MX2008001084A - Composiciones para el tratamiento o prevencion del deterioro, lesion o dano de tejido debido a insuficiencia cardiaca congestiva. - Google Patents

Abstract

Un metodo de tratamiento para tratar, prevenir, inhibir o reducir el deterioro, lesion o dano de tejido a enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva, o para restaurar tejido adversamente afectado por dicha enfermedad, en un sujeto, incluye la administracion a un sujeto de una cantidad efectiva de una composicion que incluye un agente peptido que incluye la secuencia de aminoacido LKKTET o LKKTNT, una variante conservativa de esta, o un agente peptido que estimula la produccion de un peptido LKKTET o LKKTNT, o una variante conservativa de esta, en el tejido.

Description

COMPOSICIONES PARA EL TRATAMIENTO O PREVENCIÓN DEL DETERIORO, LESIÓN O DAÑO DE TEJIDO DEBIDO A INSUFICIENCIA CARDIACA CONGESTIVA Campo de la Invención La presente invención se relaciona con el campo del tratamiento o prevención del deterioro, lesión o daño de tejido debido a insuficiencia cardiaca congestiva.

Antecedentes de la Invención La presente invención reivindica el beneficio de la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos de América número 60/702,269, presentada el 26 de julio de 2005.

La enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva (CHF) se manifiesta en un desequilibrio en la función de bombeo del corazón en la cual el corazón falla en mantener la circulación de la sangre de manera adecuada. La manifestación más severa de la CHF, edema pulmonar, se desarrolla cuando este desequilibrio causa un aumento en el fluido pulmonar secundario que se filtra de las capilaridades pulmonares dentro del intersticio y alvéolos del pulmón. La CHF puede ser categorizada como insuficiencia ventricular hacia atrás o hacia adelante. La insuficiencia hacia atrás es secundaria a la presión venosa sistémica elevada, mientras que la insuficiencia ventricular izquierda es secundaria al flujo reducido hacia adelante dentro de la aorta y la circulación sistémica. Adicionalmente, la insuficiencia cardiaca puede ser subdividida en una disfunción sistólica y diastólica. La disfunción sistólica se caracteriza por un ventrículo izquierdo dilatado con contractilidad dañada, mientras que la disfunción diastólica ocurre en un ventrículo izquierdo normal o intacto con una capacidad dañada para relajarse y recibir así como expulsar sangre. La clasificación funcional de la New York Heart Association de la CHF es una de las más útiles. La clase I describe un paciente que no está limitado con actividad física normal por síntomas. La clase II ocurre cuando la actividad física normal resulta en fatiga, disnea, u otros síntomas. La clase III se caracteriza por una limitación marcada en la actividad física normal. La clase IV es definida por síntomas en descanso o con cualquier actividad física.

La CHF se resume mejor como un desequilibrio en las fuerzas de Starling o un desequilibrio en el grado de elasticidad de la fibra diastólica terminal proporcional al trabajo mecánico sistólico gastado en una contracción consiguiente. Este desequilibrio puede ser caracterizado como una disfunción entre los mecanismos que mantienen al intersticio y los alvéolos secos y las fuerzas opuestas que son responsables de la transferencia de fluidos al intersticio. La conservación de la presión oncótica del plasma (generalmente aproximadamente de 25 mm Hg) mayor que la presión capilar pulmonar (aproximadamente de 7-12 mm Hg), conservación del tejido conectivo y barreras celulares relativamente impermeables a las proteínas del plasma, y la conservación de un extenso sistema linfático son los mecanismos que mantienen al intersticio y a los alvéolos secos. Las fuerzas opuestas responsables de la transferencia de fluidos al intersticio incluyen la presión capilar pulmonar y la presión oncótica del plasma. Bajo circunstancias normales, cuando el fluido es transferido dentro del intersticio del pulmón con un flujo linfático aumentado, no ocurre un aumento en el volumen del intersticio. Cuando la capacidad del drenaje linfático es excedida, sin embargo, se acumula líquido en los espacios intersticiales que rodean a los bronquiolos y la vasculatura pulmonar, creando de este modo la CHF. Cuando un fluido y una presión aumentados causan una vía dentro del espacio intersticial alrededor de los alvéolos y una ruptura de las uniones de membrana alveolares, el fluido inunda los alvéolos y lleva al edema pulmonar. En los Estados Unidos De América, más de 3 millones de personas tienen CHF, y más de 400,000 nuevos pacientes la presentan anualmente. La prevalencia de la CHF es de 1-2% de la población general. Aproximadamente 30-40% de los pacientes con CHF son hospitalizados cada año. La CHF es el grupo líder relacionado con diagnóstico entre los pacientes hospitalizados mayores de 65 años. En 1971 se reportó una proporción de mortalidad de 5 años después del diagnostico como del 60% en hombres y 45% en mujeres. En 1991, los datos mostraron que la proporción de mortalidad de 5 años por CHF permaneció esencialmente sin cambios, con una sobre vivencia media de 3.2 años para hombres y 5.4 años para mujeres. Esto puede ser secundario a una población de los Estados Unidos de América que envejece con una mortalidad descendente debido a otras enfermedades.

La causa más común de muerte por CHF es la insuficiencia cardiaca progresiva, pero la muerte súbita puede contar hasta por el 45% de las muertes totales. Después de auditar datos en 4606 pacientes hospitalizados con CHF entre 1992-1993, la proporción de mortalidad total en el hospital fue del 19%, con 30% de las muertes ocurriendo a partir de causas no cardiacas. Aún existe una necesidad en la técnica de métodos de tratamiento para tratar, prevenir, inhibir o reducir el deterioro, lesión o daño de tejidos debido a la insuficiencia cardiaca congestiva.

