MX2008006673A - Metodo para acoplar polipeptidos que se enlazan a la queratina con moleculas efectoras que soportan grupos carboxilicos o grupos de acido sulfonico - Google Patents
Metodo para acoplar polipeptidos que se enlazan a la queratina con moleculas efectoras que soportan grupos carboxilicos o grupos de acido sulfonicoInfo
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Abstract
La invención se refiere a un método para producir moléculas efectoras que se enlazan a la queratina y productos intermediarios y productos finales del método inventivo y al uso de las moléculas efectoras que se enlazan a la queratina, que se producen de acuerdo con el método inventivo, en dermocosméticos.
Description
MÉTODO PARA ACOPLAR POLIPÉPTIDOS QUE SE ENLAZAN A LA QUERATINA CON MOLÉCULAS EFECTORAS QUE SOPORTAN GRUPOS CARBOXÍLICOS O
GRUPOS DE ÁCIDO SULFÓNICO CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a un método para producir moléculas efectoras de enlace a queratina, y a los intermediarios y productos finales del método de acuerdo con la invención y al uso de las moléculas efectoras de enlace a queratina producidas de acuerdo con la invención en la dermocosmética. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las células de los vertebrados comprenden filamentos, de los cuales un grupo de construye de queratinas. Las proteínas específicas, tales como, por ejemplo, la desmoplaquina o la placofilina 1, se enlazan a estas queratinas, lo cual también ocurre en el cabello, la piel y las uñas de los dedos y las uñas de los pies, por medio de un motif o porción de secuencia especifica, un así llamado dominio de enlace a queratina
(Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L, Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermedíate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus . , Mol Biol Cell. Mayo del 2003; 14 (5) : 1978-92. Epub 26 de enero del 2006; Hopkinson SB, Jones
JC., The N-terminus of the transmembrane protein BP180 interacts with the N-terminal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of the hemidesmosome, Mol Biol Cell. Enero del 2000; 11 (1) :277-86) ; Smith E.A., Fuchs E., Defining the Interactions Between Intermedíate Filaments and Desmosomes, The Journal of Cell Biology, Volumen 141, 1998) . La piel humana está sometida a ciertos procesos de envejecimiento, algunos de los cuales se pueden atribuir a procesos intrínsecos (envejecimiento inducido por la edad) y algunos de los cuales se pueden atribuir a factores exógenos
(ambientales, por ejemplo, envejecimiento producido por luz solar) . Además, pueden surgir cambios temporales o persistentes en la apariencia de la piel, tales como el acné, piel grasosa o seca, rosácea, reacciones fotosensibles, in lamatorias, eritematosas, alérgicas o autoinmunes, tales como dermatosis y fotodermatosis . Los factores exógenos incluyen, en particular, fuentes de radiación solar, o artificiales con un espectro comparable, y también los radicales libres o compuestos iónicos los cuales pueden surgir como resultado de la radiación. Estos factores también incluyen el humo del cigarro y los compuestos radiactivos presentes en el mismo, tal como el ozono, los radicales libres, el oxígeno singulete y otros compuestos de
reactivos de oxígeno o nitrógeno los cuales trastornan la fisiología natural de la piel. En Alemania, desde 1968 el ozono total se ha reducido en términos generales justo por debajo del 10%, o alrededor de 3% por década. En el mismo periodo, la radiación UV ha aumentado aproximadamente 15%. La radiación UV-B que provoca quemaduras de sol, con aproximadamente 300 nm de longitud de onda tienen la mayor efectividad de cáncer. Esta aumenta el riesgo de enfermarse con el así llamado cáncer de piel no melanoma (espinalioma o cáncer epidermoide o cáncer basocelular. En este sentido, el riesgo de los tumores aumenta con el número de quemaduras solares. En particular, la exposición a UV en los primeros diez años de vida (quemaduras solares en el caso de niños) tiene influencia sobre el riesgo de cáncer. De acuerdo con los estimados de la HO, cada año dos millones de personas en todo el mundo se enferman de carcinomas basocelulares y carcinomas epidermoides de la piel y aproximadamente 200,000 de melanoma. En Alemania, el número de casos nuevos de cáncer de piel es de aproximadamente 120,000, de los cuales el 7 por ciento son melanomas. Cada año en Alemania, aproximadamente 1600 muertas se pueden atribuir a melanomas o al cáncer de piel no melanoma (Arztezeitung 5.17.2000) Para prevenir y tratar los daños y las enfermedades
citados arriba, y también para el cuidado y el tratamiento embellecedor de la piel, el cabello, y las uñas de las manos y las uñas de los pies, existe una necesidad siempre creciente para nuevos ingredientes y productos y para métodos de aplicación novedosa de los mismos. La solicitud de patente Alemana con el archivo de referencia DE 102005011988.3 describe el uso de dominios de enlace a queratina en preparaciones cosméticas. La solicitud de patente internacional con el archivo de referencia PCT/EP/05/005599 revela que los dominios de enlace a queratina también se pueden asociar con moléculas efectoras. Un objetivo de la presente invención era proporcionar nuevos tipos de compuestos para ingredientes activos dermocosméticos para la aplicación a la piel, el cabello las uñas de las manos y las uñas de los pies, y también los métodos para la producción de los mismos. Ventajosamente, se debían identificar los compuestos para ingredientes activos los cuales tuviesen una propiedad de enlace a queratina y además fueran adecuados para producir formulaciones o preparaciones cosméticas y/o dermocosméticas . Además, un objetivo de la presente invención era identificar los compuestos adecuados los cuales se pudiesen acoplar a un polipéptido con propiedades de enlace a la queratina vía un enlace covalente. En particular, un objetivo de la presente
invención era proporcionar un método de aplicación novedoso para los ingredientes activos dermocosméticamente . Además el objetivo era proporcionar un método para aumentar el tiempo de residencia de un ingrediente dermocosméticamente activo sobre la piel, el cabello, las uñas de las manos y las uñas de los pies . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En una primera modalidad, la invención se refiere a un método para producir moléculas efectoras de enlace a queratina asociando las moléculas efectoras (i) dirigiendo al menos un grupo carboxilo o ácido sulfónico a un polipéptido de enlace a queratina (ii) usando una molécula enlazadora (iii) la cual tiene al menos dos funcionalidades de acoplamiento las cuales pueden entrar en los enlaces elegidos del grupo que consiste de enlaces de amida, tioéster, éster, éster de ácido sulfónico y sulfonamida, y (a) un primer paso de acoplamiento, en primer lugar la molécula efectora (i) se enlaza a la molécula enlazadora (iii) vía el grupo carboxilo o ácido sulfónico por medio de un enlace de éster o sulfonamida, y (b) en otro paso de acoplamiento, el producto de la reacción de (a) se acopla con el polipéptido de enlace a queratina (ii) por medio de una funcionalidad de acoplamiento aun libre de la molécula enlazadora (iii) .
En una modalidad adicional de la invención, el acoplamiento de acuerdo con la invención de la molécula enlazadora (iii) con la molécula (i) efectora tiene lugar por medio de una reacción de esterificación mediada por carbodiimida. En una modalidad preferida de la invención la molécula efectora (i) usada en el método de acuerdo con la invención, se elige del grupo que consiste de tintes, agentes fotoprotectores, vitaminas, provitaminas, carotenoides, antioxidantes y desintegradores de peróxido. En una modalidad particularmente preferida, se usan polipéptidos de enlace a queratina (ii) los cuales tienen una afinidad de enlace por la queratina de la piel, el cabello o las uñas humanas. Preferiblemente, el polipéptido de enlace a queratina
(ii) usado de acuerdo con la invención comprende (a) (a) al menos una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170 o
(b) un polipéptido el cual es al menos 40% idéntico con al menos una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126,128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170 y es capaz de enlazarse a la queratina. Preferiblemente, el polipéptido de enlace a queratina (ii) usado de acuerdo con la invención tiene una afinidad de enlace con la queratina de la piel, el cabello o las uñas humanas y preferiblemente puede ser codificado por una molécula de ácido nucleico que comprende al menos una molécula de ácido nucleico elegida del grupo que consiste de: a) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales codifican los polipéptidos que comprenden las secuencias mostradas en la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170;
(b) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales comprenden al menos un polinucleótido de las secuencias mostradas en la SEC ID No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 o 169; c) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales codifican un polipéptido de acuerdo con las secuencias SEC ID
No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166,168 O 170; d) las moléculas de ácidos nucleicos con una secuencia del ácido nucleico que corresponde a al menos una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161,
163, 165, 167 o 169 o una molécula de ácido nucleico derivada de los mismos por substitución, eliminación o inserción, la cual codifica un polipéptido el cual es al menos 40% idéntica con al menos una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170 y que es capaz de enlazarse a la queratina; e) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales codifican un polipéptido el cual se reconoce por un anticuerpo monoclonal dirigido hacia un polipéptido el cual es codificado por las moléculas de ácidos nucleicos de acuerdo con (a) a (c); f) las moléculas de ácidos nucleicos que codifican una proteína de enlace a la queratina, la cual bajo condiciones severas, se híbrida con una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) ; g) las moléculas de ácido nucleico que codifican una proteína de enlace a la queratina la cual se puede aislar de un banco de ADN usando una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) o partes o fragmentos de la misma de al
menos 15 nt , preferiblemente 20 nt, 30 nt , 50 nt, 100 nt , 200 nt o 500 nt, como sondas bajo condiciones de hibridación severas, y h) moléculas de ácidos nucleicos las cuales se pueden producir por la retro-traducción una de las secuencias de aminoácidos mostradas en la secuencias SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170. En el método de acuerdo con la invención son más preferidas las moléculas enlazadoras (iii) de acuerdo con la fórmula general 1
Fórmula 1
donde "n" es un entero entre 0 y 20 e Y es un grupo hidroxi o amino . Los grupos amino pueden ser grupos amino primarios o secundarios . En una modalidad particularmente preferida de la presente invención, la molécula enlazadora (ii) es un
maleimidoalcanol, de manera particularmente muy preferida maleimidopentanol . En una modalidad preferida adicional de la presente invención, este es un método en el cual i) el polipéptido de enlace a la queratina usado comprende una de las secuencias mostradas en la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78,. 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170 y j) la molécula enlazadora (iii) usada es maleimidopentanol, y k) la molécula efectora (i) usada es ácido 2-(4-N,N-dialquilamino-2 -hidroxi) benzoilbenzoico, donde los grupos alquilo usados son, independientemente unos de otros, cadenas alquídicas de C1-C6 ramificadas o no ramificadas o cadenas cicloalquídicas de C3-C10. Los ejemplos de los radicales alquilo adecuados son: metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, 3-metilpentilo, ciclopropilo, ciciohexilo, 1-etilciclopropilo o ciclodecilo. Se da preferencia particular al uso del ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2) -hidroxibenzoilbenzoico .
La invención también se refiere a moléculas efectoras de enlace a la queratina, donde las moléculas efectoras (i) se acoplan directamente al polipéptido de enlace a la queratina por medio de moléculas enlazadoras (iii) y las moléculas enlazadoras (iii) no son una maleimida, el polipéptido (ii) de enlace a la queratina no corresponde a la SEC ID No.: 166 y las moléculas efectoras (ii) no son un tinte fluorescente. En una modalidad preferida, está es una molécula efectora la cual comprende, como el polipéptido de enlace a la queratina (ii) , un polipéptido o proteína que comprende una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID No.: 2,4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170, como la molécula (iii) se usó maleidopentanol y la molécula efectora (i) es ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxi) benzoilbenzoico o derivados de ácido 2- (4-N,N-dialquilamino-2-hidroxi) benzoilbenzoico (como se describe arriba). La invención proporciona además el uso en dermocos éticos, de las moléculas efectoras de enlace a la queratina descritas arriba de acuerdo con la invención, donde
los dermocosméticos preferidos particularmente a ser mencionados son: composiciones para protección de la piel, composiciones para cuidado de la piel, composiciones para limpieza de la piel, composiciones para protección del cabello, composiciones para cuidado del cabello, composiciones para limpieza del cabello, colorantes para el cabello, composiciones para el cuidado de las uñas de las manos y de las uñas de los pies y cosméticos decorativos. La invención proporciona además compuestos de la fórmula 2,
Fórmula 2
Donde "n" corresponde a un entero entre 0 y 20. La presente invención proporciona además dermocosméticos que comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina producidas de acuerdo con el método descrito arriba, donde el polipéptido de enlace a la queratina (ii) no corresponde a la SEC ID No. : 166. Definiciones Para los propósitos de la presente invención, "anticuerpos" son las proteínas las cuales los humanos y los vertebrados que tienen mandíbulas, producen para protegerse
contra los antígenos (patógenos infecciosos o materiales biológicos extraños para el cuerpo) . Estos son un constituyente central del sistema inmune de los eucariotas superiores y son secretados por una clase de corpúsculos blancos de la sangre, las células B. Estas se producen en la sangre y en el líquido extracelular de los tejidos. Para los propósitos de la presente invención, "retro-traducción" significa la traducción de una secuencia proteínica en una secuencia de ácido nucleico que codifica esta proteína. La retro-traducción es por lo tanto un proceso para decodificar una secuencia de aminoácidos en la secuencia de ácido nucleico correspondiente a esta. Los métodos convencionales se basan en crear tablas de uso de codones específicos del organismo, los cuales se producen por comparaciones de secuencias asistidas por computadora. Usando las tablas de uso de codones es posible determinar los codones usados más frecuentemente por un cierto aminoácido para un organismo específico. La retro-traducción de proteínas se puede llevar a cabo usando programas de computadora los cuales son conocidos por las personas experimentadas en la técnica y generados específicamente para este propósito (Andrés Moreira y Alejandro Maass. TIP: protein retro-traducción aided by genetic algorithms. Bioinformatics, Volumen 20, Número 13 Pp . 2148-2149 (2004); G Pesóle, M Attimonelli, y S Liuni . A retro-
traducción method based on codon usage strategy. Nucleic Acids Res. 11 de marzo de 1988; 16(5 pt A): 1715-1728). Los "grupos carboxi" , denominados también como ácidos carboxílicos, en conexión con la descripción de "moléculas efectoras que contienen grupos carboxilo" significa grupos COOH libres o grupos carboxilo los cuales permiten que las moléculas que contienen estos grupos COOH sean enlazados covalentemente a otras moléculas vía una reacción de esterificación o una reacción de formación de amida. Para los propósitos de la presente invención, "grupos carboxi" son también aquellos los cuales se pueden convertir químicamente en funciones COOH, tales como, por ejemplo, derivados, tales como carboximetilo, carboxietilo. En este sentido, las moléculas efectoras e acuerdo con la invención tienen al menos un grupo carboxi. Sin embargo, también es posible usar moléculas efectoras con dos, tres o más grupos carboxi. "Cosméticos embellecedores" significa los auxiliares cosméticos los cuales no se usan principalmente para el cuidado, sino para el embellecimiento o mejora de la apariencia de la piel, el cabello y/o las uñas de las manos y las uñas de los pies. Los auxiliares de este tipo se conocen apropiadamente por las personas experimentadas en la técnica y comprenden, por ejemplo, lápices delineadores para los ojos, mascaras, sombras para los ojos, cremas de día con color,
polvos, lápices correctores, colorete, lápices para labios, lápices delineadores para labios, maquillajes, barniz para uñas, gel embellecedor, etc. También se incluyen las composiciones adecuadas para colorear la piel y el cabello. "Dermocosméticos" también denominados como "productos cosmecéuticos" o "composiciones dermocosméticas" o "preparaciones dermocosméticas" son composiciones o preparaciones (i) para proteger contra el daño a la piel, el cabello y/o las uñas de las manos y las uñas de los pies, (ii) para tratar el daño existente a la piel, el cabello, y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies y (iii) para el cuidado de la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies, que comprenden composiciones, preparaciones y formulaciones cosméticas para la piel, cosméticas para las uñas, cosméticas para el cabello, dermatológicas de higiene o farmacéuticas, y para mejorar la sensación de la piel (las propiedades sensoriales) . Las composiciones para cosméticos embellecedores se incluyen explícitamente. También se incluyen las composiciones para el cuidado de la piel, con las cuales se logra el uso dermatológico farmacéutico pretendido tomando en consideración los puntos de vista cosméticos. Las composiciones o las preparaciones de este tipo se usan para ayudar, prevenir y tratar los trastornos de la piel y, además del efecto cosmético, desarrollar un efecto biológico. Para
los propósitos de la definición dada arriba, "dermocosméticos" comprende, en un medio compatible cosméticamente, los auxiliares y aditivos adecuados los cuales son familiares para las personas experimentadas en la técnica y pueden ser encontrados en los manuales de cosmética, por ejemplo, Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundamentáis and formulations of cosmetics] , Hüthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1, o Umbach, Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel [Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions], 2da edición extendida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 137126029. Para los propósitos de la presente invención, "ingredientes activos dermocosméticos" o "ingredientes activos dermocosméticamente" son los ingredientes activos presentes en los dermocosméticos de acuerdo con la definición dada arrona. Los cuales están involucrados al realizar el modo individual de acción de los dermocosméticos. Por lo tanto estos son, por ejemplo, los ingredientes activos los cuales dan lugar a la protección contra el daño de la piel el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies, (ii) se pueden usar para tratar el daño existente a la piel, el cabello y/o las uñas de las manos y las uñas de los pies, (iii) tienen propiedades de cuidado de la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las
uñas de los pies y (iv) se usan para el embellecimiento decorativo o la mejora en la apariencia de la piel, el cabello y/o las uñas de las manos y las uñas de los pies. También se incluyen los ingredientes activos para el cuidado de la piel con los cuales se logra el uso dermatológico pretendido farmacéuticamente tomando en consideración los puntos de vista cosméticos. Los ingredientes activos de este tipo se usan para ayudar, prevenir y tratar los trastornos de la piel, y además del efecto cosmético, desarrollar un efecto biológico. Los ingredientes activos se este tipo se eligen, por ejemplo, del grupo de los polímeros, pigmentos, humectantes, aceites, ceras, enzimas, minerales, vitaminas, protectores solares, tintes, perfumes, antioxidantes y conservadores naturales o sintéticos, y los ingredientes farmacéuticos activos los cuales se usan para ayudar, evitar y tratar los trastornos de la piel y tienen un efecto biológico el cual cura, evita el daño, regenera o mejora la condición general de la piel. Para los propósitos de la presente invención, "moléculas efectoras" significa las moléculas o los ingredientes dermocosméticos activos los cuales tienen un cierto efecto previsible, preferiblemente un efecto protector, preventivo y/o de cuidado biológico o fisiológico y/o un efecto de cuidado sobre la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies y/o tienen un efecto decorativo
cosméticamente, las moléculas afectotas son preferiblemente compuestos no proteinogénicos, tales como tintes, agentes fotoprotectores, vitaminas, pro vitaminas, antioxidantes y ácidos grasos, acondicionadores o compuestos que contienen iones metálicos, en particular muy preferiblemente vitaminas, provitaminas y precursores de vitaminas de los grupos A, B, C E y F, donde las vitaminas Bl, B2 , B3 y B5 son particularmente preferidas. Los agentes fotoprotectores preferidos son aquellos basados en hidroxibenzofenona amino substituida, en particular preferiblemente 2 -hidroxi -4 -metoxibenzofenona, 2-hidroxi-4-metoxi-4 ' -metilbenzofenona, 2,2' -dihidroxi-4-metoxibenzofenona, más preferiblemente ácido 2-(4-N,N-dialquilamino-2 -hidroxi) benzoil) -benzoico . "Aumento en el tiempo de residencia de los ingredientes dermocosméticos activos sobre la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies" significa un tiempo de residencia extendido temporalmente y por lo tanto de la disponibilidad de este ingrediente activo sobre la piel y/o el cabello, en comparación con los ingredientes activos los cuales no están acoplados con polipéptidos de enlace a la queratina. Preferiblemente, el tiempo de residencia aumentado sobre la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los píes significa una presencia temporal del ingrediente activo sobre la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o
las uñas de los pies, aumentado en 10%, 15%, 20%, en particular preferiblemente 30%, 40%, 50%, en particular muy preferiblemente 75%, 100%, 125%, más preferiblemente 150%, 200%, 300%, sobre todo más preferiblemente 500%, 750%, 1000%, en comparación con los ingredientes activos idénticos no acoplados, bajo las condiciones de aplicación por lo demás idénticas . Para los propósitos de la presente invención, "queratina" significa los filamentos intermedios construidos de complejos proteínicos similares a cuerdas. Los filamentos intermedios se construyen de muchas proteínas del mismo tipo (monómeros) , las cuales se posicionan en paralelo para dar una estructura similar a un tubo. Los filamentos intermedios se enlazan para dar haces relativamente grandes (tonofibrillas) . Los filamentos intermedios forman el citoesqueleto de las células con los microtubos y los filamentos de actina. Se hace una distinción entre cinco tipos de filamentos intermedios; queratinas acidas y básicas, desminas, neurofilamentos y y láminas. Para los propósitos de la presente invención son de preferencia específica las queratinas acidas y básicas en el epitelio (las capas de células individuales o múltiples las cuales cubren las superficies externas del cuerpo de los organismos animales multicelulares) . "Queratina" o "queratinas" (también: la sustancia cornea, escleroproteína)
significa una proteína la cual es responsable de la estabilidad y la forma de las células. Esta proteína es un constituyente de la piel, el cabello y las uñas de los mamíferos. La resistencia de la queratina se aumenta a través de la formación de fibras : las cadenas aminoacídicas individuales forman una alfa hélice girada a la derecha, y cada tres de estas hélices forman una superhélice girada a la izquierda (protofibrillas) . Once protofibrillas se combinan para dar una microfibrilla - estas se combinan a su vez para dar hacer y formar las microfibrillas las cuales, por ejemplo, rodean las células del cabello. "Polipéptido de enlace a la queratina" significa un polipéptido o una proteína los cuales tienen la propiedad de enlazarse a la queratina, dentro del significado de la definición dada arriba. Los polipéptidos de enlace a la queratina son también por lo tanto proteínas asociadas con los filamentos intermedios. Estos polipéptidos de enlace a la queratina tienen una afinidad de enlace hacia la queratina o las macroestructuras que se componen de queratina tales como las protofibrillas, las microfibrillas o las macrofibrillas . Además, polipéptidos de enlace a la queratina se entiende para denotar aquellos polipéptidos los cuales tienen una afinidad de enlace para la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies de los mamíferos.
Los "polipéptidos de enlace a la queratina" son también los polipéptidos los cuales, dentro del organismo de un mamífero, tienen una función biológica asociada con el enlace de la queratina, las fibras de queratina, la piel o el cabello. Los polipéptidos de enlace a la queratina significan del mismo modo los motifs de enlace o los dominios proteínicos del polipéptido de enlace a la queratina (ii) para que la queratina pueda ser evaluada bajo las condiciones descritas en los Ejemplos 8, 9 y 10. Los polipéptidos de enlace a la queratina son aquellos polipéptidos los cuales, en las pruebas cuantitativas de enlace a la queratina, mencionadas arriba, tienen aproximadamente 10%, 20%, 30%, 40% o 50%, preferiblemente 50%, 60%, 70%, 80%, 0 90%, en particular preferiblemente 100%, 125%, 150%. En particular muy preferiblemente 200%, 300%, o 400%, más preferiblemente 500%, 600%, o 700% o 1000% o más de la capacidad de enlace a la queratina de la desmoplaquina (SEC ID No. : 2) , preferiblemente del dominio B de enlace a la queratina de la desmoplaquina (SEC ID No. : 4) . Para los propósitos de la presente invención, composiciones cosméticas para el cuidado oral, el cuidado de las encías y el cuidado de la dentadura significa todas las composiciones, preparaciones y formas de suministro adecuadas para la higiene oral, la higiene dental, la higiene de las
encías y la higiene de la dentadura, como se describen en los libros de texto, por ejemplo, Umbach: Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel [Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions], capitulo 7, página 187-219, 2da edición extendida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9, al cual se hace referencia expresamente por la presente. Estas composiciones, preparaciones y formas de suministro son familiares para las personas experimentadas en la técnica y comprenden, por ejemplo, polvos dentales, cremas dentales, pastas dentales, cremas dentales para niños, geles dentales, cremas dentales líquidas, colutorios, enjuagues bucales, ungüentos y pastas, aunque esta lista no se debe considerar exhaustiva. La preparación de tales composiciones es familiar para las personas experimentadas en la técnica y se puede encontrar en los libros de texto generales (por ejemplo, Umbach: Kosmetik:
Entwicklung, Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel
[Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions] , 2da edición expandida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 7126029) . Por lo tanto además de las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo, estas composiciones también comprenden otros ingredientes conocidos por las personas experimentadas en la técnica. Estos
pueden ser, por ejemplo, surfactantes, cuerpos de limpieza, ingrediente activos, adherentes, humectantes, reguladores de consistencia, conservadores, tintes, aromas y edulcorantes, aunque esta lista no se debe considerar exhaustiva los ingredientes activos específicos son preferiblemente ingredientes activos los cuales se usan para inflamaciones de las encías o para lesiones en la cavidad oral. Además, estos ingredientes activos pueden ser efectivos, por ejemplo; para combatir las bacterias de la placa o para proteger las encías. Por esto, se hace referencia explícitamente a los ejemplos de formulación mostrados en el libro de texto Umbach: Kosmetik:
Entwicklung, Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel
[Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions], 2da edición expandida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 137126029, en las páginas 205 a 207. "Medio compatible cosméticamente" se debe entender en el sentido amplio y denota las substancias adecuadas para la producción de preparaciones cosméticas o dermocosméticas, y las mezclas de las mismas. Estos son preferiblemente medios compatibles con proteínas. Por el contacto con el tejido epidérmico o el cabello humano y/o de animales, "las substancias compatibles cosméticamente" no llevan a irritaciones o daños y no tienen incompatibilidades con otras substancias. Además, estas
substancias tienen un potencial alergénico pequeño y están aprobadas por las autoridades estatales de registro para usarse en preparaciones cosméticas. Estas substancias son familiares para las personas experimentadas en la técnica y se pueden encontrar, por ejemplo, en los libros de texto de cosméticos, por ejemplo, Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundamentáis and formulations of cosmetics] . Hüthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1. "Ácidos nucleicos" o "moléculas de ácidos nucleicos" significa desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos o polímeros o híbridos de los mismos en forma de hebra simple o de hebra doble, en orientación homosentido o antisentido. El término ácido nucleico o molécula de ácido nucleico se puede usar para describir un gen, ADN, ADNc, ARNm, oligonucleótidos o polinucleótidos. "Secuencia de ácido nucleico" significa una secuencia sucesiva y enlazada de desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos de una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la definición dada arriba, como puede ser verificado usando las técnicas de secuenciamiento de ADN/ARN disponibles, y descritas o mostradas en una lista de abreviaciones, letras o palabras las cuales representan los nucleótidos. , Para los propósitos de la presente invención, "polipéptido" significa una macromolécula construida de
moléculas de aminoácidos en la cual los aminoácidos se enlazan linealmente vía enlaces peptídico. Un polipéptido se puede componer de unos cuantos aminoácidos (aproximadamente 10 a 100) , pero también comprender proteínas las cuales se construyen por lo general de al menos 100 aminoácidos, pero también puede comprender varios miles de aminoácidos. Preferiblemente, los polipéptidos comprender al menos 20, 30, 40, o 50, en particular preferiblemente al menos 60, 70, 80 o 90, en particular muy preferiblemente al menos 100, 125, 150, 175 o 200, más preferiblemente al menos más de 200 aminoácidos, es posible que el límite superior sea de varios miles de aminoácidos. "Homología" o "identidad" entre dos secuencias de ácidos nucleicos se entenderá por referirse a la identidad de la secuencia de ácido nucleico a través de la longitud completa de la secuencia en cuestión, la cual se calcula por comparación, con la ayuda del algoritmo de programa GAP
(Wisconsin Package Versión 10.0, University of Wisconsin,
Genetics Computer Group (GCG), Madison, USA; Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389ff) con los siguientes ajustes de los parámetros: Ponderación de los Huecos: 50 Ponderación de la Longitud: 3 Compatibilidad promedio: 10 Incompatibilidad Promedio: 0 A manera de ejemplo, una secuencia la cual tiene una
homología de al menos 80% basada en el ácido nucleico con la SEC ID No. : 1 se entenderá por referirse a una secuencia la cual tiene una homología de al menos 80% cuando se compara con la secuencia SEC ID No. : 1 de acuerdo con el algoritmo de programa de arriba con el conjunto de parámetros de arriba. La homología de dos polipéptidos se entenderá por referirse a la identidad de la secuencia de aminoácidos a través de la longitud completa de la secuencia, la cual se calcula por comparación, con la ayuda del algoritmo de programa GAP (Wisconsin Package Versión 10.0, University of Wisconsin, Genetics Computer Group (GCG) , Madison, USA) con los siguientes ajustes de los parámetros: Ponderación de los Huecos: 8 Ponderación de la Longitud: 2 Compatibilidad Promedio: 2.912 Incompatibilidad promedio: -2.003 I A manera de ejemplo, una secuencia la cual tiene una homología de al menos 80% basada en el polipéptido con la secuencia SEC ID No. : 2 se entenderá por referirse a una secuencia la cual tiene una homología de al menos 80% cuando se compara con la SEC ID No. : 2 de acuerdo con el algoritmo de programa de arriba, con el conjunto de parámetros de arriba. "Condiciones de hibridación" se debe entender en el sentido más amplio y se refiere a condiciones de hibridación everas o menos severas dependiendo de la aplicación. Tales
condiciones de hibridación se describen, inter alia, en Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T et al., en Molecular Cloning (A Laboratory Manual) , 2da edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, páginas 9.31-9.57) o en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Las personas experimentadas en la técnica elegirían las condiciones de hibridación las cuales les permitirían diferencias las hibridaciones específicas de las hibridaciones no específicas. Por ejemplo, las condiciones durante el paso de lavado se pueden elegir de las condiciones con severidad baja (con aproximadamente 2X SSC a 50°C) y aquellas con severidad alta (con aproximadamente 0.2X SSC a 50°C) , preferiblemente a 65°C) (2X SSC: citrato de sodio 0.3M, NaCl 3M, pH 7.0) . Además la temperatura durante el paso de lavado se puede aumentar de la condición de severidad baja a la temperatura ambiente, aproximadamente 22 °C, a condiciones de severidad mayores a aproximadamente 65 °C. Ambos parámetros, la concentración de la sal y la temperatura, se pueden variar al mismo tiempo o individualmente, manteniendo constantes los otros parámetros en cada caso. Durante la hibridación, también es posible usar agentes desnaturalizantes tales como, por ejemplo, formamida o SDS. En presencia de formamida al 50%, la hibridación se lleva a cabo preferiblemente a 42 °C. Algunas condiciones ilustrativas para los pasos de hibridación y de
lavado se dan abajo: 1. Las condiciones de hibridación se pueden elegir, por ejemplo, de las siguientes condiciones: a) 4x SSC a 65°C, b) 6X SSC a 45°C, c) 6X SSC, 100 µg/ml de ADN de esperma de pescado fragmentado, desnaturalizado a 68 °C, d) 6X SSC, 0.5% SDS, 100 µg/ml de ADN de esperma de salmón desnaturalizado a 68°C, e) 6X SSC, 0.5% SDS, 100 µg/ml de ADN de esperma de salmón, desnaturalizado, formamida al 50% a 42 °C, f) formamida al 50%, 4X SSC a 42°C, o g) formamida al 50% (vol/vol ) , 0.1% de albúmina de suero de bovino, 0.1% de Ficoll, 0.1% de polivinilpirrolidona, amortiguador de fosfato de sodio 50 mM, pH 6.5, NaCl 750 mM, citrato de sodio 75 mM a 42°C, o i) 2X o 4X SSC a 50°C (condición de severidad baja) , j) 30 a 40% de formamida, 2X o 4X SSC a 42°C (condición de severidad baja) . 500 nM de amortiguador de fosfato de sodio pH 7.2 , 7% de SDS (g/V) EDTA lmM, 10 µg/mL de ADN de hebra sencilla, 0.5% de BSA (g/V) (Church y Gilbert, Genomic sequencing. Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 81:1991. 1984). 2. Los pasos de lavado se pueden elegir, por ejemplo, de
las siguientes condiciones: a) NaCl 0.015 M/sodio citrato 0.0015 M/0.1% de SOS a 50°C. b) 0.1X SSC a 65°C. c) 0.1X SSC, 0.5% de SDS a 68°C. d) 0.1X SSC, 0.5% de SDS, 50% de formamida a 42°C. e) 0.2X SSC, 0.1% de SDS a 42°C. f) 2X SSC a 65°C (condición se severidad baja) En una modalidad, las condiciones de hibridación severa se eligen como sigue: Se elige un amortiguador de hibridación el cual comprende formamida, NaCl y PEG 6000. La presencia de la formamida en el amortiguador de hibridación desestabiliza las moléculas de ácido nucleico de hebra doble, como resultado de lo cual, la temperatura de la hibridación se puede reducir a 42 °C sin bajar la severidad. El uso de sal en el amortiguador de hibridación aumenta la velocidad de renaturación de un de un híbrido, o la eficiencia de la hibridación. Aunque el PEG aumenta la viscosidad de la solución, lo cual tiene un efecto negativo sobre las velocidades de naturación, como resultado de la presencia del polímero en la solución, la concentración de la sonda en el medio restante aumenta, lo cual aumenta la velocidad de hibridación. La composición del amortiguador es como sigue:
Amortiguador de Hibridación Amortiguador de fosfato de sodio 250 mM, pH 7.2 EDTA 1 mM 7% de SDS (g/v) NaCl 250 mM 10 µg/ml de ADNss 5% de polietilen glicol (PEG) 6000 40% de formamida Tabla 1 : Amortiguador de hibridación
Las hibridaciones se llevan a cabo durante toda la noche a 42 °C. los filtros se lavan la siguiente mañana 3x con 2xSSC + 0.1% de SDS durante aproximadamente 10 min en cada caso. "Acoplamiento" en conexión con el enlace de una molécula enlazadora con una molécula efectora o una proteína de enlace a la queratina significa un enlace covalente de dichas moléculas . "Funcionalidades de acoplamiento" son grupos funcionales de una molécula enlazadora los cuales pueden participar en un enlace covalente con los grupos funcionales de la molécula efectora o la proteína de enlace a la queratina. Los ejemplos no limitantes los cuales se pueden mencionar son: grupos hidroxi, grupos carboxilo, grupos tio y grupos amino. "Funcionalidades de acoplamiento" o "funcionalidad de acoplamiento" y "grupos de anclaje" o "grupo de anclaje" se usan como sinónimos. Los "grupos de ácido sulfónico" en conexión con la descripción de "moléculas efectoras que contienen el grupo ácido sulfónico" significa los grupos S03H libres los cuales
permiten que las moléculas que contienen estos grupos S03H sean enlazados covalentemente a otras moléculas vía una reacción de esterificación o reacción de formación de amina. Para los propósitos de la presente invención, los "grupos ácido sulfónico" son también aquellos los cuales pueden ser convertidos químicamente en funciones S03H, tales como, por ejemplo, los derivados tales como, por ejemplo, sulfonato de metilo, sulfonato de etilo. En este sentido, las moléculas efectoras de acuerdo con la invención tienen al menos un grupo ácido sulfónico. Sin embargo, también es posible usar moléculas efectoras con dos, tres o más grupos ácido sulfónico. . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método para producir moléculas efectoras de enlace a la queratina acoplando las moléculas efectoras (i) que contienen al menos un grupo carboxilo o ácido sulfónico en un polipéptido de enlace a la queratina (ii) usar las moléculas efectoras (iii) las cuales tienen al menos dos funcionalidades de acoplamiento las cuales pueden participar en enlaces elegidos del grupo que consiste de enlaces de amida, tioéster, éster, éster de ácido sulfónico y sulfonamida, y (a) en un primer paso de acoplamiento, las moléculas efectoras primero (i) se enlazan a las moléculas enlazadoras
(iii) vía el grupo carboxilo o ácido sulfónico por medio de un enlace de éster o sulfonamida, y (b) en otro paso de acoplamiento, el producto de la reacción de (a) se acopla con el polipéptido de enlace a la queratina (ii) vía una funcionalidad de acoplamiento aun libre de las moléculas enlazadoras (iii) . En una modalidad preferida de la invención, las moléculas enlazadoras (iii) tienen al menos dos funcionalidades de acoplamiento o grupos de anclaje, de los cuales al menos uno de estos grupos es un grupo hidroxi o amino. El acoplamiento de las moléculas enlazadoras (iii) con las moléculas efectoras tiene lugar vía el grupo hidroxi o amino, y las moléculas efectoras de enlace se acoplan al polipéptido de enlace a la queratina (ii) con el grupo de anclaje restante. Los acoplamientos de enlace preferidos de las moléculas enlazadoras (iii) con el polipéptido de enlace a la queratina (ii) tienen lugar vía los grupos amino, tiol o carboxilo los cuales, por ejemplo, con un grupo hidroxi de las moléculas enlazadoras (iii) , si es apropiado en seguida de la activación, pueden participar en un enlace de amida, tioéster o éster correspondiente. En una modalidad de la invención preferida particularmente, las moléculas enlazadoras (iii) tienen al
menos dos diferentes funcionalidades de acoplamiento, aquí se da preferencia muy particular a las moléculas enlazadoras (iii) las cuales tienen un grupo maleimida. El más preferido es el uso de las moléculas enlazadoras (iii) representadas por la fórmula general 1,
Fórmula 1
donde "n" es un entero entre 0 y 20, preferiblemente entre 0 y 15, en particular preferiblemente entre 1 y 10, en particular muy preferiblemente entre 1 y 8, e Y es un grupo hidroxi o amino. Los grupos amino pueden ser primarios o secundarios. Las moléculas enlazadoras (iii) son en particular muy preferiblemente un maleimidoalcanol . Los malimidoalcanoles son preferiblemente maleimidoetanol, más preferiblememte de todos maleimidopentanol . En una modalidad adicional particularmente preferida, las moléculas enlazadoras (iii) tienen al menos dos diferentes funcionalidades de acoplamiento y adicionalmente un módulo, el cual aumenta la hidrofilicidad o la lipofilicidad. Estas moléculas enlazadoras preferidas se representan en la fórmula
donde "n" es un entero entre 0 y 40 o 0 y 20, preferiblemente entre 0 y 15, en particular preferiblemente entre 0 y 10, en particular muy preferiblemente entre 1 y 9, o entre 2 y 8, o entre 3 y 7, y X representa los radicales O, S, N, CH2, -0-C=0, 0=C-0-, -NR-C=0, 0=C-NR-, y R es H, grupos alquilo ramificados o no ramificados de C?-C?2, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, o los grupos cicloalquilo, benzoilo, bencilo, arilo de C6 a Cío, tales como fenilo y haftilo, heteroarilo, preferiblemente H, metilo y etilo, y el "módulo" es un radical etilen glicol o polietilen glicol que tiene 2 a 40, preferiblemente 2 a 20, en particular preferiblemente 2 a 10, unidades de repetición, o un aminoácido, elegido preferiblemente del grupo que consiste de glicina, alanina, serina, treonina, ácido glutámico, glutamina, ácido aspártico, asparagina, arginina y císteína, o un polipéptido que tiene 2 a 40, preferiblemente 2 a 20, en particular preferiblemente 2 a 10, aminoácidos, donde los aminoácidos son preferiblemente aminoácidos polares, elegidos en particular preferiblemente del grupo que consiste de glicina, alanina, serina, treonina, ácido glutámico, glutamina, ácido aspártico, asparagina, arginina y cisteína, o un radical ácido poliacrílico que tiene
2-100, preferiblemente 2-80, en particular preferiblemente 2-50, más preferiblemente 2-20 unidades monoméricas, o para aumentar la lipofilicidad, el "módulo" es un radical alquídico que tiene 2-40 átomos de carbono o un radical poliolefinico que tiene 2 a 40, preferiblemente 2 a 20, en particular preferiblemente 2 a 10, unidades de repetición, o un aminoácido, elegido preferiblemente del grupo que consiste de glicina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, triptofano, prolina, metionina, o un polipéptido que tiene 2 a 40, preferiblemente 2 a 20, en particular preferiblemente 2 a 10, aminoácidos, donde los aminoácidos son preferiblemente aminoácidos no polares, elegidos en particular preferiblemente del grupo que consiste de glicina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, triptofano, prolina, metionina, o un poliéster, poliamina o poliuretano, que tiene 2-100, preferiblemente 2-80, en particular preferiblemente 2-50, más preferiblemente 2-20, unidades monoméricas, e Y es un grupo funcional de los grupos hidroxi o amino. En una modalidad aún más preferida, las moléculas enlazadoras son moléculas de acuerdo con la fórmula general le,
Fórmula lc > )
donde X en la posición o, m o p, es OH, NH2, R-OH o RNH2, y R es un grupo alquilo lineal o ramificado de C?-C?2 tales como, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, o un grupo alquilo cíclico tal como un radical cicloalquilo de C5-C?2, substituido opcionalmente por uno o más grupos alquilo de C?-C4, o una unidad de arilo, bencilo, o benzoilo orientada en o, m, o p, preferiblemente ciciohexilo, fenilo y naftilo. En una modalidad adicional preferida, R también puede ser el "módulo" descrito en la fórmula lb. En una modalidad preferida adicional, el acoplamiento de las moléculas enlazadoras (iii) con las moléculas efectoras (i) descritas en (a) es una reacción de esterificación o una formación de amida mediada por carbodiimida, anhídrido o cloruro de ácido, donde el uso del cloruro de ácido de las moléculas enlazadoras (iii) se prefiere particularmente. La reacción medada por carbodiimida, anhídrido o cloruro de ácido significa la activación del grupo carboxilo de las moléculas enlazadoras (iii) requerida para la formación de un éster o amida entre las moléculas enlazadoras (iii) y las moléculas efectoras (i) por medio de la reacción con las carbodiimidas, mediante la reacción para dar un anhídrido simétrico o
mezclado o, mediante la reacción para dar el cloruro de ácido.
