MX2007000150A

MX2007000150A - Inhibicion de moleculas pequenas de la interaccion del domini pdz.

Info

Publication number: MX2007000150A
Application number: MX2007000150A
Authority: MX
Inventors: Rodney Kiplin Guy; Naoaki Fujii; Liang You; David M Jablons
Original assignee: Univ California
Priority date: 2004-07-01
Filing date: 2005-06-30
Publication date: 2007-03-30
Also published as: EP1781609A4; US20080064733A1; AU2005262332A1; CA2572469A1; WO2006007542A1; IL180576A0; US20110160263A1; US8211934B2; CN101014568A; RU2007103834A; JP2008505183A; US7795295B2; EP1781609A1

Abstract

Nuevos compuestos que se han encontrado efectivos para inhibir las interacciones del dominio PDZ, y particularmente las interacciones de los dominios PDZ en MAGIs con la proteina oncogenica PTEN (supresora de tumor) e interacciones entre el dominio PDZ en la proteina Dishevelled (Dv1) y otras proteinas tales como la proteina Frizzled (Fz), tienen la formula general (I) o (II). La invencion tambien incluye bibliotecas combinatorias, ordenamientos y metodos para detectar de manera sistematica y estudiar las proteinas utilizando tales compuestos. Los compuestos de la invencion han producido apoptosis en ciertas lineas celulares que sobreexpresan la proteina Dishevelled (Dv1), inhibiendo la senalizacion Wnt.

