MX2007000920A - Dispositivo de flujo lateral para la deteccion de patogenos grandes. - Google Patents
Dispositivo de flujo lateral para la deteccion de patogenos grandes.Info
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Abstract
Se proporciona un dispositivo de ensayo de flujo lateral para detectar la presencia o la cantidad de un analito que reside en una muestra de prueba en donde el dispositivo de ensayo de flujo lateral tiene una membrana porosa en comunicacion con una almohadilla de conjugado y una almohadilla de transmision. La membrana porosa tiene una zona de deteccion en donde una muestra de prueba es aplicada y la cual tiene un primer reactivo de captura inmobilizado configurado para aglutinar a por lo menos una parte del analito y los complejos de analito-conjugado para generar una senal de deteccion. La zona de control esta localizada hacia debajo de la zona de deteccion de la membrana porosa y tiene un segundo reactivo de captura inmobilizado dentro de la zona de control. La almohadilla de conjugado esta localizada hacia arriba de la zona de deteccion, y tiene sondas de deteccion con miembros de aglutinamiento especificos para el analito. Una zona de liberacion de amortiguador esta localizada hacia arriba de la zona de conjugado y proporciona la adicion de amortiguador al dispositivo. El amortiguador sirve para mover las sondas de deteccion a las zonas de deteccion y de control.
Description
DISPOSITIVO DE FLUJO LATERAL PARA LA DETECCIÓN DE PATÓGENOS GRANDES
Antecedentes de la Invención
El diagnóstico de patógenos grandes es efectuado actualmente mediante examinar muestras bajo un microscopio o mediante cultivar una muestra. La evaluación microscópica requiere de un especialista entrenado y de un instrumento mientras se cultivan muestras generalmente requiere un tiempo de más de 24 horas para obtener resultados.
El flujo a través de ensayos han por lo tanto probado un uso limitado en la detección de patógenos grandes debido al tamaño del patógeno. Por ejemplo, varios procedimientos y dispositivos analíticos son comúnmente empleados en ensayos de flujo lateral para determinar la presencia y/o la concentración de analitos más pequeños que puedan estar presentes en una muestra de prueba. Los inmunoensayos, por ejemplo, utilizan mecanismos de los sistemas inmunes, donde los anticuerpos son producidos en respuesta a la presencia de antígenos que son patogénicos o extraños a los organismos. Estos anticuerpos y los antígenos, por ejemplo, los inmunoreactivos, son capaces de unirse uno con el otro, por lo que causan un mecanismo de reacción altamente específico que puede ser usado para determinar la presencia o la concentración de ese antígeno particular en una muestra biológica. Estos ensayos requieren el movimiento del analito a través del dispositivo, por lo que obstaculizan su utilidad con patógenos, de movilidad inferior, más grandes.
Hay varios métodos de inmunoensayos muy conocidos que usan inmunoreactivos etiquetados con un componente que se detecta para que así el analito pueda ser analíticamente detectado. Por ejemplo, los ensayos de "tipo emparedado" típicamente involucran mezclar la muestra de prueba con sondas que se detectan, tal como un látex teñido o un radioisótopo, y los cuales son conjugados con un miembro aglutinante específico del analito. Las sondas conjugadas forman complejos con el analito. Estos complejos que entonces alcanzan una zona de anticuerpos inmovilizados donde ocurre la aglomeración entre los anticuerpos y el analito para formar "complejos emparedados" ternarios. Los complejos emparedados están localizados en la zona de detección del analito. Esta técnica puede ser usada para obtener resultados cuantitativos o semi-cuantitativos .
Una técnica alterna es el ensayo de "tipo competitivo". En un ensayo de "tipo competitivo", la etiqueta típicamente es un analito etiquetado o un analito análogo que compite por el aglutinamiento de un anticuerpo con cualquier analito sin etiquetar presente en la muestra. Los ensayos competitivos típicamente son usados para la detección de analito tales como los haptenos, cada hapteno es monovalente y capaz de aglutinar solamente una molécula de anticuerpo.
A pesar de los beneficios logrados de estos dispositivos, muchos ensayos de flujo lateral convencionales encuentran inexactitudes significativas cuando son expuestos a concentraciones de analito relativamente superiores y cuando intenten detectar patógenos muy grandes que son difíciles para causar a fluir. Cuando el analito esta presente en concentraciones superiores, por ejemplo, una parte substancial del analito en la muestra de prueba puede no formar complejo con las sondas conjugadas. Por lo tanto, al alcanzar la zona de detección, el analito sin ser complejo, compite con el analito complejo por sitios de aglutinamiento. Debido a que el analito sin complejar no está etiquetado con una sonda, éste no puede ser detectado. Consecuentemente, si un número significativo de los sitios de aglutinamiento se vuelven ocupados por el analito sin acomplejar, el ensayo que puede exhibir un "negativo falso" . Este problema es comúnmente referido como el "efecto de gancho". En el caso de patógenos grandes, como, por ejemplo, el albican Cándida, es posible que el complejo no pueda fluir adecuadamente a la zona de detección en la membrana debido al tamaño del complejo formado.
Sin embargo, todavía existe una necesidad, de una técnica mejorada de reducción el "efecto de gancho" y para detectar patógenos grandes que son difíciles a causar a fluir a través de un dispositivo de flujo lateral.
Síntesis de la Invención
De acuerdo con una incorporación de la presente invención, se describe un dispositivo de ensayo para detectar la presencia o la cantidad de un analito grande que reside en una muestra de prueba. El dispositivo de ensayo comprende una almohadilla conjugada que está en comunicación líquida con una membrana porosa que también está en comunicación con una almohadilla de escurrimiento.
La membrana porosa puede ser hecha de cualquiera de una variedad de materiales a través de los cuales las sondas de detección son capaces de pasar similares, por ejemplo, a la nitrocelulosa. La membrana porosa tiene una zona de detección donde una muestra de prueba es contactada, depositada o aplicada y con la cual es inmovilizada para primero capturar el reactivo. Esta primera captura de reactivo está configurada para aglutinarse a por lo menos una parte del analito y de los complejos conjugados de analito para generar una señal de detección. La primera captura de reactivo puede ser seleccionada del grupo que consiste antígenos, haptenos, proteína A o G, de neutravidina, de avidina, de estreptavidina, de captavidina, y de anticuerpos primarios o secundarios, y los complejos de los mismos. La primera captura de reactivo, puede por ejemplo, se aglutina con los complejos formados entre el analito y las sondas de detección conjugadas.