Compendio de la Invención De acuerdo con un aspecto, un método de tratamiento para tratar, prevenir, inhibir o reducir el deterioro, lesión o daño de tejidos debido a la enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva, o para restaurar tejido afectado adversamente por dicha enfermedad, en un sujeto, comprende la administración a un sujeto con la necesidad de tal tratamiento, de una cantidad efectiva de una composición que comprende un agente péptido que comprende la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT, una variante conservativa de ésta, o un agente estimulante que estimule la producción de un péptido de LKKTET o LKKTNT, o una variante conservativa de éste, en dicho tejido, de forma tal que inhiba dicho deterioro, lesión o daño del tejido debido a la enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva, o que restaure el tejido afectado adversamente por dicha enfermedad.

Descripción Detalla de la Invención La insuficiencia cardiaca congestiva, también llamada insuficiencia cardiaca, es un desorden en el cual el corazón pierde la capacidad de bombear sangre de manera eficiente y ya no puede satisfacer la demanda normal que recae sobre este. Como una consecuencia de las condiciones que dañan o debilitan el músculo del corazón y causan que los ventrículos se estiren (dilaten), el bombeo insuficiente no mueve la sangre eficientemente a través de todo el sistema circulatorio. La sangre comienza a acumularse, aumentado la presión en los vasos sanguíneos y forzando al fluido desde los vasos sanguíneos dentro de los tejidos del cuerpo. Esta condición puede afectar el lado derecho, el lado izquierdo o ambos lados del corazón. Típicamente, la insuficiencia cardiaca comienza a empeorar (insuficiencia cardiaca del lado izquierdo/insuficiencia cardiaca ventricular izquierda), la contra presión de la sangre fuerza al fluido a recolectarse en los pulmones (edema pulmonar). Este fluido extra en los pulmones hace más difícil que las vías respiratorias se expandan durante la inhalación. La respiración se hace más difícil y ocurre la falta de aliento (disnea). Cuando el lado derecho del corazón comienza a fallar (insuficiencia cardiaca del lado derecho), hay una retro presión de la sangre intentando entrar al corazón causando que el fluido se recolecte en los pies, tobillos y piernas inferiores. Conforme la insuficiencia cardiaca empeora, las piernas superiores se hinchan y eventualmente el abdomen recolecta fluidos (ascites). El aumento de peso acompaña a la retención de fluidos. La hinchazón esponjosa (edema periférico) es un signo de insuficiencia cardiaca derecha, especialmente si el edema es un edema punteado. Esta acumulación de fluidos en los pulmones, piernas, tobillos, hígado y abdomen es la parte congestiva de la insuficiencia cardiaca. El desarrollo de la CHF es progresivo y generalmente es una condición crónica, de largo plazo, aunque esta puede desarrollarse repentinamente después de un paro cardiaco o una enfermedad inflamatoria del músculo del corazón, tal como una cardiomiopatía restrictiva o dilatada, o similares. La cardiomiopatía dilatada (congestiva) es la forma más común y ocurre debido al alargamiento y estiramiento (dilatación cardiaca) de la cavidad del corazón, debilitando al corazón de forma que bombee anormalmente. También pueden ocurrir ritmos de corazón anormales (arritmias) y alteraciones de la conducción eléctrica del corazón. La causa de esta condición no se conoce en muchos casos, pero esta puede ser causada por un virus, enfermedades autoinmunes tales como artritis reumatoide, y el consumo de alcohol en exceso. Adicionalmente, la sangre fluye más lentamente y de manera turbulenta a través de un corazón agrandado y arrítmico, conduciendo a la formación de coágulos de sangre. La Cardiomiopatía restrictiva es el tipo menos común de cardiomiopatía y se desarrolla cuando el músculo del corazón dañado es reemplazado por una cicatriz fibrosa y tejido grasoso. El lado derecho del corazón, incluyendo el atrio puede engrosarse primero y después dilatarse, esto es, volverse más delgado. Esto puede conducir a una actividad eléctrica desordenada y en algunos casos con la acción de bombeo del corazón. Para la mayoría los ventrículos se vuelven tan rígidos que es difícil para ellos llenarse de sangre entre las contracciones. La CHF se vuelve más común con una edad avanzada. Los factores de riesgo incluyen obesidad, diabetes, uso de tabaco, abuso de alcohol, uso de cocaína. Etiología La causa más común de la insuficiencia cardiaca congestiva es la enfermedad de arterias coronarias (arterosclerosis), la cual debilita al corazón dejando algunas áreas del miocardio privadas crónicamente de sangre rica en oxígeno y nutrientes. Consecuentemente, estas áreas del corazón bombean menos vigorosamente. En muchos casos, el flujo de sangre al miocardio es solo suficiente para mantener al músculo vivo pero no funcionando bien. En otros casos, ocurre un paro cardiaco cuando el flujo de sangre es completamente bloqueado hacia un área del músculo del corazón. Las regiones del miocardio muertas debilitan la capacidad total del corazón para bombear. Otra causa importante de la CHF es la hipertensión, que resulta en la insuficiencia cardiaca ventricular izquierda. Si la presión sanguínea es alta, el corazón tiene que trabajar más de lo que debería para hacer circular la sangre a través del cuerpo. Con el paso del tiempo, el músculo del corazón puede volverse más grueso para compensar el trabajo extra que debe llevar a cabo, pero con ninguna o poca utilidad. En algunos casos el corazón se agrandará. Eventualmente, el músculo del corazón puede volverse ya sea muy rígido o demasiado débil para bombear la sangre de manera efectiva. Otras causas funcionales o estructurales de la insuficiencia cardiaca incluyen enfermedad de las válvulas del corazón (incompetente o estenótica), enfermedad del corazón congénita, distrofinopatías, cardiomiopatía dilatada idiopática, (enfermedad/daño/debilidad del músculo del corazón de origen desconocido), arritmias serias prolongadas, y enfermedad del pulmón (por ejemplo, hipertensión pulmonar arterial). Clasificación de la CHF Insuficiencia cardiaca sistólica: La acción de bombeo del ventrículo izquierdo se reduce o debilitada causando que pierda su capacidad de contraerse vigorosamente. Una medida clínica común de la función ventricular izquierda es la fracción de expulsión. Los pacientes con insuficiencia cardiaca sistólica tienen una fracción de expulsión disminuida de menos de 50% (usualmente alrededor de 40% o menos). Una fracción de expulsión normal es mayor de 50%. Insuficiencia cardiaca diastólica: El ventrículo izquierdo parece contraerse normalmente pero ha perdido su capacidad de relajarse o de llenarse completamente (esto es, está rígido, o menos flexible, cuando se está relajando o llenando con sangre). Esto impide que la sangre llene el corazón y produce una acumulación dentro de los pulmones. La insuficiencia cardiaca diastólica es más común en individuos con edades por arriba de los 75. En la insuficiencia cardiaca diastólica la fracción de expulsión es normal. Sin estar ligados a ninguna teoría, los péptidos secuestradores de actina tales como la timosina beta 4 (Tß4 o TB4) y otros agentes que incluyen péptidos o fragmentos de péptidos secuestradores de actina que contienen la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT o variantes conservativas de éstas, promueven la reversión o prevención del deterioro, lesión o daño de tejido debido a enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva. La timosina beta 4 se identificó inicialmente como una proteína que es sobre-regulada durante la migración y diferenciación de células endoteliales in vitro. La timosina beta 4 fue aislada originalmente a partir del timo y es un polipéptido ubicuo de 43 aminoácidos y 4.9 kDa, identificada en una variedad de tejidos. Se le han atribuido varios papeles a esta proteína incluyendo un papel en una diferenciación y migración de célula endotelial, diferenciación de célula T, secuestro de actina, vascularización y curación de heridas. De acuerdo con una modalidad, la invención es un método de