Las carbodiimidas a ser mencionadas son preferiblemente diciclohexilcarbodiimida (DCC) , diisopropilcarbodiimida (DIC) , clorhidrato de N' - (3 -dimetilaminopropil) -N-etilcarbodiimida (EDC) , donde se prefiere particularmente el uso de diidopropilcarbodiimida o EDC. Además, es posible llevar a cabo una activación con carbonildiimidazol (CDl) . Estas esterificaciones se llevan a cabo en presencia de 0.1-100 %mol de N,N-dimetilaminopiridina (DMAP), preferiblemente 0.5-10%, en particular preferiblemente 1-6%. La formación de las amidas puede tener lugar haciendo reaccionar el compuesto activado con carbodiimida, con la amina. Opcionalmente, la formación de la amida se puede llevar a cabo en presencia de aditivos, tales como, por ejemplo, N-hidroxisuccinimida, pentafluorofenol o N-hidroxibenzotriazol. Tales aditivos son conocidos por las personas experimentadas en la técnica. Si se obtienen esteres activos que se pueden aislar, a través de estos aditivos, las reacciones de estos esteres activos que se pueden aislar, con las moléculas efectoras también se entiende de acuerdo con la invención como una esterificación mediada por carbodiimida. La reacción de las moléculas enlazadoras (iii) para dar el anhídrido tiene lugar mediante los métodos generales, como se conocen por las personas experimentadas en la técnica. Se
da preferencia al uso de anhídridos mezclados, como se obtienen, por ejemplo, por la reacción con esteres de anhídrido acético, anhídrido pivaloilico, cloruro de acetilo, cloruro de pivaloilo o clorofórmico. Se da preferencia particular a los anhídridos pivaloilicos y a los anhídridos con ácido carboxílico. Cuando se usan los cloruros de ácido, es conveniente llevar a cabo la formación del anhídrido en presencia de una base terciaria, tales como, por ejemplo, piridina, trietilamina. El acoplamiento de las moléculas enlazadoras (iii) con las moléculas efectoras (i) descritas bajo (a) preferiblemente se puede llevar a cabo después de la activación de las moléculas enlazadoras (iii) , descrita arriba, para dar el anhídrido en presencia de una base. Las bases preferidas a ser mencionadas son: alquilaminas aromáticas y terciarias, por ejemplo, piridina, trietilamina, tributilamina, trioctilamina, etil -diisopropilamina, etc. En una modalidad preferida particularmente, la base usada es trietilamina. Los solventes preferidos para la formación de la amida a ser mencionados son: hidrocarburos halogenados (diclorometano, cloroformo, 1, 2 -dicloroetano) , éteres (THF), DMF, NMP, esteres
(esteres acéticos) , hidrocarburos aromáticos y alifáticos
(benceno, tolueno, hexano, heptano), acetonitrilo. Acetona, metil etil cetona, alcoholes (metanol, etanol, isopropano,
trifluoroetanol) , agua y mezclas de los mismos. Es posible la activación de los "derivados de ácido 2- (4-N,N-dialquilamino-2-hidroxibenzoilbenzoico (como se describe arriba) " durante la formación del éster, a través de la reacción con carbodiimidas (por ejemplo, EDC) en la presencia de cantidades catalíticas de N,N-dimetilaminopiridina (DMAP) en cloruro de metileno como solvente. En una modalidad preferida adicional, el acoplamiento de las moléculas enlazadoras (iii) con las moléculas efectoras (i) descrito bajo (a) se lleva a cabo con la activación de las moléculas efectoras (i) en presencia de cantidades catalíticas de N, N-dimetilaminopiridina (DMAP). La invención por lo tanto, adicionalmente proporciona preferiblemente el uso de DMAP como catalizador en cloruro de metileno como solvente, donde la molécula enlazadora (iii) usadas es maleimidopentanol, y la molécula efectora (i) usada es ácido 2- (4, 4-dietilamino-2-hidroxibenzoilbenzoico . En una modalidad preferida adicional, el acoplamiento de las moléculas enlazadoras (iii) con las moléculas efectoras (i) descrito bajo (b) para dar los esteres, tioésteres o amidas, tiene lugar enseguida de la activación como cloruro de ácido, donde se prefiere el uso del cloruro de ácido de las moléculas efectoras (i) (reacción mediada por cloruro de ácido) .
Muchas moléculas efectoras están disponibles comercialmente en forma de sus cloruros de ácido (cloruro de palmitoilo por ejemplo) . Estas se pueden usar directamente sin activación adicional. De lo contrario, el cloruro de ácido se prepara fácilmente mediante los métodos conocidos por las personas experimentadas en la técnica. Para la reacción de las moléculas efectoras (i) con el cloruro de ácido, los agentes de cloración usados son los agentes de cloración acostumbrados conocidos por las personas experimentadas en la técnica, por ejemplo, cloruro de tionilo, tricloruro de fósforo, pentacloruro de fósforo, cloruro de oxalilo, fosgeno, y oxicloruro de fósforo. Se da preferencia muy particular al uso de cloruro de tionilo (SOCl2) . Los solventes adecuados aquí son: los hidrocarburos aromáticos y alifáticos, por ejemplo, benceno, tolueno, xilenos, hexano, heptano, etc., hidrocarburos halogenados, por ejemplo, cloruro de metileno, éteres, por ejemplo, dietil éter, THF, et . , y un exceso del agente de cloración en si. En una modalidad preferida se usa tolueno. La cloración se puede llevar a cabo con o sin un catalizador. El DMF se prefiere particularmente como el catalizador para la cloración. En una modalidad preferida adicional, el acoplamiento de las moléculas enlazadoras (iii) con las moléculas efectoras
(i) descrita bajo (b) se lleva a cabo directamente después de la activación de las moléculas enlazadoras (iii) o de las moléculas efectoras (i) , descrita arriba, en presencia de una base. Las bases preferidas son alquilaminas aromáticas o terciarias, por ejemplo, piridina, trietilamina, tributilamina, trioctilamina, etildiisopropilamina, etc. En una modalidad preferida particularmente, la base usada es trietilamina . La invención proporciona además preferiblemente el uso de trietilamina como el catalizador básico en combinación con una molécula efectora (i) reaccionada para dar un cloruro de ácido o que se puede obtener como cloruro de ácido, donde la molécula efectora (i) es preferiblemente ácido 2-(4-N,N-dialquilamino-2-hidroxi) benzoil-benzoico, y la molécula enlazadora (iii) es preferiblemente maleimidopentanol. Opcionalmente, el producto de la reacción del paso (a)
(designado abajo como la molécula efectora (iv) ) se puede purificar adicionalmente para separar los posibles isómeros del producto de reacción. Aquí, se pueden usar los siguientes métodos: métodos de. destilación, rectificación, cristalización, extracciones y purificación cromatográfica. Preferiblemente se lleva a cabo la cromatografía en columna. En enlace de las moléculas efectoras enlazadoras (iv) que surgen del paso (a) descrito arriba con el polipéptido de
enlace a la queratina (ii) tiene lugar vía el segundo grupo de anclaje aun todavía libre de las moléculas enlazadoras. Por ejemplo, tal grupo de anclaje puede ser una función tiol, por medio de la cual, el enlazador puede participar en un enlace de disulfuro con un radical de cisteína del polipéptido de enlace a la queratina (ii) . El enlazador usado está controlado por la funcionalidad a ser acoplada. Son de conveniencia, por ejemplo, las moléculas las cuales acoplan los polipéptidos (ii) para ser enlazados a la queratina por medio de grupos reactivos con sulfhidrilo (por ejemplo, maleimidas, disulfuros de piridilo, a-haloacetilos, vinilsulfonas, sulfatoalquilsulfonas (preferiblemente sulfatoetilsulfonas) ) . Se da preferencia a un acoplamiento covalente de las moléculas enlazadoras (iii) con el polipéptido (ii) de enlace a la queratina. Esto puede tener lugar, por ejemplo, vía las cadenas laterales del polipéptido (ii) de enlace a la queratina, en particular, vía las funciones amino, las funciones hidroxi, las funciones carboxilato o las funciones tiol. Se da preferencia a un acoplamiento vía las funciones amino de uno o más radicales de lisina, uno o más grupos tiol de los radicales de cisteína, uno o más grupos hidroxilo de los radicales de serina, treonina o tirosina, uno más grupos carboxilo de los radicales de ácido aspártico o ácido
glutámico o vía la función N-terminal o la C-terminal del polipéptido (ii) de enlace a la queratina. Aparte de las funciones aminoacídicas que aparecen en la secuencia primaria del polipéptido (ii) de enlace a la queratina, también es posible añadir a la secuencia aminoácidos con funciones adecuadas (por ejemplo, cisternas, lisinas, aspartatos, glutamatos) , sustituir los aminoácidos de la secuencia del polipéptido por tales funciones aminoacídicas. Los métodos para la mutagénesis o la manipulación de las moléculas de ácidos nucleico son conocidos suficientemente por las personas experimentadas en la técnica. Unos cuantos métodos seleccionados se describen a continuación. Se da preferencia particular al uso de moléculas efectoras enlazadoras (iv) las cuales han sido preparadas usando el maleimidopentanol o el maleimidoetanol especificado por ser preferidos para el método de acuerdo con la invención, en el caso de tales moléculas efectoras enlazadoras (iv) , los radicales de cisteína presentes en el polipéptido de enlace a la queratina se usan para el acoplamiento. El éxito del acoplamiento de las moléculas efectoras se puede monitorear por medio de dos pruebas diferentes: (i) la prueba de Ellmann en la cual se puede determinar el número de grupos Cys-SH libres en la proteína, antes y después del acoplamiento de las moléculas efectoras. Una
reducción considerable en los grupos SH libres después del acoplamiento indica un buen progreso de la reacción (véase el Ejemplo 22) . (ii) la prueba de actividad en la cual se puede medir el enlace con el cabello del polipéptido de enlace a la queratina con sin las moléculas efectoras enlazadoras acopladas. (Véase el Ejemplo 21) . En una modalidad, los polipéptidos de enlace a la queratina (ii) y las moléculas efectoras (iv) usadas en el paso (a) del método de acuerdo con la invención se usan en cantidades equimolares. En una modalidad adicional de acuerdo con la invención, el enlace de las moléculas efectoras tiene lugar de tal manera que estas pueden ser eliminadas y liberadas de los polipéptidos de enlace a la queratina en el sentido de una "liberación lenta" o "liberación controlada" como resultado del efecto de las enzimas endógenas (por ejemplo, las esterasas, lipasas o glucosidasas) o como resultado de las condiciones ambientales sobre la piel (por ejemplo, la humedad el pH ácido) a través del tiempo. Los polipéptidos (ii) de enlace a la queratina se pueden usar por lo tanto como un sistema de aplicación con el cual, a través de una aplicación única o repetida, se pueden alcanzar cantidades pequeñas de las moléculas efectoras libres sobre la piel. En principio, se
conoce por las personas con experiencia en la técnica que las los efectoras se pueden liberar sobre la piel a partir de sus derivados correspondientes, por ejemplo a partir del acetato de tocoferol, palmitato ascórbico o ascorbil glucosidasas (literatura ejemplificante: Redoules, D. et al. J. Invest. Dermatol. 125, 2005, 270, Beijersbegen van Henegouwen, G.M.J. et al., J. Photochem. Photobiol . 29, 1995,45.). En una modalidad preferida adicional de la invención, para el método de acuerdo con la invención, las moléculas efectoras (i) que contienen grupos carboxilo o ácido sulfónico usadas, se eligen del grupo que consiste de tintes, agentes fotoprotectores, vitaminas, provitaminas, carotenoides, antioxidantes y descomponedores de peróxido. Aquí, las moléculas efectoras usadas pueden tener uno o más grupos carboxilo o ácido sulfónico. Tintes Entre los tintes, se da preferencia a los tintes para alimentos, los tintes semi permanentes, tintes reactivos o tintes de oxidación. En el caso de los tintes de oxidación, se prefiere enlazar un componente como la molécula efectora (i) con la secuencia del polipéptido de enlace a la queratina (ii) y después acoplarlos por medio de oxidación con el segundo componente colorante en el sitio de acción, es decir, después del enlace con el cabello. También se prefiere, en el caso de
los tintes de oxidación, llevar a cabo el acoplamiento de los componentes del tiene antes del acoplamiento con la secuencia del polipéptido de enlace a la queratina (ii) . Los tintes adecuados son en principio todos los tintes para cabello acostumbrados proporcionados aquí, que tienen un grupo carboxilo o ácido sulfónico que se puede acoplar. Los tintes adecuados son conocidos por las personas con experiencia en la técnica, a partir de los libros de texto de cosméticos, por ejemplo, Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundaments and formulations of cosmetics] . Hüthig Verlag, Heidelberg/ 1989, ISBN 3-77851491-1. Los tintes para alimentos preferidos son las betalainas, tales como, por ejemplo, betacyan, betaxantina, carmín, ácido carmínico, ácido carmésico, rojo de cochinilla A e indicaxantina. Los tintes particularmente ventajosos son aquellos especificados en la lista a continuación. Los números del índice de Colores (CIN) se toman del Rowe Colour Index, 3ra edición, Society of Dyers and Colourists, Bradford, Inglaterra, 1971.
Tabla 2: Tintes Ventajosos
Los tintes citados arriba también se pueden usar como moléculas efectoras (i) para la secuencia (i) del péptido de enlace a la piel o a las uñas para la coloración de la piel y las uñas, por ejemplo en tatuajes. De conveniencia particular es el uso de moléculas efectoras de enlace a la queratina que comprenden tintes fluorescentes (por ejemplo, los tintes fluorescentes incluidos en la Tabla 2) para lograr una tonalidad de la piel mas saludable y luminosa y para aclarar ópticamente la piel ("blanqueo de la piel") enseguida de la aplicación a la piel. El uso de pigmentos fluorescentes se describe, por ejemplo, en US 6753002. Los tintes fluorescentes para producir una tonalidad más saludable de la piel se describen en "Filling the Fluorescent Palette, Cosmetics & Toiletries, 26-34, 121, No. 5, 2006". Se da preferencia por ejemplo, a los tintes fluorescentes de DayGlo. Además, estas moléculas efectoras de enlace a la queratina que comprende tintes fluorescentes también se pueden usar para aclarar el cabello y para producir reflejos y brillos especiales sobre el cabello. Esto se describe, por ejemplo en "Hair lightening by fluorescent dyes, Cosmetics &
Toiletries, 56-57, 120, No. 7, 2005" y la especificación US 2004/0258641 citada ahí. Otras moléculas efectoras (i) preferidas son los carotenoides. De acuerdo con la invención, se entenderá que carotenoides denota los siguientes compuestos y los derivados eterificados y glucosilados de los mismos: bixina, crocetina, esteres de ácido ß-Apo-8-carotenoico individualmente o como una mezcla. Otras moléculas (i) efectoras preferidas son las svitaminasm, en particular, la vitamina A y los esteres de la misma . Para los propósitos de la presente invención, retinoides denota el ácido de vitamina A (ácido retinoico) y los esteres de vitamina A (por ejemplo, acetato de retinilo, propionato de retinilo y palmitato de retinilo) . El término ácido retinoico incluye aquí tanto el ácido todo-trans retinoico y también el ácido 13-cis-retinoico. Un ácido retinoico preferido usado para las suspensiones de acuerdo con la invención es el ácido todo-trans retinoico. Otras moléculas efectoras (i) preferidas son las vitaminas, las presente invención vitaminas y los precursores de vitaminas de los grupos A, C y F, en particular el ácido ascórbico (vitamina C) , y los esteres palmíticos, glucósidos o fosfatos de ácido ascórbico, también la vitamina F, la cual se
entiende que incluye los ácidos grasos esenciales, en particular el ácido linoleico, el ácido linoleico conjugado, el ácido linoleico y el ácido araquidónico, y el ácido fólico.
Las vitaminas, las provitaminas o los precursores de vitaminas del grupo de vitaminas B o los derivados de los mismos, y los derivados de la 2-furanona a ser usados con preferencia de acuerdo con la invención incluyen, inter alia:
La vitamina B3. Este término incluye frecuentemente los compuestos ácido nicotínico y nicotinamida (niacinamida) . De acuerdo con la invención se da preferencia al ácido nicotínico . Vitamina B5, ácido pantoténico. Se da preferencia a usar el ácido pantoténico. Los derivados del ácido pantoténico lo cuales se pueden usar de acuerdo con la invención son, en particular, los esteres del ácido pantoténico con todos los estereoisómeros que se incluyen expresamente. Estos compuestos imparten ventajosamente propiedades de humectación y calmantes de la piel a las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención. La vitamina B7 (biotina) , conocida también como vitamina
H o "vitamina de la piel" . La biotina es el ácido
(3aS, 4S, 6aR) -2-oxo-hexahidrotienol [3 , 4-d] imidazol -4 -valérico .
El ácido pantoténico, ' la pentalactona, el ácido nicotínico y la biotina son muy particularmente preferidos de
acuerdo con la invención. De acuerdo con la invención, los derivados adecuados (sales, esteres, azucares, nucleótidos, nucleósidos, péptidos y lípidos) de dichos compuestos se pueden usar como las moléculas efectoras. Los antioxidantes solubles en aceite, lipofílicos preferidos de este grupo son los esteres gálicos y los carotenoides. Los antioxidantes solubles en agua preferidos son los aminoácidos, por ejemplo, tirosina y cisteína y los derivados de estos, y también los taninos, en particular aquellos de origen vegetal. Se da preferencia adicional a los así llamados descomponedores de peróxidos, es decir, los compuestos los cuales pueden descomponer los peróxidos, en particular preferiblemente los peróxidos de lípidos. Se entenderá que estos incluyen las substancias orgánicas, tales como por ejemplo, el ácido piridino-2-tiol-3-carboxílico, los ácidos 2-metoxipirimidinocarboxílicos, los ácidos 2-metoxipiridinocarbpoxilicos, los ácidos 2-dimetilaminopirimidinolcarboxilicos, los ácidos 2-dimetilaminopiridinocarboxilico. Los triterpenos, en los ácidos triterpenoicos particulares, tales como el ácido ursólico, el ácido rosmarínico, el ácido betulinico, el ácido boswellico y el ácido brionolico.
Otra molécula efectora (i) adicional es el ácido lipoico y los derivados adecuados (sales, esteres, azucares, nucleótidos, nucleósidos, péptidos y lípidos) . Otras moléculas efectoras preferidas son las siliconas, por ejemplo, hexametildisiloxano, octametiltrisiloxano, decametiltetrasiloxano, 1,1,3, 3-tetraisopropildisiloxano, octafeniltrisiloxano, 1,3, 5-trivinil-l ,1,3,5,5-pentametiltrisiloxano, etc. En una modalidad preferida los clorosiloxanos se hacen reaccionar con los compuestos de fórmula 1, lb o lc para dar los siloxil éteres correspondientes. Los clorosiloxanos, los cuales se pueden usar son, por ejemplo: cloropentafenildisiloxano, 1,3-diclorotetrafenildisiloxano, 1, 3 -diclorotetrametildisiloxano, 1, 5-diclorohexametiltrisiloxano, etc . En otra modalidad preferida, los halometilsiloxanos se hacen reaccionar con los compuestos de fórmula 1, lb o lc para dar los metilsiloxil éteres correspondientes, por ejemplo, clorometilpentadisiloxano, clorometilheptametilciclotetrasiloxano, 3-clorometilheptametiltrisiloxano, 1,3-bis (bromometil) tetrametildisiloxano, 3 , 5-bis (clorometil) octametiltetrasiloxano, etc. En otra modalidad preferida, se usan las siliconas que tienen grupos carboxilo o sus equivalentes funcionales y se pueden usar para hacerlos
reaccionar con los compuestos de la fórmula 1, lb o lc, para formar esteres o amidas. Los ejemplos de tales siliconas son: 1, 3-bis- (carbometoxil) tetrametildisiloxano, ácido propiónico pentametildisiloxano, etc. Otras moléculas efectoras (i) preferidas son los filtros fotoprotectores UV. Se entiende que estos denotan las substancias orgánicas las cuales pueden absorber los rayos ultravioleta y liberar otra vez la energía absorbida en forma de radiación de onda más larga, por ejemplo, calor. Las substancias orgánicas pueden ser solubles en aceite o solubles en agua . Los filtros UV-B solubles en aceite, los cuales se pueden usar son, por ejemplo, las siguientes substancias: derivados de ácido -aminobenzoico, preferiblemente 4- (dimetilamino) benzoato de 2-etilhexilo, 4- (dimetilamino) benzoato de 2-octilo y 4- (dimetilamino) benzoato de amilo; esteres de ácido cinámico, preferiblemente 4-metoxicinamato de 2-etilhexilo, 4-metoxicinamato de propilo, 4-metoxicinamato de isoamilo, 4-metoxicinamato de isopentilo, 2-ciano-3-fenilcinamato de 2-etil-hexilo (octocrileno) ; esteres de ácido salicílico, preferiblemente salicilato de 2-etilhexilo, salicilato de 4-isopropilbencilo, salicilato de homomentilo;
esteres de ácido benzalmalonico, preferiblemente 4-metoxibenzmalonato de di-2-etilhexilo; derivados de triazina, tales como, por ejemplo, 2,4,6-trianilino (p-carbo-2 ' -etil-1' -hexiloxi) -1,3, 5 -triazina (octiltriazona) y dioctilbutamidotriazona (Uvasorb® HEB) : Las substancias solubles en agua adecuadas son: ácido 2-fenilbencimidazol-5-sulfónico y las sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, amonio, alquilamonio, alcanolamonio y glucamonio del mismo; derivados de ácido sulfónico de benzofenonas, preferiblemente ácido 2-hidroxi-4-metoxibenzofenona-5-sulfónico y sus sales; derivados de ácido sulfónico de 3-bencilidenocamfor, tales como, por ejemplo, ácido 4-(2-oxo-3-bornildenometil) bencenosulfonico y ácido 2- (metil-5- (2-oxo-3-bornilideno) sulfónico y las sales de los mismos. Se da preferencia particular al uso de esteres de ácido cinámico, preferiblemente 4-metoxicinamato de 2-etilhexilo, 4-metoxicinamato de isopentilo, 2-ciano-3-fenilcinamato de 2-etilhexilo (octocrileno) . Los filtros de UV-A típicos, adecuados son: los derivados de benzoilmetano, tales como, por ejemplo, 1- (4 ' -ter-butilfenil) -3- (4 ' -hidroifenil) propano- 1, 3 -diona, 4-ter-butil-4 ' -hidroxidibenzoilmetano o l-fenil-3- (4 ' -
isopropilfenil) propano-1, 3 -diona los derivados aminohidroxi substituidos de benzofenonas, tales como, por ejemplo, n-hexilbenzoato de N,N-dietilaminohidroxibenzoilo . Por supuesto los filtros de UV-A y UV-B se pueden usar en mezclas. Las substancias filtrantes de UV se dan en la tabla de abajo .
Tabla 3 Substancias filtrantes de UV adecuadas Además de los dos grupos citados arriba de substancias fotoprotectoras primarias, también es posible usar agentes
fotoprotectores secundarios del tipo antioxidante los cuales interrumpen la cadena de reacciones fotoquímicas las cuales se activan cuando la radiación UV penetra en la piel. Los ejemplos típicos de estos son el ácido ascórbico (vitamina C) . En el método de acuerdo con la invención, se da preferencia a aquellos polipéptidos de enlace a la queratina (ii) los cuales (c) comprenden al menos una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24,26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o0 170, o (d) corresponde a un polipéptido el cual es al menos 40%, 45% o 50%, preferiblemente al menos 55% o 60%, 655 o 70%, en particular preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93% o 94%, en particular muy preferiblemente al menos 95% o 96% idéntico con al menos una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108,
110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170 y que puede enlazarse a la queratina. En una modalidad preferida de la presente invención, el polipéptido de enlace a la queratina (ii) usado, está codificado por una molécula de ácido nucleico que comprende al menos una molécula de ácido nucleico elegida del grupo que consiste de: a) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales codifican un polipéptido que comprende la secuencia mostrada en la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54,
56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84,
86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136,
138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166,168 o 170; b) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales comprenden al menos un polinucleótido de la secuencia mostrada en la SEC ID No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39,41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55,
57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85,
87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137,
139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 o 169; c) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales codifican un polipéptido de acuerdo con las secuencias SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170; d) las moléculas de ácidos nucleicos con una secuencia del ácido nucleico correspondiente a al menos una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID No. : 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 o 169 o las moléculas de ácido nucleico derivadas de las mismas por substitución, eliminación o inserción las cuales codifican un polipéptido el cual es al menos 40% o -50%, preferiblemente al menos 55%, 60%, 65% o 70%, en particular preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93% o 94%, en particular muy preferiblemente al menos 95% o 96% idéntico con al menos una de las secuencias de
acuerdo con la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46,48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170 o 166 y que puede enlazarse a la queratina; e) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales codifican un polipéptido el cual se reconoce por un anticuerpo monoclonal dirigido hacia un polipéptido el cual se codifica por las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) ; f) las moléculas de ácidos nucleicos que codifican una proteína de enlace a la queratina la cual, bajo condiciones severas, se híbrida con una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) ; g) las moléculas de ácidos nucleicos que codifican una proteína de enlace a la queratina la cual se puede aislar de un banco de ADN usando una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) (c) o fragmentos de la misma que comprenden al menos 15 nt, preferiblemente 20 nt, 30 nt, 50 nt , 100 nt, 200 nt, 500 nt, como sonda, bajo condiciones de hibridación severas, y h) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales se pueden producción mediante retro-traducción de una de las
secuencias de aminoácidos mostradas en las secuencias SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60,62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170. Los dominios del polipéptido de enlace a la queratina adecuados de acuerdo con la invención están presentes en las secuencias polipeptídicas de las desmoplaquinas, las placofilinas, las placoglobinas, las plecinas, las periplaquinas, las envoplaquinas, las tricohialinas, las epiplaquinas y las proteínas del folículo capilar. En una modalidad preferida de la presente invención, las desmoplaquinas de acuerdo con las secuencias SEC ID No. : 2, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164 o 166, y/o las placofilinas de acuerdo con las secuencias SEC ID No.: 18, 20, 26, 28, 32, 34, 36, 168, 170 y/o las placoglobinas de acuerdo con las secuencias SEC ID No.: 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, y/o las periplaquinas de acuerdo con la secuencia SEC ID No. : 86, y/o, las envoplaquinas de acuerdo con la SEC ID No.: 90, 92, 94, 96, 98, 102, 104, 105 y/o las secuencias de acuerdo co la SEC ID No. : 138 y 140 se usan como los polipéptidos de enlace a la
queratina. Los dominios de enlace a la queratina preferidos son los polipéptidos de desmoplaquina mostrados en las secuencias SEC ID Nos.: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170,, y los equivalentes funcionales de los mismos. En una modalidad de la invención preferida particularmente, los polipéptidos de enlace a la queratina, mostrados en las secuencias SEC ID No.: 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166,168 y/o 170 se usan en el método de acuerdo con la invención. En una modalidad de la presente invención la cual se prefiere sobre todas, se usa la proteína de enlace a la queratina mostrada en la sec SEC ID No.; 168. Se da por descontado aquí que esta proteína se puede usar ya sea con o sin los anclajes de histidina presentes en la SEC ID No.: 168. Por lo tanto, el anclaje de histidina (o un sistema de purificación/detección a ser usado de manera análoga) también puede estar presente en la C-terminal. En el uso práctico de dichas proteínas de enlace a la queratina (por ejemplo, en preparaciones cosméticas) , un anclaje de histidina
(o un sistema de purificación/identificación a ser usado de manera análoga) no es necesario. Por lo tanto se prefiere el uso de dichas proteínas son secuencias de aminoácidos adicionales . Incluidos del mismo modo de acuerdo con la invención están los "equivalentes funcionales" de los polipéptidos de
enlace a la queratina (i) descritos específicamente y el uso de estos en el método de acuerdo con la invención. Para los propósitos de la presente invención, "equivalentes funcionales" o análogos de los polipéptidos de enlace a la queratina (ii) descritos específicamente son polipéptidos diferentes de estos, los cuales también tienen la actividad biológica deseada, tal como, por ejemplo, enlace a la queratina. Así, por ejemplo, se entiende que los "equivalentes funcionales" de los polipéptidos de enlace a la queratina denotan aquellos polipéptidos los cuales, bajo condiciones comparables de otro modo, en las pruebas cuantitativas de enlace a la queratina descritas en los ejemplos, tienen aproximadamente 10%, 20%, 30%, 405 o 50%, preferiblemente 60%. 70%, 80% o 90%, en particular preferiblemente 100%, 125%, 150%, en particular muy preferiblemente 200%, 300% o 400%, más preferiblemente 500%, 600%, 700% o 1000% o más de la capacidad de enlace a la queratina de los polipéptidos mostrados bajo la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170.
De acuerdo con la invención, se entiende que los
"equivalentes funcionales" también denotan las muteinas las cuales tienen un aminoácido diferente al dado específicamente en al menos una posición de la secuencia de las secuencias de aminoácidos citadas arriba, pero no obstante tienen una de las actividades biológicas citadas arriba. Los "equivalentes funcionales" incluyen por lo tanto las muteinas que se pueden obtener por una mutación donde los cambios específicos pueden resultar en cualquier posición de la secuencia siempre que estos lleven a una muteina con el perfil de propiedades de
' acuerdo con la invención. Para los propósitos de la presente invención, "mutación" significa el cambio en la secuencia del ácido nucleico de una variante genética en un plásmido o en el genoma de un organismo. Las mutaciones pueden darse, por ejemplo, como resultado de errores durante la replicación, o pueden ser causadas por mutágenos. La tasa de las mutaciones espontáneas en el genoma celular de los organismos es muy baja aunque se las personas con experiencia en la técnica, informados conocen un gran número de mutágenos biológicos, químicos o físicos. Las mutaciones comprenden substituciones, inserciones, eliminaciones de uno o más radicales de ácido nucleicos. Se entiende que las substituciones denotan el reemplazo de bases individuales de los ácidos nucleicos, haciendo una distinción
aquí entre transiciones (substituciones de una base de purina por una base de purina o una base de pirimidina por una base de pirimidina) y transversiones (substituciones de una base de purina por una base de pirimidina (o viceversa) ) . Se entiende que las adiciones o inserciones denotan la incorporación de radicales de ácidos nucleicos adicionales en el ADN, resultando posiblemente en desplazamientos en el marco de lectura. Con los desplazamientos del marco de lectura de este tipo, se hace una distinción entre las inserciones/adiciones "en el marco" e inserciones "fuera del marco" . En el caso de las inserciones/adiciones "en el marco" , el marco de lectura se retiene y surge un polipéptido agrandado por el número de aminoácidos codificados por los ácidos nucleicos insertados. En el caso de las inserciones/adiciones "fuera del marco", el marco de lectura original se pierde y ya no es posible la formación de un polipéptido completo y funcional. Las eliminaciones describen la pérdida de uno o más pares de bases, lo cual del mismo modo lleva a desplazamientos "en fase" o "fuera de fase" en el marco de lectura y las consecuencias asociadas con eso con respecto a la formación de una proteína intacta. Los agentes mutagénicos (mutágenos) los cuales se pueden usar para producir mutaciones aleatorias o buscadas como
objetivos y los métodos y las técnicas aplicables se conocen por las personas con experiencia en la técnica. Tales métodos y mutágenos se describen, por ejemplo, en A.M. van Harten [(1998), "Mutation breeding: theory and practical applications" , Cambridge University Press, Cambridge, UK] , E Friedberg, G Walker, W Siede [(1995), "DNA Repair and Mutagenesis", Blackwell Publishing], o K. Sankaranarayanan, J. M. Gentile, L. R. Ferguson [(2000) "Protocols in Mutagenesis", Elsevier Health Sciences] . Para introducir las mutaciones buscadas como objetivos, se pueden usar los métodos y los procesos acostumbrados de la biología molecular tales como, por ejemplo, los Equipos de Mutagenesos in Vitro, el Equipo de Mutagénesis in Vitro de LA PCR (Takara Shuzo, Kyoto) , el Equipo QuickChange® de Stratagene o la mutagénesis por PCR usando los cebadores adecuados . Como ya se discutió arriba, hay un gran número de mutágenos biológicos, químicos y físicos. Los mutágenos listados abajo se dan a manera de ejemplo, pero sin limitación. Los mutágenos químicos se pueden subdividir de acuerdo con su mecanismo de acción. Por lo tanto, hay análogos de bases (por ejemplo, 5-bromouracilo, 2-aminopurina) , agentes alquilantes mono y bifuncionales (por ejemplo, los
monofuncionales tales como etilmetilsulfonato, sulfato de dimetilo, o los bifuncionales tales como sulfito de dicloroetilo, mitomicina, nitrosoguanidinas - derivados de dialquilnitrosogaminas, N-nitrosoguanidina) o las substancias de intercalamiento (por ejemplo, acridinas, bromuro de etidio) . Así, por ejemplo, para el método de acuerdo con la invención, también es posible usar aquellos polipéptidos los cuales se pueden obtener como resultado de la una mutación de un polipéptido de acuerdo con la invención, por ejemplo, de acuerdo con la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 y/o 170. Los ejemplos de substituciones de aminoácidos adecuadas se dan en la tabla de abajo: Radical Original Ejemplos de Substitución Ala Ser Arg Lys Asn Gln; His Asp Glu
Cys Ser o Ala Gln Asn Glu Asp Gly Pro His Asn; Gln lie Leu; Val Leu lie; Val Lys Arg; Gln; Glu Met Leu; lie Phe Met; Leu; Tyr Ser Thr Thr Ser Trp Tyr Tyr Trp; Phe Val lie; Leu Tabla 4: Substituciones de aminoácidos adecuadas Se sabe que en la SEC ID No. : 2, la serina presente naturalmente en la posición 2849 puede, por ejemplo, ser reemplazada por glicina con el fin de evitar una fosforilación en esta posición (Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermedíate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus . , Mol Biol Cell.
2003 May; 14 (5) : 1978-92. Epub, 26 de enero del 2003). En el sentido de arriba, los "equivalentes funcionales" son también "precursores" de los polipéptidos descritos, y los "derivados funcionales" y las "sales" de los polipéptidos. Aquí, "precursores" son los precursores naturales o sintéticos de los polipéptidos con o sin la actividad biológica deseada. Se entiende que la expresión "sales" denota ya sea las sales de los grupos carboxilo o las sales de adición de ácido de las moléculas proteínicas de acuerdo con la invención, las sales de los grupos carboxilo se pueden preparar en una manera conocida per se e incluyen las sales inorgánicas, tales como, por ejemplo, las sales de sodio, calcio, amonio, fierro y zinc, y también las sales con bases orgánicas, tales como, por ejemplo, aminas tales como trietilamina, arginina, lisina, piperidina y las similares. También se proporcionan por la invención las sales de adición de ácido, tales como, por ejemplo, las sales con ácidos minerales, tales como ácido clorhídrico o ácido sulfúrico, y las sales con ácidos orgánicos tales como ácido acético y ácido oxálico. Los "equivalentes funcionales" naturalmente también comprenden los polipéptidos los cuales son accesibles de otros organismos, y las variantes de formación natural (alelos) . Por ejemplo, a través de comparaciones de secuencias, se pueden
determinar las áreas de regiones de secuencia homologa o regiones preservadas. Usando estas secuencias, se pueden inspeccionar las bases de datos de ADN (por ejemplo, bases de datos genómicas o de ADNc) por las enzimas equivalentes, usando programas bioinformáticos de comparación. Los programas de computadora adecuados y las bases de datos las cuales están accesibles al público se conocen lo suficiente por las personas con experiencia en la técnica. Estas alineaciones de las secuencias proteínicas conocidas se pueden llevar a cabo, por ejemplo, usando un programa de computadora, tal como Vector NTI 8 (versión del 25 de septiembre del 2002) de InforMax Inc. Además, "los equivalentes funcionales" son proteínas de fusiones las cuales tienen una de las secuencias de polipéptidos citadas arriba o los equivalentes funcionales derivados de estos y tienen al menos otra secuencia heteróloga funcionalmente diferente de esta en los enlace funcionales de la N- o la C-terminal (es decir, , sin deterioro funcional esencial mutuo de las partes de la proteína de fusión) . Los ejemplos no limitantes de tales secuencias heterólogas son, por ejemplo, los péptidos o las enzimas señal. Los "equivalentes funcionales" incluidos de acuerdo con la invención son homólogos a las proteínas descritas específicamente. Estos tienen al menos 40%, 45% o 50%,
preferiblemente al menos 55%, 60%, 65% p 70%, en particular, preferiblemente al menos 75%, 80%, 85% 90%, 91%, 92%, 93% o 94%, en particular muy preferiblemente al menos 95% o 95% de homología con una de las secuencias de aminoácidos descritas específicamente, calculada usando los programas de computadora y los algoritmos de computadora descritos en las definiciones.
En el caso de una posible glicosilación de las proteínas, los "equivalentes funcionales" de acuerdo con la invención incluyen las proteínas del tipo referido arriba en forma desglicolizada o glicolizada, y tamben las formas modificadas que se pueden obtener cambiando el patrón de glicosilación. En el caso de una posible glicosilación de las proteínas, los "equivalentes funcionales" de acuerdo con la invención incluyen las proteínas del tipo referido arriba en forma desfosforilada o fosforilada, y también las formas modificadas que se pueden obtener cambiando el patrón de fosforilación. Los homólogos de los polipéptidos de acuerdo con la invención se pueden identificar analizando banco combinatorios de mutantes, tales como, por ejemplo, mutantes de acortamiento. Por ejemplo se puede producir un banco de variantes proteínicas por medio de mutagénesis combinatoria a nivel del ácido nucleico, tal como, por ejemplo, mediante
ligación enzimática de una mezcla de oligonucleótidos sintéticos. Existe un gran número de métodos los cuales se pueden usar para producir bancos de homólogos potenciales a partir de una secuencia oligonucleotidica degenerada. La síntesis química de una secuencia genética degenerada se puede llevar acabo en una máquina automática de síntesis de ADN, y el gen sintético se puede ligar después en un vector de expresión adecuado. El uso de un conjunto de genes degenerados hace posible proporcionar todas las secuencias en una mezcla, la cual codifica el conjunto deseado de secuencias proteínicas potenciales. Los métodos para sintetizar los oligonucleótidos degenerados se conocen por las personas con experiencia en la técnica (por ejemplo, Narang, S.A. (1983) Tetrahedron 39:3; Itakura et al. (1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323; Itakura et al., (1984) Science 198:1056; Ike et al. (1983) Nucleic Acids Res. 11 :477) . En la técnica previa, se conoce un número de técnicas para el análisis de los productos genéticos de bancos combinatorios los cuales han sido producidos por mutaciones puntuales o acortamiento, y para el análisis de bancos de ADNc por los productos genéticos con una propiedad seleccionada. Las técnicas usadas más frecuentemente para analizar bancos de genes grandes los cuales se someten al análisis con una alta productividad incluyen la clonación del banco de genes en
vectores de expresión replicables, transformar las células adecuadas con el banco de vectores resultante y expresar los genes combinatorios bajo condiciones bajo las cuales la detección de la actividad deseada facilita el aislamiento de los vectores los cuales codifican el gen cuyo producto ha sido detectado. La mutagénesis de grupo recursivo (REM) una técnica que aumenta la frecuencia de mutantes funcionales en los bancos, se puede usar en combinación con las pruebas de selección con el fin de identificar los homólogos (Arkin y Yourvan (1992) PNAS 89:7811-7815; Delgrave et al. (1993) Protein Engineering 6 (3) : 327-331) . La inspección de as genotecas de ADNc o de ADN geonómico disponibles físicamente de otros organismos, usando la secuencia de ácido nucleico descrita bajo las SEC ID No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 y/o 169, y/o partes de las mismas como sondas, es un método conocidos por las personas con experiencia en la técnica, para identificar los homólogos de otras maneras. Aquí, las sondas derivadas de las secuencias de ácidos nucleicos de acuerdo con la SEC ID No.: 1, 3, 5, 7, 9,
11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 y/o 169 tienen una longitud de al menos 20 bp, preferiblemente al menos 50 bp, en particular preferiblemente al menos 100 bp, en particular muy preferiblemente al menos 200 bp, más preferiblemente al menos 400 bp. La sonda también puede tener una o más kilobases de largo, por ejemplo, 1 Kb, 1.5 Kb. Para inspeccionar las genotecas también puede ser posible usar una secuencia de la hebra de ADN complementaria descrita en la SEC ID No. : en particular preferiblemente 165 y 167, más preferiblemente 167, o un fragmento de la misma con una longitud entre 20 bp y varias kilobases. Las condiciones de hibridación a ser usadas se describen arriba. En el método de acuerdo con la invención, es posible usar aquellas moléculas de ADN las cuales, bajo las condiciones estándar, se hibridan con las moléculas de ácidos nucleicos descritas por la SEC ID No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103,
105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 y/o 169, en particular preferiblemente 165 y 167, más preferiblemente 1687, y que codifican los polipéptidos de enlace a la queratina, las moléculas de ácidos nucleicos complementarias a estos o partes de los citados anteriormente, y como secuencias completas codifican los polipéptidos los cuales tienen las mismas propiedades que los polipéptidos descritos bajo la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 1Í8, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170. Una modalidad particularmente ventajosa de la invención son los polipéptidos de enlace a la queratina (i) los cuales comprenden al menos una de las secuencias polipeptídicas como se muestran en la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160,
162, 164, 166, 168 o 170, con la provisión de que el enlace a la queratina de dichos polipéptidos sea al menos 10%, 20%, 30%, 40% o 50%, preferiblemente 69%, 70%, 80% o 90%, en particular preferiblemente 100%, del valor el cual tienen las secuencias polipeptídicas correspondientes como se muestran en las SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 13= , 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170, medida en la prueba de acuerdo con el Ejemplo 9 o 10. Se da preferencia a usar polipéptidos de enlace a la queratina (ii) los cuales tienen una afinidad altamente específica por los organismos deseados. Por consiguiente, para los usos en cosméticos para la piel, se da preferencia a usar polipéptidos de enlace a la queratina (ii) los cuales tienen una afinidad particularmente alta por la queratina de la piel humana. Para los usos en cosméticos para la piel, se da preferencia a aquellas secuencias polipeptídicas las cuales tengan una afinidad particularmente alta por la queratina del cabelio humano . Para las aplicaciones en el campo de las mascotas,
además de las secuencias polipeptídicas descritas (SEC ID No. : 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40,42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170, en particular preferiblemente 166 y 168, más preferiblemente 168) , se prefieren por consiguiente aquellos polipéptidos de enlace a la queratina (ii) los cuales tienen una afinidad particularmente alta por la queratina correspondiente, por ejemplo, la queratina canina o la queratina felina. Sin embargo, también es posible usar más de un polipéptido de enlace a la queratina (ii) acoplado con las moléculas efectoras (i) de acuerdo con la invención, por ejemplo, un polipéptido de enlace a la queratina (ii) el cual tenga una alta afinidad de enlace para la queratina de la piel humana se puede combinar con las moléculas efectoras en combinación con otro polipéptido de enlace a la queratina (ii) el cual tenga una afinidad alta por la queratina del cabello humano. También es posible usar polipéptidos quiméricos los cuales comprende dos o más copias del mismo (o también de diferentes) polipéptidos de enlace a la queratina (ii) o los dominios de enlace a la queratina de los mismos. Por ejemplo,
fue posible por lo tanto, lograr el enlace efectivo a la queratina. Los polipéptidos de enlace a la queratina (ii) adecuados se conocen. Por ejemplo, las desmoplaquinas y las plectinas comprenden dominios de enlace a la queratina (Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L, Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermedíate filaments is mediated by distinct sequences within .their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May;14 (5) : 1978-92. Epub enero 26 del 2003; Hopkinson SS, Jones JC, The N-terminus of the transmembrane protein BP180 interacts with the N-terminal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of the hemidesmosome, Mol Biol Cell. Ene 2000; 11 (1) :277-86) . Los polipéptidos de enlace a la queratina (i) de acuerdo con la invención también pueden - si se desea- ser fácilmente separados otra vez de la queratina. Para esto, por ejemplo, se puede usar un enjuague que contiene queratina, como resultado de lo cual, los polipéptidos de enlace a la queratina (i) se desplazan de su enlazamiento existente a la queratina y se saturan con la queratoina del enjuague. Alternativamente, un enjuague con un alto contenido de detergente (por ejemplo, SDS) también es posible para el lavado.