Description

INHIBICIÓN DE MOLÉCULAS PEQUEÑAS DE LA INTERACCIÓN DEL DOMINIO PDZ ANTECEDENTES Y CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a la inhibición de interacciones de dominios PDZ de una proteina o proteínas con otras proteínas, y más particularmente a nuevos compuestos que se ha encontrado que son efectivos en la inhibición de dominios PDZ. En un aspecto muy especifico, esta invención se refiere a la inhibición de un dominio PDZ de proteínas que regulan la función de la proteína oncosupresora PTEN, o del dominio PDZ de la proteína Dishevelled (Dvl) , y compuestos que se ha encontrado que poseen tal capacidad de inhibición. Se ha demostrado que los compuestos de la invención producen apoptosis en células cancerígenas que sobreexpresan Dvl. Los dominios PDZ son regiones de proteínas de señalización que funcionan para modular las interacciones proteína-proteina tal como el reconocimiento de proteína-proteína. Los dominios PDZ se nombraron para tres proteínas en las cuales este dominio se descubrió inicialmente: PSD-95 (una proteína de 95 kDa implicada en la señalización en la densidad post-sináptica) , DLG [Drosophila letal (1) discos grande-1] , y ZO-1 (la proteína zonula occludens-1 incluida en el mantenimiento de la polaridad epitelial) . Estas proteínas juegan papeles importantes en la transmisión sináptica neuronal, supresión tumoral, y formación de unión celular, respectivamente. Se entienden que funcionan in vivo al organizar complejos de múltiples proteínas que funcionan en señalización, por ejemplo, comunicación entre células. Por ejemplo, los complejos de señalización organizada por PDZ se sabe que funcionan en comunicación incluyendo neuronas o células epiteliales, por ejemplo, al acoplar receptores activados a sistemas de segundo mensajero corriente abajo, y en transportar y tener como objetivo proteínas para sitios de señalización celular. Estos se incluyen en el funcionamiento de los mediadores de señal celular importantes incluyendo canales iónicos, receptores de transmembrana, y enzimas reguladoras. Las proteínas que contienen PDZ se cree que se incluyen en los trastornos asociados con señalización de célula defectiva, incluyendo daño de nervio isquémico y tumorigenesis . Estructuralmente, los dominios PDZ son dominios de interacción de proteína modular de 80-90 aminoácidos que comprenden seis filamentos beta (betaA a betaF) y dos alfa-hélices, A y B, compactamente colocados en una estructura globular. La unión de péptido del ligando tiene lugar en una hendidura de superficie alargada a medida que un filamento beta anti-paralelo interactúa con el filamento betaB y el de hélice B. La estructura de los dominios PDZ permite la unión a un grupo carboxilato libre en el extremo de un péptido a través de una espira de unión de carboxilato entre los filamentos betaA y betaB . Entre las proteínas con los dominios PDZ se encuentran las MAGIs (proteínas de guanilato cinasa asociadas por membrana con orientación inversa) . Las proteínas en esta clase participan en la instalación de complejos de múltiple proteínas sobre la superficie interna de la membrana de plasma en regiones de contacto de célula-célula. Las MAGIs son una pequeña familia de adaptadores, ampliamente expresados en el cuerpo humano, que tienen seis dominios PDZ. MAGI-3 se une a la supresora de tumor PTEN, una fosfatasa de lípido/proteína, que utiliza su segundo dominio PDZ (MAGI3-PDZ) . La interacción de MAGI-3 y PTEN reduce la fosfotidilinositol 3 -cinasa y señalización Akt/PKB mientras que la liberación de PTEN de MAGI-3 aumenta la señalización Akt/PKB. Normalmente, la señalización Akt/PKB asegura la supervivencia celular durante la respuesta a las agresiones celulares al suprimir la apoptosis. Sin embargo, los mutantes PTEN que originan la señalización Akt/PKB constitutiva se han asociado con cánceres humanos. La ruptura química de esta interacción sería una manera única de investigar el papel de la señalización Akt/PKB en la transformación y el cáncer, y podría afectar el desarrollo de los crecimientos cancerosos . También entre las proteínas que se ha encontrado que poseen un dominio PDZ es la proteína Dishevelled (Dvl) . Sus interacciones con las proteínas nt y Frizzled se han indicado como involucradas en uno o más tipos de cánceres. Los inhibidores de molécula pequeña de interacciones de proteínas que tienen dominios PDZ con otras proteínas, serían deseables. Hasta recientemente, no se han reportado moléculas pequeñas que tengan esta capacidad. En 2002 y 2003, descubrimos varios compuestos que tuvieron tal capacidad [Novak et al . , Investigation of the PDZ Domain Ligand Binding Site Using Chemically Modified Peptides, Bioorganic & Medicinal Chemistry Lett . 2002 (2471); Fuj ii et al . , Targeting PDZ-domain by Rationally Designed Non-peptide Small Molecules (poster) (American Society of Cell Biology, Congreso de Diciembre 2002); Novak et al . , Small molecule inhibition of a PDZ domain interaction (poster) (American Society of Biochemistry and Molecular Biology, Congreso de Abril, 2003); Fujii et al . , A selective irreversible inhibitor targeting a PDZ domain interaction protein, JACS 2003 125:12074. SUMARIO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a nuevos compuestos que se han encontrado eficaces en la inhibición de interacciones del dominio PDZ, y particularmente interacciones del dominios PDZ en MAGIs con la proteína oncosupresora PTEN (supresora de tumor) , y de un dominio PDZ en la proteína Dishevelled con proteínas Frizzled, y a la inhibición de la actividad del dominio PDZ mediante el uso de estos compuestos . Los nuevos compuestos tienen la fórmula general: (D (») o (ID) en la cual : B es O, 1 o 2 ; Xx es NH, N(CH3), CH2, CH(CH3), C(CH3)2/ O, S, S(O) , o S02; R0 se selecciona del grupo que consiste de alquilo C?-C3, ciclopropilo, halo, 0R5 y S(0)mR5 en la cual m es 0 , 1 o 2 ; Rx y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de alquenilo C2-C8, fenilciclopropilo, fenilpropenilo, Re-X2-C (R8) (R8) -R7-, R6-X2-N (R8) -R7-, y R10X3R7" ; R3 y R4 son independientemente hidrógeno, metilo o etilo; R5 es metilo o etilo; R6 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo C?-C10, arilo, , Y, NH2, NHC0NR3R4/ NHCOOR3 y NHSO2R9; R7 se selecciona del grupo que consiste de un enlace directo, un grupo alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, arilo, - (NH)P (CH2CH20) g(NH)p- en la cual p es 0 o 1 y g es un entero de 1 a 4, y ; R8 se selecciona del grupo que consiste de H, Y, OH, -NHCONR3R4; -NHCOOR3; -NHS02R9, - (CH2)rC02R3, y (CH2) rCONR3R4 en la cual r es un entero de 1 a 3 ; R9 es arilo o alquilo C?-C6; R?0 se selecciona de alquilo C?-c10; arilo y W; X2 se selecciona del grupo que consiste de un enlace directo, -NH-, -N(CH3)-, -NCONR3R4, -NCOOR3, y -NSO2R9 ; X3 se selecciona de O, S, SO y S02; W es un grupo heterocíclico o carbocíclico saturado; Y se selecciona del grupo que consiste de COOH, COOR3, CONR3R4 CONHS02R5/ hídroximetilo, -CH2COOH, CH2CONR3R4; y 5-tetrazolilo; e hidratos y sales de los mismos, y derivados etiquetados de los mismos . Las modalidades preferidas de los compuestos de la Fórmula (I) incluyen aquellos en los cuales Xx es NH o S, aquellos en los cuales Rx y R2 son independientemente alquilo, opcionalmente sustituidos por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo, aquellos en los cuales Rx es un grupo cicloalquilo, y aquellos en los cuales Rx es un grupo fenilo. En una modalidad, R2 es un grupo alquilo no sustituido que tiene de 1 a 20, preferentemente de 1 a 10, y más preferentemente de 1 a 8 , y más preferentemente de 3 a 8 , átomos de carbono y Rx es un grupo alquilo con las mismas posibilidades, opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo. En otras modalidades, R es fenilo o fenetilo y R2 es un grupo alquilo, opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo. Todavía