La zona de control está ubicada corriente abajo en la membrana porosa de la zona de detección. Una segunda captura del reactivo es inmovilizada dentro de la zona de control que está configurada para aglutinarse al conjugado, al complejo analito conjugado o a las sondas puras, para indicar que el ensayo está efectuándose adecuadamente. En una incorporación, la segunda captura de reactivo es seleccionada del grupo que consiste de antígenos, de haptenos, de proteína A o G, de neutravidina, de avidina, de estreptravidina, de captavidina, de anticuerpos primarios y secundarios, y de complejos de los mismos.
La almohadilla conjugada contiene sondas de detección que señalan la presencia del analito. La almohadilla conjugada también puede incluir otras, poblaciones de sondas diferentes, que incluyen las sondas para la indicación de la zona de control. Si se desea, las sondas de detección pueden comprender una sustancia seleccionada del grupo que consiste de cromogenes, de catalizadores, de compuestos luminiscentes (por ejemplo, fluorescentes, fosforescentes, etc.), de compuestos radioactivos, de etiquetas visuales, de liposomas, y de combinaciones de los mismos. El miembro aglutinante específico puede ser seleccionado del grupo que consiste de antígenos, de aptameros, de anticuerpos primarios o secundarios, de biotina, y de combinaciones de los mismos.
En comunicación líquida con el extremo de la almohadilla conjugada lejos de la membrana hay una zona de liberación amortiguadora. Después de que la muestra ha sido depositada en la zona de detección, un amortiguador es liberado de la corriente arriba de la almohadilla conjugada en la zona de liberación amortiguadora. El amortiguador lava las sondas de la almohadilla conjugada hacia la zona de detección donde las sondas de detección podrán ser capturadas en la zona de detección por el analito, sí están presentes, y ceder un resultado positivo. Si la muestra no contiene analito, la línea de detección podrá ser negativa. El amortiguador, todavía contiene algunas sondas (las cuales pueden incluir sondas diferentes de las sondas de detección) continúa a las zonas de control donde un reactivo captura las sondas conjugadas, el de complejo analito conjugado o puras para indicar que el ensaye está funcionando adecuadamente.
La almohadilla de escurrimiento está en comunicación líquida con la membrana y proporciona una fuerza de impulso para el movimiento del líquido debido a la capilaridad de la almohadilla.
De acuerdo con otra incorporación de la presente invención, se describe un método para detectar la presencia o la cantidad de un analito que reside en una muestra de prueba. El método incluye los pasos de:
i) proporcionar un dispositivo de ensayo de flujo lateral que tiene una membrana porosa en comunicación líquida con una almohadilla conjugada y una almohadilla de escurrimiento, la almohadilla conjugada tiene sondas de detección conjugadas con un miembro aglutinante específico para el analito, la membrana porosa que define una zona de detección en la cual una primera captura de reactivo es inmovilizado y una zona de control dentro de la cual una segunda captura de reactivo es inmovilizado, en donde la zona de control está ubicada corriente abajo de la zona de detección, la almohadilla conjugada está ubicada corriente arriba de la membrana porosa y la zona de liberación amortiguadora esta corriente arriba de la almohadilla conjugada,- ii) contactar la muestra de prueba que contiene el analito con la zona de detección;
iii) liberar un amortiguador en las zonas de liberación amortiguadora para que el amortiguador pueda transportar las sondas de detección a las zonas de detección y de control ;
iv) detectar la señal de detección.
Otras características y aspectos de la presente invención están descritas en mayor detalle abajo.
Breve Descripción de los Dibujos
La figura 1 es una vista en perspectiva de una incorporación de un dispositivo de ensayo de flujo lateral de la presente invención.
Descripción Detallada
Como es usado aquí, el término "analito" generalmente se refiere a una substancia para ser detectada. Por ejemplo, los analitos pueden incluir substancias antigénicas, haptenos, anticuerpos, y las combinaciones de los mismos. Los analitos incluyen, pero no están limitados a, las toxinas, los compuestos orgánicos, las proteínas, los peptidos, los microorganismos, los amino ácidos, los ácidos nucleicos, las hormonas, los esteroides, las vitaminas, las drogas (que incluyen aquellas administradas para propósitos terapéuticos así como aquellas administradas para propósitos ilícitos) , las drogas intermediarias o los productos secundarios, las bacterias, las partículas virus y los metabolítos de o los anticuerpos a cualquiera de las substancias anteriores. Los ejemplos específicos de algunos de analitos incluyen la ferritina; la quinasa de creatinina MB (CK-MB) ; la digoxina; la fenitoina; el fenobarbitol; la carbamazepina; la vancomicina; la theofillina; el ácido valproico; la quinidina; la hormona de luteinizinga (LH) ; la hormona estimulante de folículo (FSH) ; el estradiolo; la progesterona; la proteína C-reactiva; las lipocalinas; los anticuerpos IgE; las citoquinas; la vitamina B2 micro-globulina; la hemoglobulina glicatada (Gly.Hb) ; el cortisol; la digitoxina; la N-acetilprocainamida (NAPA) ; la procainamida; los anticuerpos a la rubéola, tal como la rubéola IgG y la rubéola IgM; los anticuerpos a la toxoplasmosis, tal como la toxoplasmosis IgG (Toxo-IgG) y la Toxo-IgM) ; la testosterona; los salicilatos; el acetaminofeno; el antígeno 'de superficie de virus de hepatitis B (HBsAG) ; los anticuerpos al antígeno de núcleo de hepatitis B, tal como el antígeno de núcleo anti-hepatitis B IgG y el IgM (Anti-HBC) ; el virus de inmunodeficiencia humana 1 y 2 (HIV 1 y 2) ; el virus de leucemia célula-T humana 1 y 2 (HTLV) ; el antígeno de hepatitis Be (HBeAg) ; los anticuerpos al antígeno hepatitis Be (Anti-HBe) ; el virus de la influenza; la hormona que estimula la tiroides (TSH) ; la tiroxina (T4) ; la triiodotironina total (Total T3) ; la triiodotironina libre (Libre T3) ; el antígeno carcinoembriónico (CEA) ; las liporpoteínas, el colesterol, y los triglicéridos; y la alfa fetoproteína (AFP) . Las drogas -de abuso y las substancias controladas incluyen, pero no a tienen intención de estar limitadas a, la anfetamina; la metanfetamina; los barbitúricos, tales como el amobarbital, el secobarbital, el pentobarbital, el fenobarbital, y el barbital; las benzodiazepinas, tales como el librium y el valium; los cannabonoides, tales como el hashish y la mariguana; la cocaína; la fentanila; el LSD; la metaqualona; los opiatos, tales como la heroína, la morfina, la codeina, la hidromorfona, la hidrocodona, la metadona, la oxicodona, la oximorfona y el opio; la fenciclidina; y el propoxiheno. Otros analitos pueden estar descritos en la patente de los Estados Unidos de América No. 6,436,651.