Los polipéptidos de enlace a la queratina (i) de acuerdo con la invención tiene un campo de aplicación adicional en cosméticos humanos, en particular en el cuidado de la piel, el cuidado de las uñas y el cuidado del cabello, el cuidado de animales, el cuidado del cuero y el trabajado del cuero. Preferiblemente, los polipéptidos de enlace a la queratina (ii) de acuerdo con la invención se usan para cosméticos de la piel y cosméticos para el cabello. Estos permiten una concentración alta o un tiempo de acción largo de las moléculas efectoras de cuidado o de protección. En una modalidad particularmente preferida de la presente invención, se usan los polipéptidos de enlace a la queratina los cuales tienen una afinidad de enlace por la queratina de la piel, el cabello o las uñas humanas. En una modalidad preferida específicamente, la presente invención proporciona un método en el cual i) el polipéptido de enlace a la queratina usado comprende una de las secuencias mostradas en la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 O 170,
preferiblemente en la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44, 46,48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170,, en particular preferiblemente 166 y 168, más preferiblemente 168, y j) la molécula enlazadora (iii) usada es maleimidopentanol, y k) la molécula efectora (i) usada es ácido 2-(4-N,N-dietilamino-2 -hidroxibenzoil) benzoico. La presente invención proporciona además moléculas efectoras de enlace a la queratina en las cuales la molécula efectora (i) se acopla directamente con el polipéptido de enlace a la queratina vía una molécula enlazadora (iii) . Se da preferencia a las moléculas efectoras de enlace a la queratina la cuales comprenden al menos un polipéptido de enlace a la queratina (ii) de acuerdo con las secuencias mostradas en la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157 o 158,, preferiblemente en la SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170,, y durante cuya producción, la molécula enlazadora (iii) usada,
fue maleimidopentanol. Se da preferencia muy particular a las moléculas efectoras de enlace a la queratina citadas arriba, en las cuales la molécula (iii) enlazadora usada fue meleimidopentanol y la molécula efectora (i) usada se compone de derivados de ácido 2- (4-N,N-dialquilamino-2-hidroxi) benzoilbenzoico (como se describe arriba). La presente invención proporciona además el uso en preparaciones cosméticas de las moléculas efectoras de enlace a la queratina producidas de acuerdo con la invención. preferiblemente, las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención se usan en cosméticos para el piel y para el cabello. Estas permiten una concentración alta y un tiempo de acción largo de las substancias efectoras de cuidado de la piel y de protección del cabello. Además, se prefiere el uso de las moléculas efectoras de enlace a la queratina en el cuidado de las encías y la boca. En una modalidad preferida de la presente invención, las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo se añaden a los dermocosméticos o las composiciones para cuidado oral, dental y de dentaduras en una concentración de desde 0.001' a 1 por ciento en peso (% en peso), preferiblemente 0.01 a 0.9% en peso, en particular preferiblemente 0.01 a 0.8% en
peso o 0.01 a 0.7% en peso, en particular muy preferiblemente 0.01 a 0.6% en peso o 0.01 a 0.5% en peso, mas preferiblemente 0.01 a 0.4% en peso o 0.01 a 0.3% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad adicional, las composiciones comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en una concentración de desde 1 a 10% en peso, preferiblemente 2 a 8% en peso, 3 a 7% en peso, 4 a 6% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad preferida de igual modo, las composiciones comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en una concentración de desde 10 a 20% en peso, preferiblemente 11 a 19% en peso, 12 a 18% en peso, 13 a 17% en peso, 14 a 16% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad preferida aun más, las composiciones comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en una concentración de desde 20 a 30% en peso, preferiblemente 21 a 29% en peso, 22 a 28% en peso, 23 a 27% en peso, 24 a 26% en peso, con base en el peso total de la composición. En otra modalidad preferida, las moléculas efectoras de enlace a la queratina citadas arriba, de acuerdo con la
invención se usan en dermocosméticos y/o composiciones para cuidado oral, dental y de dentaduras en combinación con (i) auxiliares cosméticos del campo de los cosméticos decorativos, (ii) ingredientes activos dermocosméticos y (iii) los auxiliares y aditivos adecuados. Preferiblemente, estos son ingredientes activos y auxiliares y aditivos los cuales se usan para proteger la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies del daño, para tratar el daño existente a la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies y para el cuidado de la piel, el cabello y/o las uñas de las manos o las uñas de los pies. Estos ingredientes activos se eligen preferiblemente del grupo de los polímeros, pigmentos, humectantes, aceites, ceras, enzimas, minerales, vitaminas, protectores solares, tintes, fragancias, antioxidantes, conservadores y/o ingredientes activos farmacéuticos naturales o sintéticos. Los auxiliares y los aditivos adecuados para producir las preparaciones cosméticas para el cabello o cosméticas para la piel son familiares para las personas con experiencia en la técnica y se pueden encontrar en los manuales de cosméticos, por ejemplo, Schrader, Grundlagen und Rezepturen dar Kosmetika
[Fundamentáis and formulations of cosmetics] , Hüthig Verlag,
Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1, o Umbach, Kosmetik:
Entwicklung, Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel
[Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions], 2da edición expandida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9. Preferiblemente, las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención se usan en dermocosméticos o composiciones para cuidado oral, cuidado dental y cuidado de dentaduras en combinación con al menos un constituyente diferente de las mismas el cual se elige de los ingredientes activos cosméticamente, emulgentes, surfactantes, conservadores, aceites perfumados, espesantes, polímeros capilares, acondicionadores de cabello y piel, polímeros de injerto, polímeros solubles o dispersibles en agua que contienen silicona, agentes fotoprotectores, blanqueadores, formadores de gel, agentes de protección, colorantes, agentes de teñido, agentes de bronceado, tintes, pigmentos, reguladores de consistencia, humectantes, agentes de regeneración de grasa, colágeno, hidrolizados de proteínas, lípidos, antioxidantes, antiespumantes, antiestáticos, emolientes y suavizadores. Los ingredientes activos también pueden estar presentes en las preparaciones cosméticas en forma encapsulada, como se describe en las patentes/solicitudes de patente EP 00974775 Bl, DE 2311 712, EP 0278 878, DE 199947147, EP 0706822B1 y WO 98/16621, a las cuales se hace referencia expresamente aquí por este medio.
Ventajosamente, los antioxidantes se eligen del grupo que consiste de aminoácidos (por ejemplo, glicina, histidina, tirosina, triptofano) y los derivados de los mismos, imidazoles (por ejemplo, ácido urocánico) y derivados de los mismos, péptidos tales como D,L-carmosina, D-carmosina, L-carmosina y derivados de los mismos (por ejemplo, anserina) , carotenoides (por ejemplo, ß-caroteno, licopeno) y derivados de los mismos, ácido clorogénico y derivados del mismo, ácido lipoico y derivados del mismo (por ejemplo, ácido dihidrolipoico) , aurotioglucosa, propiltiouracilo y otros tioles (por ejemplo, tiorodoxina, glutationa, cisteína, cistina, cistamina y el glucosil, N-acetil, metil, etil, propil, amil, butil y lauril, palmitoil, oleil, ?-linoleil, colesteril y gliceril esteres de los mismos) y sales de los mismos, tiodipropionato de dilaurilo, tiodipropionato de diestearilo, ácido tiodipropionico y derivados de los mismos
(esteres, éteres, péptidos, lípidos, nucleótidos, nucleósidos y sales), y compuestos de sulfoximina (por ejemplo, butionina, sulfoximinas, sulfoximinas de homocisteína, butotionino sulfonas, penta, hexa, heptationino sulfoximina) en dosis muy poco toleradas (por ejemplo pmol a µmol/kg) , también (agentes formadores de quelatos (metales) (por ejemplo, a-hidroxi ácidos grasos, ácido palmítico, ácido fítico, lactoferrina) ,
a-hidroxi ácidos (por ejemplo, ácido cítrico, ácido láctico, ácido málico) , ácido húmico, ácido biliar, extractos biliares, bilirrubina, bilverdina, EDTA y derivados de los mismos, ácidos grasos insaturados y derivados de los mismos (por ejemplo, ácido ?-linoleico, ácido linoleico, ácido oleico), ácido fólico y derivados de los mismos, ubiquinona y ubiquinol y derivados de los mismos, vitamina C y derivados de la misma (por ejemplo, ascorbato de sodio, palmitato de ascorbilo, ascorbil fosfato de Mg, acetato de ascorbilo) , tocoferol y derivados del mismo (por ejemplo, acetato de vitamina E, tocotrienol) , vitamina A y sus derivados (palmitato de vitamina A) , y benzoato de coniferilo o resina de benzoina, ácido rutinico y derivados del mismo, a-glicosilrutina, ácido ferúlico, furfurildenoglucitol, carnosina, butilhidroxitolueno, butilhidroxianisol, ácido norhidroguaiacico, ácido nordihidroguaiaretico, trihidroxibutirofenona, ácido úrico y derivados de los mismos, mañosa y derivados de la misma, zinc y derivados del mismo (por ejemplo, ZnO, ZnS0 ) , selenio y derivados del mismo (por ejemplo, selenometionina) , estilbenos y derivados del los mismos (por ejemplo, óxido de estilbeno, óxido de trans-estilbeno) . Las vitaminas, provitaminas o precursores de vitaminas
del grupo de la vitamina B o los derivados de los mismos y los derivados de 2-furanona a ser usados con preferencia e acuerdo con la invención incluyen, inter alia: Vitamina Bi, nombre trivial tiamina, nombre químico cloruro de 3- [ (4 ' -amino-2 ' -metil-5' -pirimidinil) metil] -5- (2-hidroxietil) -4-metiltiazolio. Vitamina B2, nombre trivial riboflavina, nombre químico 7, 8-dimetil -10- (1-D-ribitil) -benz [g] pteridino-2 , 4 -diona. En forma libre, la riboflavina se forma por ejemplo, en el suero de leche, otros derivados de riboflavina se pueden aislar de bacterias y levaduras. Un estereoisómero de la riboflavina el cual es adecuado de igual modo de acuerdo con la invención es la lixoflavina, la cual se puede aislar de la harina de pescado o del hígado y contiene un radical D-arabitilo en lugar del radical D-ribitilo. Vitamina B3. Los compuestos ácido nicotínico y nicotinamida (niacinamida) frecuentemente llevan este nombre. De acuerdo con la invención, se da preferencia a la nicotinamida . Vitamina B5 (ácido pantoténico y pantenol) . Se da preferencia a usar el pantenol . Los derivados de pantenol los cuales se pueden usar de acuerdo con la invención son, en particular, los esteres y éteres de pantenol, y los pantenoles derivados cationicamete . En una modalidad preferida adicional
de la invención, los derivados de 2-furanona también se pueden usar además del ácido pantoténico o el pantenol . Los derivados preferidos particularmente son también las substancias disponibles comercialmente dihidro-3-hidroxi-4 , 4-dimetil-2 (3H) -furanona con el nombre trivial pantolactona (Merck), 4-hidroximetil-?-butirolactona (Merck), 3 , 3-dimetil-2-hidroxi-?-butirolactona (Aldrich) y 2 , 5-dihidro-5-metoxi-2-furanona
(Merck), con todos los estereoisómeros incluidos expresamente.
Estos compuestos imparten ventajosamente propiedades de humectación y alivio de la piel a los dermocosméticos de acuerdo con la invención. Vitamina B6, la cual se entiende aquí que no denota una sustancia uniforme, sino los derivados de 5 -hidroximetil -2-metilpiridin-3-ol conocidos bajo los nombres triviales piridoxina, piridoxamina y piridoxal . Vitamina B7 (biotina) , llamada también como vitamina H o "vitamina de la piel". La biotina es el ácido (3aS, 4S, 6aR) -2-oxohexahidrotienol [3 , 4-d] imidazol -4 -valérico . El pantenol, la pantolactona, nicotinamida y la biotina se prefiere muy particularmente de acuerdo con la invención. Tintes Los tintes los cuales se pueden usar son las substancias aprobadas y adecuadas para propósitos cosméticos, como se
listan, por ejemplo, en la publicación "Kosmetische Fárbemittel" [Colorantes cosméticos] de la Farbstoffkommission der Deutchen Forschungsgemeinschaft [Comisión de Tintes de la Sociedad de Investigación Alemana] , publicado por Verlag Chemie, Weinheim, 1984. Estos tintes se usan usualmente en concentraciones de, desde 0.001 a 0.1% en peso, con base en la mezcla total . Pigmentos En una modalidad preferida, las composiciones de acuerdo con la invención comprenden al menos un pigmento. Los pigmentos están presentes en la masa del producto en forma disuelta y pueden estar presentes en una cantidad de, desde 0.01% a 25% en peso, en particular preferiblemente desde 5 a 15% en peso. El tamaño de partícula preferido es de 1 a 200 µm, en particular 2 a 150 µm, en particular preferiblemente 10 a 100 µm. Los pigmentos son colorantes los cuales son virtualmente insolubles en el medio de aplicación y pueden ser inorgánicos u orgánicos. También son posibles los pigmentos inorgánicos-orgánicos mezclados. Se da preferencia a los pigmentos inorgánicos. La ventaja de los pigmentos inorgánicos es su excelente fotoestabilidad, estabilidad al clima y estabilidad térmica. Los pigmentos orgánicos pueden ser de origen natural, por ejemplo, preparados de tiza, ocre, tierra de sombra, tierra verde, tierra de siena quemada o grafito.
Los pigmentos pueden ser pigmentos blancos, tales como, por ejemplo, dióxido de titanio u óxido de zinc, pigmentos negros, tales como, por ejemplo, negro de óxido de hierro, pigmentos con color, tales como, por ejemplo, azul ultramarino o rojo de óxido de hierro, pigmentos perlescentes, pigmentos con efecto metálico, pigmentos perlescentes y fluorescentes o pigmentos fosforescentes, donde preferiblemente al menos un pigmento es un pigmento no blanco, con color. Los óxidos metálicos, hidróxidos e hidratos de óxidos, pigmentos de fase mezclada, silicatos que contienen azufre, sulfuros metálicos, cianuros metálicos complejos, sulfatos metálicos, cromatos y molibdatos, y los metales en si (pigmentos de bronce) son adecuados. De conveniencia particular son el dióxido de titanio (Cl 77891) , el óxido de hierro negro (Cl 77499) , el óxido de hierro amarillo (Cl 77492) , el óxido de hierro rojo y café (Cl 77491) , el violeta de manganeso (Cl 77742) , ultramarino (sulfosilicatos de sodio y aluminio, Cl 7707, Pigmento Azul 29) , hidrato de óxido de cromo (Cl 77289) , azul acero (ferrocianuro férrico, Cl 77510) , carmín (cochinilla) . Se da preferencia particular a los pigmentos perlescentes y a los pigmentos con color basados en mica, los cuales se revisten con un óxido metálico o un oxicloruro metálico, tales como dióxido de titanio u oxicloruro de bismuto, y si es apropiado otras substancias que imparten color, tales como
óxidos de fierro, azul acero, ultramarino, carmín, etc., y donde el color se pueda determinar variando el espesor de la capa. Los pigmentos de este tipo se venden, por ejemplo, bajo los nombres comerciales Roña®, Colorona®, Dichrona® y timiron®. Los pigmentos orgánicos son, por ejemplo, los pigmentos naturales sepia, gutagamba, café Cassel, índigo, clorofila y otros pigmentos de plantas. Los pigmentos orgánicos son, por ejemplo, los pigmentos azo, antraquinoides, indigoides, dioxanzina, quinacridona, ftalocianina, isoindolinona, perileno y perinona, complejos metálicos, azul alcalino y pigmentos de dicetopirrolopirrol . En una modalidad, las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo se usan con al menos una sustancia en partículas la cual está presente en la composición en una cantidad de, desde 0.01 a 10% en peso, preferiblemente desde 0.05 a 5% en peso. Las substancias adecuadas son, por ejemplo, las substancias las cuales son sólidas a la temperatura ambiente (25°C) y están en forma de partículas. Por ejemplo, son adecuados la sílice, silicatos, aluminatos, tierras arcillosas, mica, sales, en particular, sales metálicas inorgánicas, óxidos metálicos, por ejemplo, dióxido de titanio, minerales y partículas poliméricas. Las partículas están presentes en la composición preferiblemente
en forma dispersada establemente, no disuelta y pueden, enseguida de la aplicación a la superficie de aplicación y la evaporación del solvente, ser depositadas en forma sólida. Las substancias en particular preferidas son sílice (gel de sílice, dióxido de silicio) y sales metálicas, en particular sales metálicas inorgánicas, donde se prefiere particularmente el sílice. Las sales metálicas son, por ejemplo, haluros de metales alcalinos o metales alcalinotérreos, tales como cloruro de sodio o cloruro de potasio; sulfatos de metales alcalinos o metales alcalinotérreos, tales como sulfatos de sodio o sulfato de magnesio. Agentes perlescentes Los agentes perlescentes son, por ejemplo, alquelen glicol esteres, específicamente diesterato de etlen glicol, ácido graso alcanolamidas, específicamente ácido graso de coco dietanolamida; glicéridos parciales, específicamente monoglicérido de ácido esteárico; esteres de ácidos carboxílicos opcionalmente hidroxi substituidos, polibásicos con alcoholes de ácidos grasos que tienen 6 a 22 átomos de carbono, específicamente esteres de cadena larga de ácido tartárico, substancias grasas, tales como, por ejemplo, alcoholes grasos, cetonas grasas, aldehidos grasos, éteres grasos y carbonatos grasos, los cuales tiene en total al menos 24 átomos de carbono; específicamente laurona y diestearil
éter; ácidos grasos, tales como ácido esteárico, ácido hidroxiestearico o ácido behénico, productos de apertura de anillos de epóxidos olefínicos que tienen 12 a 22 átomos de carbono con alcoholes grasos que tienen 12 a 22 átomos de carbono y/o polioles que tienen 2 a 15 átomos de carbono y 2 a 19 grupos hidroxilo, y mezclas de los mismos. Los espesantes acostumbrados en tales formulaciones son los ácidos poliacrílicos reticulados y los derivados de los mismos, polisacáridos y derivados de los mismos, tales como goma de xantano, agar agar, alginatos o tilosas, derivados de celulosa, por ejemplo, carboximetilcelulosa o hidroxicarboximetilcelulosa, alcoholes grasos, monoglicéridos y ácidos grasos, alcohol polivinílico y polivinilpirrolidona. Se da preferencia a usar espesantes no iónicos. Los ingredientes activos cosméticamente y/o dermocosméticamente adecuados son, por ejemplo, los ingredientes activos colorantes, agentes de pigmentación de la piel y el cabello, agentes de teñido, agentes de bronceado, blanqueadores, substancias de endurecimiento de la queratina, ingredientes activos antimicrobianos, ingredientes activos fotofiltros, ingredientes activos repelentes, substancias hiperémicas, substancias efectivas queratoliticamente y queratoplasticamente, ingredientes activos anticaspa, antiflogísticos, substancias queratinizantes, ingredientes
activos antioxidantes y/o ingredientes activos los cuales actúan como depuradores de radicales libres, substancias hidratantes o humectantes, ingredientes activos de regenración de grasa, ingredientes activos antieritematosos o antialérgicos, ácidos grasos ramificados, tales como ácido 18-metilericosanoico, y mezclas de los mismos. Los ingredientes activos que broncean la piel artificialmente los cuales son adecuados para broncear la piel sin radiación natural o artificial con rayos UV son, por ejemplo, dihidroacetona, alloxan y extracto de cascara de nuez. Las substancias de endurecimiento de queratinas adecuadas son usualmente los ingredientes activos, los cuales se usan también en desodorantes, tales como, por ejemplo, sulfato de potasio y aluminio, hidroxicloruro de aluminio, lactato de aluminiOo, etc. Los ingredientes activos antimicrobianos se usan para destruir los microorganismos o para inhibir su crecimiento y por lo tanto sirven tanto como conservadores y como substancias desodorizantes las cuales reducen la formación o la intensidad del olor corporal. Estas incluyen, por ejemplo, los conservadores acostumbrados conocidos por las personas con experiencia en la técnica, tales como los esteres p-hidroxibenzoicos, imidazolidinilurea, formaldehído, ácido sórbico, ácido benzoico, ácido salicílico, etc. Tales
substancias son, por ejemplo, ricinoleato de zinc, triclosan, alquilolamidas de ácido undecilénico, citrato de trietilo, clorexidina, etc. Los conservadores adecuados a ser usados ventajosamente de acuerdo con la invención son:
Tabla 5: Conservadores adecuados. Los números E listados en la tabla de arriba son las designaciones usadas en la norma 95/2/EEC.
También son adecuados de acuerdo con la invención los conservadores o auxiliares conservadores acostumbrados en los cosméticos dibromodicianobutano (2-bromo-2-bromometilglutarodinitrilo) , butilcarbamato de 3-yodo-2-propinilo, 2 -bromo-2 -nitropeopano-1 , 3 -diol , imidazolidinilurea, 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona, 2-cloroacetamida, cloruro de benzalconio y alcohol bencílico.
También son adecuados como conservadores los fenil hidroxialquil éteres, en particular el compuesto conocido bajo el nombre fenoxietanol a causa de sus efectos bactericidas y fungicidas sobre un número de microorganismos. Otros agentes antimicrobianos son adecuados de igual manera para ser incorporados en las preparaciones de acuerdo con la invención. Las substancias ventajosas son, por ejemplo, 2 , 4, 4 ' -tricloro-2 ' -hidroxifenil éter (irgasan) , l,6-di(4-clorofenilbiguanido) hexano (clorhexidina, 3,4,4'-triclorocarbanilida, compuestos de amonio cuaternario, aceite de clavo, aceite de menta, citrato de trietilo, farnesol (3, 7, ll-trimetil2, 6, 10-dodecatrien-l-ol) , y los ingredientes activos o las combinaciones de ingredientes activos descritas en las especificaciones de patente abiertas a inspección publica DE-37 40 186, DE-39 38 140, DE-42 04 321, DE-42 29 707, DE-43 09 372, DE-44 11 664, DE-195 41 967, DE-195 43 695, DE-195 43 696, DE-195 47 160, DE-196 02 108, DE-196 02 110, DE-196 02 111, DE-196 31 003, DE-196 31 004 y DE-196 34 019, y las especificaciones de patente DE-42 29 737, DE-42 37 081, DE-43 24 219, DE-44 29 467, DE-44 23 410 y DE-195 16 705. El bicarbonato de sodio también se puede usar ventajosamente. Los polipéptidos microbianos también se pueden usar igualmente. Aceites perfumados Si es apropiado, las composiciones cosméticas pueden
comprender aceites perfumados. Los aceites perfumados los cuales se pueden mencionar son, por ejemplo, mezclas de fragancias naturales y sintéticas. Las fragancias naturales son extractos de flores (lirio, lavanda, rosa, jazmín, neroli, ylang-ylang, tallos y hojas (geranio, pachulí, citrus aurantium) , frutas (anís, cilantro, alcaravea, enebro), cascaras de frutas (bergamota, limón, naranja), raíces (macis, angélica, apio, cardamomo, costus, flor de lis, Acorus calmus) , maderas (madera de pino, sándalo, madera de guayaco, madera de cedro, palisandro) , hierbas y pastos (taragon, limocillo, salvia, tomillo) , agujas y ramas (picea, abeto, pino, pino enano, resinas y bálsamos (gálbano, alemí, benzoina, mirra, incienso, opopanax) . También son adecuadas las materias primas animales, tales como por ejemplo, algalia y castóreo. Los compuestos de fragancia sintéticos típicos son los productos del tipo éster, del tipo éter, del tipo cetona, del tipo alcohol y del tipo hidrocarburos. Los compuestos de fragancia del tipo éster son, por ejemplo, acetato de bencilo, isobutirato de fenoxietilo, ciclohexilacetato de 4-ter-butilo, acetato de linalilo, acetato de dimetilbencilcarbinilo, acetato de feniletilo, benzoato de linalilo, formato de bencilo, glicinato de etil metilfenilo, ciclohexilpropionato de alilo, propionato de estrialilo y salicilato de bencilo. Los esteres incluyen, por ejemplo, bencil etil éter, los
aldehidos incluyen, por ejemplo, los alcanales que tienen 8 a 18 átomos de carbono, citral, citronelial, citroneliloxiacetaldehido, ciclamenaldehido, hidroxicitronelal , lilial y bourgeonal , las cetonas incluyen, por ejemplo, las iononas, a-isometilioneno y metil cedril cetona, los alcoholes incluyen etanol, citronelol, eugenol, isoeugenol, geraniol, linalool, feniletil alcohol y terpenol, los hidrocarburos incluyen principalmente los terpenos y bálsamos. Sin embargo, se da preferencia a usar mezclas de diferentes fragancias las cuales juntas producen un efecto de aroma placentero. Los aceites esenciales con volatilidad relativamente baja, los cuales se usan por lo común como componentes de aroma, también son adecuados como aceites perfumados, por ejemplo, aceite de salvia, aceite de manzanilla, aceite de clavo, aceite de melisa, aceite de menta, aceite de hojas de canela, aceite de flores de tila, aceite de bayas de junípero, aceite de Vetivera ziznioides, aceite de olíbano, aceite de gálbano, aceite de labolanum y aceite de Lavandula hybrida. Preferiblemente, se usa el aceite de bergamota, dihidromircenol , lilial, liral, citronelol, fenil etil alcohol, -hexilcinamaldehido, geraniol, bencilacetona, ciclamenaldehido, linalool, Boisambrene®Forte, ambroxan, indol, hediona, sandelice, aceite de elimon, aceite de mandarina, aceite de naranja, glicolato de alil amilo,
ciclovertal, aceite de Lavandula hybrida, aceite de Salvia clarea, ß-damascona, borbón de aceite de geranio, salicilato de ciciohexilo, Vertifox®Coeur, Iso-E-Super®, Fixolide®NP, evernilo, iraldein gamma, ácido fenilacetico, acetato de geranilo, acetato de bencilo, óxido de rosa, romillate, irotilo y floramato, individualmente o en mezclas. Aceites, Grasas y ceras. Preferiblemente, las composiciones de acuerdo con la invención comprenden aceites, grasas y/o ceras. Los constituyentes de la fase aceitosa y/o de la fase grasa de las composiciones de acuerdo con la invención se eligen ventajposamente del grupo de las lecitinas de triglicéridos de ácidos grasos, es decir, los triglicerol esteres de ácidos alcanocarboxílieos ramificados y/o no ramificados, saturados y/o no satiurados, con una longitud de cadena de 8 a 24, en particular 12 a 18, átomos de carbono. Los trigliceriso de ácidos grasos pueden, por ejemplo, ser elegidos ventajosamente del grupo de los aceites sintéticos, semi sintéticos y naturales, tales como, por ejemplo, aceite de olivo, aceite de girasol, aceite de soya, aceite de cacahuate, aceite de semillas de colza, aceite de almendras, aceite de palma, aceite de coco, aceite de ricino, aceite de germen de trigo, aceite de semillas de uva, aceite de cardo, aceite de primavera nocturna, aceite de nuez de macadamia y los
similares. Otros componentes aceites polares se pueden elegir del grupo de los esteres de ácidos alcanocarboxilicos ramificados y/o no ramificados, saturados y/o no saturados con longitudes de la cadena de 3 a 30 átomos de carbono y los alcoholes ramificados y/o no ramificados, saturados y/o no saturados con longitudes de cadena de 3 a 30 átomos de carbono y del grupo de los estrés de ácidos carboxílicos aromáticos y de los alcoholes ramificados y/o no ramificados, saturados y/o no saturados con longitudes de cadena de 3 a 30 átomos de carbono. Tales aceites esteres se pueden ser elegidos entonces ventajosamente del grupo que consiste de miristato de isopropilo, palmitato de isoproipilo, estearato de isopropilo, oleato de isopropilo, estearato de n-butilo, laurato de n-hexilo, oleato de n-decilo, estarato de isooctilo, estarato de isononilo, isononanoato de isononilo, palmitato de 2-etilhexilo, laurato de 2-etilhexilo, estearato de 2-hexildecilo, palmitato de 2-octildodecilo, oleato de oleilo, erucato de oleilo, oleato de erucilo, erucato dicaprililcarbonato de erucilo (cetiol CC) y cocogliceridos (miritol 331) , dicaprilato/dicaprato de butilen glicol y adipato de dibutilo, y las mezclas sintéticas, semisinteticas y naturales de tales esteres, tales como, por ejemplo, aceite de jojoba. Además, uno o más componentes aceitosos se pueden elegir
ventajosamente del grupo de los hidrocarburos ramificados y no ramificados, y las ceras, aceites de silicona, dialquil éteres, el grupo de los alcoholes ramificados o no ramificados, saturados o no saturados. Todas las mezclas de tales componentes aceitosos y cerosos también se pueden usar ventajosamente para los propósitos de la presente invención. Si es apropiado, también puede ser ventajoso usar ceras, por ejemplo, palmitato de cetilo, como el único componente lipídico de la fase aceitosa. De acuerdo con la invención, el componente aceitoso se elige ventajosamente del grupo que consiste de isoestearato de 2-etilhexilo, octildodecanol , isononanorato de isotridecilo, cocoato de 2 -etilhexilo, benzoato de alquilo de C12-C15, triglicérido caprilico/caprico, dicaprilil éter. De acuerdo con la invención, las mezclas de benzoato de alquilo de C12-C15 e isostearato de 2 -etilhexilo, mezclas de enzoato de alquilo de C12-C15 e isononanoato de isotridicelo, y mezclas de benzoato de alquilo de C12-C15, isostearato de etilhexilo e isonanoato de isotridecilo son ventajosas. De acuerdo con la invención, los aceites con una polaridad de, desde 5 a 50 mN/m usadas en particular preferiblemente son los triglicéridos de acido graso, en particular aceite de soya y/o aceite de almendras. De los hidrocarburos, el aceite de parafina, escualano y escualeno se deben usar ventajosamente para los propósitos de
la presente invención. Además, la fase aceitosa puede ser elegida ventajosamente del grupo de los alcoholes de Guerbet. Los alcoholes de Guerbet se nombraron después que Marcel Guebert quien descubrió su preparación por primera vez. Estos se forman de acuerdo con la ecuación de reacción R R— CHj-CHr— OH *- R — C I H-CHz— OH catalizador
Por la oxidación de un alcohol para dar un aldehido, por condensación aldolica del aldehido, eliminación del agua del aldol e hidrogenación del aldehido de alilo. Los alcoholes de Guerbet son líquidos aun a temperaturas bajas y virtualmente no provocan irritaciones de la piel. Estos se pueden usar ventajosamente como constituyentes de formación de grasa formación de super-grasas y también en re-formación de grasas en composiciones cosméticas. El uso de los alcoholes de Guerbet en los cosméticos se conoce per se. Tales especies se caracterizan entonces principalmente por la estructura
Aquí, Ri y R2 son usualmente radicales alquilo no ramificados .
De acuerdo con la invención el alcohol o los alcoholes de Guerbet se eligen ventajosamente del grupo donde Ri= propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo u octilo y R2= hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tridecilo o tetradecilo Los alcoholes de Guerbet de acuerdo con la invención son 2 -butiloctanol (disponibles comercialmente, por ejemplo, como usofol®12 (Condea) ) y 2 -hexildecanol (disponibles comercialmente, por ejemplo, como Iosofol®16 (Condea)). Las mezclas de los alcoholes de Guerbet de acuerdo con la invención también se deben usar ventajosamente de acuerdo con la invención, tales como, por ejemplo, mezclas de 2-butiloctanol y 2 -hexildecanol (disponibles comercialmente, por ejemplo, como Isofol®14 (Condea)). Todas las mezclas de tales componentes aceitosos y cerosos también se van a usar ventajosamente para los propósitos de la presente invención. Entre las poliolefinas, los polidecenos son las substancias preferidas. El componente aceitoso también puede tener ventajosamente un contenido de aceites de silicona cíclicos o lineales o consisten completamente de tales aceites, aunque se prefiere usar un contenido adicional de otros componentes de fase aceitosa aparte del aceite de silicona o los aceites de silicona. Las siliconas o los aceites de silicona de bajo peso
molecular se definen generalmente por la siguiente formula general :
Las siliconas o los aceites de silicona con pesos moleculares más altos se define generalmente por la siguiente formula general
donde los átomos de silicio pueden ser substituidos por radicales alquilo y/o radicales arilo idénticos o diferentes, los cuales se muestran aquí en términos generales por los radicales Ri a R . Aquí m puede asumir valores desde a 200 000.