en otras modalidades, R2 es un grupo cicloalquilo. Esta invención también incluye procesos y productos intermedios para la preparación de estos compuestos. Esta invención también incluye bibliotecas de tales compuestos y métodos para preparar tales bibliotecas . La invención también incluye versiones marcadas de los compuestos y medidores químicos preparados al enlazar los nuevos compuestos a diversas porciones de marcado . En otro aspecto, esta invención incluye métodos para inhibir la interacción de un dominio PDZ de una proteína con otras proteínas, más particularmente, la interacción de una proteína MAGI o de la proteína Dishevelled (Dvl) con otras proteínas, al poner en contacto la proteína que contiene el dominio PDZ, o el dominio PDZ, con una cantidad efectiva inhibidora de un compuesto según se define en la presente. Todavía en otro aspecto, esta invención se refiere a los métodos de estudio de interacciones de proteína y/o funcionamiento de dominio PDZ que incluye poner en contacto la proteína o el dominio con un compuesto o compuestos según se describe en la presente. La invención también incluye ordenamientos de tales compuestos para estudiar las interacciones de proteína o para seleccionar las proteínas para la actividad de dominio PDZ . En un aspecto más específico de esto, la invención comprende inhibir las interacciones de los dominios PDZ en MAGIs con la proteína oncogénica PTEN (supresora de tumor) o de inhibir las interacciones entre el dominio PDZ en la proteína Dishevelled y otras proteínas, por ejemplo la proteína Frizzled (Fz) , al poner en contacto la proteína MAGI , la proteína Dishevelled, o un dominio PDZ de tal proteína con una cantidad inhibidora efectiva de un compuesto según se describe en la presente. En otra modalidad esta invención también proporciona métodos terapéuticos para tratar el cáncer que comprende poner en contacto el cáncer o células cancerígenas con un dominio PDZ efectiva-inhibíendo la cantidad de un compuesto de la invención. En estas modalidades, la célula cancerígena típicamente se encuentra en un paciente y la etapa de contacto se lleva a cabo mediante la administración de un agente terapéutico, principalmente uno o más compuestos de la invención, o una composición que contiene el mismo, al paciente. El método puede además comprender administrar al paciente un segundo agente terapéutico, tal como un agente quimioterapeútico o terapia de radiación. La célula cancerígena puede ser una célula cancerígena de mama, célula cancerígena colorectal, una célula cancerígena de pulmón, una célula de sarcoma, o una célula mesotelioma, una célula cancerígena de próstata, una célula cancerígena pancreática, una célula cancerígena cervical, una célula cancerígena ovárica, una célula cancerígena gástrica, una célula cancerígena esofageal, una célula cancerígena de cuello y cabeza, una célula de carcinoma hepatocelular, una célula melanoma, una célula glioma, una célula cancerígena escamosa, o una célula de glioblastoma. La solicitud de patente de Estados Unidos 10/678,639 presentada el 3 de Octubre de 2003, titulada "Métodos para Tratar Cáncer al Inhibir la Señalización Wnt", de He et al . , se incorpora en la presente en su totalidad. Esa solicitud describe la inhibición del crecimiento de las células cancerígenas que sobreexpresan una proteína Wnt al poner en contacto la célula con un agente que inhibe la unión de la proteína Wnt a un receptor Frizzled. La solicitud PCT WO 02/088081 describe que la sobreexpresión de Wnt parece conectada al caso de cáncer escamoso de cabeza y cuello. Wong et al . , J. Mol . Cell 12 : 1251 (Noviembre, 2003) describieron que la unión de la proteína Dvl a Fz ocurre en el dominio PDZ de Fz . La inhibición de la interacción de dominio PDZ/Dvl puede de esta manera inhibir la señalización Wnt y por consecuencia inhibir el crecimiento de las células cancerosas . El término "proteína Frizzled" (Fz o Frz) se refiere a una familia de proteínas de mamífero relacionadas a los genes Orosoph.Ha frizzled, los cuales juegan un papel en el desarrollo de polaridad de tejido. La familia Frizzled comprende al menos 10 genes de mamífero. Los receptores Frizzled humanos ejemplares incluyen Frizzledl, Frizzled2, Frizzled3, Frizzled4, Frizzled5, Frizzled6, Frizzled7, Frizzledd, Frizzled9 y FrizzledlO. Los receptores de proteína Frizzled se incluyen en un modelo dinámico de transducción de señal de transmembrana análogo a receptores acoplados a proteína G con dominios de unión de ligando aminoterminal . El término "Dischevelled" o "Dvl" se refiere a un miembro de una familia de proteínas ischevelled, las secuencias de longitud completa de las cuales típicamente posee tres dominios conservados, un dominio DIX, presente en la proteína antagonizante Wnt Axin; un dominio PDZ incluido en interacciones de proteína-proteína, y un dominio DEP encontrado en proteínas que regulan Rho GTPases . Las proteínas Dvl incluyen, por ejemplo, Dvl-1, Dvl-2, y Dvl-3. La secuencia de proteína Dvl y ácido nucleico se conocen de una variedad de especies, incluyendo ratón y humano . Las secuencias de proteína humana ejemplares Dvl-1, Dvl-2, y Dvl-3 se encuentran disponibles bajo secuencias de referencia NP_004412, NP_004413, y NM_004414, respectivamente. "Inhibidores de señalización Wnt" se refiere a compuestos que, por ejemplo, se unen a proteínas Dishevelled a fin de interferir con la interacción de Dishevelled/Frizzled, y por consecuencia bloquean total o parcialmente la señalización Wnt, según se mide por ejemplo, en ensayos conocidos para la señalización Wnt (por ejemplo, medición de niveles ?-catenina, o expresión de oncógeno controlada por factores de transcripción Tcf y Lef) . Una "célula cancerígena que sobreexpresa una proteína Wnt" es una célula cancerígena en cuya expresión de una proteína Wnt particular es al menos aproximadamente 2 veces, usualmente al menos aproximadamente 5 veces el nivel de expresión en una célula normal del mismo tejido. Los métodos para determinar el nivel de expresión de un gen particular se conocen bien en la materia. Tales métodos incluyen RT-PCR, uso de anticuerpos contra los productos de gen, y lo similar. Todavía en otro aspecto esta invención incluye proteínas de selección para la actividad del dominio PDZ al poner en contacto las proteínas con un compuesto o compuestos de la invención. Al estudiar el funcionamiento de proteínas que tienen un dominio PDZ o proteínas de selección para la actividad del dominio PDZ puede incluirse el uso de un compuesto único de la invención, o un número, incluyendo un gran número de compuestos de la invención. Lo último puede llevarse a cabo con un número de pruebas utilizando proteínas individuales, o con ordenamientos o bibliotecas de tales compuestos . Los compuestos pueden encontrarse en la forma mostrada anterior o preferentemente también incluyen una porción de marcado. Adicionalmente, los compuestos pueden conjugarse o unirse a un soporte sólido, por ejemplo, una placa o un material particulado, y tales combinaciones de soporte sólido y compuestos son otro aspecto de esta invención. Por "inhibidores" se entiende compuestos que, por ejemplo, se unen para, parcial o totalmente bloquear la estimulación, reducir, prevenir, o retardar la activación, o inactiva, desensibilizar, o regular en disminución la transducción de señal. De igual forma, el término "inhibición" significa un bloqueo total o parcial, estimulación, reducción, prevención o retraso de la activación, o inactivación, desensibilización o regulación en disminución de la transducción de señal. Una "cantidad inhibidora efectiva" de un compuesto o composición es una cantidad que produce la inhibición en un ensayo particular o en un paciente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 representa la unión de un compuesto de la invención a proteína GMP32 de dominio PDZ2 MAGI3 fusionada a GST.

