MX2007016597A - Componente purificado de algas azules-verdes y metodo de uso - Google Patents

Abstract

Se divulgan en la presente extractos de algas azules-verdes, tal como Aphanizomenonflos aquae, que son enriquecidos para un ligando de selectina, tal como un ligando de L-selectina.Los ligandos de selectina aislados de las células de las algas azules-verdes se divulgan en la presente. Se describen métodos para aislar estos ligandos de selectina. Los ligandos de selectina purificados son de uso en inducir la movilización de las células madre en un sujeto. Así, métodos para inducir el aislamiento de las células madre que incluyen administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del extracto enriquecido del ligando de selectina, o una ligando de selectina aislado, son divulgados en la presente.

Description

COMPONENTE PURIFICADO DE ALGAS AZULES-VERDES Y MÉTODO DE USO CAMPO Esta solicitud se relaciona a un extracto acuoso de algas azules-verdes, tal como un extracto acuoso de algas que incluye un ligando de selectina. ANTECEDENTES Las células madre son células pluripotentes derivadas de tejido somático capaces de diferenciarse en células más especializadas. Por ejemplo, las células madre hematopoyéticas pueden diferenciarse en muchos tipos diferentes de células sanguíneas, incluyendo glóbulos rojos, plaquetas y leucocitos. Las células madre hematopoyéticas desempeñan una función en el reabastecimiento fisiológico de toda la vida continuo de células sanguíneas. Las células madre se desarrollan en tanto células de linaje hematopoyéticas como células especificas de tejido, no hematopoyéticas. Recientemente, las células madre se han encontrado que se diferencian en una variedad de tipos de células especificas de tejido, tales como miocitos, hepatocitos, osteocitos, células guales y neuronas. Por ejemplo, las células madre se ha mostrado que cruzan la barrera de sangre-cerebro (Willams y Hickey, Curr . Top . Microbiol . Immunol . 202:221-245, 1995) y se diferencian en neuronas (Mezey, Science 290:1779-82, 2000) . Asi, es posible que las células madre pudieran ser utilizadas para tratar la enfermedad de Parkinson (Polli, Haema tologi ca 85:1009-10, 2000), enfermedad de Alzheimer ( attson, Exp . Geron tol . 35:489-502, 2000), y lesión cerebral traumática (Magavi, Na ture 405: 892-3, 895, 2000). Las células madre también se han mostrado que se diferencian en fibroblastos o células similares a fibroblastos, y a expresar colágeno (Peñera y colaboradores, Proc . Na ti . Acad. Sci . 95:1142-7, 1998) . Asi, es posible que las células madre se pueden utilizar para tratar osteogénesis imperfecta y fracturas de hueso. Peterson y colaboradores ( Sci en ce 284: 1168-70, 1999) también han mostrado que las células de higado pueden surgir de las células madre. Asi, las células madre pueden ser de uso en tratar una variedad de patologías del higado, incluyendo, pero no limitado a cirrosis. Además, las células madre derivadas de la médula espinal se han mostrado que migran al sitio de un infarto miocardial y forman miocardio. (Orlic, Na t ure 410:701-5, 2000) . Asi, las células madre se pueden utilizar en el tratamiento de infarto miocardial . Puesto que las células madre son capaces de diferenciarse en una amplia variedad de tipos de células, desempeñan una función importante en los procesos de sanación y regenerativos de diversos tejidos y órganos (ver Koc y" colaboradores, Bone Marrow Transplan t , 27 ( 3 ): 235-39, 2001). Los ligandos de selectina estimulan la liberación de células madre de la médula espinal (Frenette y colaboradores, Blood 96:2460-68, 2000) . Muchos estudios sugieren que la movilización, migración y diferenciación de las células madre de la médula espinal en el tejido objetivo constituye un fenómeno natural de sanación en el cuerpo humano (Spencer y colaboradores, Thorax 60(l):60-2, 2005; Ishikawa y colaboradores, FASEB J. 18(15): 1958-60, 2004; Mattsson y colaboradores, Transplan ta tion 15;78(1): 154-7, 2004; Thiele J y colaboradores, Transplan ta tion 77(12): 1902-5, 2004; Cogle y colaboradores, The Lancet 363(9419): 1432-7, 2004; Deb y colaboradores, Circula tion 107(9): 1247-9, 2003; Korbling y colaboradores, N Engl J Med 3 6 ( 10 ): 738-46, 2002; Adams y colaboradores, Blood 102 ( 10) : 3845-7 , 2002; Krause y colaboradores, Cell 105 ( 3 ): 369-77 , 2001). Las células madre utilizadas siguen la concentración de gradientes de citocinas liberados por los tejidos dañados y migran por su cuenta en tejidos siguiendo tales gradientes. En realidad, la movilización de las células madre de médula espinal inducidas por la inyección de citocinas se ha mostrado que acelera la sanación del tejido cardiaco después del infarto miocardial agudo. Por lo tanto, accionando simplemente la movilización de las células madre de médula espinal con un consumible efectivo y seguro puede aumentar este proceso fisiológico natural y proporcionar una terapia potencial para varias patologías. Asi, existe una necesidad por composiciones que incrementen la movilización y tráfico de la célula madre. BREVE DESCRIPCIÓN Se divulga un proceso ejemplar para obtener un extracto acuoso de algas azules-verdes que contienen un ligando de selectina. En este procedimiento, un ligando de selectina se aisla de las algas azules-verdes que utilizan un sustrato sólido covalentemente enlazado a una selectina, tal como L-selectina, P-selectma, y/o E-selectina. El ligando de selectina puede enlazarse específicamente a la L-selectina, P-selectina y/o E-selectina. Se describen ligandos de selectina purificados que se aislan en las algas azules-verdes. Estos ligandos se aislan de las algas azules-verdes que son una proteina y una glicoproteina de un peso molecular de aproximadamente 55 kDa bajo condiciones de reducción. En varios ejemplos, el ligando de selectina tiene un peso molecular de aproximadamente 54 kDa o aproximadamente 57 kDa bajo condiciones de reducción. En ejemplos adicionales, el ligando de selectina tiene un peso molecular de aproximadamente 54 kDa, aproximadamente 57 kDa, aproximadamente 162 kDa, aproximadamente 171 kDa, aproximadamente 233 kDa o aproximadamente 111 kDa bajo condiciones no de reducción. Se divulga un extracto de Aphani zomenonfl os aquae (AFA) en la presente que contiene el ligando de L-selectina.

Este extracto se puede formular para la administración a un sujeto. Composiciones que incluyen el extracto solo, o que incluyen otros extractos de Aphani zomenonflos aquae (AFA) se pueden administrar a un sujeto en necesidad de la movilización de células madre y/o monómero incrementado de células madre circulantes. En un ejemplo, el extracto que contiene el ' ligando de L-selectina se administra con un extracto de Aphani zomenonflos aquae (AFA) que contiene polisacáridos. Composiciones, que incluyen o consisten del ligando de L-selectina de Aphani zomenonflos aqua e (AFA) son de uso para la movilización de células madre e incrementan el número de células madre circulantes. Se divulga un método en la presente para accionar la movilización de células madre al administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un extracto especifico de algas azules-verdes a un sujeto. Extractos de uso en inducir la movilización de células madre incluyen extractos de algas azules-verdes que contienen un ligando de selectina, tal como un ligando de L-selectina, P-selectina y/o uno de E-selectina. En un ejemplo, las algas azules-verdes son Aphani zomenonflos aquae (AFA) . Los extractos se pueden administrar solos o en conjunción con otros extractos de Aphani zomenonflos aquae (AFA) . En un ejemplo, un extracto que contiene polisacárido también se administra. La administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un extracto de las algas azules-verdes, tal como un extracto que contiene ligando de selectina incluye un incremento transciente en la población de algunas células madre tal como células madre CD34+ y/o células madre CD133+, en el sistema circulatorio del sujeto. Lo anterior y otras caracterís icas y ventajas llegarán a ser más evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de diversas modalidades, lo cual procede con referencia a las figuras acompañantes. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La FIG. 1 es una gráfica a linea que muestra un curso del tiempo para el incremento en el número de células madres circulantes en la sangre de humanos sanos en la ingestión de AFA. La citometria de lujo se realiza sobre linfocitos y monocitos humanos, donde el anticuerpo monoclonal CD34, con especificidad para células madre humanas se utilizó para demostrar que el extracto A de AFA contiene un compuesto que moviliza las células madre al incrementar sus números en la circulación sanguínea. La FIG. 2 es una gráfica de "barras que muestra la citometria de flujo que se realizó sobre linfocitos, monocitos humanos, y células nucleadas polimorfas, donde el anticuerpo monoclonal TQ1, especifico para el área de enlace de ligando de la L-selectina humana se utilizó para demostrar que el extracto A de AFA contiene un compuesto que compite para enlazar sobre el sitio de enlace de ligando de L-selectina. El efecto de la competición entre el anticuerpo TQ1 y el compuesto del extracto A de AFA es dependiente de concentración. La FIG. 3 es una ilustración esquemática del método utilizado para purificar el ligando de selectma del extracto A de AFA. Cuentas magnéticas se recubrieron con Proteina G, que enlaza la porción de Fe de la inmunoglobulina. Estas cuentas se utilizaron para capturar una proteina recombinante quimérica que consiste de la porción extracelular de la L-selectina humana, unida conjuntamente con la porción de Fe de la IgGl inmunoglobulina humana. Una reacción química se realizó para formar enlaces covalentes entre la porción Fe y la Proteina G sobre las cuentas magnéticas. Estas cuentas, ahora recubiertas con la quimera, con la porción extracelular de la L-selectina humana que alcanzan las cuentas, se utilizaron para capturar el ligando para la L-selectina en los extractos de AFA. Las FIGS. 4A-4B son imágenes digitales que muestran la electroforesis del gel que ilustra el peso molecular aproximado del compuesto que se purificó con afinidad del extracto A de AFA, cuando el método de afinidad descrito en la FIG. 3 se empleó. Las figuras son imágenes digitales de geles, en donde la electroforesis de gel se realizó sobre material levigado de las cuentas magnéticas después de que estas cuentas hablan capturado el ligando de selectina del extracto A de AFA. La FIG. 4A es una imagen digital que muestra el compuesto levigado de las cuentas que se recubrieron con L-selectina recombinante humana, y la FIG. 4B es una imagen digital que muestra el compuesto levigado de las cuentas recubiertas con la P-selectina recombinante humana los geles se corrieron bajo condiciones de reducción. Se muestran dos bandas distintas a aproximadamente 54 y 57 kDa. Se observaron patrones de banda idénticos para tanto la L- como P-selectina, que indican que el ligando de selectina es un ligando para tanto L- como P-selectina. La FIG. 5 es una imagen digital de un gel, en donde la electroforesis de gel se realizó sobre material levigado de las cuentas magnéticas después de que estas cuentas habla sido utilizadas para capturar los ligandos de selectina potenciales en el extracto A de AFA contra el extractor B. El ligando de selectina de AFA se encontró en el extracto A. Nada de ligando de selectina de AFA se puede detectar en el Extracto B. La linea 1 es un control negativo, la linea dos muestra el ligando purificado del Extracto A (flecha), y la linea 3 muestra que una banda correspondiente no se observó en el Extracto B. La FIG. 6 es una gráfica a linea que muestra los resultados del análisis de citometria de flujo de la expresión del receptor de quimiocina CXCR4 , como se induce por un liando de L-selectina conocido, Fucoidano. Los datos indican que el Fucoidano de ligando de L-selectina conocido, compite- con el compuesto de AFA para enlazar ala L-selectina sobre los linfocitos sanguíneos periféricos humanos. La FIG. 7 es una gráfica a linea que muestra los resultados de un análisis de citometria de flujo de la expresión del receptor de quimiocina CXCR4 , como se induce por un ligando de L-selectina conocido, Fucoidano. Los datos indican que el Fucoidano de ligando de L-selectina conocido, compite con el compuesto de AFA para enlazar la L-selectina sobre la linea celular KG-la de CD34+ humano. La FIG. 8 es una Tabla. Los resultados presentados muestran que el Extracto A (AFA-W) bloquea el enlace de TQ1 MoAb a la L-selectina sobre los leucocitos humanos. La FIG. 9 es una gráfica a linea que muestra el curso del tiempo del número de células CD34 + en la sangre periférica humana después del consumo (flecha) del ligando de L-selectina (LSL) , migratosa (MGT) , combinación aumentada de células madre (SE) o un placebo (marcado Ctrl) . El ligando de L-selectina (LSL) es un extracto de Aphani zomenonflos aquae (AFA) enriquecido para el ligando de L-selectina. Para los sujetos tratados con LSL, un gramos del extracto concentrado en el ligando de L-selectina (ver la sección de ejemplos) se mezcló en 40 ml de agua y se consumió por el sujeto. La migratosa (MGT) es un extracto en donde el liquido de Aphani zomenonflos aquae (AFA) se extrajo con 10% de etanol a 85°C por tres horas. La solución se centrifugó y el sobrenadante se secó utilizando R . Para la administración, 150 mg del producto seco se mezcló con 250 mg de un portador, se encapsuló en una cápsula vegetal y se consumió por los sujetos. La combinación de aumento de células madre (SE) fue una mezcla de LSL y MGT, como se describe en lo anterior. Un gramos de SE se mezcló en 40 ml de agua y se consumió por los sujetos. En control fue 400 mg de hojuelas de papa finamente molidas encapsuladas en cápsulas vegetales. DESCRIPCIÓN DETALLADA I . Abreviaciones AFA: Aphani zomenonflos aqua e Ctrl: control LSL: ligando de L-selectina mg: miligramos ml : mililitro MGT: migratosa SE: combinación de aumento de células madre, incluye LSL y MGT g: gramo kg: kilogramos II. Términos A menos que de otra manera se note, los términos técnicos se utilizan de acuerdo al uso convencional. Las II definiciones de los términos comunes en la biología molecular se pueden encontrar en Benjamín Lewin, Genes V, publicada por Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew y colaboradores (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, publicada por Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182- 9); y Robert A. Meyers (ed.), Molecula r Biology and Biotechnology: a Comprehens ive Desk Reference, publicada por VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8). A