Las siliconas cíclicas a ser usadas ventajosamente de acuerdo con la invención se definen generalmente por la siguiente formula general
R, rt-0-Si-0-S¡-
donde los átomos de silicio pueden ser substituidos por radicales alquilo y/o radicales arilo idénticos o diferentes, los cuales se muestran aquí en términos generales por los radicales Ri a R . Sin embargo, el numero de radicales diferentes no se limita necesariamente hasta 4. "n" aquí puede asumir valores de 3/2 a 20. Los valores fracciónales para n toman en consideración que en el ciclo pueden estar presentes números desiguales de grupos siloxilo. Ventajosamente, se elige la feniltrimeticona como el aceite de silicona. Otros aceites de silicona, por ejemplo, dimeticona, hexametilciclosiloxano, fenildimeticona. Ciclometicona, (octametilciclotetrasiloxano) , hexametilciclotrisiloxano, polidimetilsiloxano, poli (metilfenilsiloxano) , cetildimeticona, behenoxidimeticona, también se pueden usar ventajosamente para los propósitos de la presente invención. También son ventajosas las mezclas de ciclometicona e isononanoato de idotridecilo, y aquellas de ciclometicona e isostearato de 2. etilhexilo. Sin embargo también es ventajoso elegir aceites de silicona de constitución similar para los compuestos referidos arriba cuyas cadenas laterales orgánicas están derivadas, por ejemplo, polietoxiladas y/o polipropoxiladas . Estas incluyen, por ejemplo, copolimeros de polisiloxano-polialquilo-polieter, tales como, por ejemplo, cetildimeticona copoliol. La
ciclometicona (octametilciclotetrasiloxano) se usa ventajosamente como el aceite de silicona a ser usado de acuerdo con la invención. Los componentes grasos y/o cerosos a ser usados ventajosamente de acuerdo con la invención se pueden elegir del grupo de las ceras vegetales, las ceras animales, las ceras minerales y las ceras petroquímicas. Por ejemplo, cera de candelilla, cera de caranday, cera de Japón, cera de Lygeum spartum, cera de guarumo, cera de aceite de germen de arroz, cera de caña de azúcar, cera de moras, cera de ouricuri, cera de lignito, cera de joroba, manteca de karité, cera de abeja, cera de laca, blanco de ballena, lanolina (cera de lana) , grasa uropigia, ceresina, ozoquerita (cera de tierra) , ceras parafinitas y micro ceras son ventajosas . Otros componentes grasos y/o cerosos ventajosos son las ceras modificadas químicamente y las ceras sintéticas, tales como, por ejemplo, Syncrowax®HRC (tribenato de glicerilo) y Syncrowax®AW 1 C (acido graso de C?8-36) Y ceras de éster montanico, ceras de sasol, ceras de jojoba hidrogenadas, ceras de abeja sintéticas o modificadas (por ejemplo, cera de abeja de copoliol y/o cera de abeja de alquilo de C30-so) / ricinoleatos de cetilo, tales como, por ejemplo, Tegosoft®CR, ceras de polialqilneno, ceras de polietilen glicol, pero también las grasas modificadas químicamente, tales como, por
ejemplo, los aceites vegetales hidrogenados (por ejemplo, aceite de ricino hidrogenado y/o glicéridos grasos de coco hidrogenados) , triglicéridos tales como, por ejemplo, glicérido de soya hidrogenado, trihidroxiestearina, ácidos grasos, esteres de ácidos grasos y glicol esteres, tales como por ejemplo estearato de alquilo de C20- o/ estearato de alquilo de C20-4ohidroxiestearoilo y/o glicol montanato. Además, ciertos compuestos de organosilicio los cuales tienen propiedades similares a los componentes grasos y/o cerosos especificados, tales como, por ejemplo estearoxitrimetillsilano, también son ventajosos . De acuerdo con la invención los componentes grasos y/o cerosos se pueden usar en las composiciones ya sea individualmente o como una mezcla. Todas las mezclas de tales componentes aceitosos y cerosos también se pueden usar ventajosamente para los propósitos de la presente invención.-Ventajosamente, la fase aceitosa se elige del grupo que consiste de isoestearato de 2-etilhexilo, octildodecanol , isononanoato de isotridecilo, dicaprilato/dicaprato de butilen glicol, cocoato de 2-etilhexilo, benzoato de alquilo de C?2-?s# triglicérido caprilico/caprico, dicaprilil éter. Las mezclas de octildodecanol, triglicérido caprilico/caprico, dicaprilil éter, carbonato mde dicaprililo, cocogliceridos, o la smezclas de benzoato de alquilo de C12-15 e isoestearato de 2 -etilhexilo,
mezclas de benzoato de alquilo de C12-15 y dicaprilato de butilenglicol y las mezclas de benzoato de alquilo de C?2-?sr isoestearato de 2 -etilhexilo e isononanoato de isotridecilo son particularmente ventajosas. De los hidrocarburos, el aceite de parafina, cicloparafina, escualano, escualeno, poliisobuteno hidrogenado y polideceno se deben usar ventajosamente para los propósitos de la presente invención. El componente aceitoso también se elige ventajosamente del grupo que consiste de fosfolípidos. Los fosfolípidos son esteres fosforitos de gliceroles acilatados. De mayor importancia entre las fosfatidilcolinas son, por ejemplo, las lecitinas, las cuales se caracterizan por la estructura general
Donde R' y R" son típicamente radicales alifáticos no ramificados que tienen 15 a 17 átomos de carbono y hasta 4 dobles enlaces cis. De acuerdo con la invención, Merkur Weissoel Pharma 40 de Merkur Vaselina, Shell Ondina®917, Shell Ondina®927, Shell Oil 422, Shell Ondina®933 de Shell % DEA Oil, Pioner® 6301 S, Pioner® 2071 (Hansen & Rosenthal) se pueden usar como aceites
parafínicos ventajoso de acuerdo con la invención, los componentes aceitosos y grasos compatibles cosméticamente, adecuados, se describen en Kart-Heinz Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundamentáis and formulations of cosmetics] 2da edición, Verlag Hüthig, Heildelberg, pp . 319-355, del cual se hace referencia por este motivo en su ámbito completo. Solventes Si las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método de la invención se usan en preparaciones cosméticas o dermatológicas las cuales son una solución o una emulsión o una dispersión, los solventes los cuales se pueden usar son: agua o soluciones acuosas; aceites, tales como, triglicéridos de acido cáprico o acido caprílico, pero preferiblemente aceite de ricino; grasas, ceras y otras substancias grasas naturales y sintéticas, preferiblemente esteres de ácidos grasos con alcoholes con numero bajo de átomos de carbono, por ejemplo, con isopropanol, propilenglicol o glicerol, o esteres de alcoholes grasos con ácidos alcanoicos con un numero bajo de átomos de carbono, o con ácidos grasos; alcoholes, dioles o polioles con un numero bajo de átomos de carbono; y éteres de los mismos, preferiblemente etanol, isopropanol, propilenglicol, glicerol,
etilenglicol, etilenglicol monoetil o monobutil éter, propilenligol monometil, monoetil o monobutil éter, dietilemglicol monometil o monoetil éter y los productos análogos. En particular se usan mezclas de los solventes citados arriba. En el caso de los solventes alcohólicos, el agua puede ser un constituyente adicional . Surf ctantes De acuerdo con la invención, además de las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método de la invención, las composiciones también pueden comprender surfactantes. Tales surfactantes son, por ejemplo: - esteres fosforitos y sales, tales como, por ejemplo, DEA-olet-10 fosfato y dilauret-4-fosfato, -alquilsulfonatos, por ejemplo, sulfato de monoglicerido de coco sódico, olefinosulfonato de C?2_?4 sódico, laurel sulfoacetato de sodio y sulfato de PEG-3 cocamida, ácidos carboxílicos y derivados, tales como, por ejemplo, acido láurico, estearato de aluminio, alcanoato de magnesio y undecilenato de zinc, ácidos carboxílicos de éster, por ejemplo, estearoil lacilato de calcio, citrato de lauret-6 y carboxilato de PEG-4 lauramida sódica, - esteres los cuales se forman por la esterificación de ácidos carboxílicos con oxido de etileno, glicerol, sorbitan u
otros alcoholes, - éteres, por ejemplo, alcoholes etoxilados, lanolina etoxilada, polisiloxanos etoxilados, POE éteres propoxilados y alquil poliglicosidos, tales como laurel glicosido, decil glicosido y cocoglicosido . Polisorbatos De acuerdo con la invención, además de las moléculas efectoras de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo, las composiciones también pueden comprender polisorbatos. Los polisorbatos ventajoso para los propósitos de la invención de este documento son: - polioxietil (20) Sorbitan monolaurato (Tween 20, CAS No. 9005-64-5) - polioxietilen (4) sorbitan monolaurato (Tween 21, CAS No. 9005-64-5) - polioxietilen (4) sorbitan momoestearato (Tween 61, CAS No. 9005-67-8) - polioxietilen (29) sorbitan triestearato (Tween 65, CAS No. 9005-71-4) - polioxietilen (20) sorbitan monooleato (Tween 80, CAS No. 9005-65-6) - polioxoetilen (5) sorbitan monoleato (Tween 81, CAs No. 9005-65-5)
-polioxietilen(20) sorbitan trioleato (Tween 85, CAS No. 9005-70-3)- poloxietilen (20) (sorbitan monopalmitato (Tween 40, CAS No. 9005-66-7) - polioxoetilen (20) sorbitan monoestarato (Tween 60, CAS No. 9005-67-8) . De acuerdo con la invención, estos se usan ventajosamente en una concentración de desde 0.1 a 5% en peso, y en particular en una concentración de desde 1.5 a 2.5% en peso, con base en el peso total de la composición, individualmente o como una mezcla de dos o más polisorbatos. Agentes Acondicionadores En una modalidad preferida de la invención, las composiciones también comprenden agentes acondicionadores. Los agentes acondicionadores preferidos de acuerdo con la invención son, por ejemplo, todos los compuestos los cuales se listan en el International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook (Volumen 4, editor: R. C. Pepe, J.A. Wenninger, G.N. McEwen, The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, 9na edición, 2002) bajo la sección 4 bajo las palabras clave Agentes Acondicionadores del Cabello, Humectantes, Agentes de Acondicionamiento-Emolientes de la Piel, Agentes de Acondicionamiento de la Piel -Humectantes, Agentes de Acondicionamiento de la Piel-Misceláneos, Agentes de Acondicionamiento de la Piel -Obstaculizantes y Protectores de
la Piel, y todos los compuestos listados en EP-A 934 856 (pp, 11-13) bajo "water soluble conditioning agent" y "oil soluble conditioning agent" . Otros agentes acondicionadores ventajoso son, por ejemplo, los compuestos mencionados de acuerdo con el INCI como Policuaternio (en particular Policuaternio-1 a Policuaternio-56) . Los agentes acondicionadores adecuados también incluyen, por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario, derivados de celulosa catiónica y polisacáridos. Los agentes acondicionadores ventajosos de acuerdo con la invención pueden ser elegidos aquí de los compuestos mostrados en la tabla a continuación:
Tabla 6: Agentes Acondicionadores a ser usados ventajosamente
Otros acondicionadores ventajosos de acuerdo con la invención son los derivados de celulosa, y los derivados de goma de guar cuaternizada, en particular el cloruro de guar
hidroxipropilamonio (por ejemplo Jaguar Excel®, Jaguar C162® (Roída), CAS 65497-29-2, CAS 39421-75-5). También los copolímeros no iónicos de poli-N-vinilpirrolidona/acetato de polivinilo (por ejemplo, Luviskol®VA 64 (BASF Aktiengessellschaft ) ) , copolímeros aniónicos de acrilato (por ejemplo, Luviflex®Soft Aktienessellschaft) ) , y/o copolímeros anfoteritos de amida/acrilato/metacrilato (por ejemplo, Amphomer® (Nacional Starch) ) se pueden usar ventajosamente como acondicionadores de acuerdo con la invención. Materias primas en polvo Una adición de las materias primas en polvo puede ser ventajosa por lo general. El uso de talco se prefiere particularmente . Esteres de glicerol ácidos grasos etoxilados De acuerdo con la invención, además de las moléculas efectoras e enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas por el método inventivo, las composiciones pueden, si es apropiado, comprender también aceites etoxilados elegidos del grupo de los esteres de glicerol ácidos grasos etoxilados, en particular preferiblemente PEG-10 glicéridos de aceite de oliva, PEG-11 glicéridos de aceite de aguacate, PEG-11 glicéridos de manteca de cacao, PEG-15 glicéridos de aceite de girasol, PEG-15 isoestearato de glicerilo, PEG-9 glicéridos
de ácido graso de coco, PEG-54 aceite de ricino hidrogenado, PEG-7 aceite de ricino hidrogenado, PEG-60 aceite de ricino hidrogenado, aceite de jojoba etoxilado (PEG-26 ácidos grasos de jojoba, PEG-26 alcohol de jojoba), gliceret-5 cocoato, PEG-9 glicéridos de ácido graso de coco, PEG-7 cocoato de glicerilo, PEG-45 glicéridos de aceite de nuez de palma, PEG-35 aceite de ricino, éster de aceite de olivo PEG-7, PEG-6 glicéridos caprílicos/cápricos . PEG-10 glicéridos de aceite de oliva, PEG-13 glicéridos de aceite de girasol, PEG-7 aceite de ricino hidrogenado, glicérido de aceite de nuez de palma hidrogenado PEG-6 éster, PEG-20 glicéridos de aceite de maíz, PEG-18 oleato cocoato de glicerilo, PEG-40 aceite de ricino hidrogenado, PEG-40 aceite de ricino, PEG-60 aceite de ricino hidrogenado, PEG-60 glicéridos de aceite de maíz, PEG-54 aceite de ricino hidrogenado, PEG-45 glicéridos de aceite de nuez de palma, PEG-35 aceite de ricino, PEG-80 cocoato de glicerilo, PEG-60 glicéridos de aceite de almendra, PEG-60 glicéridos de primavera nocturna. PEG-200, palmato de glicerilo hidrogenado y PEG-90 isoestearato de glicerilo. Los aceites etoxilados preferidos son PEG-7 cocoato de glicerilo, PEG-9 cocogliceridos, PEG-40 aceite de ricino hidrogenado, PEG-200 palmato de glicerilo hidrogenado. Los esteres de glicerol ácidos grasos etoxilados se usan en formulaciones de limpieza acuosas para una variedad de
propósitos. Los esteres de glicerol ácidos grasos con un bajo grado de etoxilación (3-12 unidades de óxido de etileno) sirven usualmente como agentes de re-formación de grasa para mejorar la sensación de la piel después del secado, los esteres de glicerol ácidos grasos con un grado de etoxilación de aproximadamente 30-50 sirven como promotores de solubilidad para substancias no polares, tales como los aceites perfumados. Los esteres de glicerol ácidos grasos con un alto grado de etoxilación se usan como espesantes. Un aspecto que todas estas substancias tienen en común es que estas producen una sensación particular sobre la piel cuando se usan sobre la piel en dilución con agua. Agentes fotoprotectores El uso de las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en combinación con agentes fotoprotectores en las preparaciones dermocosméticas, está igualmente de acuerdo con la invención, estas composiciones fotoprotectoras cosméticas y/o dermatológicas se usan para la fotoprotección cosmética y/o dermatológica, y también para el tratamiento y el cuidado de la piel y/o del cabello y como un producto de maquillaje en cosméticos decorativos. Estas incluyen, por ejemplo, cremas solares, lociones solares, leches solares, aceites solares, bálsamos solares, geles
solares, cuidado de labios y lápices labiales, cremas y lápices correctoras, cremas hidratantes, lociones, emulsiones, cremas para cara, cuerpo y manos, tratamientos y enjuagues para el cabello, composiciones para fijación del cabello, geles para estilización, aerosoles para el cabello, desodorantes de bola o cremas para las arrugas de los ojos, preparaciones tropicales, bloquedoras solares y para después de asolearse. Todas las preparaciones comprenden al menos una molécula efectora de enlace a la queratina y una de las substancias filtrantes de UV especificadas. Los aceites solares son principalmente mezclas de diferentes aceites con uno o más filtros fotoprotectores y aceites perfumados. Los componentes aceitosos se eligen de acuerdo con las diferentes propiedades cosméticas. Los aceites los cuales lubrican bien e imparten una sensación suave a la piel, tales como los aceites minerales (por ejemplo, los aceites parafínicos) y los triglicéridos de ácidos grasos (por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de sésamo, aceite de aguacate, triglicéridos de cadena media) , se mezclan con los aceites los cuales mejorar la capacidad de extenderse y la absorción de los aceites solares hacia el interior de la piel, reducen la pegajosidad y hacen la película de aceite permeable al aire y el vapor de agua (transpiración) . Estos incluyen los esteres de ácidos grasos ramificados (por ejemplo, palmitato
de isopropilo) y los aceites de silicona (por ejemplo, dimetilsilicona) . Cuando se usan los aceites basados en ácidos grasos saturados, se añaden antioxidantes, por ejemplo, tocoferol, con el fin de evitar que estos se vuelvan rancios. Los aceites solares, que son formulaciones anhidras, usualmente no comprenden conservadores. Tales leches y cremas solares se preparar como emulsiones de aceite en agua (0/W) y como emulsiones de agua en aceite (W/0) . Dependiendo del tipo de emulsión, las propiedades de las preparaciones pueden ser variables: las emulsiones 0/W son más extendibles sobre la piel, estas se absorben rápidamente en su mayor parte y casi siempre se pueden lavar fácilmente de la cara con agua. Las emulsiones W/0 son más difíciles de frotar, estas lubrican la piel en un grado más considerable y por lo tanto parecen ser algo más pegajosas, pero por otro lado protegen mejor la piel de la desecación. Las emulsiones W/0 son en su mayor parte resistentes al agua. En el caso de las emulsiones W/0, las bases de emulsiones, la selección de las substancias fotoprotectoras adecuadas y, si es apropiado, el uso de auxiliares (por ejemplo, polímeros) determina el grado de resistencia al agua. Las bases de emulsiones 0/W liquidas y similares a cremas se asemeja a otras emulsiones acostumbradas en el cuidado de la piel, en términos de su composición. La lecha solar debe lubricar suficientemente la piel desecada por
el sol, el agua y el viento. Estas no deben se pegajosas debido que esto es percibido por ser particularmente desagradable en el calor y tras el contacto con la arena. Las composiciones de protección solar se basan generalmente en un portador el cual comprende al menos una fase aceitosa. Sin embargo, las composiciones solamente sobre una base acuosa también son posibles. Por consiguiente. Los aceites, las emulsiones de aceite en agua y de agua en aceite, las cremas y los emplastos, las composiciones de lápices de protección para labios o los geles libres de grasas son adecuados. Las emulsiones adecuadas, inter alia, también las macroemulsiones 0/W, las microemulsiones 0/W o las emulsiones O/W/O con partículas de dióxido de titanio revestidas en la supercine presentes en forma dispersa, las emulsiones que se pueden obtener por medio de la tecnología de inversión de fase, como en DE-A-197 26 121. Los auxiliares cosméticos acostumbrados los cuales se pueden considerar como aditivos son, por ejemplo,
(co) emulgentes, grasas y ceras, estabilizadores, espesantes, ingredientes activos biogénicos, formadores de película, fragancias, tintes, agentes perlescentes, conservadores, pigmentos, electrolitos (por ejemplo, sulfato de magnesio) y reguladores de pH. Los estabilizadores los cuales se pueden usar son las sales metálicas de ácidos grasos tales como, por
ejemplo, estearato de magnesio, estearato de aluminio y/o estearato de zinc. Los ingredientes activos biogénicos se entenderá por referirse, por ejemplo, a extractos de plantas, hidrolizados de proteínas y complejos de vitaminas. Los formadores de película acostumbrados son, por ejemplo, hidrocoloides , tales como quitosano, quitosano microcristalino o quitosano cuaternizado, polivinilpirrolidona, copolímeros de vinilpirrolidona-acetato de vinilo, polímeros de la seria del ácido acrílico, derivados de celulosa cuaternaria y los compuestos similares. Los ingredientes fotofiltrantes son las substancias las cuales absorben los rayos mUV en la región UV-B y UV-A. Estos se entienden por significar las substancias orgánicas las cuales son capaces de absorber los rayos ultravioleta y liberar la energía absorbida otra vez, en forma de radiación de onda más larga, por ejemplo, calor. Las substancias orgánicas pueden ser solubles en aceite o solubles en agua. Los filtros UV adecuados son, por ejemplo, 2 , 4 , 6-trialil-1 , 3 , 5-triazinas en las cuales los grupos arilo pueden contener cada uno al menos un sustituyente el cual se elige preferiblemente de hidroxi, alcoxi, específicamente metoxi, alcoxicarbonilo, específicamente metoxicarbonilo y etoxicarbonilo. También son adecuados los esteres aminobenzoicos, los esteres cinámicos, las benzofenonas, los
derivados de alcanfor, y los pigmentos los cuales detienen los rayos UV, tales como dióxido de titanio, talco y óxido de zinc. Los pigmentos basados en dióxido de titanio son particularmente preferidos. Los filtros de UV-B solubles en aceite los cuales se pueden usar son, por ejemplo, las siguientes sustancias: 3-bencilidenoalcanfor y los derivados del mismos, por ejemplo 3- (4-metilbenciliden) alcanfor; drizados de ácido 4 -aminobenzoico, preferiblemente 4-(dimetilamino) benzoato de 2-etilhexilo, 4- (dimetilamino) benzoato de 2-octilo y 4- (dietilamino) benzoato de amilo;
esteres de ácido cinámico, preferiblemente, 4-metoxicinamato de 2-etilhexilo, 4-metoxicinamato de propilo, 4-metoxicinamato de isoamilo, 4-metilcinamato de isopentilo,
2-ciano-3-fenilcianamato de 2-etilhexilo (octocrileno) ; esteres de ácido salicílico, preferiblemente salicilato de 2 -etilhexilo, salicilato de 4-isopropilbencilo, salicilato de homomentilo; derivados de benzofenona, preferiblemente 2 -hidroxi -4- metoxibenzofenona, 2-hidroxi-4-metoxi-4' -metilbenzofenona,
2 , 2-dihidroxi-4-metoxibenzofenona; esteres de ácido benzalmalonico, preferiblemente 4-metoxibenzmalonato de 2 -etilhexilo; í
derivados de triazina, tales como, por ejemplo, 2,4,6-trianilino (p-carbo-2 ' -etil-1' -hexiloxi) -1,2, 5-triazina (octiltriazona y diotilbutamidotriazona (Uvasorb® HEB) : propano-1, 3 -dionas, tales como, por ejemplo, l-(4-ter-butilfenil) -3- (4 ' -metoxifenil) propano-1 , 3 -diona. Las substancias solubles en agua adecuadas son: ácido 2-fenilbencimidazol-5-sulfónico y las sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, de amonio, de alquilaminio, de alcanolamonio y de glucamonio del mismo; derivados de ácido sulfónico de benzofenona, preferiblemente, ácido 2-hidroxi- -metoxibenzofenona-5-sulfónico y sus sales; derivados de ácido sulfónico de 3 -bencilidenoalcanfor, tales como, por ejemplo, ácido 4-(2-oxo-3-bornilidenometil) bencenosulfonico y ácido 2-metil-5- (2-oxo-3-bornilideno) sulfónico y las sales de los mismos. Se da preferencia particular al uso de los esteres de ácido cinámico, preferiblemente 4-metoxicinamato de 2-etilhexilo, 4-metoxicinamato de isopentilo, 2-ciano-3-fenilcianamto de 2 -etilhexilo (octocrileno) . Además, se prefiere el uso de derivados de benzofenona, en particular, 2-hidroxi-4-metoxibenzofenona, 2-hidroxi-4-metoxi-4 ' -metilbenzofenona, 2,2' -dihidroxi-4-metoxibenzofenona, y el uso de propano-1 , 3-dionas , tales como,
por ejemplo, 1- (4-ter-butilfenil) -3- (4 ' -metoxifenil) propano. Los filtros de UV-A típicos adecuados son: los derivados de benzoilmetano, tales como, por ejemplo, 1- (4 ' -butilfenil) -3- (4 ' -metoxifenil) propano- 1 , 3 -diona, 5-ter-butil-4 ' -metoxidibenzoilmetano o l-fenil-3- (4 ' -isopropilfenil) propano- 1, 3 -diona; derivados aminohidroxi substituidos de benzofenonas, tales como, por ejemplo, n-hexilbenzoato de N,N-dietilaminohidroxibenzoilo. Los filtros de UV-A y UV-B se pueden usar por supuesto en mezclas. Otras substancias filtrantes de UV adecuadas se dan en la tabla de abajo,
Tabla 7: Agentes Fotoprotectores adecuados
Además de los dos grupos citados arriba de substancias fotoprotectoras primarias, también es posible usar agentes fotoprotectores secundarios del tipo antioxidante, los cuales interrumpen la cadena de reacciones fotoquímicas la cual se activa cuando la radiación UV penetra en la piel. Los ejemplos típicos de estos son la superóxido dismutasa, catalasa, tocoferoles (vitamina E) y ácido ascórbico (vitamina C) . Un grupo adicional son los anti irritantes, los cuales tienen un efecto anti inflamatorio sobre la piel dañada por la luz UV. Tales substancias son, por ejemplo, bisabolol, fitol y ftantriol . Del mismo modo, de acuerdo con la invención es el uso en las preparaciones dermocosméticas, de moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo, en combinación con pigmentos orgánicos, los cuales detienen los rayos UV, se da preferencia a los pigmentos basados en óxidos metálicos y/u otros compuestos metálicos, los cuales son insolubles o escasamente solubles en agua y elegidos del grupo de los óxidos de zinc (ZnO) , titanio (Ti02) , fierro (por ejemplo, Fe203) , zirconio (Zr02) , silicio (Si02) , manganeso (por ejemplo, MnO) , aluminio (Al203) , cerio (por ejemplo, Ce203) , óxidos mezclados de los metales correspondientes y mezclas de tales óxidos.
Los pigmentos inorgánicos pueden estar presentes aquí en forma revestida, es decir, se tratan superficialmente. Este tratamiento superficial puede consistir, por ejemplo, en proveer a los pigmentos con una capa hidrofóbica por medio de un método conocido per se, como se describe en DE-A-33 14 172. Los ingredientes activos repelentes adecuados son compuestos los cuales son capaces de repeler o ahuyentar ciertos animales, en particular insectos, de los humanos. Estos incluyen, por ejemplo, 2-etil-l, 3-hexanodiol, N,N-dietil-m-toluemida, etc. Las substancias hiperémicas, las cuales estimulan el flujo de sangre a través de la piel, son, por ejemplo, aceites esenciales, tales como extracto de pino enano, extracto de lavanda, extracto de romero, extracto de bayas de junípero, extracto de castaña de indias, extracto de hoja de abdedul , extracto de flor de heno, acetato de etilo, alcanfor, mentol, aceite de menta, extracto de romero, aceite de eucalipto, etc. Las substancias queratolíticas y queratoplasticas adecuadas son, por ejemplo, ácido salicílico, triglicolato de calcio, ácido tioglicólico y sus sales. Los ingredientes activos anti-caspa son, por ejemplo, azufre, azufre polietilen glicol sorbitan monooleato, azufre ricinol polietoxilato, zinc piritiona, et . Los antiflogísticos adecuados, los cuales contrarrestan las irritaciones de la
piel son, por ejemplo, allantoina, bisabolol, dragosantol , extracto de manzanilla, pantenol, etc. El uso de las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en combinación con al menos un polímero aceptable cosméticamente o farmacéuticamente también esta igualmente de acuerdo con la invención. Los polímeros adecuados son, por ejemplo, polímeros catiónicos con el nombre INCI Policuaternio, por ejemplo, los polímeros de vinilpirrolidona/sales de N-imidazolio (Luviquiat FC, Luviquiat HM, Luviquiat MS, Luviquat Care) , copolímeros de N-vinilpirrolidona/metacrilato de dimetilaminoetilo, cuaternizados con sulfato de dietilo (Luviquiat PQ 11) , copolímeros de N-vinilcaprolactam/N-vinilpirrolidona/sales de N-vinilimidazolio (Luviquat E Hold) , derivados cationicos de celulosa (Policuaternio-4 y -10) copolímeros de archilamida (Policuaternio-7) y quitosan. Los polímeros catiónicos adecuados (cuaternmizados) también son Marquat (polímero basado en cloruro de dimetildialilamonio) , Gafquat (polímeros cuaternarios los cuales se forman haciendo reaccionar polivinilpirrolidona con compuestos de amonio cuaternario) , polímero JR (hidroxietilcelulosa con grupos catiónicos) y polímeros catiónicos basados en plantas, por ejemplo, polímeros de guar,
tales como los grados Jaguar de Roída. Otros polímeros adecuados también son los polímeros neutros, tales como polivinilpirrolidonas, copolímeros de N-vinilpirrolidona y acetato de vinilo y/o propionato de vinilo, polisiloxanos, polivinilcaprolactama y otros copolímeros con N-vinilpirrolidona, polietilenoiminas y sales de los , mismos, polivinilaminas y sales de las mismas, derivados de celulosa, sales de ácido poliaspartico y derivados. Estos incluyen, por ejemplo Luviflex Swing (Copolímero de acetato de polivinilo u polietielnglicol, hidrolizado parcialmente, BASF Aktiengessellschaft) . Los polímeros adecuados también son los polímeros u oligómeros solubles en agua o dispersibles en agua, no iónicos, tales como polivinilcaprolactama (por ejemplo, Luviskol 0 Plus (BASF) , o polivinilpirrolidona y copolímeros de los mismos, en particular, vinil éteres, tales acetato de vinilo, por ejemplo, Luviskol VA 37 (BASF) , políamidas, por ejemplo basadas en ácido itacónico y diaminas alifáticas, como se describe, por ejemplo, en DE-A-43 33238. Los polímeros adecuados también son los polímeros anfotéricos o zwitteriónicos, tales como los copolímeros de amida/metacrilato de etilo/metracrilato de ter-butilaminoetilo-metacrilato de hidroxipropilo, obtenibles bajos los nombres Amphomer (National Starch) , y los polímeros
zwitteriónicos, como se describe, por ejemplo en las Solicitudes de patente alemanas DE39 29 973, DE 21 50 557, DE28 17 369 y DE 3708 451. Los copolímeros de cloruro de acrilamidopropiltrimetilaminio (ácido acrílico o los copolímeros de ácido metacrílico y las sales de metales alcalinos y amonio de los mismos son los polímeros zwitteriónicos preferidos. Otros polímeros zwitteriónicos adecuados son los copolímeros de metacriloetilbetaina/metacrilato, los cuales están disponibles comercialmente bajo el nombre Amersette (AMERCHOL) , y los copolímeros de metacrilato de hidroxietilo, metacrilato de metilo, metacrilato de N,N-dimetilaminoetilo y ácido acrílico (Jordapon (D) ) . Los polímeros adecuados también son los polímeros solubles o dispersibles en agua, que contienen siloxano, no iónicos, por ejemplo, siloxanos de poliéter, tales como Tegopren (Goldschmidt) . Igualmente, de acuerdo con la invención es el uso de moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en combinación con ingredientes activos dermocosméticos (uno o más compuestos) elegidos ventajosamente del grupo que consiste de ácido acetilsalicílico, atropina, azuleno, hidrocortisona y derivados de los mismos, por ejemplo, hidrocortisona-17-
valerato, vitaminas de las series B y D, en particular vitamina Bi, vitamina B?2, vitamina D, vitamina A o los derivados de las mismas, tales como palmitato de retinilo, vitamina E o los derivados de la misma, tales como, por ejemplo, acetato de tocoferilo, vitamina C y los derivados de la misma, tales como, por ejemplo, ascorbil glucósido, pero también niacinamida, pantenol, bisabolol, polidocanol , 1 ácidos grasos insaturados, tales como, por ejemplo, los ácidos grasos esenciales (conocidos usualmente como vitamina F) , en particular el ácido ?-linoleico, ácido oleico, ácido eicosapentaenoico, ácido docosahexaenoico, y los derivados de los mismos, clotramfenicol , cafeína, prostaglandinas, timol, alcanfor, escualeno, extractos de otros productos de origen vegetal y animal, por ejemplo, aceite de primavera nocturna, aceite de borraja o aceite de semillas de algarrobo, aceite de pescado, aceite de hígado de bacalao o ceramidas y compuestos similares a ceramidas, extracto de incienso, extracto de te verde, extracto de lirio acuático, extracto de regaliz, hammamelis, ingredientes activos anti-caspa (por ejemplo, disulfuro de selenio, piritiona de zinc, piroctona, olamina, climbazol, octopirox, y combinaciones de los mismos) , ingredientes activos complejos, tales como, por ejemplo, aquellos de las ?-orizanol y sales de calcio, tales como
pantotenato de calcio, cloruro de calcio, acetato de calcio. También es ventajoso elegir los ingredientes activos del grupo de las substancias de re-formación de grasa, por ejemplo, aceite de purcellin, Eucerit® y Neocerit®. El ingrediente activo o los ingredientes activos también se eligen en particular ventajosamente del grupo de los inhibidores de la síntesis de NO, en particular si las preparaciones de acuerdo con la invención deben ser usadas para el tratamiento y la profilaxis de los síntomas del envejecimiento intrínseco y/o extrínseco de la piel, y para el tratamiento y la profilaxis de los efectos dañinos de la radiación ultravioleta sobre la piel y el cabello. Un inhibidor de la síntesis de No preferido es la nitroarginina. El ingrediente activo o los ingredientes activos se eligen además ventajosamente del grupo que comprende las catequizas y los estrés de ácidos biliares de catequizas y los extractos acuosos o inorgánicos de "plantas o partes de plantas las cuales tienen un contenido de catequizas o esteres de ácidos biliar de catequizas, tales como, por ejemplo, las hojas de la familia de las plantas Theaceaseas, en particular de las especies Camelia sinensis (te verde) . Sus ingredientes típicos (por ejemplo, polifenoles o catequizas, cafeína, vitaminas, azucares, minerales, aminoácidos, lípidos) son particularmente ventajosos. Las catequizas son un grupo de compuestos los cuales se deben
entender como flaconas hidrogenadas o antrocianidinas y representan derivados de "catequina" (catecol, 3,3',4',5'-flavanpentanol , 2- (3 , 4-dihidrofenil) croman-3 , 5 , 7-triol) . La epicatequina ( (2R, 3R) -3 , 3 ' , 4' , 5, 7-falvapenatol) es un ingrediente activo ventajoso para los propósitos de la presente invención. También son ventajosos los extractos de hojas de las plantas de la especie Camelia spec., muy particularmente los tipos de te Camelia sinenis, C. assamica, C. taliensis y C. inawadiensis y los híbridos de estas con, por ejemplo, Camelia japónica. Los ingredientes activos preferidos también son los polifenoles y las catequinas del grupo (-) -catequina, (+) -catequina, galato de (-) -catequina, galato de (-) -galocatequina, (+) -epicatequina, (-)-epicatequina, (-) -galato de epicatequina, (-)-epigalocatequina, galato de (-) -epigalocatequina. La flavona y sus derivados (llamados frecuente también como "flavonas") son ingredientes activos ventajosos para los propósitos de la presente invención. Estas se caracterizan por la siguiente estructura básica (posiciones de substitución dadas) :
Algunas de las flaconas importantes, las cuales también se pueden usar preferiblemente en las preparaciones de acuerdo con la invención se listan en la Tabla 8 a continuación.
Tabla 8: Flavonas
Las flavonas aparecen en la naturaleza en forma glicosilada . De cuerdo con la invención, los flavonoides se eligen preferiblemente del grupo de las substancias de la fórmula general
en donde Z a Z7, independientemente unas de las otras, se eligen del grupo de los grupos H, OH, alcoxi e hidroxialcoxi, donde los grupos alcoxi o hidroalcoxi pueden ser ramificados o no ramificados y tienen 1 a 18 átomos de carbono. Además, los ingredientes activos (uno o más compuestos) también pueden ser elegidos muy ventajosamente del grupo de los ingredientes activos hidrofílicos, en particular del siguiente grupo: a-hidroxi ácidos, tales como el ácido láctico o el ácido salicílico o las sales de los mismos, tales como, por ejemplo, lactato de Na, lactato de Ca, lactato de TEA, urea,
, allantoina, serina, sorbitol, glicerol, proteínas de leche, pantenol, quitosan. La cantidad de tales ingredientes activos (uno o más compuestos) en las preparaciones de acuerdo con la invención es preferiblemente 0.0001 a 30% en peso, en particular preferiblemente 0.05 a 20% en peso, en particular 1 a 10% en peso, con base en el peso total de la preparación. Los ingredientes activos específicos y otros ingredientes activos los cuales pueden ser usados en las preparaciones de acuerdo con la invención se dan en DE 103 18 526 Al en las paginas 12 a 17, al ámbito completo de las cuales se hace referencia en este punto. Además, la presente invención se refiere al uso de las preparaciones citadas arriba para evitar los cambios
indeseables en la apariencia de la piel, tales como, por ejemplo, el acné o piel grasosa, queratosis, rosacea, reacciones fotosensibles, infamatorias, eritematosas, alérgicas o autoinmune-reactivas . Para usarse, las preparaciones cosméticas de acuerdo con la invención se aplican a la piel, el cabello las uñas de las manos o las uñas de los pies o las encías, en la manera acostumbrada para los cosméticos o los dermocosméticos. La presente invención proporciona además dermocosméticos que comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina, preferiblemente moléculas efectoras de enlace a la queratina producidas por el método de acuerdo con la invención, en particular preferiblemente, las moléculas efectoras de enlace a la queratina para cuya producción se han usado las moléculas efectoras elegidas del grupo que consiste de tintes, agentes fotoprotectores, vitaminas, provitaminas, carotenoides, antioxidantes y descomponedores de peróxido como se describen arriba. Se da preferencia particular a los dermocosméticos que comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina listadas en la Tabla 11. Se da preferencia muy particular a aquellas moléculas efectoras de enlace a la queratina para cuya producción se usan las moléculas efectoras del grupo que consiste de derivados de ácido 2- (4-N,N-dialquilamino-2-
hidroxibenzoil) benzoico, ácidos grasos ramificados y no ramificados, por ejemplo, ácido palmitito, ácido eicosanoico o ácido 18-metileicosanoico, ácido pantoténico, ácido retinoico y ácidos polisiloxanocarboxilicos y cloruros. Se da preferencia sobre todo a los dermocosméticos que comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina, las cuales comprenden al menos un polipéptido de enlace a la queratina (ii) de acuerdo con las secuencias representadas en la SEC ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 30, 32, 34, 36, 38,40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66 , 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80,82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170, en particular preferiblemente 166 y 168, más preferiblemente 168 y para cuya preparación la molécula enlazadora usada fue meleimidopentanol . Se da preferencia muy particular a las moléculas efectoras de enlace a la queratina citadas arriba en las cuales la molécula (iii) enlazadora usada fue meleimidopentanol, y los derivados de ácido 2- (4-N,N-dialquilamino-2 -hidroxi) benzoilbenzoico (como se describe arriba), preferiblemente, el ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico se uso como la molécula (i) efectora.
En una modalidad preferida de la presente invención, los
dermocosméticos o lasa composiciones para cuidado oral, cuidado dental y cuidado de dentaduras, preferiblemente composiciones para el tratamiento de la piel y el cabello, comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo, en una concentración de, desde 0.001 a 1 por ciento en peso (% en peso), preferiblemente 0.01 a 0.9% en peso, en particular preferiblemente 0.01 a 0.8% en peso o 0.01 a 0.7% en peso, muy particularmente preferiblemente 0.01 a 0.6% en peso o 0.01 a 0.5% en peso, más preferiblemente 0.01 a 0.4% en peso o 0.01 a 0.3% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad adicional, las composiciones comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en una concentración de, desde 1 a 10% en peso, preferiblemente 2 a 8% en peso, 2 a 7% en peso, 4 a 6% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad preferida igualmente, las composiciones comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en una concentración de desde 10 a 20% en peso, preferiblemente 11 a 19% en peso, 12 a 18% en peso, 13 a 17% en peso, 14 a 16% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad preferida del
mismo modo, las composiciones comprenden moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en una concentración de, desde 20 a 30% en peso, preferiblemente 21 a 29% en peso, 22 a 28% en peso, 23 a 27% en peso, 24 a 26% en peso, con base en el peso total de la composición. Las composiciones de acuerdo con la invención son preferiblemente composiciones de protección para la piel, composiciones de cuidado de la piel, composiciones para limpieza de la piel, composiciones para protección del cabello, composiciones para cuidado del cabello, composiciones para limpieza del cabello, colorantes para el cabello, enjuagues bucales, o preparaciones para cosméticos decorativos, los cuales se usan preferiblemente en la forma de ungüentos, cremas, emulsiones, suspensiones, lociones, como leches, emplastos, geles, espumas o aerosoles, dependiendo del campo de uso. Además de las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas por el método inventivo, los dermocosméticos de acuerdo con la invención pueden comprender todos los polímetros pigmentos, humectantes, aceites, ceras, enzimas, minerales, vitaminas, agentes de protección solar, tintes, fragancias, antioxidantes, conservadores y/o ingredientes activos
farmacéuticos ya listados arriba. Adicionalmente, lo siguiente se aplica para los dermocosméticos de acuerdo con la invención: La base de formulación de las composiciones de acuerdo con la invención comprende preferiblemente los auxiliares aceptables cosméticamente o dermocosméticamente/farmacéuticamente . Los auxiliares aceptables farmacéuticamente son los auxiliares los cuales se conocen por usarse en el campo de la farmacia, la tecnología de alimentos y los campos relacionados, en particular, los auxiliares listados en la farmacopea relevante (por ejemplo, DAB Ph, Eur. BP NF) , y otros auxiliares cuyas propiedades no excluyan una aplicación fisiológica. Los auxiliares adecuados pueden ser: agentes de deslizamiento, agentes de humedecimiento, emulgentes y agentes de suspensión, conservadores, antioxidantes, antiirritantes, agentes de formación de quelatos, estabilizadores de emulsión, formadores de película, formadores de gel, agentes de ocultamiento de olores, resinas, hidrocoloides, solventes, promotores de solubilidad, agentes de neutralización, aceleradores de permeación, pigmentos, compuestos de amonio cuaternario, agentes de re-formación de grasas y la formación de super-grasas, substancias base para ungüentos, cremas y aceites, derivados de silicona, estabilizadores, agentes de
esterilización, propelentes, agentes de secado, opacificadores, espesantes, ceras, ablandadores, aceite blanco. Una modalidad a este respecto se basa en el conocimiento especializado, como se muestra, por ejemplo, en Fiedler, H. P. Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete [Lexicón of auxiliarles for pharmacy, cosmetics and related fields], 4ta edición, Aulendorf : ECV-Editio-Kantor-Verlag, 1996. Para producir las composiciones dermocosméticas de acuerdo con la invención, los ingredientes activos pueden ser mezclados o diluidos con un auxiliar (excipiente) soluble. Los excipientes pueden ser materiales sólidos, semisólidos o líquidos los cuales pueden servir como vehículos, portadores o medios para el ingrediente activo. La mezcla de otros auxiliares tiene ligar, si se desea, en la manera conocida por las personas experimentadas en la técnica. Además, los polímeros y las dispersiones son adecuadas como auxiliares en la farmacia, preferiblemente como o en (a) composiciones de revestimiento o adherentes para formas farmacológicas sólidas. Estas también se pueden usar en cremas y como revestimientos de comprimidos y aglutinantes de comprimidos. De acuerdo con una modalidad adicional, las composiciones de acuerdo con la invención son composiciones cosméticas para el cuidado y la protección de la piel y el
cabello, composiciones para cuidado de las uñas o preparaciones para cosméticos decorativos. Las composiciones cosméticas para la piel, adecuadas son por ejemplo, tónicos faciales, mascaras faciales, desodorantes y otras lociones cosméticas. Las composiciones para usarse en los cosméticos decorativos incluyen, por ejemplo, lápices correctores, maquillaje escénico, rímel y sombra para los ojos, lápices labiales, lápices delineadores para los ojos, delineadores, polvos para rubor de mejillas, polvos y lápices para cejas. Además, las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método de la invención se usan en tiras nasales para limpieza de los poros, en composiciones anti acné, repelentes, composiciones para afeitado, composiciones de cuidado para después del afeitado y antes del afeitado, composiciones de cuidado para después de asolerase, composiciones para remoción de cabello, colorantes para el cabello, composiciones para cuidado intimo, composiciones para cuidado de los pies, y para cuidado de bebes . Las composiciones para cuidado de la piel de acuerdo con la invención son, en particular, cremas para la piel W/0 u 0/W, cremas de día y cremas de noche, cremas para los ojos, cremas para la cara, cremas antiarrugas, cremas para
protección solar, cremas humectantes, cremas blanqueadoras, cremas de auto bronceado, cremas de vitaminas, lociones para la piel, lociones para cuidado y lociones humectantes. Las composiciones cosméticas y dermatológicas para la piel de acuerdo con la invención también pueden comprender un ingrediente activo el cual descompone los radicales libres y protege contra los procesos oxidantes y los procesos de envejecimiento asociados o el daño de la piel y/o el cabello, además de las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método de la invención. Estos ingredientes activos soin preferiblemente las substancias descritas en las solicitudes de patente WO/0207698 y WO/03059312, a los contenidos de las cuales se hace referencia aquí expresamente, preferiblemente los compuestos que contienen boro descritos aquí, las cuales pueden reducir los peróxidos o los hidroperóxidos para dar los alcoholes correspondientes sin la formación de los estados subsecuentes de radicales libres. Además, las aminas obstaculizadas estéricamente de acuerdo con la fórmula general 3 se pueden usar para este propósito.
Fórmula 3
donde el radical Z tiene el siguiente significado: H, grupos alquilo de C?-C22, preferiblemente grupos alquilo de C?-C?2, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, grupos alcoxi de C?-C22, preferiblemente, grupos alcoxi de C1-C12, tales como alcoximetilo, alcoxi-etilo, alcoxi-propilo, alcoxi -isopropilo, alcoxi-butilo, alcoxi-isobutilo, alcoxi-sec-butilo, alcoxi-ter-butilo, alcoxi-pentilo, alcoxi -isopentilo, alcoxi-neopentilo, alcoxi-ter-pentilo, alcoxi-hexilo, alcoxi-heptilo, alcoxi-octilo, alcoxi-nonilo, alcoxi-decilo, alcoxi -undecilo, alcoxi-dodecilo, grupos arilo de C6 a Cío, tales como fenilo y naftilo, donde el radical fenilo puede estar substituido por radicales alquilo de Ci a C4, grupos O-arilo de C6 a C?0, los cuales pueden estar substituidos por un grupo alquilo de C?-C22 o alcoxi de C?-C22/ preferiblemente, por un grupo alquilo de C?-C22 o un grupo alcoxi de C1-C12 como se describen arriba, y los radicales R1 a R6, independientemente unos de otros, tienen el siguiente significado, H, OH, O, grupos alquilo de C1-C22/ preferiblemente grupos alquilo de C1-C12, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo,
dodecilo, grupos alcoxi de C?-C22, preferiblemente grupos alcoxi de C1-C12 tales como, alcoxi-metilo, alcoxi-etilo, alcoxi-propilo, alcoxi-isopropilo, alcoxi-butilo, alcoxi-isobutilo, alcoxi-sec-butilo, alcoxi-ter-butilo, alcoxi-pentilo, alcoxi-isopentilo, alcoxi -neopentilo, alcoxi-ter-pentilo, alcoxi-hexilo, alcoxi-heptilo, alcoxi-octilo, alcoxi-nonilo, alcoxi-decilo, alcoxi-undecilo, alcoxi-dodecilo, grupos arilo de C6 a C?0, tales como fenilo y naftilo, donde el radical fenilo puede estar substituido por radicales alquilo de Ci a C4, grupos O-arilo de C6 a Cío, los cuales pueden estar substituidos por un grupo alquilo de C?-C22 o alcoxi de C?-C22, preferiblemente por un grupo alquilo de C1-C12 o alcoxi de Ci-C12, como se describen arriba. Se da preferencia particular al uso de las aminas obstaculizadas estéricamente 3-dodecil-N- (2 , 2 , 6, 6-tetrametil -4-piperidinil) succinimida, 3-docecil-N- (1,2,2,6, 6-pentametil-4-piperidinil) succinimida, 3 -octil -N- (2,2,6, 6-tetrametil -4-piperidinil) succinimida, 3 -octil -N- (1,2,2,6, 6-pentametil-4-piperidinil) succinimida, 3 -octenil-N- (2,2,6, 6-tetrametil-4 -piperidinil) succinimida, 3-ocetnil-N- (1,2,2,6, 6-pentame il-4-piperidinil) succinimida y/o Uvonil®5050H, en una cantidad de, desde 0.001 a 1 por ciento en peso (% en peso) , preferiblemente 0.01 a 0.1% en peso, 0.1 a 1% en peso, con base en el peso total de la composición.