tratamiento para tratar, prevenir, inhibir o reducir el deterioro, lesión o daño de tejidos debido a la enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva, o para restaurar el tejido afectado de manera adversa por dicha enfermedad, en un sujeto, el cual comprende la administración a un sujeto en necesidad de tal tratamiento, de una cantidad efectiva de una composición que comprende un agente péptido, el cual puede ser un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT, o una variante conservativa de ésta que tiene una actividad inhibitoria de la enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva, preferiblemente Timosina ß4, y/o isoformas de Tß4, análogos o derivados, incluyendo KLKKTET, LKKTETQ, Tß4 oxidada, variantes de terminación N de Tß4, variantes de terminación C de Tß4 y similares. En las modalidades preferidas, el deterioro, lesión o daño de tejidos comprende cuando menos uno de: un aumento en el tamaño o masa del corazón, aumento en el tamaño o masa del tejido del corazón, engrosamiento del músculo del corazón, o edema pulmonar. Las composiciones que pueden ser usadas de acuerdo con la presente invención incluyen agentes péptidos tales como Timosina ß4 (Tß4), y/o isoformas de Tß4, análogos o derivados, incluyendo Tß4 oxidada, variantes con terminación N de Tß4, variantes con terminación C de Tß4 y antagonistas de Tß4, polipéptidos o fragmentos de péptido que comprenden o consisten esencialmente en la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT, o variantes conservativas de esta, que tienen actividad inhibitoria de la enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva. La Solicitud de Patente Internacional No. PCT/US99/17282, incorporada aquí como referencia, describe isoformas de Tß4 las cuales pueden ser útiles de acuerdo con la presente invención, así como también la secuencia de aminoácidos LKKTET y variantes conservativas de esta, las cuales pueden ser utilizadas con la presente invención. La solicitud de Patente Internacional No. PCT/GB99/00833 (WO 99/49883), incorporada aquí como referencia, describe Timosina ß4 oxidada la cual puede ser utilizada de acuerdo con la presente invención. Aunque la presente invención es descrita principalmente aquí con respecto a las isoformas de Tß4 y Tß4, deberá entenderse que la siguiente descripción tiene la intención de ser igualmente aplicable a la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT, péptidos y fragmentos que comprenden o consisten esencialmente en LKKTET o LKKTNT, variantes conservativas de esta que tienen actividad inhibidora de la enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva y/o isoformas de Tß4, análogos o derivados, que incluyen Tß oxidada, variantes con terminación N de Tß4, variantes con terminación C de Tß4 y similares. En una modalidad, la invención provee un método de tratamiento para tratar, prevenir, inhibir o reducir el deterioro, lesión o daño de tejido debido a la enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva, o para restaurar tejido afectado adversamente por dicha enfermedad, en un sujeto, poniendo en contacto el tejido cardiaco con una cantidad efectiva de la composición la cual contiene un agente péptido tal como se describe aquí. El contacto puede ser directo o de manera sistémica. Ejemplos de la administración directa incluyen, por ejemplo, poner en contacto el tejido, por medio de aplicación directa o inhalación, con una solución, loción, pomada, gel, crema, pasta, rocío, suspensión, dispersión, hidrogel, ungüento, espuma o aceite que comprende un agente péptido tal como se describe aquí mismo. La administración sistémica incluye, por ejemplo inyecciones intramusculares, intraperitoneales, intravenosas de una composición que contiene un agente péptido tal como se describe aquí, en un portador farmacéuticamente aceptable tal como agua para la inyección. Los agentes péptidos para su uso en la invención, tal como se describen aquí, pueden ser administrados en cualquier cantidad efectiva. Por ejemplo, un agente péptido tal como se describe aquí puede ser administrado en dosis dentro del rango de aproximadamente 0.0001-1,000,000 de microgramos, más preferiblemente en cantidades dentro del rango de aproximadamente 0J -5,000 microgramos, más preferiblemente dentro del rango de aproximadamente 1-30 microgramos. Una composición de acuerdo con la presente invención puede ser administrada diariamente, cada tercer día, cada tercera semana, cada tercer mes, etc., con una aplicación singular o aplicaciones múltiples por día de administración, tal como aplicaciones 2, 3, 4 o más veces por día de administración. Han sido identificadas muchas isoformas de Tß4 que tienen aproximadamente 70%, o aproximadamente 75%, o aproximadamente 80% o más de homología con la secuencia de aminoácidos conocida de la Tß4. Tales isoformas incluyen, por ejemplo, Tß4ala, Tß9, TßlO, Tßl l, Tß412, Tßl3, Tßl4 y Tßl5. De igual manera que la Tß4, se ha demostrado que las isoformas TßlO y Tßl5, secuestran la actina. Las Tß4, TßlO y Tß 15, así como estas otras isoformas comparten una secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT, que parece estar involucrada en la mediación del secuestro o la unión de la actina. Si bien no se desea estar ligado a ninguna teoría particular, la actividad de los agentes de péptido como los que se describen aquí puede deberse, cuando menos en parte, a la actividad anti-inflamatoria y/o actividad moduladora de la actina, de dichos agentes. La Tß4 modula la polimerización de la actina (por ejemplo, parece ser que la ß-timosina despolimeriza la F-actina mediante el secuestro de la actina G libre). La capacidad de la Tß4 para modular la polimerización de la actina puede deberse a su capacidad de unirse a o de secuestrar la actina a través de la secuencia LKKTET o LKKTNT. De esta manera, como con la Tß4, otras proteínas que son anti-inflamatorias y/o se unen o secuestran a la actina, o que modulan la polimerización de la actina, incluyendo a las isoformas de la Tß4 que tienen la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT, son probablemente efectivas, solas o en combinación con la Tß4, como se establece aquí mismo. Agentes de péptido como se describen aquí, tales como la Tß4 e isoformas de Tß4, disminuyen la actividad de caspasa y citoquina, y quimiocina inflamatoria. Por lo tanto, se contempla de manera específica que isoformas de la Tß4, conocidas tales como la Tß4ala, Tß9, TßlO, Tßl l, Tß412, Tßl3, Tßl4 y Tßl5, así como también las isoformas de la Tß4 que aún no han sido identificadas, serán útiles en los métodos de la invención. Como tales, las isoformas de la Tß4 son útiles en los métodos de la invención, incluyendo los métodos llevados a la práctica en un sujeto. La invención por lo tanto además provee composiciones farmacéuticas que comprenden la Tß4, así como también las isoformas de Tß4, tales como Tß4ala, Tß9, TßlO, Tßl l, Tßl2, Tßl3, Tßl4 y Tßl5, y un portador farmacéuticamente aceptable. Además, otras proteínas o agentes que tienen actividad anti-inflamatoria y/o capacidad de secuestrar o de unirse a la actina, o que pueden movilizar la actina o modular la polimerización de la actina, como se demostró en un ensayo adecuado de secuestro, unión, movilización o polimerización, o como se identificó mediante la presencia de una secuencia de aminoácidos que media la unión de la actina, tal como LKKTET o LKKTNT, por ejemplo, pueden de manera similar ser empleados en los métodos de la invención. Tales proteínas pueden incluir al gelsolin, proteína de unión de la vitamina D (DBP), profilin, cofilin, depactin, Dnasel, vilin, fragmin, severin, proteína de recubrimiento coronal, ß-actinin, y acumentin, por ejemplo. En virtud de que tales métodos incluyen aquellos que se practican en un sujeto, la invención además provee composiciones farmacéuticas que comprenden gelsolin, proteína de unión de la vitamina D (DBP), profilin, cofilin, depactin, Dnasel, vilin, fragmin, severin, proteína de recubrimiento coronal, ß-actinin, y acumentin como se establece aquí mismo. De esta manera, la invención incluye el uso de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT y variantes conservativas de éstas.