DESCRIPCIÓN DETALLADA D ELA INVENCIÓN Esta invención se refiere a nuevos compuestos que se han encontrado eficaces en la inhibición de las interacciones de dominio PDZ, particularmente interacciones de un dominio PDZ en Mis con la proteína oncosupresora PTEN (supresora de tumor) e interacciones de un dominio PDZ en la proteína Dishevelled con un receptor o proteína Frizzled, y a la inhibición de actividad del dominio PDZ por el uso de estos compuestos . La invención también se refiere a efectos antitumorales producidos por tales compuestos, y al uso de tales compuestos en el tratamiento de cáncer. Los nuevos compuestos tienen las fórmulas generales : 0) di) o OH) en la cual : n es 0, 1 o 2 ; Xx es NH, N(CH3), CH2, CH(CH3), C(CH3)2, O, S, S(O) , o S02; R0 se selecciona del grupo que consiste de alquilo C?-C3, ciclopropilo, halo, ORs y S(0)raR5 en la cual m es 0, 1 o 2; Ra y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de alquenilo C2-C8, fenilciclopropilo, fenilpropenilo, R6-X2-C (R8) (R8) -R7-, Rd-X2-N (Rß) -R7- , y RxoXR - ; R3 y R4 son independientemente hidrógeno, metilo o etilo,- R5 es metilo o etilo; R6 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo C?-C?0, arilo, W, Y, NH2/ NHCONR3R4, NHCOOR3 y NHS02R9; R7 se selecciona del grupo que consiste de un enlace directo, un grupo alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, arilo, - (NH)P (CH2CH20) g(NH)p- en la cual p es 0 o 1 y ?r es un entero de 1 a 4, y W; R8 se selecciona del grupo que consiste de H, Y, OH, -NHCONR3R4; -NHCOOR3; -NHS02R9, - (CH2)rC02R3/ y (CH2 ) rCONR3R4 en la cual r es un entero de 1 a 3 ; R9 es arilo o alquilo C?-C6; R10 se selecciona de alquilo C?-c10; arilo y W; X2 se selecciona del grupo que consiste de un enlace directo, -NH- , -N(CH3)-, -NCONR3R4/ -NCOOR3, y -NSO2R9 ; X3 se selecciona de O, S, SO y S02; W es un grupo heterocíclico o carbocíclico saturado; Y se selecciona del grupo que consiste de COOH, COOR3, CONR3R4, CONHSO2R5, hidroximetilo, -CH2COOH, CH2CONR3R4; y 5-tetrazolilo; e hidratos y sales de los mismos, y derivados etiquetados de los mismos . Las modalidades preferidas de los compuestos de la Fórmula (I) incluyen aquellos en los cuales Xx es NH o S, aquellos en los cuales Rx y R2 son independientemente alquilo, opcionalmente sustituidos por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo, aquellos en los cuales R un grupo fenilo. En una modalidad, R2 es un grupo alquilo no sustituido que tiene de 1 a 20, preferentemente de 1 a 10, y más preferentemente de 1 a 8 , y más preferentemente de 3 a 8 , átomos de carbono y Rx es un grupo alquilo con las mismas posibilidades, opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo. Algunas modalidades preferidas para Rx y R2 incluyen alquilo C3-C8; cicloalquilo C3-C3; alquilo C?-C3 sustituido por un grupo cicloalquilo C3-C6, alquenilo C3-C8/- -(CH2)mC6H5 en donde m es 0 o un entero de 1-3; CH20C6H5, CH2C0C6H5, fenil (alquenilo C2-C4) , o residuos análogos que tienen grupos fenilo sustituidos; fenilciclopropilo opcionalmente sustituido; -(CH2)sOH, (CH2)?C0NH2 y -(CH2)sCOOH en donde s es un entero de 1 a 3 ,-fenilo; tienilo;y cicloalquilo C3-C6- (alquilo C?-C3) opcionalmente sustituido. Las modalidades particularmente preferidas son fenilo, fenetilo, fenilpropilo, hidroxietilo, hidroxipropilo, y varios grupos propilo, butilo y pentilo. En una modalidad preferida, Rx es -(CH2)mC6H5 en donde m es 0 u entero de 1-3, más preferentemente fenilo o fenetilo, y R2 es un grupo alquilo que tiene de 1-8, preferentemente 3-8, átomos de carbono, opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo. En otra modalidad, R es un grupo alquilo que tiene de 1-8, preferentemente de 3-8 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo, y R2 es un grupo alquilo que tiene de 1-8, preferentemente de 3-8, átomos de carbono. El término "alquilo" según se utiliza en la presente significa una cadena ramificada o recta, o radical hidrocarbúrico, cíclico o no aromático, o combinación de los mismos, que se satura completamente y tiene el número de átomos de carbono designados (es decir, C?-C10 significa uno a diez átomos de carbono) . Los ejemplos de grupos alquilo acíclicos incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, homólogos e isómeros de los mismos, por ejemplo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, y lo similar. Los ejemplos de grupos alquilo cíclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, y lo similar. El término "alquilo inferior" significa un grupo del tipo mencionado, teniendo hasta diez; preferentemente hasta seis, átomos de carbono. Para uso en la invención, los grupos alquilo generalmente pueden ser de cualquier tamaño deseable. Preferentemente, contendrán hasta 20, más preferentemente, hasta 10, y más preferentemente hasta 8, átomos de carbono. Los grupos cicloalquilo contienen de 3 a 8 átomos de carbono. El término "alquenilo" según se utiliza en la presente significa una cadena recta o ramificada, o radical hidrocarbúrico cíclico o no aromático, o combinación de los mismos, que contiene uno o más enlaces olefínicos y tiene el número de átomos de carbono designados (es decir, C?-C10 significa uno a diez átomos de carbono) . Los ejemplos de grupos alquenilo acíclico incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como vinilo, alilo, propenilo, butenilo, crotilo, butadienilo, y lo similar. Los ejemplos de grupos alquilo cíclico incluyen ciclopentilo, ciclohexenilo, ciclohexadienilo, y lo similar. Para utilizarse en la invención, los grupos alquenilo generalmente pueden ser de cualquier tamaño deseable. Preferentemente contendrán hasta 20, más preferentemente, hasta 10, y más preferentemente hasta 8, átomos de carbono . Los grupos alquilo y alquenilo utilizados en esta invención pueden ser sustituidos o pueden ser mono-o polisustituidos, según se indica anteriormente. Los grupos alquilo, alquenilo o cicloalquilo sustituidos también incluyen grupos arilalquilo, principalmente grupos alquilo (incluyendo cicloalquilo) sustituidos por uno o más grupos arilo; por ejemplo, bencilo, fenetilo, 1-fenilpropilo, trifenilmetilo, fenilpropenilo, ciclohexilmetilo, ciclopropilmetilo, y lo similar. También pueden incluir grupos cicloalquilo que tienen un grupo arilo tal como un sustituyente tal como fenilciclopropilo. El anillo o los anillos aromáticos en los grupos arilalquilo pueden además ser sustituidos de igual forma a otros grupos alifáticos, por ejemplo, clorobencilo, metilbencilo, etc. Los grupos alquilo sustituido también incluyen grupos alquilo sustituidos por uno o más grupos heterocíclicos saturados o no saturados, es decir, los grupos alquilo sustituido son piridilmetilo, piridiletilo, piperidinilmetilo, pirrolidinilmetilo, morfolinilmetilo, quinolilmetilo, etc. Tales grupos pueden sustituirse por uno o más halógenos, grupos hidroxilo, grupos alquilo inferior, o grupos alcoxi inferior (incluyendo combinaciones de tales grupos) . Según se utiliza en la presente, "arilo" se refiere a los grupos hidrocarbilo no alifáticos sustituidos o no sustituidos típicos de esta clase, es decir, un sustituyente hidrocarbúrico polinosaturado, típicamente aromático, el cual puede ser un anillo único o múltiples anillos (hasta tres anillos) que se fusionan juntos o se unen covalentemente, tal como fenilo, naftilo, y lo similar. Esta clase de porciones también incluye porciones de anillo fusionado tales como indanilo, etc. Los sustituyentes para las porciones aromáticas son similares a aquellos para los grupos alifáticos. "Arilo", según se utiliza en la presente, también incluye grupos heterocíclicos análogos (algunas veces denominados grupos "heteroaromáticos"), principalmente porciones cíclicas polinosaturadas que contienen átomos de carbono en el anillo y adicionalmente uno a más átomos hetero, los cuales son típicamente oxígeno, nitrógeno, azufre y o fósforo, tal como piridinilo, pirazinilo, pirazolilo, tienilo, furilo, tiazolilo, imidazolilo, pirrolilo, etc., y porciones de anillo fusionado tales como benzoxazolilo, benztiazolilo, etc . Estos pueden sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes tales como halógeno, hidroxi, amino, alquilo inferior opcionalmente sustituido, alcoxi inferior opcionalmente sustituido, NCONR3R4 y NCOOR3, y otros sustituyentes anteriormente incluidos dentro de la definición de grupo R6 - Los compuestos arilo también incluyen porciones aromáticas fluorescentes tales como Las porciones heterocíclicas o carbocíclicas para W generalmente tienen la fórmula en donde X4 es un enlace directo, NH, N(CH3), CH2, CH(CH3), C(CH3)2, O, S, S(O), S02, C(O), NCONR3R4 o NC02R8, en donde R3, R4 y R8 son según se definen anteriormente, y son, por ej emplo : En general, los compuestos de la Fórmula (I) pueden sintetizarse de un aminobenceno de inicio, por ejemplo o compuestos análogos con varias porciones según se indica anteriormente para los grupo Y y R0, seguido por la iodinación de la posición 5 y la reacción con un compuesto tal como R?CH=TMS o R?CH=-TES (en donde TMS y TES permanecen para un grupo trimetilsililo y trietilsililo, respectivamente) para formar un indol sustituido, y alquilación o lo similar para agregar el grupo -CHR2 (CH2) nOH . Una ilustración de tal método se muestra en la sección de "Ejemplos" de abajo. Los derivados pueden elaborarse por sustitución adecuada de grupos de los compuestos elaborados según se describe así . Los compuestos de la Fórmula (III) pueden generalmente sintetizarse como sigue. El éster 3-fluoro-4-nitro-6-metilbenzoato se trata con aminas primarias seguidas por cloruro de estaño (2) para lograr esteres de ácido 3-alquilamino-4-amino-6-metilbenzoico. Estos compuestos reaccionan con ácidos 2~hidroxicarboxílicos bajo condiciones acidas seguidas por hidrólisis alcalina (Esquema A) : SnCl2 esquema A Los compuestos de la Fórmula (III) también pueden sintetizarse como sigue. Un compuesto trifluoroacetilado de la anilina mostrada en el párrafo [0034] anterior se usa con nitro seguida por tratamiento de cloruro de estaño (2) , dando un diaminobenceno mono-trifluoroacetilado. La alquilación y desprotección del grupo trifluoroacetilo logra un diaminobenceno monoalquilatado, el cual puede convertirse así en los compuestos de la Fórmula (III) según se muestra en el Esquema A. Este proceso se muestra en el Esquema B de abajo . iBr K2C03 R2 Esquema B Las siguientes Tablas IA y IB muestran los compuestos representativos de las Fórmulas (I) y (II) de la invención que se hicieron ya sea individualmente o como bibliotecas por un proceso según se muestra anteriormente .

