o recombinantemente preparadas de una molécula de anticuerpo que puede selectivamente unirse a una proteína seleccionada. Los ejemplos no limitantes de los fragmentos proteolíticos y/o recombinantes incluyen Fab, F(ab')2, Fab', Fv, y un anticuerpo de cadena individual (scFv) que contiene un dominio V [L] y/o V [H] unido al enlazador del péptido. Los scFvs se pueden enlazar covalente o no covalentemente para formar anticuerpos que tiene dos o más sitios de unión. En algunas modalidades, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal humanizado. El término "anticuerpo monoclonal humanizado" como se utiliza en la presente, es un anticuerpo monoclonal de un origen no humano (receptor) que ha sido alterado para contener por lo menos uno o más de residuos de aminoácidos encontrados en el anticuerpo monoclonal humano equivalente (donador) . Un "anticuerpo monoclonal completamente humanizado" es un anticuerpo monoclonal de una fuente no humana que ha sido alterado para contener todos los residuos de aminoácido encontrados en la región de enlace al antígeno del anticuerpo monoclonal humano equivalente. Los anticuerpos humanizados también pueden comprender residuos que no se encuentran ni en el anticuerpo receptor ni el anticuerpo donador. Estas modificaciones se pueden hacer además para refinar y optimizar la funcionalidad del anticuerpo. Un anticuerpo humanizado también puede opcionalmente comprender por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina humana (Fc) . En ciertas modalidades, el anticuerpo utilizado en una formulación de viscosidad reducida es un anticuerpo anti-mioestatina (por ejemplo, MYO-022, MYO-028 (Figura 6), MYO-029 (Figura 7)). Los anticuerpos MYO-022, MYO-028, y MIO-029 se describen la solicitud de patente de E. U. A. No. 10/688,925 (Pub. No. 2004/0142382), la cual se incorpora aquí por referencia. En otras modalidades, el anticuerpo es un anticuerpo IL-12 (por ejemplo, J695 (Figura 8) ) . El anticuerpo J695 se describe en la patente de E . U. A. No. 6,914,128, que se incorpora aquí por referencia. En aún otra modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo anti-IL-13 (por ejemplo, IMA-638 (Figura 9) , CAT-354) . Los anticuerpos anti-IL-13 se describen la solicitud de patente de E . U. A. No. 11/149,309, que se incorpora aquí por referencia. En algunas modalidades, la proteína que se va a formular es una proteína de fusión. En una modalidad, la proteína de fusión es una proteína de fusión de inmunoglobulina (Ig) . En una modalidad específica, la proteína de fusión comprende la región constante de cadena pesada IgG. En otra modalidad, la proteína de fusión comprende una secuencia de aminoácido que corresponde a la conexión, a las regiones CH2 y CH3 de la inmunoglobulina humana C?l . Los ejemplos de proteínas de fusión Ig incluyen CTLA4 Ig y VCAM2D-IgG. Los métodos para preparar proteínas de fusión son conocidos en la técnica (por ejemplo, Patentes de E. U. A. Nos. 6,887,471 y 6,482,409). En ciertas modalidades, la proteína que se va a formular es una proteína que no incluye un polipéptido del Factor VII, o un anticuerpo anti-IgE. Una formulación de viscosidad reducida puede contener más de una proteína según sea necesario para el tratamiento de un trastorno particular. La(s) proteína (s) adicional típicamente tiene actividades complementarias a otras proteínas en la formulación, y no afecta adversamente la otra(s) proteína (s) en la formulación. Por ejemplo, puede ser deseable proporcionar una sola formulación conteniendo dos o más anticuerpo que se unen a mioestatina; dos o más anticuerpos que se unen a IL-12; o dos o más anticuerpos que se unen a IL-13. Además, una formulación de proteína también puede contener sustancias no de proteína que se utilizan en la utilidad final de la formulación de proteína de viscosidad reducida. Por ejemplo, se puede adicionar sacarosa para mejorar la estabilidad y la solubilidad de la proteína en solución; y se puede adicionar histidina para proporcionar la capacidad amortiguadora de pH apropiada. Las sustancias adicionales pueden ser parte de una formulación de proteína antes de la adición de un agente reductor de viscosidad o la adición en el procedimiento para hacer una formulación de viscosidad reducida. En ciertas modalidades, la proteína a formular es esencialmente pura y/o esencialmente homogénea (es decir, esencialmente libre de proteínas contaminantes, etc.) antes de su uso en la formulación. El término- proteína "esencialmente pura" significa una composición que comprende por lo menos 90% en peso de una fracción de proteína seleccionada, por ejemplo, por lo menos alrededor 95% en peso de la fracción de proteína seleccionada. El término proteína "esencialmente homogénea" significa una composición que comprende por lo menos 99% en peso de una fracción de proteína seleccionada, excluyendo la masa de varios estabilizadores y agua en solución.

Concen tra ción de la Proteína en una Formulación de Baja Vi scosidad La concentración del a proteína en una formulación de viscosidad reducida depende del uso final de la formulación. Las concentraciones de proteína en las formulaciones descritas en la presente están generalmente entre aproximadamente 10 mg/ml y aproximadamente 300 mg/ml, por ejemplo, entre aproximadamente 10 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml, aproximadamente 25 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml, aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml, aproximadamente 75 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml, aproximadamente 100 mg/ml y aproximadamente 200 mg/ml, aproximadamente 125 mg/ml y aproximadamente 200 mg/ml, aproximadamente 150 mg/ml y aproximadamente 200 mg/ml, aproximadamente 200 mg/ml y aproximadamente 300 mg/ml, y aproximadamente 250 mg/ml y aproximadamente 300 mg/ml. Por ejemplo, las concentraciones de proteína en la formulación descrita en la presente pueden estar entre 10 mg/ml y 300 mg/ml, por ejemplo, entre 10 mg/ml y 100 mg/ml, entre 25 mg/ml y 100 mg/ml, entre 50 mg/ml y 100 mg/ml, entre 75 mg/ml y 100 mg/ml, entre 100 mg/ml y 200 mg/ml, entre 125 mg/ml y 200 mg/ml, entre 150 mg/ml y 200 mg/ml, entre 200 mg/ml y 300 mg/ml, y entre 250 mg/ml y 300 mg/ml. El término "entre" pretende ser inclusivo de las concentraciones mínima y máxima.