fin de facilitar la revisión de las diversas 'modalidades de esta descripción, se proporcionan las siguientes explicaciones de los términos específicos: Administración a un sujeto. Proporcionar algas azules-verdes a un sujeto incluye administrar células de algas azules-verdes enteras y/o extractos (fracciones) de células de algas azules-verdes. Las rutas de administración incluyen, pero no se limitan a, rutas orales y parenterales, tales como intravenosa (IV), intraperitoneal (IP), rectal, tópica, oftálmica, nasal, y transdérmica. La administración oral incluye tanto algas azules-verdes enteras como extractos de algas azules-verdes. Más de un extracto se puede administrar. Si se administra oralmente, las células enteras o extractos se pueden proporcionar o administrar en la forma de una dosis unitaria, en forma sólida, semisólida o de dosificación liquida tales como tabletas, pildoras, polvos, soluciones liquida, o suspensiones liquidas. Sin embargo, los extractos de algas azules-verdes también se pueden administrar intravenosamente en cualquier medio convencional para la inyección intravenosa, tal como un medio de solución salina acuoso, o en un medio de plasma sanguíneo. El medio también puede contener materiales adjuntos farmacéuticos convencionales, tales como sales farmacéuticamente aceptables para ajustar la presión osmótica, portadores de lipidos (por ejemplo, ciclodextrinas), proteínas (por ejemplo, albúmina de suero, agentes hidrofilicos (por ejemplo, metilcelulosa) detergentes, soluciones reguladoras, conservadores, y los similares. Una explicación más completa de portadores farmacéuticos aceptables se puede encontrar en Remington : The Science and Pra cti ce of Pharmacy (19th Edición, 1995) en el capitulo 95. Agente que afecta la hematopoyesis. Un compuesto, anticuerpo, molécula de ácido nucleico, proteina, glicoproteina o célula que altera la formación de células sanguíneas, tales como glóbulos blancos. Un agente molecular puede ser una molécula que ocurre naturalmente o una molécula sintética. En algunas modalidades, el agente afecta la movilización, crecimiento, proliferación, maduración, o diferenciación o liberación de las células hematopoyéticas. En una modalidad, el agente es un ligando de selectina extraído de una célula de algas azules-verdes. Agente que afecta la circulación de la célula madre. Un compuesto, anticuerpo, molécula de ácido nucleico, proteina, glicoproteina, o célula, que incluye neuropéptidos y otras moléculas de señalización, que afecta la liberación de células madre en el sistema circulatorio, asi como alojamiento del sistema circulatorio en el tejido. Un agente molecular puede ser una molécula que ocurre naturalmente o una molécula sintética. En un ejemplo especifico, el agente es un ligando de selectina de algas azules-verdes. Un agente que afecta la circulación de las células madre puede afectar la relación de las células madre en la acumulación inactiva contra la acumulación activa. En algunas modalidades, el agente afecta el equilibrio entre las células madre no diferenciadas y las células madre que se diferencian en célula CD34-negativa (CD34-) y CD34-positiva (CD34+) , y/o células CD133-negativa (CD133-) y CD133-positiva (CD133+) . En otras modalidades, el agente afecta la liberación de las células madre de las ubicaciones de tejido tal como la liberación de células CD34+ y/o células CD133+ y/o células detectadas mediante métodos basados sobre las acciones enzimáticas de la aldehido deshidrogenasa, del medio ambiente de médula espinal. Animal. Un organismo vertebrado, multicelular, viviente que incluye, por ejemplo, mamíferos,., peces, reptiles y pájaros. Algas azules-verdes. Nombre común para bacterias fotosintéticas gramos-negativa que pertenecen a la División Cianofita que puede existir en formas unicelulares, coloniales o filamentosas. Las azules-verdes representativas incluyen pero no se limitan a, especies Spirulina y especies Afani zomenon . Aphani zomenonflos aquae (AFA) es un tipo no limitativo, especifico de algas azules-verdes. El término "algas" en la forma plural de "alga", que es una célula de unas especies de microalgas. Por ejemplo (y sin limitación) , "algas azules-verdes" se refiere a múltiples células de unas especies Aphani zomenon individuales, múltiples células de unas especies Spirulina individuales, o una mezcla de células de múltiples especies de Aphani zomenon y/o Spirulma . Sistema circulatorio. En animales, el sistema circulatorio se compone de las estructuras que mueven la sangre y componentes de sangre a través del cuerpo, incluyendo los sistemas vasculares y linfáticos. Los componentes del sistema circulatorio incluyen el corazón, vaso sanguíneo (arterias, venas y capilares), y vasos linfáticos. Célula madre circulante. Una célula madre presente en el sistema circulatorio. Componente de algas azules-verdes. Cualquier fracción, extracto, o molécula aislada o purificada de una célula de algas azules-verdes. En una modalidad, el componente es una proteina o una glicoproteina o ácido nucleico. En otra modalidad, el componente es un componente fotoquimico. En otra modalidad, el componente es un extracto acuoso de unas algas azules-verdes que incluyen un ligando de selectina. Asi, las algas azules-verdes se interrumpen, un solvente inorgánico u orgánico se adiciona y los extractos se recolectan. Ejemplos no limitativos, específicos, son extractos aislados que utilizan cromatografía liquida de alto desempeño, cromatografía de capa delgada, columna de afinidad, cuenta magnéticas o destilación. En una modalidad, el fraccionamiento se basa sobre el peso molecular o la hidrofobicidad de los componentes de las algas azules-verdes. Diferenciación. El proceso por el cual las células llegan a ser más especializada para realizar funciones biológicas. La diferenciación es una propiedad que es frecuentemente de manera total o parcialmente perdida por las células que se han sometido a la transformación maligna. Cantidad efectiva. Una cantidad, tal como una cantidad de un extracto que contiene selectina de algas azules-verdes, capaces de accionar o aumentar la movilización de células madre, que se puede determinar por varios métodos utilizados en las ciencias biológicas. Estos métodos incluyen poro no se limitan a, generación de una cuerva de respuesta de dosis empírica. En una modalidad, una "cantidad terapéuticamente efectiva" es una cantidad efectiva para aumentar la movilización de las células madre que reabastecen, reparan o rejuvenecen el tejido. En otra modalidad, una "cantidad terapéuticamente efectiva" es una cantidad efectiva para aumentar el tráficos de las células madre. En todavía otra modalidad, la "cantidad terapéuticamente efectiva" es una cantidad efectiva para aumentar la indicación de las células madre del sistema circulatorio a varios tejidos u órganos. Una cantidad terapéuticamente efectiva también puede ser una cantidad suficiente para tratar una condición o enfermedad, tal como una cantidad suficiente para aliviar síntomas asociados con desórdenes del sistema nervioso (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis múltiple) , lesión cerebral o médula espinal traumática, enfermedad del higado, o desórdenes de hueso o cartílago. Una cantidad terapéuticamente efectiva también puede ser una cantidad suficiente para acelerar y aumentar la recuperación de infarto miocardial agudo. En un ejemplo no limitativo, especifico, la cantidad terapéuticamente efectiva del extracto, tal como un extracto que contiene selectina de algas azules-verdes, es de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 1.0 g por kg de peso corporal, tal como aproximadamente 0.05 a aproximadamente 0.5 gramos por kg de peso corporal, o de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.5 gramos por kg de peso corporal. En otro ejemplo, no limitativo, especifico, la cantidad efectiva del extracto que contiene selectina de las algas azules-verdes es de aproximadamente 0.25 gramos a aproximadamente 5 gramos, o de aproximadamente 0.5 gramos a aproximadamente 5 gramos o de aproximadamente 1 gramos a aproximadamente 2 gramos. En un ejemplo no limitativo, especifico, la cantidad efectiva del extracto que contiene selectina de las algas azules-verdes es de 1 gramos. Esta cantidad efectiva se puede administrar en una frecuencia dada tal como aproximadamente una vez a la semana, aproximadamente dos veces a la semana, aproximadamente tres veces a la semana, una vez al dia, aproximadamente dos veces al dia, aproximadamente tres veces al dia, o más. La cantidad terapéuticamente efectiva de un extracto de algas azules-verdes tal como un extracto acuoso que contiene selectina de algas azules-verdes y la frecuencia de administración puede depender sobre una variedad de factores tal como el género o especie de las algas utilizadas, la salud general del sujeto que se trata, y las características fisiológicas (por ejemplo altura, peso, porcentaje de grasa corporal, metabolismo, etc.) del sujeto que se trata. Ensayos específicos para determinar una cantidad terapéuticamente efectiva de un extracto acuoso tal como un extracto que contiene el ligando de selectina, de algas azules-verdes se proporciona en la presente. En un ejemplo no limitativo, especifico, cantidades diferentes de un extracto que contiene ligando de selectina de algas azules-verdes, tal como AFA, se consumen por los sujetos humanos y la presencia y/o cantidad de células madre (que puede incluir subtipos de tales células) presentes en el sistema circulatorio se detecta y/o se analiza. En otra modalidad, se utiliza un modelo animal (por ejemplo murino), y la población de células madre recientemente integradas se monitorea en varios tejidos (ver los Ejemplos enseguida). Los métodos divulgados tienen una aplicación igual en arreglos médicos y veterinarios. Por lo tanto, el término general "sujeto que se trata" incluye todos los vertebrados (por ejemplo, pero no limitado a, humanos, simios, perros, gatos, ratones, ratas, conejos, ovejas, caballos, cerdos y vacas). Aumento (aumentar) . Un incremento en un parámetro particular de una célula u organismo. En una modalidad, aumento se refiere a un 25%, 50%, 100%, o mayor que 100% de incremento en un parámetro. En una ejemplo no limitativo, especifico, el aumento de la circulación de células madre se refiere a un incremento en una población especifica de las células, tal como un 25%, 50%, 100%, 200%, 400%, 500% o mayor incremento en la población especifica de células o la respuesta de la población de células. En una modalidad, el parámetro es la movilización de las células madre. En otra modalidad, el parámetro es la diferenciación de las células madre. En todavía otra modalidad, el parámetro es el alojamiento de las células madre. Eritrocitos. Glóbulos rojos que llevan oxigeno a los tejidos del cuerpo. Extracto. Una preparación concentrada de una composición, tal como unas algas azules-verdes, obtenidas al remover los componentes activos de la composición con solventes adecuados, evaporar todo o casi todo del solvente, y ajustar la masa residual o polvo a la cantidad estándar predeterminada. Un extracto es "enriquecido" para un producto, tal como un ligando de selectina, si la actividad o cantidad de un componente de interés se incrementa sustancialmente en el extracto como es comparado a otros extractos o a la misma cantidad de la composición original extraída . Glicoproteina. Una molécula compleja hecha de una porción de proteina y una porción de glicano o polisacárido. Hematopoyesis. La formación y desarrollo de células sanguíneas. La hematopoyesis involucra la proliferación y diferenciación terminal de las células madre hematopoyéticas. En mamíferos adultos, la hematopoyesis es conocida que ocurre en la médula espinal. La hematopoyesis es la producción de células hematopoyéticas que incluyen células B, células T, células de linaje de macrófago de monocito, y glóbulos rojos.

Alojamiento. El proceso de una célula que migra desde el sistema circulatorio en un tejido u órgano. En algunos casos, el alojamiento se logra por la via de las moléculas de adhesión especificas al tejido y los procesos de adhesión. Inmunológicamente normal. "Inmunológicamente normal" denota un sujeto que exhibe características del sistema inmune típicas para las especies a las cuales el individuo pertenece. Estas características típicas incluyen, entre .otras, funcionamiento de las células B y células T asi como componentes celulares estructurales, llamados antigenos de superficie celular, que actúan como la firma inmunológica para un organismo particular. El uso de tales recipientes inmunológicamente normales significa que un sistema inmune del recipiente inmunológicamente normal, por la via de sus células B (respuesta humoral) y T (respuesta celular), identificará los antigenos de superficie celular de una célula extraña o un tejido injertado como extraño. Este reconocimiento conduce finalmente a una respuesta inmune contra la célula o tejido, dando por resultado la destrucción de la célula o rechazo del tejido. Una respuesta inmune contra un tejido alogénico es conocido como el rechazo del huésped-contra-injerto. Inmunológicamente comprometido. Un sujeto "inmunológicamente comprometido" tiene una inmunodeficiencia genotipica o una fenotipica. Un sujeto genotipicamente inmune deficiente tiene un defecto genético que da por resultado una habilidad para generar ya sea respuestas humorales o mediadas por células. Un ejemplo no limitativo, especifico de un sujeto fenotipicamente inmunodeficiente es un ratón genotipicamente inmunodeficiente, tal como un ratón SCID o un ratón bg/nu/xid (Andriole y colaboradores, J. Immunol . 135:2911, 1985; McCune y colaboradores, Science 241:1632, 1988) o un humano XSCID. Un "sujeto fenotipicamente inmunodeficiente" es un sujeto, que es genéticamente capaz de generar una respuesta inmune, todavía ha sido alterado fenotipicamente tal que ninguna respuesta se observa. En un ejemplo no limitativo, especifico, se irradia un recipiente fenotipicamente inmunodeficiente . En otro ejemplo no limitativo, especifico, un sujeto fenotipicamente inmunodeficiente ha sido tratado con quimioterapia. En todavía otro ejemplo no limitativo, especifico, el sujeto fenotipicamente inmunodeficiente ha sufrido una infección bacteriana o viral, tal como el virus de inmunodeficiencia humano (HIV) o virus de inmunodeficiencia de simio (SIV) . Incremento: Un incremento significante en una actividad particular o de un componente de interés. En una modalidad, la inhibición se refiere por lo menos aproximadamente un incremento de 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 100% en la actividad o concentración.