Como se utiliza aquí, el término "variante conservativa" o las variaciones gramaticales de ésta, denota el reemplazo de un residuo aminoácido por otro residuo biológicamente similar. Los ejemplos de las variantes conservativas incluyen el reemplazo de un residuo hidrofóbico tal como isoleucina, valina, leucina o metionina, por otro, el reemplazo de un residuo polar por otro, tal como la substitución de arginina por lisina, ácido glutámico por ácido aspártico, o glutamina por asparragina, y similares. La Tß4 ha sido ubicada en una cantidad de tejidos y tipos de células y, de esta forma, agentes que estimulen la producción de un péptido de LKKTET o LKKTNT tal como la Tß4 u otro agente de péptido como se describe aquí mismo, pueden agregarse a o comprender una composición para efectuar la producción de un agente de péptido a partir de un tejido y/o una célula. Tales agentes de estimulación pueden incluir miembros de la familia de factores de crecimiento, tales como el factor de crecimiento similar a insulina (IGF-1), factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento epidemial (EGF), factor beta de crecimiento de transformación (TGF-ß), factor de crecimiento de fibroblastos básicos (bFGF), timosina al (Tal) y factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Más preferiblemente, el agente de estimulación es el factor beta de crecimiento de transformación (TGF-ß) u otros miembros de la súper familia del TGF-ß. De acuerdo con una modalidad, se tratan sujetos con un agente de estimulación que estimula la producción en el sujeto de un agente de péptido como se define aquí mismo. Adicionalmente, otros agentes que ayuden en la reducción del deterioro, lesión o daño del tejido debido a enfermedad de insuficiencia cardiaca congestiva, o al restablecimiento del tejido afectado de manera adversa por dicha enfermedad, pueden ser agregados a una composición conjuntamente con un agente de péptido como se describe aquí mismo. Por ejemplo, y de ninguna manera en forma de limitación, un agente de péptido como se describe aquí mismo solo o en combinación puede ser agregado en combinación con uno o más de los siguientes agentes: antibióticos, VEGF, KGF, FGF, PDGF, TGF-ß, IGF-1, IGF-2, IL-1, protimosina a y/o timosina al en una cantidad efectiva.