Además de los compuestos citados arriba de acuerdo con la invención y los portadores adecuados, las preparaciones cosméticas para la piel también pueden comprender ingredientes los ingredientes activos y los auxiliares acostumbrados en los cosméticos para la piel, como se describe arriba. Estos incluyen, preferiblemente, emulgentes, conservadores, aceites perfumados, ingredientes activos cosméticos, tales como fitantiol, vitamina A, E y C, retinol, bisabolol, pantenol, agentes fotoprotectores, blanqueadores, colorantes, agentes de teñido, agentes de bronceado, colágeno, hidrolizados de proteína, estabilizadores, reguladores de pH. Tintes, sales, espesantes, formadores de geles, reguladores de consistencia, siliconas, humectantes, agentes de re-formadores de grasas y/o otros aditivos acostumbrados. Los componentes aceitosos y grasos preferidos de las composiciones cosméticas y dermocosméticas para la piel son los aceites minerales y sintéticos citados arriba, tales como, por ejemplo, parafinas, aceites de silicona e hidrocarburos alifáticos que tienen más de 8 átomos de carbono, aceites vegetales y animales, tales como, por ejemplo, aceite de girasol, aceite de coco, aceite de aguacate, aceite de olivo, lanolina, o ceras, ácidos grasos, esteres de ácidos grasos, tales como por ejemplo triglicéridos de ácidos grasos de C6-C30, esteres cerosos, tales como, por ejemplo, aceite de
jojoba, alcoholes grasos, vaselina, lanolina hidrogenada y lanolina acetilada, y mezclas de los mismos. Para establecer ciertas propiedades, tales como, por ejemplo, mejorar la sensación al tacto, el comportamiento de difusión, la resistencia al agua y/o la adhesión de los ingredientes activos y de los auxiliares tales como los pigmentos, las preparaciones cometidas para la piel y dermocosméticas pueden comprende también adicionalmente substancias acondicionadoras basadas en compuestos de silicona. Los compuestos de silicona adecuados son, por ejemplo, polialquilsiloxanos , poliarilsiloxanos , poliarilalquilsiloxanos, poliéter siloxanos o resinas de silicona. Las preparaciones cosméticas o dermocosméticas se producen mediante los métodos acostumbrados conocidos por las personas con experiencia en la técnica. Preferiblemente, las composiciones cosméticas y dermocosméticas se presentan en forma de emulsiones, en particular como emulsiones de agua en aceite (W/0) y de aceite en agua (0/W) . Sin embargo, también es posible elegir otros tipos de formulaciones, por ejemplo, geles, aceites, oleogeles, emulsiones múltiples, por ejemplo, en forma de emulsiones
W/O/W u O/W/O, ungüentos anhidros o bases de ungüentos, etc. Las formulaciones libres de emulgentes, tales como las hidrodispersiones, los dirígeles o una emulsión Pickering también son modalidades ventajosas. Las emulsiones se producen mediante los métodos conocidos. Además de al menos una molécula efectora de enlace a la queratina, las emulsiones usualmente comprenden constituyentes acostumbrados, tales como alcoholes grasos, esteres de ácidos grasos, y en particular, trigliceridos de ácidos grasos, ácidos grasos, lanolina y derivados de los mismos, aceites naturales o sintéticos o ceras y emulgentes en presencia de agua. La elección de los aditivos específicos para el tipo de emulsión y la producción de emulsiones adecuadas, se describe, por ejemplo, en Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundamentáis and formulations of cosmetics] , Hüthig Buch Verlag, Heidelberg, 2da edición, 1989, tercera parte, o Umbach, Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung kosmetischer Mittel [Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions] , 2da edición expandida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9, páginas 122 ff., a las cuales se hace referencia expresamente aquí . Una emulsión adecuada en forma de una emulsión W/0, por ejemplo, para una crema para la piel, etc., por lo general
comprende una fase acuosa la cual se emulsiona en una fase aceitosa o grasa usando un sistema demulgente adecuado. Un complejo polielectrolitico se puede usar para proporcionar la fase acuosa. Los componentes grasos preferidos los cuales pueden estar presentes en la fase grasa de las emulsiones son: Aceites hidrocarbúricos, tales como parafina, aceite de purcelina, pertidroescualeno y soluciones de ceras microcristalinas en estos aceites; aceites minerales o vegetales, tales como aceite de almendras dulces, aceite de aguacate, aceite de calofilo, lanolina y derivados de los mismos, aceite de ricino, aceite de sésamo, aceite de olivo, aceite de jojoba, aceite de karité, aceite de hoplostethus, aceites minerales cuyo punto de inicio de la destilación bajo presión atmosférica es de aproximadamente 250 °C y cuyo punto de final de destilación está a 410°C, tales como, por ejemplo, aceite de Vaselina, esteres de ácidos grasos saturados o insaturados, tales como miristatos de alquilo, por ejemplo, miristato de isopropilo, miristato de butilo o miristato de cetilo, estearato de hexadecilo, palmitatyo de etilo o isopropilo, triglicéridos de ácido octanoico o decanoico y ricinoleato de acetilo. La fase grasa también puede comprenden aceites de silicona los cuales son solubles en otros aceites, tales como
dimetilpolisiloxano, metilfenilpolisiloxano, y el Copolímero de silicona glicol, ácidos grasos y alcoholes grasos. Además de los compuestos citados arriba, de acuerdo con la invención, las composiciones para el cuidado de la piel también puede comprender ceras, tales como, por ejemplo, cera de carnauba, cera de candelila, cera de abeja, cera microcristalina, cera de ozoquerita, y oleatos, miristatos, linoleatos y estearatos de Ca, Mg, y Al. Además, una emulsión de acuerdo con la invención puede estar en forma de una elusión 0/W. tales emulsión usualmente comprende una fase aceitosa, emulgentes los cuales estabilizan la fase aceitosa en la fase acuosa, y una fase acuosa, la cual está presente usualmente en forma espesada. Los emulgentes adecuados son preferiblemente emulgentes 0/W, tales como poliglicerol esteres, sorbitan esteres o glicéridos esterificados parcialmente. De acuerdo con una modalidad preferida, las composiciones de acuerdo con la invención son composiciones fotoprotectoras, un gel para baño, una formulación de champú o una preparación para baño, con las preparaciones fotoprotectoras que se prefieren particularmente. Tales formulaciones comprenden al menos una molécula efectora de enlace a la queratina de acuerdo con la invención, y/o producida de acuerdo con el método inventivo, y usualmente
surfactantes como surfactantes básicos y/o surfactantes amfotericos y/o no iónicos como co-surfactantes . Otros ingredientes activos y/o auxiliares adecuados se eligen por lo general de lípidos, aceites perfumados, tintes, ácidos orgánicos, conservadores y antioxidantes, y espesantes, formadores de/gel, agentes de acondicionamiento de la piel y humectantes . Estas formulaciones comprenden ventajosamente 2 a 50% en peso, preferiblemente 5 a 40% en peso, en particular preferiblemente 8 a 30% en peso, de surfactantes, con base en el peso total de la formulación. En las preparaciones de lavado, ducha o baño, se pueden usar todos los surfactantes aniónicos, neutros, anfotéricos o catiónicos acostumbrados usados en las composiciones para limpieza del cuerpo. Los surfactantes aniónicos adecuados son, por ejemplo, sulfatos de alquilo, alquil éter sulfatos, alquilsulfonatos, alquilarilsulfonatos, succinatos de alquilo, sulfosuccionatos de alquilo, sarcosinatos de N-alcoiilo, tauratos de acilo, isotionatos de acilo, fosfatos de alquilo, alquil éter fosfatos, alquil éter carboxilatos, alfa-olefinsulfonatos, en particular las sales de metales alcalinos y de metales alcalinotérreos, por ejemplo, las sales de sodio, potasio, magnesio, calcio y amonio trietanolamina. Los alquil éter
sulfatos, alquil éter fosfatos y alquil éter carboxilatos pueden tener entre 1 y 10 unidades de óxido de etileno u óxido de propileno, preferiblemente 1 a 3 unidades de óxido de etileno, en las moléculas. Estos incluyen, por ejemplo, lauril sulfato de sodio, lauril sulfato de amonio, lauril éter sulfato de sodio, lauril éter sulfato de amonio, lauril sarcosinato de sodio, oleil succinato de sodio, lauril sulfosuccionato de amonio, dodecilbencenosulfonato de sodio, trietanolamina dodecilbencenosulfonato. Los surfactantes amfotericos adecuados son, por ejemplo, alquilbetainas , alquilamidopropilbetainas, alquilsulfobetainas, glicinatos de alquilo, carboxiglicinatos de alquilo, amfoacetatos o propionatos de alquilo, amfodiacetatos o dipropionatos de alquilo: Por ejemplo, se puede usar la cocodimetilsulfopropilbe aina, laurilbe aina, cocamidopropilbetaina o cocalcamforpropionato de sodio. Los surfactantes no iónicos adecuados son, por ejemplo, los productos de reacción de alcoholes alifáticos o alquilfenoles que tienen 6 a 20 átomos de carbono en la cadena alquídica, la cual puede ser lineal o ramificada, con óxido de etileno y/o óxido de propileno. La cantidad del óxido de alquileno es de aproximadamente 6 a 60 moles por mol del
alcohol. Además, los óxidos de alquilamina, mono o dialquilalcanolaminas, esteres de ácidos grasos de polietilenglicoles, amidas de ácidos grasos etoxiladas, alquil poliglicosidos o sorbitan éter esteres son adecuados. Además, la preparación de lavado, de ducha o de baño puede comprender los surfactantes catiónicos acostumbrados, tales como, por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario, por ejemplo, cloruro de cetiltrimetilamonio. Además, las formulaciones de en gel/champú para ducha pueden comprender espesantes, tales como, por ejemplo, cloruro de sodio, PEG-55, oleato de propilenglicol, PEG-120 metilglucosa dioleato y otros, y también conservadores, otros ingredientes activos y auxiliares y agua. Composiciones para tratamiento del cabello De acuerdo con una modalidad preferida más, los dermocosméticos de acuerdo con la invención son composiciones para el tratamiento del cabello. Preferiblemente, las composiciones para el tratamiento del cabello de acuerdo con la invención están en forma de una espuma fijadora, espuma para el cabello, gel para el cabello, aerosol para el cabello, espuma para el cabello, fluido de terminación, neutralizador para ondulación permanente, colorante y blanqueador para el cabello o tratamiento de aceite caliente. Dependiendo del campo de uso, las
preparaciones cosméticas para el cabello pueden ser aplicadas como (aerosol) rociador, (aerosol) espuma, gel, aerosol en gel, crema, loción o cera. Los aerosoles para el cabello incluye aquí tanto los rociadores en aerosol y también los rociadores de bomba sin gas propelente. Las espumas para el cabello incluyen tanto las espumas en aerosol y también las espumas de bomba sin gas propelente. Los aerosoles para el cabello y las espumas para el cabello preferiblemente incluyen predominante o exclusivamente componentes solubles en agua o dispersibles en agua. Si los compuestos usados en los rociadores para el cabello y las espumas para el cabello de acuerdo con la invención, son dispersibles en agua, estos pueden ser aplicados en forma de microdispersiones acuosas con diámetros de partícula usualmente de 1 a 350 nm, preferiblemente 1 a 250 nm. Los contenidos de sólidos de estas preparaciones son aquí usualmente en un rango desde aproximadamente 0.5 a 20% en peso. Estas microdispersiones usualmente no requieren emulgentes o surfactantes para su estabilización. Se debe entender que otros constituyentes significa los aditivos de costumbre en los cosméticos, por ejemplo, propelentes, antiespumantes, compuestos tensioactivos, es decir, surfactantes, emulgentes, formadores de espuma y solubilizantes. Los compuestos tensioactivos usados pueden ser
aniónicos, catiónicos, amfotericos o neutros. Otros constituyentes acostumbrados también pueden ser, por ejemplo, conservadores, aceites perfumados, opacificadores, ingredientes activos, filtros UV, substancias para cuidado, tales como pantenol, colágeno, vitaminas, hidrolizados de proteínas, ácidos alfa y beta-hidrocarboxilicos, estabilizadores, reguladores de pH, tintes, reguladores de viscosidad, formadores de gel, humectantes, agentes de regeneradores o re-formadores de grasa, agentes de formación de complejos y otros aditivos de costumbre. También se incluyen todos los polímeros de estilización y acondicionadores conocidos en los cosméticos, los cuales pueden ser usados en combinación con las aminas obstaculizadas esféricamente de acuerdo con la invención si se deben establecer propiedades muy específicas. Los polímeros cosméticos para el cabello convencionales, adecuados son, por ejemplo, los polímeros catiónicos, aniónicos, neutro y anfotericos, a los cuales se hace referencia aquí. Para establecer ciertas propiedades, las preparaciones pueden comprender también adicionalmente substancias acondicionadoras basadas en compuestos de silicio. Los compuestos de silicio adecuados con, por ejemplo, polialquilsiloxanos, poliarilsiloxanos,
poliarilalquilsiloxanos, poliéter siloxanos, resinas de silicona o copolioles de dimeticona (CTFS) y compuestos de silicona amino funcionales, tales como amodimeticonas (CTFA) . Los propelentes son los propelentes usados de forma acostumbrada para aerosoles para cabello o espumas en aerosol .
Se da preferencia a las mezclas de propano/butano, pentano, dimetil éter, 1 , 1-difluoroetano (HFC-152 a), dióxido de carbono, nitrógeno o aire comprimido. Los emulgentes los cuales pueden ser usados son todos los emulgentes usados de forma acostumbrada en las espumas para cabello. Los emulgentes adecuados pueden ser no iónicos, catiónicos o aniónicos o anfotéricos. Los ejemplos de los emulgentes no iónicos (nomenclatura INCI) son laurets, por ejemplo, lauret-4; cetets, por ejemplo, cetet-1, polietilenglico cetil éter, cetearets-25, glicéridos de poliglicol ácidos grasos, lecitina hidroxilafda, lactil esteres o ácidos grasos, alquil poliglicosidos. Los ejemplos de emulgentes catiónicos son dihidrogenofostao de cetildimetil-2-hidroxietilamonio, cloruro de cetiltrimonio, bromuro de cetiltrimonio, metil sulfato de cocotrinio, cuaternio-1 x (INCI) . Los emulgentes aniónicos se pueden elegir, por ejemplo, del grupo de los sulfatos de alquilo, alquil éter sulfatos, alquilsulfonatos, alquilarilsulfonatos, succinatos de alquilo,
sulfosuccionatos de alquilo, sarcosinatos de N-alcoilo, lauratos de acilo, isetionatos de acilo, fosfatos de alquilo, alquil éter fosfatos, alquil éter carboxilatos, alfa-olefinosulfonatos, en particular las sales de metales alcalinos y de metales alcalinotérreos, por ejemplo las sales de sodio, potasio, magnesio, calcio y amonio y trietanolamina. Los alquil éter sulfatos, los alquil éter fosfonatos y los alquil éter carboxilatos pueden tener entre 1 y 10 unidades de óxido de etileno u óxido de propileno, preferiblemente 1 a 3 unidades de óxido de etileno, en la molécula. Los formadores de gel los cuales pueden ser usados son todos los formadores de gel usados de manera acostumbrada en los cosméticos. Estos incluyen el ácido poliláctico poco reticulado, por ejemplo, Carbonero (INCI) , derivados de celulosa, por ejemplo, hidroxipropilcelulosa, hidroxietilcelulosa, celulosas modificadas catiónicamente, polisacáridos, por ejemplo, goma de xantano, triglicérido caprílico/cáprico, copolímeros de acrilato de sodio, policuaternio-32 (y) parafina liquida (INCI) , copolímeros de acrilato de sodio (y) parafina liquida (y) PPG-1 tridecet-6, copolímeros de cloruro de acrilamidopropiltrimonio/archilamida, esteret-10 alil éter, copolímeros de acrilato, policuaternio-37 (y) parafina liquida (y) PPG-1 tridecet-6, policuaternio 37 (y) propilenglicol
dicaprato (y) PPG-1 tridecet-6, policuaternio-7 , policuaternio-44. En las formulaciones de champú, se pueden usar todos los surfactantes aniónicos, neutros, anfotéricos o catiónicos usados de manera acostumbrada en los champuses . Los surfactantes aniónicos adecuados son, por ejemplo, sulfatos de alquilo, alquil éter sulfatos, alquilsulfonatos, alquilarilsulfonatos, succinatos de alquilo, sulfosuccionatos de alquilo, N-alcoxi sarcosinatos, tauratos de acilo, isotionatos de acilo, fosfatos de alquilo, alquil éter fosfatos, alquil éter carboxilatos, alfa-olefinosulfonatos, en particular, las sales de metales alcalinos y de metales alcalinotérreos, por ejemplo, las sales de sodio, potasio, magnesio, calcio y amonio. Los alquil éter sulfatos, los alquil éter fosfatos y los alquil éter carboxilatos pueden tener entre 1 y 10 unidades de óxido de etileno o de óxido de propileno, preferiblemente 1 a 3 unidades de óxido de etileno en la molécula. De conveniencia son, por ejemplo, el lauril sulfato de sodio, lauril sulfato de amonio, lauril éter sulfato de sodio, lauril éter sulfato de amonio, lauroil sarcosinato de sodio, oleil succionato de sodio, lauril sulfosuccionato de amonio, docecilbencenosulfonato de sodio, trietanolamina dodecilbencenosulfonato .
Los surfactantes anfotéricos adecuados son, por ejemplo, alquilbetainas, alquilamidopropilbetainas, alquilsulfobetainas, glicinatos de alquilo, carboxiglicinatos de alquilo, amfoacetatos o propionatos de alquilo, alfodiacetatos o dipropionatos de alquilo. Por ejemplo se pueden usar la cocodimetilsulfopropilbetaina, laurilbetaina, cocamidopropilbetaina o el cocanfopropionato de sodio. Los surfactantes no iónicos adecuados son, por ejemplo, los productos de la reacción de los alcoholoes alifáticos o los alquilfenoles que tienen 6 a 20 átomos de carbono en la cadena alquídica, los cuales pueden ser lineales o ramificados, con óxido de etileno y/u óxido de propileno. La cantidad de óxido de etileno es aproximadamente 6 a 60 moles por mol de alcohol. Además, los óxidos de alquilamina, mono o dialquilalcanolamidas, los esteres de ácidos grasos de prolietilen glicoles, los alquil poliglicosidos o los sorbitan éter esteres son adecuados. Además, las formulaciones de champú pueden comprender surfactantes catiónicos, tales como, por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario, por ejemplo, cloruro de cetiltrimetilamonio. En las formulaciones de champú, con el fin de lograr ciertos efectos, se pueden usar los agentes de
acondicionamiento acostumbrados, en combinación con las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención. Estas incluyen, por ejemplo, los polímeros catiónicos citados arriba con el nombre INCI Policuaternio, en particular, los copolímeros de vinilpirrolidona/sales de N-vinilimidazolio (luviquat FC, Luviquat MS, Luviquat Care) , copolímeros de N-vinilpirrolidona/metacrilato de dimetilaminoetilo, cuaternizados con sulfato de dietilo (Luviquat D PQ 11) , copolímeros de N-vinilcarprolactama/N-vinilpirrolidona/sales de N-vinilimidazolio (Luviquat D Hola) , derivados de celulosa catiónica (Policuaternio-4 y 10) , copolímeros de archilamida (polyquaternium-7) . Además, se pueden usar hidrolizados de proteína, y también las substancias de acondicionamiento basadas en compuestos de silicona, por ejemplo, polialquilsiloxanos, poliarilsiloxanos, poliarilalquilsiloxanos, polieter siloxanos o resinas de silicona. Otros compuestos de silicona adecuados son los polioles de dimeticona (CFTA) y los compuestos de silicona amino funcionales, tales como amodimeticonas (CTFA) . Además, se pueden usar los derivados de guar catiónicos, tales como Guar Cloruro de Hidroxipropiltrimonio (INCI) . De acuerdo con una modalidad más, estos cosméticos para el cabello preparaciones cosméticas para el cabello sirven
para el cuidado y la protección de la piel o el cabello y están en forma de una emulsión, una dispersión, una suspensión, una preparación surfactante acuosa, una leche, una loción, una crema un bálsamo, un ungüento, un gel, un granulado, un polvo, una preparación en barra, tales como, por ejemplo, un lápiz labial, una espuma, un aerosol o un rociador. Tales formulaciones son altamente adecuadas para preparaciones tópicas. Las emulsiones adecuadas son emulsiones de aceite en agua y emulsiones de agua en aceite o microemulsiones. Por lo general, la preparación cosmética para el cabello o cosmética para la piel se usa para la aplicación a la piel
(tópica) o el cabello. Se entiende que aquí, preparaciones tópicas, significa aquellas preparaciones las cuales son adecuadas para aplicar los ingredientes activos a la piel en una distribución fina y preferiblemente en una forma la cual puede ser absorbida por la piel . De conveniencia pata este propósito son, por ejemplo, soluciones acuosas y acuosas-alcohólicas, rociadores, espumas, aerosoles en espuma, ungüentos, geles acuosas, emulsiones del tipo 0/W o W/0, microemulsiones o preparaciones cosméticas en barra. De acuerdo con una modalidad preferida de la composición cosmética de acuerdo con la invención, la composición comprende un portador. Un portador preferido es agua, un gas,
un liquido basado en agua, un aceite, un gel, una emulsión o microemulsión, una dispersión o una mezcla de los mismos. El portador especificado exhibe buena compatibilidad con la piel. De ventaja particular para las preparaciones tópicas son los geles acuoso, emulsiones o microemulsiones. Los emulgentes los cuales pueden ser usados son los surfactantes no ionogenicos, surfactantes zwitteriónicos, surfactantes anfoliticos o emulgentes aniónicos. Los emulgentes pueden estar presentes en la composición de acuerdo con la invención, en cantidades de, desde 0.1 a 10% en peso, preferiblemente 1 a 5% en peso, con base en las composiciones.
El surfactante no ionogénico usado puede ser, por ejemplo, un surfactante de al menos uno de los siguientes grupos : productos de adición de 2 a 3 moles de óxido de etileno y/o 0 a 5 moles de óxido de propileno sobre los alcoholes grasos lineales que tienen 8 a 22 átomos de carbono, sobre ácidos grasos que tengan 12 a 22 átomos de carbono y sobre alquilfenoles que tengan 8 a 15 átomos de carbono en el grupo alquilo; mono y diésteres de ácidos grasos de C?2?ß de productos de adición de 1 a 30 moles de óxido de etileno sobre glicerol; glicerol mono y di esteres y sorbitan mono y diésteres de ácidos grasos saturados e insaturados que tengan 6 a 22 átomos
de carbono y productos de adición de óxido de etileno de los mismos; alquil mono y oligoglicosidos que tengan 8 a 22 átomos de carbono en el radical alquilo y los análogos etoxilados de los mismos; productos de adición de, desde 15 a 60 moles de óxido de etileno sobre aceite de ricino y/o aceite de ricino hidrogenado; poliol y, en particular poliglicerol esteres, tales como, por ejemplo, poliricinoleato de poliglicerol, poli-12-hidroxiestearato de poliglicerol o dimerato de poliglicerol. Igualmente adecuadas son las mezclas de compuestos desde dos a más de estas clases de substancias; los productos de adición de, desde 2 a 15 moles de óxido de etileno sobre aceite de ricino y/o aceite de ricino hidrogenado; esteres parciales basados en ácidos grasos de C6/22 lineales, ramificados insaturados o saturados, ácido ricinoleico, y ácido 12-hidroxiestearico y glicerol, poliglicerol, pentaeritritol, dipentaeritritol, alcoholes de azúcar (por ejemplo, sorbitol) , alquil glucósidos (por ejemplo, metil glucósido, butil glucósido, lauril glucósido) y poliglucosidos (por ejemplo, celulosa) , fosfatos de mono, di y trialquilo, y fosfatos de mono, di y/o tri-PEG alquilo y sales de los mismos; alcoholes de cera de lana; copolímeros de polisiloxano-apolialquil polieter y los
derivados correspondientes; esteres mezclados de pentaeritritol, ácidos grasos, ácido cítrico y alcohol graso como en la Especificación de patente alemana 1165574 y/o esteres mezclados de ácidos grasos que tengan 6 a 22 átomos de carbono, metilglucosa y polioles, preferiblemente glicerol o poliglicerol, y polialquilen glicoles . Además, los surfactantes zwitteriónicos se pueden usar como emulgentes. Surfactantes zwitteriónicos es el termino usado para referirse a aquellos compuestos tensioactivos los cuales contienen al menos un grupo amonio cuaternario y al menos un grupo carboxilato, o un grupo sulfonato en la molécula. Los surfactantes zwitteriónicos adecuados particularmente son las así llamadas botainas, tales como los glicinatos de N-alqui-N,N-dimetilamonio, por ejemplo, glicinato de cocoalquildimetilamonio, glicinatos de N-acilaminopropil-N,N-dimetilamonio, por ejemplo, glicinato de cocoacilaminopropildimetilamonio, y 2-alquil-3-carboxilmetil-3-hidroxietilimidazolinas que tienen en cada caso 8 a 18 átomos de carbono en el grupo alquilo o acilo, y carboximetilglicinato de cocoacilaminoetilhidroxietilo. Se da preferencia particular al derivado de ácido graso amida conocido bajo el nombre CTFA Cocamidopropil Betaina. Igualmente adecuados son los surfactantes anfotéricos.
Se entiende que surfactantes anfolíticos significa aquellos compuestos tensioactivos los cuales, aparte del grupo alquilo o acilo de C8,i8 en la molécula, comprenden al menos un grupo amino libre y al menos un grupo -COOH- o S03H, y son capaces de formar sales internas. Los ejemplos de surfactantes anfoliticos adecuados son N-alquilglicinas, ácidos N-alquilpropionicos, ácidos N-alquilaminobutiricos, ácidos N-alquilimidopropionico, N-hidroxietil-N-alquilamidopropilglicinas, A-alquiltaurinas, N-alquilsarcosinas, ácidos 2-alquilaminopropionicos y ácidos alquilaminoacetico que tienen en cada caso aproximadamente 8 a 18 átomos de carbono en el grupo alquilo. Los surfactantes anfoliíicos preferidos particularmente son N-cocoalquilaminipropionato, cocoacilaminoetilaminopropionato y acilsarcosina de C?2/?ß-Además de los emulgentes anfoliticos, los emulgentes cuaternarios también son adecuados, con aquellos del tipo del éster quat, preferiblemente sales de metilo-cuaternizado ácido digraso trietanolamina éster, que son particularmente preferidas. Además, los emulgentes aniónicos los cuales pueden ser usados son los alquil éter sulfatos, monoglicérido sulfatos, ácido graso sulfatos, sulfosuccinatos y/o éter ácidos carboxílicos. Los cuerpos aceitosos adecuados son los alcoholes de
Guerbet basados en alcoholes grasos que tienen 6 a 18, preferiblemente 8 a 10, átomos de carbono, esteres de ácidos grasos de C8-C22 lineales con alcoholes grasos de C6-C lineales, esteres de ácidos carboxílicos de C6-C?3 ramificados con alcoholes grasos de C6-C22, esteres de ácidos grasos de C6-C22 lineales con alcoholes ramificados, en particular 2-etilhexanol, esteres de ácidos grasos lineales y/o ramificados con alcoholes polihídricos (tales como, por ejemplo, propilen glicol, dimerdiol o trimertriol) y/o alcoholes de Guerbet, triglicéridos basados ácidos grasos de C6-C?0, mezclas basadas en ácidos grasos de C6-C?8, esteres de alcoholes grasos de C6-C22 y/o alcoholes de Guerbet con ácidos carboxílicos aromáticos, en particular ácido benzoico, esteres de ácidos dicarboxílicos de C2-C12 con alcoholes lineales o ramificados que tienen 1 a 22 átomos de carbono o polioles que tienen 2 a 10 átomos de carbono y 2 a 6 grupos hidroxilo, aceites vegetales, alcoholes primarios ramificados, ciclohexanos substituidos, carbonatos de alcoholes grasos de C6-C2, carbonatos de Guerbet, esteres de ácido benzoico con alcoholes de C6-C22 lineales y/o ramificados (por ejemplo, Finsolv® TN) , dialquil éteres, productos de abertura de anillos de esteres de ácidos grasos epoxidizados con polioles, aceites de silicona y/o hidrocarburos alifáticos o nafténicos . Los cuerpos aceitosos los cuales pueden ser usados son los
compuestos de silicona, por ejemplo, dimetilpolisiloxanos, metilfenilpolisiloxanos, siliconas cíclicas, y compuestos de silicona modificados son amino, ácido grasos, alcohol, poliéter, epoxi, flúor, alquilo y/o glicosido, los cuales pueden estar ya sea en forma de un liquido o en forma de una resina a la temperatura ambiente. Los cuerpos aceitosos pueden estar presentes en las composiciones de acuerdo con la invención en cantidades de, desde 1 a 90% en peso, preferiblemente 5 a 80% en peso, y en particular 10 a 50% en peso, con base en la composición.. La lista de ingredientes especificados los cuales pueden ser usados junto con las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con la invención y/o producidos mediante el método inventivo, no se deben considerar por supuestos para ser exhaustivos o limitantes. Los ingredientes se pueden usar individualmente o en cualquier combinación entre si. La invención proporciona además compuestos de la fórmula
Fórmula 2
donde "n" es un entero entre 0 y 20 , preferiblemente entre 3 y 15 , en particular preferiblemente entre 3 y 10 , en particular muy preferiblemente entre 3 y 8, más preferiblemente sobre todo 4.
La presente invención proporciona además compuestos de la fórmula 2 a donde "n" es un entero entre 0 y 20, preferiblemente entre 3 y 15, en particular preferiblemente entre 3 y 10, en particular muy preferiblemente entre 3 y 8, más preferiblemente sobre todo 4, y X corresponde al modulo definido en la fórmula lb.
Fórmula 2a
La invención proporciona además compuestos de la fórmula
Fórmula 3
donde "n" es un entero entre 0 y 20, preferiblemente entre 0 y 15, en particular preferiblemente entre 1 y 10, en particular muy preferiblemente entre 1 y 8, más preferiblemente sobre todo 1 o 4, "o" es un entero entre 0 y 30, preferiblemente entre 0 y 20, en particular preferiblemente entre 6 y 16, "p" es un entero entre 0 y 5, en particular preferiblemente 0, l o 2, y "q" es 0, 1 o 2. Además, también se entiende que los compuestos mono o
poliinsaturados los cuales pondrían ser convertidos a los compuestos de la fórmula general 3b por hidrogenación también están incluidos. Secuencias
SEC ID Tipo de Descripción de la secuencia NO: Secuencia 1 Ácido Desmoplaquina de Homo sapiens_No. De nucleico Acceso NM_004415 2 Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de Acceso NM_004415 3 Ácido Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de nucleico Acceso NM_004415 dominio B 4 Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens No. de Acceso NM_004415 dominio B 5 Ácido Desmoplaquina de Homo sapiens No. de nucleico Acceso NM_004415 dominio B-l 6 Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens No. de Acceso NM_004415 dominio B-l 7 Ácido Desmoplaquina de Homo sapiens No. de nucleico Acceso NM_004415 dominio B-2 8 Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens No. de Acceso NM_004415 dominio B-2 9 Ácido Desmoplaquina de Homo sapiens No. de nucleico Acceso NM_004415 dominio 10 Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens No. de Acceso NM_004415 dominio 11 Ácido Desmoplaquina de Homo sapiens No. de nucleico Acceso NM_004415 dominio C-l 12 Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens No. de Acceso NM_004415 dominio C-l 13 Ácido Desmoplaquina de Homo sapiens No. de nucleico Acceso NM_004415 dominio C-2 14 Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens No. de Acceso NM_004415 dominio C-2 15 Ácido H . sapiens_Filaggrin_No . de Acceso nucleico CA119595 16 Proteína H. sapiens_Filaggrin_No. de Acceso CA119596 17 Ácido Placofilina de Homo sapiens 1 NM DE nucleico ACCESO_001005337, Variante de transcripto la
proteina Placofilina de Homo sapiens 1 NM DE
ACCESO_001005337, Variante de transcripto la Ácido Placofilina de Homo sapiens 1 NM DE nucleico ACCESO_000299, Variante de transcripto lb
Proteína Placofilina de Homo sapiens 1 NM DE
ACCESO_000299, Variante de transcripto lb
Ácido Placofilina de Mus musculus 2 NM DE nucleico ACCESO_026163 NM_027894 Proteína Placofilina de Mus musculus NM DE ACCESO_026163 NM_027895 Ácido Placofilina de Mus musculus NM DE nucleico ACCESO_019645 Proteína Placofilina de Mus musculus NM DE ACCESO_019646 Ácido Placofilina de Bos laurus 1 ARNm parcial, nucleico ACCESO XM_868348 Proteína Placofilina de Bos laurus 1 ARNm parcial,
ACCESO XM_868349 Ácido Canis familiaris similar a la isoforma la nucleico de placofilina 1, ACCESO XM_851528 Proteína Canis familiaris similar a la isoforma la de placofilina 1, ACCESO XM_851529 Ácido Danio rerio similar a la Placofilina 1 nucleico ACCESO XM_695832 Proteína Danio rerio similar la Placofilina 1
ACCESO XM_695833 Ácido Rattus norvegicus similar a la nucleico Placofilina 1, ACCESO XM_222666 Proteína Rattus norvegicus similar a la
Placofilina 1, ACCESO XM_222667 Ácido Pan troglodytes similar a la Placofilina nucleico 1, ACCESO XM_514091 Proteína Pan troglodytes similar a la Placofilina
1, ACCESO XM_514092 Ácido Gallus gallus similar a la Placofilina 1, nucleico ACCESO XM_419240 Proteína Gallus gallus similar a la Placofilina 1,
ACCESO XM- 419241 Ácido Xenopus laevis similar a la plakophilin nucleico 4, ACCESO BI390496 Proteína Xenopus laevis similar a la plakophilin
4, ACCESO BI390497
Acido Desmoplaquina de Homo sapiens, variante nucleico de transcripto 2, NM DE ACCESO_001008844
Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens, Variante de transcripto 2, NM DE ACCESO_001008845
Ácido Desmoplaquina de Mus musculus, ACCESO nucleico XM_621314 Proteína Desmoplaquina de Mus musculus, ACCESO
XM_621315 Ácido Rattus norvegicus similar a la isoformaa nucleico II de desmoplaquina, ACCESO XM_225259
Proteína Rattus norvegicus similar a la isoformaa
II de desmoplaquina, ACCESO XM_225260
Ácido Desmoplaquina de Pan troglodytes, ACCESO nucleico XM_518227 Proteína Desmoplaquina de Pan troglodytes, ACCESO XM_518228 Gallus Ácido Gallus similar a la desmoplaquina, ACCESO nucleico XM- 418957 Proteína Gallus Gallus similar a la desmoplaquina, ACCESO XM- 418958 Placoglobina de unión de Homo sapiens
Ácido (JUP) , Variante de transcripto 2 NM DE nucleico ACCESO_021991 Placoglobina de unión de Homo sapiens (JUP) , variante de transcripto 2, ACCESO proteína NM_021992 Ácido Mus musculus, placoglobina; gamma-nucleico catenina, NM DE ACCESO_010593 Proteína Mus musculus, placoglobina; gamma- catenina, NM DE ACCESO_010594 Ácido Gamma-catenina de Rattus norvegicus nucleico (placoglobina) , NM DE ACCESO_031047 Proteína Gamma-catenina de Rattus norvegicus (placoglobina) , NM DE ACCESO_031048 Ácido Familia de proteínas de Danio rerio nucleico armadillo; placoglobina, NM DE ACCESO_131177 Proteína Familia de proteínas de Danio reno armadillo; placoglobina, NM DE ACCESO_131178 Ácido Placoglobina de unión de Xenopus nucleico Tropicalis, ACCESO BC064717 Proteína Placoglobina de unión de Xenopus Tropicalis, ACCESO BC064718
Canis familiaris similar a la isoforma 10
Acido de la placoglobina de unión, ACCESO
59 nucleico XM_856625 Canis familiaris similar a la isoforma 10 de la placoglobina de unión, ACCESO
60 Proteína XM_856625 61 Ácido Proteína Jup de Xenopus laevis, ACCESO nucleico BC09411 62 Proteína Proteína Jup de Xenopus laevis, ACCESO BC094117 63 Ácido Placoglobina de unión de Bos Taurus, NM nucleico DE ACCESO_001004024 64 Proteína Placoglobina de unión de Bos laurus, NM DE ACCESO_001004025 65 Ácido Placoglobina de Sus scrofa, NM DE nucleico ACCESO_214323 66 Proteína Placoglobina de Sus scrofa, NM DE ACCESO_214324 67 Ácido Placoglobina de unión de Danio rerio, nucleico ACCESO BC058305 68 Proteína Placoglobina de unión de Danio rerio, ACCESO BC058306 69 Ácido Saccharomyces cerevisiae, nucleico placoglobina/armadilio/beta-catenina, ACCESO AF005267 70 Proteína Saccharomyces cerevisiae, placoglobina/armadillo/beta-catenina, ACCESO AF005268 71 Ácido Plectina 1 de Homo sapiens, proteína de nucleico enlace de filamento intermedio, NM DE ACCESO_201380 72 Proteína Plectina 1 de Homo sapiens, proteína de enlace de filamento intermedio, NM DE ACCESO_201381 73 Ácido Plectina de Mus musculus 1 (Plecl), nucleico Variante de transcripto 11, ARNm, NM DE ACCESO_201394 XM 74 Proteína Plectina de Mus musculus 1 (Plecl), Variante de transcripto 11, ARNm, NM DE ACCESO_201394 XM 75 Ácido Bos laurus similar a la isoforma 1 de nucleico plectina 1 (LOC510991) ACCESO XM_588232
76 Proteína Bos laurus similar a la isoforma 1 de plectina 1 (LOC510991) , ACCESO XM_588233
77 Ácido Canis familiaris similar a la 1 isoforma nucleico de plectina, ACCESO XM_539204
78 Proteína Canis familiaris similar a la 1 isoforma de plectina, ACCESO XM_539205 79 Ácido Trypanosoma cruzi, proteína similar la nucleico plectina 1, ACCESO XM_809849 80 Proteína Trypanosoma cruzi, proteína similar la plectina 1, ACCESO XM_809850 81 Ácido Plectina de Rattus norvegicus ACCESO nucleico X59601 82 Proteína Plectina de Rattus norvegicus, ACCESO X59602 83 Ácido Plectina de Cricetulus griseus, ACCESO nucleico AF260753 84 Proteína Plectina de Cricetulus griseus, ACCESO AF260754 85 Ácido Periplaquina de Homo sapiens, NM DE nucleico ACCESO_002705 86 Proteína Periplaquina de Homo sapiens, NM DE ACCESO_002706 87 Ácido Periplaquina de Mus musculus, NM DE nucleico ACCESO_008909 XM_358905 88 Proteína Periplaquina de Mus musculus, NM DE ACCESO_008909 XM_358906 89 Ácido Envoplaquina de Homo sapiens, NM DE nucleico ACCESO_001988 90 Proteína Envoplaquina de Homo sapiens, NM DE ACCESO_001989 91 Ácido Envoplaquina de Mus musculus, NM DE nucleico ACCESO_025276 XM_283024 92 Proteína Envoplaquina de Mus musculus, NM DE ACCESO_025276 XM_283025 93 Ácido Bos taurus similar a Envoplaquina, ACCESO nucleico XM_587641 94 Proteína Bos taurus similar a Envoplaquina, ACCESO XM 587642 95 Ácido Canis familiaris similar a Envoplaquina, nucleico ACCESO XM_540443 96 Proteína Canis familiaris similar a Envoplaquina, ACCESO XM_540444 97 Ácido Danio rerio similar a Envoplaquina, nucleico ACCESO XM_687958 98 Proteína Danio rerio similar a Envoplaquina, ACCESO XM_687959 99 Ácido Rattus norvegicus, similar a nucleico envoplaquina, db_xref GenID: 303687 00 Proteína Rattus norvegicus, similar envoplaquina, db_xref GenID ¡303688
101 Acido Pan troglodytes similar a Envoplaquina, nucleico ACCESO XM_511692 102 Proteína Pan troglodytes similar a Envoplaquina, ACCESO XM_511693 103 Ácido Antígeno penfigoide del bolo humano, nucleico ACCESO M63618 104 Proteína Antígeno penfigoide del bolo humano, ACCESO M63619 105 Ácido Antígeno penfigoide 1 del bolo de Mus nucleico musculus (Bpagl) , ACCESO AF396877 106 Proteína Antígeno penfigoide 1 del bolo de Mus musculus (Bpagl) , ACCESO AF396878 107 Ácido Mus musculus similar a tricohialina 1 , NM nucleico DE ACCESO_027762 108 Proteína Mus musculus similar a tricohialina 1 , NM DE ACCESO_027763 109 Ácido Bos taurus similar a tricohialina 1, nucleico ACCESO XM_597026 110 Proteína Bos taurus a similar a tricohialina 1, ACCESO XM_597027 111 Ácido Similar a tricohialina 1 de Homo sapiens, nucleico NM DE ACCESO_001008536 XM_060104 112 Proteína Similar a tricohialina 1 de Homo sapiens, NM DE ACCESO_001008536 XM_060105 113 Ácido Stronglyocentrotus purpuratus similar a nucleico Tricohialina, ACCESO XM_793822 114 Proteína Strongylocentrotus purpuratus similar a Tricohialina, ACCESO XM_793823 115 Ácido Tricohialina de Trypanosoma cruzi, nucleico putativo, ACCESO XM_809758 116 Proteína Tricohialina de Trypanosoma cruzi, putativo, ACCESO XM_809759 117 Ácido Tricohialina de Giardia lamblia ATCC nucleico 50803, ACCESO XM_765825 118 Proteína Tricohialina de Giardia lamblia ATCC 50803, ACCESO XM_765826 119 Ácido Aspergillus fumigatus Af293, nucleico tricohialina, ACCESO XM_748643 120 Proteína Aspergillus fumigatus Af293, tricohialina, ACCESO XM_748644 121 Ácido Tricohialina de O.cuniculus ACCESO nucleico Z19092 122 Proteína Tricohialina de O.cuniculus. ACCESO Z19093 123 Ácido Pan troglodytes similar a Tricohialina, nucleico ACCESO XM 526770
124 Proteína Pan troglodytes similar a Tricohialina, ACCESO XM_526771 125 Ácido Tricohialina Humana (TRHY) , ACCESO L09190 nucleico 126 Proteína Tricohialina Humana (TRHY) , ACCESO L09191 127 Ácido Proteína 3 rica en prolina pequeña de Mus nucleico musculus, NM DE ACCESO_011478 128 Proteína Proteína 3 rica en prolina pequeña de Mus musculus, NM DE ACCESO_011479 129 Ácido Proteína 2B rica en prolina pequeña de nucleico Homo sapiens (SPRR2B) , ACCESO NM_001017418 130 Proteína Proteína 2B rica en prolina pequeña de Homo sapiens (SPRR2B) , ACCESO NM_001017419 131 Acido Proteína del folículo capilar AHF de Mus nucleico musculus, ACCESO XM-485271 132 Proteína Proteína del folículo capilar AHF de Mus musculus, ACCESO XM-485272 133 Ácido Epiplaquina 1 de Homo sapiens (EPPKl) , NM nucleico DE ACCESO_031308 XM_372063 134 Proteína Epiplaquina 1 de Homo sapiens (EPPKl) , NM DE ACCESO_031308 XM_372064 135 Ácido Epiplaquina 1 de Mus musculus, NM DE nucleico ACCESO_144848 NM_173025 136 Proteína Epiplaquina 1 de Mus musculus, NM DE ACCESO_144848 NM_173026 137 Ácido Proteína estructural FBF1 de Mus nucleico musculus, ACCESO AF241249 138 Proteína Proteína estructural FBF1 de Mus musculus, ACCESO AF241250 139 Ácido Gen spaP mutante de estreptococo para el nucleico antígeno I/II, ACCESO X17390 140 Proteína Gen spaP mutante de estreptococo para el antígeno, ACCESO X17391 141 Ácido Secuencia del cebador PCR Bag 43 nucleico 142 Ácido Secuencia del cebador PCR Bag 44 nucleico 143 Ácido Secuencia del cebador PCR Bag 53 nucleico 144 Ácido Secuencia del cebador PCR Bag 51 nucleico 145 Ácido Fragmento de ADN el cual ha sido nucleico amplificado por medio del cebador PCR Libl48 (SEC ID NO: 147) y Libl49 (SEC ID NO: :148)
146 Protema Producto de traducción de la molécula de ácido nucleico SEC ID NO . : 145 147 Ácido Secuencia del cebador de PCR Libl48 nucleico 148 Ácido Secuencia del cebador de PCR Libl49 nucleico 149 Ácido Fragmento de ADN el cual ha sido nucleico amplificado por medio del cebador PCR Libl51149 (SEC ID NO.: 148) y Libl50 (SEC ID NO.152:151) . 150 Protema Producto de traducción de la molécula de ácido nucleico SEC ID No. : 149 151 Ácido Secuencia del cebador de PCR Libl50 nucleico 152 Ácido Fragmento de ADN el cual ha sido nucleico amplificado por mel57dio del cebador PCR Libldl (SEC ID No.:11556) and Libl52 (SEC ID No. : 157) 153 Proteína Producto de traducción de la molécula de ácido nucleico SEC ID No . : 152 154 Ácido Secuencia del cebador de PCR Libl51 nucleico 155 Ácido Secuencia del cebador de PCR Libl52 nucleico 156 Proteína KBD-B_3_Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de Acceso NM_004415 dominio B-3 157 Proteína KBD-B_4 Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de Acceso NM_004415 dominio B-4 158 Proteína KBD-B_5 Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de Acceso NM_004415 dominio B-5 159 Ácido KBD-B_6_Desmoplaquina de Homo sapiens_No. nucleico de Acceso NM_004415 dominio B-5 160 Proteína KBD-B_6_Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de Acceso NM_004415 dominio B-5 161 Ácido Tricopleina de Homo sapiens, BCO04285 nucleico 162 Proteína Tricopleina de Homo sapiens, BCO04285 163 Ácido Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de nucleico Acceso NM_004415 con intercambio de ácidos nucleicos en comparación con la SEC ID No. : ID 1 164 Proteína Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de Acceso NM_004415 con intercambios de aminoácidos en las posiciones 905, 2687 y 2688 en comparación con la SEC ID No.: ID 2
165 Acido KBD-B_7 Desmoplaquina de Homo sapiens_No. nucleico de Acceso NM_004415 dominio B-7 166 Proteína KBD-B_7 Desmoplaquina de Homo sapiens_No. de Acceso NM_004415 dominio B-7 167 Ácido KBD-D con anclaje de histidina N- nucleico terminal, placofilina la de H. sapiens NM DE ACCESO_001005337 168 Proteína KBD-D con anclaje de histidina C- terminal, placofilina la de H. sapiens ACCESO NM_001005337 169 Acido Aminoácidos 1-273 de BD-D con anclaje de nucleico histidina C-terminal, Placofilina la de H. sapiens NM DE ACCESO_001005337 170 Proteína Placofilina la de H. sapiens ACCESO NP_001005337 171 Ácido Secuencia del cebador PCR HRe6 nucleico 172 Ácido Secuencia del cebador PCR HRe9 nucleico 173 Ácido Secuencia del cebador PCR HRe7 nucleico 174 Ácido Secuencia del cebador PCR HRed nucleico 175 Ácido Secuencia del cebador PCR HRe26 nucleico 176 Ácido Secuencia del cebador PCR HRe27 nucleico
Ejemplos experimentales
Los siguientes ejemplos se describen con el fin de ilustrar las modalidades preferidas de la presente invención.