Inhibir. Una disminución en un parámetro particular de una célula u organismo. En una modalidad, la inhibición se refiere a una disminución de 25%, 50% o 100% en un parámetro. Aislado. Un componente biológico "aislado" (tal como una molécula de ácido nucleico, polipéptido, polisacárido, selectina, ligando de selectina, y otra molécula biológica) ha sido sustancialmente separada o purificada lejos de otros componentes biológicos de células en las cuales el componente ocurre naturalmente. Una célula "aislada" ha sido separada sustancialmente o purificada lejos de otras células o especies diferentes (en el caso de microorganismos) o células del organismo (en el caso de orgánicos multicelulares) . Ácidos nucleicos y proteínas se pueden aislar mediante métodos de purificación estándares, expresión recombinante en una célula hospedera, o químicamente sintetizados. Las células se pueden aislar mediante métodos de cultivo estándares. En una modalidad, las algas azules-verdes se cosechan de una fuente natural (tal como Lago Klamath) , y se preparan mediante el secado (ver enseguida) . Leucocitos. Glóbulos blancos, Esféricos, incoloros, y corpúsculos nucleados involucrados en la defensa del hospedero, que incluyen respuestas inmunológicas . Tipos específicos de leucocitos incluyen basófilos, celomocitos, eosinófilos, hemocitos, linfocitos, netrófilos y monocitos, células dendriticas circulantes, y células madre hematopoyéticas circulantes. L-selectina. Un miembro de las lectinas dependiente de calcio de la familia selectina, también conocida como CD62L. Una molécula de adhesión utilizada para las células madre a adherirse al medio ambiente de la médula espinal. L-selectina, la más pequeña de las selectinas vasculares, es una molécula de 74-100 kDa, que se expresa constitutivamente en las puntas de micropliegues sobre los granulocitos, monocitos, y una arreglo basto de L-selectina de linfocito circulante también es conocida como LECAM-1, LAM-1, antigeno Mel-14, gp90mel, y antigeno Leu8/TQ-1. La L-selectina es conocida por ser importante para el enlace de leucocitos al endotelio en varias situaciones fisiológicas, que incluyen el enlace de fagocitos al endotelio, el enlace de los leucocitos al endotelio inflamado, y el alojamiento de linfocitos y la adhesión a las células endoteliales altas de las vénulas poscapilares de los nodulos linfáticos periféricos. Por otra parte, esta molécula de adhesión contribuye grandemente a la captura de leucocitos circulantes durante las fases tempranas de la cascada de adhesión. Son conocidas las secuencias de aminoácidos de muchas L-selectinas . Un "ligando de L-selectina" enlaza específicamente la L-selectina. En algunas modalidades, un ligando puede bloquear la activación por otros ligandos, por ejemplo mediante la interferencia espacial con el área de enlace de ligando. Un ligando también puede activar la célula por la via de la ligación a la L-selectina, por ejemplo al accionar el flujo de calcio, rearreglos citoesqueléticos u otros eventos de señalización. Además, un ligando puede alterar las rutas de traducción de señal de modo que un enlace subsecuente con cualquiera de otro ligando de L-selectina, o un estimulo independiente de L-selectina da por resultado una respuesta fisiológica alterada. En algunos ejemplos, cuando los linfocitos humanos se activan por la via de algunos ligandos de L-selectina, la L-selectina acciona la expresión de CXCR4 , un receptor para el Factor Derivado Estromal 1 (SDF1), una citocina involucrada en la residencia de las células madre en la médula espinal. En una modalidad, el extracto que contiene L-selectina de las algas azules-verdes inhibe la expresión de CXCR4 accionado por la activación de la L-selectina con el Fucoidano. Las secuencias de aminoácidos para los ligandos de L-selectina ejemplares son conocidas. Por ejemplo, el GlyCam-1 muscular de ratón se muestra en el Número de Acceso GENBANK NM_008134 y aislados de mRNA Humanos para el GlyCam-1 se muestran en los Nos. De Acceso de GENBANK AJ_489 590, AJ 489 591, AJ 489 592, AJ 489 593, y AJ 489 589, todos ya disponibles el 24 de Junio del 2005, que se incorporan en la presente por referencia. Estas secuencias de aminoácidos no se proponen ser limitativas, sino se proporcionan como ejemplos. Formas recombinantes y modificadas se incluyen en la presente descripción. Linfocitos. Un tipo de glóbulos blancos que se involucran en las defensas inmunes del cuerpo. Existen dos tipos principales de linfocitos: célula B y células T. Linfoproliferación. Un incremento en la producción y/o división de linfocitos. Mamifero . Este término incluye tanto mamíferos humanos como no humanos, similarmente, el término "sujeto" incluye tanto sujetos humanos como veterinarios. Monocito. Un glóbulo blanco grande en la sangre que ingiere microbios u otras células y partículas extrañas. Cuando un monocito pasa de la corriente sanguínea y entra a los tejidos, este se desarrolla en un macrófago. Célula de músculo. Una célula de tejido muscular estriado, cardiaco o liso. En el músculo estriado (esquelético), una célula de músculo se compone de un sin sitio formado por la fusión de neoblastos embriónicos. En el músculo liso, una célula de músculo es una sola célula caracterizada por cantidades grandes de actina y miocina y capaces de contraerse a una fracción pequeña de su longitud total. En el músculo cardiaco, la célula del músculo se enlaza a las células vecinas mediante uniones especializadas llamadas discos intercalados. Portadores farmacéuticamente aceptables . Los portadores farmacéuticamente aceptables útiles son convencionales. Remington ' s Pharmaceu ti cal Sciences, por E.

W. Martin, Mack Pubiishing Co., Easton, PA, 15th Edition (1975), describe composiciones y formulaciones adecuadas para el suministro farmacéutico de las algas azules-verdes y extractos descritos en la presente. En general, la naturaleza del portador dependerá sobre el modo particular de administración que se emplea. Por ejemplo, las formulaciones parenterales comprenden usualmente fluidos inyectables que incluyen fluidos farmacéuticamente y fisiológicamente aceptables tal como agua, solución salina fisiológica, soluciones de sal balanceadas, dextrosa acuosa, glicerol o los similares como un vehículo. Para las composiciones sólidas (por ejemplo, polvo, pildora, tableta o formas ce cápsula), los portadores sólidos no tóxicos convencionales pueden incluir, por ejemplo, grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, o estearato de magnesio. Además de los portadores biológicamente neutros, las composiciones farmacéuticas a ser administradas pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas, tales como agentes humectantes o emulsificantes, conservadores y agentes conservadores de pH y los similares, por ejemplo acetato de sodio o monolaurato de sorbitan. Plasticidad. La capacidad a ser moldeada, frecuentemente utilizada para referirse a la flexibilidad y reversibilidad del tejido y especificación de linaje. Plaquetas. Fragmentos celulares pequeños en la sangre derivados de megacariocitos . Las plaquetas participan en la sanación de heridas, coagulación de la sangre, reparación de vasos sanguíneos dañados y procesos inflamatorios patológicos. Célula progenitora. Una célula que motiva a la progenie en un linaje de célula definida. Una "célula progenitura hematopoyética" es una célula que motiva a las células de linaje hematopoyéticas. P-selectina. Un miembro de las lectinas dependientes de calcio de la familia de selectina, también conocida como CD62P. La P-selectina se expresa sobre la superficie de las células endoteliales, plaquetas (cantidades incrementadas con la activación) y megacariocitos . La P-selectina puede mediar el enlace de las plaquetas activadas a los leucocitos, y pueden contribuir adicionalmente al enlace subsecuente de estos leucocitos al endotelio. La expresión de la P-selectina sobre el endotelio de la médula espinal desempeña una función para las ubicaciones de las células madre ín vivo, que incluyen retensión, movilización y alojamiento en la médula espinal (Frenette y Weiss, Blood 96(7) : 2460, 2000) . Reclutamiento de una célula madre. Un proceso mediante el cual una célula madre en el sistema circulatorio migra en un tejido u órgano. El reclutamiento se puede facilitar mediante un compuesto o molécula, tal como una señal quimioatrayente o receptor celular. Por ejemplo, tanto CXCR4 como SDF-1 tienen funciones identificadas en el alojamiento de las células madre. Hidalgo y colaboradores, Exp . Hema tol 29 (3 ): 345-55, 2001; Kollet y colaboradores Blood 97(10)3283-91, 2001. Célula satélite. Una célula madre especifica de músculo, frecuentemente localizada en la periferia del tejido muscular y capaz de migrar en un músculo para ayudar en la reparación y reconstrucción del tejido. Selectina. Una familia de lectinas dependientes de calcio, también conocida como CD62. Los tres miembros de esta familia incluyen L-selectina (CD62L) , P-selectina (CD62P) , y E-selectina (CD62E) . Estas moléculas de adhesión se involucran en alentar la circulación de leucocitos durante su tránsito en las vénulas, y también se involucran en un hospedero de otras interacciones adhesivas, que incluyen pero se limitan a las interacciones de plaqueta-leucocito, retención de células en ciertos tejidos que incluyen médula espinal, y la adhesión de leucocitos al endotelio inflamado. Célula madre. Una célula pluripotente que motiva a la progenie de muchos tipos de tejido, que incluyen (pero no se limitan a) los linajes de células estromales hematopoyéticas y de médula completas. Una célula madre típica reside en la médula espinal, ya sea como un tipo de célula estromal adherente, o como una célula más diferenciada que expresa CD34, ya sea sobre la superficie celular o en una manera en donde la célula es negativa para la superficie celular CD34. Las células madre también pueden expresar CD133. Asi una célula madre puede ser una célula CD34+, una célula CD133+, o se pueden mostrar para expresar tanto CD34 como CD133 (ver He y colaboradores, Stem Cel ls and Development 14 (2 ): 188-198 , 2005). Alternativamente, una célula madre puede ser una célula que se puede medir mediante el aminoacetaldehido fluorescentemente marcado, formado cuando una enzima en el citoplasma de la célula madre, se convierte a un sustrato no fluorescente en un compuesto fluorescente que se retiene dentro de la célula madre y que permite su detección basadas sobre la función enzimática. Un subconjunto de células CD34+ en la médula espinal, productos de leucaféresis y sangre del cordón con características fenotipicas primitivas que expresan CD133, una molécula de 5-transmembrana de función desconocida. Anticuerpos específicos para la cepa CD133 de 35-75% de la población de CD34+ que depende de la fuente de las células madre (De Wynter y colaboradores, Stem Cells 16:387-396, 1998). La trasplantación de una fracción de la célula madre no adherente CD133+CD34+ aislada en ratones NOD/SCID inmunodeficientes indujeron injerto multilinaje mieloide y linfoide alto, que siguiere que estas células se enriquecen altamente en las células de repoblación SCID (Kuci y colaboradores Blood 101:869-876, 2003). Células madre "totipotentes", tal como células madre hematopoyéticas o células madre neuronales, motivan generalmente a la progenie de un número limitado de tipos de tejido. Las células madre hematopoyéticas, las células madre de músculo y las células precursoras neuronales son varios ejemplos de células madre totipotentes . Sujeto. Una animal que tiene un sistema circulatorio, que incluye vertebrados tales como humanos y otros sujetos veterinarios, tales como, pero no se limitan a, primates, caninos, felinos, bovinos, y roedores. Tráfico. Los procesos de movimiento de una célula de tenido de origen y el viaje dentro del sistema circulatorio. En una modalidad, el tráfico incluye el movimiento de una célula del tejido de origen, alojamiento por la adhesión al endotelio, trasmigración, y migración final dentro del órgano efectivo. En una modalidad, el tráfico es el proceso del movimiento de una célula del sistema inmune. En otra modalidad, el tráfico incluye la movilización de la célula madre. Un ejemplos no limitativo, especifico de tráfico es el movimiento de una célula madre a un órgano objetivo. Otro ejemplos no limitativo, especifico de tráfico es el movimiento de una célula B o una célula pre- B que deja la médula espinal y que se mueve a un órgano objetivo . Trasdiferenciación . El cambio de una célula o tejido de un estado diferenciado a otro, o la diferenciación de una célula madre especifica de tejido en otro tipo de célula como, por ejemplo, una célula madre de médula ósea que se diferencia en una neurona. Trasplantación. La transferencia de una población de células, tejido o un órgano, o una porción de la misma, o un cuerpo o parte del cuerpo a otro cuerpo parte del cuerpo. Una "trasplantación alogenéica" o una "trasplantación heteróloga" es la trasplantación de un individuo a otro, en donde los individuos tienen genes en uno o más sitios que no son idénticos en secuencia en los dos individuos. Una trasplantación alogenéica puede ocurrir entre dos individuos de las mismas especies, quienes se diferencian genéticamente, o entre individuos de dos especies diferentes. Una "trasplantación autóloga" es una trasplantación de un tejido o una porción del mismo de una ubicación a otra en el mismo individuo, o trasplantación de un tejido o una porción del mismo de un individuo a otro, en donde los dos individuos son genéticamente idénticos. A menos que de otra manera se explique, todos los - térmicos .técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado como es entendido comúnmente por uno de habilidad ordinaria en la técnica a la cual está descripción pertenece. Los términos singulares "un", "una" y "el" incluyen referentes plurales a menos que el contexto claramente lo indique de otra manera. Similarmente, la palabra "o" se propone incluir "y" a menos que el contexto claramente lo indique de otra manera. Va a ser entendido adicionalmente que todos los tamaños de base o tamaño de aminoácido, y todo el peso molecular o valores de masa molecular, dadas para ácidos nucleicos o polipéptidos son aproximados, y se proporcionan para descripción. Aunque los métodos y materiales similares equivalentes aquellos descritos en la presente se pueden utilizar en la práctica o prueba de esta descripción, métodos y materiales adecuados se describen enseguida. El término "comprende" significa "incluye". Todas las publicaciones, solicitudes de patente, y otras referencias mencionadas en la presente se incorporan por referencia en su totalidad. En caso de conflicto, la presente especificación, incluyendo especificaciones de términos, se controlarán. Además, los materiales, métodos, ejemplos son ilustrativos solamente y no se proponen ser limitativos . Ligando de Selectina Aislado de Células de Algas Azules- Verdes Se divulga en la presente un extracto acuoso de algas azules-verdes, tal como Aphani zomenonflos aquae (AFA) , que se enriquece para un ligando de selectina, tal como un ligando de L-selectina. En una modalidad, el extracto es "Extracto A" un extracto acuoso que incluye compuestos polares que se disuelven rápidamente en agua o solución salina, que se enriquece para un ligando se selectina, tal como un ligando de L-selectina. En otra modalidad, este extracto se seca utilizando un proceso conocido, y se resuspende en una solución acuosa. Las algas azules-verdes, tal como Aphani zomenonflos aquae (AFA) o Spirulina se pueden fraccionar. El proceso para desarrollar, Gosechar y concentrar células de algas azules-verdes han sido descritos. Las algas azules-verdes AFA o Spirulina , se pueden aislar de cualquier fuente. La fuente puede ser una fuente natural de algas azules-verdes, tal como un lago (por ejemplo Lago Klamath) . La fuente también puede ser una fuente hecha por el hombre de algas Klamath tales como un lago artificial o fuente de agua, la fuente puede ser un medio ambiente producido para desarrollar y cosechar algas azules-verdes comercialmente. Las algas azules-verdes se pueden utilizar directamente, o se pueden almacenar como liquido, liquido congelado, deshidratado por congelación, o deshidratado utilizando el método descrito enseguida. En una modalidad, las algas - azules-verdes se cosechan y se secan utilizando la Tecnología REFRACTANCE WINDOW™. EL término "Tecnología REFRACTANCE WINDOW™" se refiere a un sistema en donde el secador utiliza las mu?has propiedades de agua para conducir el agua fuera del producto. En breve, cuando el agua se coloca sobre una fuente de calentamiento, el calor se dispersa en el agua a través de la convección. Conforme esta absorbe el calor, el agua transmite energía infrarroja al exterior en tres maneras: evaporación, conducción y radiación. Si la superficie de la superficie del agua se cubre por un medio transparente tal como plástico, la evaporación y su pérdida de calor asociado se bloquean y solamente la conducción ocurre. La membrana de plástico actúa similar a un espejo que refleja la energía infrarroja. Cuando un material húmedo, tal como algas azules-verdes húmedas se colocan sobre la superficie de plástico, el agua en el material crea una "ventana" que permite el pasaje de energía infrarroja. Se cree que en este sistema el agua en el material permite la radiación, conducción y evaporización todo para ocurrir, proporcionando transferencia de calor excepcionalmente efectiva. Sin embargo después de pocos minutos, conforme el material se seca, la "ventana" infrarroja y la conducción permanece el único medio de transferencia de calor. Puesto que el plástico es un conductor de calor pobre, poco calor se pierde y se transfiere al producto. Por lo tanto, cuando se seca con la Tecnología REFRACTANCE WINDOW™, las algas se exponen al calor solo brevemente. En este sistema de secado, las algas liquidas (células suspendidas en solución) se colocan sobre la superficie de la banda transportadora del secador. La banda es una mylar de grado alimenticio (película de poliéster transparente) colocada sobre la superficie del agua caliente. El calor del agua circulante se conduce a la banda y luego en el agua presente en el producto a ser secado, acelerando suavemente el proceso natural de evaporación mientras que protege los nutrientes naturales. Conforme el producto se seca y el agua se evapora, el calor cesa a ser transmitido al producto. Sin que sea relacionado por la teoría, esto previene la degradación de polipéptidos , ácidos nucleicos, nutrientes y pigmentos. Asi, el proceso de secado mantiene la