MX2007012062A

MX2007012062A - Composiciones farmaceuticas con toxina clostridial estabilizada sin proteina.

Info

Publication number: MX2007012062A
Application number: MX2007012062A
Authority: MX
Inventors: Terrence J Hunt
Original assignee: Allergan Inc
Priority date: 2005-10-06
Filing date: 2006-10-04
Publication date: 2007-12-04
Also published as: DK2679217T3; JP2012197320A; US8642047B2; AU2006299366A1; JP5758856B2; ES2580010T3; NZ562033A; EP2679217A1; AU2006299366B2; SI2679217T1; JP5140595B2; US20120141619A1; JP6235176B2; EP1931306A1; WO2007041664A1; CA2602926C; EP1931306B2; US20100279953A1; HK1192710A1; JP2009511485A

Abstract

La presente invencion se refiere a una composicion farmaceutica de toxina clostridial que comprende una toxina clostridial, tal como una toxina botulinum, en donde la toxina clostridial presente en la composicion farmaceutica, es estabilizada por un excipiente sin proteina, tal como polivinilpirrolidona, un disacarido, un trisacarido, un polisacarido, un alcohol, un metal, un aminoacido, un tensoactivo y/o un polietilenglicol.

Description

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS CON TOXINA CLOSTRIDIAL ESTABILIZADA SIN PROTEINA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas de toxina clostridial. En particular, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas de toxina clostridial con un excipiente sin proteína, el cual funciona para estabilizar la toxina clostridial (tal como toxina botulinum) presente en la composición farmacéutica.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Una composición farmacéutica es una formulación la cual contiene al menos, un ingrediente activo (tal como una toxina clostridial), así como también por ejemplo, uno o más excipientes, amortiguadores, portadores, estabilizadores, preservativos y/o agentes de volumen, y es adecuada para administración a un paciente, para lograr un reeultado diagnóstico deseado o efecto terapéutico. Las composiciones farmacéuticas descritas en este documento, tienen utilidad de investigación y/o terapéutica, de diagnóstico. Para estabilidad de almacenaje y conveniencia de manipulación, una composición farmacéutica puede ser formulada como un polvo liofilizado (es decir, secado por congelamiento) , o secado a vacío, el cual pueden ser Ref. : 186553 reconstituido con un fluido adecuado, tal como salina o agua, antes de la administración a un paciente. Alternativamente, la composición farmacéutica puede ser formulada como una solución o suspensión acuosa. Una composición farmacéutica puede contener un ingrediente activo proteináceo. Desafortunadamente, un ingrediente de proteína activa puede ser muy difícil de estabilizar (es decir, mantenido en un estado en donde la pérdida de actividad biológica es minimizada), resultando por lo tanto, en una pérdida de proteína y/o pérdida de actividad proteínica durante la formulación, reconstitución (si se requiere), y durante el periodo de almacenamiento previo al uso de una proteína que contiene composición farmacéutica. Los problemas de estabilidad pueden ocurrir debido a la desnaturalización, degradación, dimerización y/o polimerización de la proteína. Varios excipientes, tales como albúmina y gelatina, han sido usados con diferentes grados de éxito para ensayar y estabilizar un ingrediente activo de proteína presente en una composición farmacéutica. Adicionalmente, los crioprotectores tales como alcoholes, han sido usados para reducir la desnaturalización de la proteína, bajo las condiciones de congelamiento de liofilización.

Excipientes de Proteína Varias proteínas tales como albúmina y gelatina, han sido usadas para estabilizar una toxina botulinum presente en una composición farmacéutica. Las albúminas son proteínas de plasma abundante, pequeñas. La albúmina de suero humano tiene un peso molecular de aproximadamente 69 kiloDaltons (kD) y ha sido usada como un ingrediente no activo en una composición farmacéutica en donde puede servir como un portador de volumen y estabilizador de ciertos ingredientes activos de proteína presentes en una composición farmacéutica . La función de estabilización de albúmina en una composición farmacéutica, puede ser presente tanto durante la formulación de etapas múltiples de la composición farmacéutica y después de la última reconstitución de la composición farmacéutica formulada. De este modo, la estabilidad puede ser impartida por albúmina a un ingrediente activo proteináceo en una composición farmacéutica mediante, por ejemplo, (1) reducir la adhesión (comúnmente referida como "pegajosidad") del ingrediente activo de la proteína a las superficies, tal como las superficies de cristales de laboratorio, vasos de precipitado, al vial en el cual la composición farmacéutica es reconstituida y en la superficie interior de una jeringa usada para inyectar la composición farmacéutica. La adhesión de un ingrediente activo de la proteína a las superficies, puede conducir a pérdida del ingrediente activo y a desnaturalización del ingrediente activo de la proteína retenida restante, ambos de los cuales reducen la actividad total del ingrediente activo presente en la composición farmacéutica; y (2) reducir la desnaturalización del ingrediente activo, lo cual puede ocurrir después de la preparación de una solución de baja dilución del ingrediente activo. Así como también siendo capaz de estabilizar un ingrediente de proteína activa en una composición farmacéutica, la albúmina de suero humano también tiene la ventaja de inmunogenidad en general insignificante, cuando se inyecta a un paciente humano. Un compuesto con una inmunogenicidad apreciable, puede causar la producción de anticuerpos contra los cuales puede conducir a una reacción anafiláctica y/o al desarrollo de la resistencia del fármaco, con la enfermedad o trastorno a ser tratado con ello, llegando a ser potencialmente refractorio a la composición farmacéutica la cual tiene un componente inmunogénico. La albúmina recombinante ha sido propuesta como un estabilizador en una composición farmacéutica de toxina botulinum. De este modo, la solicitud de Patente Estadounidense publicada número 2003 0118598 (Hunt) , describe el uso de varios excipientes tales como una albúmina recombinante, colágeno o almidón, para estabilizar una toxina botulinum presente en una composición farmacéutica. El colágeno es la proteína más abundante en mamíferos, que comprende aproximadamente un cuarto de todas las proteínas en el cuerpo y es el constituyente principal de tejidos conectivos, tales como piel, ligamentos y tendones. El colágeno nativo es una hélice triple de tres proteínas de alto peso molecular. Cada una de las tres cadenas de proteínas que comprende la hélice de colágeno, tiene más de 1400 aminoácidos. Al menos veinticinco distintos tipos de colágenos han sido identificados en humanos. El colágeno ha sido usado cosméticamente como un material de filtro para tratar los problemas de contorno de piel, tales como surcos suaves de la línea de la sonrisa y líneas de gestos fruncidos, doblez entre las cejas, arrugas en las esquinas de los ojos y pliegues verticales finos arriba y por debajo de los labios. El colágeno también es útil en ciertas cicatrizaciones de acné o traumáticas post-quirúrgicas y marcas virales, tales como marcas de varicelas. Para tales propósitos, el colágeno es inyectado en la dermis para elevar la piel. Se puede obtener la gelatina por la hidrólisis de colágeno. La gelatina ha sido usada en algunas composiciones farmacéuticas de ingrediente activo de la proteína, como un sustituto de albúmina. Notablemente, la gelatina es una proteína derivada de animal y por lo tanto, lleva el mismo riesgo de infectividad potencial la cual puede ser poseída por albúmina de suero humano. La Patente China CN 1215084, discute una toxina botulinum libre de albúmina tipo A, formulada con gelatina nativa (un hidrolizado de colágeno) , una proteína derivada de animal, dextrano y sacarosa. La patente Estadounidense número 6,087,327, también discute una composición de toxina botulinum tipos A y B formuladas con gelatina nativa. Desafortunadamente, debido a sus efectos de estabilización conocidos, existen desventajas significantes al uso de excipientes de proteínas tales como albúmina o gelatina, en una composición farmacéutica. Por ejemplo, la albúmina y gelatina son costosas e incrementadamente difíciles de obtener. Además, los productos sanguíneos o productos derivados de animal, tales como albúmina y gelatina cuando se administran a un paciente, pueden someter el paciente a un riesgo potencial de recibir sangre que lleva patógenos o agentes infecciosos. De este modo, se sabe que existe la posibilidad de que la presencia de un excipiente de proteína derivada de animal en una composición farmacéutica, pueda resultar en incorporación inadvertente de elementos infecciosos en la composición farmacéutica. Por ejemplo, se ha reportado que el uso de albúmina de suero humano puede transmitir priones en una composición farmacéutica. Un prión es una partícula infecciosa proteinácea la cual es hipotetizada por originarse como una isoforma conformacional anormal a partir de la misma secuencia de ácido nucleico, el cual hace a la proteína normal. Se ha hipotetizado además, que la infectividad reside en una "reacción de reclutamiento" de la proteína de isoforma normal de la isoforma de proteína prión a un nivel post-traduccional. Aparentemente, la proteína celular endógena normal es inducida al desplegamiento en una conformación de prión patogénico. De este modo, es deseable encontrar un excipiente adecuado el cual pueda ser usado para estabilizar la toxina botulinum presente en una composición farmacéutica de toxina botulinum. Preferiblemente, el estabilizador de toxina botulinum no es una proteína derivada de una fuente animal (es decir, mamífero) .