Estos ejemplos no se deben considerar por ser exhaustivos o limitar la materia objeto de la invención.
En la descripción experimental, se usa las siguientes
abreviaturas : (2-amino-2-metilpropanol) AMP, (grados Celsius) °C, (ácido etilendiaminotetraacetico) EDTA, (estabilizador de
amina enmascarada) HAS, (1 , 1-difluoroetano) HFC 152,
Nomenclatura Internacional de Ingredientes Cosméticos) INCI,
(mililitros) ml , (minutos) min, (aceite/agua) 0/W,
(polietilenglicol) PEG-25, (ácido paraaminobenzoico) PABA, (partes por millón) ppm, (quantum satis) q.s.,
(vinilpirrolidona) VP, (agua/aceite) W/0, (ingrediente activo)
AI, (polivinilpirrolidona) PVP, dominio de enlace a la queratina (KBD) , dominio B de enlace a la queratina de la desmoplaquina humana (KBD-B) , dominio C de enlace a la queratina de la desmoplaquina humana (KBD-C) , dominio de enlace a la queratina de la placofilina humana (KBD-D) . Ejemplo 1: Vectores de expresión y cepas de producción Se evaluaron varios vectores de expresión para la expresión de los dominios de enlace a la queratina (KBD) . Para estos, se usaron varios promotores (por ejemplo, inducible por IPTG, inducible por rhamnosa, inducible por arabinosa, inducible por metanol, promotores constitutivos, etc.). Igualmente se evaluaron constructos en los cuales los KBD se expresaron como proteínas de fusión (por ejemplo, como fusiones con tioredoxina, o eGFP, o YaaD [B. subtilis, SWISS-PROT: P37527, PDX1] , etc.). Aquí, tanto el KBD-B (dominio B de enlace a la queratina, SEC ID NO: 4) y KBD-C (dominio C de enlace a la queratina, SEC ID NO. : 10) descritos, t la combinación de los dos dominios KBD-BC se expresaron usando
los varios sistemas de expresión. Los constructos de vectores mencionados no son limitantes para las reivindicaciones. Dado a manera representantiva como un ejemplo, es el mapa del vector, del vector pQE30-KBD-B inducible por IPTG (Figura 1) , de los vectores indicibles por metanol pLib5
(Figura 2) y pLibl6 (Figura 3) , t del vector inducible pLibl9
(Figura 4) . El procedimiento para KBD-C también puede ser análogo a las construcciones y expresiones de vectores descritos . Para la expresión de los KBD, se usaron varios hospederos de producción, tales como, por ejemplo, cepas de E. coli (véase el Eje. 2; por ejemplo, XLIO-Gold [Stratagene], LL12-CodonPlus [Stratagene] , y otros) . Sin embargo, también se usaron otros hospederos de producción bacterianos, tales como, por ejemplo, Bacillus megaterium o Bacillus subtilis. En el caso de la expresión de KBD en B. megaterium, el procedimiento se llevo a cabo de manera análoga a: Barg, H. , Malten, M. & Jahn, D. (2005) . Protein and vitamin production in Bacillus megaterium en Methods in Biotechnology-Microbial Products and Biotransformations (Barredo, J.-L., ed, 205-224). Las cepas de producción fúngicas usadas fueron Pichia pastoris (véase, el Eje. 2; por ejemplo, GS115 y KM71 [ambos de Invitrogen] ; o otras) y Aspergillus nidulans (véase el Eje. 4; por ejemplo, RMS011 [Stringer, MA, Dean, RA, Sewall,
TC, Timberlake, WE (1991) Rodletless, a new Aspergillus developmental mutant induced by direct gene activation. Genes Dev 5:1161-1171] und SRF200 [Karos, M, Fischer, R (1999) Molecular characterization of HymA, an evolutionarily highly conserved and highly expresed protein of Aspergillus nidulans. Mol Genet Genomics 260:510-521], y otros). Sin embargo, también es posible usar otros hospederos de producción fúngicos, tales como, por ejemplo, Aspergillus Níger (análogos de expresión de KBD para EP 0635574A1 y/o WO 98/46772) para la expresión de KBD. Ejemplo 2: Expresión de KBD en cepas de E. coli con promotores inducibles por IPTG, por ejemplo, por el plásmido de expresión pQE30-KBD-B Para la expresión, se usaron varios hospederos de producción, tales como, por ejemplo, varias cepas de E. coli
(por ejemplo, XLIO-Gold [Stratagene] , BL21-CodonPlus
[Stratagene] , y otras] , Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, etc. Aquí se describe - a manera de un ejemplo representativo - la clonación y la expresión de de KBD-B por E. coli transformada con pQE30-KBD-B. Clonación de pQE30-KBD-B - Lambda-MaxiDNA (Equipo DNA-Lambda Maxi , Quiagen) se preparó a partir de un banco de ADNc de queratinocitos humanos
(BD Bioscience, Clontech, ADNc de queratinocitos humanos, foresquina, cultivo primario en fase logarítmica, vector ?gtll) . La PCR se llevó a cabo usando los siguientes oligonucleótidos: Bag 43 (5'- GGTCAGTTACGTGCAGCTGAAGG -3') (SEC ID No.: 141) y Bag 44 (5' GCTGAGGCTGCCGGATCG -3') (SEC ID No.: 142) 50 µl de Mezcla de PCR: Amortiguador lOx de PCR Pfu Ultra Alta Fidelidad: 5 µl ADN lambda (744ng/µl) 1 µl (dilución 1:30) Mezcla de dNTP (10 mM) 1 µl Oligo Bag 43 (192ng/µl) 0.5 µl Oligo Bag 44 (181 ng/µl) 0.5 µl Polimerasa de Ultra Alta Fidelidad Pfu 1 µl H20 41 µl Programa de Temperaturas :
iente 50°c?>60°c
min. 72°c - el producto PCR resultante, con un tamaño aproximado
de 1102 bp se recorto de un gel de agarosa y se purificó. - Usando el producto PCR purificado como plantilla, se llevó a cabo entonces una 2da PCR: Oligonucleótidos usados: Bag 53: (5'- CGCGCCTCGAGCCACATACTGGTCTGC -3') (SEC ID No.: 143) y Bag 51 (5'- GCTTAGCTGAGGCTGCCGGATCG -3') (SEC ID No.: 144) 5 µl de mezcla PCR: lOx amortiguador TAQ de PCR: 5 µl Plantilla de la PCR de arriba 3.5 µl Mezcla de dNTP (10 mM) 1 µl Oligo Bag 53 (345 ng/µl) 0.5 µl Oligo Bag 51 (157 ng/µl) 0.5 µl TAQ Polimerasa 1 µl H20 39 µl Programa de Temperaturas :
min 72°C - El producto PCR resultante de aproximadamente 1073 bp de tamaño se recortó de un gel de agarosa, se purificó y se
clonó en el siguiente vector: pCR2.1-T0P0 (Invitrogen). - el vector resultante pCR2.1-T0P0+KBD-B (5027 bp) se transformó, se amplificó en E. coli, después se cortó con Xhol y EcoRI y el fragmento KBD-B resultante se clonó en pBAD/HisA (Invitrogen, se cortó igualmente con Xhol y EcoRI) . - El vector pBAD/HisA+KBD-B (5171 bp) recién formado se cortó otra vez con Sacl y Stul y el fragmento KBD-B resultante se clono en pQE30 (Quiagen; se cortó con Sacl y Smal) . El vector de expresión resultante pQE30-KBD-B (4321 bp; véase también la Figura 1) se usó para las siguientes expresiones de KBD-B. El KBD-B (SEC ID NO. : 4) expresado por el vector pQE30-KBD-B en E. coli, incluía adicionalmente, en la N-terminal, los aminoácidos MRGSHHHHHHGSACEL, y en la C-terminal, los aminoácidos GVDLQPSLIS (SEC ID NO.: 166). Expresión de KBD-B por pQE30-KBD-B en E. coli - Se cultivaron precultivos del plato o el cultivo de glicerol con cepas de E. coli transformadas con pQE30-KBD-B
(por ejemplo, XLIO-Gold ( [Stratagene] ) . Dependiendo del tamaño del cultivo promedio, se llevó a cabo la inoculación con medio LB (aproximadamente 1:100) en un tubo un frasco pequeño. - Se usaron antibióticos de acuerdo con la cepa usada (para pQE30-KBD-B ampicilina 100 µg/ml) .
- La incubación se llevó a cabo a 250 rpm y 37 °C) . - El cultivo principal se inoculó aproximadamente 1:100 con el precultivo, cultivo principal: medio LB o el medio mínimo adecuado con los antibióticos respectivos. Incubación a 250 rpm y 37 °C. - La inducción se llevó a cabo con IPTG 1 mM por arriba de un OD(600nm) de 0.5. Después de la inducción por 4 h, las células se separaron por centrifugación. En los termentadores el procedimiento fue análogo, aunque fue posible llevar a cabo la inducción a unidades OD mucho mayores y por lo tanto aumentar considerablemente el rendimiento de células y proteína. Ejemplo 3: Expresión intracelular y secretoria de KBD por medio de cepas de Pichia pastoris usando promotores inducibles por metanol, por ejemplo, a través de plasmados de expresión pLib 15 y pLib 16 (frasco de agitación) Para la expresión de KBD, se usaron varias cepas de Pichia pastoris, tales como, por ejemplo, GS115 y KM17 (Paquete de Expresión en Pichia, Versión M; Invitrogen Life Technologies) . Aquí se describe- a manera de representación como un ejemplo - la expresión de KBD-B por P. pastoris transformada con pLibl5 (expresión intracelular, vector, véase la Figura 2)
o pLibl6 (expresión secretoria, vector, véase la Figura 3) . - Para la construcción del pLibl5, un fragmento de ADN que codifica a KBD-B (SEC ID NO. : 145) , 948 bp de tamaño, se amplificó por medio de PCR usando los oligonucleótidos Libl48 ( 5 ' -GCTAAGGAATTCACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3' (SEC ID No.: 147)) y Libl49 (5' -GCTGGAGAATTCTCAGCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3' (SEC ID No.: 148)), y el vector pQE30-KBD-B (Ejemplo 2, Fig. 1) como plantillas. Aquí, los sitios de restricción EcoRI se introdujeron como ambos extremos de los productos PCR. - Para la construcción de pLibl6, un fragmento de ADN que codifica KBD-b (SEC ID NO.:149), 942 bp de tamaño, se amplificó por medio de PCR usando los oligonucleótidos Libl49 (5?-GCTGGAGAATTCTCAGCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3' (SEC ID No.: 148)) y Libl50 (5 ' -GCTAAGGAATTCCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3' (SEC ID NO.: 151)) y el vector pQE30-KBD-B (Ejemplo 2, Figura 1) como plantillas. Aquí, los sitios de restricción EcoRI se introdujeron en ambos extremos de los productos PCR. - La PCR se llevó a cabo usando 50 µl de las mezclas de reacción las cuales tenían la siguiente composición: 1 µl de plásmido ADN pQE30 -KBD-B 1 µl de Mezcla de dNTP (10 mM cada uno; Eppendorf)
µl 10 x amortiguador de PCR MgCl2 (Roche) 1 µl del cebador 5' Libl48 o Libl50 (corresponde a 50 pmol) 1 µl del cebador 3' Libl49 (corresponde a 50 pmol) 5 U de Pwo polimerasa (Roche) Las reacciones de PCR se llevaron acabo bajo las siguientes condiciones del ciclo: Paso 1: 5 minutos a 95°C (desnaturalización) Paso 2: 45 segundos a 95°C Paso 3: 45 segundos a 50°C (hibridación) Paso 4: 2 minutos a 72 °C (alargamiento) 30 ciclos de los pasos 2-4 Paso 5: 10 minutos a 72 °C (post alargamiento) Paso 6: 4°C (pausa) - El producto PCR el cual se amplificó con los oligonucleótidos Libl48/Libl49 (SEC ID NO.:145) se digirió con EcoRI y se ligó en el vector cortado por EcoRI pPIC3.5 (Equipo de Expresión en Pichia, Versión M. Invitrogen) . La amplificación correcta de KBD se verificó por secuenciamiento del vector pLibl5 (Figura 2) resultante de la ligación. El producto PCR el cual se amplificó con los oligonucleótidos Libl49/Libl50 (SEC ID NO. : 149) se digirió con EcoRI y se ligo en el vector cortado por EcoRI pPIC9
(Equipo de Expresión en Pichia, Versión M, Invitrogen) . La amplificación correcta se verificó por el secuenciamiento del vector pLibld (Figura 3) resultante de la ligación. Células electrocompetentes y esferoplastos de las cepas de P. pastoris se transformaron con los vectores circulares y linearizados por Stul pLibl5 y pLibld de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Equipo de Expresión en
Pichia, Versión M, Invitrogen) - Los transformantes se analizaron por medio de PCR y Transferencia Western usando el ADN cromosómico. - Para el precultivo, los transformantes de P. Pastoris que expresan KBD-B se incubaron en placas o cultivos de glicerol. Dependiendo del tamaño del cultivo principal, la inoculación con medio MGY, BMG o BMGY, (Equipo de Expresión en Pichia, Versión M, Invitrogen) (aproximadamente (1:100) se llevó a cabo en un tubo o un frasco pequeño. - El cultivo se incubó a 250-300 rpm y 30°C hasta un OD60o=2-6. - Las células se cosecharon con 1500-3000xg por 5 min a la temperatura ambiente. - Para el cultivo principal, el aglomerado de células se reunió a un OD60o=l en medio mM, BMM o BMMY conteniendo metanol (Equipo de Expresión en Pichia, Versión M, Invitrogen) con el fin de inducir la expresión.
- El cultivo principal se incubó a 350-300 rpm y 30°C por 1-96 h. - La inducción se mantuvo cada 24 h añadiendo metanol al 100% a una concentración final de etanol de 0.5%. - En el caso de la expresión intracelular, la cosecha y la destrucción de las células se llevó a cabo al final del cultivo principal, por medio de un Menton-Gaulin. - En el caso de la expresión secretoria, el sobrenadante del cultivo se recolectó y el KBD-B se purificó directamente de este. - El KBD-B expresado intracelularmente en P. Pastoris (SEC ID NO. : 145) (pLibl5) incluía, además de la secuencia del polipéptido SEC ID NO.:4, adicionalmente, en la N-terminal, los aminoácidos MHHHHHH, y en la C-terminal, los aminoácidos GVDLOPSLIS. - El KBD-B expresado de manera secretoria en P. pastoris (SEC ID NO. : 149) (pLibld) incluía, antes del procesamiento, además de la secuencia del péptido SEC ID NO.: 4, adicionalmente en la N-terminal, los aminoácidos MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAOIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFS NSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAYVEFHHHHHH, y, en la C-terminal, los aminoácidos GVDLQPSLIS. El KBD-B procesado y secretado por medio de P. pastoris (SEC ID NO. : 149) (pLiblß) , incluía, además de la
secuencia del polipéptido SEC ID NO.:4, adicionalmente en la N-terminal, los aminoácidos YVEFHHHHHH, y en la C-terminal, los aminoácidos GVDLQPSLIS. Ejemplo 4: Expresión de KBD por medio de cepas de Aspergillus nidulans usando el promotor alCa inducible, por ejemplo, a través del plásmido de expresión pLib 19 (frasco de agitación) Para la expresión, se usaron cepas de A. nidulands del tipo silvestre, tales como, por ejemplo, RMS011 o SRF200. Aquí se describe - a manera de representación como un ejemplo - la expresión de KBD-B por A. nidulans, transformada con pLibl9 (Figura 4) . - Para la construcción del pLibl9, un fragmento de ADN que codifica KBD-B, de 922 bp de tamaño (SEC ID NO. : 152) se amplificó por medio de PCR usando los oligonucleótidos Libl51 (5'- CACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3' (SEO ID No.: 154)) y ( 5 ' -GCTAATTAAGCTTGGCTGCA- 3 ' (SEO ID No.: 155)) y el vector pQE30-KBD-B (Ejemplo 2, Figura 1) como plantilla (usando las condiciones de PCR citadas arriba, con la temperatura de hibridación del programa PCR de 53 °C siendo adaptada para los valores de tM de los cebadores Libl51 y Libl52) . El producto PCR se ligó en el vector penar/D (pENTR™ Direccional TOPO® Cloning Kit, Versión E,
Invitrogen) . La amplificación correcta de KBD-B se verificó por secuenciamiento. - La recombinación del fragmento de ADN que codifica el KBD-B se llevó a cabo dentro del vector pMT-OvE (Toews MW, Warmbold J, Konzack S, Rischitor P, Veith D, Vienken K, Vinuesa C, Wei H, Fischer R; Establishment of mRFPl as a fluorescent marker in Aspergillus nidulans and construction of expression vectors for high-throughput protein tagging using recombination in Vitro (GATEWAY). (2004) Curr Genet 45: 383-389) usando "la mezcla de enzimas Gateway LR clonase™" (Invitrogen) . Esto produjo el vector pLibl9 (Figura 4) . - Protoplastos de las cepas de A. nidulans del tipo silvestre con el vector circular pLibl9 (Yelton MM, Hamer JE, Timberlake WE; Transformation of Aspergillus nidulans by using a trpC plasmid., (1984) Proc Nati Acad Sci USA 81: 1479-1474). Los transformantes se analizaron por medio de PCR y transferencia Southern usando ADN cromosómico. Para el precultivo de los transformantes de A. nidulans que expresan KBD-B, 100 ml de medio mínimo (0.6% de NaN03; 0.152% de KH2P04; 0.052% de KCl [pH 6.5]; 0.8% de glucosa; 0.05% de MgS04; 1 ml de soluciones de elementos de traza [1 g/1 FeS04 x 7 H20; 8.8 g/1 de ZnS04 x 7 H20; 0.4 g/1 de CuS04 x 5 H20; 0.15 g/1 de MnS04 x 4 H20; 0.1 g/1 Na2B407 x 10 H20; 0,5 g/1 de (NH4) 6Mo7024 x 4 H20, + suplementos
específicos de la cepa) o 100 ml de medio completo (2% de extracto de malta; 0.1% de peptona; 2% de glucosa; + suplementos específicos de la cepa) se inocularon en matraces de 500 ml con 106-107 esporas y se incubaron por 16-24 h a 200-250 rpm y 37°C. después del procedimiento, el micelio fúngico se cosechó por filtración, se lavó con agua destilada y se transfirió a matraces con 100-500 ml de medio mínimo fresco. En este medio de cultivo principal, se uso 0.1% de fructosa en lugar de la glucosa como la fuente de C. para inducir la expresión del KBD, se agregaron adicionalmente al medio etanol
(concentración final de 1%) o glicerol (50 mM) o acetato de sodio (50 mM) o etilamina o treonina. El cultivo principal se incubó por otras 5-48 h a 200-250 rpm y 37 °C. - Después del final del cultivo, el micelio fúngico se cosechó con 1500-3000 x g por 5 min a la temperatura ambiente y se destruyó por medio de un Menton-Gaulin. - Además de la secuencia del péptido SEC ID NO.: 4, el KBD-B expresado en A. nidulans (SEC ID NO.: 152) (pLibl9) incluía, en la N-terminal, los aminoácidos MHHHHHH, y en la C-terminal, los aminoácidos
GVDLQPSL1SKGGRADPAFLYKWMIRLLTKPERKLLEGGPGTQLLFPLVRVNCALGVIMVI AVSCVKLLSAHNSTQHTSRKHKV . Ejemplo 5: Rompimiento de las células y purificación de
los cuerpos de inclusión (pQE30-KBD-B) . El KBD expresado de manera soluble podría ser usado directamente enseguida del rompimiento de las células (por ejemplo, por medio del Menton-Gaulin) o se purifican por medio de cromatografía (véase el Ejemplo 6) . El KBD expresado de manera insoluble (por ejemplo, en cuerpos de inclusión) se purificó como sigue: Los contenidos del fermentador se sometieron a centrifugación, el aglomerado se suspendió en amortiguador de forsfato 20 mM, pH=7.5, y se rompieron por medio de un Menton-Gaulin. - Las células rotas se sometieron a centrifugación otra vez (15 000 g) , el aglomerado de esto se trató con fosfato 20 mM, NaCl 500 mM y urea 8M y de esa manera se agitaron. (Disolución de los cuerpos de inclusión) - El pH del sobrenadante se ajustó a 7.5. - La centrifugación se llevó a cabo entonces otra vez y el sobrenadante se aplicó a una columna de Ni quelato Sefarosa y se purificó como se describe en el Ejemplo 6. Ejemplo 8: Purificación del dominio B de enlace a la queratina sobre Ni quelato Sefarosa. El KBD podría ser purificado cromatográficamente a través de una columna de Ni . Material de la columna: Ni-Sefarosa de Alta Resolución
Amersham Biosciences, Orden No. : 17-5268-02 El material se empacó en una columna (por ejemplo, diámetro 2.6 cm, altura 10 cm) y se equilibró con amortiguador A + 4% de amortiguador B (corresponde a imidazol 20 mM) . El extracto de proteína (véase, por ejemplo, rompimiento de las células y purificación de los cuerpos de inclusión) se aplicó a la columna a pH 7.5 usando un Superloop (sistema ÁKTA) (flujo, aproximadamente 5/ ml/min) . Enseguida de la aplicación, se llevó a cabo el lavado con amortiguador A + imidazol 20 mM. La elusión se llevó a cabo con amortiguador B (imidazol 500 mM en el amortiguador A) . El eluido se recolectó en fracciones usando un recolector de fracciones. El eluido se liberó entonces de la sal (ventajoso para las muestras las cuales deben ser concentradas) . Para eswto, el eluido se liberó de la sal, por ejemplo, a través de una columna de medio Sephadex G25 (Amersham) . Entonces, para la concentración, por ejemplo, se podría usar una cámara Amicon (celda de ultrafiltración agitada) . Amortiguador A: dihidrogenofosfato de sodio 20 mM Nací 500 nM (si se desea, también es posible usar amortiguador con concentraciones bajas de
NaCl) Urea 8 M (la urea no necesita ser usada si se somete a cromatografía el KBD "activo" el cual ya ha sido expresado de manera soluble. Son urea, no se requiere desnaturalización subsecuente de la proteína) . pH = 7.50 Amortiguador B: dihidrogenofosfato de sodio 20 mM Nací 500 mM (si se desea, también es posible usar amortiguador con concentraciones bajas de NaCl) Urea 8 M Imidazol 500 mM PH = 7.50 Ejemplo 7: Renaturalización del dominio B de enlace a la queratina. El dominio de enlace a la queratina expresado de manera insoluble (por ejemplo, de los cuerpos de inclusión) puede ser renaturalizado y por lo tanto activado como sigue: Método 1: Diálisis continua 6.5 ml de IB Celitico (Sigma, No. De orden C5236) y DTT 5 mM se añadieron a 6.5 ml de cuerpos de inclusión de KBD-B en urea 8 M (eluido de quelato de Ni, HiTrap) . La solución a ser renaturalizada se vertió entonces en un tubo de diálisis
(Espectro: Espectro Por MWCO: 12-14 kD) . Se llevó a cabo la diálisis pore aproximadamente 12 horas contra ÍL de solución de urea 6 M a 4°C con agitación cuidadosa . 500 ml de Tris/HCl 25 mM, pH = 7.50 se añadió y la diálisis se llevó a cabo de esta manera durante 9 horas a 4aC. Adición subsecuente de otros 250 ml del amortiguador de Tris (véase arriba) y la diálisis por otras 12 horas. 500 ml de Tris/HCL 25 mM se añadieron entonces otra vez y la diálisis se llevó a cabo de esta manera por 9 horas a 4°C. Adición subsecuente de otros 250 ml del amortiguador de Tris (véase arriba) y diálisis por otras 12 horas. 500 ml de Tris/HCl 25 mM, pH =7.50, se agregaron entonces y la diálisis se llevó a cabo de esta manera por 9 horas a 4°C. El tubo de diálisis conteniendo el dializado se colocó entonces en 2L: Tris 25 mM + nací 150 mM, pH=7.50. La diálisis se llevo a cabo entonces, otra vez a 4°C por 12 horas . Los contenidos del tubo de diálisis se extrajeron entonces. Método 2 : Diálisis continua 20 ml de cuerpos de inclusión de KBD-B en urea 8 (eluido de quelato de Ni, HiTrap) se trataron con 10 ml de IB Celitico (Sigma, No. De Orden C5336) y DTT 5 mM. La solución
se vertió entonces en una cámara de diálisis: Cartucho de diálisis Slide-A-lyzer, PIERCE, MWCO : 10 kD . No. De Orden 66830. La diálisis se llevó a cabo entonces por aproximadamente 1 hora contra ÍL de solución de urea 6M a 4°C. Después, durante un periodo de 48 H, a l del siguiente amortiguador se introdujeron continuamente por medio de una bomba peristáltica; Tris 25 mM/HCl, pH= 7.5. El tubo de diálisis conteniendo el dializado se agregó entonces a 2 1 del amortiguador final: Tris 25 mM + NaCl 150 mM, pH= 7.50, y la diálisis se llevó a cabo por aproximadamente 12 horas a 4°C. Los contenidos del tubo de diálisis se extrajeron entonces . Ejemplo 8: Enlazamiento a la piel 1 (cualitativo) Se desarrolló una prueba cualitativa visual con el fin de examinar si el KBD se enlaza a la piel. Soluciones usadas: Solución de bloqueo: Lavado DIG + Bufferset 1585762 Boehringer MA (solución 10X) diluida en YBS . TBS: Tris 20 mM, NaCl 150 mM, pH = 7.5 TTBS: TBS + 0.05% de Tween 20 El primer paso es la transferencia de la capa externa de queratina de la piel a un soporte estable. Para este
propósito, una cinta transparente adhesiva se aplica firmemente a la piel humana depilada y se retira otra vez. La prueba se puede llevar a cabo directamente sobre la tira adhesiva transparente, o la capa de queratina adherente puede ser transferida a un portaobjetos de vidrio a través de una adhesión renovada. La adhesión se demostró como sigue: Para la incubación con los varios reactivos, transferencia a un recipiente de Falcon - Si es apropiado, adición de etanol para el desengrase, extracción del etanol y secado del portaobjetos - Incubación con amortiguador de bloqueo por 1 h a la temperatura ambiente - 2 lavados por 5 minutos con TTBS - 1 lavado por 5 minutos con TBS - Incubación con el KBD a ser evaluado (acoplado a una etiqueta, por ejemplo, His6 HA, etc.) o la proteína de control en TBS/0.05% de Tween 20 por 2-4 h a la temperatura ambiente - Extracción del sobrenadante - 3 lavados con TBS - Incubación por 1 h a la temperatura ambiente con anticuerpos anti-polihistidina monoclonales (o de conejo específicos del kdb) , diluidos 1:2000 en TBS"0.01% de bloqueador - 2 lavados por 5 min con TTBS
- 1 lavado por 5 min con TBS Incubación por 1 h a la temperatura ambiente con conjugado fosfatasa alcalina IgG anti ratón, diluido 1:4000 en TBS + 0.01% de bloqueador - 2 lavados por 5 min con TTBS - 1 lavado por 5 min con TBS Adición de substrato de fosfatasa (NBT-BCIP, Boehringer MA 1 tableta/40 ml de agua, 2.5 min; detención: con agua) - Detección óptica del precipitado coloreado con a simple vista o usando un microscopio. Un precipitado color azul indica que el KBD se a adherido a la piel. Ejemplo 9: Adhesión a la piel 2 (cuantitativo) Se desarrolló una prueba cuantitativa con la cual se puede comparar la fuerza de la adhesión al cabello/piel del KBD, con las proteínas no especificas. Un perforador de corchos se usó para perforar una sección de una pieza seca congelada de la piel sin cabello (humana o de cerdo) (o en el caso de una prueba superficial, una sección se inserta en una tapa Falcon) . La muestra de piel se convirtió entonces a un espesor de 2-3 m con el fin de eliminar todo el tejido presente. La muestra de piel se transfirió entonces a un recipiente Eppendorf (enlace bajo en proteína) con el fin de llevar a cabo la demostración de
adhesión (véase también la Figura 6; alternativamente, también se puede usar el sistema Episkin [piel humana reconstituida] de L'Oreal) : - 2 lavados con PBS/0.05% de Tween 20 - Adición de 1 ml de BSA al 1% en PBS e incubación por 1 h a la temperatura ambiente, movimientos oscilantes suaves (900 rpm) . - Extracción del sobrenadante - Adición de 100 µg de KBD en PBS con 0.05% de Tween 20; incubación por 3 h a la temperatura ambiente y movimientos oscilantes suaves (900 rpm) . - Extracción del sobrenadante - 3 lavados con PBS/0.05% de Tween 20 - Incubación con 1 ml de anticuerpos anti -etiqueta de ratón monoclonal (His6 o HA específicos del KBD) con conjugado de peroxidasa (1:2000 en PBS con 0.05% de Tween 20) [Conjugado de AntipoliHistidina Peroxidasa Monoclonal, producido en ratones, polvo liofilizado, sigma] por 2-4 h a la temperatura ambiente, movimientos oscilantes suaves (900 rpm) - 3 lavados con PBS/0.05% de Tween 20 - Adición de substrato de peroxidasa (1 ml/recipiente Eppendorf; composiciones, véase abajo) - Permitir que la reacción continúe hasta una coloración
azul (aproximadamente 90 segundos) . - Detener la reacción con 100 µl de H2S04 2 M. - La absorción se midió a 405 nm. Substrato de peroxidasa (preparar poco antes del uso) : 0.1 ml de solución de TMB (TMB 42 mM en DMSO) + 10 ml de amortiguador de substrato (acetato de sodio 0.1 M pH 4.9) + 14.7 µl de H202 con 3% de fuerza Ejemplo 10: Adhesión al cabello (cuantitativo) Con el fin de poder demostrar la fuerza de la adhesión del KBD al cabello, también con relación a otras proteínas, se desarrollo un ensayo cuantitativo (véase también la Figura 6) .
En esta prueba, el cabello se incubó primero con el KBD y el exceso de KBD de quitó por lavado. Un conjugado de anticuerpo-peroxidasa se acopló entonces vía la etiqueta His del KBD. El conjugado anticuerpo-peroxidasa no enlazado se eliminó por lavado otra vez. El conjugado de anticuerpo-peroxidasa enlazado ( [Conjugado de AntipoliHistidina Peroxidasa
Monoclonal, producido en ratones, polvo liofilizado, Sigma] puede convertir un substrato incoloro (TMB) en un producto coloreado, el cual puede ser medido fotométricamente a 405 nm.