temperatura de las algas muy abajo de la temperatura del agua circulante debajo de la banda transportadora. Otros sistemas de secado se pueden utilizar para producir algas secas. Generalmente, dos factores desempeñan una función en la degradación de las algas: grado de calor y tiempo de exposición al calor. La aplicación de una cantidad alta de calor para un periodo corto de tiempo da por resultado menos degradación de los componentes de las algas azules-verdes. En un ejemplo, el calor, tal como una temperatura de aproximadamente 65°C a aproximadamente 80°C se aplica, tal como una temperatura de aproximadamente 70°C a aproximadamente 75°C, o aproximadamente 72°C. El calor se puede aplicar durante una cantidad suficiente de tiempo para secar las algas, tal como aproximadamente 1 a aproximadamente 15 minutos, o durante aproximadamente 2 a aproximadamente 10 minutos, o durante aproximadamente 3 a aproximadamente 7 minutos. En un ejemplo, el calor se aplica a las algas a 72°C por solamente 3 a 5 minutos. Este proceso es conocido por uno de habilidad en la técnica, y se describe totalmente en Rossha Enterprises Website, y se describe en Abonyi y colaboradores, "Evaluation of Energy Efficiency and Quality Retention for the REFRACTANCE WINDOW™ Drying System: Research Report," Washington State University, Pullman, WA, 30 de Diciembre de 1999). Sin embargo, las células secas por congelación también se pueden utilizar. Como se divulga en la presente, un extracto acuoso se puede preparar a partir de células de algas azules-verdes deshidratadas o conservadas, frescas, tal como Aphani zomenonflos aquae (AFA) . Las algas se pueden extraer con agua o una solución de sal regulada adecuada. Por ejemplo, en agua o soluciones reguladas, generalmente de un pH neutro (aproximadamente pH 7.0 a aproximadamente pH 7.8, tal como aproximadamente pH 7.2 a aproximadamente pH 7.6, o aproximadamente pH 7.4) se utiliza. Las soluciones de sal reguladas adecuadas son bien conocidas en la técnica e incluyen solución salina regulada de fosfato (tal como aproximadamente solución salina regulada de fosfato 0.1 M) y medios de cultivo comercialmente disponibles. La extracción acuosa se realiza generalmente abajo de temperatura ambiente (generalmente 25°C), tal como a temperatura de 3°C a aproximadamente 15°C, tales como aproximadamente 4°C a aproximadamente 10°C, o a aproximadamente 4°C, pero la extracción también se puede realizar a temperatura ambiente (aproximadamente 25°C). En un ejemplo, un gramos de material de alga seco, tal como Aphani zomenonflos aquae (AFA) seco, se suspende en aproximadamente 10 ml a aproximadamente 50 ml, tal como aproximadamente 40 ml de solución salina regulada con fosfato (por ejemplo, solución salina regulada con fosfato 0.1 M, pH 7.4), y se incuba a 4°C. Esta incubación puede durax por 5 minutos, la mitad de una hora, varias horas, o durante la noche. En varios ejemplos, las algas se incuban en una solución acuosa durante aproximadamente la mitad de una hora a aproximadamente dos horas, aproximadamente la mitad de una hora o aproximadamente tres horas, o aproximadamente la mitad de una hora a aproximadamente 12 horas. Las algas suspendidas en la solución de sal regulada se pueden proteger de la luz para disminuir la degradación. Después de la incubación en una solución acuosa, el material sólido se separa del extracto acuoso. La mezcla de algas en la solución acuosa, tal como la solución de sal se puede mezclar mediante la inversión repetida del frasquito de vidrio, y se centrifuga para remover el material sólido. Por ejemplo, la suspensión se puede centrifugar a 400 g durante 10 minutos. Después de la separación del material sólido, el sobrenadante, que se presenta generalmente azul en color, se aisla. Este extracto es llamado "Extracto A". Este sobrenadante opcionalmente se puede esterilizar tal como mediante filtración. En un ejemplo, el sobrenadante azul brillante se decanta después de la centrifugación y se filtra estéril utilizando un filtro de 0.22 mm. Este filtrado se puede almacenar, tal como aproximadamente 4°C en la oscuridad. El extracto que contiene el ligando de selectina, tal como el ligando de L-selectina, tal como el Extracto A, se pueden secar como se describe en lo anterior. En un ejemplo, el calor, tal como una temperatura de aproximadamente 65°C a aproximadamente 80°C se aplica al extracto acuoso, tal como una temperatura de aproximadamente 70°C a aproximadamente 75°C, o aproximadamente 72°C. El calor se puede aplicar durante una cantidad suficiente de tiempo para secar el extracto, tal como aproximadamente 1 a aproximadamente 15 minutos, o por aproximadamente 2 a aproximadamente 10 minutos, o por aproximadamente 3 a aproximadamente 7 minutos. En un ejemplo, el calor se aplica al extracto a 72°C durante solamente 3 a 5 minutos. Este proceso es similar al proceso para secar las algas (ver Abonyi y colaboradores, "Evaluation of Energy Efficiency and Quality Retention for the REFRACTANCE WINDOW™ Drying System: Research Report," Washington State University, Pullman, WA, 30 de Diciembre de 1999) . Uno de habilidad en la técnica puede producir fácilmente un producto seco a partir de un extracto acuoso utilizando metodologías conocidas. En varios ejemplos no limitativos, específicos, una cantidad efectiva del extracto que contiene selectina de algas azules-verdes, tal como un extracto acuoso enriquecido para un ligando de L-selectina, es de aproximadamente 0.25 gramos a aproximadamente 5 gramos , o de aproximadamente 0.5 gramos a aproximadamente 5 gramos, o de aproximadamente 1 gramo a aproximadamente 2 gramos de un extracto acuoso seco, tal como el extracto A. En un ejemplo nc limitativo, especifico, la cantidad efectiva de extracto que contiene selectina de algas azules-verdes es de aproximadamente 1 gramo de un extracto acuoso seco, tal como el extracto A. Un ligando de selectina se puede purificar adicionalmente a partir del extracto A acuoso. Por ejemplo, el ligando de selectina se aisla utilizando la purificación de afinidad. En un ejemplo, el extracto A se pone en contacto con un sustrato sólido que incluye L-selectina, P-selectina, o E-selectina. Las cuentas magnéticas se enlazan covalentemente a una selectina, tal como la L-selectina humana se puede utilizar. Una secuencia de aminoácido ejemplar de la L-selectina humana se expone como No. de Acceso de GENBANK NP 000646; una secuencia de aminoácido ejemplar de L-selectina de murino se expone como CAB55488 y una secuencia ejemplar de L-selectina de ratón se expone como No. de Acceso de GENBANK AAH52681. Todo de estas secuencias fueron disponibles en internet el 24 de Junio del 2005, y se incorporan por referencia en la presente. Secuencias ejemplares adicionales de L-, P-, y E-selectinas se pueden encontrar en la base de datos de GENBANK. La selectina puede ser una molécula nativa, tal como una L-selectina humana, una P-selectina humana, una L-selectina de murino, o una P-selectina de murino. La selectina también puede ser una forma genéticamente diseñada, tal como una molécula recombmante que es una forma estable de la L-selectina y/o una molécula que incluye un fragmento de una selectina, tal como la porción extracelular de la molécula de L-selectina humana. En un ejemplo, la selectina es una proteina de fusión en la cual la porción extracelular de la L-selectina humana y la porción Fe de la inmunoglobulina. Tales proteínas de fusión recombinantes son comercialmente disponibles, tal como de, por ejemplo, R&D Systems, y se pueden ordenar a través del internet. El sustrato sólido enlaza covalentemente a la selectina, tal como, pero no se limita a, L-selectina, se incuba con el sobrenadante "Extracto A" (el extracto soluble en agua de las algas azules-verdes). El material de las algas que enlaza específicamente una selectina luego se aisla. Por ejemplo, el ligando de selectina se puede segmentar de la molécula de selectina recombinante utilizando un tratamiento de ácido. El ligando de selectina también se puede segmentar de la molécula de selectina recombinante utilizando un tratamiento alcalino y/o utilizando el tratamiento de calor. Como se divulga en la presente, el ligando de selectina aislado tiene un peso molecular de aproximadamente 50 kDa a aproximadamente 60 kDa, tal como aproximadamente 55 SkDa, bajo condiciones de reducción. En un ejemplo, el ligando de selectina aislado tiene un peso molecular de aproximadamente 54 kDa o aproximadamente 57 kDa bajo condiciones de reducción. En una modalidad, el ligando de selectina no forma un complejo. Por ejemplo, el ligando de selectina no puede formar un complejo con si mismo o con otro ligando de selectina. En varios ejemplos, bajo condiciones no de reducción, el ligando de selectina se puede asociar en un complejo. Asi, si un complejo de tres subunidades de 54 kDa se forma bajo condiciones no de reducción el peso molecular es de aproximadamente 162 kDa, y si un complejo de tres subunidades de 57 kDa se forma el peso molecular evidente bajo condiciones no de reducción es de aproximadamente 171 kDa. Si un complejo de tres subunidades de 54 kDa y tres subunidades de 57 kDa se forma bajo condiciones no de reducción el peso molecular . del complejo es de aproximadamente 233 kDa. Asi, el ligando de selectina purificado puede tener un peso molecular de aproximadamente 200 kDa bajo condiciones no de reducción. Si un complejo de uno de cada ligando se forma, entonces el peso molecular evidente del complejo es de aproximadamente alrededor de 111 kDa. Alternativamente, las dos subunidades no pueden estar en un complejo, y el peso molecular evidente bajo condiciones no de reducción será el mismo como bajo condiciones de reducción. El ligando de selectina puede ser una proteina o una glicoproteina. Los extractos y composiciones divulgados en la presente se pueden administrar en cualquier forma, incluyendo como sólidos tales como tabletas o polvos o como una preparación liquida. En un ejemplo, las composiciones se formulan para la administración enteral. Un ejemplo de una formulación de uso es una preparación farmacéutica (tal como una tableta, liquido enteral, liquido parenteral, cápsula, liquida intranasal u otra forma) . En un ejemplo divulgado particular la composición es una preparación farmacéutica en particular una tableta o cápsula. Como se conoce en la técnica, las composiciones adecuadas para la administración oral se pueden presentar como unidades discretas tales como cápsulas, trociscos o tabletas, cada uno que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición, como un polvo p granulos o como una solución o una suspensión en un liquido acuoso. Asi, las formas de dosificación incluyen tabletas, cápsulas., dispersiones, suspensiones, soluciones, cápsulas y los similares. Debido a su facilidad de administración, las tabletas y cápsulas representan una forma unitaria de dosificación oral conveniente caso en el cual los portadores farmacéuticos sólidos como se describe en lo anterior se emplean. Sin embargo, los compuestos también se pueden administrar mediante medios de liberación controlados, o se pueden formular por otros medios de suministro, tal como, pero no se limitan a suministro intranasal o transdérmico . Las composiciones pueden incluir ingredientes inactivos tales como agentes aglutinantes (tal como almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa) ; aglutinantes o rellenadores (tales como lactosa, pentosan, celulosa microcristalina, o fosfato de hidrógeno de calcio) ; lubricantes (tal como estearato de magnesio, talco o sílice) ; desintegrantes (tal como almidón de papa o glicolato de almidón de sodio) ; o agentes humectantes (tal como lauril sulfato de sodio) . En un ejemplo, una tableta que contiene las composiciones divulgadas en la presente, tal como pero no se limita a un extracto enriquecido para un ligando de L-selectina o una forma sólida del mismo, o un ligando de selectina purificado, se pueden preparar mediante compresión o moldeo, opcionalmente, con uno o más ingredientes accesorios. Las tabletas comprimidas se pueden preparar al comprimir en una máquina adecuada, una forma que fluye libre tal como polvo o granulos de un extracto seco y/o ligando de selectina, opcionalmente mezclado con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, agente activo de superficie o dispersante. La composición, tal como la tableta, puede incluir componentes farmacéuticamente aceptables tales como lactosa, glucosa, sacarosa, almidón de maíz, almidón de papa, esteres de celulosa tal como acetato de celulosa, etilcelulosa, estearato de magnesio, silicato de calcio, sílice precipitada, talco, ácidos grasos tal como ácido esteárico, celulosa microcristalina, cera de carnauba y los similares. Las tabletas o cápsulas se pueden recubrir mediante métodos bien conocidos en la técnica. Las preparaciones liquidas para la administración oral pueden tomar la forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes o suspensiones, o pueden ser presentados como un producto seco para la constitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso (ver la sección de ejemplos) . Tales preparaciones liquidas se pueden preparar mediante medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables que son agentes inactivos tal como agentes de suspensión (tal como jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas), agentes emulsificantes (tal como lecitina o acacia), y conservadores (tal como metil o propil-p-hidroxibenzoatos o ácido sórbico) . Las composiciones también se pueden hacer para hacer agradables al sabor, y asi pueden contener sales reguladoras, saborizantes, colorantes y agentes edulcorantes como apropiados. Los diluyentes y otros ingredientes inactivos tal como uno o más agentes aglutinantes farmacéuticamente aceptables, rellenadores, soportes, agentes espesantes, agentes que mejoran el sabor, agentes colorantes, conservadores, estabilizantes, reguladores, emulsificantes, agentes de flujo, absorbentes y los similares o mezclas de los mismos se pueden utilizar dependiendo de la forma de la composición empleada. La composición también puede incluir un edulcorante, tal como un edulcorante natural (por ejemplo, azúcar o miel) o artificial (por ejemplo, sacarina), si se desea. Generalmente, los portadores, azucares, diluyentes, estabilizantes, soluciones reguladoras, ingredientes sabopzantes y de textura se consideran que son ingredientes inactivos, ya que no imparten un efecto terapéutico en y de si mismos. En varias modalidades, la composición puede incluir uno o más extracto (s) adicional (es ) de Aphanizomenonflos aquae (AFA) que induce la migración de las células madre. Este extracto se puede obtener al extraer la Aphani zomenonflos aquae liquida (AFA) en un alcohol, tal como pero no se limita a, etanol o metanol. En un ejemplo, el extracto adicional se produce al extraer Aphani zomenonflos aquae (AFA) en aproximadamente 10% a aproximadamente 20% de etanol. En un ejemplo, la composición incluye un extracto preparado al extraer Aphanizomenonflos aquae liquida (AFA) en aproximadamente 10% de etanol. En un ejemplo, el extracto adicional se produce al incubar AFA liquida en aproximadamente 10% de etanol a una temperatura de aproximadamente 65°C a aproximadamente 85°C se aplica al extracto acuoso, tal como a una temperatura de aproximadamente 70°C a aproximadamente 905°C, o aproximadamente 85°C. La solución luego se centrifuga y el sobrenadante se seca (ver en lo anterior) . En una modalidad, aproximadamente 50 mg a aproximadamente 500 mg, tal como aproximadamente 100 mg a aproximadamente 250 mg, tal como aproximadamente 150 mg del producto seco se administra al sujeto . En un ejemplo, una composición de uso incluye aproximadamente 0.25 gramos a aproximadamente 5 gramos, de aproximadamente 0.5 gramos a aproximadamente 5 gramos, o de aproximadamente 1 gramo a aproximadamente 2 gramos de un extracto que contiene selectina seco, tal como una forma sólida de un extracto acuoso enriquecido para un ligando de L-selectina, tal como el extracto A. En un ejemplo no limitativo, especifico, la composición incluye aproximadamente 1 gramo de un extracto que contiene selectina seco de algas azules-verdes (tal como AFA) , tal como una forma sólida de una forma enriquecida de extracto acuoso un ligando de L-selectina, tal como el extracto A. La composición también incluye aproximadamente 150 mg de un segundo extracto seco de AFA, en donde el segundo extracto seco se produce al incubar la AFA en aproximadamente 10% a aproximadamente 20% de etanol a aproximadamente 70°C a aproximadamente 90°C aproximadamente de una a tres horas, tal como al incubar la AFA en aproximadamente 10% de etanol durante aproximadamente 850°C durante aproximadamente de una a tres horas. Aumento de la Movilización de la Célula Madre Se describe un método en la presente para aumentar la movilización de las células madre al administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un extracto acuoso de unas algas azules-verdes tal como Aphani zomenonflos aquae (AFA) , enriquecida para un ligando de selectina, tal como L-selectina, y/o una cantidad terapéuticamente efectiva de un ligando de selectina purificado. El ligando de selectina puede ser un ligando de L-selectina, P-selectina, y/o una E-selectina. Los ligandos de selectina estimulan la generación de la célula madre (Frenette y Weiss, Blood 196(7): 2460, 2000). El sujeto puede ser cualquier sujeto, tal como un humano o un sujeto veterinario. Un extracto acuoso de algas azules-verdes enriquecido para un ligando de selectina tal como una L-selectina, o un ligando de selectina purificado de algas azules-verdes, se puede administrar solo o en combinación con otros agentes. En varias modalidades, el ligando de selectina purificado y/o el extracto acuoso enriquecido para un ligando de -selectina (o una forma sólida del mismo), se incluye en una composición farmacéutica junto con un portador farmacéuticamente aceptable. Cantidades terapéuticamente efectivas de componentes adicionales, tal como formas sólidas de extractos adicionales, también se pueden administrar al sujeto. En una modalidad, una cantidad terapéuticamente efectiva de una forma sólida de un extracto acuoso de unas algas azules-verdes enriquecidas para un ligando de selectina se administran al sujeto. Asi, un método se proporciona en la presente para incrementar la movilización de las células madre en un sujeto, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un extracto acuoso de algas azules-verdes enriquecidas para un ligando de selectina tal como L-selectina, de esta manera incrementado la movilización de las células madre en el sujeto.