Toxina botulinum El género clostridium tiene más de ciento veintisiete especies, agrupadas por morfología y función. La bacteria gram positiva, anaeróbica, Clostridium botulinum, produce una toxina botulinum, neurotoxina de polipéptido potente, la cual causa una enfermedad neuroparalítica en humanos y animales, referido como botulismo. El Clostridi um botulinum y sus esporas, se encuentran comúnmente en el suelo y la bacteria puede crecer en contenedores de alimentos inapropiadamente esterilizados y sellados de latas de base doméstica, las cuales son la causa de muchos de los casos de botulismo. Los efectos de botulismo típicamente aparecen 18 hasta 36 horas después de comer los productos alimenticios infectados con un cultivo o espora de Clostridi um botul inum . La toxina botulinum puede aparentemente, pasar inatenuada a través del revestimiento del intestino y atacar las neuronas motoras periféricas. Los síntomas de intoxicación de toxina botulinum pueden progresar de dificultad para caminar, hinchazón y hablar, a parálisis de los músculos respiratorios y muerte. La toxina botulinum tipo A, es el agente biológico natural más letal conocido por el hombre. Aproximadamente 50 picogramos de toxina botulinum tipo A (complejo de neurotoxina purificada), son un LD50 en ratones. De manera interesante, en una base molar, la toxina botulinum tipo A, es 1.8 billones de veces más letal que la difteria, 600 millones de veces más letal que el cianuro de sodio, 30 millones de veces más letal que carbotoxina y 12 millones de veces más letal que el cólera. Singh, Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins, páginas 63-84 (capítulo 4) de Natural Toxins II, editado por B. R. Singh et al., Plenum Press, New York (1976) (en donde el LD50 declarado de toxina botulinum tipo A de 0.3 ng se iguala 1 U, es corregido por el hecho de que aproximadamente 0.05 ng de BOTOX® igualan 1 unidad) . Una unidad (U) de toxina botulinum es definida como el LD50 después de la inyección intraperitoneal en ratones hembra Swiss Webster que pesan 18-20 gramos cada uno. En otras palabras, una unidad de toxina botulinum es la cantidad de toxina botulinum que elimina 50% de un grupo de ratones hembra Swiis Webster. Han sido caracterizadas en general, varias neurotoxinas de botulinum inmunológicamente distintas, estas son respectivamente, neurotoxinas botulinum serotipos A, B, Ci, D, E, F, y G, cada uno de los cuales son distinguidos por neutralización con los anticuerpos de tipo específico. Los diferentes serotipos de toxina botulinum varían en las especies animales que son afectadas y en la severidad y duración de la parálisis que evocan. Por ejemplo, se ha determinado que la toxina botulinum tipo A, es 500 veces más potente, medida por la relación de parálisis producida en la rata, que es toxina botulinum tipo B. Adicionalmente, la toxina botulinum tipo B, ha sido determinada por ser no tóxica en primates, a una dosis de 480 U/kg, la cual es aproximadamente 12 veces el LD50 de primate para toxina botulinum tipo A. Las toxinas botulinum aparentemente se enlazan con alta afinidad a las neuronas motores colinérgicas, son translocadas en la neurona y bloquean la liberación presináptica de acetilcolina. Las toxinas botulinum han sido usadas en establecimientos clínicos para el tratamiento de trastornos neuromusculares caracterizados por los músculos esqueléticos hiperactivos . La toxina botulinum tipo A, se aprobó por la Administración Estadounidense de Alimentos y Fármacos en 1989, para el tratamiento de blefarospasmo esencial, estrabismo y espasmos hemifaciales en pacientes de más de doce años. Los efectos clínicos de infección periférica (es decir, intramuscular o subcutánea), de toxina botulinum tipo A, son usualmente vistos dentro de una semana de la inyección, y a menudo, dentro de pocas horas después de la inyección. La duración típica del alivio sintomático (es decir, parálisis del músculo flácido) , a partir de una inyección intramuscular única de toxina botulinum tipo A, puede ser aproximadamente tres meses hasta aproximadamente seis meses. Aunque todos los serotipos de toxina botulinum aparentemente inhiben la liberación de la acetilcolina neurotransmisora en la unión neuromuscular, haciendo esto, afectan diferentes proteínas neurosecretoras y/o desdoblan estas proteínas a diferentes sitios. La toxina botulinum A es una endopeptidasa del zinc, la cual puede específicamente, hidrolizar un enlace peptídico de la vesícula intracelular, asociada con la proteína SNAP-25. La botulinum tipo E también desdobla la proteína asociada sinaptosomal de 25 kiloDalton (kD) (SNAP-25) , pero dirige diferentes secuencias de aminoácido dentro de esta proteína, comparado con la toxina botulinum tipo A. La toxina botulinum tipos B, D, F y G, actúan en la proteína asociada con la vesícula (VAMP, también llamada sinaptobrevina) , con cada serotipo que desdobla la proteína en un sitio diferente. Finalmente, la toxina botulinum tipo Ci, ha sido mostrada por desdoblar tanto la sintaxis como la SNAP-25. Estas diferencias en el mecanismo de acción, pueden afectar la potencia relativa y/o duración de acción de los varios serotipos de toxina botulinum. Con respecto al serotipo, el mecanismo molecular de la intoxicación de toxina, parece ser similar e involucra al menos, tres etapas o estados. En la primera etapa del proceso, la toxina se enlaza a la membrana perisináptica de la neurona objetivo a través de una interacción específica entre la cadena pesada (cadena H) y un receptor de superficie celular; el receptor se piensa, es diferente para cada serotipo de toxina botulinum y para toxina del tétano. El extremo terminal carboxilo de la cadena H, Hc, parece ser importante para dirigir la toxina a la superficie de célula. En la segunda etapa, la toxina cruza la membrana plasmática de la célula envenenada. La toxina es primero envuelta por la célula a través de la endocitosis mediada por el receptor, y un endosoma que contiene la toxina se forma. La toxina entonces escapa al endosoma en el citoplasma de la célula. Esta última etapa se piensa, es mediada por el segmento de término amino de la cadena H, HN, la cual activa un cambio conformacional de la toxina en respuesta a un pH de aproximadamente 5.5 o inferior. Los endosomas son conocidos por poseer una bomba de protones, los cuales disminuyen el pH intra-endosomal . El cambio conformacional expone residuos hidrofóbicos en la toxina, lo cual permite a la toxina incluirse la misma en la membrana endosomal. La toxina entonces se transloca a través de la membrana endosomal en el citosol. La última etapa del mecanismo de actividad de toxina botulinum, parece involucrar la reducción del enlace de disulfuro que une la cadena H y L. La actividad tóxica completa de botulinum y toxinas del tétano, está contenida en la cadena L de la holotoxina; la cadena L es una endopeptidasa del zinc (Zn++), la cual desdobla selectivamente, proteínas esenciales para el reconocimiento y acoplamiento de las vesículas que contienen neurotransmisor con la superficie citoplásmica de la membrana plasmática, y fusión de las vesículas con la membrana plasmática. La neurotoxina del tétano, toxina botulinum B, D, F y G, causan degradación de sinaptobrevina (también llamada proteína de la membrana asociada con la vesícula (VAMP) ) , una proteína de membrana sinaptosomal. La mayoría de la VAMP presente en la superficie citosólica de la vesícula sináptica, es removida como un resultado de cualquiera de estos eventos de desdoblamiento. Cada toxina específicamente, desdobla un enlace diferente. El peso molecular de la molécula de proteína de toxina botulinum, para los siete de los serotipos de toxina botulinum conocidos, es aproximadamente 150 kD. Las toxinas botulinum son liberadas por la bacteria clostridial, como complejos que comprenden la molécula de proteína toxina botulinum de 150 kD, junto con proteínas sin toxina asociadas. De este modo, el complejo de toxina botulinum tipo A, puede ser producido por la bacteria clostridial como formas de 900 kD, 500 kD y 300 kD. La toxina botulinum tipos B y Ci, son aparentemente producidas como solamente un complejo de 500 kD. La toxina botulinum tipo D, es producida como complejos de tanto 300 kD como 500 kD. Finalmente, la toxina botulinum tipos E y F, son producidos como solamente complejos de aproximadamente 300 kD. Los complejos (es decir, peso molecular mayor de aproximadamente 150 kD) , se cree, contienen una proteína hemaglutinina sin toxina y una proteína sin hemaglutinina no tóxica y sin toxina. Estas dos proteínas sin toxina (las cuales junto con la molécula de toxina botulinum, pueden comprender el complejo de neurotoxina relevante), pueden actuar para proporcionar estabilidad contra la desnaturalización en la molécula de toxina botulinum y protección contra ácidos digestivos cuando la toxina es ingerida. Adicionalmente, es posible que los complejos de toxina botulinum más grandes (mayor de aproximadamente 150 kD de peso molecular) , pueden resultar en una velocidad más lenta de difusión de la toxina botulinum separadas de un sitio de inyección intramuscular de un complejo de toxina botulinum. Los complejos de toxina pueden ser disociados en proteína de toxina y proteínas de hemaglutinina tratando el complejo con células rojas de la sangre a pH 7.3. La proteína de toxina tiene una inestabilidad marcada después de la remoción de la proteína de hemaglutinina. Todos los serotipos de toxina botulinum son elaborados por la bacteria Clos tridi um botulinum como proteínas de cadena única inactivas, las cuales deben ser desdobladas o cortadas por proteasas para llegar a ser neuroactivos . Las cepas bacterianas que hacen la toxina botulinum serotipos A y G, poseen proteasas endogenosas y los serotipos A y G pueden por lo tanto, ser recuperados de los cultivos bacterianos en su forma predominantemente activa. Por el contrario, la toxina botulinum serotipos Ci, D y E, son sintetizados por cepas no proteolíticas y son por lo tanto, típicamente inactivados cuando se recuperan del cultivo. Los serotipos B y F son producidos por cepas tanto proteolíticas como no proteolíticas y por lo tanto, pueden ser recuperadas en ya sea la forma activa o inactiva. Sin embargo, aún las cepas proteolíticas que producen por ejemplo, la toxina botulinum serotipo B, solamente desdobla una porción de la toxina producida. La proporción exacta de moléculas cortadas a no cortadas, depende de la longitud de incubación y la temperatura del cultivo. Por lo tanto, un 1 cierto porcentaje de cualquier preparación de, por ejemplo, la toxina botulinum tipo toxina B, es probablemente ser infectiva, posiblemente contando la potencia significantemente inferior conocida de toxina botulinum tipo B, comparada con la toxina botulinum tipo A. La presencia de moléculas de toxina botulinum inactivas en una preparación clínica, contribuirá a la carga de proteína total de la preparación, la cual ha sido ligada a antigenicidad incrementada, sin contribuir a su eficacia clínica. Adicionalmente, se sabe que la toxina botulinum tipo B, ha, después de la inyección intramuscular, una duración más corta de actividad y también es menos potente que la toxina botulinum tipo A al mismo nivel de dosificación. Estudios in vi tro, han indicado que la toxina botulinum inhibe la liberación inducida por el catión de potasio de tanto acetilcolina y norepinefrina de cultivos de células primarias del tejido del tronco encefálico. Adicionalmente, se ha reportado que la toxina botulinum inhibe la liberación evocada de tanto glicina como glutamato en cultivos primaros de neuronas de la médula espinal, y que en el sinaptosoma cerebral, las preparaciones de toxina botulinum, inhiben la liberación de cada una de las acetilcolina neurotransmisoras, dopamina, norepinefrina, CGRP y glutamato. La toxina botulinum cristalina de alta calidad tipo A, puede ser producida de la cepa Hall A de Clostridi um botulinum, con características de > 3 x 107 U/mg, un A26o 2 8 de menos de 0.60 y un patrón distinto de vendaje en electroforesis en gel. El proceso Schantz conocido puede ser usado para obtener la toxina botulinum cristalina tipo A, como se expone en Schantz, E.J., et al, Properties and use of Botulinum toxin and Other Microbial Neurotoxins in Medicine, Microbiol Rev. 56: 80-99 (1992). En general, el complejo de toxina botulinum tipo A, puede ser aislado y purificado de una fermentación anaeróbica cultivando Clostridi um botulinum tipo A en un medio adecuado. La toxina pura puede ser cosechada por precipitación con ácido sulfúrico y concentrada por ultramicrofiltración . La purificación se puede llevar a cabo disolviendo el ácido precipitado en cloruro de calcio. La toxina puede entonces, ser precipitada con etanol frío. Lo precipitado puede ser disuelto en amortiguador de fosfato de sodio y centrifugado. Después del secado, puede entonces obtenerse el complejo de toxina botulinum cristalina tipo A de aproximadamente 900 kD, con una potencia específica de 3 x 107 LD50 U/mg o mayor. Este proceso conocido, también puede ser usado, después de la separación de las proteínas sin toxinas, para obtener toxinas botulinum puras, tales como por ejemplo: toxina botulinum purificada tipo A con un peso molecular de aproximadamente 150 kD, con una potencia específica de 1-2 X 108 LD50 U/mg o mayor; toxina botulinum purificada tipo B con un peso molecular de aproximadamente 156 kD, con una potencia específica de 1-2 xlO8 LD50 U/mg o mayor, y; toxina botulinum purificada tipo F con un peso molecular de aproximadamente 155 kD, con una potencia específica de 1-2 x 107 LD50 U/mg o mayor. Las toxinas botulinum y complejos de toxinas, se pueden obtener a partir de por ejemplo, List Biological Laboratories, Inc., Campbell, California; the Centre for Applied Microbiology and Research, Portón Down, U. K; Waki (Osaka, Japón), así como también de Sigma Chemicals de St . Louis Missouri. La toxina botulinum comercialmente disponible que contiene composiciones farmacéuticas, incluye BOTOX® (complejo de neurotoxina de toxina botulinum tipo A con albúmina de suero humano y cloruro de sodio) , disponible de Allergan, Inc. de Irvine, California en viales de 100 unidades como un polvo liofilizado a ser reconstituido con cloruro de sodio al 0.9% antes del uso), Dysport® (complejo de hemaglutinina de toxina Clostridi um botulinum tipo A con albúmina de suero humano y lactosa en la formulación) , disponible de Ipsen Limited, Berkshire, U.K. como un polvo a ser reconstituido con cloruro de sodio al 0.9% antes del uso) y MyoBloc™ (una solución inyectable que comprende toxina botulinum tipo B, albúmina de suero humano, succinato de sodio y cloruro de sodio a pH de aproximadamente 5.6, disponible de Solstice Neurosciences, Inc., South San Francisco, California) . El éxito de la toxina botulinum tipo A, para tratar una variedad de condiciones clínicas, ha conducido a un interés en otros serotipos de toxina botulinum. Adicionalmente, la toxina botulinum pura, ha sido usada para tratar humanos. Véase por ejemplo, Kohl A., et al., Comparison of the effect of botulinum toxin A (Botox (R) ) with the highly-purified neurotoxin (NT 201) in the extensor digitorum brevis muscle test, Mov Disord 2000; 15 (Suppl 3):165. Por lo tanto, una composición farmacéutica puede ser preparada usando una toxina botulinum pura. La toxina botulinum tipo A, es conocida por ser soluble en soluciones acuosas dilutas a pH 4-6.8. A pH arriba de aproximadamente 7, las proteínas no toxicas estabilizantes, se disocian de la neurotoxina, resultando en una pérdida gradual de toxicidad, particularmente conforme se eleva el pH y temperatura. Schantz EJ. , et al Preparation and characterization of botulinum toxin type A for human treatment (en particular, páginas 44-45), siendo el capítulo 3 de Jankovic, J. , et al, Therapy with Botulinum Toxin, Marcel Dekker, Inc. (1994). La patente Europea EP1112082 ("Formulaciones líquidas estables de toxina botulinum"), publicada el 31 de Julio de 2002, reivindica una formulación de toxina botulinum farmacéutica líquida estable, que comprende un amortiguado (pH 5-6) y una toxina botulinum, en donde la formulación de toxina es estable como un líquido por al menos, un año a temperaturas entre 0-10°C o al menos, 6 meses a temperaturas entre 10 y 30°C. Tal formulación farmacéutica de toxina botulinum (una modalidad la cual es comercialmente vendida bajo el nombre comercial MyoBloc® o NeuroBloc® por Solstice Neurosciences, Inc., de San Diego, California), es preparada como una solución líquida (no se lleva a cabo liofilización o secado a vacío) , la cual no requiere reconstitución antes del uso. La Patente Estadounidense 5,512,547 (Johnson et al), titulada "Composición farmacéutica de Neurotoxina Botulinum y Método de Preparación", publicada el 30 de Abril de 1996, reivindica una formulación de botulinum pura tipo A, que comprende albúmina y trehalosa, en almacenaje estable a 37°C. La Patente Estadounidense 5,756,468 (Johnson et al), publicada el 26 de Mayo de 1998 ("Composiciones Farmacéuticas de Toxina Botulinum o Neurotoxina Botulinum y Método de Preparación") , reivindica una formulación de toxina botulinum liofilizada que comprende un tioalquilo, albúmina, y trehalosa, los cuales pueden ser almacenados entre 25°C y 42°C. La Patente Estadounidense 5,696,077 (Johnson et al), titulada "Composición Farmacéutica que Contiene Complejo de Botulinum B" , publicada el 9 de diciembre de 1997, reivindica una formulación de complejo de botulinum tipo B libre de cloruro de sodio, secado por congelamiento, que comprende un complejo tipo B y un excipiente de proteína. Se describe, Goodnough M. C, et al., Stabilization of botulinum toxin type A during lyophilization, Appl Environ Microbiol 1992;58 (10) :3426-3428, y; Goodnough M. C, et al., Recovery of type-A botulinum toxin following lyophilization, Acs Symposium Series 1994;567(-): 193-203. La solicitud de patente China CN 1215084A, discute una toxina de botulinum libre de albúmina tipo A, formulada con gelatina, una proteína derivada animal. La patente Estadounidense Número 6,087327, también describe una composición de toxina botulinum tipos A y B, formuladas con gelatina. Estas formulaciones por lo tanto, no eliminan el riesgo de transmitir una proteína animal derivada o que acompaña un elemento infeccioso. Se ha reportado que el BoNt/A, ha sido usado en varios establecimientos clínicos, que incluyen como sigue: (1) aproximadamente 75-125 unidades de BOTOX® por inyección intramuscular (músculos múltiples) para tratar distonia cervical; (2) 5-10 unidades de BOTOX® por inyección intramuscular para tratar líneas glabelares (hendiduras marrón) (5 unidades inyectadas intramuscularmente en el músculo procerus, y 10 unidades inyectadas intramuscularmente en cada músculo superciliar corrugador) ; (3) aproximadamente 30-80 unidades de BOTOX® para tratar constipación por inyección intraesfínter del músculo puborectal; (4) aproximadamente 1-5 unidades por músculo de BOTOX® inyectado intramuscularmente para tratar blefaroespasmo inyectando el músculo ocular orbiculares pre-tarsal lateral de la tapa superior y el óculo orbicularis pre-tarsal lateral de la tapa inferior. (5) para tratar estrabismo, los músculos extraoculares han sido inyectados intramuscularmente con entre aproximadamente 1-5 unidades de BOTOX®, la cantidad inyectada variará basada en el tamaño del músculo a ser inyectado y la extensión de la parálisis muscular deseada (es decir, la cantidad de corrección de dioptría deseada) . (6) para tratar espasticidad de extremo superior seguida por apoplejía por inyecciones intramusculares de BOTOX® en cinco diferentes músculos flexores de la extremidad superior, como sigue: (a) flexor profundo de los dedos: 7.5 U hasta 30 U (b) flexor sublime de los dedos: 7.5 U hasta 30 U (c) flexor cubital del carpo: 10 U hasta 40 U (d) flexor radial del carpo: 15 U hasta 60U (e) músculos bíceps: 50 U hasta 200 U. Cada uno de los cinco músculos indicados, ha sido inyectado en la misma sesión de tratamiento, de manera que el paciente recibe de 90 U hasta 360 U de BOTOX® en el músculo flexor de extremo superior por inyección intramuscular en cada sesión de tratamiento. (7) Para tratar migraña, se inyecta pericranealmente (simétricamente inyectada en los músculos grabelares, frontalis y temporal), una inyección de 25 U de BOTOX® que ha mostrado beneficio significante como un tratamiento profiláctico de migraña, comparado con el vehículo como se mide por cantidades reducidas de frecuencia de migraña, severidad máxima, asociada con el vómito y mediación aguda por uso durante el periodo de tres meses después de la inyección de 25 U. Se sabe que la toxina botulinum tipo A conocida, puede tener una eficacia por hasta 12 meses (European J. Neurology 6 (Supp 4): Slll -S1150 : 1999) , y en algunas circunstancias, tan largo como 27 meses. The Laryngoscope 109:1344-1346:1999. Sin embargo, la duración usual de una inyección intramuscular de Botox®, es típicamente aproximadamente 3 a 4 meses. El éxito de la toxina botulinum tipo A para tratar una variedad de condiciones clínicas, ha conducido a interés en otros serotipos de toxina botulinum. Adicionalmente, la toxina botulinum pura, ha sido usada en humanos. Véase por ejemplo, Kohl A., et al., Comparison of the effect of botulinum toxin A (Botox (R) ) with the highly-purified neurotoxin (NT 201) in the extensor digitorum brevis muscle test, Mov Disord 2000; 15 (Suppl 3):165. Por lo tanto, puede ser preparada una composición farmacéutica usando una toxina botulinum pura. La molécula de toxina botulinum (aproximadamente 150 kDa) , así como también los complejos de toxina botulinum (aproximadamente 300-900 kDa), tales como el complejo de toxina tipo A, son también extremadamente susceptibles para desnaturalización debido a la desnaturalización de superficie, calor y condiciones alcalinas. Las toxinas inactivadas forman proteínas toxoides las cuales pueden ser inmunogénicas. Los anticuerpos resultantes pueden proporcionar a un paciente refractorio a la inyección de toxina . Como con las enzimas en general, las actividades biológicas de las toxinas botulinum (las cuales son peptidasas intracelulares), son dependientes al menos en parte, de su conformación tri-dimensional. De este modo, la toxina botulinum tipo A, es destoxificada por calor, varios químicos de estiramiento de superficie y secado de superficie. Adicionalmente, se sabe que la dilución del complejo de toxina obtenido por el cultivo conocido, fermentación y purificación a lo mucho, concentraciones de toxina muy inferiores usadas para la formulación de composición farmacéutica, resulta en rápida destoxificación de la toxina, a menos que esté presente un agente estabilizante adecuado. La dilución de la toxina de cantidades miligramos a una solución que contiene nanogramos por mililitro, presenta dificultades significantes debido a la pérdida rápida de toxicidad específica sobre tal dilución mayor. Puesto que la toxina puede ser usada meses o años después que es formulada la composición farmacéutica que contiene toxina, la toxina debe ser estabilizada con un agente estabilizante. A la fecha, el único agente estabilizante exitoso para este propósito ha sido la albúmina de suero humano de proteínas derivadas de animales y gelatina . Una toxina botulinum comercialmente disponible que contiene composición farmacéutica, es vendida bajo la marca comercial BOTOX® (disponible de Allergan, Inc., de Irvine, California) . El BOTOX® consiste de un complejo de toxina botulinum purificada tipo A, albúmina de suero humano, y cloruro de sodio envasado en forma secada en vacío, estéril. La toxina botulinum tipo A, se elabora de un cultivo de la cepa Hall de Clostridi um botulinum que crece en un medio que contiene amina N-Z y extracto de levadura. El complejo de toxina botulinum tipo A, es purificado de la solución de cultivo por una serie de precipitaciones de ácido a un complejo cristalino que consiste de la proteína de toxina de alto peso molecular, activa, y una proteína de hemaglutinina asociada. El complejo cristalino es re-disuelto en una solución que contiene salina y albúmina y filtrada estéril (0.2 micrones) antes del secado a vacío. El BOTOX® puede ser reconstituido con salina estéril, no preservada, antes de la inyección intramuscular. Cada vial de BOTOX®, contiene aproximadamente 100 unidades (U) de complejo de toxina Clostridi um botul inum tipo A, 0.5 miligramos de albúmina de suero humano, y 0.9 miligramos de cloruro de sodio en una forma seca a vacío, estéril, sin un preservativo. Para reconstituir BOTOX® secado a vacío, se usa salina normal estéril sin un preservativo (inyección de cloruro de sodio al 0.9%), retirando hasta la cantidad apropiada de diluyente en la jeringa de tamaño apropiado. Puesto que el BOTOX® es desnaturalizado burbujeando o por agitación violenta similar, el diluyente es uniformemente inyectado en el vial. Por razones de esterilidad, el BOTOX® debe ser administrado dentro de cuatro horas después de la reconstitución. Durante este periodo de tiempo, el BOTOX® reconstituido es almacenado en un refrigerador (2° a 8°C). El BOTOX® reconstituido es transparente, incoloro y libre de materia particulada. El producto secado a vacío es almacenado en un congelador a, o por debajo de -5°C. Se ha reportado que una alternativa adecuada a la albúmina de suero humano como un estabilizador de toxina botulinum, puede ser otra proteína o alternativamente, un compuesto de bajo peso molecular (sin proteína). Carpender et al., Interactions of Stabilizing Additives with Proteins During Freeze-Thawing and Freeze-Drying, International Symposium on Biological Product Freeze-Drying and Formulation, 24-26 October 1990; Karger (1992), 225-239. Muchas sustancias comúnmente usadas como portadores y agentes de volumen en composiciones farmacéuticas, han probado ser inadecuados como excipientes sin proteína, para estabilizar la toxina botulinum presente en una composición farmacéutica. Por ejemplo, el disacárido celobiosa, se ha encontrado por ser inadecuado como un estabilizador de toxina botulinum. De este modo, se sabe que el uso de celobiosa como un excipiente, en conjunto con albúmina y cloruro de sodio, resulta en un nivel muy inferior de toxicidad (10% de recuperación) , después de la liofilización de toxina botulinum cristalina tipo A con estos excipientes, comparado con la toxicidad después de la liofilización con solamente albúmina de suero humano (>75% hasta >90% de recuperación) . Goodnough et al., Stabilization of Botulinum Toxin Type A During Lyophilization, App & Envir. Micro. 58 (10) 3426-3428 (1992) . Además, sacáridos que incluyen polisacáridos, son en general, candidatos pobres para servir como estabilizadores de proteína. De este modo, se sabe que una composición farmacéutica que contiene un ingrediente activo de proteína, es inherentemente inestable si la formulación de proteína comprende un sacárido (tal como glucosa o un polímero de glucosa) o carbohidratos, debido a que proteínas y glucosa se conocen por interactuar en conjunto y someterse a la reacción Maular descrita también, debido a la naturaleza reductora de la glucosa y polímeros de glucosa. Se ha dedicado mucho trabajo a intentos la mayoría sin éxito, en la prevención de esta reacción de proteína-disacárido mediante por ejemplo, reducción de la humedad o uso. de azúcares no reductores. De manera significante, la trayectoria degradativa de la reacción Maular, puede resultar en una insuficiencia terapéutica del ingrediente activo de proteína. Una formulación farmacéutica que comprende proteína y un sacárido reductor, carbohidrato o azúcar, tal como un polímero de glucosa, es por lo tanto, inherentemente inestable y no puede ser almacenado por un periodo prolongado de tiempo sin pérdida significante de la actividad biológica deseada de la proteína del ingrediente activo. Los polisacáridos de alto peso molecular particulares (almidones) , tales como Hetastarch, han sido propuestos como estabilizadores de la toxina botulinum presente en una composición farmacéutica de toxina botulinum.