La intensidad de la absorción indica la cantidad de KBD enlazado, o de la proteína de comparación. La proteína de
comparación elegida fue, por ejemplo, YaaD de B. subtilis, la cual igualmente tenia - según fue necesario para esta prueba -una etiqueta His para la detección. En lugar de la etiqueta His, también se pueden usar otros anticuerpos específicos conjugados con peroxidasa. 5 mg de cabello (humano) se cortan en sección de 5 mm de longitud y se transfieren a recipientes Eppendorf (enlace bajo de proteína) con el fin de llevar a cabo la demostración de adhesión: - Adición de 1 ml de etanol para el desgrase - Centrifugación del etanol y lavado del cabello con H20
- Adición de 1 ml de BSA al 1% en PBS e incubación por 1 h a la temperatura ambiente, movimientos oscilatorios suaves - Centrifugación, extracción del sobrenadante - Adición de los dominios de enlace a la queratina a ser avaluados (acoplados a la etiqueta - por ejemplo, His6, HA, etc.) o la proteína de control en 1 ml de PBS/0.05% de Tween 20 por 16 h a 4°C (o al menos 2 h a la temperatura ambiente) con movimientos oscilantes suaves. - Centrifugación, extracción del sobrenadante - 3 lavados con PBS/0.05% de Tween 20 Incubación con anticuerpos anti etiqueta de ratón monoclonales (His6 o HA) con conjugado de peroxidasa (1:2000 en PBS/0.05% de Tween 20) [Conjugado de de AntipolyHistidina
Peroxidasa Monoclonal, producido en ratones, polvo liofilizado, Sigma) por 2-4 h a la temperatura ambiente, movimientos oscilantes suaves. - 3 lavados con PBS/0.05% de Tween 20 - Adición de substrato de peroxidasa (1 ml/recipiente Eppendorf) - Permitir que la reacción proceda hasta una coloración azul (aproximadamente 2 minutos) . - Detener la reacción con 100 µl de H2S04 2 M. - La absorción se mide a 405 nm. Substrato de peroxidasa (preparar poco antes de su uso) :
0.1 ml de solución de TMB (TMB 42 mM en DMSO) + 10 ml de amortiguador de substrato (acetato de sodio
0.1 M, pH 4.9) + 1.47 µl de H202 3% de fuerza BSA = Albúmina de suero de bovino PBS = Solución salina amortiguada con fosfato Tween 20 = Polioxietilen sorbitan monolaureato, n aproximadamente 20 TMB = 3, 5, 3' , 5' -tetrametilbencidina Una prueba de adhesión sobre el cabello llevada a cabo a manera de ejemplo para el KBD-B demostró una superioridad considerable de la adhesión del KBD-B (SEC ID NO. : 166) al
cabello en comparación con la adhesión significativamente más pobre de la proteína de comparación YaaD :
Tabla 9. prueba cuantitativa de actividad del KBD: 1) amortiguador; 2) proteína de comparación YaaD; 3) KBD desnaturalizado; 4) KBD-B renaturalizado. La tabla muestra los valores de absorción medidos a 405 nm. Ejemplo 11: Expresión de KBD-D (SEC ID NO.: 167) por medio de cepas de Escherichia coli usando el plásmido de expresión pRee024 con un promotor inducible por IPTG (Figura 7) Para la expresión, se usó la cepa de E. coli XLIO-Gold [Stratagene] . Aquí se describe, a manera de representación como un ejemplo, la clonación del KBD-D (SEC ID NO. : 167) y la expresión subsecuente de la proteína KBD-B (SEC ID NO. : 168) en E. coli, transformada con pRee024 (Figura 7) : Clonación de pRee024 : - Lambda-MaxiDNA (Equipo DNA-Lambda Maxi , Quiagen) se preparó a partir de un banco de ADNc de queratinocitos humanos (BD Bioscience, Clontech, ADNc de queratinocitos humanos, foresquina, cultivo primario en fase logarítmica, vector: ?gtll) La PCR para la amplificación del gen KBD-B se llevó a
cabo en dos pasos. Primero, se amplificaron independientemente el extremo 5' y 3' . Estos fragmentos fueron la matriz para la amplificación del gen KBD-D completo. La PCR para la amplificación del extremo 5' se llevó a cabo como sigue: Los cebadores tuvieron la siguiente secuencia: HRe6: 5' -ATGAACCACTCGCCGCTCAAGACCGCCTTG-3' (SEC ID No.: 171) HRe9: 5 ' -CGTTCCCGGTTCTCCTCAGGAGGCTGACTG-3 ' (SEC ID No.: 172) 100 µl de mezcla de PCR: lOx amortiguador de PCR Pfu de Ultra Alta Fidelidad: 10 µl ADN Lambda (744 ng/µl) 1 µl (dilución 1:10)
Mezcla de dNTP (10 mM) 10 µl HRe6 (196 ng/µl) 1 µl HRe9 (201 ng/µl) 1 µl Polimerasa de Ultra alta Fidelidad de Pfu 1 µl H20 bidestilada 76 µl
- Un fragmento de aproximadamente 1 kb de tamaño se detectó en el gel de agarosa. La reacción se purificó y se usó
como la plantilla del extremo 5' para la amplificación del gen KBD-b La PCR para la amplificación del extremo 3' se llevó a cabo como sigue: Los cebadores tenían la siguiente secuencia: HRe7: 5' -TTAGAATCGGGAGGTGAAGTTCCTGAGGCT-3' (SEC ID No.: 173) HRe8: 5' -CACCACCAACAAGCTGGAGACCCGGAG-3' (SEC ID No . : 174) 100 µl de mezcla de PCR: lOx amortiguador de PCR Pfu de Ultra Alta Fidelidad: 10 µl ADN Lambda (744 ng/µl) 1 µl (dilución 1:10) Mezcla de dNTP (10 mM) 10 µl HRe7 (201 ng/µl) 1 µl HRe8 (109 ng/µl) 1 µl Polimerasa de Ultra Alta Fidelidad Pfu 1 µl H20 bidestilada 76 µl Programa de Temperatura:
- Un fragmento de aproximadamente 1.2 kb de tamaño se detectó en el gel de agarosa. La reacción se purificó y se uso abajo como la plantilla del extremo 3' para la amplificación
del gen KBD-B. - Para la amplificación del gen KBD-D, la plantilla del extremo 5' y la plantilla del extremo 3' se usaron como matriz. La PCR se llevó a cabo como sigue: 100 µl de mezcla de PCR lOx amortiguador de PCR de Ultra Alta Fidelidad Pfu: 10 µl Mezcla de dNTP (10 mM) 10 µl H20 bidestilada 75 µl Plantilla del extremo 5' 1 µl Plantilla del extremo 3' 1 µl Polimerasa de Ultra Alta Fidelidad Pfu 1 µl H20 76 µl Programa de temperatura:
Después de los 10 ciclos, se añadieron 1 µl de cebador HRe6 (196 µg/ml) y HRe7 (206 µg/ml) y 1 µl de Polimerasa de Ultra Alta Fidelidad Pfu y se llevó a cabo el siguiente programa de temperatura con la reacción:
Después, se añadió 1 µl de Taq polimerasa y la mezcla se incubó por 10 minutos a 72 °C. - El producto PCR resultante de aproximadamente 2150 bp de tamaño se cortó de un gel de agarosa, se purificó y se clonó en el siguiente vector pCR2.1-TOPO (Invitrogen). - El vector resultante pRee019 (6112 bp) se transformó entonces, se amplificó en E. coli y el gen KBD-D se verificó por secuenciamiento. Subsecuentemente, el gen KBD-D se clonó en el vector de expresión. Para esto, se llevó a cabo una PCR adicional con el vector pRee019 como plantilla: Oligonucleótidos usados: HRe26: 5' -CTCGGTACCAACCACTCGCCGCTCAAGACCGCCTTGGCG-3 ' (SEC ID No.: 175) HRe27: 5' -ATTAAGCTTTTAGAATCGGGAGGTGAAGTTCCTGAGGCT-3 ' (SEC ID No. : 176) 100 µl de mezcla de PCR: lOx amortiguador PCR de Ultra Alta Fidelidad Pfu 10 µl
pRee019 (25 ng/µl) 1 µl Mezcla de dNTP (10 mM) 10 µl HRe26 (287 ng/µl) 1 µl HRe27 (354 ng/µl) 1 µl Polimerasa de Ultra Alta Fidelidad Pfu 1 µl H20 bidestilada 76 µl Programa de temperatura :
- Un fragmento de aproximadamente 2.2 kb de tamaño se detectó en el gel de agarosa. La reacción se purificó y después se cortó con las endonucleasas de restricción Kpnl y HindIII; el fragmento resultante se clonó en el vector de expresión. Esto dio el vector pRee024, el cual se usó subsecuentemente para la expresión de KBD-D. Expresión de KBD-B (SEC ID NO.: 167) por pRee024 en E. coli - Los precultivos se inocularon del cultivo de placa o de glicerol con cepas de E. coli transformadas con pRee024 (por ejemplo TG10) . Dependiendo del tamaño del cultivo principal,
la se llevó a cabo la inoculación con medio LB (aproximadamente 1:100) en un tubo o en un matraz pequeño. - Los antibióticos se usaron de acuerdo con la cepa usada (para E. coli transformada con pRee024 TG10, 100 µg/ml de ampicilina) . - La incubación se llevó a cabo a 250 rpm y 37°c. - El cultivo principal se inoculó aproximadamente 1:100 con el precultivo, cultivo principal: medio LB o medio mínimo adecuado con los antibióticos respectivos. Incubación a 250 rpm y 37°C. - La inducción se llevó a cabo con IPTG 1 mM arriba de un OD578nm de 1. La temperatura de incubación se bajó entonces a la temperatura ambiente (aproximadamente 20 °C) . Las células se separaron por centrifugación 2 horas antes de la inducción (véase la Figura 7) . Ejemplo 12: Rompimiento de las células y purificación de los cuerpos de inclusión (pRee024) El KBD-B (SEC ID NO . : 168) expresado de manera insoluble (por ejemplo, en cuerpos de inclusión) se purificó como sigue: El sedimento de células del Ejemplo 2 se resuspendió en amortiguador de fosfato 20 mM con NaCl 100 mM, pH=7.5 y se rompieron por tratamiento ultrasónico. Las células rotas se sometieron a centrifugación otra vez
(4°C, 12 000 g, 20 minutos) . El sobrenadante se desechó. El sedimento se disolvió en amortiguador A (10 NaH2P04 10 mM,
KH2P04 2 mM, NaCl 100 mM, urea 8 M, DTT 5 mM) . La mezcla se sometió a centrifugación entonces otra vez y el sobrenadante se aplicó a una Sefarosa de quelato de Ni. Enseguida de la aplicación, se llevó a cabo el lavado con el amortiguador B
(NaH2P04 10 mM, KH2P04 2 mM, NaCl 100 mM, urea 8 M, DTT 5 mM, imidazol 500 mM) . El eluido se recolectó y se analizó por medio de SDS-PAGE. Las fracciones, las cuales comprendían el KBD-D purificado se renaturalizaron como se describe en el
Ejemplo 13. Ejemplo 13: Renaturalización del dominio D de enlace a la queratina (SEC ID NO.: 168) El dominio D de enlace a la queratina expresado de manera insoluble (por ejemplo, de los cuerpos de inclusión) podría ser renaturalizado por diálisis y por lo tanto activado. El procedimiento fue como sigue: Las fracciones del ejemplo 12, las cuales comprendían el KBD-D purificado se vertieron en un tubo de diálisis (MWCO 2-14KD) . La diálisis se llevó a cabo entonces por aproximadamente 1 hora contra 1 1 de solución de urea 8 M. Después, durante un periodo de 12 horas, 2 1 de agua desionizada se introdujeron continuamente por medio de una
bomba peristáltica. Los contenidos del tubo de diálisis se extrajeron entonces. El KBD-D activado de esta manera se usó para la siguiente prueba de actividad. Ejemplo 14: Adherencia cualitativa a la piel Se usó una prueba cualitativa visual con el fin de examinar si el KBD-D (SEC ID NO.: 168) se adhiere a la piel. Soluciones usadas: Solución de bloqueo: Reactivo de Transferencia Western 1922673 Roche (solución lOx) diluido con TBS TBS: 20 Tris 20 mM; NaCl 150 mM, pH 7.5 TTBS: TBS + 0.05% de Tween 20 El primer paso es la transferencia de la capa externa de queratina de la piel a un soporte estable. Para este propósito, una cinta adhesiva transparente se aplicó firmemente a la piel humana depilada y se removió otras vez. La prueba se puede llevar a cabo directamente sobre la tira adhesiva transparente, o la capa de queratina adherida se puede transfirió a un portaobjetos de vidrio a través de la adhesión renovada. La adhesión se demostró como sigue: para la incubación con los varios reactivos, transferencia a un recipiente Falcon Si es apropiado, adición de etanol para desengrasar, extracción del etanol y secado de los portaobjetos
- Incubación con el amortiguador de bloqueo por 1 h a la temperatura ambiente - 2 lavados por 5 min con TTBS - 1 lavado por 5 min con TBS - incubación con el KBD a ser evaluado (acoplado a una etiqueta- por ejemplo, His6, HA, etc.) en TBS/0.05% de Tween 20 por 2-4h a la temperatura ambiente - extracción del sobrenadante - 3x lavados con TBS - incubación por lh a la temperatura ambiente con anticuerpos anti-etiqueta de ratón monoclonales con conjugado de peroxidasa (1:2000 en TBS + 0.01% de bloqueador) [conjugado de peroxidasa antipolihistidina monoclonal, producido en ratones, polvo liofilizado, Sigma] - 2x lavados por 5 min con TTBS - lx lavado por 5 min con TBS - adición de substrato de fosfatasa (NBT-BCIP; Boehringer MA 1 tableta/40 ml de agua, 2.5 min; detención: con agua) - - detección óptica del precipitado coloreado a simple vista o usando un microscopio. Un precipitado de color azul, que es una reacción del conjugado antipolihistidina-AP que interactúa con el KBD-D, fue visible sobre la cinta adhesiva transparente tratada con KBD-D. Como control negativo, una cinta adhesiva transparente
fue tratada solo con el amortiguador. So se podía ver ninguna coloración azul significativa ahí. Estos resultados muestran que el KBD-D se había adherido a la queratina de la piel sobre la cinta adhesiva transparente. Ejemplo 15: Adhesión cualitativa a la piel y el cabello Con el fin de investigar la fuerza de la adhesión del KBD-D (SEC ID NO.: 168) a la piel y el cabello en comparación con el KBD-B (SEC ID NO. : 166) , se llevó a cabo una prueba cuantitativa. En esta prueba, primero se incubó cabello con el KBD-B o el KBD-D y el KBD-B o el KBD-D en exceso se eliminaron con lavado. Un conjugado de anticuerpo-peroxidasa se acopló entonces vía la etiqueta His del KBD-B o -D. el conjugado de anticuerpo-peroxidasa no enlazado se eliminó por lavado otra vez. El conjugado de anticuerpo-peroxidasa enlazado puede convertir un substrato incoloro (TMB) en un producto coloreado, el cual se midió fotométricamente a 405 nm. La intensidad de la absorción indica la cantidad de KBD-B o -D enlazado. La prueba para la adhesión a la piel se llevó a cabo con queratinocitos humanos en placas de microtitulación como sigue . - 2x lavados con PBS/0.05% de Tween 20 - adición de 1 ml de BSA al 1% en PBS e incubación por 1 h a la temperatura ambiente, movimientos oscilantes suaves
(900 rpm) . - extracción del sobrenadante - adición de 100 µg de KBD en PBS con 0.05% de Tween 20; incubación por 2 h a la temperatura ambiente y movimientos oscilantes suaves (900 rpm) . - extracción del sobrenadante - 3x lavados con PBS/0.05% de Tween 20 - incubación con 1 ml de anticuerpos anti etiqueta Hisd de ratón monoclonal por 2-4 h a la temperatura ambiente, movimiento oscilante suave (900 rpm) - 3x lavados con PBS/0.05% de Tween 20 adición de substrato de peroxidasa (1 ml/recipiente Eppendorf; véase abajo la composición) Reacción hasta una coloración azul (aproximadamente 90 segundos) . - la reacción se detiene con 100 µl de H2S04 2 M. - la absorción se midió a 405 nm. Substrato de peroxidasa (preparado poco antes de su uso) 0.1 ml de solución de TMB (TMB 42 mM en DMSO) + 10 ml de amortiguador de substrato (acetato de sodio 0.1 M, pH 4.9) + 14.7 µl de H202 3% de fuerza Con el fin de caracterizar la adhesión al cabello del
KBD-D en comparación el KBD-B, se llevó a cabo el siguiente ensayo : 5 ml de cabello (humano) se cortaron en secciones de 5 mm de longitud y se transfirieron a recipientes Eppendorf (enlace bajo de proteína) . - adición de 1 ml de etanol para desengrasar centrifugación, extracción del etanol y lavado del cabello con H20 - centrifugación, extracción del sobrenadante - adición e dominio de enlace a la queratina a ser evaluado (acoplado a una etiqueta - por ejemplo, His6, HA, etc.) en 1 ml de PBS/0.05% de Tween 20; incubación por 2 h a la temperatura ambiente con movimientos oscilantes suaves - centrifugación, extracción del sobrenadante - 3x lavados con PBS/0.05% de Tween 20 - incubación con 1 ml de anticuerpos anti etiqueta (His6 o HA) de ratón monoclonal con conjugado de peroxidasa (1:2000 en PBS/0.05% de Tween 20 [Conjugado de Peroxidasa AntipoliHistidina monoclonal, producido en ratones, polvo liofilizado, Sigma] por 2-4 h a la temperatura ambiente, movimiento oscilante suave - 3x lavados con PBS/0.05% Tween 20 - adición de substrato de peroxidasa (1 ml/recipiente Eppendorf)
- permitir que la reacción proceda hasta la coloración azul (90 segundos) - detener la reacción con 100 µl de H2S04 2M. La absorción se midió a 405 nm Substrato de peroxidasa (preparado poco antes de su uso) :
0.1 ml de solución de TMB (TMB 42 mM en DMSO) + 10 ml de amortiguador de substrato (acetato de sodio
0.1 M pH 4.9) + 14.7 µl de H202 con 3% de fuerza BSA = Albúmina de suero de bovino PBS = Solución salina amortiguada con fosfato Tween 20 = Polioxietilen sorbitan monolaureato, n aproximadamente 20 TMB = 3, 5, 3 ' , 5' -tetrametilbencidina
Dominio de enlace a la queratina Absorción a 405 nm KBD-D a la piel 3 $9 KBD-D a la piel después del tratamiento de SDS con 10% de fuerza 3.15 KBD-B a la piel 0.93 KBD-B a la piel después del tratamiento con SDS con 10% de fuerza 0.185 Tab- 0a, Enlace Cuantitativo de KBD-D o KBD-B a la piel. Los valores de absorción listados son los valores estandarizados para la superficie (de la piel o el cabello)
Dominio de enlace a la queratina Absorción a 405 nm KBD-D al cabello 0M KBD-D al cabello después del tratamiento con SDS de 10% de fuerza 0.62 Tabla 10b. Adhesión cuantitativa del KBD-D al cabello. Los valores de absorción listados son los valores estandarizados para la superficie
Pérdida de absorción _ . . . , , .. rreellaattiivvaa ddeessppuuéés del Dominio de enlace a la queratma ttrraattaammiieennttoo ccoonn SDS de 10% de fuerza KBD-D a la piel después del tratamiento con SDS de 15 10% de fuerza KBD-B a la piel después del tratamiento de SDS con 80 10% de fuerza KBD-D al cabello después del tratamiento con SDS de 30 10% de fuerza KBD-B al cabello después del tratamiento de SDS con 86 10% de fuerza Tab. 10c, Enlace Cuantitativo de KBD-D y KBD-B a la piel y el cabello después del tratamiento con SDS de 10% de fuerza en % con relación al cabello o la piel no tratados con KBD-D y KBD-B
Estos resultados muestran que la proteína KBD-D puede adherirse al cabello y más fuertemente a la piel (véase la Tab. 10). En contraste con el KBD-B (SEC ID NO.:166), la adhesión del KBD-D (SEC ID NO. : 168) está influenciada solo más débilmente por un . lavado con una solución de SDS de hasta 10% de fuerza (véase Tab. 10a) . Ejemplo 16: Síntesis de los meleimidoalcanoles Se describe la síntesis de 2-hidroxietilmaleimida y otras maleimidas bifuncionales, por ejemplo, en U. Bayer et al., Monatshefte f. Chemie 128 (1997), 91-102. La síntesis de 2-aminoetilmaleimida se describe, por ejemplo, en Y. Araño et al., J. Med. Chem. 1996, 39 3451-3460. Los métodos de síntesis descritos se pueden trasferir de manera análoga a otras maleimidas. Por consiguiente. El maleimidopentanol se preparó de acuerdo con el siguiente
procedimiento : Síntesis de maleimido-N-pentanol Una solución de 50 g de anhídrido maléico en 75 ml de THF se agregó gota a gota con enfriamiento a RT durante 30 min a 41 g de aminopentanol en 75 ml de THF. Cuando se completó la adición gota a gota, la cristalización comenzó espontáneamente. La suspensión de se enfrió a 2°C y los cristales resultantes se separaron por filtración con succión, se lavaron con una pequeña cantidad de THF y se secaron durante toda la noche en una cabina de secado al vacío. Se obtuvieron 78.6 g de cristales blancos. Cristalización para dar maleimido-N-pentanol 7.2 g de Na2S04 (anhidro) se agregaron a 5.5 g de ácido maleado monoamido-N-pentanol en 600 ml de tolueno, y la suspensión resultante se calentó a reflujo por 6 h. La solución transparente se separó por decantación del residuo aceitoso-viscoso amarillento y el solvente se extrajo en el evaporador rotatorio. El residuo se distribuyó entre 50 ml de cada uno de acetato de etilo y agua y el pH de la fase acuosa se ajustó a 1 usando HCl 2N. La fase acuosa se lavó dos veces adicionales en cada caso con 50 ml de acetato de etilo, y todas las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2S0 y el solvente se separó por destilación en un evaporador rotatorio. Se obtuvo 1 g del producto como un aceite
amarillento . Ejemplo 17. Acoplamiento del ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2 -hidroxibenzoilbenzoico con maleimido-N-pentanol A 0°C, 1.65 g de ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoilbenzoico y 0.22 g de N,N-dimetilaminopiridina y 1.05 g de EDC en 10 ml de cloruro de metileno se agregaron a 1 g de maleimidopentanol (II) en 20 ml de cloruro de metileno, y la suspensión resultante se agitó entonces por 1 h a 0°C y por 3 h a la TA. La mezcla de reacción se lavó con 2x 20 ml de HCl 2N y con 2x 20 ml de agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio y el solvente se separó por destilación en un evaporador rotatorio, se obtuvieron 2.8 g de un aceite pegajoso café. Para la purificación, el residuo se colocó en una pequeña cantidad de acetato de etilo y se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (ciciohexano : acetato de etilo 1:1) . Se obtuvieron 1.4 g del producto como un aceite amarillo con un valor RF de 0.36. Ejemplo 18: Acoplamiento de cloruro de estearilo en el maleimidoetanol A la TA, 0.75 g de trietanolamina y 1-12 g de cloruro de estearilo se agregaron a 0.53 g de maleimido-N-etanol en 50 ml de cloruro de metileno y la mezcla se agitó por 12 h a la TA.
La solución resultante se lavó con 2x 25 ml de HCl ÍN y lx 25 ml de agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio y el solvente se separó por destilación en un evaporador rotatorio; se obtuvieron 1.13 g de un sólido cristalino blanco amarillento. Las enlazadoras efectoras listadas en la Tabla 11 a continuación se pueden preparar de acuerdo con los Ejemplos 16 y 18. Todas las otras moléculas enlazadoras de acuerdo con las formulas lb y lc descritas en esta solicitud también pueden ser usadas naturalmente en lugar de ácido maleimidocaproico.
Tabla 11 Las moléculas enlazadoras efectoras listadas en la tabla lia de abajo se pueden preparar de acuerdo con los ejemplos 16 y 18. Todas las otras moléculas enlazadoras de acuerdo con las fórmulas lb y lc descritas en esta solicitud naturalmente también se pueden usar en lugar del maleinimidoalcanol .
Tabla 11
Ejemplo 19: Acoplamiento del ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico en un polipéptido de enlace a la queratina Para el acoplamiento del ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2 -hidroxibenzoil) benzoico (Uvinil A Plus) usando maleimido-N-pentanol, se usaron las cisteínas en el KBD-B (SEC ID NO.:166). Por lo tanto, el KBD-B (SEC ID NO.: 166) tiene cuatro cisteínas. De estas, dos cisteínas están en el lado de la estructura y no son accesibles para el acoplamiento de un efector (identificables por análisis de la estructura cristalina. Las dos cisteínas restantes cercanas a la N-terminal (posiciones de aminoácidos 14 y 83; véase la secuencia KBD-B (SEC ID NO.:166) están sobre la superficie de la proteína y son accesibles para aun acoplamiento efector. El ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico-maleimido-N-pentanol acoplable, se acopló sobre el KBD-B (SEC ID NO. : 166) vía al menos uno de los dos grupos Sh libres de una cisteína. Esto lleva a un ataque nucleofilico de la cisteína sobre el enlace doble del maleimido-N-pentanol. El siguiente método de acoplamiento eficiente ha sido establecido: cantidades de una solución de 17 mg/ml de ácido 2 - (4-N,N-dietilamino-2 -hidroxibenzoil ) benzoico-maleimido-N-pentanol en etanol se añadieron a 1-10 mg/ml de solución de KBD-B (SEC ID NO. : 166) (preferiblemente 1 mg/ml de KBD-B) en
amortiguador de fosfato (pH 7.4) de tal manera que la relación molar del KBD-B:2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico-maleimido-N-pentanol fue de aproximadamente 1:1 a 1:2. La mezcla se agito entonces cuidadosamente por 1 h a la temperatura ambiente. El producto de la reacción también se denomina abajo como KBD-B-Uvinul A Plus El éxito del acoplamiento efector se pude monitorear por tres pruebas diferentes: (iii) prueba de Ellman en la cual se puede determinar el número de grupos Cys-SH libres en la proteína antes y después del acoplamiento efector. Aquí, una reducción considerable en los grupos SH libres después del acoplamiento indica un buen progreso de la reacción (véase el Ejemplo 22) (iv) Prueba de actividad en la cual se puede medir el enlace del KBD-B con y sin el ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoilbenzoico al cabello. Un buen procedimiento de reacción no debería reducir la actividad del KBD-maleimido-N-pentanol -ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico, en comparación con el KBD no acoplado (véase el Ejemplo 21) (v) corrida FPLC y espectro de absorción de soluciones de KBD-B-KBD-maleimido-N-pentanol-ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2 -hidroxibenzoil) benzoico y comparación con los estándares kdb y ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidrocibenzoil) benzoico no
acoplados (véase abajo) Re (V) : El ácido 2 - (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico (Unvinul A Plus) tiene un máximo de absorción de 360 nm (véase la Figura 5.1) . Un máximo de absorción del KBD-B está en 280 nm (véase la Figura 5.2) . Si una mezcla de acoplamiento se separa ahora cromatográficamente - de acuerdo con los métodos descritos arriba - (véase el Ejemplo 6) entonces, como resultado de la absorción a 360 nm y 280 nm. El KBD-B-maleimido-N-pentanol -ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico acoplado puede ser distinguido del ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico desacoplado (véanse las Figuras 5.1-5.5) . Ejemplo 20: Acoplamiento efector del ácido maleimidocaproico al KBD-D (SEC ID NO.:168) Para acoplar el ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico (Unvinul A Plus) por medio de maleimido-N-pentanol, las cisteínas también se pueden usar en el KBD-D (SEC ID NO.:168) de manera análoga al KBD-B. El KBD-D (SEC ID NO..-168) tiene 24 cisteínas. Además, los radicales de cisteína capaces de acoplarse pueden ser introducidos en una manera dirigida por mutagénesis dirigida. El ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico-maleimido-N-pentanol capaz de acoplarse podría ser acoplado
por lo tanto al KBD-D (SEC ID NO.: 168) vía al menos uno de los grupos SH libres de una cisteína. La molécula afectora de KDB- D pantenol obtenida de esta manera se podría usar de acuerdo con los ejemplos 23-25 de manera análoga a la molécula eectora KDB-B pantenol - Todas las moléculas efector enlazador, listadas en las
- Tablas 12 y 12a se pueden acoplar preferiblemente en una manera análoga a los polipéptidos de enlace a la queratina con una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEC IN No.; 2, 4, 5, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156,
157, 158, 160, 162 o 164.
15 20
Tabla 12
Tabla 12a Ejemplo 21 Prueba de adhesión al cabello del ácido 2- (4-
N,N-dietilamino-2 -hidroxibenzoil) benzoico (Uvinul A Plus) acoplado con KBD-B Con el fin de verificar si el KBD-B se enlaza con el Uvinul A Plus acoplado con el cabello, se puede llevar a cabo un ensayo de enlace cuantitativo (véase la Fig. 6) : En esta prueba, el cabello se incubó primero con KBD-B-Uvinul A Plus el KBD-B-Uvinul A Plus no enlazado se eliminó por lavado. Una peroxidasa se acopló entonces vía la etiqueta His del KBD-B. La peroxidasa no enlazada se eliminó por lavado otra vez. La peroxidasa enlazada puede convertir un substrato incoloro (TMB) en un producto coloreado el cual se puede medir fotométricamente a 405 nm. La intensidad de la absorción indica la cantidad de KBD-b-Uvinul A Plus enlazado. Como muestra de comparación, se eligió KBD-B- sin Uvinul A Plus (véase también el Ejemplo 10 para el procedimiento preciso) . Ejemplo 22: prueba de Ellmann Materiales requeridos Reactivo de Ellmann: 5, 5' -ditiobis (ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB) ; 4 mg/l ml en amortiguador de fosfato de Na 1M - amortiguador de fosfato de Na 0.1 M, pH 8.0 Solución de cisteína (26.3 mg de monohidrato de clorhidrato de cisteína/100 ml de amortiguador de fosfato de Na)
Las soluciones se y deben ser preparadas solamente poco antes de su uso. 1. En cada caso 25 µl , 50 µl , 100 µl , 150 µl , 200 µl u 250 µl de solución de cisteína se transfirieron con una pipeta en tubos de prueba (13 x 100 mm) para una curva de calibración. Las muestras de proteína a ser determinadas se vertieron en tubos de prueba separados (volumen <= 250 µl) . Del KBD a ser evaluado, se dispensó una cantidad de al menos 1 mg por mezcla de reacción. En el caso de los tubos de prueba, el volumen total se ajustó entonces en cada caso a 250 µl con amortiguador de fosfato de Na. Si se excede el volumen de 250 µl de la muestra (a cuenta del 1 mg requerido de KBD) , esto se tomo en consideración cuando se rellena en el punto 2 con 2.5 ml de amortiguador de fosfato de Na. 2. Adición en cada caso de 50 µl de reactivo de Ellmann y 2.5 ml de amortiguador de fosfato de Na. Mezclar brevemente e incubar por 15 min a la TA. 3. Medir la absorción a 412 nm 4. Construir curvas de calibración, gráficas y leer los valores de las muestras de proteína a ser determinadas. Preparaciones dermocosméticas de acuerdo con la invención A continuación se describen las preparaciones
dermocosméticas de acuerdo con la invención, las cuales comprenden las moléculas efectoras de enlace a la queratina acopladas con el ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) -benzoico (KBD-Uvinul A Plus) , producidas de acuerdo con el Ejemplo 19. Las moléculas efectoras de enlace a la queratina especificadas se denominan en los siguientes ejemplos como dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus. El dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus se especifica en los ejemplos de abajo a manera de representación de todas las otras moléculas efectoras de enlace a la queratina descritas arriba. Se apreciará por las personas con experiencia en la técnica que todas las otras moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con el Ejemplo 19 se pueden producir también y se usan en las preparaciones dadas a continuación. Ejemplo 23: uso del KBD en una emulsión para cuidado de día - tipo 0/W Al 1% % Ingrediente (INCI) A 1.7 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 0.7 Cetearet-25 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearilico 6.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Adipato de Dibutilo
B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA Disódico 1.0 Pantenol c.s. Conservador 69.8 Agua desm. C 4.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Copolimeros de acrilatos de sodio D 0.2 Ascorbilo Fosfato de Sodio 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Ascorbato de sodio, Tocoferol, Retinol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus E c.s. Hidróxido de sodio Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 1.7 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 0.7 Cetearet-25 2.0 PEG- 14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearilico 6.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Adipato de Dibutilo B 5.0 Glicerina
0.2 EDTA Disodico 1.0 Pantenol c.s. Conservador 65.8 Agua desm. C 4.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Copolímero de Acrilatos de Sodio D 0.2 Ascorbilo Fosfato de Sodio 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Ascorbato de sodio, Tocoferol, Retinol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus E c.s. Hidróxido de sodio Preparación: Calentar las fases A y B por separado una de la otra a aproximadamente 80 °C. Agitar la Fase B en la Fase A y homogeneizar. Agitar la Fase C en las fases combinadas A y B y Homogeneizar otra vez. Enfriar con agitación a aproximadamente 40 °C, añadir la fase D, ajustar el pH a aproximadamente 6.5 usando la fase E, homogeneizar y enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Nota: La formulación se prepara sin gas de protección. El embotellado se debe hacer en empaques impermeables al oxigeno, por ejemplo, tubos de aluiminio.
Ejemplo 24: Uso de KBD en una crema protectora de día -tipo 0/W Al 1% % Ingrediente (INCI) A 1.7 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 0.7 Cetearet-25 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearilico 6.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Adipato de Dibutilo B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA Disodico 1.0 Pantenol c.s. Conservador 70.6 Agua desm. C 4.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Copolímero de Acrilatos de Sodio D 1.0 Ascorbilo Fosfato de Sodio 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus E c.s. Hidróxido de sodio Al 5%:
% Ingrediente (INCI) A 1.7 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 0.7 Cetearet-25 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearilico 6.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Adipato de Dibutilo B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA Disodico 1.0 Pantenol c.s. Conservador 66.6 Agua desm. C 4.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Copolímero de Acrilatos de Sodio D 1.0 Ascorbilo Fosfato de Sodio 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus E c.s. Hidróxido de sodio Preparación: Calentar las fases A y B por separado una de la otra a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Incorporar la fase C en las fases A y B combinadas y homogeneizar. Enfriar con agitación a
aproximadamente 40 °C. Añadir la fase D, ajustar el pH a aproximadamente 6.5 usando la fase E y homogeneizar. Enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 25: Uso del KBD en una loción para limpieza del rostro - tipo 0/W Al 1% % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 10.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico 1.5 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 2.0 PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado B 3.5 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Copolímero de Acrilatos de Sodio C 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Conservador c.s. Aceite perfumado D 3.0 Policuaternio-44 0.5 Metosulfato de Cocotrimonio 0.5 Cetearet-25 2.0 Pantenol, Propilenglicol 4.0 Propilenglicol 0.1 EDTA Disodico 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de
enlace a la queratina-Uvinul A Plus 60.7 Agua desm. Al 5% % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 10.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico 1.5 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 2.0 PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado B 3.5 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Copolímero de Acrilatos de Sodio C 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Conservador c.s. Aceite perfumado D 3.0 Policuaternio-44 0.5 Metosulfato de Cocotrimonio 0.5 Cetearet-25 2.0 Pantenol, Propilenglicol 4.0 Propilenglicol 0.1 EDTA Disodico 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 56.7 Agua desm. Preparación: Disolver la fase A. Agitar la fase B en la
fase A. Incorporar la fase C en las fases A y B combinadas. Disolver la fase D. agitar en las fases combinadas A, B y C y homogeneizar. Después agitar por 15 min. Ejemplo 26: Uso del KBD en un aerosol para cuerpo de cuidado diario Al 1% % Ingrediente (INCI) A 3.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Benzoato de Dietilamino Hidroxibenzoil Hexilo 1.0 Policuaternio-44 3.0 Propilenglicol 2.0 Pantenol, Propilenglicol 1.0 Ciclopentasíloxano, Ciclohexasiloxano 10.0 Octildodecanol 0.5 PVP 10.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico 3.0 Benzoato de Alquilo de C12-C15 3.0 Glicerina 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.3 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 59.2 Alcohol Al 5%
% Ingrediente (INCI) A 3.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Benzoato de Dietilamino Hidroxibenzoil Hexilo 1.0 Policuaternio-44 3.0 Propilenglicol 2.0 Pantenol, Propilenglicol 1.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 10.0 Octildodecanol 0.5 PVP 10.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico 3.0 Benzoato de Alquilo de C12-C15 3.0 Glicerina 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.3 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 55.2 Alcohol Preparación: Pesar los componentes de la fase A y disolverlos hasta que la solución se vuelva transparente. Ejemplo 27: Uso del KBD en un gel de cuidado para la piel Al 1% % Ingrediente (INCI) A 3.6 PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado
.0 Alcohol 0 0.1 Bisabolol 0.5 Acetato de Tocoferilo q.s. Aceite perfumado B 3.0 Pantenol 0.6 Carbómero 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 75.4 Agua desm. C 0.8 Trietanolamina Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 3.6 PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado 15.0 Alcohol 0 0.1 Bisabolol 0.5 Acetato de Tocoferilo c.s. Aceite perfumado B 3.0 Pantenol 0.6 Carbómeroo 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 71.4 Agua desm. C 0.8 Trietanolamina Preparación: Disolver la fase A hasta una solución
transparente. Permitir que la fase B se expanda y neutralizar con la fase C. Agitar la fase A en la fase B homogeneizada y homogeneizar . Ejemplo 28: Uso del KBD en una loción para después de afeitar Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Acetato de Tocoferilo 1.0 Bisabolol 0.1 Aceite perfumado 0.3 Polímero reticulado de Acrilatos/Acrilato de Alquilo de C10-C30 B 15.0 Alcohol 1.0 Pantenol 3.0 Glicerina 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.1 Trietanolamina 63.5 Agua desm. Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Acetato de Tocoferilo
1.0 Bisabolol 0.1 Aceite perfumado 0.3 Polímero reticulado de Acrilatos/Acrilato de Alquilo de C10-C30 B 15.0 Alcohol 1.0 Pantenol 3.0 Glicerina 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.1 Trietanolamina 59.5 Agua desm. Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Disolver la fase B, incorporarla en la fase A y homogeneizar Ejemplo 29: Uso del KBD en una loción para después de tomar el sol Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 0.4 Polímero reticulado de Acrilatos/Acrilato de Alquilo De C10-C30 15.0 Etilhexanoato de Cetearilo 0.2 Bisabolol 1.0 Acetato de Tocoferilo c.s. Aceite perfumado B 1.0 Pantenol
.0 Alcohol 3.0 Glicerina 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 63.2 Agua desm. C 0.2 Trietanolamina Al 5% % Ingrediente (INCI) A 0.4 Polímero reticulado de Acrilatos/Acrilato de Alquilo de C10-C30 15.0 Etilhexanoato de Cetearilo 0.2 Bisabolol 1.0 Acetato de Tocoferilo c.s. Aceite perfumado B 1.0 Pantenol 15.0 Alcohol 3.0 Glicerina 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 59.2 Agua desm. C 0.2 Trietanolamina Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Agitar la fase B en la fase A con homogenización. Neutralizar con la fase C y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 30: Uso del KBD en una loción de protección solar Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 4.5 Metoxicinamato de Etilhexilo 3.0 Octocrileno 2.5 Malato de Dialquilo de C12-13 0.5 Acetato de Tocoferilo 4.0 Poligliceril-3 Metil Glucosa Diestearato B 3.5 Isononanoato de Cetearilo 1.0 Copolímero de VP/Eicoseno 5.0 Isohexadecane 2.5 Malato de Dialquilo de C12-13 3.0 Dioxido de titanio, Trimetoxicaprililsilano C 5.0 Glicerina 1.0 Cetearil Sulfato de Sodio 0.5 Goma de Xantano 61.7 Agua desm. D 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus
1.0 Fenoxietanol, Metilparabeno, Etilparabeno, Butilparabeno, Propilparabeno, Isobutilparabeno
0.3 Bisabolol Al 5%:
% Ingrediente (INCI) A 4.5 Metoxicinamato de Etilhexilo 3.0 Octocrileno 2.5 Malato de Dialquilo de C12-13 0.5 Acetato de Tocoferilo 4.0 Poligliceril-3 Metil Glucosa Diestearato B 3.5 Isononanoato de Cetearilo 1.0 Copolímero de VP/Eicoseno 5.0 Isohexadecane 2.5 Malato de Dialquilo de C12-13 3.0 Dioxido de titanio, Trimetoxicaprililsilano C 5.0 Glicerina 1.0 Cetearil Sulfato de Sodio 0.5 Goma de Xantano 57.7 Agua desm. D 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Fenoxietanol, Metilparabeno, Etilparabeno, Butilparabeno, Propilparabeno, Isobutilparabeno 0.3 Bisabolol Preparación: Calentar los componentes de las fases a y B por separado una de la otra a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Calentar la fase C a aproximadamente 80 °C y agitar en las fases A y B combinadas
con homogenización. Enfriar a aproximadamente 40 °C, añadir la fase D y homogeneizar otra vez. Ejemplo 31: Uso del KBD en una loción de protección solar tipo 0/W Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 2.0 Cetearet-25 3.0 Tribehenina 2.0 Alcohol Cetearilico 2.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 1.0 Etilhexil Triazona 1.0 Copolímero de VP/Eicoseno 7.0 Miristato de Isopropilo B 5.0 Oxido de Zinc, Trietilcaprililsilano C 0.2 Goma de Xantano 0.5 Acrilato de Hidroxietilo/Acriloildimetil Taurato de Sodio Copolymer, Escualano, Polisorbato 60 0.2 EDTA Disodico 5.0 Propilenglicol 0.5 Pantenol 60.9 Agua desm. D 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de
enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Fenoxietanol, Metilparabeno, Butilparabeno, Etilparabeno, Propilparabeno, Isopropilparabeno
1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 2.0 Cetearet-25 3.0 Tribehenina 2.0 Alcohol Cetearilico 2.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 1.0 Etilhexil Triazona 1.0 Copolímero de VP/Eicoseno 7.0 Miristato de Isopropilo B 5.0 Oxido de Zinc, Trietilcaprililsilano C 0.2 Goma de Xantano 0.5 Acrilato de Hidroxietilo/Acriloildimetil Taurato de Sodio Copolymer, Squalate, Polisorbato 60 0.2 EDTA Disodico 5.0 Propilenglicol 0.5 Pantenol 56.9 Agua desm.