En un ejemplo no limitativo, especifico, el extracto acuoso se seca, tal que una fórmula sólida se produce, y una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma sólida se administra a un sujeto de interés. La cantidad terapéuticamente efectiva de extracto, tal como un extracto acuoso de algas azules-verdes enriquecido para un ligando de selectina, es de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 1.0 g por kg de peso corporal, tal como aproximadamente 0.05 a aproximadamente 0.5 gramos por kg de peso corporal, o de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.5 gramos por kg de peso corporal. En otro ejemplo no limitativo, especifico la cantidad efectiva de la forma sólida de un extracto acuoso de algas azules-verdes enriquecidas para un ligando de selectina es de aproximadamente 0.25 gramos a aproximadamente 5 gramos, de aproximadamente 0.5 gramos a aproximadamente 5 gramos, o de aproximadamente 1 gramo a aproximadamente 2 gramos. En un ejemplo no limitativo, especifico, la cantidad efectiva de la forma sólida del extracto acuoso del as algas azules-verdes enriquecidas que forman un ligando de selectina es de aproximadamente 1 gramo. Los agentes activos de las composiciones divulgadas en la presente se pueden mezclar con un portador. En general, la naturaleza del portador dependerá del modo particular de la administración que se emplea. Por ejemplo, las formulaciones parenterales comprenden usualmente fluidos inyectables que incluyen fluidos farmacéuticamente y fisiológicamente aceptables tales como agua, solución salina fisiológica, soluciones de sal balanceadas, dextrosa acuosa, glicerol y los similares como un vehículo. Para las composiciones sólidas (por ejemplo, formas de polvo, pildoras, tabletas, o cápsulas) , los portadores sólidos no tóxicos convencionales pueden incluir, por ejemplo, grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, o estearato de "magnesio. Además de los portadores biológicamente neutros, las composiciones farmacéuticas a ser administradas pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas, tal como agentes humectantes o emulsificantes, conservadores, y agentes reguladores de pH y los similares, por ejemplo acetato de sodio o monolaurato de sorbitan. Esta cantidad efectiva se puede administrar en una frecuencia dada, tal como aproximadamente una vez a la semana, aproximadamente dos veces a la semana, aproximadamente tres veces a la semana, una vez al dia, aproximadamente dos veces al dia, aproximadamente tres veces al dia, o más. Uno de habilidad en la técnica puede determinar fácilmente una cantidad terapéuticamente efectiva de un ligando de selectina purificado, o un extracto acuoso enriquecido de un ligando de selectina. En un ejemplo no limitativo, especifico, se estima la cantidad de células madre circulantes, tal como la cantidad de la célula que expresa CD34. La cantidad terapéuticamente efectiva de unas algas azules-verdes de extracto acuoso enriquecidas para un ligando de selectina y la frecuencia de administración de estas composiciones puede depender de una variedad de factores, tal como el género o especie de las algas utilizadas, la salud general del sujeto que se trata, y las características fisiológicas (por ejemplo, altura, peso, porcentaje de grasa corporal, .metabolismo, etc.) del sujeto que se trata. El extracto acuoso se puede administrar directamente, sin alterar los parámetros físicos, o se puede administrar en otra forma fisica. Asi, en una modalidad, el extracto se seca y se administra como un sólido. En otra modalidad, el extracto acuoso se seca, y luego una cantidad especifica se disuelve en un portador y se administra subsecuentemente al sujeto . Ensayos específicos para determinar una cantidad terapéuticamente efectiva de un extracto acuoso, tal como un ligando acuoso enriquecido para una selectina se proporcionan en la presente. En un ejemplo no limitativo, especifico, diferentes cantidades de un extracto que contiene ligando e selectina de algas azules-verdes, tal como AFA, se consumen por los sujetos humanos y la presencia y/o la cantidad de las células madre (que pueden incluir subtipos de tales células) presentes en el sistema circulatorio se detecta y/o se analiza. En otra modalidad, un modelo animal (tal como un ratón, rata, u otro veterinario) se utiliza, y la población de células madre recientemente integradas se monitorea en varios tejidos. Ver los ejemplos enseguida) . Debe ser notado que los métodos divulgados tienen aplicación igual en arreglos médicos y veterinarios. ¡ Sin considerar como se proporcione o como se > administre, el extracto de algas azules-verdes y/o el ligando | I de selectina purificado induce un incremento transiente en la población de las células madre circulantes, tal como células ¡ madre CD34+ y/o células CD133+. El extracto de algas azules-verdes también puede incluir un incremento transciente en las células madre que se pueden medir mediante aminoacetaldehido fluorescentemente marcado. Este procedimiento se describe en el sitio de internet de células madre (ver http://www.stemcell.com/technical/aldefluor.asp, ver también http: //www. stemcell . com/technical/12_aldeflúor . pdf ) . Brevemente, el aminoacetaldehido marcado con fluorescencia puede difundirse libremente en las células. Una enzima intracelular ALDH (aldehido deshidrogenasa) convierte esto en aminoacetato marcado con fluorescencia, que puede difundirse fuera de las células. Asi, las células que tienen la enzima ALDH (tal como células madre) llega a ser fluorescente. Otras células (tales como células que no son células madre, que incluyen células diferenciadas) se presentan no fluorescentes después del lavado. El aumento de la movilización de las células madre se puede medir al analizar la respuesta de las células madre a una dosis particular del extracto de algas azules-verdes. En una modalidad, proporcionando un ligando de selectina purificado de algas azules-verdes a un sujeto aumentarán la movilización de esas células madre del sujeto dentro de un cierto periodo de tiempo, tal como menor que aproximadamente 5 horas, menor que aproximadamente 4 horas, menor que aproximadamente 2 horas, menor que aproximadamente 1 hora, menor que aproximadamente 30 minutos, o menor que aproximadamente 10 minutos después de la administración. En una modalidad, la administración del extracto acuoso de las algas azules-verdes enriquecidas para un ligando de selectina, y/o el ligando de selectina purificado, da por resultado la movilización de las célula madre en la circulación de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 minutos después de la administración. Las células madre movilizadas entrarán al sistema circulatorio, de esta manera incrementado el número de células madre circulantes dentro del cuerpo del sujeto. El incremento del porcentaje en el número de células madre circulantes comparado a una linea base normal puede incrementar de aproximadamente 25%, aproximadamente 50%, aproximadamente 100% o mayor que aproximadamente 100% como es comparado a un control. En una modalidad, el control es un valor de la linea base del mismo sujeto. En otra modalidad, el control es el número de células madre circulantes en un sujeto no tratado, o en un sujeto tratado con un placebo o un portador farmacéutico. En algunas modalidades, el sujeto está saludable.

En otra modalidades, el sujeto está sufriendo una enfermedad o condición fisiológica, tal como la inmunosupresión, enfermedad crónica, lesión traumática o enfermedad degenerativa. En ciertas modalidades, el sujeto sufre una enfermedad o condición de la piel, sistema digestivo, sistema nervioso, sistema linfático, sistema cardiovascular, o sistema endocrino. En modalidades especificas, el sujeto sufre de osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, infarto cardiaco, enfermedad de Parkinson, lesión del cerebro traumática, esclerosis múltiple, cirrosis del higado, o cualquiera de las enfermedades y condiciones descritas en los ejemplos enseguida. EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar características particulares de varias modalidades descritas. El alcance de la presente invención no debe ser limitado a aquellas características ejemplificadas. Ejemplo 1 Producción de AFA y extracción Unas algas azules-verdes, Aphani zomenonflos aquae (AFA), se aislaron de Lago Klamath. Las algas azules-verdes se secaron utilizando la Tecnología REFRACTANCE WINDOW™. Un gramo de material de alga seco se resuspendió en 10 ml de solución salina regulada con fosfato y agua y se incubó a 1 hora a 4°C y se protegió de la luz. Este fango se mezcló mediante inversión repetida del frasquito de vidrio y se centrifugó a 400g durante 10 minutos. El sobrenadante azul brillantes se decantó y se filtró estéril utilizando un filtro e 0.22 mm. Este filtrado se almacenó en frió y en oscuro, y se utilizó dentro del mismo dia de preparación. Este extraco se llamó Extracto A. Ejemplo 2 Ligando de selectina extraido de AFA- : materiales y métodos Soluciones reguladoras y medios : Para los cultivos celulares, las células se resuspendieron y se cultivaron en RPMI-1640 con 10% de suero de becerro fetal, penicilina y estreptomicina al 1%, y L-glutamina. Para le inmunomanchado, las células se lavaron, se resuspendieron y se mancharon en solución salina regulada con fosfato que contiene Ázida al 0.02% y suero de becerro fetal o albúmina de suero bovino al 1%. Para los ensayos de proliferación y para la estimulación de los ensayos de manchado de fosfotirosina, las células se prepararon en RPMI 1640 con rojo fenol, Suero de Becerro Fetal al 10% (Gibco, Grand Island NY) , glutamina al 1%, penicilina al 1% y estreptomicina al 1%.