Tabla Al (Fórmula I) Tabla IB (Fórmula II Un procedimiento que puede utilizarse para preparar las bibliotecas de los compuestos de las Fórmulas (I) y (II) se muestra abajo (Esquema C) .

W -==-TES ^o PdGI2(PPh3)2 -te R2C0C1 2nClz Esquema C Este proceso incluye la producción de los compuestos de la Fórmula (II) como penúltimos compuestos en la síntesis de los compuestos de la Fórmula (I) . Sin embargo, según se observará de los datos de prueba que siguen, los compuestos de la Fórmula (II) no son meramente productos intermedios sino varios demuestran actividad, así también.

Formulación y Administración Los compuestos de la invención que inhiben las interacciones entre el dominio PDZ de una proteína y otras proteínas pueden administrarse a un paciente o sujeto en dosis eficaces para proporcionar la inhibición deseada, o en dosis terapéuticamente eficaces para prevenir, tratar, o controlar las condiciones, por ejemplo, para actuar como fármacos neuroprotectores y agentes anti-tumorales . Las composiciones que contienen las sustancias se administran a un paciente o sujeto en una cantidad suficiente para producir una respuesta terapéutica efectiva en el paciente. Una cantidad adecuada para lograr esta se define como una "cantidad inhibidora efectiva", una "dosis terapéuticamente efectiva" o una "cantidad terapéuticamente efectiva" . La dosis o cantidad se determinará por la eficacia de la sustancia activa particular empleada y la condición del sujeto. El tamaño de la dosis también se determinará por la existencia, naturaleza, y grado de cualquiera de los efectos secundarios que acompañan a la administración de un compuesto en particular en un sujeto en particular. Típicamente, el paciente o sujeto es humano. Sin embargo, el paciente o sujeto puede ser un mamífero no humano (por ejemplo, un primate, un ratón, un cerdo, una vaca, un gato, una cabra, un conejo, una rata, un conejillo de indias, un hámster, un caballo, una oveja, un perro, un gato y lo similar) , y puede ser macho o hembra . La toxicidad y la eficacia terapéutica de los compuestos pueden determinarse por procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, al determinar la LD50 (la dosis letal a 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en 50% de la población) . La proporción de dosis entre los efectos terapéuticos y tóxicos se encuentra en el índice terapéutico y pueden expresarse como la proporción, LD50/ED5o - Los compuestos que muestran grandes índices terapéuticos, se prefieren. Mientras que los compuestos que muestran efectos secundarios tóxicos pueden utilizarse, deberá tenerse cuidado para diseñar un sistema de suministro que tenga como objetivo tales compuestos al sitio de tejido afectado para minimizar el daño potencial a las células normales y reducir de tal modo los efectos secundarios. Los datos obtenidos de los ensayos de cultivo celular y los estudios de animal pueden utilizarse para formular un rango de dosificación para utilizarse en humanos . La dosificación de tales compuestos recae preferentemente dentro de un rango de concentraciones circulantes que incluyen la ED50 con poca o nada de toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración. Para cualquier compuesto utilizado en los métodos de la invención, la dosis terapéuticamente efectiva puede estimarse inicialmente de los ensayos de cultivo celular. Una dosis puede formularse en modelos de animal para lograr un rango de concentración de plasma circulante que incluya la IC50 (la concentración del compuesto de prueba que logra una inhibición máxima media de síntomas) según se determina en el cultivo celular. Tal información puede utilizarse para determinar más exactamente las dosis útiles en humanos. Los niveles en el plasma pueden medirse, por ejemplo, por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) . Las composiciones farmacéuticas para utilizarse en la presente invención pueden formularse por técnicas estándar que utilizan uno o más excipientes o vehículos fisiológicamente aceptables. Los compuestos y sus solvatos y sales fisiológicamente aceptables pueden formularse para la administración mediante cualquier vía adecuada, incluyendo vía inhalación, localmente, sublingualmente, intranasalmente, oralmente, parenteralmente (por ejemplo, intravenosamente, intraperitonealmente, intramusculármente, subcutáneamente, intravesicalmente o intratecalmente) , o mucosamente (incluyendo intranasalmente, oralmente y rec almente) . Para la administración sublingual u oral, las composiciones farmacéuticas de las composiciones de la invención pueden tomar la forma de, por ejemplo, pastillas, tabletas o cápsulas preparadas por medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables, incluyendo aglutinantes, por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona, o hidroxipropil metilcelulosa; materiales de relleno, por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, o fosfato de hidrógeno de calcio; lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, talco, o sílice; desintegrantes, por ejemplo, almidón de papa o glicolato de almidón de sodio,-o agentes humectantes, por ejemplo, sulfato de laurilo de sodio. Las tabletas pueden revestirse por métodos bien conocidos en la materia. Las preparaciones líquidas para la administración oral pueden tomar la forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes, o suspensiones, o pueden presentarse como un producto seco para constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de utilizarse. Tales preparaciones líquidas pueden prepararse por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, agentes de suspensión, por ejemplo, sorbitol, jarabe, derivados de celulosa, o grasas comestibles hidrogenadas; agentes emulsificantes, por ejemplo, lecitina o acacia; vehículos no acuosos, por ejemplo, aceite de almendra, esteres aceitosos, alcohol etílico, o aceites vegetales fraccionados; y conservadores, por ejemplo, metil o propil-p-hidroxibenzoatos o ácido ascórbico . Las preparaciones también pueden contener sales reguladoras, saborizantes, colorantes, y/o edulcorantes según sea adecuado. Si se desea, las preparaciones para la administración oral pueden formularse de manera adecuada para dar la liberación controlada del compuesto activo. Para la administración por inhalación, los compuestos pueden suministrarse convenientemente en la forma de una presentación de rociador de aerosol de envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono, u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosis puede determinarse al proporcionar una válvula para suministrar una cantidad medida. Las cápsulas y los cartuchos de, por ejemplo, gelatina para utilizarse en un inhalador o insuflador pueden formularse conteniendo una mezcla en polvo del compuesto y una base en polvo adecuado, por ejemplo, lactosa o almidón. Los compuestos pueden formularse para la administración parenteral por inyección, por ejemplo, por inyección de bolo o infusión continua. Las formulaciones para la inyección pueden presentarse en forma de dosis de unidad, por ejemplo, en ampolletas o en contenedores de múltiples dosis, con un conservador agregado. Las composiciones pueden tomar tales formas como suspensiones, soluciones, o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden contener agentes formuladores, por ejemplo, agentes de suspensión, estabilizadores, y/o dispersantes. Alternativamente, el ingrediente activo puede encontrarse en forma de polvo para la constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua libre de pirógeno estéril, antes de utilizarse . Las composiciones de la invención pueden también formularse en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, conteniendo bases de supositorio convencionales tales como manteca de coco u otros glicéridos . Las composiciones de la invención también pueden formularse para la administración transdérmica. Para la administración transdérmica, los compuestos activos se formulan en pomadas, ungüentos, geles, o cremas según se conocen generalmente en la materia. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración transdérmica pueden proporcionarse como parches discretos pretendidos para permanecer en contacto íntimo con la epidermis por un período prolongado de tiempo. Si las composiciones de la invención son para administrarse localmente, las composiciones pueden formularse en la forma de, por ejemplo, una pomada, crema, parche transdérmico, loción, gel, rociador, aerosol, solución, emulsión, u otra forma bien conocida por un experto en la materia. Para las formas de dosificación local no rociables, las formas sólidas o semi-sólidas viscosas que comprenden un vehículo o uno o más excipientes compatibles con la aplicación local y que tienen una viscosidad dinámica preferentemente mayor al agua, se emplean típicamente. Las formulaciones adecuadas incluyen, sin limitación, soluciones, suspensiones, emulsiones, cremas, pomadas, polvos, linimentos, ungüentos, y lo similar, los cuales son, si se desea, esterilizados o mezclados con agentes auxiliares (por ejemplo, conservadores, estabilizadores, agentes humectantes, reguladores, o salas) para influir en varias propiedades, tales como, por ejemplo, presión osmótica. Otras formas de dosificación local adecuadas incluyen preparaciones de aerosol rociables en donde el ingrediente activo, preferentemente en combinación con un vehículo inerte líquido o sólido, se envasa en una mezcla con un volátil presurizado (por ejemplo, un propulsor gaseoso, tal como Freon) , o en una botella a presión. Las emulsiones hidratantes o humectantes pueden también agregarse a composiciones farmacéuticas y formas de dosificación si se desea. Los ejemplos de tales ingredientes adicionales se conocen bien en la materia . Las composiciones pueden también incluirse en un dispositivo para suministro transdérmico tal como un parche para piel o un dispositivo más complejo. Los compuestos también pueden formularse como una preparación de depósito. Tales formulaciones de acción duradera pueden administrarse por implantación (por ejemplo, subcutáneamente o intramuscularmente) o por inyección intramuscular. De esta manera, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con materiales hidrofóbicos o poliméricos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados poco solubles, por ejemplo, como una sal poco soluble. Las composiciones también pueden encontrarse en la forma de composiciones de liberación sostenida o liberación controlada según se conoce en la materia, por ejemplo, en aglomerantes de microcápsulas o microesferas poliméricas inyectables biodegradables o no biodegradables, en liposomas, en emulsiones, y lo similar. Las composiciones, si se desea, pueden presentarse en un dispositivo distribuidor o envase que puede contener una o más formas de dosis de unidad que contiene el ingrediente activo. El envase puede, por ejemplo, comprender oropel de plástico o metálico, por ejemplo, un envase con burbujas. El envase o dispositivo distribuidor puede acompañarse por instrucciones para la administración . Dependiendo de su naturaleza química y física, los compuestos de la invención pueden incluirse en las composiciones y administrarse al paciente por sí mismo, o en otra forma tal como una sal, solvato, complejo, quelato u otro derivado según sea adecuado o según sea necesario para la buena formulación o administración de la sustancia. De igual forma, un profármaco de la sustancia puede incluirse en las composiciones, es decir, una sustancia que libera la sustancia activa ya sea en la preparación de la composición o en la administración de la composición al paciente o sujeto. Según se menciona anteriormente, esta invención también proporciona métodos terapéuticos para tratar el cáncer que comprende administrar uno o más compuestos de la invención, o una composición que contiene la misma, al paciente. El método puede además comprender administrar al paciente un segundo agente terapéutico, tal como un agente quimioterapéutico o terapia de radiación. El cáncer que se trata puede ser un cáncer de mama, un cáncer colorectal, un cáncer de pulmón, un sarcoma, un mesotelioma, un cáncer de próstata, un cáncer pancreático, un cáncer cervical, un cáncer ovárico, un cáncer gástrico, un cáncer esofageal, un cáncer de cuello y cabeza, un carcinoma hepatocelular, n melanoma, un glioma, un cáncer escamoso, o un glioblastoma. Al llevar a cabo la invención, un compuesto inhibidor único, o una combinación de los compuestos de acuerdo a esta invención puede administrarse a un paciente. Los compuestos eficaces pueden administrarse solos o en combinación con (o en proximidad de tiempo a) otros agentes terapéuticos administrados para propósitos terapéuticos o similares, por ejemplo, administración de un compuesto de acuerdo a esta invención junto con un adyuvante u otro agente anti-inflamatorio. De igual forma, las composiciones que contienen uno o más de los compuestos de esta invención pueden también contener otros agentes terapéuticos o farmacéuticos . La presente invención también incluye grupos para probar sustancias para la interacción con o inhibición de dominios PDZ. Típicamente, tales grupos se utilizarán para probar las bibliotecas u otras de combinación. Los grupos comprenderán equipo estándar tal como una placa, que contendrá los compuestos colocados sobre la superficie de la placa, por ejemplo, en cavidades o unidos a ciertas ubicaciones sobre la superficie . Una placa o grupo puede contener los compuestos de un tipo único o puede contener diferentes compuestos, ubicados en una forma precolocada. En un aspecto, por lo tanto, la invención proporciona ensayos in Vi tro, ex vivo, e in vivo para inhibidores de proteínas que tienen dominios PDZ o para estudiar la inhibición de la actividad de un dominio PDZ dado o una proteína que contiene uno. En particular, los ensayos pueden utilizarse para probarse para compuestos que poseen esta actividad para probarse para la unión a, o inhibición de la actividad de, dominios PDZ. Típicamente, en tales ensayos, el compuesto o los compuestos a probar se contactan con la proteína que tiene un dominio PDZ y pruebas adecuadas se llevan a cabo para lograr si la actividad normal de ese dominio se ha inhibido. Por ejemplo, los resultados del ensayo pueden compararse a un ensayo de control que comprende la proteína sola, sin el (los) compuesto de prueba, utilizando cualquier actividad conocida de la proteína como el estándar de comparación. Alternativamente, la selección de un compuesto para la inhibición de actividad del dominio PDZ de una proteína puede comprender poner en contacto tal proteína o una célula que contiene o que la expresa con un compuesto de la invención y detectar la unión específica del compuesto al dominio. La detección puede llevarse a cabo por medio de un método tal como electroforesis capilar, transferencia Western, espectroscopia de masa, ELISA, inmunocromatografía, o inmunohistoquímica. La unión de los compuestos de prueba a dominios PDZ de proteínas puede realizarse en solución, en una membrana bicapa, unida a una fase sólida, en una monocapa lípida, o en vesículas. La unión de los compuestos de prueba pueden probarse al medir u observar cambios en la actividad o, por ejemplo, cambios en características espectroscópicas o en propiedades de solubilidad o cromatográficas . La unión de los compuestos de prueba también puede lograrse en ensayos de unión competitivos, por ejemplo, al lograr si los compuestos de prueba no marcados previenen la interacción entre la proteína y un derivado fluorescente o biotinilado de un compuesto de referencia. Los ensayos que forman un aspecto de esta invención pueden diseñarse para seleccionar grandes bibliotecas químicas para la inhibición de una o más de las proteínas que utilizan etapas de ensayo automáticas, las cuales se ejecutan típicamente en paralelo (por ejemplo, en formatos de microconcentración en placas de microconcentración en ensayos robóticos) . En una modalidad preferida, se utilizan los métodos de selección de alto rendimiento que incluyen proporcionar una química de combinación u otra biblioteca que contiene un gran número de compuestos inhibidores potenciales. Tales bibliotecas se seleccionan así en uno o más ensayos, según se describe en la presente, para identificar aquellos miembros de biblioteca (ya sea subclases o especies químicas particulares) que muestran la actividad deseada. Cuando se selecciona para los moduladores, un resultado de ensayo positivo no necesita indicar que el agente de prueba particular es un buen farmacéutico . A su vez, un resultado de prueba positivo puede simplemente indicar que el agente de prueba puede utilizarse para inhibir la actividad de un dominio PDZ de una proteína. Los compuestos identificados de esta manera pueden servir como "compuestos de plomo" convencionales para el descubrimiento de inhibidor de dominio PDZ o pueden utilizarse por sí mismos como terapéuticos actuales o potenciales.