Como es usado aquí, el término "muestra de prueba" generalmente se refiere a un material que se sospecha que contiene el analito. La muestra de prueba puede, por ejemplo, incluir materiales obtenidos directamente de un suministro, así como los materiales previamente tratados que usan técnicas, tales como, pero no limitadas a, la filtración, la precipitación, la dilución, de la destilación, el mezclado, la concentración, la inactivación de componentes que interfieren, la adición de reactivos, y así sucesivamente. La muestra de prueba puede ser derivada de un suministro biológico, tal como un fluido un fisiológico, que incluye, la sangre, el fluido intersticial, la saliva, el fluido de lentes oculares, el fluido espinal cerebral, el sudor, la orina, la leche, el fluido ascitis, la mucosa, el fluido sinovial, el fluido peritoneal, el fluido vaginal, el fluido amniótico o los similares. Además de los fluidos fisiológicos, otras muestras líquidas pueden ser usadas, tales como el agua, los productos alimenticios, y así sucesivamente. Adicionalmente, un material sólido sospechoso de contener el analito también pueden ser usados como muestra de prueba.
En general, la presente invención está dirigida a un dispositivo de ensaye de flujo lateral para detectar la presencia o la cantidad de un analito que reside en una muestra de prueba. Los ensayos conocidos requieren que los patógenos "se muevan desde un punto de deposición hasta un punto donde éstos puedan ser detectados. En vez de mover los patógenos a través de un haría que contienen las sondas de detección y entonces a una zona de detección, sin embargo, la invención instantánea mueve en las sondas, inicialmente ubicadas en una almohadilla conjugada, al patógeno localizado en una zona de detección que tiene un reactivo de captura. Los inventores han descubierto que el permitir a las sondas de detección a moverse a la muestra, en vez de la práctica general de la cual es el reverso, permite la detección de analitos grandes sobre rangos de concentración extendidos en una manera costo efectiva, eficiente, y sencilla. También es apropiado para la detección de patógenos pequeños, particularmente en concentraciones inferiores, y virtualmente elimina el "efecto de gancho" causado por un exceso de analito sin complejar.
El dispositivo utiliza una membrana porosa que tiene una zona de detección y una zona de control. Las zonas de detección y de control tienen reactivos de captura inmovilizados. El dispositivo además usa una zona de liberación amortiguadora en el extremo corriente arriba del dispositivo y una almohadilla conjugada localizada entre la zona de liberación amortiguadora y la membrana porosa. Una almohadilla de escurrimiento está en comunicación líquida y con el extremo opuesto de la membrana porosa en el extremo corriente abajo del dispositivo. En uso, la muestra es aplicada en la zona de detección y después de un periodo de tiempo, el amortiguador es liberado. El amortiguador lava la liberación y opcionalmente otros tipos de sondas, de la almohadilla conjugada a través de la zona de detección, que resulta en una indicación de la presencia de patógenos .
Los patógenos preferidos para el análisis en la presente invención son aquellos que son relativamente grandes, por ejemplo; entre alrededor de 0.03 y 30 mieras en tamaño. Los patógenos grandes son difíciles para detectar usando los dispositivos de flujo lateral actualmente conocidos porque su tamaño los hace difícil a moverse.
Los ejemplos de patógenos apropiados que pueden ser detectados usando la invención incluyen, pero no están limitados cada las bacterias tales como las especies Salmonella, los grupos de menengitidas Neisseria, el pneumoniae Streptococcus, las levaduras tales como la Candida albicans, la Candida tropicalis, los hongos tales como la aspergillua, los virus tales como la influenza haemofilus, el HIV, y las protozoas tales como las Trichomonas y el Plasmodium.
Mientras que son preferidos los patógenos grandes, el ensaye de la presente invención también es apropiado para los patógenos pequeños (analito) , por ejemplo menos de 0.3 mieras en tamaño. Cuando el analito pequeño está presente en una concentración inferior éste también puede ser así disperso o diluido y a cantidad insuficiente para ser notado en la zona de detección de los dispositivos de flujo laterales convencionales. Depositar la muestra de prueba en la zona de detección incrementa la posibilidad de detección de patógenos pequeños, de concentración inferior. Cuando el analito pequeño está presente en una alta concentración, puede ser evitado el "efecto de gancho" común a los ensayos convencionales, como se describe adicionalmente abajo. Adicionalmente, los patógenos pequeños no se mueven también a través de la membrana si la membrana porosa es una con los poros relativamente grandes. Si éste es el caso, los resultados negativos falsos son una vez más posibles debido a la falta de movilidad del patógeno a la zona de detección. La invención instantánea supera estas fallas para detectar patógenos pequeños mediante depositar la muestra de prueba directamente en la zona de detección.
Refiriéndonos a la figura 1, una incorporación .de un dispositivo de ensaye de flujo lateral 20 de puede ser formado con la presente invención ahora podrá ser descrito en mayor detalle. Deberá de notarse que el término "flujo lateral" tiene la intención de ser descriptivo y no limitante, mientras el dispositivo puede ser configurado en otras maneras con el mismo efecto. Los dispositivos de flujo radial o vertical fácilmente pueden ser visualizados, por ejemplo, que emplean el mismo principio como la invención instantánea, sin apartarse del espíritu de la invención. Como se muestra, el dispositivo 20 contiene una membrana porosa 22 opcionalmente sostenida por un material rígido 24. La membrana porosa 22 tiene una zona de detección (o línea) 30. La membrana porosa 22 también tiene una zona de control (o línea) 32.