Véase por ejemplo, Patente Europea EP 1 253 932, publicada el 27 de Abril de 2005. Notablemente, una de las razones de que la albúmina o gelatina puedan funcionar efectivamente como un estabilizador de un ingrediente activo de proteína en una composición farmacéutica, es debido a que siendo proteínas estos estabilizadores no se someten a la reacción Maillard con el ingrediente activo de proteína en una composición farmacéutica. Por lo tanto, se podría esperar encontrar y observar para un sustituto para estos excipientes de proteínas usados para estabilizar la toxina botulinum presente en una composición farmacéutica de toxina botulinum entre otras proteínas. Las características únicas de toxina botulinum y su formulación en una composición farmacéutica adecuada, restringen y dificultan y proporcionan la investigación para una recolocación de un estabilizadora en una toxina botulinum que contiene formulaciones farmacéuticas problemáticas. Ejemplos de cuatro de estas características únicas, continúan. Primero, la toxina botulinum es una proteína relativamente grande para incorporación en una formulación farmacéutica (el peso molecular del complejo de toxina botulinum tipo A es 900 kD) , y es por lo tanto, inherentemente frágil y lábil. El tamaño del complejo de toxina la hace mucho más friable y lábil que las proteínas de complejos menores, más pequeñas, con ello, formando en compuesto la formulación y dificultando la manipulación si la estabilidad de la toxina es mantenida. Por lo tanto, un estabilizador de toxina botulinum debe ser capaz de interactuar con la toxina en una manera la cual no desnaturaliza, fragmenta o de otro modo, destoxifica la molécula de toxina o causa disociación de las proteínas sin toxina presentes en el complejo de toxina. Segundo, como la mayoría de los productos biológicos letales conocidos, la seguridad excepcional, precisión y exactitud, son llamados para todas las etapas de la formulación de una composición farmacéutica que contiene toxina botulinum. De este modo, un estabilizador de toxina botulinum, no debe el mismo, ser tóxico o difícil de manipular, para que no exacerbe la toxina botulinum ya extremadamente rigurosa que contiene los requerimientos de formulación de composición farmacéutica. Tercero, puesto que la toxina botulinum fue la primera toxina microbiana a ser aprobada (por la FDA en 1989) para inyección para el tratamiento de enfermedades humanas, los protocolos específicos han sido desarrollados y aprobados para el cultivo, producción a volumen, formulación en un farmacéutico y uso de toxina botulinum. Consideraciones importantes son la pureza y dosis de toxina para inyección.