Extra ctos cianoba cterianos : Polvo seco de las algas azules-verdes de agua fresca Aphani zomenonflos aquae (AFA) se obtuvieron del Lago Klamath Superior en Oregon, USA. Para los experimentos tempranos, se utilizó un polvo seco por congelación. Para los experimentos posteriores, un polvo se obtuvo de Desert Lake Technologies LLC, Keno, OR, que habia sido secado utilizando la tecnología de secado REFRACTANCE WINDOW™. El polvo seco de Spirul ina pla tensis se obtuvo de Healthforce Nutritionals Inc, Escondido CA. Un gramo de material de algas seco se resuspendió en 10 ml de solución salina regulada con fosfato, y se incubó durante la noche a 4°C y se protegió de la luz. El fango se mezcló mediante inversión repetida del frasquito de vidrio, y se centrifugó a 400 g durante 10 minutos. El sobrenadante azul brillante se decantó y se filtró estéril utilizando un filtro de 0.22 mm. Este filtrado se almacenó frió y oscuro, y se utilizó dentro del mismo dia de preparación. An ti cuerpos monoclona les : el anticuerpo monoclonal CD62L TQ1 (especifico para el área de enlace de ligando de la molécula de L-selectina) enlazado a ficoeritrina (PE), se adquirió de Coulter (Hialeah, FL) . CD45-PerCP, CDllb-PE, CD14-PE, y los anticuerpos de control de isotipo se obtuvieron de Becton-Dickinson . Captura del l igando util i zando Dynabeads y proteínas quimera : A fin de identificar el peso molecular del compuesto de enlace de selectina, se utilizó un método libre de células, en el cual las Dynabeads (Dynal Biotech Inc., Lake Success, NY) recubiertas con proteina G se incubaron con una proteina quimera de selectina (R & D Systems Inc., Minneapolis, MN) . La proteina quimera es una fusión del dominio extracelular de la L-selectina, P-selectina, o E-selectina humana, con la porción Fe de la inmunoglobulina humana G. la proteina quimera se enlazó covalentemente sobre la Dynabeads recubiertas con proteina G utilizando el protocolo recomendado por el fabricante, en el cual las cuentas se incubaron durante una hora en una solución de 5.4 mg/ml recientemente hecha de dimetil pimelimidato x 2HC1 (Sigma Aldrich) en solución reguladora de trietanolamina 0.2 M de pH 8.0 (Sigma Aldrich). La reticulación se detuvo al remover las cuentas de la solución reticuladora, y resuspender en solución reguladora TRIS 50 mM pH 7.5 (Sigma Aldrich) durante 15 minutos. La quimera no enlazada se levigó fuera de las cuentas por dos lavados en solución reguladora de citrato/ácido citrico de pH 2.8. Las cuentas luego se lavaron varias veces en PBS pH 7.4, y se adicionaron a un extracto de agua de AFA recientemente hecho. El material de enlace del extracto de agua de AFA se levigó en uno de los tres dias: 1) al hervir en solución reguladora Laemmli que contiene beta-mercaptoetanol, 2) levigar con pH 12.5, y 3) competición para el sitio de enlace de ligando de selectina que utiliza ligandos de selectina conocidos. Se encontró que un compuesto de peso molecular evidentemente idéntico se purificó con afinidad tanto por L-selectina como P-selectina. En experimentos paralelos, las cuentas recubiertas con la proteina de fusión de L-selectina/IgGl humana recombinante se utilizaron para observar si un extracto de agua similar de otras algas azules-verdes, Spirulina pla tensis, contuvieron un compuesto de enlace de selectina similar . Electroforesis : Muestras de eluyente del método de afinidad de Dynabeads se prepararon para la electroforesis de gel al mezclar 1:1 v/v en solución reguladora de muestra Laemmli (Biorad cat# 161-0737) con mercaptoetanol . La electroforesis de gel de SDS se realizó sobre cuatro geles al 15% (BioRad) en solución reguladora de TRIS/glicina/SDS (Biorad cat# 161-0732) durante 1 hora a 120 V. La electroforesis para la proteina nativa se realizó con reactivos libre de SDS, utilizando la Solución Reguladora de Muestra Nativa (Biorad cat# 161-0738) para carga, y solución reguladora de TRIS/glicina (Biorad cat# 161-0734) para la electroforesis. Suj etos humanos : Se reclutaron voluntarios humanos saludables en consentimiento informado del personal de laboratorio y estudiantes entre 20 y 45 años de edad. Las muestras sanguíneas se obtuvieron mediante venopunción bajo condiciones asépticas y se procesaron inmediatamente. Aislamien to de Cél ula s Mononucleares Sanguíneas Periféricas (PBMC) : Sangre venosa periférica se formó en capas sobre Ficoll-Hypaque (Amersham) , y se centrifugó' durante 25 minutos a 400 g. La interfase rica en PBMC se cosechó, y las células se lavaron dos veces en RPMI . Aislamien to de Cél ulas Nucleadas Polimorfas (PMN) : Sangre venosa periférica se mezcló con dextrina 70 en solución salina 0.9% a una concentración final de dextrina al 1% a temperatura ambiente. La sedimentación se permitió durante 1 hora. El sobrenadante rico en leucocitos se cosechó y los leucocitos se formaron en pelotilla mediante centrifugación. La pelotilla se resuspendió en 2 ml de solución salina regulada con fosfato que luego se formó en capas sobre la parte superior de Ficoll-Hypaque 3 ml, y se realizó la centrifugación gradiente para separar las células nucleares (linfocitos y monocitos) de neutrófilos. La pelotilla que contiene neutrófilos se resuspendió en solución salina. Las células se lavaron, se resuspendieron en un medio rico en nutriente (RPMI 1640), y se mantuvo sobre hielo hasta el uso. Inmunomanchado para la L-selectina : Leucocitos sanguíneos periféricos frescos y fijados con formalina se distribuyeron en cavidades en una placa de microtitulo de 96 cavidades de fondo B en la concentración aproximada de 105 células por cavidad. Un extracto basado en agua recientemente preparado de las algas azules-verdes AFA se preparó en solución salina fisiológica y se realizaron diluciones en serie. Las células se resuspendieron en ya sea PBS, PBS-AFA-W, PBS-AFA-W-ázida, o PBS-PC en varias diluciones. Las células se incubaron a temperatura ambiente en la oscuridad durante 20 minutos. La fracción no fijada no estuvo en contacto con la ázida de sodio durante tratamiento con el extracto de AFA, sino se resuspendió en solución reguladora que contiene ázida de sodio para el inmunomanchado subsecuente. Esto fue para permitir movimiento citoesqueléticos libres y derramamiento de la L-selectina. La fracción que se mantuvo en ázida de sodio al 0.02% estuvo en contacto con la ázida de sodio durante el procedimiento completo, tanto el tratamiento con extracto de AFA como el inmunomanchado subsecuente. Esto bloqueó en movimientos citoesquelético y redujo o bloqueó el derramamiento de la L-selectina. Después de la incubación con o sin AFA-W, la solución reguladora se adicionó, y las células se centrifugaron. El sobrenadante se descartó, y las células se resuspendieron en volumen de 50 µl de solución salina regulada con fosfato que contiene suero de becerro fetal al 1% y ázida al 0.05%. las cantidades óptimas de los anticuerpos monoclonales, como se determina por las titulaciones previas se adicionaron. Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 10 minutos, la solución reguladora se adicionó, y las placas se centrifugaron. Los sobrenadantes se descartaron, las células se resuspendieron en 50 µl de solución reguladora, y se fijaron en formalina al 1%. Las muestras se mantuvieron en frió y en oscuro hasta la adquisición por la citometria de flujo. La adquisición se realizó dentro de 24 horas de fijación. Inmunomanchado para la expresión CXCR4 inducida por los ligandos de L-selectina : El enlace de Fucoidano a L-selectina da por resultado la externalización de CXCR4 pre-hecho sobre la superficie celular, seguido por la internalización, creando una ventana en el tiempo para la sensibilidad a los factores quimiotácticos . Este sistema se utilizó para examinar si la AFA-W competirla con el Fucoidano para enlazar al a L-selectina sobre la superficie celular de leucocitos, y para estimar si bloquearla este efecto funcional de otro ligando de L-selectina. Para ser esto, las PBMC humanas recientemente purificadas se resuspendieron en RPMI, y se distribuyeron en una serie de microcavidades de fondo redondo. El Fucoidano se adicionó a una serie de cavidades, la AFA-W a otra serie, y una mezcla de Fucoidano y AFA-W se adicionó a la tercera serie de cavidades. En puntos de tiempo diferentes (1, 10, 20, 30, 40, 60 minutos), la ázida de sodio que contiene PBS se adicionó a las cavidades a fin de detener los movimientos citoesqueléticos, y de esta manera detener el reciclado del CXCR , permitiendo el manchado para el CXCR4 expresado en la superficie celular en cada punto de tiempo. Las células se lavaron en solución salina regulada con fosfato que contiene ázida se mancharon con CXCR4-PE utilizando el protocolo de manchado descrito en lo anterior, se fijaron en formalina, y se analizaron para la citometria de flujo. Estimación del peso molecular de los componentes na tivos contra desna turalizados del ligando de selectina de AFA : Las distancias de el gel se midieron para los marcadores de peso molecular conocidos. La posición del ligando de selectina derivado de AFA (doble banda) se graficaron sobre esa gráfica. Ejemplo 3 Células madre se movilizaron mediante un extracto acuoso de AFA Estos experimentos descritos enseguida demuestran que un extracto acuoso de AFA (Extracto A, también llamado "AFA-W") es enriquecido por un ligando de selectina y se puede utilizar para aumentar la movilización de las células madre CD34+. Se identificaron voluntarios humanos saludables, y la proporción de las células CD34+ se evaluó en la sangre periférica (células CD34+ circulantes) de cada persona previo al consumo del extracto que contiene selectina de algas azules-verdes asi como 10 minutos, 30 minutos, 60 minutos, y 120 minutos después del consumo. Los voluntarios se les instruyó limitar la actividad fisica y mental durante un tiempo antes y después del consumo del extracto de AFA. En una modalidad, 5 gramos de AFA seca se extrajeron en 40 ml de agua y el participante bebió el agua, en otra modalidad, los participantes consumieron 750 mg de extracto que contiene ligando de L-selectina seco de AFA. Los glóbulos rojos en las muestras sanguíneas enteras obtenidas de cada voluntario se Usaron utilizando solución de lisado FACS (Beckton-Dickinson, San José, CA) . Las células restantes se lavaron y se mancharon con el anticuerpo monoclonal HPCA-2 conjugado con isotiocianato de fluoresceina . Las muestras se fijaron en formalina al 1% y se analizaron mediante la citometria de flujo utilizando un citómetro de flujo FacsCalibur (Becton-Dickinson, San José, CA) y el software CellQuest (Becton-Dickinson, San José, CA) . La FIG. 1 ilustra que el consumo del extracto que contiene ligando de selectina de AFA accionó un incremento transciente en las células madre circulantes. Específicamente, el eje X muestre el curso de tiempo de un experimento típico a 0, 10, 30, y 60 minutos después de la ingestión del extracto que contiene el ligando de L-selectina de AFA, expresado como un porcentaje del nivel de control. En el tiempo de la ingestión, la proporción de la célula CD34+ circulantes es el mismo como el control. El incremento pico en la célula CD34+ circulante se observó aproximadamente 10-30 minutos después del consumo. En este punto de tiempo, el número de células CD34+ circulantes se incrementó 2 veces (mayor que 200%) sobre el valor del control. Por una hora después de la ingestión del extracto que contiene el ligando de se.lectina de AFA, las células CD34+ circulantes hablan regresado al valor de la linea base, por lo tanto, un extracto acuoso de AFA puede aumentar la liberación de las células madre endógenas (por ejemplo células CD34+) de la médula espinal y otros sitios anatómicos en la circulación. El consumo del extracto que contiene el ligando de selectina de AFA moviliza las células madre CD34+. Ejemplo 4 Un Extracto Acuoso de AFA Contiene un Ligando de Selectina Los experimentos descritos enseguida documentan que la AFA contiene un compuesto soluble en agua que reduce específicamente el inmunomanchado TQ1 de la L-selectina sobre linfocitos, monocitos, y neutrófilos humanos. Las Células Mononucleares Sanguíneas Periféricas (PBMC) se aislaron al formar en capas la sangre venosa periférica sobre Ficoll-Hypaque (Amersham) , y se centrifugaron durante 25 minutos a 400 g. La interfase rica en PBMC se cosechó, y las células se lavaron dos veces en RPMI. Las células polimorfonucleares (PMN) se aislaron al mezclar la sangre venosa periférica con dextrina 70 en solución salina al 0.9% a una concentración final de dextrina al 1% a temperatura ambiente. La sedimentación se permitió durante 1 hora. El sobrenadante rico en leucocitos se cosechó y los leucocitos se formaron en pelotillas mediante centrifugación. La pelotilla se resuspendió en 2 ml de solución salina regulada con fosfato que luego se formó en capas sobre la parte superior del Ficoll-Hypaque 3 ml, y la centrifugación gradiente se realizó para separar las células mononucleares (linfocitos y monocitos) de los neutrófilos. La pelotilla que contiene neutrófilos se resuspendió en solución salina. Las células se lavaron, se resuspendieron en un medio rico en nutriente (RPMI 1640), y se mantuvieron sobre hielo hasta el uso. Los leucocitos sanguíneos periféricos frescos y fijos en formalina se distribuyeron' en cavidades en una placa de microtitulo de 96 cavidades de fondo en V en la concentración aproximada de 105 células por cavidad. Un extracto basado en agua recientemente preparado de las algas azules-verdes AFA se preparó en solución salina fisiológica y se realizaron diluciones en serie. Las células se resuspendieron en ya sea PBS, PBS-AFA-W, PBS-AFA- W-ázida, o PBS-PC en varias diluciones. Las células se incubaron a temperatura ambiente y en la oscuridad durante 20 minutos. La fracción no fija no estuvo en contacto con la ázida de sodio durante el tratamiento con el extracto de AFA, sino se resuspendió en solución reguladora que contiene ázida de sodio para el inmunomanchado subsecuente. Esto fue para permitir los movimientos citoesqueléticos libres y el derramamiento de la L-selectina. La fracción que se mantuvo en ázida de sodio a 0.02% estuvo en contacto con la ázida de sodio durante el procedimiento completo, tanto el tratamiento con extracto de AFA y el inmunomanchado subsecuente. La ázida de sodio bloquea el movimiento citoesquelético y reduce o bloquea el derramamiento de la L-selectina. Por lo tanto, cualquier reducción en el manchado para la L-selectina con un anticuerpo monoclonal es debido a la competición directa con un compuesto en el extracto de AFA. Después de la incubación con o sin la solución reguladora de Extracto A (AFA-W) se adicionó, y las células se centrifugaron. El sobrenadante se descartó, y las células se resuspendieron en un volumen de 50 µl de solución salina regulada con fosfato que contiene suero de becerro fetal al 1% y ázida al 0.05%. Las cantidades óptimas de los anticuerpos monoclonales, como se determina por las titulaciones previas, se adicionaron. Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 10 minutos, la solución reguladora se adicionó, y las placas se centrifugaron. Los sobrenadantes se descartaron, las células se resuspendieron en 50 µl de solución reguladora, y se fijaron en formalina al 1%. Las muestras se mantuvieron frias y en la oscuridad hasta la inquisición por la citometria de flujo. La adquisición se realizó dentro de 24 horas de fijación. El anticuerpo monoclonal CD62L TQl (especifico para el área de enlace de ligando de la molécula de L-selectina) se enlazó a la ficoeritrina (PE), se adquirió de Coulter (Hialeah FL) . La incubación de las PBMC y PMN con el extracto de agua de AFA (AFA-W) dio por resultado la reducción del inmunomanchado con el anticuerpo monoclonal de L-selectina antihumano TQl, que es conocido por ser especifico para el área de enlace de ligando de la L-selectina (Spertini y colaboradores, J Immunol 147 ( 3 ): 942-9, 1991). La reducción mediada con AFA-W del manchado de TQl fue más fuerte sobre los linfocitos y el PMN, pero también se observó sobre los monocitos (FIG. 2A) . Sobre los linfocitos y el PMN, una reducción de 40-70 veces aproximada en el manchado de TQl se observó cuando las células se preincubaron con AFA-W, en contraste a una reducción de 15 veces para los monocitos. La expresión de CDllb se reguló ligeramente hacia arriba, mientras que ningunos cambios significantes se observaron para otros marcadores de adhesión (CDlla, CD18, CD29, CD49d, CD49e, y CD44) . Los linfocitos sanguíneos periféricos fijados en formalina se incubaron en ausencia o presencia de las diluciones en serie de AFA-W. El manchado de los linfocitos con el anticuerpo TQl mostró una reducción dependiente de dosis en el enlace de TQl a la L-selectina con el incremento de las concentraciones del extracto A. Ya que el efecto se observó también sobre los linfocitos fijados en formalina, el manchado reducido no podria ser debido al derramamiento de la L-selectina (FIG. 2) . Ejemplo 5 El ligando de selectina AFA bloquea la expresión de los sectores de quimiocina accionados por el Fucoidano en la linea celular KG-la CD34br?ght La linea celular primitiva KG-la es brillantemente positiva para la CD34 ay para la L-selectina, como es evaluado por el manchado con el anticuerpo monoclonal TQl. La KG-la también contiene depósitos intracelulares del receptor 'de quimiocina CXCR4 que se externalizan en la ligación de la L-selectina. La incubación de la KG-la con el Fucoidano, un agonista de la L-selectina, acciona la expresión del receptor de quimiocina CXCR4. El Extracto A de AFA bloqueó el efecto mediado con Fucoidano sobre la expresión CXCR4 (FIG. 3) . Ejemplo 6 Purificación de ligando de L-selectina de AFA Un ligando de selectina se aisló de AFA utilizando cuentas magnéticas covalentemente enlazadas a la proteina de fusión genéticamente diseñada en la cual la porción extracelular de la L-selectina o P-selectina recombinante humana se acopla a la porción Fe de la inmunoglobulina. Las cuentas se incuban con la fracción soluble en agua de AFA y el ligando de selectina se aisla (ver FIG. 4A: L-selectina, Figure 4B: P-selectina) . Las cuentas se recolectaron utilizando un magneto y se lavaron muchas veces. Las cuentas luego se expusieron a un tratamiento con ácido o ebullición o un tratamiento alcalino para romper el enlace entre el ligando y la selectina recombinante. El ligando de selectina también se aisló utilizando una columna de afinidad. Cuando el ligando de las selectinas se recubre bajo condiciones de reducción, este es un dimero hecho de dos subunidades de aproximadamente 54 kDa y 57 kDa (FIG. 4B) . Una molécula compuesta basada sobre estas subunidades podria tener pesos moleculares de 108, 111, o 114 kDa aproximadamente, y multiplicidades más altas de las mismas. El uso de las técnicas de exclusión de tamaño, cuando la fracción del extracto A se pasó a través de un filtro de 100 kDa, el ligando se encontró en concentraciones más altas en la fracción arriba de 100 kDa. Por lo tanto, el ligando se puede aislar como un dimero de por lo menos 100 kDa. Ejemplo 7 El ligando de selectina extraido de AFA no es uno encontrado en el Extracto B El extracto B se produjo en diversas etapas, primero al extraer compuestos en etanol, luego regresarlos en una solución reguladora polar (agua, solución salina) . La primera etapa fue para producir un polvo amarillo/café de la AFA seca, inicialmente durante 3 horas a 50°C con una solución acuosa que contiene etanol al 20%. El sobrenadante se decantó y los sólidos se precipitaron al adicionar etanol a una concentración al 80% final. El precipitado se secó utilizando la técnica de secado REFRACTANCE WINDOW™. Cuando este polvo amarillo se puso de regreso en la solución acuosa, (agua o solución salina, se produjo un extracto anaranjado. Los sólidos se removieron mediante centrifugación, y el sobrenadante se filtró estéril. Este liquido el Extracto B. Este extracto se incubó con las cuentas magnéticas recubiertas descrita en lo anterior. El Extracto B no contuvo un ligando de selectina (FIG. 5) . Ejemplo 8 El ligando de selectina de las algas azules-verdes modula la expresión CXCR4. Las células madre se mantienen dentro del medio ambiente de la médula espinal por lo menos en parte a través de las moléculas de adhesión de selectina. Cuando la selectina se acopla mediante un ligando apropiado, acciona la expresión del receptor de citocina CXCR4. El CXCR4 es un receptor especifico para el Factor Derivado Estromal 1 (SDF-1) y el enlace del SDF-1 a CXCR4 ayuda a mantener las células madre enlazadas a la médula espinal. La inhibición del enlace de ligando de selectina reduce la expresión de CXCR4 , que conduce a un desprendimiento de las células madre de la médula espinal y su liberación en la corriente sanguínea. Para demostrar el efecto fisiológico del ligando de selectina de la AFA, en una modalidad el ligando de selectina se probó sobre la expresión CXCR4 accionada por el fucoidano, un ligando del L-selectina conocido que estimula la expresión CXCR4. La expresión de los receptores CXCR4 después de la exposición al fucoidano se evaluó sobre los linfocitos utilizando la citometria de flujo. La incubación con el ligando de selectina de AFA inhibió significantemente la expresión de CXCR4 sobre los linfocitos humanos (FIG.6) y sobre la linea celular KG-la progenitora CD34+ humana (Figure 7), que indica que esto es un mecanismo por el cual el ligando de selectina de AFA puede accionar la movilización de la célula madre. Ejemplo 9 Las células madre de la médula espinal poblan los múltiples tejidos distantes. Un modelo murino se puede utilizar para evaluar la habilidad de las células madre movilizadas por el consumo de algas azules-verdes para poblar los tejidos distantes del cuerpo. Se seleccionan ratones macho como animales donadores de médula espinal, mientras que todos los ratones recipientes son hembras. Los recipientes hembras se irradian subletalmente antes de la inyección de las células de médula espinal macho en sus venas de la cola. Dos grupos de ratones se evalúan. El primer grupo de 20 animales se irradia subletalmente, se inyectan con médula espinal, y se ponen en alimento normal. El segundo grupo de 20 animales también se irradia subletalmente, reciben médula espinal macho, y se alimentan con una dieta de alimento normal más 0.5 a 15% w/v de la fracción que contiene ligando de selectina de AFA. Aproximadamente 6 x 106 de células nucleadas de médula espinal adulto se cosecha de los ratones macho de edad de 8-10 semanas y se inyecta en las venas de la cola de los recipientes hembras adultos isogénicos subletalmente irradiados, también de edad de 8-10 semanas. Los ratones de cada grupo se sacrifican en cada uno de los puntos de tiempo siguientes: tiempo 0, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, y 8 semanas. En los puntos de tiempo 2 y 8 semanas, 6 ratones se sacrifican de cada grupo. En todos los otros puntos de tiempo, dos ratones se sacrifican de cada grupo. Durante las primeras dos semanas después de la inyección, 15 microlitros de sangre entera se toman de la oreja, cola o pata, y se diluyen inmediatamente en 200 microlitros de solución reguladora (solución salina regulada con fosfato, pH = 7.2, suero al 2%, ázida al 0.02%) para diluir los factores de coagulación y prevenir la coagulación. Las muestras sanguíneas se analizan para monitorear la repoblación de las plaquetas, glóbulos rojos y leucocitos dentro de la sangre. Una porción de la muestra sanguínea se utiliza para obtener un conteo celular y para la evaluación diferencial de glóbulos rojos contra los glóbulos blancos. La muestra se analiza utilizando un citómetro de flujo, y la proporción de neutrófilos, linfocitos, y monocitos será evaluada utilizando la dispersión delantera y lateral. Los leucocitos sanguíneos serán examinados para el origen del macho utilizando la citometria de flujo. En el tiempo del sacrificio, varios tipos de células y tejido se examinaron para el antigeno Hy, que demuestra que la célula o tejido se originó en un ratón macho. Los cerebros se cosecharon y el cerebro se examina, incluyendo el bulbo olfatorio, hipocampo, áreas córticas, y cerebelo. La médula espinal, el músculo de corazón, el músculo de la pata trasera, el higado, el páncreas, las secciones del intestino delgado, y el tejido del pulmón se examinan para la presencia de células con el cromosoma Y, ya sea mediante la detección del antigeno Hy de superficie mediante la inmunofluorescencia, o mediante la hibridación in situ de fluorescencia utilizando sondas para el cromosoma Y. Estos datos documentarán que grado de una dieta que contiene algas azules-verdes promueve el alojamiento, implantación, y proceso de diferenciación de las células madre de médula espinal inyectadas. Ejemplo 10 Las células madre de la médula espinal poblan múltiples tejidos distantes Un estudio similar a aquel descrito en lo anterior se conduce utilizando ratones macho transgénicos que llevan el gen para la proteina fluorescente verde (GFP) y los ratones hembra isogénicos como recipientes. Los animales se tratan, se alimentan, y se sacrifican como se describe en lo anterior, y las muestras sanguíneas también se analizan en una manera similar. Los leucocitos sanguíneos se examinan para la expresión de GFP utilizando la citometria de flujo y, en el tiempo de sacrifico, varios tipos de células y tejidos serán examinados para el antigeno GFP, lo cual demuestra el origen del donador. Los tejidos y órganos se cosechan como se describe en lo anterior y la presencia de células que llevan el GFP se detectan mediante la citometria de flujo o microscopía de fluorescencia. Ejemplo 11 Repoblación de células madre incrementada de tejido traumatizado Un modelo de ratón se utiliza para evaluar el alojamiento e integración de células madre derivadas de la médula espinal en tejido traumatizado. Todos los donadores de médula son ratones machos adultos (8-10 semanas de edad), y todos los ratones recipientes son hembras adultas (8-10 semanas de edad). Dos grupos de ratones se evalúan. Un grupo de recipientes subletalmente irradiados reciben 6 x 106 de células donadoras nucleadas por la via de la inyección en la vena de la cola y se dejan dos semanas de recuperación. Los animales luego se traumatizan ligeramente mediante la inserción de una aguja delgada en el músculo de la pata trasera, corazón y cerebro. Todos los animales recibieron alimentación normal por todo el estudio. En el segundo grupo, los ratones hembra se tratan idénticamente como el primer grupo, pero se alimentan con una dieta que incluye 0.5 a 15% w/v de la fracción que contiene el ligando de selectina de .AFA. Dos ratones se sacrifican previo al trauma para evaluar los niveles de la linea base de las células derivadas del macho. Subsecuentemente, los ratones se sacrifican en los siguientes puntos de tiempo: 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, y 4 semanas. Dos ratones se sacrifican para cada punto de tiempo, excepto para el punto de tiempo de 2 semanas, donde 6 ratones se sacrifican de cada grupo. El músculo de la pata trasera, el corazón, y el tejido del cerebro se aislan de los animales sacrificados. Las secciones se cortan a través de las áreas traumatizadas, y se manchan para las células derivadas del macho que utilizan ya sea el análisis marcador de superficie celular para la expresión del antigeno Hy o mediante la hibridación in si tu de fluorescencia utilizando sondas para el cromosoma Y. Alternativamente, será utilizado un ratón donador transgénico que expresa GFP (similar al Ejemplo #4) . Los datos obtenidos demuestran el efecto de consumir la fracción que contiene el ligando de selectina de AFA sobre la velocidad del reclutamiento de la célula madre después del trauma. Ejemplo 12 Informe sobre el caso para la reparación de tejido Un sujeto fue un fisicoculturista que tuvo un accidente de auto hace tres años. Un automóvil golpeó su automóvil en la puerta sobre el lado del conductor y varios músculos se desgarraron en su cadera y muslo. Se sometió a una serie de cirugías para unir los músculos desunidos. A pesar de las cirugías exitosas, el daño muscular fue muy severo que permaneció con un dolor constante y no pudo reanudar su entrenamiento de levantamiento de pesas, ya que aun una sesión de entrenamiento leve seria seguida por el hinchamiento y dolor, lo cual le impedirla caminar durante varios dias. Probó muchos fármacos antiinflamatorios, pero después de 18 meses todavía no pudo entrenar. Comenzó a consumir la fracción de algas azules-verdes que contiene un ligando de selectina. Dos semanas después, reportó que fue capaz de regresar al gimnasio, y después de dos meses del consumo, habla reanudado el entrenamiento normal, indicando la reparación extensiva del tejido muscular. Ejemplo 13 Informe sobre el caso para la reparación de tejido Un sujeto de 55 años de edad fue para un sexto reemplazo de cadera - cuatro sobre el lado izquierdo. Generalmente, hubo una prognosis muy pobre y dificultades enormes involucradas. El cirujano ortopédico reconstruyó la pelvis y el acetábulo. Sin embargo, previo a la cirugía al sujeto se le informó por el personal médico que no hubo manera para que el cuerpo produzca hueso nuevo necesario para el éxito a largo plazo del procedimiento. Se presentó que si el sujeto fue capaz de crecimiento de hueso probablemente seria menor que el requerido para la sanación. Al sujeto se le proporcionó con la fracción de algas azules-verdes que contienen la L-selectina poco después de la cirugía. El crecimiento del hueso fuerte, nuevo se presentó rápidamente y la recuperación fue rápida. El sujeto reportó que no necesitó más muletas y fue capaz de estar sobre el estado que lleva peso completo en 6 semanas comparado a 6 meses con la cirugía previa del sujeto. El sujeto reportó que la sanación acelerada se confirmó en cada chequeo. El sujeto también reportó que el hueso que circunda su cadera derecha que tuvo una revisión hecha en los inicios de los 80 se encontró muy fuerte. Esto se consideró excepcional . Ejemplo 14 Informe sobre el caso Se le diagnosticó a una mujer joven a la edad de tres años con distrofia muscular infantil. Fue incapaz de caminar. Fue muy frágil, y experimentó frecuentemente neumonía, lo cual cada vez dio por resultado el confinamiento a la cama durante 8-10 dias. Estuvo en terapia convencional para la distrofia muscular durante seis meses, pero esto resultó sin cambio. Comenzó a consumir Spirulina , que algún grado mejoró su función inmune ya que experimentó neumonías menos frecuentes y menos severas. Luego comenzó a consumir la fracción de algas azules-verdes que contienen un ligando de selectina (Extracto A) . después de dos semanas comenzó a dar sus primeros pasos. Después de tres meses estuvo caminando. No tuvo más neumonías. La enfermedad es una enfermedad hereditaria, y varios miembros de familia con la misma enfermedades - pero degenerada adicionalmente - también comenzaron a consumir la fracción de algas (Extracto A) . Estos individuos reportaron que experimentaron beneficios del consumo de esta fracción. Ejemplo 15 Estudios humanos Un estudio controlado con placebo, aleatorizado, de triple blindado sobre sujetos humanos se condujo sobre el efecto de varios extractos de AFA sobre los números de células madre circulantes. Los métodos siguientes se utilizaron en estos estudios: Productos consumibles : Se probaron cuatro productos consumibles. Dos fueron líquidos, y dos fueron encapsulados. Ninguno de los voluntarios, tampoco la persona que administra la sustancia, ni el personal del laboratorio realizaron el análisis de datos conocido que la sustancia estuvo siendo administrada en un dia de estudio dado. 1. SLSL : Extracto A, una fracción de AFA enriquecida en el ligando de L-selectina. Un gramo de la fracción concentrada en el ligando de L-selectina (LSL) se mezcló en 40 ml de agua y se sirvió para estudiar sujetos en un vaso de papel. 2. Migratosa (MGT) : La fracción conocida por contener el compuesto bioactivo responsable para la migración de las células inmune y madre se obtuvieron al extraer la AFA liquida con etanol al 10% a 50°C durante una horas. Las solución se centrifugó y el sobrenadante se secó utilizando RW. Este producto habla sido llamado internamente Migratosa (MGT). La Migratosa (150 mg) se mezcló con 250 mg de placebo y se administró en una cápsula vegetal. 3. StemEnhance (SE) : El StemEnhance es una mezcla de LSL y Migratosa. Un gramo de StemEnhance se mezcló en 40 ml de agua y se sirvió para estudiar sujetos en un vaso de papel . 