Las formulaciones de proteína de viscosidad reducida se pueden utilizar para propósitos terapéuticos. Por consiguiente, la concentración de la proteína en una formulación utilizada por una aplicación terapéutica se determina con base en la provisión de la proteína en una dosis y volumen que es tolerado, y de valor terapéutico, para el paciente. Si se va a administrar una formulación de viscosidad reducida a través de inyección, la concentración de proteína dependerá del volumen de inyección (usualmente 1.0 ml-1.2 ml) . Las terapias basadas en proteína pueden requerir varios mg/kg de dosificaciones por semana, por mes, o por varios meses. Por consiguiente, si se va a proporcionar una proteína a 2-3 mg/kg del peso corporal del paciente, y pesos de paciente promedio de 75 kg, serán necesarios 150 mg-225 mg de la proteína para ser suministrados en 1.0 ml-1.2 ml de volumen de inyección. Alternativamente, la formulación es provista en una concentración adecuada para distribuirla en más de un sitio de inyección por tratamiento. Cuando se incrementa la concentración de la proteína en una formulación, la viscosidad de la formulación de la proteína probablemente también se incrementa. La viscosidad incrementada de la formulación hace la formulación más dura de administrar. Por consiguiente, existe la necesidad de disminuir la viscosidad de las formulaciones de proteína cuando la viscosidad incrementada impacta su habilidad para utilizarse. Agentes Reductores de Viscosidad Se ha encontrado que la adición de concentraciones relativamente bajas de ciertos agentes reductores de viscosidad a una formulación de proteína reduce la viscosidad de la formulación de proteína. El término "agente reductor de viscosidad" como se utiliza en la presente, incluye cualquier agente que reduce la viscosidad de una formulación de proteína comparado con una formulación de proteína que no contiene, o que contiene una cantidad menor de, agente reductor de viscosidad. Por ejemplo, un agente reductor de viscosidad generalmente reduce la viscosidad de una formulación de proteína en aproximadamente 5%, aproximadamente 10%, aproximadamente 20%, aproximadamente 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50%, aproximadamente 60%, aproximadamente 70%, aproximadamente 90%, o aproximadamente 95% comparado con la viscosidad de la formulación de la proteína sin, o conteniendo cantidades inferiores de, agente reductor de viscosidad. Por ejemplo, un agente reductor de viscosidad generalmente reduce la viscosidad de la formulación de proteína en 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 90%, o 95%, comparado con la viscosidad de una formulación de proteína sin, o conteniendo cantidad inferiores de, el agente reductor de viscosidad. Los ejemplos no limitantes de agentes reductores de viscosidad incluyen cloruro de calcio, cloruro de magnesio, clorhidrato de arginina, cloruro de sodio, tiocianato de sodio, tiocianato de amonio, sulfato de amonio, fosfato de sodio, y cloruro de amonio. En una modalidad, el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad es cloruro de magnesio. En una modalidad alternativa, se adiciona más de un agente reductor de viscosidad a la formulación de proteína. Un agente reductor de viscosidad generalmente se adiciona a una formulación de proteína a una concentración final de entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 150 mM, por ejemplo, entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM, entre aproximadamente 2 mM y aproximadamente 40 mM, entre aproximadamente 4 mM y aproximadamente 30 mM, entre aproximadamente 4 mM y aproximadamente 25 mM, entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 20 mM, entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 25 mM, entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 30 mM, entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 40 mM, y entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 50 mM. En ciertas modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a la formulación de proteína a una concentración final menor de 14 mM, menor de 13, mM, menor de 12 mM, menor de 11 mM, menor de 10 mM, menor de 9 mM, menor de 8 mM, menor de 7 mM, menor de 6 mM, menor de 5 mM, menor de 4 mM, menor de 3 mM, o menor de 2 M. En otras modalidades, el agente reductor de viscosidad se adiciona a la formulación de proteína a una concentración de entre 0.5 mM y 14 mM, entre 0.5 mM y 13 mM, entre 0.5 mM y 12 mM, entre 0.5 y 11 mM, entre 0.5 mM y 10 mM, entre 0.5 mM y 9 mM, entre 0.5 mM y 8 mM, entre 0.5 mM y 7 mM, entre 0.5 mM y 6 mM, o entre 0.5 mM y 5 mM. En una modalidad, el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio o una concentración final de entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 20 mM en la formulación. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio a una concentración de entre 5 mM y aproximadamente 14 mM en la formulación. En otras modalidades, el agente reductor de viscosidad es cloruro de magnesio a una concentración final de entre aproximadamente 5 mM y aproximadamente 20 mM en la formulación. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad es cloruro de magnesio o una concentración final de entre 5 mM y aproximadamente 14 mM en la formulación. La viscosidad de una formulación de proteína se puede medir a través de cualquier método adecuado conocido en la técnica incluyendo, por ejemplo, el uso de un viscómetro capilar o un reómetro de placa cónica. Amortiguadores de pH El término "amortiguador de pH" como se utiliza en la presente, incluye aquellos agentes que mantienen el pH en una solución, por ejemplo, una formulación, en un intervalo deseado. El pH de una formulación como se describe en la presente está generalmente entre aproximadamente un pH de 5.0 a aproximadamente 9.0, por ejemplo, un pH de aproximadamente 5.5 a aproximadamente 6.5, aproximadamente un pH de 5.5 a aproximadamente 6.0, aproximadamente un pH de 6.0 a aproximadamente 6.5, pH 5.5 , pH 6.0 , o pH 6.5. En general, se utiliza un amortiguador de pH que puede mantener una solución a un pH de 5.5 a 6.5. Los ejemplos no limitantes de amortiguadores de pH que se pueden utilizar en una formulación descrita en la presente incluyen, histidina, succinato, gluconato, tris ( trometamol) , fosfato, citrato, ácido 2-morfolinetansulfónico (MES), fosfato de sodio, acetato de sodio, y cacodilato. La histidina es un amortiguador de pH que está típicamente en las formulaciones de viscosidad reducida que no se administran a través de inyección subcutánea, intramuscular o peritoneal. La concentración del amortiguador de pH está entre aproximadamente 5 mM y 30 mM. En una modalidad, el amortiguador de pH de una formulación es histidina a una concentración de aproximadamente 5 mM y aproximadamente 20 mM. Excipientes En la adición a la proteína, el agente reductor de viscosidad, y un amortiguador, una formulación de viscosidad reducida como se describe en la presente también puede contener otras sustancias. Las sustancias incluye, pero no se limitan a, crioprotectores, lioprotectores , agentes tensioactivos, agentes de volumen, anti -oxidantes, y agentes estabilizadores. En una modalidad, una formulación de proteína de viscosidad reducida descrita en la presente incluye excipientes seleccionados del grupo que consiste de crioprotector, un lioprotector, un agente tensioactivo, un agente de volumen, un anti-oxidante, un agente estabilizador, y combinaciones de éstos. El término "crioprotector" como se utiliza en la presente, incluye agentes que proporcionan estabilidad a la proteína en una formulación contra las tensiones inducidas por congelación, por ejemplo, siendo preferiblemente excluida de la superficie de proteína. Los crioprotectores también pueden ofrecer protección durante el secado primario y secundario y el almacenamiento del producto a largo plazo. Los ejemplos no limitantes de crioprotectores incluyen azúcares, tales como sacarosa, glucosa, trehalosa, manitol, mañosa, y lactosa; polímeros, tales como de dextrina, almidón de hidroxietilo y polietilenglicol; agentes tensioactivos, tales como polisorbatos (por ejemplo, PS-20 o PS-80) ; y aminoácidos, tales como glicina, arginina, leucina, y serina. Generalmente se utiliza un crioprotector que exhibe baja toxicidad en sistemas biológicos. Un crioprotector, si se incluye en la formulación, generalmente se adiciona a una concentración final de entre aproximadamente 0.1% y aproximadamente 10% (peso/volumen) , por ejemplo entre aproximadamente 0.5% y aproximadamente 10%, entre aproximadamente 0.5% y aproximadamente 5%, entre aproximadamente 0.5% y aproximadamente 2%, entre aproximadamente 1% y aproximadamente 5%, o entre aproximadamente 5% y aproximadamente 10%. En una modalidad, el crioprotector es sacarosa a una concentración de entre aproximadamente 0.5% y aproximadamente 10% (peso/volumen). En una modalidad, un lioprotector se adiciona a una formulación descrita en la presente. El término "lioprotector" como se utiliza en la presente, incluye agentes que proporcionan estabilidad a la proteína durante el procedimiento de liofilización o deshidratación (ciclos de liofilización primaria y secundaria) , por ejemplo proporcionando una matriz vitrea amorfa y a través de la unión con la proteína a través de enlace de hidrógeno, que reemplaza las moléculas de agua que se remueven durante el proceso de secado. Esto ayuda a mantener la conformación de la proteína, minimiza la degradación de la proteína durante el ciclo de liofilización, y mejora la estabilidad del producto a largo plazo. Los ejemplos no limitantes de