La producción por cultivación y la purificación, se deben llevar a cabo de manera que la toxina no se exponga por cualquier sustancia que podría contaminar el producto final en cantidades aún indicadoras y causar reacciones indebidas en el paciente. Estas restricciones requieren cultivar en un medio simplificado, sin el uso de productos de harina animal y purificación por procedimientos que no involucran solventes o resinas sintéticas. La preparación de toxina usando enzimas, varios intercambiadores, tales como aquellos presentes en columnas de cromatografía y solventes sintéticos, pueden introducir contaminantes y son por lo tanto, excluidos de las etapas de formulación preferidas. Además, la toxina botulinum tipo A, es fácilmente desnaturalizada a temperaturas arriba de 40°C, pierde toxicidad cuando forma burbujas a la interfaz aire/líquido, y se desnaturaliza en la presencia de nitrógeno o dióxido de carbono . Cuarto, existen dificultades particulares para estabilizar la toxina botulinum tipo A, debido a que el tipo A consiste de una molécula de toxina de aproximadamente 150 kD, en asociación no covalente con proteínas sin toxina que pesan aproximadamente 750 kD. Las proteínas sin toxina se cree, preservan o ayudan a estabilizar las estructuras secundarias y terciarias después de lo cual, la toxicidad es dependiente. Los procedimientos o protocolos aplicables a la estabilización de no proteínas o a proteínas relativamente pequeñas, no son aplicables a los problemas inherentes con la estabilización de los complejos de toxina botulinum, tales como complejo de toxina botulinum tipo A de 900 kD. De este modo, mientras el pH de 3.5 a 6.8 de la toxina tipo A y proteínas no toxinas, son unidos en conjunto no covalentemente, bajo condiciones ligeramente alcalinas (pH >7.1), la toxina muy lábil es liberada del complejo de toxinas. Como se expone previamente, la toxina botulinum pura (es decir, la molécula de 150 kD) , ha sido propuesta como el ingrediente activo en una composición farmacéutica. En vista de la naturaleza única de toxina botulinum y los requerimientos expuestos anteriormente, la probabilidad de un estabilizador sin proteína adecuado para los estabilizadores de proteína usados en composiciones farmacéuticas que contienen toxina botulinum, debe ser realísticamente vista por alcanzar cero. Antes de la presente invención, solamente las proteínas derivadas de animal, albúmina de suero humano y gelatina, han sido conocidas por tener utilidad como estabilizadores adecuados de la toxina botulinum presente en una formulación farmacéutica. De este modo, albúmina por sí misma o con una o más sustancias adicionales tales como fosfato de sodio o citrato de sodio, es conocida por permitir la alta recuperación de toxicidad de toxina botulinum tipo A después de la liofilización.

Desafortunadamente, como ya se expuso, la albúmina de suero humano, como un producto de sangre combinada, puede, al menos potencialmente, llevar elementos que causan enfermedad o infeccioso cuando se presenta en una composición farmacéutica. Sin embargo, cualquier producto o proteína animal, tal como albúmina de suero humano o gelatina, pueden también contener potencialmente, pirógenos u otras sustancias que causan reacciones adversas después de la inyección en un paciente . Lo que se necesita por lo tanto, es una composición farmacéutica de toxina clostridial, en donde la toxina clostridial (tal como una toxina botulinum) , es estabilizada por un excipiente sin proteína.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención cubre esta necesidad y proporciona una composición farmacéutica de toxina botulinum, la cual es estabilizada por un excipiente sin proteína.