En general, la membrana porosa 22 puede ser hecha de cualquiera de una variedad de materiales a través de los cuales las sondas de detección son capaces de pasar. Por ejemplo, los materiales usados para formar la membrana porosa 22 pueden incluir, pero no estén limitados a, los material-es naturales, sintéticos, o que ocurren naturalmente que están sintéticamente modificados, tales como los polisacáridos (por ejemplo los materiales de celulosa tales como el papel y los derivados de la celulosa, tales como el acetato de celulosa y la nitrocelulosa) ; la sulfona de poliéter; el polietileno; el nailon; el fluoruro de polivinilideno (PVDF) ; el poliéster; el polipropileno; el sílice; los materiales inorgánicos, tales como la alumina desactivada, la tierra diatomacea, el MgS04, u otro material finamente dividido inorgánico uniformemente disperso en un aglomerante de polímero poroso, con los polímeros tales como el cloruro de vinilo, el copolímero ,de cloruro-propileno de vinilo, y el copolímero de acetato de cloruro-vinilo vinilo; la tela, ambas que ocurren naturalmente
(por ejemplo, algodón) y sintéticas (por ejemplo, el nailon o el rayón) ; los geles porosos, tales como el gel de sílice, la agarosa, el dextrano, y la gelatina; las películas poliméricas, tal como la poliacrilamida; y las similares. En una incorporación particular, la membrana porosa 22 es formada de materiales de nitrocelulosa y/o de sulfona de poliéter. Deberá de ser entendido que el término "nitrocelulosa" se refiere a los esteres de ácido nítrico de celulosa, los cuales pueden ser nitrocelulosas solas, o un éster mezclado de ácido nítrico y otros ácidos, tales como los ácidos carboxilicos alifáticos que tienen desde 1 a 7 átomos de carbono.
El dispositivo 20 también puede contener una almohadilla de escurrimiento 26. La almohadilla de escurrimiento 26 generalmente recibe fluido que ha migrado a través de la membrana porosa 22 completa. Como es muy conocido en el arte, la almohadilla de escurrimiento 26 puede asistir en promover la acción capilar y el flujo de fluido a través de la membrana 22.
El dispositivo 20 tiene una zona de liberación amortiguadora 34. En una incorporación la zona de liberación 34 tiene un reservorio amortiguador 36 dentro del cual puede estar almacenando el amortiguador 38. El amortiguador 38 alternativamente puede ser suministrado por un reservorio separado. El amortiguadora 28 puede ser cualquier líquido que podrá ser transportado lejos de las sondas de detección usadas en la invención. Los ejemplos de amortiguadores apropiados incluyen la solución de salino amortiguado con fosfato (PBS) (pH de 7.2), la solución de salino tris-amortiguado (TBS) (pH de 8.2) o el ácido sulfónico de etano 2- (N-morfolino) (MES) (pH de 5.3).
Una almohadilla conjugada 40 está en comunicación líquida con la zona de liberación amortiguadora 34 y está localizada entre la zona de liberación amortiguadora 34 y la membrana porosa 22 para que el amortiguador 38 se mueva de la zona de liberación amortiguadora 34 esta podrá atravesar la almohadilla conjugada 40 y transportar las sondas a la zona de detección 30 y a la zona de control de 32 en la membrana porosa
22. La almohadilla conjugada 40 está formada de un material a través del cual el amortiguador es capaz de pasar. La almohadilla conjugada 40 puede ser formada de fibras de vidrio, por ejemplo. Aunque solamente una almohadilla conjugada 40 está mostrada, deberá de ser entendido que otras almohadillas conjugadas también pueden ser usadas en la presente invención.
Para iniciar la detección de un analito dentro de la muestra de prueba, un usuario puede directamente aplicar, contratar o depositar la muestra de prueba a la parte de la zona de detección 30 de la membrana porosa 22. En la incorporación ilustrada, la muestra de prueba está colocada en la zona de detección 30. Una vez que la muestra ha contactado la zona de detección 30, el amortiguador 38 es liberado en la zona de liberación amortiguadora 34. El amortiguador 32 puede ser aplicado por medio de un reservorio integral, o mediante un suministro separado tal como mediante una pipeta o cualquier otro medio efectivo conocido por aquellos con habilidad en el arte. El amortiguador 38 se mueve a través de la almohadilla conjugada 40 que está en comunicación líquida con la membrana porosa 22, a la zona de detección 30 y a la zona de control 32.
Una cantidad predeterminada de por lo menos un tipo de sondas de detección son aplicadas a la almohadilla conjugada a fin de facilitar la detección exacta de la presencia o la ausencia de un analito dentro de la muestra de prueba. Cualquier sustancia generalmente capaz de generar una señal que es visualmente detectable o mediante un dispositivo instrumental puede ser usado como sondas de detección. Varias substancias apropiadas pueden incluir cromógenos; catalizadores; compuestos luminiscentes (por ejemplo, fluorescente; fosforescente, etc.); compuestos radiactivos; etiquetas visuales, que incluyen partículas metálicas coloidales (por ejemplo, oro) y no metálicas, las partículas de tinte, las enzimas o los substratos, por las partículas de látex de polímero orgánico; los liposomas u otros versículos que contienen substancias que producen señal; y así sucesivamente. Algunas enzimas apropiadas para uso como sondas de detección están descritas en la patente de los Estados Unidos de América No. 4,275,149. Un ejemplo de un sistema de enzima/substrato es la enzima de fosfato alcalina y el substrato de fosfato de nitro azul tetrazolium-5-bromo-4-cloro-3-indolilo, o un derivado o análogo del mismo, o el substrato 4 -metilumbelliferil-fofato. Otra sondas de detección pueden estar descritas en las patentes de los Estados Unidos de América Nos. 5,670,381 y 5,252,459.
En algunas incorporaciones, las sondas de detección pueden contener un compuesto fluorescente que produce una señal que se detecta. El compuesto fluorescente puede ser una molécula fluorescente, un polímero, un dendrimero, una partícula, y así sucesivamente. Algunos ejemplos de moléculas fluorescentes, por ejemplo, incluyen, pero no están limitadas a la fluoresceina, los quelatos de europium, la ficobiliproteína, la rhodamina y sus derivados y análogos .