lioprotectores incluyen azúcares, tales como sacarosa o trehalosa; un aminoácido, tal como glutamato monosódico, lisina o histidina no cristalina; una metilamina tal como betaína; una sal lioprótica, tal como sulfato de magnesio; un poliol, tal como alcoholes de azúcar trihídricos o superiores, por ejemplo, glicerina, eritritol, glicerol, arabitol, xilitol, sorbitol, y manitol; propilenglicol; polietilenglicol; plurónicos; y combinaciones de éstos. La cantidad de lioprotector adicional a la formulación es generalmente una cantidad que no conduce a una cantidad inaceptable de degradación/agregación de la proteína cuando se liofiliza a la formulación de proteína. Cuando el lioprotector es una azúcar (tal como sacarosa o trehalosa) y la proteína es un anticuerpo, los ejemplos no limitantes de concentraciones de lioprotector en una formulación de proteína de viscosidad reducida son de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 400 mM, de aproximadamente 30 mM a aproximadamente 300 mM, y de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 100 mM. En ciertas modalidades, un agente tensioactivo se incluye en una formulación descrita en la presente. El término "agente tensioactivo" como se utiliza aquí, incluye agentes que reducen la tensión de superficie de un líquido a través de la adsorción de la interfaz de airea-líquido. Los ejemplos de agentes tensioactivos incluyen, sin limitación, agentes tensioactivos no iónicos, tales como polisorbatos (por ejemplo, polisorbato 80 o polisorbato 20) ; poloxámeros (por ejemplo, poloxámero 188) ; Tritón™ (por ejemplo, Triton™X-100) ; dodecil sulfato de sodio (SDS) ,- octal glicosida de sodio; lauril-sulfobetaína; miristil-sulfobetaína; linoleil- sulfobetaína; estearil-sulfobetaína lauril-sarcosina; miristil-sarcosina; linoleil-sarcosina estearil-sarcosina; linoleil-betaína; miristil-betaína cetil-betaína; lauroamidopropil-betaína; cocamidopropil-betaína; linoleamidopropil-betaína; miristamidopropil-betaína, palmidopropil-betaína, isoestearamidopropil-betaína (por ejemplo, lauroamidopropilo) ; miristarnidopropil- , palmidopropil- , o isoestearamidopropil-dimetilamina; metil cocoil de sodio, o metil ofeil-taurato disódico; y las series Monaquat™ (Mona Industries, Inc., Paterson, N. J.); polietil glicol; polipropil glicol; y copolímeros de glicol de etileno y propileno (por ejemplo, plurónicos, PF68) . La cantidad de agente tensioactivo adicionado es tal que mantiene la agregación de la proteína reconstruida en un nivel aceptable como se ensaya utilizando por ejemplo, SEC-HPLC para determinar el porcentaje de especies de alto peso molecular (HMW, por sus siglas en inglés) o especies de bajo peso molecular (LMW, por sus siglas en inglés) , y minimiza la formación de partículas después de la reconstitución de un liofilato de una formulación de proteína descrita en la presente. Por ejemplo, el agente tensioactivo puede estar presente en una formulación (líquida o antes de la liofilización) en una cantidad de aproximadamente 0.001-0.5%, por ejemplo, de aproximadamente 0.05-0.3%. En algunas modalidades, el agente de volumen se incluye en una formulación de viscosidad reducida. El término "agente de volumen" como se utiliza en la presente, incluye agentes que proporcionan la estructura del producto liofilizado sin interactuar directamente con el producto farmacéutico. Además de proporcionar una torta farmacéuticamente elegante, los agentes de volumen también pueden impartir calidades útiles con respecto a la modificación de la temperatura de colapso, proporcionar protección de congelado-descongelado y mejorar la estabilidad de la proteína en almacenamiento a largo plazo. Los ejemplos no limitantes de agentes de volumen incluyen manitol, glicina, lactosa y sacarosa. Los agentes de volumen pueden cristalinos (por ejemplo, como glicina, manitol, o cloruro de sodio) o amorfos (tal como dextrina o almidón de hidroxietilo) y generalmente se utilizan en formulaciones de proteína en una cantidad de 0.5% a 10%. Otros portadores, excipientes, o estabilizadores farmacéuticamente aceptables, tales como aquellos descritos en Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20a edición, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2000) también se pueden incluir a una formulación de proteína descrita en la presente, siempre que no afecten adversamente las características deseadas de la formulación. Los portadores, excipientes, o estabilizadores aceptables son no tóxicos a los receptores (por ejemplo, pacientes) a dosificaciones y concentraciones utilizadas e incluyen: agentes amortiguadores de pH adicionales; conservadores, co-solventes ; antioxidantes, incluyendo ácido ascórbico y metionina; agentes quelatadores tales como EDTA; complejos metálicos (por ejemplo, complejos de proteína Zn) ; polímeros biodegradables, tales como poliésteres; contraiones formadores de sal, tales como sodio, alcoholes de azúcar polihídricos; aminoácidos, tales como alanina, glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, lisina, ornitina, leucina, 2-fenilalanina, ácido glutámico, y trionina; azúcares orgánicos o alcoholes de azúcar, tales como lactitol, estaquiosa, mañosa, sorbosa, xilosa, ribosa, ribitol, mioinisitosa, mioinisitol, galactosa, galactitol, glicerol, ciclitoles (por ejemplo, inositol), polietilenglicol; agentes reductores que contienen azufre, tales como urea, glutationa, ácido tióctico, tioglicolato de sodio, tioglicerol, a-monotioglicerol , y tiosulfato de sodio; proteínas de bajo peso molecular, tales como albúmina de suero humano, albúmina de suero de bovino, gelatina u otras inmunoglobulinas; y polímeros hidrofílicos, tal como polivinilpirrolidona.

Formula ciones de Proteina Il us tra tivas MYO-029 En un ejemplo, se puede formular una formulación de viscosidad reducida MYO-029 utilizando 1 mg/ml a 300 mg/ml del anticuerpo MYO-029. La formulación MYO-029 generalmente incluye entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM de cloruro de calcio o cloruro de magnesio. La formulación puede incluir aproximadamente 5 mM a aproximadamente 25 mM de histidina. La formulación puede incluir aproximadamente 1% a aproximadamente 5% (p/v) de sacarosa o trehalosa. En algunos casos, la formulación puede incluir de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 25 mM de metionina. En ciertas formulaciones MYO-029, se adiciona 0.05-0.2% (p/v) de polisorbato-20 o polisorbato-80. El pH de la formulación está generalmente entre 5.5 y 6.5. En un ejemplo específico, la formulación MYO-029 comprende 150 mg/ml del anticuerpo MYO-029, 10 mM de cloruro de calcio o cloruro de magnesio, 20 mM de histidina, 4% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. En otro ejemplo específico, la formulación MYO-029 comprende 75 mg/ml del anticuerpo MYO-029, 5 mM de cloruro de calcio o cloruro de magnesio, 10 mM de histidina, 10 mM de metionina, 2% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. En otro ejemplo específico, una formulación del anticuerpo MYO-029 comprende 150 mg/ml del anticuerpo MYO-029, 10 mM de cloruro de magnesio o de cloruro de calcio, 20 mM de histidina, 20 mM de metionina, 4% de sacarosa, 0.2% de polisorbato- 80 , y tiene un pH de 6.0. MYO-028 Las formulaciones de viscosidad reducida MYO-028 se pueden formular utilizando 1 mg/ml a 300 mg/ml del anticuerpo MYO-028. La formulación MYO-028 generalmente incluye entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM de cloruro de calcio o cloruro de magnesio. La formulación puede incluir aproximadamente 5 mM a aproximadamente 25 mM de histidina. La formulación puede incluir aproximadamente 1% a aproximadamente 5% (p/v) de sacarosa o trehalosa. En algunos casos, la formulación puede incluir de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 25 mM de metionina. El pH de una formulación MYO-028 está generalmente entre aproximadamente 5.5 y 6.5. En un ejemplo específico, una formulación del anticuerpo MYO-028 comprende 50 hs mg/ml del anticuerpo, 10 mM de histidina, 5% de sacarosa, y tiene un pH de 6.5. En otro ejemplo específico, una formulación del anticuerpo MYO-028 comprende 50 mg/ml del anticuerpo, 10 mM de cloruro de calcio o de cloruro de magnesio, 10 mM de histidina, 5% de sacarosa, y tiene un pH de 6.5. J695 Las formulaciones de viscosidad reducida J695 se pueden formular utilizando 1 mg/ml a 300 mg/ml del anticuerpo J695. Una formulación J695 generalmente incluye entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM de cloruro de calcio o de cloruro de magnesio. La formulación puede incluir aproximadamente 5 mM a aproximadamente 25 mM de histidina. La formulación puede incluir entre aproximadamente 1% a aproximadamente 5% (p/v) de sacarosa o trehalosa. En algunos casos, la formulación puede incluir aproximadamente 10 mM a aproximadamente 25 mM de metionina. En ciertas formulaciones J695, entre aproximadamente 1% a aproximadamente 5% (p/v) de manitol se adiciona. El pH de la formulación generalmente está entre 5.5 y 6.5. En un ejemplo específico, la formulación del anticuerpo J695 comprende 100 mg/ml del anticuerpo J695, 10 mM de histidina, 10 mM de metionina, 4% de manitol, 1% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. En otro ejemplo específico, una formulación de anticuerpo J695 comprende 100 mg/ml del anticuerpo J695, 10 mM de histidina, 10 mM de metionina, 5 mM de metionina, 5 mM de cloruro de calcio o cloruro de magnesio, 4% de manitol, 1% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. En otra modalidad específica, la formulación del anticuerpo J695 comprende 100 mg/ml del anticuerpo J695, 10 mM de