Definiciones Como se usa en este documento, las palabras o términos expuestos abajo, tienen las siguientes definiciones. "Aproximado", significa que el artículo, parámetro o término así calificado, abarca un intervalo de más o menos diez por ciento arriba y abajo del valor del artículos, parámetros o términos declarados. "Administración", o "administrar", significa la etapa de dar (es decir, administrar) una composición farmacéutica a un sujeto. Las composiciones farmacéuticas descritas en este documento, son "localmente administradas" por ejemplo, rutas de administración intramuscular (i.m.), intradérmica, administración subcutánea, administración intratecal, administración intraperitoneal (i.p), tópica (transdérmica) e implantación (es decir, de un dispositivo de lenta liberación tal como bomba miniosmótica o implante polimérico) . "Libre de proteína animal", significa la ausencia de sangre derivada, sangre combinada y otros productos o compuestos derivados de animal. "Animal", significa un mamífero (tal como un humano), ave, reptil, pescado, insecto, araña u otras especies animales. "Animal", excluye microorganismos tales como bacterias. De este modo, una composición farmacéutica libre de proteína animal dentro del alcance de la invención puede incluir, neurotoxina clostridial. Por ejemplo, una composición farmacéutica libre de proteína animal, significa una composición farmacéutica la cual es ya sea sustancialmente libre o esencialmente libre de, o completamente libre de un suero derivado de albúmina, gelatina y otras proteínas derivadas de animal, tales como inmunoglobulinas. Un ejemplo de una composición farmacéutica libre de proteína animal, es una composición farmacéutica la cual comprende o la cual consiste de una toxina botulinum (como el ingrediente activo) , y un polisacárido adecuado como un estabilizador o excipiente. "Toxina botulinum", significa una neurotoxina producida por Clos tridi um botul inum, así como también una toxina botulinum (o la cadena ligera o cadena pesada del mismo) elaborados recombinantemente por una especie no clostridial. La frase "toxina botulinum" como se usa en este documento, abarca la toxina botulinum serotipos A, B, C, D, E, F, y G. La toxina botulinum como se usa en este documento, también abarca tanto un complejo de toxina botulinum (es decir, los complejos de 300, 600 y 900 kDa), así como también la toxina botulinum purificada (es decir, aproximadamente 150 kDa). "Toxina botulinum purificada", es definida como una toxina botulinum que es aislada, o sustancialmente aislada, de otras proteínas que incluyen proteínas que forman un complejo de toxina botulinum. Una toxina botulinum purificada puede ser mayor de 95% pura, y preferiblemente, es mayor de 99% pura. Las citotoxinas C2 y C3 de botulinum, no son neurotoxinas, son excluidas del alcance de la presente invención . "Neurotoxina clostridial", significa una neurotoxina producida de, o nativa a, bacteria clostridial, tal como Clos tridi um botulinum, Clostridi um butyri cum o Clostridi um bera t ti , así como también una neurotoxina clostridial elaborada recombinantemente por una especie no clostridial . "Completamente libre (es decir, terminología "que consiste de") , significa que dentro del intervalo de detección del instrumento o proceso a ser usado, la sustancia no puede ser detectada o su presencia no puede ser confirmada . "Esencialmente libre" (o "que consiste esencialmente de"), significa que solamente cantidades rastro de la sustancia pueden ser detectadas. "Toxina botulinum modificada", significa una toxina botulinum que tiene al menos, uno de sus aminoácidos suprimido, modificado o reemplazado, comparado con una toxina botulinum nativa. Adicionalmente, la toxina botulinum modificada puede ser una neurotoxina recombinantemente producida, o un derivado o fragmento de una neurotoxina recombinantemente elaborada. Una toxina botulinum modificada, retiene al menos, una actividad biológica de la toxina botulinum nativa, tal como la capacidad para enlazarse a un receptor de toxina botulinum, o la capacidad para inhibir el neurotransmisor liberado de una neurona. Un ejemplo de una toxina botulinum modificada, es una toxina botulinum que tiene una cadena ligera a partir de un serotipo de toxina botulinum (tal como el serotipo A) , y una cadena pesada de un serotipo de toxina botulinum diferente (tal como serotipo B) . Otro ejemplo de una toxina botulinum modificada es una toxina botulinum acoplada a un neurotransmisor, tal como la sustancia P. "Composición farmacéutica", significa una formulación en la cual, un ingrediente activo puede ser una neurotoxina clostridial, tal como una toxina botulinum. La palabra "formulación", significa que existe al menos, un ingrediente adicional en la composición farmacéutica, además de un ingrediente activo de neurotoxina clostridial. Una composición farmacéutica es por lo tanto, una formulación la cual es adecuada para administración diagnóstica o terapéutica (es decir, por inyección intramuscular o subcutánea o por inserción de un depósito o implante), a un sujeto, tal como un paciente humano. La composición farmacéutica puede estar: en una condición secada por vacío o liofilizada; una solución formada después de la reconstitución de la composición farmacéutica secada por vacío o liofilizada con salina o agua, o; como una solución la cual no requiere reconstitución. El ingrediente activo de neurotoxina puede ser uno de toxina botulinum serotipos A, B, Ci, D, E, F o G, o una toxina del tétanos, todos los cuales pueden ser elaborados nativamente por la bacteria clostridial. Como se declaró, una composición farmacéutica puede ser líquida o sólida, por ejemplo, secada a vacío. Los ingredientes constituyentes de una composición farmacéutica, pueden ser incluidos en una composición única (esto es, todos los ingredientes constituyentes, excepto para cualquier fluido de reconstitución requerido, están presentes al tiempo de la formación de compuestos iniciales de la composición farmacéutica), o como un sistema de dos componentes, por ejemplo, una composición secada a vacío reconstituida con un diluyente tal como salina, en la cual, el diluyente contiene un ingrediente activo no presente en la formación de compuesto inicial de la composición farmacéutica. Un sistema de dos componentes proporciona el beneficio de permitir la incorporación de ingredientes los cuales no son suficientemente compatibles para auto almacenamiento prolongado, con el primer componente del sistema de dos componentes. Por ejemplo, el vehículo o diluyente de reconstitución, puede incluir un preservativo, el cual proporciona suficiente protección contra el crecimiento microbiano por el periodo de uso, por ejemplo, una semana de almacenamiento refrigerado, pero no está presente durante el periodo de almacenamiento por congelador de dos años, durante tal tiempo, podría degradarse la toxina. Otros ingredientes los cuales no pueden ser compatibles con una toxina clostridial u otros ingredientes por periodos prolongados de tiempo, pueden ser incorporados de esta manera; esto es, agregados en un segundo vehículo (es decir, en el fluido de reconstitución) al tiempo de uso aproximado. "Estabilizador" (o "estabilizador primario") , es un agente químico que asiste para preservar o mantener la estructura biológica (es decir, la conformación tri-dimensional) y/o actividad biológica de una proteína (tal como neurotoxina clostridial, tal como una toxina botulinum). Los estabilizadores usados en este documento, son no proteínas. El estabilizador primario puede ser un agente sintético que podría no producir una respuesta inmunogénica (o produce una respuesta inmune atenuada) en un sujeto que recibe una composición que contiene el estabilizador primario. Estabilizadores adicionales pueden también ser incluidos en una composición farmacéutica. Estos estabilizadores adicionales o secundarios, pueden ser usados solos o en combinación con los estabilizadores primarios. Estabilizadores secundarios ejemplares incluyen, pero no se limitan a, derivados de aminoácido no oxidantes (tales como un derivado triptófano, tal como N-acetil-triptofano ("NAT") ) , caprilato (es decir, caprilato de sodio) , un polisorbato (es decir, P80), aminoácidos, y cationes de metales divalentes tales como zinc. Una composición farmacéutica también puede incluir agentes preservativos tales como alcohol bencílico, ácido benzoico, fenol, parabenos y ácido sórbico. "Estabilizante", "estabilizadores" o "estabilización", significa que un ingrediente activo farmacéutico ("PAI"), retiene al menos, 20% y hasta 100% de su actividad biológica (la cual puede ser valorada como potencia o como toxicidad en una medida in vivo de LD50 o EC50) , en la presencia de un compuesto el cual es estabilizante, estabiliza o el cual proporciona estabilización al PAI . Por ejemplo, después de (1) preparación de diluciones seriales de una solución base o volumen, o (2) después de reconstitución con salina o agua de una composición farmacéutica que contiene toxina botulinum secada a vacío, o liofilizada, la cual ha sido almacenada en o por debajo de aproximadamente -2°C por entre seis meses y cuatro años, y (3) por una composición farmacéutica que contiene toxina botulinum de solución acuosa, la cual ha sido almacenada a entre aproximadamente 2° y aproximadamente 8°C, desde seis meses hasta cuatro años, la toxina botulinum presente en la composición farmacéutica de solución acuosa o reconstituida tiene (en la presencia de un compuesto el cual es estabilizante, estabiliza, o el cual proporciona estabilización al PAI), más de aproximadamente 20% y hasta aproximadamente 100% de la potencia o toxicidad que la toxina botulinum biológicamente activa tiene antes de ser incorporada en la composición farmacéutica. "Sustancialmente libre", significa presente a un nivel de menos de uno porciento en peso de la composición farmacéutica . "Formulación terapéutica", significa que una formulación puede ser usada para tratar y con ello, aliviar un trastorno o enfermedad, tal como un trastorno o una enfermedad caracterizada por hiperactividad (es decir, espasticidad), de un músculo periférico. La toxina botulinum puede estar presente como un complejo de toxina botulinum (es decir, como un complejo de aproximadamente 300 hasta aproximadamente 900 kiloDalton, dependiendo del serotipo de toxina botulinum particular) , o la toxina botulinum puede estar presente como una toxina botulinum pura o purificada (es decir, como la molécula de toxina botulinum de aproximadamente 150 kiloDaltons). Las composiciones farmacéuticas descritas en este documento, pueden tener un pH de entre aproximadamente 5 y 7.3, cuando se reconstituyen o después de la inyección. La invención puede ser practicada utilizando una composición que comprende una toxina botulinum tipo A. En otras modalidades de la invención, los métodos mencionados anteriormente pueden ser practicados con una composición que comprende, toxina botulinum tipo B. En modalidades adicionales de la invención, los métodos pueden ser practicados con una composición que comprende una pluralidad de serotipos de toxina botulinum, tal como serotipos de toxina botulinum seleccionados del grupo que consiste de toxina botulinum serotipos A, B, Cx, D, E, F y G. En ciertas modalidades de la invención, las toxinas botulinum purificadas, pueden ser usadas. En otras modalidades, las toxinas botulinum modificadas pueden ser usadas. En modalidades de la invención aún adicionales, las composiciones usadas en los métodos mencionados anteriormente, pueden ser administradas intramuscularmente al paciente. En otras modalidades, las composiciones pueden ser administradas subcutáneamente y/o intratecalmente . La invención abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum y una polivinilpirrolidona. La toxina botulinum es una toxina botulinum biológicamente activa y la toxina botulinum se selecciona del grupo que consiste de las toxinas botulinum tipos A, B, C, D, E, F y G. Preferiblemente, la toxina botulinum es una toxina botulinum tipo A. Una función de la polivinilpirrolidona presente en la composición farmacéutica, es estabilizar la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, y entre aproximadamente 5 gramos y aproximadamente 20 gramos de polivinilpirrolidona para cada aproximadamente 100 unidades de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, y una polivinilpirrolidona, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, y una polivinilpirrolidona, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 50% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, y una polivinilpirrolidona, y un disacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, y una polivinilpirrolidona, y un disacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 50% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, y una polivinilpirrolidona, y un disacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 60% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, y una polivinilpirrolidona, y un disacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 70% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, y una polivinilpirrolidona, y un polietilenglicol, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un primer monosacárido, un primer disacárido, un primer trisacárido, y un primer alcohol, elaborado reduciendo el primer monosacárido, y un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consisten de un polietilenglicol, un segundo monosacáridos, un segundo disacárido, un segundo trisacárido, un metal, un segundo alcohol, y un aminoácido, en donde el segundo monosacárido, el segundo disacárido y el segundo trisacárido, son diferentes del primer monosacárido respectivamente, el primer disacárido y el primer trisacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, un polietilenglicol, y un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 20% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.

La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, un polietilenglicol, y un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 30% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, un polietilenglicol, y un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, un polietilenglicol, y un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 50% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, un polietilenglicol, y un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 60% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum. La invención también abarca una composición farmacéutica que comprende (o que consiste de o consiste esencialmente de) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, un polietilenglicol, y un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 70% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.