Las sondas de detección, tales como las anteriormente descritas, pueden ser usadas solas o en conjunto con una micropartícula (algunas veces referidas como "cuentas" o "microcuentas") . Por ejemplo, pueden ser usadas las micropartículas que ocurren naturalmente, tales como el nucleico, la micoplasma, los plasmidos, los plástidos, las células mamarias (por ejemplo, los fantasmas de eritrocito), los organismos unicelulares (por ejemplo, la bacteria) , los polisacáridos (por ejemplo, la agarosa), y así sucesivamente. Además, también pueden ser utilizadas las micropartículas sintéticas. Por ejemplo, en una incorporación, son utilizadas las micropartículas de látex que están etiquetadas con un tinte fluorescente o coloreado. Aún que cualquier micropartícula de látex puede ser usada en la presente invención, las micropartículas de látex típicamente son formadas de poliestireno, de estirenos de butadieno, de terpolímero de estirenoacrílico, de polimetilmetacrilato, de polietilmetacrilato, de copolímero de anhídrido estireno-maléico, de acetato de polivinilo, de polivinilpiridina, de polivinilbenzeno, de polibutilenotereftalato, de acrilonitrilo, de vinilcloruro-acrilatos, y así sucesivamente, o un aldehido, un carboxilo, un carboxilo, un amino, un hidroxilo, o un derivado de hidrazida del mismo. Otras micropartículas apropiadas pueden estar descritas en las patentes de los Estados Unidos de América Nos. 5,670,381 y 5,252,459. Los ejemplos comercialmente disponible de partículas fluorescentes apropiadas incluyen las microesferas carboxilatadas fluorescentes vendidas por Molecular Probes, Inc. bajo los nombres de marca "FluoSphere" (Rojo 580/605) y "TransfluoSphere" (543/620) , así como el "Rojo Texas" y el 5- y el 6-cerboxitetrametilrhodamina, las cuales también son vendidas por Molecular Probes, Inc.. Adicionalmente, los ejemplos comercialmente disponibles de micropartículas el látex, coloreadas apropiadas incluyen las cuentas de látex carboxilatadas vendidas por Bang's Laboratory, Inc.
Cuando son utilizadas, generalmente pueden variar las formas de las partículas. En una incorporación particular, por ejemplo, las partículas son esféricas en forma. Sin embargo, deberá de ser entendido que otras formas también están contempladas por la presente invención, tales como los platos, las varillas, los discos, las barras, los tubos, las formas irregulares, etc.. Adicionalmente, el tamaño de las partículas también puede variar. Por ejemplo, el tamaño promedio (por ejemplo, el diámetro) de las partículas pueden ser en el rango de alrededor de 0.1 nanómetros hasta alrededor de 1000 mieras, en algunas incorporaciones, desde alrededor de 0.1 nanómetros hasta alrededor de 100 mieras, y en algunas incorporaciones, desde alrededor de 1 nanómetro hasta alrededor de 10 mieras. Por ejemplo, las partículas de "micro-escala" a menudo son deseadas. Cuando son utilizadas, tales partículas de "micro-escala" pueden tener un tamaño promedio de desde alrededor de 1 miera hasta alrededor de 1000 mieras, en algunas incorporaciones desde alrededor de 1 miera hasta alrededor de 100 mieras, y en algunas incorporaciones, desde alrededor de 1 miera hasta alrededor de 10 mieras. De la misma manera, también pueden ser utilizadas las partículas de "nano-escala" . Tales partículas de "nano-escala" pueden tener un tamaño promedio de desde alrededor de 0.1 hasta alrededor de 10 nanómetros, en algunas incorporaciones desde alrededor de 0.1 hasta alrededor de 5 nanómetros, y en algunas incorporaciones, desde alrededor de 1 hasta alrededor de 5 nanómetros .
En algunas instancias, es deseado modificar las sondas de detección en alguna manera para que éstas sean más fácilmente capaces de aglutinarse al analito. En tales instancias, las sondas de detección pueden ser modificadas con ciertos miembros de aglutinamiento específicos que están adheridos a los mismos para formar sondas conjugadas. Los miembros de aglutinamiento específicos generalmente se refieren a un miembro de un aglutinante específico, por ejemplo, dos moléculas diferentes donde una de las moléculas químicamente y/o físicamente se aglutina a la segunda molécula. Por ejemplo, los miembros aglutinantes específicos inmunoreactivos pueden incluir antígenos, haptenos, aptameros, anticuerpos (primarios o secundarios) , los complejos de los mismos, incluyen aquellos formados por métodos de ADN recombinantes o las síntesis de péptidos. Un anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal o policlonal, o una proteína recombinante o una(s) mezcla (s) o fragmento (s) de las mismas, así como una mezcla de un anticuerpo y otros miembros aglutinantes específicos. Los detalles de la preparación de tales anticuerpos y su adaptabilidad para uso como miembros aglutinantes específicos son muy conocidos por aquellos con habilidad en el arte. Otros pares aglutinantes específicos comunes incluyen pero no están limitados a, la biotina y la avidina (o los derivados de las mismas) , la biotina y la estreptavidina, los carbohidratos y las lecitinas, las secuencias de nucleótidos complementarias (que incluye la sonda y la captura de secuencias de ácido nucleico usadas en ensayos de hibridización de .ADN para detectar una secuencia de ácido nucleico objetivo) , las secuencias de péptidos complementarias incluyen aquellas formadas por métodos recombinantes, moléculas efectoras y receptoras, la hormona y la proteína aglutinante de hormona, los cofactores de enzimas y las enzimas, los inhibidores de enzimas y las enzimas, y así sucesivamente. Adicionalmente, los pares aglutinantes específicos pueden incluir miembros que son análogos del miembro aglutinante específico original. Por ejemplo, un derivado o fragmento del analito, por ejemplo, un analito análogo, puede ser usado siempre y cuando tenga por lo menos un epítrope en común con el analito.