La invención también incluye una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente de péptido como se describe aquí mismo en un portador farmacéuticamente aceptable. Tales portadores incluyen aquellos enlistados aquí. La dosis real de reactivo, formulación o composición que proporciona tratamiento puede depender de muchos factores, incluyendo la talla y salud del sujeto. Sin embargo, las personas con conocimientos normales en la técnica pueden usar las enseñanzas descritas en los métodos y técnicas para la determinación de las dosis clínicas como se describe en el documento PCT/US99/17282, supra, y las referencias que se citan allí mismo, para determinar la dosis apropiada de uso. Las formulaciones adecuadas pueden incluir un agente de péptido como se describe aquí mismo en una concentración dentro del intervalo de aproximadamente 0.001 a 50% en peso, más preferiblemente dentro del intervalo de aproximadamente 0.01 a 0.1% en peso, más preferiblemente aproximadamente 0.05% en peso. Los planteamientos terapéuticos descritos aquí mismo involucran varias rutas de administración o repartición de un agente de péptido como se describe aquí mismo, incluyendo cualesquiera técnicas de administración convencionales (por ejemplo, pero no limitadas a, la administración directa, inyección local, inhalación, administración sistémica, etc.) a un sujeto. Los métodos y composiciones que utilizan o contienen un agente péptido como se describió aquí mismo pueden ser formuladas en composiciones farmacéuticas mediante su mezcla con excipientes o portadores no tóxicos y farmacéuticamente aceptables. La invención incluye el uso de anticuerpos que interactúan con, mejoran o inhiben un agente de péptido como se describió aquí mismo. Se proveen anticuerpos que consisten esencialmente en anticuerpos monoclonales acumulados con diferentes especificidades epitópicas, así como también distintas preparaciones de anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos monoclonales son preparados a partir de fragmentos de la proteína que contienen antígeno, mediante métodos que se conocen bien por aquellos capacitados en la técnica como se describe en el documento PCT/US99/17282, supra. El término anticuerpo como se utiliza en esta invención significa que incluye anticuerpos monoclonales y policlonales.

En todavía otra modalidad, la invención provee un método de tratamiento de un sujeto mediante la administración de una cantidad efectiva de un agente de estimulación que modula la expresión de genes. El término "modular" se refiere a la inhibición o supresión de la expresión cuando un agente de péptido como se describe aquí mismo es sobre expresado, y la inducción de la expresión cuando un agente de péptido como se describió aquí mismo es hipo expresado. El término "cantidad efectiva" significa aquella cantidad de agente de estimulación que es efectiva en la modulación de la expresión de genes de un agente de péptido como se describió aquí mismo, resultando en la reducción de los síntomas del deterioro, lesión o daño de tejido debido a una enfermedad por insuficiencia cardiaca congestiva, o el restablecimiento del tejido afectado de manera adversa por dicha enfermedad. Un agente de estimulación que modula la expresión de genes de un agente de péptido como se describió aquí mismo puede ser un poli nucleótido, por ejemplo. El poli nucleótido puede ser un antisentido, un agente triplex, o una ribozima. Por ejemplo, puede utilizarse un antisentido dirigido a la región de gene estructural o a la región promotora de un agente de péptido como se describió aquí mismo. El agente de estimulación el cual modula la expresión de genes de un agente de péptido como se describió aquí mismo también puede ser un pequeño ARNs de interferencia (siRNA). En otra modalidad, la invención provee un método para la utilización de compuestos que modulan la actividad de un agente de péptido como se describió aquí mismo. Los compuestos que afectan la actividad de un agente de péptido como se describió aquí mismo (por ejemplo, antagonistas y agonistas) incluyen péptidos, péptido miméticos, polipéptidos, compuestos químicos, minerales tales como el zinc y agentes biológicos. Un método de tamisaje para un agente de estimulación como se describió aquí mismo comprende el poner en contacto tejido de corazón que presenta enfermedad por insuficiencias cardiaca congestiva, con un compuesto candidato; y medir la actividad en dicho tejido de un péptido de LKKTET o LKKTNT, en donde un aumento de actividad de dicho péptido en dicho tejido, en comparación con un nivel de actividad de dicho péptido en un tejido correspondiente que carece de dicho compuesto candidato, indica que dicho compuesto es capaz de inducir dicho agente de estimulación.