La presente invención se basa en el descubrimiento que la composición farmacéutica de toxina clostridial, con una toxina clostridial estabilizada, puede ser elaborada usando un excipiente sin proteína como el estabilizador primario de la toxina clostridial. Se ha descubierto que un reemplazo adecuado para un excipiente de proteína tal como albúmina o gelatina en una composición farmacéutica de toxina clostridial, puede ser un compuesto sin proteína. El excipiente sin proteína usado en la presente invención, puede impartir estabilidad a un ingrediente activo de neurotoxina, tal como una toxina botulinum, presente en la composición farmacéutica mediante: (1) reducir la adhesión (comúnmente referida como "pegajosidad") de la toxina botulinum a las superficies, tales como las superficies de los vidrios de laboratorio, vasos de precipitado, los viales en los cuales la composición farmacéutica es reconstituida y la superficie interior de la jeringa usada para inyectar la composición farmacéutica. La adhesión de la toxina botulinum a superficies, puede conducir a pérdida de toxina botulinum y a desnaturalización de la toxina botulinum retenida, ambas de las cuales reducen la toxicidad de la toxina botulinum presente en la composición farmacéutica. (2) reducir la desnaturalización de la toxina botulinum y/o disociación de la toxina botulinum de otras proteínas no toxinas presentes en el complejo de toxina botulinum, en el cual, pueden ocurrir las actividades de desnaturalización y/o disociación, debido a la baja dilución de la toxina botulinum presente en la composición farmacéutica (es decir, antes de la liofilización o secado a vacío) y en la composición farmacéutica reconstituida. (3) reducir la pérdida de toxina botulinum (es decir, debido a la desnaturalización o disociación de proteínas no toxinas en el complejo) , durante los cambios considerables de pH y concentración, los cuales toman lugar durante la preparación, procesamiento y reconstitución de la composición farmacéutica . Los tres tipos de estabilizaciones de toxina botulinum proporcionados por los estabilizadores sin proteína descritos en este documento, conservan y preservan la toxina botulinum con toxicidad nativa, antes de la inyección de la composición farmacéutica. En ciertas modalidades de la invención, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender una pluralidad de serotipos de toxina botulinum. En otras palabras, la composición puede incluir dos o más serotipos de toxinas botulinum diferentes. Por ejemplo, una composición puede incluir toxina botulinum serotipos A y B. En otra modalidad, una composición puede incluir toxina botulinum serotipos A y E. Usando una combinación de serotipos de toxina botulinum, se permitirán a los cuidadores, personalizar la composición para lograr un efecto deseado basado en la condición a ser tratada. En una modalidad adicional de la invención, la composición puede comprender una toxina botulinum modificada. La toxina botulinum modificada preferiblemente, inhibirá la liberación del neurotransmisor de una neurona, pero puede tener mayor o inferior potencia que la toxina botulinum nativa, o puede tener un efecto biológico mayor o menor que la toxina botulinum nativa. Debido a que las composiciones de la invención pueden ser usadas para el tratamiento relativamente prolongado de animales, las composiciones pueden ser proporcionadas en una forma relativamente pura. En una modalidad, las composiciones son de un grado farmacéutico. En ciertas modalidades, la neurotoxina clostridial tiene una pureza mayor de 95%. En modalidades adicionales, la neurotoxina clostridial tiene una pureza mayor de 99%. La invención también abarca la adición de un preservativo, ya sea en el diluyente o la formulación misma, para permitir el almacenamiento prolongado. Un preservativo preferido es salina preservada que contiene alcohol bencílico . Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administradas usando modos convencionales de administración. En modalidades preferidas de la invención, las composiciones son administradas subcutáneamente o intramuscularmente al sujeto. En otras modalidades, las composiciones de la invención pueden ser administradas intratecalmente . Además, las composiciones de la invención pueden ser administradas con uno o más agentes analgésicos o anestésicos . El modo más efectivo de administración y régimen de dosificación para las composiciones de esta invención, depende del tipo, severidad y curso de la condición a ser tratadas, la salud del animal y la respuesta al tratamiento, y el juicio del doctor que trata. Por consiguiente, los métodos y dosificaciones de las composiciones, deben ser ajustados al sujeto individual. Por medio del ejemplo y no por medio de limitación, puede ser preferido administrar la composición de la invención intramuscularmente para reducir un espasmo muscular . La invención también puede abarcar una composición farmacéutica que comprende una toxina botulinum y un colágeno, para uso para tratar una variedad de condiciones en donde la toxina botulinum actúa para paralizar un músculo y el colágeno actúa para proporcionar un rellenador dérmico. Las composiciones que contienen otros serotipos de toxina botulinum, pueden contener diferentes dosificaciones de toxina botulinum. Por ejemplo, la toxina botulinum tipo B, puede ser proporcionada en una composición a una dosis mayor que una composición que contiene la toxina botulinum tipo A. En una modalidad de la invención, la toxina botulinum tipo B, puede ser administrada en una cantidad de entre aproximadamente 1 U/kg y 150 U/kg. La toxina botulinum tipo B, también puede ser administrada en cantidades de hasta 20,000 U (unidades de ratón, como se describe anteriormente) . En otra modalidad de la invención, la toxina botulinum tipos E o F, puede ser administrada a concentraciones de entre aproximadamente 0.1 U/kg y 150 U/kg. Además, en composiciones que contienen más de un tipo de toxina botulinum, cada tipo de toxina botulinum puede ser proporcionado en una dosis relativamente más pequeña que la dosis típicamente usada para un serotipo de toxina botulinum único. La combinación de serotipos de toxina botulinum puede entonces, proporcionar un grado adecuado y duración de parálisis con un incremento en la difusión de las neurotoxinas (por ejemplo, véase la Patente Estadounidense No. 6,087,327).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN EJEMPLOS Los siguientes ejemplos exponen modalidades específicas de la presente invención y no están propuestos para limitar el alcance de la invención. En los ejemplos siguientes, se usó el ensayo de dosis5o letal (el "ensayo MLD50") , para determinar la potencia de la toxina botulinum. Dependiendo de las circunstancias, "potencia", puede significar la potencia recuperada de la toxina botulinum o la potencia de la toxina botulinum antes de la liofilización. La potencia recuperada es sinónima con la potencia de reconstitución, potencia de recuperación y con potencia después de la reconstitución. El ensayo MLD50, proporciona una determinación de la potencia de una toxina botulinum en términos de su dosis letal al 50% en ratón o "LD50". De este modo, una unidad (U) de una toxina botulinum, se define como la cantidad de toxina botulinum la cual, después de la inyección intraperitoneal, elimina 50% (es decir, un LD50) de un grupo de ratones hembra Swiss Weber que pesan 17-22 gramos cada uno al inicio del ensayo. El ensayo MLD50, es un método validado para medir la potencia de una toxina botulinum reconstituida o de una formulación de toxina botulinum reconstituida. Cada ratón es mantenido en una posición supino con su cabeza colocada hacia abajo y es inyectado intraperitonealmente en el abdomen derecho inferior a un ángulo de aproximadamente 30 grados usando una aguja de calibre 25 a 27 3/8" a 5/8", con una de varias diluciones seriales de la toxina botulinum en salina normal. Se registró las proporciones de muerte durante las siguientes 72 horas para cada dilución. Se prepararon un mínimo de seis diluciones a intervalos de 1.33 dosis y se usaron típicamente, diez animales en cada grupo dosificado (60 ratones empleados por lo tanto) . Se llevaron a cabo concurrentemente, diez ensayos de referencia estándar (se emplearon 60 ratones adicionales). Las diluciones se prepararon de manera que la mayoría de la dilución concentrada produce una proporción de muerte de al menos, 80% del ratón inyectado, y al menos, la dilución de concentración produce una proporción de muerte no mayor del 20% de los ratones inyectados. Debe haber un mínimo de cuatro diluciones que caen dentro del intervalo de reducción monótono de las proporciones de muerte. El intervalo de reducción monótono, comienza con una proporción de muerte de no menos de 80%. Dentro de las cuatro o más proporciones de reducción monótonas, las dos proporciones más grandes y las dos más pequeñas deben ser reducidas (es decir, sin equivalentes). La dilución en la cual el 50% de los ratones mueren dentro de los tres días del periodo de observación posterior a la inyección, es definido como una dilución la cual comprende una unidad (1U) de la toxina botulinum. Un ensayo MLD50 refinado, ha sido desarrollado, el cual usa algunas (cinco en lugar de seis) diluciones a intervalos de dosis 1.15 y algunos ratones (seis en lugar de diez) por dilución probada.

Ejemplo 1 Composición Farmacéutica de Toxina Botulinum que Contiene Albúmina de Suero Humano (Técnica Anterior) Se obtuvo un complejo de toxina botulinum tipo A, a partir de un cultivo de la cepa Hall de Clostridi um botulinum que crece en un medio que contiene amina N-Z y extracto de levadura. El complejo de toxina botulinum tipo A, se purificó de la solución de cultivo por una serie de precipitaciones de ácido a un complejo cristalino que consiste de la proteína de toxina de alto peso molecular, activa y una proteína hemaglutinina asociada. El complejo cristalino fue entonces redisuelto en una solución que contiene salina y albúmina y se filtró estéril (0.2 micrones) antes del secado a vacío. La composición de secado a vacío se reconstituyó con salina no preservada, estéril, previo a la inyección. Cada vial de la composición secada a vacío, contiene aproximadamente 100 unidades (U) de complejo de toxina Clostridi um botulinum tipo A, 0.5 miligramos de albúmina de suero humano y 0.9 miligramos de cloruro de sodio en una forma secada a vacío, estéril, sin un preservativo. La composición farmacéutica se vende comercialmente bajo el nombre comercial BOTOX® en viales de 100 unidades para reconstitución con salina antes de la inyección.

Ejemplo 2 Formulaciones de Toxina Botulinum Estabilizadas Sin Proteína Se llevaron a cabo experimentos para preparar formulaciones múltiples de toxina botulinum con uno o más excipientes estabilizantes sin proteína. Todas las formulaciones se formaron en compuestos, liofilizaron, reconstituyeron y valoraron en potencia de la misma manera y con el mismo tipo de toxina botulinum usada en cada formulación, esperando que cada formulación sea preparada con un excipiente o excipientes diferentes sin proteína, o con una cantidad diferente del excipiente sin proteína o de los excipientes sin proteína presentes en la formulación de toxina botulinum. Los excipientes sin proteína usados (separadamente o en combinación) en las formulaciones elaboradas en estos experimentos incluyen: una polivinilpirrolidona (también llamada povidona, tal como Kollidon 17); varios disacáridos (tales como lactosa y trehalosa) ; un trisacárido (tal como rafinosa); un polisacárido (tal como inulina); un alcohol (tal como alcohol elaborado reduciendo un monosacárido [tal como fructuosa] o tal como manitol); un metal (tal como zinc); un aminoácido (tal como glicina), y; un polietilenglicol (tal como poloxámero 188 y/o PEG 3350). Puesto que una proteína es un poliaminoácido, el uso de uno o más aminoácidos únicos en las formulaciones expuestas en este documento, no proporciona un excipiente de proteína en estas formulaciones . Las formulaciones descritas en este Ejemplo, se elaboraron primero agregando la cantidad indicada del excipiente (s ) sin proteína al agua estéril para inyección, para formar una solución. Después, entre 100 a 200 unidades de un complejo de toxina botulinum tipo A (obtenido por fermentación anaeróbica de la cepa Hall de Clostridi um botulinum seguido por purificación de la toxina botulinum liberada en y removida del medio de fermentación. Véase por ejemplo, el Ejemplo 1 anterior y Schantz E.J. et al., Properties and use of botulinum toxin and other microbial neurotoxins in medicine, Microbiol Rev 1992 Mar; 56 (1) : 80-99) , se agregó a la solución, para con ello, formar una formulación de toxina botulinum, la cual puede ser sinónimamente referida como una composición farmacéutica de toxina botulinum, o simplemente como una formulación. La potencia antes de la liofilización de la toxina botulinum usada, se determino por el ensayo LD50 de ratón antes de la adición de la toxina botulinum a la solución, y fue entre aproximadamente 100 unidades y aproximadamente 200 unidades. Las formulaciones fueron entonces liofilizadas (o secadas por congelamiento o secadas por vacío) , seguidas por reconstitución con salina normal. La potencia recuperada de la toxina botulinum presente en la formulación reconstituida, se determinó por aplicación del mismo ensayo LD50 de ratón. El "% de recuperación" en las Tablas 1 a 5, es la potencia de la toxina botulinum después de la reconstitución (por lo tanto, "potencia recuperada") , expresada como un porcentaje de la potencia de la toxina botulinum antes de la liofilización de la formulación. D este modo, por ejemplo, un % de recuperación de 60%, significa que la potencia de la toxina botulinum después de la reconstitución, fue 60% de la potencia de la toxina botulinum antes de la liofilización. La potencia recuperada teórica máxima es 100%. Los valores de % de recuperación, se obtuvieron por reconstitución directa después que la formulación se liofilizó. Las tablas 1 a 6 presentan los resultados de los experimentos llevados a cabo en este Ejemplo, en donde las formulaciones se hacen como se muestra abajo.