Los miembros aglutinantes específicos generalmente pueden estar unidos a las sondas de detección que usan cualquiera de una variedad de técnicas muy conocidas. Por ejemplo, una unión covalente de los miembros aglutinantes específicos para las sondas de detección (por ejemplo, partículas) pueden ser logradas usando grupos funcionales carboxilicos, amino, aldehido, bromoacetilo, iodoacetilo, tiolo, epoxia y otros reactivos o eslabones, así como radicales libres residuales y cationes radicales, a través de las cuales puede ser lograda una reacción de acoplamiento de proteína. Un grupo funcional de superficie también puede ser incorporado como un co-monómero funcionalizado porque la superficie de la sonda de detección puede contener una concentración de superficie relativamente superior de grupos polares. Adicionalmente, aunque las sondas de detección a menudo son funcionalizadas después de la síntesis, en ciertos casos,' tal como el poli (tiofenol) , las micropartículas son capaces de enlazarse covalentemente directamente con una proteína sin la necesidad de modificación adicional.
Refiriéndonos otra vez a la figura 1, el dispositivo de ensayo 20 también contiene una zona de detección 30 dentro de la cual es inmovilizado un primer reactivo de captura que es capaz de aglutinarse al analíto o a las sondas de detección conjugadas. El aglutinante del analito resulta en una indicación que se detecta que el analito esta presente y tal indicación puede ser visual o a través de otros medios tales como varios detectores o lectores (por ejemplo, lectores de fluorescencia) , descritos abajo. Los lectores también pueden ser diseñados para determinar las cantidades relativas de analito en el sitio de detección, basado sobre la intensidad de la señal en la zona de detección.
En algunas incorporaciones, el primer reactivo de captura puede ser un reactivo de captura biológico. Tales reactivos de captura biológicos son muy conocidos en el arte y pueden incluir, pero no están limitados a los antígenos, los haptenos, la proteína A o G, la neutravidina, la avidina, -la estreptavidina, la captavidina, los anticuerpos primarios o secundarios (por ejemplo, policlonal, monoclonal, etc.), y los complejos de los mismos. En muchos casos, es deseado que éstos reactivos de captura biológicos sean capaces de aglutinarse a un miembro aglutinante específico (por ejemplo, anticuerpo) presente en las sondas de detección.
También puede ser deseado utilizar varios materiales no-biológicos para el reactivo de captura. Por ejemplo, en algunas incorporaciones, el reactivo puede incluir un polielectrolito. Los polielectrolitos también pueden tener una carga positiva neta o una carga negativa, o una carga que es generalmente neutral. Algunos ejemplos apropiados de polielectrolitos que tienen una carga positiva neta incluyen, pero no están limitados a la polilisina (disponible comercialmente de Sigma-Aldrich Chemical Co., Inc. de St. Louis, Missouri), la polietilenimina; las poliamidas de epiclorohidrina-funcionalizadas y/o las poliamidoaminas, tales como la poli (dimetilamina-co-epiclorohidrina) ; el cloruro de polidiallildimetilo-amonio; los derivados de celulosa cationica, y tales como los copolímeros de celulosa o los derivados de celulosa injertada con un monómero soluble en agua de amonio cuaternario; y así sucesivamente. En una incorporación particular, pueden ser utilizados el CelQuat® SC-230M o el H-100 (disponible de National Starch & Chemical, Inc.), los cuales son derivados celulósicos que contiene en un monómero soluble en agua de amonio cuaternario . Algunos ejemplos apropiados de polielectrolitos que tienen una carga negativa neta incluyen, pero no están limitados a los ácidos poliacrílicos, tales como la sal de sodio de ácido de polietileno-co-acrílico, y así sucesivamente. Deberá de ser entendido que también pueden ser usados otros polielectrolitos. Algunos de éstos, tales como los polielectrolitos amfifílicos (por ejemplo, que tienen partes polares y no polares) pueden tener una carga neta es generalmente neutral. Por ejemplo, algunos ejemplos de polielectrolitos amfifílicos apropiados incluyen, pero no están limitados al yoduro de polistirilo-b-N-metilo 2-vinilo de piridinium) y el ácido polistirilo-b-acrílico) , ambos de los cuales están disponibles de Polymer Source , Inc . de Dorval , Canadá .
Los primeros reactivos de captura sirven como un sitio aglomerante estacionario para complejos formados entre el analito y las sondas de detección. Específicamente, los analitos tales como los anticuerpos, los antígenos, etc., típicamente tienen dos o más sitios aglomerantes (por ejemplo, los epítropes) . Al alcanzar la zona de detección 30, uno de estos sitios aglomerantes es ocupado por el miembro aglomerante específico de la sonda. Sin embargo, el sitio aglomerante libre del analito puede unirse al reactivo de captura inmovilizado. Al estar unido al reactivo de captura inmovilizado, las sondas complejadas forman un nuevo complejo emparedado ternario.
La zona de detección 30 generalmente puede proporcionar cualquier número de regiones de detección nítidas para que un usuario pueda mejor determinar la concentración de un analito particular dentro de una muestra de prueba. Cada región puede contener los mismos reactivos de captura, o pueden contener diferentes reactivos de captura para capturar analitos múltiples. Por ejemplo, la zona de detección 30 puede incluir dos o más regiones de detección nítidas (por ejemplo, líneas, puntos, etc.). Las regiones de detección pueden estar dispuestas en la forma de líneas en una dirección que es substancialmente perpendicular al flujo de la muestra de prueba a través del dispositivo de ensayo 20. De la misma manera, en algunas incorporaciones, las regiones de detección pueden estar dispuestas en la forma de líneas en una dirección que es substancialmente paralela al flujo de la muestra de prueba a través del dispositivo de ensayo.
En los dispositivos emparentados de flujo lateral convencionales, el analito sin complejar puede competir con el analito complejado para el reactivo de captura localizado en la zona de detección, causando una caída en la indicación de la presencia del analito. En una representación gráfica de la resistencia de la señal versus el tiempo, esta caída se asemeja a un gancho, por lo tanto este fenómeno es conocido como el "efecto de gancho". Depositar la muestra de prueba directamente en la zona de detección 30 resulta en complejar el analito con el reactivo de captura antes del contacto con las sondas de detección. Esto generalmente resulta en todos o en substancialmente todos los sitios de captura del reactivo a que estén ocupados por el analito. Las sondas de detección subsecuentemente forman un nuevo complejo emparedado ternario a su arribo a la zona de detección. Esta secuencia resulta en la eliminación virtual del "efecto de gancho" encontrado en ensayos previos por que el analito se une virtualmente a todos de los reactivos de captura, (siempre y cuando haya suficiente analito) y un exceso de sondas de detección asegura que virtualmente todos los sitios de reactivos de captura contengan analito complejado.