Ejemplo 1 Estudio de la Timosina ß4 en el Infarto de Miocardio de Ratón (MI) Modelo de Insuficiencia Cardiaca Obietivo: El objetivo del presente estudio fue el de evaluar el efecto de la timosina ß4 en el modelo de insuficiencia cardiaca inducido por MI en ratones. Modelos Los procedimientos usados en este estudio son exactamente los mismos que se reportan en Nature (432:466-472. 2004). Brevemente, ratones C57 negros, de 14 semanas de edad, fueron usados en este estudio. A los ratones se les administró timosina ß4 (Bachem, Lote # FTHYB40501B) (150 µg/ratón) inmediatamente después del infarto al miocardio y después cada tres días por 4 semanas por inyección intraperitoneal. Los parámetros de este estudio incluyeron la morfología cardiaca y el funcionamiento por ecocardiografía (eco), medición de la función cardiaca invasiva usando un catéter Millar, proporción de sobreviviencia y análisis histoquímico. Un ataque al corazón (infarto al miocardio) puede conducir rápidamente al paro cardiaco (cero latidos del corazón) o daño permanente del ventrículo izquierdo. Si el daño es lo suficientemente malo, regiones del corazón pueden no funcionar apropiadamente, lo cual puede llevar a la insuficiencia cardiaca. En Nature 2004 (citada arriba) se mostró que la TB4 era capaz de mejorar el acortamiento fraccionario y la fracción de expulsión cuando se administraba inmediatamente después de un ataque al corazón en el modelo de ratón. En este caso la medicina fue administrada con precisión y se demostraron mejorías funcionales. Aunque las mejorías funcionales son críticas para la sobre vivencia del paciente, no se presentó ningún dato que sugiriera que la TB4 fuera capaz de atenuar o mejorar el resultado que sigue al daño importante que resultó del ataque al corazón inducido en el modelo animal. Consecuentemente, no fue obvio que la TB4 fuera capaz de tratar una insuficiencia cardiaca resultante que siguiera en la animales sobrevivientes. El presente estudio sugiere que la TB4 es efectiva en el tratamiento de mamíferos con insuficiencia cardiaca/ insuficiencia cardiaca congestiva (CHF). En este caso la TB4 también fue administrada de manera aguda. Sin embargo, en la práctica la medicina debe ser administrada de manera aguda y/o crónicamente después de un Infarto Agudo al Miocardio (AMI) o crónicamente en pacientes con insuficiencia cardiaca progresiva para detener el avance y empeoramiento de los síntomas de la CHF. Mejoras Hemodinámicas Reducciones de la Presión Ventricular: El tratamiento con TB4 mostró una tendencia en el mejoramiento (esto es, una reducción) de la presión sistólica ventricular izquierda (LVSP) en seguida a una lesión/daño en el músculo del corazón. La hipertensión y/o presiones sistólicas ventriculares aumentadas es/son una causa subyacente de ciertos tipos de insuficiencia cardiaca congestiva. El tratamiento con TB4 redujo significativamente la presión diastólica del extremo ventricular izquierdo (LVDEP). La hipertensión y/o presiones diastólicas del extremo ventricular elevadas es/son una causa de cierto tipo de insuficiencia cardiaca congestiva. Reducción del Volumen Ventricular El tratamiento con TB4 atenuó significativamente el volumen sistólico del extremo ventricular izquierdo, la cual es elevada en pacientes con CHF. Debido a que el volumen del extremo sistólico es una medida de la adecuación del vaciado cardiaco relacionado con la función sistólica, este está asociado con pacientes de CHF con insuficiencia cardiaca sistólica. El tratamiento con TB4 atenuó significativamente el volumen del extremo diastólico ventricular izquierdo. En el corazón enfermo, el rendimiento del corazón falla si el volumen del extremo diastólico ventricular se eleva a altos niveles como en el caso de la insuficiencia cardiaca. Los aumentos del volumen del extremo diastólico del extremo ventricular izquierdo están asociados con pacientes con CHF con insuficiencia cardiaca diastólica. El tratamiento con TB4 mejoró significativamente la relación de cambio (velocidad) en la elevación de la presión ventricular izquierda con el tiempo (dP/dt), una medida sucedánea de una contractibilidad ventricular. Debido a que hay solo un periodo finito de tiempo disponible para una expulsión, una relación de velocidad de elevación de presión ventricular reducida (esto es, un mayor tiempo para la contracción) resulta en una expulsión de sangre menor por latido. Esto es evidenciado en pacientes con CHF con insuficiencia cardiaca sistólica.

El tratamiento con TB4 mostró una tendencia en la afectación (mejoramiento) de la relación de cambio (velocidad) en la relajación ventricular izquierda. Mientras más negativo es el valor de dP/dt más rápido es el corazón para relajarse. Los pacientes con CHF con insuficiencia cardiaca diastólica tienen corazones que son menos elásticos, cuando se relajan y llenan con sangre. Esto impide el llenado de sangre dentro de los ventrículos y produce una acumulación en los pulmones. Pesos de órganos El tratamiento con TB4 atenuó significativamente el edema pulmonar que sigue a la lesión/daño del músculo del corazón. El edema pulmonar es una consecuencia seria que ocurre en pacientes con CHF como n resultado de una insuficiencia cardiaca del lado izquierdo. El tratamiento con TB4 atenuó significativamente el engrosamiento de músculo del ventrículo izquierdo que afecta negativamente la acción de bombeo del corazón. En este estudio, se evaluaron los pesos de los órganos (corazón y pulmón) en los grupos de animales tratados con TB4, tratados con vehículo y sin tratamiento (simulados). Estos datos mostraron que la TB4 atenuó tanto el engrosamiento del músculo del corazón debido a estrés/lesión como el edema pulmonar (acumulación de fluido en el pulmón debido a insuficiencia cardiaca del lado izquierdo), indicando fuertemente que la TB4 puede ser efectiva en el tratamiento de pacientes con insuficiencia cardiaca congestiva (CHF). Ya que la CHF (también llamada insuficiencia cardiaca) es casi siempre una condición crónica, de largo plazo, el tratamiento crónico con TB4 puede retardar o detener el avance de una condición que puede ser cada vez peor.