4. Placebo: EL placebo consistió de 400 mg de hojuelas de papa finamente molidas, pigmentadas de verde encapsuladas en cápsulas vegetales. La apariencia fue idéntica a aquella de las cápsulas que contienen Migratosa. Suj etos : Se entrevistaron un total de 19 personas de voluntarios saludables de donación de sangre regular. Se utilizaron los siguientes criterios de exclusión: • Abajo de 20 o arriba de 65 años de edad • Embarazo • Asma severo y alergias que requieren mediación diaria . Cualquier enfermedad crónica conocida o enfermedad venérea previa/actual • Uso de fármaco convencional frecuente • Función digestiva deterioradas (que incluye cirugía gastrointestinal mayor previa. De las personas entrevistadas, 14 cumplieron los criterios del estudio y fueron capaces de participar. Entre los 14, tres se excluyeron subsecuentemente parte del camino a través del estudio debido a la no conformidad. Entre los 11 voluntarios resultantes, seis fueron a través de cuatro dias de estudio cada uno, tal que los datos se obtuvieron para todos los cuatro productos consumibles sobre la misma persona. Los cinco voluntarios restantes fueron capaz de participar en tres vias de estudio cada uno. A los sujetos se les programó que llegaran el mismo fin de semana en cuatro semanas sucesivas durante un periodo de dos meses. Los sujetos se programaron en el mismo fin de semana para la consistencia mayor en los datos. Se les instruyó que tengan un buen sueño de noche antes de cada dia de estudio, para comer el mismo tipo de desayuno leve en cada dia de estudio. En la llegada, los voluntarios se sentaron en área calladas lejos de cada uno, para disuadir la platica y producir, un medio ambiente callado (no hubo interrupciones tales como teléfonos, campana de puerta platicas entre el personal de laboratorio) . A los voluntarios se les instruyó permaneces inactivos, sentados confortablemente en una silla, durante una hora. El movimiento se restringió para permitir caminar al baño si es necesario. Después de una hora, la muestra sanguínea de la linea base se retiró. Inmediatamente después de retirar la muestra de la linea base, un producto consumible se proporcionó. Los voluntarios se les instruyó permanecer inactivos para la duración completa del experimento. Las muestras sanguíneas se retiraron después de 30, 60 y 120 minutos después de la ingestión del producto consumible . Cada dia, en la llegada al laboratorio, los voluntarios llenaron un cuestionario que da un estimado diario de sus condiciones generales. Este cuestionario se propuso para identificar cualquier caso por el cual los puntos de datos podrían tener que ser eliminados debido a circunstancias extraordinarias. Los siguientes criterios se utilizaron para eliminar los puntos de datos: • Falta de sueño • Estimulantes dentro de 2 horas de la llegada • Estrés. Es tima ción de cél ulas madre circulan tes : En cada punto de tiempo, 5 ml de sangre se retiraron en heparina y 2 ml de sangre se retiró en EDTA. Los frasquitos de vidrio sangre se colocaron sobre una placa oscilante hasta el uso. La sangre retirada en EDTA se utilizó para obtener un conteo sanguíneo completo (CBC) utilizando un contador Coulter (Micro Diff II, Beckman Coulter) . Todos los CBCs se realizaron dentro de una hora del retiro de la muestra. Todos los CBCs se realizaron en triplicado. La sangre heparinizada se utilizó para la purificación de la fracción celular mononuclear sanguínea periférica mediante la centrifugación gradiente, y se proceso para el inmunomanchado y la citometria de flujo. Los marcadores de la célula madre CD34-FITC (clon 8G12) y CD133-PE se utilizaron para la inmunofluorescencia de dos colores. El manchado de todas las muestras con CD34-FITC/CD133-PEW se realizó en triplicado. Los controles del isotipo apropiados se utilizaron en muestras paralelas. Los controles positivos para cada donador incluyeron CD45 y CD14. Las células manchadas se fijaron en formalina al 1% y se adquirieron para la citometria de flujo inmediatamente. Los Archivos de 200,000 eventos se relectaron sobre cada mezcla. Puesto que las células utilizadas para el inmunomanchado no incluyeron la población de granulocitos, la adquisición de 200,000 eventos incluyeron más células madre que si la sangre entera habla sido utilizada. El uso de la fracción celular mononuclear sanguínea periférica asi permite la recolección de datos con números más altos de células madre, dando un mejor peso estadístico para observar las diferencias en los números de células madre. El manchado para las CD14 se realizó en un muestras paralelas, como no para interferir con el análisis de CD34 y CD133. El análisis citométrico de flujo se realizó utilizando el software CellQuest Pro (Becton Dickinson) . Se obtuvieron los siguientes resultados: El consumo de SE y LSL condujeron a un incremento en el número de células CD34+ circulantes (ver FIG. 9), mientras que el MGT condujo a una disminución del número de células CD34+ circulantes. Después del consumo de el placebo pocos cambios que no fueron estadísticamente significantes. Con tanto SE como LSL un número de voluntarios mostraron una tendencia para una disminución transciente inicial en el número de células CD34+; esta observación fue mayor para el LSL aunque no alcanzó significancia. En 60 minutos después del consumo, el SE (p<0.003) y LSL (p<0.02 accionaron un incremento significante en el número de células CD34+. Sin embargo, MGT accionó una disminución significante (p<0.03). En una parte subsecuente de los análisis de datos, cada una de las respuestas del voluntario a los extractos de AFA se normalizaron a la misma respuesta de la persona al placebo. Esto se hizo al sustraer al cambio del porcentaje obtenido con el placebo del cambio del porcentaje obtenido con el extracto. Esto se hizo para todos los tres productos consumibles. Estos procedimientos no incrementaron la magnitud o significancia de las respuestas; el patrón obtenido fue similar a la Figura 9. Otra parte del análisis de datos se enfocó sobre el cambio por ciento máximo para cada producto consumible comparado al placebo. Lo racional para este análisis es que la absorción de compuestos bioactivos, suministrar a los órganos objetivos y el tiempo para generar una respuesta fisiológica cuantificable puede ser diferente dependiendo de cada fisiología total del voluntario. Este método de análisis minimiza las diferencias en los tiempos de respuesta individuales y permite una comparación en el grado de cambio, y respectivo de si el cambio máximo se observó a 30 o 60 minutos. Basado sobre este método se encontró a 24 ± 5% de incremento en el número de células madre circulantes con SE y una disminución de 24 ± 2% con MGT. Se encontró una respuesta de 27% y 77%, respectivamente, para SE y MGT. La estructura de tiempo para alcanzar la respuesta máxima parece que es no más de pocas semanas. Para evitar un factor de confusión potencial en los datos, la mayoría de los estudios se realizó sobre muestras de sujetos quienes consumieron regularmente la AFA. En el presente estudio, solamente un sujeto no fue un consumidor regular de AFA. Este sujeto no mostró incremento notable en la movilización de las células CD34+. Se debe notar que este voluntario se removió del análisis. Ya que fue solamente un solo sujeto quien no consumió regularmente la AFA, las muestras obtenidas del sujeto no podrían ser utilizadas para un análisis estadístico relevante. Además, una complicación en este tipo de protocolo es el hecho de que los individuos no todos se movilizan de acuerdo a una estructura de tiempo similar, y asi no puede haber una estimación abajo del pico actual de movilización. La respuesta al placebo mostró variaciones, aunque tales fluctuaciones no alcanzaron significancia estadística. No obstante, estas fluctuaciones parece que son reales y sugieren que un entendimiento mejor de el ciclo diario de la CD34+ circulante podria ser de uso en diseñar estudios futuros.

Este estudio confirmó que el SE y LSL, ambos de los cuales incluyen un extracto acuoso seco enriquecido para un ligando de selectina son efectivos en movilizar células madre de médula espinal al incrementar el número de células CD34+ circulantes. Los datos recolectados en este estudio muestran que el SE incrementa el número de células madre circulantes por hasta 35%. Será evidente que los detalles precisos de los métodos o composiciones descritas pueden ser variados o modificados sin apartarse del espíritu de la invención descrita. Los inventores reclaman todas las modificaciones y variaciones que caen dentro del alcance y espíritu de las reivindicaciones enseguida.

Claims (46)

1. REIVINDICACIONES 1. Un extracto acuoso de Aphani zomenonflos aquae, caracterizado porque el extracto se enriquece para un ligando de L-selectina.
2. 2. El extracto acuoso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el extracto acuoso se produce al suspender Aphani zomenonflos aquae seca en agua o una solución de sal y remover la materia sólida.
3. 3. Una composición sólida, caracterizada porque comprende una forma seca del extracto acuoso de conformidad con la reivindicación 1.
4. 4. Una composición, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición sólida de conformidad con la reivindicación 1 en un portador farmacéuticamente aceptable.
5. 5. La composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque además comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una segunda composición sólida, en donde la segunda composición sólida es una forma seca de un segundo extracto de Aphani zomenonflos aquae, y en donde el segundo extracto es un extracto de etanol de Aphani zomenonflos aquae .
6. 6. La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el extracto de etanol se produce al suspender Aphanizomenonflos aquae seca en aproximadamente 10 a aproximadamente 20 por ciento de etanol a aproximadamente 50 °C a aproximadamente 60 °C.
7. 7. La composición de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque comprende 1 gramo a aproximadamente 2 gramos de un extracto acuoso seco de Aphanizomenonflos aquae, en donde el extracto se enriquece para un ligando de L-selectina, y aproximadamente 100 mg a aproximadamente 500 mg de un extracto de etanol seco de Aphani zomenonf?os aquae .
8. 8. La composición de conformidad- con la reivindicación 7, caracterizada porque comprende aproximadamente 1 gramo de un extracto acuoso seco de Aphanizomenonflos aquae, en donde el extracto se enriquece para un ligando de L-selectina, y aproximadamente 150 mg de un extracto de etanol seco de Aphani zomenonflos aquae . •
9. 9. La composición de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque se produce mediante el proceso de poner en contacto una primera cantidad de Aphani zomenonflos aquae en solución salina regulada con fosfato de 0.1 molar o agua por aproximadamente la mitad de una hora a aproximadamente 12 horas para producir un extracto acuoso; remover el material sólido del extracto acuoso; secar el extracto acuoso para producir una composición sólida que comprende un ligando de L-selectina; incubar una segunda cantidad de Aphani zomenonflos aquae en etanol al 10% a aproximadamente 50°C por aproximadamente una hora para producir un extracto de etanol; remover el material sólido del extracto de etanol; secar el material sólido del extracto de etanol para producir una forma sólida del extracto de etanol; y mezclar una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición sólida que comprende el ligando de L-selectina y una cantidad terapéuticamente efectiva de la forma sólida del extracto de etanol.
10. 10. Un ligando de selectina purificado aislado de unas algas azules-verdes, caracterizado porque comprende una proteina o una glicoproteina de un peso molecular de aproximadamente 55 kDa bajo condiciones de reducción.
11. 11. El ligando de selectina purificado de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el ligando de selectina tiene un peso molecular de aproximadamente 54 kDa o aproximadamente 57 kDa bajo condiciones de reducción.
12. 12. El ligando de selectina purificado de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque las algas azules-verdes son Aphani zomenonflos aquae .
13. 13. El ligando de selectina purificado de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque las algas azules-verdes son unas especies de Spirulina .
14. 14. El ligando de selectina purificado de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el ligando de selectina tiene un peso molecular de aproximadamente 54 kDa, aproximadamente 57 kDa, aproximadamente 162 kDa, aproximadamente 171 kDa, aproximadamente 233 kDa o aproximadamente 111 kDa bajo condiciones no de reducción.
15. 15. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del ligando de selectina purificado de conformidad con la reivindicación 10 en el portador farmacéuticamente aceptable.
16. 16. Un método para movilizar células madre hematopoyéticas en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del ligando de selectina purificado de conformidad con la reivindicación 10, de esta manera movilizando las células madre hematopoyéticas en el sujeto.
17. 17. El método conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque las células madre hematopoyéticas expresan CD34 (CD34+) , CD133 (CD133+) , o ambas.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el sujeto es humano.
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque además comprende medir el número de células madre CD34+ en el sujeto.
20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el sujeto es saludable.
21. 21. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el sujeto es inmunosuprimido o tiene una enfermedad crónica, lesión traumática o enfermedad degenerativa .
22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el sujeto tiene un desorden del sistema digestivo, sistema nervioso, sistema linfático, sistema cardiovascular o sistema endocrino.
23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el sujeto tiene osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, infarto cardiaco, enfermedad de Parkinson, lesión cerebral traumática, esclerosis múltiple o cirrosis del higado.
24. 24. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el alojamiento de la célula madre se incrementa a aproximadamente 100% a aproximadamente 500% como es comparado a un control.
25. 25. Un método para movilizar células madre hematopoyéticas en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del ligando de selectina purificado de conformidad con la reivindicación 1, de esta manera movilizando las células madre hematopoyéticas en el sujeto.
26. 26. El método conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque las células madre hematopoyéticas expresan CD34 (CD34+ ) , CD133 (CD133+ ) , o ambas.
27. 27. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el sujeto es humano.
28. 28. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque además comprende medir el número de células madre CD34+ en el sujeto.
29. 29. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el sujeto es saludable.
30. 30. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el sujeto es inmunosuprimido o tiene una enfermedad crónica, lesión traumática o enfermedad degenerativa .
31. 31. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el sujeto tiene un desorden del sistema digestivo, sistema nervioso, sistema linfático, sistema cardiovascular o sistema endocrino.
32. 32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el sujeto tiene osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, infarto cardiaco, enfermedad de Parkinson, lesión cerebral traumática, esclerosis múltiple o cirrosis del higado.
33. 33. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el alojamiento de la célula madre se incrementa a aproximadamente 100% a aproximadamente 500% como es comparado a un control.
34. 34. Un método para aislar un ligando de selectina, caracterizado porque comprende extraer células de algas azules-verdes en una solución acuosa; separar el material particulado y aislar el sobrenadante resultante; poner en contacto el sobrenadante con un enlace de selectina a un sustrato sólido; y liberar un ligando que enlaza específicamente a la selectina, de esta manera aislando el ligando de selectina .
35. 35. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la liberación del ligando comprende tratamiento con ácido, álcali, calor o una combinación de los mismos .
36. 36. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la selectina comprende un dominio extracelular de L-selectina humana fusionada a un dominio Fe de inmunoglobulina o un dominio extracelular de P-selectina humana fusionado a un domino Fe de inmunoglobulina.
37. 37. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque el soporte sólido comprende cuentas magnéticas .
38. 38. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque las algas azules-verdes son Aphani zomenonflos aquae .
39. 39. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque las algas azules-verdes son Spirulina .
40. 40. Un ligando de selectina, caracterizado porque es aislado mediante el método de conformidad con la reivindicación 34.
41. 41. El ligando de selectina de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque las células de algas azules-verdes son Aphani zomenonflos aquae .
42. 42. El ligando de selectina de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque las células de algas azules-verdes son Spirulina .
43. 43. El ligando de selectina purificado de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el ligando enlaza la L-selectina, P-selectina, E-selección o cualquier combinación de las mismas.
44. 44. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la selectina comprende L-selectina, P-selectina, E-selección, o cualquier combinación de las mismas .
45. 45. El método de conformidad con la reivindicación , caracterizado porque el sujeto es un sujeto veterinario.
46. 46. El método de conformidad con la reivindicación , caracterizado porque el sujeto es un sujeto veterinario.