Refiriéndonos otra vez a la figura 1, la membrana porosa 22 también contiene una zona de control 32 colocada corriente abajo de la zona de detección 30. La zona de control 32 generalmente proporciona una región nítida sencilla (por ejemplo, línea, punto, etc.), aunque regiones múltiples están ciertamente contempladas por la presente invención. Por ejemplo, en la incorporación ilustrada, es utilizada una línea sencilla. La zona de control 32 puede estar dispuesta en una dirección que es substancialmente perpendicular al flujo de las sondas de detección y del amortiguador a través del dispositivo 20. De la misma manera, en algunas incorporaciones, la zona 32 puede estar dispuesta en una dirección que es substancialmente paralela al flujo a través del dispositivo 20.
A pesar de esta configuración, un segundo reactivo de captura está inmovilizado en la membrana porosa 32 dentro de la zona de control 32. El segundo reactivo de captura sirve como un sitio aglomerante estacionario para cualesquier sondas de detección y/o complejos de sondas de analito/conjugadas que no se unen al primer reactivo de captura en la zona de detección 30. Porque se desea que el segundo reactivo de captura se una a ambas sondas de detección complejas y sin complejar, el segundo reactivo de captura normalmente es diferente que el primer reactivo de captura. En una incorporación, el segundo reactivo de captura es un reactivo de captura biológico (por ejemplo, antígenós, haptenos, proteína A o G, neutravidina, avidina, estreptavidina, anticuerpos primarios o secundarios (por ejemplo, policlonal, monoclonal, etc.), y complejos de los mismos) que es diferente del primer reactivo de captura. Por ejemplo, el primer reactivo de captura puede ser un anticuerpo policlonal (por ejemplo, CRP Mabl) , mientras que el segundo reactivo de captura puede ser avidina (una glicoproteína altamente cationica de 66, 000-dalton) , la estreptavidina (una proteína no glicosilatada de 52, 800-dalton) , la neutravidina (un derivado de avidina deglisolatada) , y/o la captavidina (un derivado de avidina nitratada) . En esta incorporación, el segundo reactivo de captura puede aglomerarse a la biotina, la cual está biotinilatada o contenida en las sondas de detección conjugadas con un anticuerpo monoclonal diferente que el anticuerpo monoclonal del primer reactivo de captura (por ejemplo, CRP Mab2) .
Adicionalmente, también puede ser deseado utilizar varios materiales no biológicos para el segundo reactivo de captura de la zona de control 32. En muchas instancias, tales reactivos de captura no biológicos pueden ser particularmente deseados para mejor asegurar que todas de las sondas de detección conjugadas y/o de sondas de analito/conjugadas que se restan se complejen.
La detección de fluorescencia puede ser usada para detectar la presencia de analito en las zonas de detección y de control y generalmente utiliza filtración de longitud de onda para aislar los protones de emisión de los protones de excitación, y un detector que registra los protones de emisión y produce una salida que se registra, usualmente como una señal eléctrica o una imagen fotográfica. Generalmente hay cuatro tipos reconocidos de detectores : los espectrofluorómetros y las lectoras de microplato; los microscopios de fluorescencia; el escáner de fluorescencia; y los citómetros de flujo. Un detector de fluorescencia apropiado para uso con la presente invención es un Espectrofluorómetro FluoroLog III, el cual es vendido por SPEX Industries, Inc. de Edison, Nueva Jersey.
Si se desea, una técnica conocida como "detección de fluorescencia de tiempo resuelto" también puede ser utilizada la presente invención. La detección de fluorescencia de tiempo resuelto está diseñada para reducir las señales de fondo del suministro de emisión o de los procesos que se esparcen (que resulta del esparcido de la radiación de excitación) mediante tomar ventaja de las características de fluorescencia de ciertos materiales fluorescentes, tales como los quelatos de lantanida de europium (Eu (III) ) y de terbiun (Tb (III) ) . Tales quelatos pueden fuertemente exhibir emisión del larga vida, de banda estrecha, rojo cambiado después de la excitación del quelato de longitudes de onda substancialmente más cortas. Típicamente, el quelato posee una banda de absorción ultravioleta fuerte debido a un cromóforo localizado cerca a la lantanida en la molécula. Subsecuente a la absorción de luz por el cromóforo, la energía de excitación puede ser transferida el cromóforo excitado a la lantanida. Esto seguido por una emisión de fluorescencia característica de la lantanida. El uso de la excitación de pulso y de la detección de tiempo de compuerta, combinados con filtros de emisión de banda estrecha, permite para la detección específica de >la fluorescencia del quelato de la lantanida solamente, rechazando la emisión de otras especies presentes en la muestra que son típicamente de vida más corta o que tienen una emisión de longitud de onda más corta.
Mientras que la invención ha sido descrita en detalle con respecto a incorporaciones específicas de la misma, podrá ser apreciado por aquellos con habilidad en el arte, al lograr un entendimiento de lo anterior, fácilmente pueden concebir de alteraciones a, variaciones de, y equivalentes a estas incorporaciones. Por lo tanto, el alcance de la presente invención deberá de ser evaluado como esa de las reivindicaciones anexas y cualesquier equivalentes a las mismas .
Claims (20)
1. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral para detectar la presencia o la cantidad de un analito que reside en una muestra de prueba, dicho dispositivo de ensayo de flujo lateral comprende una membrana porosa, dicha membrana porosa estando en comunicación con una almohadilla conjugada y una almohadilla de transmisión, dicha membrana porosa define: una zona de detección en donde dicha muestra de prueba está aplicada y dentro de la cual está inmobilizado un primer re-agente de captura, dicho primer re-agente de captura estando configurado para aglutinar a por lo menos una parte de dicho analito y dicho analito-conjugado complejo para generar una señal de detección teniendo una intensidad; una sala de control localizada hacia debajo de dicha zona de detección, en donde un segundo reactivo de captura es inmobilizado dentro de dicha zona de control, dicho segundo reactivo de captura estando configurado para aglutinar a dicho conjugado o complejos de analito-conjugado; dicha almohadilla de conjugado localizada hacia arriba de dicha zona de detección, dicha zona de conjugado teniendo sondas de detección con miembros de aglutinamiento específicos para el analito y; dicha zona de liberación de amortiguador localizada hacia arriba de dicha almohadilla de conjugado y que proporciona para la adición de amortiguador a dicho dispositivo, dicho amortiguador sirve para mover dichas sondas de detección a dicha zona de detección y a dicha zona de control .
2. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dichas sondas de detección conjugadas comprenden una sustancia seleccionada del grupo que consiste de cromógenos, catalizadores, compuestos luminiscentes, compuestos radiactivos, etiquetas visuales, liposomas y combinaciones de los mismos.
3. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dichas sondas de detección conjugadas comprenden un compuesto luminiscente.
4. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dichas sondas de detección conjugadas comprenden una etiqueta visual.
5. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dicho miembro aglutinante específico es seleccionado del grupo que consiste de antígenos, haptenos, aptámeros, anticuerpos primarios y secundarios, biotina y combinaciones de los mismos.
6. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dicho primer reactivo de captura es seleccionado del grup que consiste de antígenos, haptenos, proteína A o G, neutravidina, avidina, estreptavidina, captavidina, anticuerpos primarios' o secundarios y complejos de los mismos.
7. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dicho segundo reactivo de captura es seleccionado del grupo que consiste de antígenos, haptenos, proteína A ó G, neutravidina, avidina, streptavidina, captavidina, anticuerpos primarios o secundarios, y complejos de los mismos.
8. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dicho analito es un patógeno grande seleccionado del grupo que consiste de especies salmonera, grupos de Neisseria meningitides, Estreptococcus neumoniae, Candida albicans, Candida tropicalis, aspergila, influenza haemofilus, VIH, Tricomonas y Plasmodio.
9. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dicho analito es seleccionado del grupo que consiste de toxinas, compuestos orgánicos, proteínas, péptidos, microorganismos, amino ácidos, ácidos nucleicos, hormonas, esteroides, vitaminas, drogas, intermediarios o subproductos de drogas, bacterias, partículas de virus y metabolitos o anticuerpos para cualquiera de las sustancias anteriores.
10. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque dicho analito es un patógeno pequeño.
11. Un método para detectar la presencia o la cantidad de un analito que reside en una muestra de prueba, dicho método comprende : i) proporcionar un dispositivo de ensayo de flujo lateral que comprende una membrana porosa, en comunicación de líquido con una almohadilla conjugada y una almohadilla de transmisión, dicha almohadilla conjugada teniendo sondas de detección conjugadas con un miembro aglutinante específico para el analito, dicha membrana porosa define una zona de detección en la cual un primer reactivo de captura es inmobilizado y una zona de control dentro de la cual un segundo reactivo de captura es inmobilizado, en donde dicha zona de control está localizada hacia debajo de dicha zona de detección, dicha almohadilla de conjugado está localizado hacia arriba de dicha membrana porosa y dicha zona de liberación de amortiguador está hacia arriba de dicha almohadilla de conjugado; ii) contactar dicha muestra de prueba conteniendo el analito con la zona de detección; iii) liberar un amortiguador en dicha zona de liberación de amortiguador de manera que dicho amortiguador lleve dichas sondas de detección a dicha zona de detección y a las zonas de control; iv) detectar una señal de detección.
12. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque dichas sondas de detección comprenden una sustancia seleccionada del grupo que consiste de cromógenos, catalizadores, compuestos luminiscentes, compuestos radioactivos, etiquetas visuales, liposomas y combinaciones de los mismos.
13. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque dichas sondas de detección conjugadas comprenden una etiqueta visual.
14. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque dicho miembro aglutinante específico es seleccionado del grupo que consiste de antígenos, haptenos, aptámeros, anticuerpos primarios o secundarios, biotina y combinaciones de los mismos.
15. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque dicho primer reactivo de captura es seleccionado del grupo que consiste de antígenos, haptenos, proteína A ó G, neutravidina, avidina, streptavidina, captavidina, anticuerpos primarios y secundarios, y complejos de los mismos.
16. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque dicho segundo reactivo de captura es seleccionado del grupo que consiste de antígenos, haptenos, proteína A ó G, neutravidina, avidina, streptavidina, captavidina, anticuerpos primarios o secundarios y complejos de los mismos.
17. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque dicho segundo reactivo de captura comprende un polielectrolito.
18. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque dicho analito es un patógeno grande seleccionado del grupo que consiste de especies Salmonera, grupos Neisseria meningitides, Streptococcus neumoniae, Candida albicans, Candida tropicalis, aspergila, influenza haemofilus, VIH, Trcomonas y Plasmodium.
19. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque dicho analito es seleccionado del grupo que consiste de toxinas, compuestos orgánicos, proteínas, péptidos, microorganismos, amino ácidos, ácidos nucleicos, hormonas, esteroides, vitaminas, drogas, intermediarios o subproductos de drogas, bacterias, partículas de virus y metabolitos de o anticuerpos para cualquiera de las sustancias anteriores .
20. Un dispositivo de ensayo de flujo lateral para detectar la presencia de un analito que reside en una muestra de prueba, en donde las sondas de detección, inicialmente localizadas sobre una almohadilla conjugada son movidas a un patógeno localizado en una zona de detección teniendo un reactivo de captura. R E S U M E Se proporciona un dispositivo de ensayo de flujo lateral para detectar la presencia o la cantidad de un analito que reside en una muestra de prueba en donde el dispositivo de ensayo de flujo lateral tiene una membrana porosa en comunicación con una almohadilla de conjugado y una almohadilla de transmisión. La membrana porosa tiene una zona de detección en donde una muestra de prueba es aplicada y la cual tiene un primer reactivo de captura inmobilizado configurado para aglutinar a por lo menos una parte del analito y los complejos de analito-conjugado para generar una señal de detección. La zona de control está localizada hacia debajo de la zona de detección de la membrana porosa y tiene un segundo reactivo de captura inmobilizado dentro de la zona de control. La almohadilla de conjugado está localizada hacia arriba de la zona de detección, y tiene sondas de detección con miembros de aglutinamiento específicos para el analito. Una zona de liberación de amortiguador está localizada hacia arriba de la zona de conjugado y proporciona la adición de amortiguador al dispositivo. El amortiguador sirve para mover las sondas de detección a las zonas de detección y de control.
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