Tabla 1. Formulaciones de Toxina Botulinum con un Excipiente sin Proteina Único y Potencia no Recuperada Excipiente Cantidad (mg) % de recuperación 1 Kollidon 17 0 5 0 2 Kolhdon 17 50 0 3 Kollidon 17 100 0 4 Kollidon 17 250 0 5 Lactosa 5 0 6 Sacarosa 5 0 7 Sacarosa 10 0 8 Sacarosa 50 0 9 Sacarosa 100 0 10 Sacarosa 250 0 1 1 Glicina 5 0 12 Glicina 10 0 13 Glicina 50 0 14 ZnCl 0 1 0 15 ZnCl 0 01 0 16 ZnCl 0 001 0 17 Manitol 5 0 18 Manitol 10 0 19 Manitol 50 0 20 Inulina 5 0 21 Inulina 10 0 22 Inulina 50 0 23 Trehalosa 5 0 24 Trehalosa 10 0 25 Trehalosa 50 0 26 Rafinosa 5 0 27 Rafinosa 10 0 28 Rafinosa 50 0 29 PEG 3350 50 0 30 Poloxamero 188 50 0 Tabla 2. Formulaciones de Toxina Botulinum con un Excipiente sin Proteína Único y una Potencia Recuperada Excipiente Cantidad (mg) % de Recuperación 1. Kollidon 17 5 48 2. Kolhdon l7 10 52 3. Kolhdon l7 20 39 4. Lactosa 10 15 5. Lactosa 50 35 Tabla 3. Formulaciones de Toxina Botulinum con Dos Excipientes sin Proteína y Potencia no Recuperada Excipiente Excipiente 2 Cantidad 1 Cantidad 2 % de 1 (mg) (mg) Recuperación l . Kolhdon 17 Lactosa 0.5 0.5 0 2. Kollidon 17 Lactosa 50 0.5 0 3. Kollidon 17 Lactosa 100 5 0 4. Koll?don l7 Sacarosa 0.5 0.5 0 5. Kolhdon 17 Sacarosa 50 0.5 0 6. Kol don 17 Sacarosa 0.5 5 0 7 Kol don 17 Sacarosa 100 5 0 8. Sacarosa ZnCl 50 0.000005 0 9. Manitol ZnCl 50 0.000005 0 10. Mam tol PEG 3350 5 50 0 1 1. Manitol Sacarosa 50 5 0 12. Manitol Sacarosa 5 50 0 13. Mam tol ZnCl 50 1 0 14. Manitol ZnCl 50 0.1 0 15. Manitol ZnCl 5 1 0 16. Manitol Trehalosa 50 50 0 17. Mam tol Trehalosa 50 5 0 18. Mam tol Trehalosa 5 50 0 19. Sacarosa Glicina 50 50 0 20. Sacarosa Glicina 50 5 0 21. Sacarosa Glicina 5 50 0 22. Sacarosa ZnCl 50 1 0 23. Sacarosa ZnCl 50 0.1 0 24. Sacarosa ZnCl 5 1 0 25. Sacarosa Trehalosa 50 50 0 26. Sacarosa Trehalosa 50 5 0 27. Sacarosa Trehalosa 5 50 0 Excipiente Excipiente 2 Cantidad 1 Cantidad 2 % de 1 (mg) (mg) Recuperación 28. ZnCl Glicina 1 50 0 29. ZnCl Glicina 1 5 0 30. ZnCl Glicina 0.1 50 0 31. Poloxámero 188 ZnCl 50 1 0 32.Poloxámero 18? ZnCl 5 1 0 33. Trehalosa ZnCl 50 1 0 34. Trehalosa ZnCl 5 1 0 35 Trehalosa ZnCl 50 0.1 0 36. PEG 3350 ZnCl 50 1 0 37 PEG 3350 ZnCl 50 0 1 0 38 Poloxámero 188 Glicina 5 50 0 39.Poloxámero 188 PEG 3350 50 50 0 40 Poloxámero 188 PEG 3350 50 5 0 41.Poloxámero 188 PEG 3350 5 50 0 42. Trehalosa Glicina 50 50 0 43. Trehalosa Glicina 50 5 0 44 Trehalosa Glicina 5 50 0 45. Trehalosa PEG 3350 50 50 0 46. PEG 3350 Glicina 50 50 0 47. PEG 3350 Glicina 50 5 0 48. PEG 3350 glicina 5 50 0 Tabla 4. Formulación de Toxina Botulinum con Dos Excipientes si Proteína y una Potencia de recuperación Excipiente Excipiente 2 Cantidad 1 (mg) Cantidad 2 (mg) % de 1 recuperación 1 Kolhdon 17 Lactosa 5 0.5 65 2 Kol don 17 Lactosa 10 0.5 47 3. Kol don 17 Lactosa 20 0.5 65 4. Kolhdon l 7 Lactosa 0.5 5 52 . Kolhdon 17 Lactosa 5 5 57 6. Kolhdon l 7 Lactosa 10 5 65 7. Kol don 17 Lactosa 20 5 49 8 Kol don 17 Lactosa 50 5 52 9 Kollidon 17 Sacarosa 5 0.5 58 . Kolhdon l 7 Sacarosa 10 0.5 46 l l . Kol don 17 Sacarosa 20 0.5 49 12. Kolhdon l 7 Sacarosa 5 5 49 13. Kol don 17 Sacarosa 10 5 58 14. Kolhdon 17 Sacarosa 20 5 47 . Kolhdon 17 Sacarosa 50 5 39 16. Kolhdon l 7 Sacarosa 250 250 39 17. Kol don 17 Sacarosa 10 250 58 18. Kolhdon 17 PEG 3350 50 50 35 Excipiente Excipiente 2 Cantidad 1 Cantidad 2 % de 1 (mg) (mg) Recuperación 19. Lactosa PEG 3350 50 50 53 Lactosa Sacarosa 50 50 27 21. Lactosa ZnCl 50 0.000005 19 22 Lactosa Manitol 50 50 23 23. Sacarosa Manitol 50 50 24 24. Manitol PEG 3350 50 50 26 . Manitol PEG 3350 50 5 30 26. Mamtol Sacarosa 50 50 29 27. Manitol Poloxámero 188 50 50 33 28. Manitol Poloxámero 188 50 5 35 29. Mamtol Poloxámero 188 5 50 30 . Sacarosa Poloxámero 188 50 50 59 31. Sacarosa Poloxámero 188 50 5 43 32. Sacarosa Poloxámero 188 5 50 55 33. Sacarosa PEG 3350 50 50 44 34. Sacarosa PEG 3350 50 5 41 . Sacarosa PEG 3350 5 50 35 36. Poloxámero 188 ZnCl 50 0.1 38 37. PEG 3350 ZnCl 5 1 23 38. Poloxámero 188 Glicina 50 50 26 39.Poloxámero 188 Glicina 50 5 33 40.Poloxámero 188 Trehalosa 50 50 53 41.Poloxámero 188 Trehalosa 50 5 75 42 Poloxámero 188 trehalosa 5 50 50 43. Trehalosa PEG 3350 50 5 41 44 Trehalosa PEG 3350 5 50 36 La tabla 5 muestra los resultados de experimentos sin formulaciones de toxina botulinum que contiene dos excipientes sin proteína y con o sin el amortiguador especificado. La potencia de la toxina botulinum se midió: () después de liofilización y reconstitución inmediata ("Potencia Inicial"), y; (2) después de liofilización, almacenaje por tres meses bajo una de dos diferentes condiciones de almacenaje (a -40 grados C o a 20 grados C) y reconstitución . La tabla 5 muestra resultados de una composición farmacéutica de toxina botulinum, que contiene un excipiente sin proteína PVO, no tiene estabilidad significante a temperatura ambiente, a menos que se formule con un amortiguador de citrato. Se encontró que aún al mismo pH, un amortiguador de fosfato no proporcionará la estabilidad deseada a temperatura ambiente para tal formulación.

Tabla 5 Formulaciones de Toxina Botulinum con Dos Excipientes sin proteína La tabla 6 muestra los resultados de experimentos con formulaciones de toxina botulinum que contienen tres excipientes no se proteína y con o sin el amortiguador especificado. La potencia de toxina botulinum se midió después de la liofilización, seguido por reconstitución inmediata ("Potencia Inicial").

La tabla 6 muestra resultados que una composición farmacéutica de toxina botulinum pueda ser estabilizada por uso de tres excipientes sin proteína presente en la misma formulación, y que el uso de un amortiguador de citrato en la formulación, en la formulación mejora la potencia inicial. Las composiciones farmacéuticas de toxina botulinum estabilizadas con otros tres diferentes excipientes sin proteína, y con potencia recuperada significante, también se elabora .