Ejemplo 2 Se estudió el uso de la timosina beta 4 durante el desarrollo de una cardiomiopatía distrófica. Se utilizó el modelo de ratón mdx deficiente en distrofina que ocurre de manera natural y se siguió la función cardiaca longitudinalmente con una ecocardiografía no invasiva. La timosina beta 4 puede tener efectos benéficos en alentar el avance de la cardiomiopatía a través de sus propiedades de estabilización de membrana y anti fibrosis. En las cardiomiopatías distróficas, las fuerzas de corte son pobremente toleradas debido a la falta de distrofina y sus conexiones con la matriz extracelular. Estas fuerzas llevan al desgarramiento de las membranas de células del músculo conduciendo a la muerte celular y fibrosis. La timosina beta 4 ha mostrado tener propiedades de estabilización de la membrana, probablemente relacionadas con efectos en la polimerización de la actina. También se siguieron parámetros funcionales de la función del músculo esquelético que también pueden beneficiarse de la administración de la timosina beta 4. Los datos preliminares son presentados en la Tabla 1. La timosina beta 4 también tiene propiedades anti fibróticas. El músculo cardiaco dañado debido a las fuerzas de corte y al influjo de calcio puede beneficiarse de la modulación de la timosina beta 4 de la remodelación muscular. Menos fibrosis mantiene una función cardiaca durante un periodo de tiempo mayor. Parámetros de prueba y diseño experimental: Se trataron cuatro grupos de ratones con timosina beta 4. El Grupo 1 fue de ratones normales (BL10) a los que se les dio un placebo (no tratados). El Grupo 2 fue de ratones normales que fueron tratados con timosina beta 4. El Grupo 3 fue de ratones deficientes de distrofina (mdx) tratados con un placebo y el Grupo 4 fue de ratones mdx tratados con limosina beta 4. Los ratones fueron tratados con 150 microgramos de timosina beta 4 en 300 micro litros de regulador proporcionados intraperitonealmente dos veces a la semana, y a los ratones placebo se les dieron 300 micro litros de regulador solamente. Los ratones se ejercitaron en una corredora a una velocidad de 12 metros por minuto por 30 minutos dos veces a la semana. Se obtuvieron datos funcionales, de comportamiento y ecocardiográficos en la línea base y después de 2 meses, 4 meses y 6 meses de tratamiento.

Los datos funcionales fueron mediciones no invasivas de la función muscular esquelética. La fuerza de los músculos de las extremidades delanteras y las extremidades traseras fue evaluada usando un medidor de fuerza de agarre. A los animales se les permitió mantenerse sobre la plataforma de medición y después fueron jalados lentamente hasta que perdieron el agarre. La cantidad de fuerza necesitada para liberar el agarre fue registrada. Se tomaron mediciones múltiples para cada ratón en cada punto del tiempo. El mismo protocolo fue seguido con la fuerza del músculo de las extremidades inferiores. Otra evaluación funcional fue la prueba Rotarod. Aquí, los ratones fueron colocados en una barra rotatoria y mantenían su equilibrio y posición conforme la barra rotaba con una velocidad creciente (10 RPM por 1 minuto y después aumentada 0.2 RPM durante los siguientes tres minutos). Se midió el tiempo hasta que cayó el ratón. Esta prueba también fue repetida múltiples veces. Los datos de comportamiento fueron recolectados usando el sistema de monitoreo de actividad animal VersaMaxMR. Los ratones fueron colocados en una caja monitoreada y la actividad fue cuantificada mediante diferentes sensores. Los datos incluyen la actividad horizontal, actividad vertical y distancia total viajada y muchos otros parámetros de actividad fueron medidos. Se realizaron múltiples mediciones durante un periodo de 3 días.

La evaluación ecocardiográfica fue llevada a cabo usando el sistema de alta frecuencia VisualSonics Vevo 660MR. La evaluación del tamaño de la cámara cardiaca, función ventricular y velocidades Doppler de ingreso/salida de flujo fueron completadas bajo anestesia con isoflorane. El cardiólogo que llevó a cabo y que midió los ecocardiogramas fue cegado para estudiar los grupos. Tabla 1 : Parámetros funcionales medidos en ratones (mdx) normales (BL10) y deficientes en distrofina en una línea de base y después de dos meses de tratamiento con timosina beta 4.

Claims (1)