histidina, 10 mM de metionina, 10 mM de cloruro de calcio o cloruro de magnesio, 4% de manito, 1% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. IMA- 638 Las formulaciones de la proteína IMA-638 se pueden formular utilizando 1 mg/ml a 300 mg/ml del anticuerpo IMA-638. Una formulación de viscosidad reducida que contiene IMA- 638 generalmente incluye entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 50 mM de cloruro de calcio o de cloruro de magnesio. La formulación puede incluir aproximadamente 5 mM a aproximadamente 25 mM de histidina. La formulación también puede incluir entre aproximadamente 1% a aproximadamente 10% (p/v) de sacarosa o trehalosa. El pH de la formulación generalmente está entre 5.5 y 6.5. En un ejemplo específico, la formulación del anticuerpo IMA- 638 comprende 50 mg/ml del anticuerpo IMA-638, 10 mM de histidina, 10 mM de metionina, 5% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. En otro ejemplo específico, la formulación de anticuerpo IMA-638 comprende 100 mg/ml del anticuerpo IMA-638, 20 mM de histidina, 10% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. En otro ejemplo específico, la formulación del anticuerpo IMA- 638 comprende 50 mg/ml del anticuerpo IMA- 638, 5 mM de cloruro de calcio o cloruro de magnesio, 10 mM de histidina, 10% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. En aún otro ejemplo específico, la formulación del anticuerpo IMA- 638 comprende 100 mg/ml del anticuerpo IMA-638, 10 mM de cloruro de calcio o de cloruro de magnesio, 20 mM de histidina, 10% de sacarosa, y tiene un pH de 6.0. Métodos de Almacenamiento Una formulación de proteína de viscosidad reducida descrita en la presente se puede almacenar a través de cualquier método adecuado conocido por un experto en la técnica. Los ejemplos no limitantes de métodos para preparar una formulación de viscosidad reducida para almacenamiento incluyen congelación, liofilización, y secado por aspersión de la formulación de proteína. En algunos casos, una formulación de viscosidad reducida se congela para almacenamiento. Por consiguiente, es deseable que la formulación sea relativamente estable en las condiciones, incluyendo cuando se somete a ciclos de congelación-descongelación. Un método para determinar la viabilidad de una formulación para almacenamiento congelada es someter una formulación de muestra a por lo menos 2, por ejemplo, de tres a diez ciclos de congelado (a, por ejemplo -20°C o -80°C) y descongelar (por ejemplo, a través de descongelación rápida a temperatura ambiente o descongelación lenta sobre hielo) , determinando la cantidad de especies LMW y/o especies HMW que se acumulan después de los sitios de congelación-descongelación y comparar la cantidad de especies LMW o especies HMW presentes en la muestra antes del procedimiento de congelación-descongelación. Un incremento en las especies LMW o en las especies HMW indica una estabilidad disminuida de la proteína almacenada como parte de la formulación. La cromatografía líquida o de alto rendimiento de exclusión de tamaño (SEC-HPLC) se puede utilizar para determinar la presencia de especies LMW y HMW. Una formulación adecuada puede acumular especies HMW o especies LMW indeseables, pero al grado que la presencia de las especies HMW o las especies LMW conviertan a la formulación en inadecuada para su uso previsto. En algunos casos, una formulación se almacena como un líquido. Por consiguiente, es deseable que la formulación líquida sea relativamente estable bajo las condiciones, incluyendo a varias temperaturas . Un método para determinar la viabilidad de una formulación para almacenamiento líquido es almacenar la formulación de muestra a varias temperaturas (tal como 2-8°C, 15°C, 20°C, 25°C, 30°C, 35°C, 40°C, y 50°C) y monitorear la cantidad (por ejemplo, el cambio en el porcentaje) de las especies HMW y/o especies LMW que se acumulan a través del tiempo. Adicionalmente, el perfil de carga de la proteína puede monitorearse a través de cromatografía líquida de alto rendimiento- intercambio de catión (CEX-HPLC) . En general, el porcentaje de las especies de alto peso molecular o de las especies de bajo peso molecular se determina ya sea como un porcentaje del contenido de proteína total en una formulación o como un cambio en el incremento del porcentaje a través del tiempo (es decir, durante almacenamiento) según sea apropiado para el ensayo del parámetro que se está determinando. En general, y en los ejemplos no limitantes, el cambio en el porcentaje de la proteína en especies de alto peso molecular o especies de bajo peso molecular en una formulación de viscosidad reducida no es mayor de 10%, por ejemplo, no más de aproximadamente 8%, no más de aproximadamente 5%, o no más de aproximadamente 3% con respecto al parámetro ensayado (por ejemplo, tiempo, temperatura, compuestos adicionales en la formulación, liofilización o agitación) . Alternativamente, una formulación se puede almacenar después de la liofilización. El término "liofilización" como se utiliza aquí, se refiere a un procedimiento a través del cual el material que se va a secar primero se congela seguido por la remoción del hielo o el solvente congelado a través de sublimación en un entorno al vacío. Un excipiente (por ejemplo, lioprotector) se puede incluir en la formulación que se va a liofilizar para así mejorar la estabilidad del producto liofilizado en almacenamiento. El término "formulación reconstituida" como se utiliza en la presente, se refiere a una formulación que ha sido preparada a través de disolución de una formulación de proteína liofilizada en un diluyente de tal forma que la proteína se dispersa en el diluyente. El término "diluyente" como se utiliza en la presente, es una sustancia que es farmacéuticamente aceptable (segura y no tóxica para administración a un ser humano) y es útil para la preparación de una formulación líquida, tal como una formulación reconstituida después de la liofilización. Los ejemplos no limitantes de diluyentes incluyen agua estéril, agua bacteriostática para inyección (BWFI) , una solución regulada en su pH (por ejemplo, salina regulada en su pH con fosfato) , solución salina estéril, solución de Ringer, solución de dextrosa, o soluciones acuosas de sales y/o amortiguadores de pH. La prueba de una formulación de viscosidad reducida para la estabilidad del componente de proteína de la formulación después de la liofilización es útil para determinar la viabilidad de una formulación. El método es similar al descrito anteriormente para congelamiento, excepto que la formulación de muestra se liofiliza en lugar de congelarse, se reconstituye utilizando un diluyente y la formulación reconstituida se prueba para la presencia de las especies LMW y/o especies HMW. Un incremento en las especies LMW o especies HMW en la muestra liofilizada comparado con una formulación de muestra correspondiente que no se liofilizó indica una estabilidad disminuida en la muestra liofilizada . En algunos casos, se secó por aspersión una formulación y después se almacenó. Para el secado por aspersión, una formulación líquida se convierte en aerosol en la presencia de una corriente de gas seco. El agua se remueve de las gotículas de la formulación en una corriente de gas, dando como resultado partículas secadas de la formulación de fármaco. Los excipientes se pueden incluir en la formulación para (1) proteger la proteína durante la deshidratación del secado por aspersión, (2) proteger la proteína durante almacenamiento después del secado por aspersión, y/o (3) dar a la solución propiedades adecuadas para la aerosolización. El método es similar al descrito anteriormente para congelación, excepto que la formulación de muestra se seca por aspersión en lugar de congelar, se reconstituye en un diluyente y la formulación reconstituida se prueba para la presencia de especies LMW y/o especies HMW. Un incremento en las especies LMW o HMW en la muestra secada por aspersión comparada con una formulación de muestra correspondiente que no se liofilizó indica una estabilidad disminuida en la muestra secada por aspersión. Métodos de Tratamiento Las formulaciones de viscosidad reducida descritas en la presente son útiles como composiciones farmacéuticas en el tratamiento y/o prevención de enfermedades o trastornos en un paciente en la necesidad del mismo. El término "tratamiento" se refiere tanto a tratamiento terapéutico y profiláctico como tratamiento preventivo. El tratamiento incluye la aplicación o administración de la formulación de viscosidad reducida al cuerpo, un tejido aislado, una célula de un paciente que tiene un trastorno, un síntoma de un trastorno, que está en riesgo de un trastorno, o una predisposición hacia un trastorno, con el propósito de curar, sanar, aliviar, liberar, alterar, remediar, disminuir, mejorar, o afectar el trastorno, el síntoma del trastorno, o la predisposición hacia el trastorno. Aquellos "en la necesidad de tratamiento" incluyen aquellos que ya tienen un trastorno, así como aquellos en donde el trastorno se va a evitar. El término "trastorno" es cualquier condición que podría beneficiarse del tratamiento con una formulación de proteína descrita en la presente. Esto incluye trastornos o enfermedades crónicas y agudas incluyendo aquellas condiciones patológicas que predisponen al sujeto (paciente) al trastorno en cuestión. Los ejemplos no limitantes de trastornos a ser tratados utilizando una formulación descrita en la presente incluyen trastornos autoinmunitarios , trastornos inflamatorios, trastornos de desgaste muscular, alergias, cánceres, distrofia muscular, sarcopenia, caquexia, diabetes de tipo II, artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, psoriasis, artritis psoriática, asma, dermatitis, rinitis alérgica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, eosinofilia, fibrosis, y exceso de producción de moco. En una modalidad, la formulación de viscosidad reducida adecuada para uso como una composición farmacéutica comprende un anticuerpo anti -mioestatina, y un agente reductor de viscosidad. En una modalidad, el anticuerpo anti-mioestatina es MYO-029. En otras modalidades, el anticuerpo anti-mioestatina es MYO-022 o MYO-028. El anticuerpo anti- mioestatina generalmente está a una concentración de aproximadamente 0.5 mg/ml y aproximadamente 300 mg/ml en la formulación. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad está a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y 20 mM en la composición farmacéutica. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad está a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y 14 mM en la composición farmacéutica. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un anticuerpo anti-mioestatina, un agente reductor de viscosidad, y un amortiguador de pH en donde el pH de la formulación está entre aproximadamente 5.5 a aproximadamente 6.5. Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente también pueden contener otras proteínas, fármacos, y/o excipientes. En particular, otras proteínas o sustancias útiles para tratar el trastorno en cuestión se pueden adicionar a la formulación. Las composiciones farmacéuticas que contienen el anticuerpo de anti-mioestatina son útiles en el tratamiento o prevención de trastornos tales como, pero no lo limitándose a, trastorno de desgaste muscular, distrofia muscular, sarcopenia, caquexia, y diabetes de tipo II. En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un anticuerpo anti -IL- 12 y un agente reductor de viscosidad. En una modalidad, el anticuerpo anti- IL- 12 es J695. El anticuerpo anti-IL-12 generalmente está a una concentración de entre aproximadamente 0.5 mg/ml y aproximadamente 300 mg/ml en la formulación. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad está a una concentración de entre aproximadamente 0.5 mM y 20 mM en la composición farmacéutica. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad está a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y 14 mM en la composición farmacéutica. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un anticuerpo anti-IL- 12, un agente reductor de viscosidad, y un amortiguador de pH, en donde el pH de la formulación estando entre aproximadamente 5.5 a aproximadamente 6.5. Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente también pueden contener otras proteínas, fármacos, y/o excipientes. En particular, las otras proteínas o sustancias útiles para tratar el trastorno en cuestión se pueden adicionar a la formulación. Las composiciones farmacéuticas que contienen el anticuerpo anti-IL-12 son útiles en el tratamiento o prevención de trastornos tales como, pero no limitándose a, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades inflamatorias, artritis reumatoide, enfermedad Crohn, psoriasis, y artritis psoriática . En otra modalidad, una composición farmacéutica comprende un anticuerpo anti-IL-13 y un agente reductor de viscosidad. En una modalidad, el anticuerpo anti-IL-13 es IMA-638. El anticuerpo anti-IL-13 generalmente está a una concentración de entre aproximadamente 0.5 mg/ml y aproximadamente 300 mg/ml en la formulación. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad está a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y 20 mM en la composición farmacéutica. En otra modalidad, el agente reductor de viscosidad está a una concentración final de entre aproximadamente 0.5 mM y 14 mM en la composición farmacéutica. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un anticuerpo anti-IL-13, un agente reductor de viscosidad, y un amortiguador de pH, en donde el pH de la formulación estando entre aproximadamente 5.5 a aproximadamente 6.5. Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente también pueden contener otras proteínas, fármacos, y/o excipientes. En particular, las otras proteínas o sustancias útiles para tratar el trastorno en cuestión se pueden adicionar a la formulación. Las composiciones farmacéuticas que contienen el anticuerpo anti-IL-13 son útiles en el tratamiento o prevención de trastornos tales como, pero no limitándose a, trastornos asmáticos, trastornos atópicos, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, condiciones que involucran inflamación de las vías aéreas, eosinofilia, fibrosis, y exceso de producción de moco, condiciones inflamatorias, condiciones autoinmunitarias, tumores y cánceres, e infección viral.

Administración Una formulación de viscosidad reducida descrita en la presente se puede administrar a un sujeto en la necesidad del tratamiento utilizando métodos conocidos en la técnica, tales como a través de bolos o infusiones simples o múltiples durante un período largo de tiempo en una forma adecuada, por ejemplo, inyección o infusión a través de administración subcutánea, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intraarterial, intralesional , o intraarticular, administración tópica, inhalación, o a través de medios de liberación sostenida o liberación extendida. Si la formulación ha sido liofilizada, el material liofilizado primero se reconstituye en un líquido apropiado antes de la administración. El material liofilizado se puede reconstituir en, por ejemplo, BWFI, salina regulada en su pH con fosfato, o la misma formulación de proteína que ha estado antes en la liofilización. Las composiciones parenterales se pueden preparar en forma de dosificación unitaria para la fácil administración y la uniformidad de dosificación. "Forma unitaria de dosificación" como se utiliza aquí, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto que se va a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de un compuesto activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico seleccionado. En el caso del método de inhalación, tal como un inhalador de dosis medida, el dispositivo se designa para distribuir una cantidad apropiada de una formulación. Para administración a través de inhalación, los compuestos se suministran en la forma de una aspersión por aerosol desde un contenedor presurizado o dispensador que contiene un propulsor adecuado, por ejemplo, un gas, tal como dióxido de carbono, o un nebulizador. Alternativamente, la forma de dosificación inhalada puede ser provista como un polvo seco utilizando un inhalador de polvo seco. Una formulación de viscosidad reducida también se puede atrapar en microcápsulas preparadas, por ejemplo, a través de técnicas de conservación o a través de polimerización interfacial, por ejemplo cápsulas de hidroximetilcelulosa o gelatina y microcápsulas de poli (metilmetacilato) , respectivamente, en sistemas de distribución de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas , y nanocápsulas) o en macroemulsiones . Las técnicas se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a. edición { supra ) . Las preparaciones de liberación sostenida de las formulaciones de proteína descritas en la presente también pueden prepararse. Los ejemplos adecuados para preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semi-permeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen la formulación de proteína. Los ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli (2-hidroxietil-metacrilato) , o poli (vinilalcohol) ) , polilactidas, copolímeros de ácido L-glutámico y ?-etil-L-glutamato, acetato de etilenvinilo no degradable, copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables, y ácido poli-D-( - ) -3 -hidroxibutírico . Las formulaciones de liberación sostenida de las proteínas descritas en la presente se pueden desarrollar utilizando polímero de ácido poliláctico-coglicólico (PLGA) debido a su biocompatibilidad y amplio intervalo de propiedades biodegradables . Los productos de degradación de PLGA, ácido láctico y glicólico, se pueden aclarar rápidamente dentro del cuerpo humano. Además, la degradación de este polímero puede ajustarse de meses a años dependiendo de su peso molecular y composición. Las composiciones liposómicas también se pueden utilizar para formular las proteínas o anticuerpos descritos en la presente . Dosifi ca ción La toxicidad y la oficia terapéutica de una formulación se puede determinar a través de procedimientos farmacéuticos conocidos en la técnica utilizando, por ejemplo, cultivos de células o animales experimentales, por ejemplo, para la determinación de LD50 (dosis letal a 50% de la población) y el ED50 (dosis terapéuticamente efectiva en 50% de la población) . La relación de dosis entre los efectos tóxico y terapéutico es el índice terapéutico, y puede expresarse como la relación LD50/ED50. Los datos obtenidos de los ensayos de cultivo celulares y estudios animales se pueden utilizar en la formulación de un intervalo de dosificación para uso en seres humanos. La dosificación de las formulaciones generalmente se basa dentro de un intervalo de concentraciones en circulación que incluye el ED50 con nada o poca toxicidad. La dosis puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación utilizada y la ruta de administración utilizada. Para cualquier formulación utilizada en el método de la invención, la dosis terapéuticamente efectiva se puede estimar inicialmente a partir de los ensayos de cultivo celulares. Una dosis se puede formular en modelos de