De esta manera, otro aspecto de esta invención recae en bibliotecas, tales como bibliotecas combinatorias, de compuestos que se producen para probarse en base a la actividad, es decir, la inhibición de un dominio PDZ según se describe en la presente, dentro de las definiciones generales de los compuestos en la presente, tales como las Fórmulas (I) y (II) . Una biblioteca química combinatoria es una colección de tales compuestos químicos generados ya sea por síntesis química o síntesis biológica, al combinar un número de "bloques de construcción" química tales como reactivos . Por ejemplo, una biblioteca química combinatoria lineal se forma al combinar un grupo de bloques de construcción química en cada manera posible para un tipo de compuesto dado. Los dispositivos para la preparación de bibliotecas combinatorias se encuentran comercialmente disponibles (véase, por ejemplo, 357 MPS, 390 MPS, Advanced Chem Tech, Louisville KY, Symphony, Rainin, Woburn, MA, 433A Applied Biosystems, Foster City, CA, 9050 Plus, Millipore, Bedford, MA) . Las bibliotecas químicas que contienen una multiplicidad de compuestos de las Fórmulas (I) o (II) , respectivamente, son un aspecto de esta invención y pueden sintetizarse al conducir síntesis paralelas según se describe anteriormente para los compuestos individuales . Los compuestos utilizados en la selección o prueba para la inhibición del funcionamiento de dominio PDZ se soportan típicamente en un soporte inerte sólido, el cual puede ser un particulado o no particulado. Típicamente, la inmovilización se logra por unión covalente o de otra forma de los compuestos al material de soporte sólido. El enlace puede hacerse por medio de una porción que es parte de la composición química del soporte o que se une al mismo, por ejemplo, para proporcionar una superficie activada (por ejemplo, en el caso de vidrio) . Numerosos tipos de soportes sólidos adecuados para inmovilizar los compuestos, se conocen en la materia. Estos incluyen nylon, nitrocelulosa, agarosa activada, celulosa diazotizada, partículas de látex, plástico, poliestireno, superficies revestidas de polímero y vidrio. Estos soportes sólidos se utilizan en varios formatos tales como membranas, placas de microconcentración, perlas, medidores, pegamentos, etc. Una amplia variedad de procedimientos químicos se conocen por unir covalentemente varios compuestos directamente o a través de un enlazador a estos soportes sólidos . Típicamente, el uso de cualquier soporte sólido requiere la presencia de un grupo nucleofílico para reaccionar con un compuesto que puede contener un "grupo reactivo" capaz de reaccionar con el grupo nucleofílico. Alternativamente, un "grupo reactivo" se presenta o se introduce en el soporte sólido para reaccionar con un nucleófilo presente en o unirse al oligonucleótido. Los grupos nucleofílicos adecuados o porciones incluyen grupos hidroxilo, sulfhidrilo, amino y carboxilo activado, mientras que los grupos capaces de reaccionar con estos y otros nucleófilos (grupos reactivos) incluyen grupos diclorotriazinilo, alquilepoxi, maleimido, bromoacetilo y otros. Los procedimientos químicos para introducir los grupos reactivos o los nucleofílicos sobre soporte sólido se conocen en la materia, e incluyen procedimientos para activar nylon (Pat. de EE.UU. No. 5,514,785), vidrio (Rodgers et al . , Anal. Biochem., 23-30 (1999)), agarosa (Highsmith et al . , , J. , Biotechniques 12:418-23 (1992) y poliestireno (Gosh et al . , Nuc . Acid.

Res. 15:5353-5372 (1987)). Dependiente de la presente de ya sea un grupo nucleofílico o reactivo sobre el soporte sólido y en el compuesto de prueba, el acoplamiento puede ya sea realizarse directamente o con reactivos bifuncionales . Los reactivos de acoplamiento o bifuncionales se conocen bien en la materia y varios se encuentran disponibles de fuentes comerciales . Típicamente, las superficies de vidrio se activan por la introducción de grupos amino-, sulfhidrilo-, carboxilo-, o epoxilo- al vidrio utilizando el reactivo de siloxano adecuado. Específicamente, la inmovilización de los ordenamientos de oligonucleótido o ue 2 etapas 79% Esquema D Metil (4 -amino-5 -yodo-2 -metil) benzoato (4) Una mezcla de 2-yodo-5-nitrotolueno (1, 10 g) , trietilamina (16 mL) , acetato de paladio (68 mg) , metanol (20 mL) y DMF (10 mL) se agitó a 90 °C durante la noche bajo atmósfera de monóxido de carbono (1 atm) . La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (200 mL) , se lavó con agua dos veces (100 mL cada una) seguida por agua salada (100 mL) , se secó (Na2S0 ) , y se evaporó. El residuo se filtró a través de una almohadilla corta de gel de sílice y se evaporó para dar 2 como un aceite crudo. Una mezcla de 2, etanol (140 mL) , agua (2 mL) , monohidrato de hidracina (3.8 mL) , tricloruro férrico (0.17 g) y carbón vegetal (0.1 g) se agitó bajo reflujo por 3 horas. La mezcla de reacción se filtró, se diluyó con acetato de etilo (200 mL) , se lavó con agua dos veces (100 mL cada una) seguida por agua salada (100 mL) , se secó (Na2S04) , y se evaporó. El residuo se filtró a través de una almohadilla corta de gel de sílice y se evaporó para dar 3 como un aceite crudo. A una mezcla de 3, metanol (33 mL) , carbonato de calcio (10 g) , solución de monocloruro de yodo (33 mL, 1M en diclorometano) se agregó lentamente a 4°C y se agitó durante la noche a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró, se diluyó con acetato de etilo (200 mL) , se lavó con solución de sulfito de sodio acuoso (100 mL) , seguida por agua salada (100 mL) , se secó (Na2S04) , y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía de columna (gel de sílice 0.2 L, eluyente: 10% de acetato de etilo en hexanos) y se evaporó para dar 4 (4.3 g) como cristales de café pálido. XH NMR (CDC13, 400 MHz) 5 8.28 (s, ÍH) , 6.54 (s, ÍH) , 4,39 (s amplio, 2H) , 3.84 (s, 3H) , 2.50 (s, 3H) . Metil (2-l(l-oxopentil) -3- (2-feniletil) -6-metil) indol-5 -carboxilato (7) Una mezcla de 4 (250 mg) , l-trietilsilil-4-fenilbutina (5, 320 mg) , acetato de paladio (30 mg) , carbonato de sodio (450 mg) , y se DMF desgasificado (2 L) se agitó a 100 °C bajo atmósfera de argón por 5 horas . La mezcla de reacción se filtró a través de fluorisil, se eluyó con 20% de acetato de etilo/hexanos y se evaporó para lograr indol 6 como un amorfo. A una mezcla de 6, diclorometano (3 mL) y cloruro de valerilo (0.52 ml) , cloruro de zinc (1M en solución de éter de dietilo, 0.77 mL) se agregó lentamente a 4°C, y se agitó a 4°C por 3 horas. La mezcla de reacción se trató con metanol (3 mL) , se diluyó con acetato de etilo (30 mL) , se lavó con agua dos veces (10 mL cada una) , carbonato de sodio acuoso (10 mL) seguida por agua salada (10 mL) , se secó (Na2S04) , y se evaporó. El residuo crudo se lavó con hexanos para dar 7 (165 mg) como un sólido café. Mp 145-147°C; 1H NMR (CDC13, 400 MHz) d 8.87 (s, ÍH) , 8.32 (s, 1H) , 7.30-7.20 (m, 3H) , 7.19 (s, ÍH) , 7.14 (d, J=l .6 Hz, 2H) , 3.93 (s, 3H) , 3.39 (t, -=8.4 Hz , 2H) , 3.01 (t, J"=7.2 Hz, 2H) , 2.74 (t, J=1 . G Hz, 2H) , 2.71 (s, 3H) , 1.68 (quíntete, J=7.6 Hz, 2H) , 1.68 (dt, J"=7.6 Hz, 15.2 Hz, 2H) , 0.95 (t, <J=7.2 Hz, 3H) . Ácido (2- (1-Hidroxipentil) -3- (2-feniletil) - 6 - etil) indol-5-carboxílico (9) Una mezcla de 7 (210 mg) , metanol (2 mL) , 1,4-dioxano (2 mL) y 10% de solución de hidróxido de sodio acuoso (0.90 mL) se calentó a 90°C por 3 horas para dar una solución de 8. El borohidruro de sodio (210 mg) se agregó a la solución a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante la noche, se diluyó con acetato de etilo (30 mL) , se lavó con agua salada (10 mL) , se secó (Na2S0 ) , y se evaporó. El residuo crudo se filtró a través de fluorisil, se eluyó con 40% de acetato de etilo/hexanos y se evaporó. El residuo se lavó con hexanos para dar 9 (161 mg) como cristales café pálido.