Tabla 6. Formulaciones de Toxina Botulinum con Tres Excipientes sin proteína Entre los descubrimientos hechos a partir de estos experimentos, son los siguientes: 1. una formulación de toxina botulinum preparada con concentraciones particulares de un excipiente sin proteína único, el cual es una polivinilpirrolidona (tal como Kollidon 17) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 1-4 de la tabla 1) . 2. una formulación de toxina botulinum preparada con diferentes concentraciones particulares de un excipiente sin proteína único, el cual es una polivinilpirrolidona (tal como Kollidon 17) puede mostrar potencia recuperada entre 39% y 52% (véase líneas 1-3 de la tabla 2) . En vista del punto 1, anterior a esto es un descubrimiento sorprendente e inesperado . 3. una formulación de toxina botulinum preparada con dos diferentes excipientes sin proteína, en donde uno de los excipientes sin proteína es una polivinilpirrolidona (tal como Kollidon 17) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 1-7 de la tabla 3) . 4. una formulación de toxina botulinum preparada con dos diferentes excipientes sin proteína, en donde uno de los excipientes sin proteína es una polivinilpirrolidona (tal como Kollidon 17) puede mostrar potencia recuperada tan grande como 65% (véase líneas 1-18 de la tabla 4) . En vista de los puntos 1 y 3, anterior a esto es un descubrimiento sorprendente e inesperado. 5. una formulación de toxina botulinum preparada con una concentración particular de un excipiente sin proteína único, el cual es un disacárido (tal como lactosa) puede no mostrar potencia recuperada (véase línea 5 de la tabla 1) . 6. una formulación de toxina botulinum preparada con diferentes concentraciones particulares de un excipiente sin proteína único, el cual es un disacárido (tal como lactosa) puede mostrar potencia recuperada entre 15% y 35% (véase línea 4-5 de la tabla 2) . En vista del punto 5, antes de esto es un descubrimiento sorprendente e inesperado. 7. una formulación de toxina botulinum preparada con diferentes concentraciones particulares de un excipiente sin proteína único, el cual es un disacárido (tal como lactosa) puede mostrar potencia recuperada (véase líneas 1-3 de la tabla 3) . 8. una formulación de toxina botulinum preparada con dos diferentes excipiente sin proteína, en donde uno de los excipiente sin proteína es un disacárido (tal como lactosa) puede mostrar potencia recuperada tan alta como 65% (véase líneas 1-8 y 19-22 de la Tabla 4) . En vista de los puntos 5 y 7, anterior a esto es un descubrimiento sorprendente e inesperado . 9. una formulación de toxina botulinum preparada con un excipiente sin proteína único, el cual es un disacárido (tal como sacarosa) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 6-10 de la Tabla 1) . 10. una formulación de toxina botulinum preparada con dos excipientes sin proteína, en donde los excipientes sin proteína un disacárido (tal como sacarosa) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 4-8, 11-12 y 19-27 de la Tabla 3) . 11. una formulación de toxina botulinum preparada con dos diferentes excipientes sin proteína, en donde una de los excipientes sin proteína es un disacárido (tal como sacarosa) puede mostrar una potencia recuperada tan grande como 59% (véase líneas 9-17, 20, 23, 26 y 30-35 de la Tabla 4) . En vista de los punto 9 y 10, antes que este sea un descubrimiento sorprendente e inesperado. 12. una formulación de toxina botulinum preparada con un excipiente sin proteína único, el cual es un aminoácido (tal como glicina) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 11-13 de la Tabla 1) . 13. una formulación de toxina botulinum preparada con dos diferentes excipientes sin proteína, en donde uno de los excipientes sin proteína es un aminoácido (tal como glicina) puede mostrar potencia recuperada (véase líneas 19-21, 28-30, 38, 42-44 y 46-48 de la Tabla 3) . 14. una formulación de toxina botulinum preparada con concentraciones diferentes de dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes no se proteína es un aminoácido (tal como glicina) puede mostrar una potencia recuperada tal grande como 33% (véase líneas 38-39 de la Tabla 4) . En vista los puntos 12-13 antes que este sea un descubrimiento sorprendente e inesperado. . una formulación de toxina botulinum preparada con un excipiente sin proteína único, el cual es un metal (tal como zinc) puede no mostrar potencia recuperada) véase líneas 14-16 de la Tabla 1) . 16. una formulación de toxina botulinum preparada con dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes sin proteína es un metal (tal como zinc) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 8-9, 13-15, 22-24 y 28-37 de la tabla 3) . 17. una formulación de toxina botulinum preparada con concentraciones particulares diferentes de dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes sin proteína es un metal (tal como zinc) puede mostrar una potencia recuperada tan grande como 38% (véase líneas 21 y 36-37 de la Tabla 4) . En vista de los puntos 15-16 antes que este sea un descubrimiento sorprendente e inesperado . 18. una formulación de toxina botulinum preparada con un excipiente sin proteína única, la cual es un alcohol (tal como manitol) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 17-19 de la Tabla 1). 19. una formulación de toxina botulinum preparada con dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes sin proteína es un alcohol (tal como manitol) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 9-18 de la Tabla 3) . 20. una formulación de toxina botulinum preparada con concentraciones diferentes de dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes sin proteína es un alcohol (tal como manitol) puede mostrar una potencia recuperada como tal grande como 35% (véase líneas 22-29 de la Tabla 4) . En vista de los puntos 17-18 antes que este sea un descubrimiento sorprendente e inesperado. 21. una formulación de toxina botulinum preparada con un excipiente sin proteína único, el cual es un disacárido (tal como trehalosa) puede no mostrar potencia recuperada) véase líneas 23-25 de la Tabla 1) . 22. una formulación de toxina botulinum preparada con dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes sin proteína es un disacárido (tal como trehalosa) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 16-18, 25-27, 33-35 y 42-45 de la Tabla 3) . 23. una formulación de toxina botulinum preparada con concentraciones particulares diferentes de dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes sin proteína es un disacárido (tal como trehalosa) puede mostrar una potencia recuperada tan grande como 75% (véase líneas 40-44 de la Tabla 4). En vista de los puntos 21-22 antes que este sea un descubrimiento sorprendente e inesperado. 24. una formulación de toxina botulinum preparada con un excipiente sin proteína único, el cual es un polietilen glicol (tal como PEG 3350 o poloxámero 188) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 29-30 de la Tabla 1) . 25. una formulación de toxina botulinum preparada con dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes sin proteína es un polietilen glicol (tal como PEG 3350 o poloxámero 188) puede no mostrar potencia recuperada (véase líneas 10, 31-32, 36-41 y 45-48 de la Tabla 3) . 26. una formulación de toxina botulinum preparada con concentraciones particulares diferentes de dos excipientes sin proteína diferentes, en donde uno de los excipientes sin proteína es un polietilen glicol (tal como PEG 3350 o poloxámero 188) puede mostrar una potencia recuperada tan grande como 75% (véase líneas 18-19, 24-25, 27-44 de la Tabla 4) . En vista de los puntos 24-25, antes que este sea un descubrimiento sorprendente e inesperado. 27. La lactosa estabilizadora sin proteína y polivinilpirrolidona ("PVP") (es decir Kollidon 17) cada una proporciona potencia recuperada significante cuando se usa como un estabilizador sin proteína de la toxina botulinum presente en una composición farmacéutica de toxina botulinum (véase Tabla 2) . 28. Cuando la lactosa y PVP usadas, ambas son usadas como estabilizadores sin proteína de la misma composición farmacéutica de toxina botulinum, se mejora la potencia recuperada, comparado a la potencia recuperada observada cuando la lactosa y PVP se usan separadamente como un estabilizador sin proteína (véase, por ejemplo, Tabla 4, líneas 1-8) . 29. Potencia recuperada (de la toxina botulinum presente en una composición farmacéutica de toxina botulinum reconstituida) mejorada cuando se usan lactosa y/o PVP con uno o más de los otros excipientes sin proteína mostrados anteriormente (véase, respectivamente, Tabla 4, líneas 19-22 y Tabla 4, líneas 9-18) . 30. Uso de ciertas combinaciones de excipientes (como estabilizadores sin proteína de la toxina botulinum presente en una composición farmacéutica de toxina botulinum reconstituida) proporciona una potencia recuperada significante, aún en donde no se obtiene la potencia recuperada, cuando ya sea tal excipiente no se proteína se usa por si mismo como un estabilizador sin proteína de la toxina botulinum presente en una composición farmacéutica de toxina botulinum. Por ejemplo, se compara: (1) Tabla 1, líneas 1-4 y Tabla 1, líneas 6-10, con la Tabla 4, líneas 9-17, y; (2) Tabla 1, línea 23-25 y Tabla 1, línea 29, con Tabla 4, 43-44. 31. Potencia recuperada es algunas veces dependiente de la concentración del estabilizador sin proteína presente en la composición farmacéutica de toxina botulinum. 32. Además a un amortiguador, puede mejorar la potencia recuperada y estabilidad de almacenaje. Amortiguadores individuales difieren en su capacidad para ejercer este efecto. Los amortiguadores actúan para obtener pH óptimo, mantener pH óptimo y en algunos casos (por ejemplo, citrato) para proteger contra la oxidación. Conclusiones generales para estos experimentos, incluyen las observaciones que: (a) La toxina botulinum presente en una composición farmacéutica de toxina botulinum puede ser estabilizada (y mostrada por una buena potencia recuperada) formulando la composición con dos o más excipientes sin proteína comunes. (b) una polivinilpirrolidona (tal como Kollidon 17) y un disacárido (tal como lactosa) puede funcionar como un estabilizador sin proteína (excipiente) en una formulación de toxina botulinum, sin la presencia de cualquier otro estabilizador sin proteína. (c) con el mismo estabilizador o estabilizadores sin proteína, la potencia recuperada pude depender en la proporción de y/o la concentración del estabilizador o estabilizadores sin proteína usados en la formulación de toxina botulinum. (d) ciertos estabilizadores sin proteína (tal como una polivinilpirrolidona [tal como Kollidon 17] y un disacárido [tal como lactosa] no únicamente pueden actuar para estabilizar la toxina botulinum en una formulación de toxina botulinum, cuando se usan juntas, pero puede proporcionar una estabilización mejorada cuando se usan juntas, como se determinó por una potencia recuperada mayor de la formulación reconstituida. (e) excipientes farmacéuticos comúnmente usados (tales como polivinilpirrolidona, lactosa, sacarosa, etc.) no funcionan cuando se usan como estabilizadores, o únicamente funcionan como un estabilizador de una toxina botulinum en una formulación de toxina botulinum sin proteína cuando se usa en concentraciones particulares, una polivinilpirrolidona (tal como Kollidon 17) y un disacárido (tal como lactosa) . (f) Muchos excipientes funcionan o funcionan como mejores estabilizadores de una toxina botulinum en una formulación de toxina botulinum sin proteína, cuando se combina con una polivinilpirrolidona (tal como Kollidon 17) o con un disacárido (tal como lactosa) . (g) A pesar que se usó "Kollodin 17" PVP específico en un número de formulaciones de toxina botulinum, hacen otros PVP están dentro del alcance de la presente invención. (h) A pesar que se usó poloxámero específico "poloxámero 188" en un número de las formulaciones de toxina botulinum, hacen otros poloxámeros están dentro del alcance de la presente invención. (i) se encontró que el polisorbato tensoactivo (Tween) se puede usar en lugar de poloxámero 188 con resultados similares. Otros excipientes sin proteína, los cuales se pueden usar en una composición farmacéutica de toxina botulinum dentro de alcance de la presente invención, incluyen antioxidantes tales como Hidroxitolueno butilado (BHT) e Hidroxianisol butilado (BHA) y aminoácidos tales como cisteína y metionina. La formulación de toxina botulinum liofilizada puede ser reconstituida con salina, agua o con un diluyente habitual, para afectar el desempeño después de la reconstitución o inyección.

Ejemplo 3 Uso de una Composición Farmacéutica de Toxina Botulinum Un macho de 48 años de edad es diagnosticado con una condición de músculo espástico, tal como distonia cervical. Se inyectaron entre aproximadamente 10-3 U/kg y aproximadamente 35 U/kg de una composición farmacéutica tipo A de toxina botulinum, de una formulación que contiene lactosa y PVP en el paciente. Dentro de 1-7 días, los síntomas de la condición del músculo espático son aliviados y el alivio de los síntomas persistentes por al menos aproximadamente 2 meses hasta aproximadamente 6 meses. Una composición farmacéutica de conformidad con la invención descrita en este documento, tiene muchas ventajas, incluyendo lo siguiente: 1. la composición farmacéutica puede ser preparada libre de cualquier producto sanguíneo, tal como albúmina y por lo tanto libre de cualquier elemento infeccioso de producto sanguíneo tal como un prion. 2. la composición farmacéutica tiene estabilidad y % alto de recuperación de potencia de toxina comparable a o superior a lo logrado con las actuales composiciones farmacéuticas disponibles. 3. toxicidad reducida, como se valoró por ya sea administración intramuscular o intravenosa. 4. antigenicidad reducida. Varias publicaciones, patentes y/o referencias se han citado en este documento, los contenidos de estas, se incorporan en sus totalidades en este documento por referencia. A pesar que la presente invención se ha descrito en detalle con respecto a ciertos métodos preferidos, son posibles otras modalidades, versiones y modificaciones dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, una amplia variedad de polisacáridos y aminoácidos establecidos están dentro del alcance de la presente invención. Por lo tanto, el espíritu y alcance de las siguientes reivindicaciones no deben ser limitadas a las descripciones de las modalidades preferidas mostradas anteriormente.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, y; (b) una polivinilpirrolidona.
2. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la toxina botulinum es una toxina botulinum biológicamente activa.
3. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la toxina botulinum se selecciona del grupo que consiste de toxinas botulinum tipos A, B, C, D, E, F y G.
4. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la toxina botulinum es una toxina botulinum tipo A.
5. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque una función de la polivinilpirrolidona es estabilizar la toxina botulinum.
6. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, y; (b) entre aproximadamente 5 gramos y aproximadamente 20 gramos de una polivinilpirrolidona para cada una de aproximadamente 100 unidades de la toxina botulinum.
7. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende: (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, y: (b) una polivinilpirrolidona, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
8. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque la toxina botulinum es una toxina botulinum biológicamente activa.
9. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque la toxina botulinum se selecciona del grupo que consiste de toxinas botulinum tipos A, B, C, D, E, F y G.
10. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque la toxina botulinum es una toxina botulinum tipo A.
11. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque una función de la polivinilpirrolidona es estabilizar la toxina botulinum.
12. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína; y; (b) una polivinilpirrolidona, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 50% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
13. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) una polivinilpirrolidona, y; (c) un disacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
14. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque la toxina botulinum se selecciona del grupo que consiste de toxinas botulinum tipos A, B, C, D, E, F y G.
15. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque la toxina botulinum es una toxina botulinum tipo A.
16. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína; y; (b) una polivinilpirrolidona; y (c) un disacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 50% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
17. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) una polivinilpirrolidona, y; (c) un disacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 60% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
18. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) una polivinilpirrolidona, y; (c) un disacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 70% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
19. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende: (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) una polivinilpirrolidona, y; (c) un polietilenglicol, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
20. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína; (b) un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un primer monosacárido, un primer disacárido, un primer trisacárido y un primer alcohol elaborado reduciendo el primer monosacárido, y; (c) un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un polietilenglicol, un segundo monosacárido, un segundo disacárido, un segundo trisacárido, un metal, un segundo alcohol y un aminoácido, en donde el segundo monosacárido, el segundo disacárido y el segundo trisacárido, son diferentes de respectivamente, el primer monosacárido, el primer disacárido y el primer trisacárido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
21. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) un polietilenglicol, y; (c) un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 20% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
22. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) un polietilenglicol, y; (c) un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 30% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
23. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) un polietilenglicol, y; (c) un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 40% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
24. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende: (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) un polietilenglicol, y; (c) un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 50% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
25. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) un polietilenglicol, y; (c) un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 60% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.
26. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende : (a) una toxina botulinum, en donde la toxina botulinum no es estabilizada por un excipiente de proteína, (b) un polietilenglicol, y; (c) un compuesto seleccionado del grupo de compuestos que consiste de un monosacárido, un disacárido, un trisacárido, un metal, un alcohol, y un aminoácido, en donde la potencia de la toxina botulinum es al menos, aproximadamente 70% de la potencia máxima teórica de la toxina botulinum.