animales para lograr un intervalo de concentración en plasma en circulación que incluye el IC50 (es decir, la concentración del compuesto de prueba que logra una inhibición máxima media de los síntomas) como se determina en el cultivo celular. La información se puede utilizar para determinar más precisamente las dosis útiles en seres humanos. Los niveles en el plasma se pueden medir, por ejemplo, a través de cromatografía líquida de alto rendimiento. La dosificación apropiada de la proteína de la formulación dependerá del tipo del trastorno a tratar, la severidad y curso del trastorno, si el agente se administra para propósitos preventivos o terapéuticos, la terapia previa, el historial clínico del paciente, y la respuesta al agente, y la discreción del médico que atiende. Una formulación generalmente se suministra de tal forma que la dosificación está entre 0.1 mg proteína/kg de peso corporal a 100 mg de proteína/kg de peso corporal. La formulación se administra al paciente una sola vez o durante series de tratamiento. En una modalidad, la formulación del anticuerpo de miostatina (por ejemplo, MYO-22, MYO-28, MYO-029) se suministra al paciente en la necesidad del mismo a una dosificación de 1 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal. En otra modalidad, una formulación del anticuerpo IL-12 se administra a un paciente en la necesidad del mismo a dosificación de 1 Sf/kg a 5 mg/kg de peso corporal. En una modalidad más, una formulación del anticuerpo IL-13 se administra a un paciente en la necesidad del mismo a una dosificación de aproximadamente 0.5 mg/kg a aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal del paciente. Una formulación a ser utilizada en la administración in vivo debe ser estéril. Una formulación puede convertirse en estéril por ejemplo, a través de filtración a través de membranas de filtración estériles, antes de, o después de, la formulación de un líquido o liofilización y reconstitución. Las composiciones terapéuticas descritas en la presente generalmente se colocan en un contenedor que tiene un puerto de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa de solución intravenosa, o un frasco que tiene un obturador perforable a través de una aguja de inyección hipodérmica. Artículos de Fabricación En otra modalidad, un artículo de fabricación es provisto conteniendo una formulación descrita en la presente y típicamente proporciona instrucciones para su uso. El artículo de fabricación comprende un contenedor adecuado para contener la formulación. Los contenedores adecuados incluyen, sin limitación, botellas, frascos (por ejemplo, frascos de cámara doble), jeringas (por ejemplo, jeringas de cámara individual o doble) , tubos de ensayo, nebulizadores, inhaladores (por ejemplo, inhaladores de dosis medida o inhaladores de polvo seco), o depósitos. El contenedor se puede formar de una variedad de materiales, tales como vidrio, metal o plástico (por ejemplo, policarbonato, poliestireno, polipropileno) , el contenedor mantiene la formulación y la etiqueta sobre o asociada con, el contendor que indica las direcciones para la reconstitución y/o uso. La etiqueta además puede indicar que la formulación es útil o prevista para administración subcutánea. El contenedor que controla formulación puede ser un frasco multiuso, que permite administraciones repetidas (por ejemplo, 2-6 dosis) de la formulación. El artículo de fabricación puede además comprender un segundo contenedor que comprende un diluyente adecuado (por ejemplo, WFI, 0.9% de NaCl, BWFI , o salina regulada en su pH con fosfato) . Cuando el artículo de fabricación comprende una versión liofilizada de una formulación de proteína, la mezcla de un diluyente con la formulación liofilizada proporcionará una concentración de proteína final en la formulación reconstituida de generalmente por lo menos 20 mg/ml. El artículo de fabricación además puede incluir otros materiales deseables de un punto de vista comercial y de usuario, incluyendo otros amortiguadores de pH, diluyentes, filtros, agujas, jeringas, insertos de paquete con instrucciones para uso. La invención además se ilustra a través de los siguientes ejemplos. Los ejemplos son provistos para propósitos ilustrativos solamente. No están construidos como limitantes del alcance o contenido de la invención en ninguna forma . EJEMPLOS Ejemplo 1 Viscosidad de Formulaciones de Anticuerpo Se formularon los anticuerpos del péptido anti-ß-amiloideo (anti-AB) , anti-IL-13, anti-IL-12 (J695) y anti-mioestatina (MYO-029) como se describe en la Tabla 1. La viscosidad de estas formulaciones de anticuerpo se midió utilizando un reómetro de cono y placa Antón Paar Physica MCR301. Específicamente, se utilizó un cono CP25-1 (24.971 mm de diámetro, ángulo de 1.002°) para todas las mediciones; la velocidad del esfuerzo constante fue constante a 898 l/s con una duración de 100 segundos. Las mediciones se hicieron cada 10 segundos. Las mediciones de la viscosidad se llevaron a cabo tanto a 4°C como 25°C utilizando una unidad de control de temperatura Peltier automática. La muestra líquida cargada en la placa fue de 90 µl. Cada muestra se analizó por triplicado . La Tabla 1 siguiente enumera las viscosidades de diferentes anticuerpos a diferentes concentraciones en diferentes formulaciones.

Los datos mostrados en la Tabla 1 demuestran que la viscosidad de anti-mioestatina (MYO-029) es significativamente mayor comparado con los otros anticuerpos enumerados en la Tabla. Las viscosidades para todos los otros anticuerpos se incrementaron a 4°C. Este incremento es proporcionalmente mucho más alto para MYO-029. Ejemplo 2 Efecto de Varias Sales en la Viscosidad de una Formulación de Anticuerpo MYO-029 Se formuló una formulación de anticuerpo MYO-029, a una concentración de 10 mM de histidina, 2% de sacarosa, pH 6.0. Las soluciones concentradas de sales (por ejemplo, cloruro de calcio, cloruro de magnesio, cloruro de sodio, y bifosfato de sodio) se diluyeron en la formulación de anticuerpo MYO-29 utilizando una pipeta. El efecto de estas sales sobre la viscosidad de la formulación de anticuerpo MYO-29 se midió como se describe en el Ejemplo 1. Estos datos se muestran en la Fig. 1. Tanto MgCl2 como CaCl2 a concentraciones en la escala de alrededor de 5 mM a aproximadamente 20 mM redujeron significativamente la viscosidad de la formulación de anticuerpo MYO-29. NaCl y NaH2P04 por el otro lado, tuvieron muy poco efecto en esta escala. De esta forma el cloruro de calcio y cloruro de magnesio, a concentraciones de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 20 mM, son agentes reductores de viscosidad efectivos para las formulaciones de anticuerpo MYO-29, a diferencia de cloruro de sodio y bifosfato de sodio. Ejemplo 3 Efecto del Cloruro de calcio en una Formulación de Anticuerpo J695 La formulación de anticuerpo J695 se midió a dos diferentes concentraciones del anticuerpo J695, es decir, 100 mg/ml y 300 mg/ml. La viscosidad de la formulación del anticuerpo J695 a una concentración más alta será más alta que la viscosidad de la formulación del anticuerpo J695 a una concentración menor. Se agregó cloruro de calcio a una concentración final de aproximadamente 5 mM a 20 mM a la formulación del anticuerpo J695 de 300 mg/ml J695. En este caso la viscosidad de la formulación del anticuerpo se esperó que se disminuyera en comparación con la formulación de J695 sin cloruro de calcio. Por consiguiente, el cloruro de calcio, a concentraciones de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 20 mM, es efectiva como un agente reductor de la viscosidad para las formulaciones del anticuerpo J695. Ejemplo 4 Efecto del cloruro de calcio en la viscosidad de una Formulación del Anticuerpo MYO-028 Se concentró otro anticuerpo anti-mioestatina MYO- 028 utilizando Centricon Ultrafree®-4 a una concentración de 95 mg/ml. Se agregó cloruro de calcio a MYO- 028 de acuerdo con la Tabla 2 siguiente: Tabla 2 MYO- 028 se formuló a 95 mg/ml en 10 mM de histidina, 5% de sacarosa, pH 6.5. La solución de CaCl2 consistió de 10 mM de histidina, 2% de sacarosa, 2M de CaCl2. La solución amortiguadora de pH consistió de 10 mM de histidina, 5% de sacarosa, pH 6.5. La viscosidad de estas formulaciones del anticuerpo MYO-028 se midieron utilizando el mismo método del reómetro como se describe en el Ejemplo 1 con el uso adicional de una trampa de solvente para evitar la evaporación, una carga demuestra líquida de 100 µl de MYO- 028 en la placa, y la prueba se realizó a temperatura ambiente. Los datos de estos experimentos se muestran en la Fig. 2. La adición de CaCl2 disminuyó la viscosidad de la formulación del anticuerpo MYO- 028 a 25 mM y 50 mM de CaCl2 comparado con una formulación de MYO- 028 sin CaCl2. Estos datos demuestran la viabilidad de CaCl2 para uso como un agente para reducir la viscosidad de una formulación de proteína, por ejemplo para formular una formulación de anticuerpo de viscosidad reducida. Ejemplo 5 Efecto de Cloruro de Calcio en la Viscosidad de una Formulación de Anticuerpo IMA-638. Para ensayar el efecto del cloruro de calcio en la viscosidad de una formulación de anticuerpo IMA- 638, se agregaron diferentes cantidades de cloruro de calcio con una pipeta a alícuotas del anticuerpo IL-13, IMA-638. Las alícuotas del anticuerpo IMA- 638 tuvieron una concentración de proteína de aproximadamente 150 mg/ml. La Fig. 3 proporciona una descripción gráfica del efecto del cloruro de calcio en la viscosidad de las formulaciones de proteína IMA- 638. La viscosidad de IMA-638 no mostró la misma reducción en la viscosidad como se observó para MYO- 029.