Mp 161-163°C; XH NMR (CDC13, 400 MHz) d 10 (amplio, ÍH) , 8.45 (s, ÍH) , 8.10 (s, ÍH) , 7.3-7.1 (m, 3H) , 7.18 (s, ÍH) , 6.98 (d, J"=6.8 Hz, 2H) , 4.39 (t, J"=7.2 Hz, 1H) , 3.19-2.87 (m, 4H) , 2.77 (s, 3H) , 1.78-1.05 (m, 6H) , 0.84 (t, "=6.8 HZ) . EXPRESIÓN DE PROTEÍNA Un plásmido que consiste de una construcción de fusión GST del segundo dominio PDZ de MAGI-3 se obtuvo de Genentech. El plásmido se transformó en células BL21 DE3 , crecidas a 37°C a una O.D.6oo de 0.8, y se indujo con 1 mM de IPTG. Después de tres horas, las células se colectaron, se destruyeron por lisinas, y la proteína se purificó a través de una mezcla de perlas de sefarosa glutationa (Pharmacia) . La proteína se dializó en el regulador de ensayo (35 M de HEPES a pH 7.4, 0.01% de tritón X-100, 10% de glicerol) y se concentró con 10,000 MW de filtros de Centricon cortado (Waters) . La pureza de proteína se verificó por SDS-PAGE con tintado de plata y Coomassie. La cuantificación de la proteína se hizo con el protocolo BCA por Pierce. La proteína se almacenó en el regulador de ensayo a -80°C. GST solo puede expresarse, purificarse y almacenarse en la misma manera. Ensayo de Unión Un ensayo de competencia de polarización de fluorescencia se utilizó para detectar la unión de los compuestos a MAGI-3 PDZ2. Una secuencia de terminal carboxi marcada con fluoresceína de PTEN, OregonGreen™-PFDEDQHTQITKV-COOH, se utilizó como una prueba. Para un control positivo, elegimos PFDEDQHTQITWV-COOH, la secuencia de péptido de afinidad más alta para MAGI-3 PDZ2 conocida. Para sintetizar el péptido marcado utilizamos las condiciones Fmoc estándar en resina Wang para construir un péptido de 13 residuos . Un ciclo de acoplamiento típico incluye la desprotección del aminoácido de terminal con 20% de piperidina en DMF seco, lavando la resina 2-3 veces con DMF después cloruro de metileno y ambos nuevamente, y determinando la existencia de amina libre por prueba kaiser ninhidrina. Una mezcla que contiene el reactivo de acoplamiento 2.4 equivalentes de HBTU, el siguiente aminoácido de terminal N a agrega al péptido creciente 2.5 equivalentes de aminoácido protegido Fmoc, 5 equivalentes de DIEA en DMF seco. El aminoácido se acopló durante 2-3 horas y la prueba kaiser se utilizó para determinar el cumplimiento. Las etapas de acoplamiento se repitieron si se dio como resultado una prueba kaiser positiva. Este método se utilizó para cada residuo del péptido. El péptido acabado se dividió de la resina con 95% de TFA con un cocktail de limpiadores incluyendo tioanisol y fenol. El péptido se precipitó con éter y se liofilizó. Los péptidos se purificaron utilizando HPLC y se identificaron con espectrometría de masa MALDI . Los resultados se muestran en la Figura 1. Para detectar la unión de los compuestos al dominio PDZ2de la proteína MAGI-3, un ensayo de polarización de competencia se empleó. El regulador incluyó 35 mM de HEPES a pH 7.4, tritón X-100 0.01%, y 10% de glicerol. La proteína se agregó a una concentración final de 300 nM y la sonda, 10 nM. El competidor se agregó así al rango de concentración final de 10 pM a 300 µM. Los triplicados de las muestras en un volumen total de 20 µL se transfirieron a la placa opaca Corning de 384 cavidades para el análisis. La polarización de fluorescencia se midió en equilibro por el lector de placas LJL Biosystems. La información de competencia se fijo a una expresión de competencia de un sitio y los valores IC50 de los compuestos de no péptido se compararon. Efectos Apoptóticos de los compuestos en la sobreexpresión de células cancerígenas Dyl El compuesto 1 de la Tabla 1A se probó para efectos apoptóticos para representar los efectos inhibidores de los compuestos en la interacción entre el dominio PDZ de la proteína Dishevelled (Dvl) y la proteína Fz (receptor Wnt) . Las líneas celulares H513 y H1703 se utilizaron, con el compuesto de prueba que se aplica a 0 (control) , 10 µM y 100 µM. Los resultados se muestran en la Tabla 2. Tabla 2 Inhibición de crecimiento de célula cancerígena humana in vivo El compuesto 1 (Ejemplo 1) se probó para la eficiencia antitumoral que se utiliza en estudios in vivo con ratones desnudos con deficiencia inmune con xenoinjertos de célula cancerígena humana. La línea celular de melanoma humano LOX a 8x10S células/animal y línea de célula de carcinoma de pulmón humano H460 se inyectó a 106 células/animal. Las líneas celulares cancerígenas humanas se ajustaron en 100 µL de volumen con medio de cultivo celular normal y se inyectaron s.c. en ratones desnudos en el área dorsal . Después de la inyección, los xenoinjertos de célula cancerígena se permitieron crecer por 7 días . Después de eso, los ratones se agruparon al azar con cada grupo consistiendo de 8 animales (n=8) . Los animales se etiquetaron individualmente con etiquetas de orejeta. El compuesto 1 se disolvió en agua y se almacenó en alícuotas y se almacenó a -80 °C antes de utilizarse. La dosis utilizada para la inyección se calculó como 50 tng/kg de peso corporal . El peso corporal de ratón promedio fue 20 g +/- 0.5 g. La cantidad de compuesto de prueba (1 mg) se ajustó a 80 µL con PBS, y se inyectó (i.p.) diariamente por 14 días. Los controles fueron PBS solo. El tamaño del tumor y el peso corporal de ratón se midieron una semana después de la primera inyección. Los resultados mostraron que al final de las dos semanas con la inyección del Compuesto 1 (véase tabla 2) , el tamaño de tumor de la inyección se redujo por 66% en xenoinjertos LOX y 20% en xenoinjertos H460 según se compara con controles PBS . Los pesos corporales de ratón promedio fueron 24.5 g para controles PBS y 22.2 g para los animales inyectados con el Compuesto 1. Los resultados se muestran en la Tabla 3. Tabla 3 En una prueba similar subsecuente, el Compuesto 1 se probó para la eficiencia antitumoral utilizando estudios in vivo con ratones desnudos con deficiencia inmune cubiertos con xenoinjertos de célula cancerígena humana . La línea celular de melanoma humana LOX se inyectó a 8000 células/animal y línea celular de carcinoma de pulmón humano H460 se inyectó a 1000000 células/animal . Las líneas celulares cancerígenas humanas se ajustaron en 100 µl de volumen con medio de cultivo celular normal y se inyectaron s . s . en ratones desnudos en el área dorsal. Después de la inyección, los xenoinj ertos de célula cancerígena se permitieron crecer por 7 días. Después de eso, los ratones se agruparon al azar con cada grupo consistiendo de 8 animales (n=8) . Los animales se etiquetaron individualmente con etiquetas de orej eta . El compuesto 1 se disolvió en agua como sal sódica. La dosis utilizada para la inyección se calculó como 50 mg/kg de peso corporal. El peso corporal de ratón promedio fue 24.2 g +/- 3.2 g. El 1 mg del compuesto 1 se ajustó a 80 µL con PBS, y se inyectó (i.p.) diariamente por 14 días. Los controles fueron PBS solo . El tamaño de tumor y el peso corporal de ratón se midieron una vez a la semana después de la primera inyección. Los resultados mostraron que al final de las dos semanas con inyección del Compuesto 1 (Tabla ÍA) , el tamaño de tumor de la inyección se redujo por 82% en xenoinjertos LOX y 34% en xenoinjertos H460 según se compara con los controles PBS . Los pesos corporales de ratón promedio fueron 25.0 g para controles PBS y 22.2 g para animales inyectados FJ-9. Los resultados se resumen en la Tabla 4. Tabla 4 El compuesto 1 y otros compuestos de las Tablas ÍA y IB se probaron de igual forma para los efectos apoptóticos para representar los efectos inhibidores de los compuestos en interacción entre el dominio PDZ de la proteína Dishevelled (Dvl) y la proteína Fz (receptor Wnt) . Las líneas celulares H460 y LOX se utilizaron, con el compuesto de prueba que se aplica a 10 µM por 3 días. Las células cultivadas tratadas con los compuestos de prueba en el medio de cultivo se colectaron por tripsinización y se tintaron utilizando un equipo de detección de apoptosis Annexin V FITC (Oncogene Science, Cambridge, MA) , de acuerdo al protocolo del fabricante. Las células tintadas se analizaron inmediatamente por citometría de flujo (FACScan; Becton-Dickinson, Franklin Lake, NJ) . Los resultados se muestran en la Tabla 5. Tabla 5 Otras proteínas que son objetivos de los compuestos de esta invención, particularmente para actividad anti-tumoral, incluyen EPB50, ZO-1, nNOS, ERBIN y MUPP1. Se entiende que los ejemplos y las modalidades descritas en la presente son para propósitos ilustrativos solamente y que varias modificaciones o cambios a la luz de la misma se sugerirán para personas expertas en la materia y se incluirán dentro del espíritu y ámbito de esta aplicación y alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones, patentes, y solicitudes de patentes citadas en la presente se incorporan en la presente para referencia en su totalidad para todos los propósitos .