1. Reivindicaciones 1. Una composición farmacéutica para tratar, prevenir, inhibir o reducir el deterioro, lesión o daño de tejido debido a enfermedad por insuficiencia cardiaca congestiva, o para restablecer el tejido afectado de manera adversa por dicha enfermedad, en un sujeto, la cual comprende un agente péptido que comprende la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT, una variante conservativa de éstas, o un agente de estimulación que estimula la producción de un péptido de LKKTET o LKKTNT, o una variante conservativa de éstas, en dicho tejido, a fin de inhibir dicho deterioro, lesión o daño a dicho tejido debido a enfermedad por insuficiencia cardiaca congestiva, o para restablecer el tejido afectado de manera adversa por dicha enfermedad. 2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicho deterioro, lesión o daño comprende cuando menos uno de: un aumento en el tamaño o masa del corazón, aumento en el tamaño o masa del tejido cardiaco, engrosamiento del tejido cardiaco o edema pulmonar. 3. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicho agente péptido es timosina beta 4 (Tß4). 4. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicho agente péptido es distinto de Tß4. 5. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicho agente péptido es distinto de Tß4 oxidada. 6. La composición farmacéutica de la reivindicación 4, en donde dicho agente péptido comprende la secuencia de aminoácidos KLKKTET, la secuencia de aminoácidos LKKTETQ, una variante de Tß4 con terminación N, una variante de Tß4 con terminación C, o una isoforma de Tß4. 7. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicha composición aporta una cantidad de dicho agente de péptido a dicho sujeto dentro del intervalo de aproximadamente 1 a 30 microgramos. 8. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicha composición está formulada para ser administrable a dicho sujeto de manera directa al tejido, o por vía intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, por inhalación, de manera transdérmica u oral. 9. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicha composición está formulada para ser administrable de manera sistémica. 10. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicha composición está formulada para ser administrable de manera directa. 11. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicha composición está formulada para ser administrable en forma de una solución, gel, crema, pasta, loción, rocío, suspensión, dispersión, ungüento, hidrogel, pomada, espuma o aceite. 12. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, en donde dicho agente de péptido es un péptido recombinante o sintético. 13. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicha composición está formulada para ser administrable de manera aguda. 14. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicha composición está formulada para ser administrable a un sujeto para lograr cuando menos una condición seleccionada del grupo formada por: una reducción de la presión sistólica del ventrículo izquierdo (LVSP) de un corazón, reducción en la presión diastólica del extremo ventricular izquierdo (LVEDP) de un corazón; atenuación del volumen sistólico del extremo ventricular izquierdo de un corazón, atenuación del volumen del extremo diastólico ventricular izquierdo de un corazón, un aumento en la relación de cambio (velocidad) en la elevación de la presión ventricular izquierda con el tiempo (dP/dt) en un corazón, un aumento de la relación de cambio (velocidad) en la disminución de la presión ventricular izquierda con el tiempo (pdP/dt) de un corazón, una atenuación de edema pulmonar en seguida al daño/lesión de músculo cardiaco, o una atenuación del espesor del músculo del ventrículo izquierdo de un corazón. 15. Un método para el tamizaje de un agente de estimulación como se definió en la reivindicación 1, el cual comprende poner en contacto un tejido que presenta enfermedad por insuficiencia cardiaca congestiva, con un compuesto candidato; y medir la actividad en dicho tejido de un péptido de LKKTET o LKKTNT, en donde un aumento en la actividad de dicho péptido en dicho tejido, en comparación con un nivel de actividad de dicho péptido en un correspondiente tejido que carece de dicho compuesto candidato, indica que dicho compuesto es capaz de inducir dicho agente de estimulación. 16. El método de la reivindicación 15, en donde dicho péptido es timosina beta 4 (Tß4). 17. El uso de un agente péptido que comprende la secuencia de aminoácidos LKKTET o LKKTNT, una variante conservativa de éstas, o un agente de estimulación que estimula la producción de un péptido de LKKTET o LKKTNT, o una variante conservativa de éstas, en dicho tejido; en la fabricación de un medicamento útil para tratar, prevenir, inhibir o reducir el deterioro, lesión o daño de tejido debido a enfermedad por insuficiencia cardiaca congestiva, o para restablecer el tejido afectado de manera adversa por dicha enfermedad, en un sujeto, la cual comprende un agente péptido a fin de inhibir dicho deterioro, lesión o daño a dicho tejido debido a enfermedad por insuficiencia cardiaca congestiva, o para restablecer el tejido afectado de manera adversa por dicha enfermedad. 18. El uso de la reivindicación 17, en donde dicho deterioro, lesión o daño comprende cuando menos uno de: un aumento en el tamaño o masa del corazón, aumento en el tamaño o masa del tejido cardiaco, engrosamiento del tejido cardiaco o edema pulmonar. 19 El uso de la reivindicación 18, en donde dicho agente péptido es timosina beta 4 (Tß4). 20. El uso de la reivindicación 18, en donde dicho agente péptido es distinto de Tß4. 21. EL uso de la reivindicación 18, en donde dicho agente péptido es distinto de Tß4 oxidada. 22. El uso de la reivindicación 20, en donde dicho agente péptido comprende la secuencia de aminoácidos KLKKTET, la secuencia de aminoácidos LKKTETQ, una variante de Tß4 con terminación N, una variante de Tß4 con terminación C, o una isoforma de Tß4. 23. El uso de la reivindicación 17, en donde dicho medicamento aporta una cantidad de dicho agente de péptido a dicho sujeto dentro del intervalo de aproximadamente 1 a 30 microgramos. 24 El uso de la reivindicación 17, en donde dicho medicamento está formulado para ser administrable a dicho sujeto de manera directa al tejido, o por vía intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, por inhalación, de manera transdérmica u oral. 25 El uso de la reivindicación 1, en donde dicho medicamento está formulado para ser administrable de manera sistémica. 26. El uso de la reivindicación 1, en donde dicho medicamento está formulado para ser administrable de manera directa. 27. El uso de la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento está formulado para ser administrable en forma de una solución, gel, crema, pasta, loción, rocío, suspensión, dispersión, ungüento, hidrogel, pomada, espuma o aceite. 28. El uso de la reivindicación 1, en donde dicho agente de péptido es un péptido recombinante o sintético. 29. El uso de la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento está formulado para ser administrable de manera aguda. 30. El uso de la reivindicación 1 , en donde dicho medicamento está formulado para ser administrable a un sujeto para lograr cuando menos una condición seleccionada del grupo formada por: una reducción de la presión sistólica del ventrículo izquierdo (LVSP) de un corazón, reducción en la presión diastólica del extremo ventricular izquierdo (LVEDP) de un corazón; atenuación del volumen sistólico del extremo ventricular izquierdo de un corazón, atenuación del volumen del extremo diastólico ventricular izquierdo de un corazón, un aumento en la relación de cambio (velocidad) en la elevación de la presión ventricular izquierda con el tiempo (dP/dt) en un corazón, un aumento de la relación de cambio (velocidad) en la disminución de la presión ventricular izquierda con el tiempo (pdP/dt) de un corazón, una atenuación de edema pulmonar en seguida al daño/lesión de músculo cardiaco, o una atenuación del espesor del músculo del ventrículo izquierdo de un corazón.