D 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Fenoxietanol, Metilparabeno, Butilparabeno, Etilparabeno, Propilparabeno, IsoPropilparabeno 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol Preparación: Calentar la fase A a aproximadamente 80°C, agitar en la fase B y homogeneizar por 3 min. Igualmente calentar la fase C a 80°C y agitar en las fases A y B combinadas con homogenización. Enfriar a aproximadamente 40 °C, agitar en la fase D y homogeneizar otra vez. Ejemplo 32: Uso del KBD en una loción de protección solar - tipo 0/W Al 1% % Ingrediente (INCI) A 3.5 Cetearet-6, Alcohol estearilico 1.5 Cetearet-25 7.5 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 0.5 Cera de abeja 3.0 Alcohol Cetearilico 10.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico B 5.0 Dioxido de titanio, Silica, Meticona, Alumina C 3.0 Glicerina
0.2 EDTA disodico 0.3 Goma de Xantan 1.0 Decil Glucósido 2.0 Pantenol, Propilen Glicol 56.3 Agua desm. D 3.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 3.5 Cetearet-6, Alcohol estearilico 1.5 Cetearet-25 7.5 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 0.5 Cera de abeja 3.0 Alcohol Cetearilico 10.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico B 5.0 Dioxido de titanio, Silica, Meticona, Alumina C 3.0 Glicerina 0.2 EDTA disodico 0.3 Goma de Xantan
1.0 Decil Glucósido 2.0 Pantenol, Propilen Glicol 52.3 Agua desm. D 7.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador Preparación: Calentar la fase A a aproximadamente 80 °c, agitar en la fase B y homogeneizar por 3 min. Igualmente calentar la fase C a 80 °C y agitar en las fases A y B combinadas con homogenización. Enfriar a aproximadamente 40 °C, agitar en la fase D y homogeneizar otra vez. Ejemplo 33: Uso del KBD en un bálsamo para los pies Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 2.0 Cetearet-25 5.0 Etilhexanoato de Cetearilo 4.0 Alcohol Cetilico 4.0 Estearato de Glicerilo 5.0 Aceite Mineral 0.2 Mentol
0.5 Alcanfor B 69.3 Agua desm. c.s. Conservador C 1.0 Bisabolol 1.0 Acetato de Tocoferilo D 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 5.0 Extracto de Hamamelis Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 2.0 Cetearet-25 5.0 Etilhexanoato de Cetearilo 4.0 Alcohol Cetilico 4.0 Estearato de Glicerilo 5.0 Aceite Mineral 0.2 Mentol 0.5 Alcanfor B 65.3 Agua desm. c.s. Conservador C 1.0 Bisabolol 1.0 Acetato de Tocoferilo D 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus
.0 Extracto de Hamamelis Preparación: Calentar los componentes de las fases A y B por separado una de la otra, a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A con homogenización. Enfriar a aproximadamente 40 °C con agitación, añadir las fases C y D y poco después homogeneizar. Enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 34: Uso del KBD en una emulsión w-o con bisabolol Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 8.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Miristato de Isopropilo 15.0 Aceite Mineral 0.3 Estearato de magnesio 0.3 Estearato de aluminio 2.0 Copolímeros de PEG-45/Dodecil Glicol B 5.0 Glicerina 0.7 Sulfato de magnesio 55.6 Agua desm. C 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Acetato de Tocoferilo
0.6 Bisabolol Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 8.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Miristato de Isopropilo 15.0 Aceite Mineral 0.3 Estearato de magnesio 0.3 Estearato de alumino 2.0 Copolímeros de PEG-45/Dodecil Glicol B 5.0 Glicerina 0.7 Sulfato de magnesio 51.6 Agua desm. C 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Acetato de Tocoferilo Preparación: Calentar las fases A y B por separado una de la otra a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase
A y homogeneizar. Enfriar a aproximadamente 40 °C con agitación, añadir la fase C y homogeneizar brevemente otra vez. Enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 35: Acondicionador en espuma con agente de fijación Al 1%:
% Ingrediente (INCI) A 10.0 Copolímeros de PVP/VA 0.2 Fosfato de hidroxietil Cetildimonio 0.2 Cetearet-25 0.5 Dimerticona Copoliol c.s. Aceite perfumado 10.0 Alcohol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 68.1 Agua desm. 10.0 Propano/Butano Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Copolímeros de PVP/VA 0.2 Fosfato de hidroxietil Cetildimonio 0.2 Cetearet-25 0.5 Dimerticona Copoliol c.s. Aceite perfumado 10.0 Alcohol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 64.1 Agua desm. 10.0 Propano/Butano Preparación: Pesar los componentes de la fase A juntos,
agitar hasta que todo se ha disuelto y embotellar. Ejemplo 36: Acondicionador en espuma Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 1.0 Policuaternio-4 0.5 Fosfato de hidroxietil Cetildimonio 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 91.5 Agua desm. 6.0 Propano/Butano Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 1.0 Policuaternio-4 0.5 Fosfato de hidroxietil Cetildimonio 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 87.5 Agua desm. 6.0 Propano/Butano Preparación: Pesar los componentes de la fase A juntos, agitar hasta que todo se ha disuelto para dar una solución
transparente y embotellar. Ejemplo 37: Acondicionador en espuma AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 1.0 Policuaternio-11 0.5 Fosfato de hidroxietil Cetildimonio 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 91.5 Agua desm. 6.0 Propano/Butano AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 1.0 Policuaternio-11 0.5 Fosfato de hidroxietil Cetildimonio 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 87.5 Agua desm. 6.0 Propano/Butano Preparación: Pesar juntos los componentes de la fase A, agitar hasta que se hayan disuelto para dar una solución
transparente y embotellar. Ejemplo 38: Espuma de estilización Al %: % Ingrediente (INCI) A 0.5 Lauret-4 q.s. Aceite perfumado B 77.3 Agua desm. 10.0 Policuaternio-28 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Dimerticona Copoliol 0.2 Cetearet-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA 0.2 Hidroxietilcelulosa C 10.0 HFC 152 A AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 0.5 Lauret-4 c.s. Aceite perfumado B 73.3 Agua desm. 10.0 Policuaternio-28 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus
0.5 Dimerticona Copoliol 0.2 Cetearet-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA 0.2 Hidroxietilcelulosa C 10.0 HFC 152 A Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Añadir los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Embotellar con la fase C Ejemplo 39: Espuma de Estilización AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de Cocotrimonio c.s. Aceite perfumado B 78.5 Agua desm. 6.7 Copolímero Acrilico 0.6 AMP 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Dimerticona Copoliol 0.2 Cetearet-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA 0.2 Hidroxietilcelulosa
C 10.0 HFC 152 A AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de Cocotrimonio c.s. Aceite perfumado B 78.5 Agua desm. 6.7 Copolimero Acrilico 0.6 AMP 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Dimerticona Copoliol 0.2 Cetearet-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA 0.2 Hidroxietilcelulosa C 10.0 HFC 152 A Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Añadir los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Embotellar con la fase C. AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de Cocotrimonio q.s. Aceite perfumado B 7.70 Policuaternio-44
1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Conservador 79.3 Agua desm. C 10.0 Propano/Butano Al 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de Cocotrimonio c.s. Aceite perfumado B 7.70 Policuaternio-44 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Conservador 75.3 Agua desm. C 10.0 Propano/Butano Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Disolver los componentes de la fase B hasta una solución transparente, entonces agitar la fase B en la fase A. Ajustar el pH a 6-7, embotellar con la fase C. Ejemplo 41: Espuma de estilización AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.00 Metosulfato de Cocotrimonio c.s. Aceite perfumado
B 72.32 Agua desm. 2.00 VP/Acrilatos/Copolimeros de Lauril Metacrilato 0.53 AMP 1.00 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.20 Cetearet-25 0.50 Pantenol 0.05 Benzofenona-4 0.20 AmoDimeticona, Cloruro de Cetrimonio, Trideceth-12 15.00 alcohol C 0.20 Hidroxietilcelulosa D 6.00 Propano/Butano Al 5% % Ingrediente (INCI) A 2.00 Metosulfato de Cocotrimonio c.s. Aceite perfumado B 68.32 Agua desm. 2.00 VP/Acrilatos/Copolimeros de Lauril Metacrilato 0.53 AMP 5.00 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.20 Cetearet-25 0.50 Pantenol 0.05 Benzofenona-4
0.20 AmoDimeticona, Cloruro de Cetrimonio, Trideceth-12 15.00 alcohol C 0.20 Hidroxietilcelulosa D 6.00 Propano/Butano Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Añadir los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Disolver la fase C en la mezcla de A y B, después ajustar el pH a 6-7. Embotellar con la fase D. Ejemplo 42: Espuma de estilización Al 1% % Ingrediente (INCI) A 2.00 Cloruro de Cetrimonio c.s. Aceite perfumado B 67.85 Agua desm. 7.00 Policuaternio-46 1.00 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.20 Cetearet-25 0.50 Pantenol 0.05 Benzofenona-4 0.20 AmoDimeticona, Cloruro de Cetrimonio, Trideceth-12 15.00 Alcohol C 0.20 Hidroxietilcelulosa D 6.00 Propano/Butano
Al 5% % Ingrediente (INCI) A 2.00 Cloruro de Cetrimonio c.s. Aceite perfumado B 63.85 Agua desm. 7.00 Policuaternio-46 5.00 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.20 Cetearet-25 0.50 Pantenol 0.05 Benzofenona-4 0.20 AmoDimeticona, Cloruro de Cetrimonio, Trideceth-12 15.00 Alcohol C 0.20 Hidroxietilcelulosa D 6.00 Propano/Butano Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Añadir los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Disolver la fase C en la mezcla de A y B, después ajustar el pH a 6-7. Embotellar con la fase D. Ejemplo 43: Espuma de estilización AI 1% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado c.s. Aceite perfumado
85.5 Agua desm. B 7.0 Sodio Poliestiren Sulfonato 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Bromuro de Cetrimonio c.s. Conservador C 6.0 Propano/Butano AI 5% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado c.s. Aceite perfumado 81.5 Agua desm. B 7.0 Sodio Poliestiren Sulfonato 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Bromuro de Cetrimonio c.s. Conservador C 6.0 Propano/Butano Preparación: Solubilizar la fase A. Pesar la fase B en la fase A y disolver hasta una solución transparente. Ajustar el pH a 6-7, embotellar con la fase C. Ejemplo 44: Espuma de Estilización AI 1%: % Ingrediente (INCI)
A c.s. PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado c.s. Aceite perfumado 92.0 Agua desm. B 0.5 Policuaternio-10 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Bromuro de Cetrimonio c.s. Conservador C 6.0 Propano/Butano Al 5%: % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado c.s. Aceite perfumado 88.0 Agua desm. B 0.5 Policuaternio-10 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Bromuro de Cetrimonio c.s. Conservador C 6.0 Propano/Butano Preparación: Disolver la fase A. Pesar la fase B en la fase A y disolver hasta una solución clara. Ajustar el pH a 6-7, embotellar con la fase C. Ejemplo 45: Espuma de estilización
AI 1% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de Ricino hidrogenado c.s. Aceite perfumado 82.5 Agua desm. B 10.0 Policuaternio-16 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Fosfato de hidroxietil Cetildimonio c.s. Conservador C 6.0 Propano/Butano AI 5% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de Ricino hidrogenado c.s. Aceite perfumado 78.5 Agua desm. B 10.0 Policuaternío-16 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Fosfato de hidroxietil Cetildimonio c.s. Conservador C 6.0 Propano/Butano Preparación: Disolver la fase A. Pesar la fase B en la fase A y disolver hasta una solución clara. Ajustar el pH a 6-
7, embotellar con la fase C. Ejemplo 46: Espuma de estilización o modelado AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de Cocotrimonio c.s. Aceite perfumado B 84.0 Agua desm. 2.0 Quitosan 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Dimerticona Copoliol 0.2 Cetearet-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA C 10.0 HFC 152 A AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de Cocotrimonio c.s. Aceite perfumado B 80.0 Agua desm. 2.0 Quitosan 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Dimerticona Copoliol
0.2 Cetearet-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA C 10.0 HFC 152 A Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Añadir los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Embotellar con la fase C. Ejemplo 47: Champú para el cuidado personal AI 1% % Ingrediente (INCI) A 30.0 Lauret Sulfato de sodio 6.0 Cocoamfoacetato de sodio 6.0 Cocamidopropil Betaina 3.0 Lauret Sulfato de Sodio, Glicol Diestearato, Cocamida MEA, Lauret -10 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 7.7 Policuaternio-44 2.0 AmoDimeticona c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 1.0 Cloruro de Sodio 43.3 Agua desm. B c.s. Ácido Cítrico
AI 5% % Ingrediente (INCI) A 30.0 Lauret Sulfato de sodio 6.0 Cocoamfoacetato de sodio 6.0 Cocamidopropil Betaina 3.0 Lauret Sulfato de Sodio, Glicol Diestearato, Cocamida MEA, Lauret -10 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 7.7 Policuaternio-44 2.0 Amodimeticona c.s. Aceite perfumado q.s. Conservador 1.0 Cloruro de Sodio 39.3 Agua desm. B c.s. Ácido Cítrico Preparación. Mezclar los componentes de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico. Ejemplo 48: Gel para baño AI 1% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Lauret Sulfato de Sodio 5.0 Decil Glucósido 5.0 Cocamidopropil Betaina
1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Pantenol c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 2.0 Cloruro de Sodio 46.0 Agua desm. B c.s. Ácido Cítrico Al 5% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Lauret Sulfato de Sodio 5.0 Decil Glucósido 5.0 Cocamidopropil Betaina 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Pantenol c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 2.0 Cloruro de Sodio 42.0 Agua desm. B c.s. Ácido Cítrico Preparación: Mezclar los componentes de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico. Ejemplo 49: Champú
AI 1% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Lauret Sulfato de Sodio 5.0 C12-C15 Paret-15 Sulfonato de Sodio 5.0 Decil Glucósido q.s. Aceite perfumado 0.1 Fitantriol 44.6 Agua desm. 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.3 Policuaternio-10 1.0 Pantenol c.s. Conservador 1.0 Lauret-3 2.0 Cloruro de Sodio Al 5% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Lauret Sulfato de Sodio 5.0 C12-C15 Paret-15 Sulfonato de Sodio 5.0 Decil Glucósido c.s. Aceite perfumado 0.1 Fitantriol 40.6 Agua desm. 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de
enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.3 Policuaternio-10 1.0 Pantenol c.s. Conservador 1.0 Lauret-3 2.0 Cloruro de Sodio Preparación: Mezclar los componentes de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico. Ejemplo 50: Champú AI 1% % ingrediente (INCI) A 15.00 Cocamidopropil Betaina 10.00 Disodium Cocoamphodiacetate 5.00 Polisorbato 20 5.00 Decil Glucósido c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 1.00 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.15 Cloruro de Guar Hidroxipropiltimonio 2.00 Lauret-3 58.00 Agua desm. c.s. Ácido Cítrico B 3.00 PEG-150 Distearato
AI 5% % ingrediente (INCI) A 15.00 Cocamidopropil Betaina 10.00 Disodium Cocoamphodiacetate 5.00 Polisorbato 20 5.00 Decil Glucósido c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.15 Cloruro de Guar Hidropropiltimonio 2.00 Lauret -3 54.00 Agua desm. c.s. Ácido Cítrico B 3.00 PEG-150 Distearato Preparación: Pesar los componentes de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7. Añadir la fase B y calentar a aproximadamente 50 °C. Enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 51: Crema Humectante para cuidado corporal AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-25 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico
3.0 Etilhexanoato de Cetearilo 1.0 Dimeticona 4.0 Alcohol Cetearilico 3.0 Estearato de Glicerilo SE 5.0 Aceite Mineral 4.0 Acite de semillas de Simmondsia Chinensis (Jojoba)
3.0 Aceite Mineral, Aceite de Lanolina B 5.0 Propilen Glicol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Pantenol 0.5 Silicato de Magnesio y Aluminio c.s. Conservador 65.5 Agua desm. C c.s. Aceite perfumado D c.s. Ácido Cítrico AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-25 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 3.0 Etilhexanoato de Cetearilo 1.0 Dimeticona 4.0 Alcohol Cetearilico 3.0 Estearato de Glicerilo SE
.0 Aceite Mineral 4.0 Aceite de semillas de Simmondsia Chinensis (Jojoba) 3.0 Aceite Mineral, Aceite de Lanolina B 5.0 Propilen Glicol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Pantenol 0.5 Silicato de Magnesio y Aluminio c.s. Conservador 61.5 Agua desm. C c.s. Aceite perfumado D c.s. Ácido Cítrico Preparación: Calentar las fase A y B por separado a aproximadamente 80 °c. Homogeneizar brevemente la fase B, entonces agitar la fase B en la fase A y homogeneizar otra vez. Enfriar a aproximadamente 40 °C, añadir la fase C y homogeneizar cuidadosamente otra vez. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico. Ejemplo 52: Crema humectante de cuidado corporal AI 1% % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de Ricino Hidrogenado 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Miristato de Isopropilo
7.0 Aceite Mineral 0.5 Manteca de Karité (Butyrospermum Park¡¡) 0.5 Estearato de aluminio 0.5 Estearato de Magnesio 0.2 Bisabolol 0.7 Cuaternio-18-Hectorita B 5.0 Dipropilen Glicol 0.7 Sulfato de Magnesio c.s. Conservador 62.9 Agua desm. C c.s. Aceite perfumado 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus AI 5% % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG- 7 Aceite de Ricino Hidrogenado 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Miristato de Isopropilo 7.0 Aceite Mineral 0.5 (Butyrospermum Park¡¡) 0.5 Estearato de aluminio 0.5 Estearato de Magnesio 0.2 Bisabolol 0.7 Cuaternio-18-Hectorite
B 5.0 Dipropilen Glicol 0.7 Sulfato de Magnesio q.s. Conservador 58.9 Agua desm. C c.s. Aceite perfumado 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Enfriar a aproximadamente 40 °C con agitación. Añadir la fase C y homogeneizar otra vez. Permitir enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 53: Maquillaje Liquido - tipo 0/W AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetereth-6, Alcohol Estearilico 2.0 Cetearet-25 6.0 Estearato de Glicerilo 1.0 Alcohol Cetilico 8.0 Aceite Mineral 7.0 Etilhexanoato de Cetearilo 0.2 Dimeticona B 3.0 Propilen Glicol 1.0 Pantenol
c.s. Conservador 61.9 Agua desm. C 0.1 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Aceite perfumado D 5.7 C.I. 77 891, Dióxido de Titanio 1.1 Óxidos de fierro Al 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetereth-6, Alcohol Estearilico 2.0 Cetearet-25 6.0 Estearato de Glicerilo 1.0 Alcohol Cetilico 8.0 Aceite Mineral 7.0 Etilhexanoato de Cetearilo 0.2 Dimeticona B 3.0 Propilen Glicol 1.0 Pantenol c.s. Conservador 57.9 Agua desm. C 0.1 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus
c.s. Aceite perfumado D 5.7 C.I. 77 891, Dióxido de Titanio 1.1 Óxidos de fierro Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Enfriar a aproximadamente 40 °C con agitación, añadir las dases C y D y homogeneizar cuidadosamente otra vez. Permitir enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 54 A continuación se as preparaciones dermocosméticas de acuwerdo con la invención que comprenden las moléculas efectoras de enlace a la queratina KBD preparadas de acuerdo con el ejemplo 19 (dominio de enlace a la queratina de acuerdo con la SEC ID NO.:166) acopladas con ácido 2-(4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil)benzoito (KBD-Uvinul A Plus). Las moléculas efectoras de enlace a la queratina especificadas se denominan en los siguientes ejemplos como dominio de enlace a la queratina-Unvuilaplus . El dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus se especifica en los ejemplos de abajo a modo de representación de todas las otras moléculas efectoras de enlace a la queratina descritas arriba. Se apreciará por las personas con experiencia en la técnica que todas las otras moléculas efectoras de enlace a la queratina especificadas de acuerdo con el ejemplo 19 también se pueden preparar y usar en
las preparaciones dadas a continuación. Las moléculas efectoras de enlace a la queratina, especificadas, se usan como solución acuosa de aproximadamente 5% en peso de fuerza. Los siguientes datos son en partes en peso. Champú transparente
Champú
Champú acondicionador transparente
Emulsiones O/W de espuma
Champú acondicionador con perlescencia
Ajustar el pH a 6.0 Champú acondicionador transparente
Ajustar el pH a 6.0 Champú acondicionador transparente con efecto de volumen
Ajustar el pH a 6.0
Crema en gel
Formulación para Protección Solar OW
Hidrodispersión
Emulsión para protección solar WO
Barras
Emulsión de PIT
Crema en Gel
Formulación de auto-bronceado OW
Maquillaje OW
Hidrodispersion de Auto Bronceado
Hidrodispersion para Después de Tomar el Sol
Emulsiones WO
Emulsión estabilizada por Sólidos (Emulsiones Pickering)
Barras
Emulsiones PIT de Auto Bronceado
Gel aceitoso
Ejemplo 55: En las formulaciones de abajo, se describen las preparaciones cosméticas de protección solar que comprenden una combinación de al menos un pigmento inorgánico, preferiblemente, óxido de zinc y/o dióxido de titanio, dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus y otros filtros UV-A UV-B orgánicos. Las formulaciones especificadas abajo se preparan de los modos acostumbrados conocidos por las personas experimentadas en la técnica. El contenido; moléculas efectoras de enlace a la queratina KBD-B preparadas de acuerdo con el ejemplo 19
(dominio de enlace a la queratina de acuerdo con la SEC ID NO.: 166), acoplada con el ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico (KBD-Uvinil A Plus); de dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus se refiere al 100% del ingrediente activo. El ingrediente activo de acuerdo con la invención puede ser usado ya sea en forma pura o también en forma de una solución acuosa. En el caso de la solución acuosa, se debe ajustar el contenido de agua desmineralizada en la formulación.
A continuación se describen las preparaciones cosméticas de acuerdo con la invención, que comprenden las moléculas efectoras de enlace a la queratina KBD-D preparadas de acuerdo
con el ejemplo 20 (dominio de enlace a la queratina de acuerdo con la SEC ID NO.: 168) acoplada a ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2 -hidroxibenzoil) -benzoico (KBD-Uvin?l A Plus). Las moléculas efectoras de enlace a la queratina especificadas se denominan en los siguientes ejemplos como dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus. El dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus se especifica en los ejemplos de abajo a manera de representación de todas las otras moléculas efectoras de enlace a la queratina descritas arriba. Se apreciará por las personas con experiencia en la técnica que todas las otras moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con el ejemplo 20 también se pueden preparar y usar en las preparaciones dadas a continuación. Ejemplo 56: Uso del KBD en una emulsión para el cuidado diario - tipo 0/W AI 1% % Ingrediente (INCI)A 1.7 Cetearet-6, Alcohol Estearílico 0.7 Cetearet-25 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearílico 6.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Adipato de Dibutilo B 5.0 Glicerina
0.2 EDTA Disódico 1.0 Pantenol q.s. Conservador 69.8 Agua desm. C 4.0 Triglicérido Caprílico/Cáprico, Copolímerosde Acrilato Sódico D 0.2 Ascorbilo Fosfato de Sodio 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Triglicérido Caprílico/Cáprico, Ascorbato de sodio, Tocoferol, Retinol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus E c.s. Hidróxido de Sodio AI 5% % Ingrediente (INCI) A 1.7 Cetearet-6, Alcohol Estearílico 0.7 Cetearet-25 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearílico 6.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Adipato de Dibutilo B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA Disódico
1. O Pantenol c.s. Conservador 65.8 Agua desm. C 4.0 Triglicérido Caprílico/Cáprico, Copolímerosde Acrilato Sódico D 0.2 Ascorbilo Fosfato de Sodio 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Triglicérido Caprílico/Cáprico, Ascorbato de sodio, Tocoferol, Retinol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus E c.s. Hidróxido de Sodio Preparación: Calentar las fases A y B por separado una de la otra a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Agitar la fase C en las fases A y B combinadas y homogeneizar otra vez. Enfriar com agitación a aproximadamente 40 °C, añadir la fase D, ajustar el oh a aproximadamente 6.5 usando la fase E, homogeneizar y enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Nota: La formulación se prepara sin gas de protección. El embotellado debe tener lugar en empaques impermeables al oxígeno, por ejemplo, tubos de aluminio. Ejemplo 57: Uso de KBD en una crema de día protectora -
tipo 0/W AI 1% % Ingrediente (INCI) A 1.7 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 0.7 Cetearet-25 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearílico 6.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Adipato de Dibutilo B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA Disódico 1.0 Pantenol c.s. Conservador 70.6 Agua desm. C 4.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Copolímeros de Acrilato Sódico D 1.0 Ascorbilo Fosfato de Sodio 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-UvinuL A Plus E c.s. Hidróxido de Sodio AI 5% Ingrediente (INCI)
A 1.7 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 0.7 Cetearet-25 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearílico 6.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Adipato de Dibutilo B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA Disódico 1.0 Pantenol c.s. Conservador 66.6 Agua desm. C 4.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico, Copolímerosde Acrilato Sódico D 1.0 Ascorbilo Fosfato de Sodio 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus E c.s. Hidróxido de Sodio Preparación: Calentar las fases A y B por separado una de la otra a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Agitar la fase C en las fases A y B combinadas y homogeneizar otra vez. Enfriar con agitación a aproximadamente 40 °C. Añadir la fase D, ajustar el pH a
aproximadamente 6.5 usando la fase E, homogeneizar. Enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 58: Uso del KBD en una loción para limpieza facial - tipo 0/W AI 1% % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 10.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico 1.5 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 2.0 PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado B 3.5 Triglicérido Caprílico/Cáprico, Copolímeros de Acrilato Sódico C 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Conservador c.s. Aceite perfumado D 3.0 Policuaternio-44 0.5 Metosulfato de Cocotrimonio 0.5 Cetearet-25 2.0 Pantenol, Propilen Glicol 4.0 Propilen Glicol 0.1 EDTA Disódico 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus
60.7 Agua desm. AI 5% % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 10.0 Triglicerido Caprílico/Cáprico 1.5 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 2.0 PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado B 3.5 Triglicérido Caprílico/Cáprico, Copolímerosde Acrilato Sódico C 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Conservador c.s. Aceite perfumado D 3.0 Policuaternio-44 0.5 Metosulfato de Cocotrimonio 0.5 Cetearet-25 2.0 Pantenol, Propilen Glicol 4.0 Propilen Glicol 0.1 EDTA Disódico 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 56.7 Agua desm. Preparación: Disolver la fase A. Agitar la fase B en la fase A. Incorporar la fase C en las fases A y B combinadas.
Disolver la fase D, agitar en las fases A, B y C combinadas y homogeneizar. Agitar después por 15 min. Ejemplo 59: Uso del KBD en un aerosol para el cuidado diario del cuerpo AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 3.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Benzoato de Dietilamino Hidroxibenzoil Hexilo 1.0 Policuaternio-44 3.0 Propilen Glicol 2.0 Pantenol, Propilen Glicol 1.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 10.0 Octildodecanol 0.5 PVP 10.0 Triglicérido Caprílico/Cáprico 3.0 Benzoato de Alquilo de C12-C15 3.0 Glicerina 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.3 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 59.2 Alcohol AI 5%: % Ingrediente (INCI)
A 3.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Benzoato de Dietilamino Hidroxibenzoil Hexilo 1.0 Policuaternio-44 3.0 Propilen Glicol 2.0 Pantenol, Propilen Glicol 1.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 10.0 Octildodecanol 0.5 PVP 10.0 Triglicérido Caprílico/Cáprico 3.0 Benzoato de Alquilo de C12-C15 3.0 Glicerina 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.3 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 55.2 Alcohol Preparación: Pesar los componentes de la fase A y disolver hasta una solución transparente Ejemplo 60: Uso del KBD en un gel para cuidado de la piel AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 3.6 PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado 15.0 Alcohol
0.1 Bisabolol 0.5 Acetato de Tocoferilo c.s. Aceite perfumado B 3.0 Pantenol 0.6 Carbómero ^ 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 75.4 Agua desm. C 0.8 Trietanolamina AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 3.6 PEG-40 Aceite de Ricino Hidrogenado 15.0 Alcohol 0.1 Bisabolol 0.5 Acetato de Tocoferilo c.s. Aceite perfumado B 3.0 Pantenol 0.6 Carbómero 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 71.4 Agua desm. C 0.8 Trietanolamina Preparación: Disolver la fase A hasta una solución transparente. Permitir que la fase B se hinche y neutralizar
con la fase C. Agitar la fase A en la fase B homogeneizada y homogeneizar . Ejemplo 61: Uso del KBD en una loción para después de afeitarse AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Acetato de Tocoferilo 1.0 Bisabolol 0.1 Aceite perfumado 0.3 Crospolímero de Acrilatos/Acrilato de Alquilo de C10-C30 B 15.0 Alcohol 1.0 Pantenol 3.0 Glicerina 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.1 Trietanolamina 63.5 Agua desm. Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Acetato de Tocoferilo 1.0 Bisabolol
O .1 Aceite perfumado 0.3 Polímero reticulado de Acrilatos/Acrilato de Alquilo de C10-C30 B 15.0 Alcohol 1.0 Pantenol 3.0 Glicerina 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.1 Trietanolamina 59.5 Agua desm. Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Disolver la fase B, incorporar en la fase A y homogeneizar Ejemplo 62: Uso del KBD en una loción para después de tomar el sol AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 0.4 Crosspolymer de Acrilatos/Acrilato de Alquilo de C10-C30 15.0 Etilhexanoato de Cetearilo 0.2 Bisabolol 1.0 Acetato de Tocoferilo c.s. Aceite perfumado B 1.0 Pantenol 15.0 Alcohol
3.0 Glicerina 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 63.2 Agua desm. C 0.2 Trietanolamina Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 0.4 Polímero reticulado de Acrilatos/Acrilato de Alquilo de C10-C30 15.0 Etilhexanoato de Cetearilo 0.2 Bisabolol 1.0 Acetato de Tocoferilo c.s. Aceite perfumado B 1.0 Pantenol 15.0 Alcohol 3.0 Glicerina 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 59.2 Agua desm. C 0.2 Trietanolamina Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Agitar la fase B en la fase A con homogenización. Neutralizar con la fase C y homogeneizar otra vez. Ejemplo 63: Uso del KBD en una loción de protección
solar AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 4.5 Metoxicinamato de Etilhexilo 3.0 Octocrileno 2.5 Malato de Dialquilo de C12-13 0.5 Acetato de Tocoferilo 4.0 Poligliceril-3 Metil Glucosa Diestearato B 3.5 Isononanoato de Cetearilo 1.0 Copolímero de VP/Eicoseno 5.0 Isohexadecano 2.5 Malato de Dialquilo de C12-13 3.0 Dióxido de Titanio, Trymethoxycaprylylsilane C 5.0 Glicerina 1.0 Cetearil Sulfato de sodio 0.5 Goma de Xantano 61.7 Agua desm. D 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Fenoxietanol, Metil Parabeno, Etil Parabeno, Butil Parabeno, Propil Parabeno, Isobutil Parabeno
0.3 Bisabolol AI 5%: % Ingrediente (INCI)
A 4.5 Metoxicinamato de Etilhexilo 3.0 Octocrileno 2.5 Malato de Dialquilo de C12-13 0.5 Acetato de Tocoferilo 4.0 Poligliceril-3 Metil Glucosa Diestearato B 3.5 Isononanoato de Cetearilo 1.0 Copolímero de VP/Eicoseno 5.0 Isohexadecano 2.5 Malato de Dialquilo de C12-13 3.0 Dióxido de Titanio, Trymethoxycaprylylsilane C 5.0 Glicerina 1.0 Cetearil Sulfato de sodio 0.5 Goma de Xantano 57.7 Agua desm. D 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Fenoxietanol, Metil Parabeno, Etil Parabeno, Butil Parabeno, Propil Parabeno, Isobutil Parabeno 0.3 Bisabolol Preparación: Calentar los componentes de las fases A y B por separado unos de los otros a aproximadamente 80 °c. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Calentar la fase C a aproximadamente 80 °C y agitar en las fases A y B combinadas con homogenización. Enfriar a aproximadamente 40 °C con
agitación, añadir la fase D y homogeneizar otra vez. Ejemplo 64: Uso del KBD en una loción de protección solar - tipo 0/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 2.0 Cetearet-25 3.0 Tribehenina 2.0 Alcohol Cetearílico 2.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 1.0 Etilhexil Triazona 1.0 Copolímero de VP/Eicoseno 7.0 Miristato de Isopropilo B 5.0 oxido de Zinc, Trietilcaprililsilano C 0.2 Goma de Xantano 0.5 Hidróxietil Acrilato/Acrilodimetiltaurato de Sodio,
Escualano 60 0.2 EDTA Disódico 5.0 Propilen Glicol 0.5 Pantenol 60.9 Agua desm. D 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus
0.5 Fenoxietanol, Metil Parabeno, Butil Parabeno, Etil Parabeno, Propil Parabeno, Isopropil Parabeno
1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 2.0 Cetearet-25 3.0 Tribehenina 2.0 Alcohol Cetearílico 2.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Metoxicinamato de Etilhexilo 1.0 Etilhexil Triazona 1.0 Copolímero de VP/Eicoseno 7.0 Miristato de Isopropilo B 5.0 oxido de Zinc, Trietilcaprililsilano C 0.2 Goma de Xantano 0.5 Hidróxietil Acrilato/AcrilodimetilTaurato de Sodio, Escualano 60 0.2 EDTA Disódico 5.0 Propilen Glicol 0.5 Pantenol 56.9 Agua desm. D 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de
enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Fenoxietanol, Metil Parabeno, Butil Parabeno, Etil Parabeno, Propil Parabeno, Isopropil Parabeno 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol Preparación: Calentar la fase A a prox 80 °C, agitar en la fase B y homogeneizar por 3 min. Igualmente calentar la fase C a 80 °c y agitar en las fases A y B combinadas con homogenización. Enfriar a aproximadamente 40 °c, agitar en la fase D y homogeneizar otra vez. Ejemplo 65: Uso del KBD en una loción de protección solar - tipo 0/W Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 3.5 Cetearet-6, Alcohol Esterilico 1.5 Cetearet-25 7.5 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 0.5 Cera de abeja 3.0 Alcohol Cetearílico 10.0 Triglicérido Caprílico/Cáprico B 5.0 Dióxido de Titanio, Silica, Meticona, Alúmina C 3.0 Glicerina 0.2 EDTA Disódico
O .3 Goma de Xantano 1.0 Decil Glucósido 2.0 Pantenol, Propilen Glicol 56.3 Agua desm. D 3.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador Al 5%: % Ingrediente (INCI) A 3.5 Cetearet-6, Alcohol Esterílico 1.5 Cetearet-25 7.5 Metoxicinamato de Etilhexilo 2.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 0.5 Cera de abeja 3.0 Alcohol Cetearílico 10.0 Triglicérido Caprílico/Cáprico B 5.0 Dióxido de Titanio, Silica, Meticona, Alúmina
C 3.0 Glicerina 0.2 EDTA Disódico 0.3 Goma de Xantano 1.0 Decil Glucósido
2.0 Pantenol, Propilen Glicol 52.3 Agua desm. D 7.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Acetato de Tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Aceite perfumado c.s. Conservador Preparación: Calentar la fase A a aproximadamente 80 °C, agitar en la fase B y homogeneizar por 3 min. Igualmente calentar la fase C a 80 °C y agitar en las fases A y B combinadas con homogenización. Enfriar a aproximadamente 40 °C, agitar en la fase D y homogeneizar otra vez. Ejemplo 66: Uso del KBD en un bálsamo para los pies. AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Esterilico 2.0 Cetearet-25 5.0 Ceteril Etilhexanoato 4.0 Alcohol Cetilico 4.0 Estearato de Glicerilo 5.0 Aceite Mineral 0.2 Mentol 0.5 Alcanfor
B 69.3 Agua desm. c.s. Conservador C 1.0 Bisabolol 1.0 Acetato de Tocoferilo D 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 5.0 Extracto de Hamamelis AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Esterilico 2.0 Cetearet-25 5.0 Ceteril Etilhexanoato 4.0 Alcohol Cetílico 4.0 Estearato de Glicerilo 5.0 Aceite Mineral 0.2 Mentol 0.5 Alcanfor B 65.3 Agua desm. c.s. Conservador C 1.0 Bisabolol 1.0 Acetato de Tocoferilo D 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 5.0 Extracto de Hamamelis
Preparación: Calentar los componentes de las fases A y B por separado una de la otra a aproximadamente 80 CC. Agitar la fase B en la fase A con homogenización. Enfriar a aproximadamente 40 "C con agitación, añadir las fases C y D y después homogeneizar brevemente. Enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 67: Uso del KBD en una emulsión W/0 con bisabolol AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de Ricino Hidrogenado 8.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Miristato de Isopropilo 15.0 Aceite Mineral 0.3 Estearato de Magnesio 0.3 Estearato de Aluminio 2.0 PEG-45/Copolimero de Dodecil Glicol B 5.0 Glicerina 0.7 Sulfato de Magnesio 55.6 Agua desm. C 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Acetato de Tocoferilo 0.6 Bisabolol
AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de Ricino Hidrogenado 8.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Miristato de Isopropilo 15.0 Aceite Mineral 0.3 Estearato de Magnesio 0.3 Estearato de Aluminio 2.0 PEG-45/Copolímero de Dodecil Glicol B 5.0 Glicerina 0.7 Sulfato de Magnesio 51.6 Agua desm. C 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 0.5 Acetato de Tocoferilo Preparación: Calentar las fases A y B por separado una de la otra a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase
A y homogeneizar. Enfriar a aproximadamente 40 °C con agitación, añadir la fase C y homogeneizar brevemente otra vez. Enfriar a la temperatura ambiente con agitación. Lista de formulaciones para el dominio de enlace a la queratina de la patente - cuidado del cabello Ejemplo 68: Crema humectante para cuidado del cuerpo AI 1%:
% Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-25 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 3.0 Etilhexanoato de Cetearilo 1.0 Dimeticona 4.0 Alcohol Cetearílico 3.0 Estearato de Glicerilo SE 5.0 Aceite Mineral 4.0 Aceite de semillas de Simmondsia Chinensis (Jojoba) 3.0 Aceite Mineral, Alcohol de Lanolina B 5.0 Propilen Glicol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Pantenol 0.5 Silicato de Magnesio y Aluminio c.s. Conservador 65.5 Agua desm. C c.s. Aceite perfumado D c.s. Ácido Cítrico AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-25 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearilico 3.0 Etilhexanoato de Cetearilo
1.0 Dimeticona 4.0 Alcohol Cetearílico 3.0 Estearato de Glicerilo SE 5.0 Aceite Mineral 4.0 Aceite de semillas de Simmondsia Chinensis (Jojoba) 3.0 Aceite Mineral, Alcohol de Lanolina B 5.0 Propilen Glicol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus 1.0 Pantenol 0.5 Silicato de Magnesio y Aluminio q.s. Conservador 61.5 Agua desm. C c.s. Aceite perfumado D c.s. Ácido Cítrico Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80 °C. Prehomogeneizar brevemente la fase B, después agitar la fase B en la fase A y homogeneizar otra vez. Enfriar a aproximadamente 40 °C, añadir la fase C y homogeneizar cuidadosamente otra vez. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico. Ejemplo 69: Crema humectante para cuidado del cuerpo AI 1%: % Ingrediente (INCI)
A 6.0 PEG-7 Aceite de Ricino Hidrogenado 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Miristato de Isopropilo 7.0 aceite Mineral 0.5 Manteca de Karité (Butyrospermum Parkii) 0.5 Estearato de Aluminio 0.5 Estearato de Magnesio 0.2 Bisabolol 0.7 Cuaternio-18-Hectorita B 5.0 Dipropilen Glicol 0.7 Sulfato de Magnesio c.s. Conservador 62.9 Agua desm. C c.s. Aceite perfumado 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de Ricino Hidrogenado 10.0 Etilhexanoato de Cetearilo 5.0 Miristato de Isopropilo 7.0 aceite Mineral 0.5 Manteca de Karité (Butyrospermum Park¡¡) 0.5 Estearato de Aluminio
0.5 Estearato de Magnesio 0.2 Bisabolol 0.7 Cuaternio-18-Hectorite B 5.0 Dipropilen Glicol 0.7 Sulfato de Magnesio c.s. Conservador 58.9 Agua desm. C c.s. Aceite perfumado 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Enfriar a aproximadamente 40 °C con agitación, añadir la fase C y homogeneizar otra vez. Permitir el enfriamiento a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 70: Maquillaje liquido - tipo 0/W Al 1%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearílico 2.0 Cetearet-25 6.0 Estearato de Glicerilo 1.0 Alcohol Cetilico 8.0 Aceite Mineral 7.0 Etilhexanoato de Cetearilo
0.2 Dimeticona B 3.0 Propilen Glicol 1.0 Pantenol c.s. Conservador 61.9 Agua desm. C 0.1 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Aceite perfumado D 5.7 C.I. 77 891, Dióxido de titanio 1.1 Óxidos de Fierro AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Cetearet-6, Alcohol Estearílico 2.0 Cetearet-25 6.0 Estearato de Glicerilo 1.0 Alcohol Cetílico 8.0 Aceite Mineral 7.0 Etilhexanoato de Cetearilo 0.2 Dimeticona B 3.0 Propilen Glicol 1.0 Pantenol c.s. Conservador 57.9 Agua desm.
C 0.1 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aproximadamente 5% de Dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus c.s. Aceite perfumado D 5.7 C.I. 77 891, Dióxido de titanio 1.1 Óxidos de Fierro Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase a y homogeneizar. Enfriar a aproximadamente 40 °C con agitación, añadir las fases C y D y homogenizar cuidadosamente. Permitir el enfriamiento a la temperatura ambiente con agitación. Ejemplo 71 A continuación se describen las preparaciones dermocosméticas de acuerdo con la invención que comprende las moléculas efectoras de enlace a la queratina KBD-D preparadas de acuerdo con el ejemplo 20 (dominio de enlace a la queratina de acuerdo con la SEC ID NO.: 168) acopladas al ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil)benzoico (KBD-Uvinul A Plus). Las moléculas de enlace a la queratina especificadas se denominan en los siguientes ejemplos como dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus. El dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus se especifica en los ejemplos de abajo a manera de presentación de todas las otras moléculas de enlace a la queratina descritas arriba. Se apreciará por las
personas con experiencia en la técnica que todas las otras moléculas efectoras de enlace a la queratina especificadas de acuerdo con el ejemplo 20, también puedan ser preparadas y usadas en las preparaciones dadas a continuación. Las moléculas efectoras de enlace a la queratina especificadas se usan como solución acuosa de aproximadamente 5% en peso de fuerza. Los siguientes dados son partes en peso.
Crema en gel
Formulación de protección solar OW
Hidrodispersión
Emulsión WO de protección solar
Barras
Emulsión PIT
Crema en Gel
Formulación de Auto Bronceado OW
Maquillaje OW
Hidrodispersion de auto-bronceado
Hidrodispersión para después de tomar el sol
Emulsión Estabilizada con Sólidos (Emulsiones de Pickering)
Barras
Emulsiones PIT de Auto Bronceado
Gel aceitoso
Ejemplo 72 En las formulaciones de abajo, se describen las preparaciones cosméticas de protección solar que comprenden una combinación de al menos un pigmento inorgánico, preferiblemente óxido de zinc, y/o dióxido de titanio, dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus y otros filtros UV-A y UV-B orgánicos. Las formulaciones especificadas a continuación se preparan en las maneras acostumbradas conocidas por las personas con experiencia en la técnica. El contenido: moléculas efectoras de enlace a la queratína KBD-D-preparadas de acuerdo con el ejemplo 20 (dominio de enlace a la queratina de acuerdo con la SEC ID
NO.: 168) acopladas al ácido 2- (4-N,N-dietilamino-2-hidroxibenzoil) benzoico (KBD-Uvinul A Plus); del dominio de enlace a la queratina-Uvinul A Plus se refiere al 100% del ingrediente activo. El ingrediente activo de acuerdo con la invención se puede usar ya sea en forma pura o también en forma de una solución acuosa. En el caso de las soluciones acuosas, se debe ajustar el contenido de agua desmineralizada en la formulación particular.
Claims (18)
- REIVINDICACIONES 1. Un método para producir moléculas efectoras de enlace a la queratina mediante el acoplamiento de moléculas efectoras (i) que contienen al menos un grupo carboxilo o ácido sulfónico en un polipéptido de enlace a la queratina (ii) usado una molécula enlazadora (iii) la cual tiene al menos dos funcionalidades de acoplamiento las cuales pueden entrar en los enlaces elegidos del grupo que consiste de enlaces de amida, tioéster, tioéter, éster, esteres de ácido sulfónico, y sulfonamida, y carcaterizado en que (a) en un primer paso de acoplamiento, primero la molécula efectora (i) se enlaza con la molécula enlazadora (iii) vía el grupo carboxilo o ácido sulfónico, por medio de un enlace de éster o sulfonamida, y (b) en otro paso de acoplamiento, el producto de la reacción de (a) se acopla con el polipéptido de enlace a la queratina (ii) vía la funcionalidad de acoplamiento todavía libre de la molécula enlazadora (iii) .
- 2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado en que, el acoplamiento de la molécula efectora (iii) con la molécula efectora (i) descrito en (a) es una reacción de esterificación mediada por carbodiimida o cloruro de ácido.
- 3. El método de acuerdo con las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado en que, la molécula efectora (i) se elige del grupo que consiste de tintes, agentes fotoprotectores, vitaminas, provitaminas, carotenoides, antioxidantes y disgregadores de peróxido.
- 4. El método de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado en que, el polipéptido de enlace a la queratina (ii) tiene una afinidad de enlace a la piel humana, a la queratina del cabello o las uñas humanas.
- 5. El método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado en que, el polipéptido de enlace a la queratina (ii) usado (a) comprende al menos una de las secuencias de acuerdo con SEC ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102,104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136,138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170, o (b) corresponde a un polipéptido el cual es al menos 40% idéntico con al menos una de las secuencias de acuerdo con SEC ID NO.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66 , 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102,104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136,138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170, y puede enlazarse a la queratina.
- 6. El método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado en que, el polipéptido de enlace a la queratina (ii) usado está codificado por una molécula de ácido nucleico que comprende al menos las moléculas de ácido nucleico elegidas del grupo que consiste de: a) moléculas de ácidos nucleicos, las cuales codifican los polipéptidos que comprenden las secuencia mostradas en las SEC ID NO.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66 , 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170; b) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales comprenden al menos un polinucleótido de las secuencias mostradas en las SEC ID NO.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 o 169; c) las moléculas de ácidos nucleicos las cuales codifican un polipéptido de acuerdo con las secuencias SEC ID NO.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170; d) las moléculas de ácidos nucleicos con una secuiencia del ácido nucleico correspondiente a al menos una de las secuencias de acuerdo con SEC ID NO.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61,. 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 o 169 o las moléculas de ácidos nucleicos derivadas de las mismas por substitución eliminación o inserción, las cuales codifican polipéptidos los cuales son al menos 40% idénticos con al menos una de las cuales de acuerdo con la SEC ID NO.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88,90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170 y que pueden enlazarse a la queratina; e) moléculas de ácidos nucleicos las cuales codifican polipéptidos los cuales son reconocidos por un anticuerpo monoclonal dirigido contra un polipéptido el cual es codificado por las moléculas de ácidos nucleicos de acuerdo con (a) a (c) ; f) moléculas de ácidos nucleicos que codifican proteínas de enlace a la queratina las cuales, bajo condiciones severas, se hibridan con las moléculas de ácidos nucleicos de acuerdo con (a) a (c) ; g) moléculas de ácidos nucleicos para las proteínas de enlace a la queratina las cuales se pueden aislar de un banco de ADN usando una molécula de ácidos nucleico de acuerdo con (a) a (c) o fragmentos o partes de las mismas que comprenden al menos 15 nucleótidos, como sonda, bajo condiciones de hibridación severas; y h) moléculas de ácidos nucleicos las cuales pueden ser producidas by retro-traducción de una de las secuencias de aminoácidos mostradas en las secuencias SEC ID NO. : acid sequences shown in the sequences SEO ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134,136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 o 170.
- 7. El método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado en que, la molécula enlazadora (iii) tiene al menos dos diferentes funcionalidades de acoplamiento.
- 8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizado en que, la molécula enlazadora (iii) tiene un grupo maleimida. 9. El método de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizado en que, se usa una molécula enlazadora (iii) de la fórmula 1
- Fórmula 1 donde "n" corresponde a un entero entre 0 y 40.
- 10. El método de acuerdo con la reivindicación 9, caracterizado en que, la molécula enlazadora (iii) es un maleimidoalcanol .
- 11. El método de acuerdo con la reivindicación 10, caracterizado en que, la molécula enlazadora (iii) es maleimidopentanol .
- 12. El método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado en que, i) el polipéptido de enlace a la queratina usado comprende una de las secuencias de acuerdo con la SEC ID NO.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 166, 168 o 170, j) la molécula enlazadora (iii) usada es maleimidopentanol, y k) la molécula efectora (i) es ácido 2- (4-dietilamino-2-hidroxibenzoil ) benzoico .
- 13. Una molécula de enlace a la queratina, caracterizada en que la molécula efectora (i) se acopla directamente con el polipéptido de enlace a la queratina (ii) vía una molécula enlazadora (iii) , con la provisión de que la molécula (iii) enlazadora no sea una maleimida, el polipéptido de enlace a la queratina (ii) no corresponda a la SEC ID NO.: 166, y la molécula efectora (ii) no sea un tinte fluorescente.
- 14. Una molécula efectora de enlace a la queratina, caracterizada en que, se produce de acuerdo con la reivindicación 12.
- 15. El uso en dermocosméticos de las moléculas efectoras de enlace a la queratina de acuerdo con las reivindicaciones 13 y 14 o producidas de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 12.
- 16. El uso de acuerdo con la reivindicación 15, donde los dermocosméticos son una composición para protección de la piel, una composición para cuidado de la piel, .una composición para limpieza de la piel, una composición para protección del cabello, una composición para cuidado del cabello, una composición para limpieza del cabello, un colorante para el cabello o un cosmético decorativo.
- 17. Un compuesto de acuerdo con la fórmula 2, Fórmula 2 caracterizado en que, "n" es un entero entre 0 y 40.
- 18. Un dermocosmético, caracterizado en que, comprende una molécula efectora de enlace a la queratina de acuerdo con las reivindicaciones 13 y 14 o producida de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 12.
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