Estos datos demuestran un método para identificar un agente reductor de viscosidad adecuado para utilizarse con una formulación de proteína. Ejemplo 6 Efecto del Cloruro de Calcio en la Estabilidad del Anticuerpo MYO-029 La adición de un compuesto (es decir, un agente reductor de viscosidad, por ejemplo CaCl2) a una formulación de proteína podría afectar potencialmente la estabilidad de la molécula hacia la tensiones inducidas por la congelación/descongelación. Este efecto podría ser ya sea perjudicial, benéfico, o no tener efecto en la estabilidad de la proteína durante la congelación/descongelación. Para evaluar el efecto de un agente (es decir, CaCl2) en la degradación inducida por congelación/descongelación del anticuerpo MYO-029, la molécula se sometió a 10 ciclos de descongelamiento a -80°C y 37°C, en presencia o ausencia de 5 mM de CaCl2. La sustancia de fármaco MYO-029 se formuló en 10 mM de histidina, 2% de sacarosa, en presencia o ausencia de cloruro de calcio a través de ultra-filtración y diafiltración. La concentración de la proteína final fue de aproximadamente 75 mg/ml. Se congelaron veinte microlitros de alícuotas a -80°C y se descongelaron a temperatura ambiente. Esto se repitió durante 5 y 10 ciclos de congelación/descongelación. Las muestras se diluyeron 25 veces con amortiguador de pH de formulación y se analizaron midiendo la absorbancia a 280 nm para la concentración de la proteína y SEC-HPLC para el porcentaje de productos con alto peso molecular (% de HMW) . El efecto de la degradación inducida por congelación/descongelación se evaluó mediante (i) recuperación de proteína (absorbancia a 280 nm) , y (ii) porcentaje de formación de alto peso molecular (% de HMW) determinada por cromatografía líquida de alto rendimiento- exclusión de tamaño (SEC-HPLC) . La formación HMW es la trayectoria de degradación más común para estas moléculas. Los resultados de estos estudios se muestran en la Fig. 4A y Fig. 4B. Comparada con la muestra de control correspondiente sin CaCl2, la adición de 5 mM de CaCl2 a la formulación no tuvo ningún efecto en la recuperación de la proteína o el % de formación de HMW. De esta forma, la adición de cloruro de calcio parece que no tiene impacto en la estabilidad de la formulación de anticuerpo MYO-29. Esto indica que la estabilidad de CaCl2 para uso como un agente reductor de la viscosidad en una formulación de proteína, por ejemplo, en una formulación de anticuerpo de viscosidad reducida.

Ejemplo 7 Efecto de cloruro de calcio en la estabilidad de una formulación de anticuerpo MYO-29 La adición de CaCl2 a una formulación de proteína podría afectar potencialmente la estabilidad líquida de las moléculas con el tiempo. Este efecto podría ser ya sea perjudicial, benéfico, o no tener efecto sobre la estabilidad de la proteína durante almacenamiento. Para evaluar el efecto de este agente en la estabilidad líquida de MYO- 029 en degradación inducida con calor, las formulaciones que contienen MYO- 029 se sometieron a almacenamiento a 50°C hasta por siete días. Las alícuotas se recolectaron a varios puntos en el tiempo y se analizaron para la concentración de la proteína mediante absorbancia a 280 nm y el % de HMW se analizó a través de SEC- HPLC. Los datos se muestran en la Fig. 5A y la Fig. 5B . Comparado con la muestra de control, la adición de CaCl2 en la formulación no tuvo un efecto negativo en la estabilidad de la proteína en el estado líquido almacenada a 50°C. El porcentaje de HMW en la sustancia de fármaco también parece ser ligeramente menor en el material que contiene CaCl2. Estos datos además demuestran la viabilidad del uso de CaCl2 como un agente reductor de la viscosidad. También demuestran un método para determinar la viabilidad de un agente que reduce la viscosidad de una formulación de proteína, por ejemplo, con respecto a si el agente tiene un efecto en la estabilidad de la formulación de proteína. Ejemplo 8 Efecto del Cloruro de Calcio en la Estabilidad de MYO-029 Liofilizado La adición de un agente tal como CaCl2 a una formulación de proteína podría afectar potencialmente las formas de dosificación liofilizadas de la proteína con el tiempo. Este efecto podría ser ya sea perjudicial, benéfico o no tener efecto sobre la estabilidad de la proteína durante almacenamiento. Para evaluar el efecto de este excipiente en la estabilidad de MYO- 029 liofilizado, una formulación conteniendo la molécula, se liofilizó tanto con cómo sin 5 mM de CaCl2 (control) y se sometió a almacenamiento a 50°C y 4°C durante cuatro semanas. Los frascos se extrajeron semanalmente y se analizaron para la concentración de la proteína mediante absorbancia a 280 nm, porcentaje de HMW mediante SEC-HPLC, y distribución de carga mediante cromatografía líquida de alto rendimiento- intercambio de catión (CEX-HPLC) . El volumen extraído y la viscosidad (un punto en el tiempo solamente) también se midieron. A. Viscosidad del Producto de Fármaco Reconsti tuido La viscosidad del producto de fármaco MYO- 029 (que se midió sustancialmente en la misma forma como en el Ejemplo 1) a aproximadamente 150 mg/ml se redujo cuando estuvieron presentes 5 mM de cloruro de calcio en la formulación. B. Vol umen Extraído del Frasco La cantidad de producto de fármaco que se puede remover del frasco con una jeringa de lml y aguja de 21 G se mejoró cuando está presente CaCl2 en la formulación. C. Concen tra ción de Proteína Comparado con el control, la adición de CaCl2 a la formulación no afecta la recuperación de la proteína. D. Al to Peso Molecular Cinco mM de CaCl2 no tendrán ningún efecto significativo en el porcentaje de especies HMW que se forman después de cuatro semanas en almacenamiento a 4°C. Sin embargo, a 50°C, el grado de formación de HMW se espera que sea significativamente reducido comparado con el control. E. Dis tribución de Carga Los puntos en el tiempo de estabilidad se analizaron por CEX-HPLC, una herramienta cromatográfica utilizada para estudiar las diferencias de carga en las proteínas. En In CEX-HPLC, las moléculas más negativamente cargadas se eluyen antes que las moléculas más positivamente cargadas. Este método se utiliza para detectar la desamidación de residuos de asparagina para ya sea ácido aspártico o iso-aspártico. La desamidación da como resultado un incremento en la carga negativa neta de la proteína, y se eluirá antes a partir de la columna HPLC. En este experimento, se investigó el efecto del cloruro de calcio sobre la degradación de la proteína dando como resultado un cambio de carga diferente del control. Comparado con el control sin cloruro de calcio, se espera que ocurran los mismos cambios de carga con el tiempo. De esta forma, se espera que CaCl2 no tenga efecto sobre la distribución de carga de MYO- 029 a ambas temperaturas de almacenamiento. En resumen, comparado con la muestra de control, la adición de CaCl2 a una formulación no tendrá un efecto negativo significativo en la estabilidad de la proteína en la formulación con relación al control experimental sin cloruro de calcio en el estado liofilizado cuando se almacena a 4°C y 50°C. En algunos casos, se encontró que el CaCl2 es benéfico para la estabilidad de la proteína. OTRAS MODALIDADES Se entiende que ya que la invención ha sido descrita junto con la descripción detallada de la misma, la descripción anterior pretende ilustrar y no limitar el alcance de la invención, la cual se define por el alance de las reivindicaciones anexas. Otros aspectos, ventajas, y modificaciones están dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES
Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1.- Un método para reducir la viscosidad de una formulación de proteína, caracterizado porque comprende: (a) proporcionar una formulación de proteína; y (b) agregar cloruro de calcio o cloruro de magnesio a la formulación de proteína a una concentración de aproximadamente 0.5 mM y aproximadamente 20 mM, en donde la viscosidad de la formulación de proteína con el cloruro de calcio o cloruro de magnesio se reduce comparada con la viscosidad de la formulación de proteína sin el agente de reducción de viscosidad. 2. - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la proteína se selecciona del grupo que consiste de un anticuerpo, una proteína de fusión Ig, un receptor, un factor de trascripción, una enzima, un ligando, y un fragmento biológicamente activo del mismo.
3. - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la proteína es un anticuerpo o un fragmento biológicamente activo del mismo.
4. - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la proteína es una proteína de fusión ig-
5. - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la proteína es un anticuerpo y el anticuerpo es un anticuerpo anti-mioestatina, un anticuerpo anti-IL-12, o un anticuerpo anti-IL-13.
6. - El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el anticuerpo anti-mioestatina es MYO-029, en donde el anticuerpo anti-IL-12 es J695, y en donde el anticuerpo anti-IL-13 es IMA-638.
7. - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la viscosidad de la formulación de proteína se reduce a través de al menos aproximadamente 5% comparado con la viscosidad de la formulación en la ausencia del agente reductor de viscosidad.
8.- Una formulación de viscosidad reducida, caracterizada porque comprende: (i) una proteína; (ii) un agente reductor de viscosidad a una concentración de entre aproximadamente 5 MM y aproximadamente 20 mM en la formulación, en donde el agente reductor de viscosidad no es cloruro de sodio o bifosfato de sodio; y (iii) un amortiguador de pH; en donde el pH de la formulación es de aproximadamente 5.5-6.5.
9. - La formulación de viscosidad reducida de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la proteína se selecciona del grupo que consiste de un anticuerpo, una proteína de fusión Ig, un receptor, un factor de trascripción, una enzima, un ligando, y fragmentos biológicamente activos de los mismos.
10.- El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la proteína es un anticuerpo o un fragmento biológicamente activo del mismo.
11.- El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la proteína es una proteína de fusión Ig.
12. - La formulación de proteína de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio, o cloruro de magnesio.
13.- Una formulación de anticuerpo anti-mioestatina, caracterizada porque comprende: (i) un anticuerpo anti-mioestatina, o un fragmento de unión a mioestatina del mismo; (ii) un agente reductor de viscosidad; y (iii) un amortiguador de pH, en donde el pH de la formulación es de aproximadamente 5.5-6.5.
14. - El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el anticuerpo anti-mioestatina es un anticuerpo monoclonal.
15. - El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el anticuerpo anti-mioestatina es un anticuerpo monoclonal humanizado.
16.- El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el anticuerpo anti-mioestatina se une a la miostatina con un Kd de aproximadamente 6 X 10"11 M determinado por Biacore™.
17. - El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el anticuerpo anti-mioestatina se selecciona del grupo que consiste de MYO- 022, MYO- 028, y MYO-029.
18. - El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el anti-mioestatina en la formulación está a una concentración de aproximadamente 25 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml.
19.- El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio o cloruro de magnesio.
20.- El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio a una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 20 mM.
21.- El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el amortiguador de pH es amortiguador de pH de histidina a una concentración en la formulación de aproximadamente 4 mM a aproximadamente 60 mM.
22.- El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la formulación además comprende un crioprotector .
23. - El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el crioprotector es sacarosa o trehalosa a una concentración en la formulación de aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% (peso/volumen) .
24. - El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la formulación además comprende un agente tensioactivo a una concentración en la formulación de aproximadamente 0% a 0.2% (peso/volumen) .
25.- El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el agente tensioactivo es polisorbato-20 o polisorbato-80.
26.- El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la formulación además comprende un anti-oxidante .
27.- El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el anti-oxidante es metionina, y la concentración de metionina en la formulación está entre aproximadamente 2 mM y aproximadamente 20 mM.
28.- La formulación del anticuerpo anti-mioestatina de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque: (i) el anticuerpo anti-mioestatina es un anticuerpo de anti-mioestatina completamente humanizado en la concentración de aproximadamente 20 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml; (ii) el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio o cloruro de magnesio a una concentración de aproximadamente 20 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml; y (iii) el amortiguador es amortiguador de pH de histidina a una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 20 mM; en donde el pH de la formulación es aproximadamente 6.0.
29.- La formulación de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque está liofilizada.
30.- La formulación de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque la viscosidad de la formulación se reduce en al menos aproximadamente 5% comparada con una formulación que carece de agente reductor de viscosidad.
31.- Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo que consiste de distrofia muscular, sarcopenia, caquexia, y diabetes de tipo II, caracterizada porque comprende una formulación de anticuerpo anti-mioestatina de la reivindicación 9.
32.- Un método para tratar un trastorno seleccionado del grupo que consiste de distrofia muscular, sarcopenia, caquexia, y diabetes de tipo II, el método caracterizado porque comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de una formulación de anticuerpo que comprende : (i) un anticuerpo de anti-mioestatina o un fragmento de unión a mioestatina del mismo; (ii) un agente reductor de viscosidad; y (iii) un amortiguador de pH, en donde el pH de la formulación es de aproximadamente 5.5-6.5.
33. - El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la formulación del anticuerpo se administra a través de inyección, infusión intravenosa, o administración pulmonar a través de un nebulizador o como un polvo seco .
34. - Un kit caracterizado porque comprende un contenedor que contiene la formulación de conformidad con la reivindicación 1.
35.- El kit de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque además comprende direcciones para la administración de la formulación.
36.- Un método para reducir la viscosidad de una formulación de proteína, el método caracterizado porque comprende : (i) proporcionar una formulación de proteína; y (ii) agregar un agente de reducción de viscosidad a la formulación de proteína, en donde el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio o cloruro de magnesio, y en donde la concentración del agente reductor de viscosidad en la formulación está entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 25 mM.
37.- Un método para identificar una formulación de proteína de viscosidad reducida, el método caracterizado porque comprende : (i) proporcionar una formulación de proteína; (ii) agregar un agente reductor de viscosidad a la formulación de proteína, en donde el agente reductor de viscosidad es cloruro de calcio o cloruro de magnesio, y en donde la concentración del agente reductor de viscosidad en la formulación está entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 25 mM, por lo tanto formando una formulación de viscosidad reducida potencial; y (iii) determinar la viscosidad de la formulación de proteína de viscosidad reducida potencial, en donde cuando la viscosidad de la formulación de proteína de viscosidad reducida potencial se reduce comparado con la viscosidad de la formulación de proteína sin el agente reductor de viscosidad, la formulación es una formulación de viscosidad reducida.
38.- El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el método además comprende determinar la estabilidad de la formulación de proteína.
39.- El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el método además comprende determinar la estabilidad de la formulación de proteína.
40.- El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la estabilidad de la formulación de proteína se determina después de la congelación-descongelación de la formulación de proteína, después del almacenamiento de la formulación de proteína a 50 °C durante 1-7 días, o después de la liofilización.
41.- El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la estabilidad se determina ensayando el porcentaje de especies de alto peso molecular, y porcentaje de especies de bajo peso molecular, o la distribución de la carga de la formulación de proteína comparado con un control .