Claims

REIVINDICACIONES Un compuesto que tiene la fórmula
(I) (11)
ODQ) en la cual : n es 0 , 1 o 2 ; Xi es NH, N(CH3), CH2, CH(CH3), C(CH3)2, O, S, S(O) , o S02; R0 se selecciona del grupo que- consiste de alquilo C1-C3, ciclopropilo, halo, OR5 y S(0)mR5 en la cual m es 0 , 1 o 2 ;
Rx y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de alquenilo C2-C8, fenilciclopropilo, fenilpropenilo, Re-X2-C (R8) (R8) - 7- R6-X2-N (Rß) -R7- , y
R10X3R7- ; R3 y R4 son independientemente hidrógeno, metilo o etilo; R5 es metilo o etilo; R6 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo C?-C?0, arilo, W, Y, NH2/ NHCONR3R4, NHCOOR3 y NHS02R9; R7 se selecciona del grupo que consiste de un enlace directo, un grupo alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, arilo, - (NH) p (CH2CH20) q (NH) p- en la cual p es 0 o 1 y g es un entero de 1 a 4, y W; R8 se selecciona del grupo que consiste de H, Y,
OH, -NHC0NR3R4; -NHC00R3; -NHS02R9, - (CH2) rC02R3 , y (CH2) rC0NR3R en la cual r es un entero de 1 a 3 ; R9 es arilo o alquilo C?-C6; Rao se selecciona de alquilo L-CIO; arilo y W; X2 se selecciona del grupo que consiste de un enlace directo, -NH-, -N(CH3)-, -NC0NR3R4, -NC00R3, y -NSO2R9 ; X3 se selecciona de O, S, SO y S02; W es un grupo heterocíclico o carbocíclico saturado;
Y se selecciona del grupo que consiste de COOH, COOR3, CONR3R4, CONHS02R5/. hidroximetilo, -CH2COOH, CH2C0NR3R4; y 5-tetrazolilo; e hidratos y sales de los mismos, y derivados etiquetados de los mismos. 2. Un compuesto de la Fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1. 3. Un compuesto de la Fórmula (II) de acuerdo con la reivindicación 1. 4. Un compuesto de la Fórmula (III) de acuerdo con la reivindicación 1. 5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual n es 0. 6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual Xx es NH . 7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual X2 es O.
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual Xx es S .
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual Xx es NCH3 o N(C2H5)
10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Y es COOH o C00R3.
11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual R0 es un grupo alquilo C1-C3.
12. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9 en el cual Ro es metilo.
13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx y R2 se seleccionan independientemente de cicloalquilo C3-C6 y alquilo Cx-C2o opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo.
14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx y R2 se seleccionan independientemente de cicloalquilo C3-C6 y alquilo Cx_C?0 opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo.
15. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx y R2 se seleccionan independientemente de cicloalquilo C3-C6 y alquilo Cx-C8 opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo.
16. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx y R2 se seleccionan independientemente de cicloalquilo C3-C3 y alquilo C3-C8 opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo.
17. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx y R2 se seleccionan independientemente de alquilo C3-C8, cicloalquilo C3-C6, - (CH^mCgHs en donde m es 0 o un entero de 1 a 3 , y un grupo alquilo Cx-C3 sustituido con un grupo cicloalquilo C3-C3.
18. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx es fenetilo opcionalmente sustituido .
19. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx es 2 -hidroxietilo .
20. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx es fenilo.
21. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual Rx es un grupo butilo.
22. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual R2 es un grupo butilo.
23. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 20 en el cual R2 se selecciona de cicloalquilo C3-C6, alquilo Cx-C3 sustituido por un grupo cicloalquilo C3-C3, -(CH2)mC6H5 en donde m es 0 o un entero de 1 a 3 , un alquilo C3-C8 opcionalmente sustituido por un grupo fenilo, cicloalquilo, carboxilo o hidroxilo.
24. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual R2 es n-butilo o fenetilo.
25. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual R2 es RS-X2-C(R8) (R8) -R7 o R6-X2-N(R8) -R7-, y el grupo Rß-X2-C (R8) (R8) -R7- o RS-X2-N(R8)-R7- se selecciona de alquilo C3-C8; cicloalquilo C3-Ce; alquenilo C3-C8; -(CH2)mC6H5 en donde m es 0 o un entero de 1-3; -CH2OCsH5, CH2COC6H5, fenil (alquenilo C2-C4) , o residuos análogos que tienen grupos fenilo sustituidos ,-fenilciclopropilo opcionalmente sustituido; -(CH2)sOH, (CH2)sCONH2 y -(CH2)sCOOH en donde s es un entero de 1 a 3; fenilo; tienilo; y cicloalquilo C3-C6- (alquilo Cx-C3) opcionalmente sustituido.
26. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual R0 es metilo, Rx es fenetilo, R2 es n-butilo, Xx es -NH, Y es COOH y n es 0.
27. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual R0 es metilo, Rx es fenetilo, R2 es fenetilo, Xx es -NH, Y es COOH y n es 0.
28. Una sonda que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 y una etiqueta detectable .
29. Un método para inhibir el funcionamiento de un dominio PDZ de una proteína que comprende poner en contacto la proteína con una cantidad efectiva inhibidora de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.
30. Un método para inhibir el funcionamiento de un dominio PDZ de una proteína que comprende poner en contacto la proteína con una cantidad efectiva inhibidora de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2.
31. Un método para inhibir el funcionamiento de un dominio PDZ de una proteína que comprende poner en contacto la proteína con una cantidad efectiva inhibidora de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3.
32. Un método para inhibir el funcionamiento de un dominio PDZ de una proteína que comprende poner en contacto la proteína con una cantidad efectiva inhibidora de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4.
33. Un método para inhibir el funcionamiento de un dominio PDZ de una proteína que comprende poner en contacto la proteína con una cantidad efectiva inhibidora de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 25.
34. Un método de acuerdo con la reivindicación 29 en el cual la proteína es una proteína MAGI .
35. Una biblioteca combinatoria de dos o más compuestos que tienen la fórmula (D di) m en la cual : n es 0 , 1 o 2 ; Xx es NH, N(CH3), CH2, CH(CH3), C(CH3)2, O, S, S(O) , o S02; R0 se selecciona del grupo que consiste de alquilo Cx-C3, ciclopropilo, halo, 0R5 y S(0)mR5 en la cual m es 0 , 1 o 2 ; Rx y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de alquenilo C2-C8, fenilciclopropilo, fenilpropenilo, R6-X2-C (R8) (R8) -R7-, R6-X2-N (R8) -R7-, y RXoX3R7- ; R3 y R4 son independientemente hidrógeno, metilo o etilo; R5 es metilo o etilo; R6 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo Cx-Cxo, arilo, W, Y, NH2, NHCONR3R4, NHCOOR3 y NHSO2R9; R7 se selecciona del grupo que consiste de un enlace directo, un grupo alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, arilo, - (NH) p (CH2CH20) q(NH)p- en el cual p es 0 o 1 y q es un entero de 1 a 4, y W; R8 se selecciona del grupo que consiste de H, Y, OH, -NHCONR3R4; -NHCOOR3; -NHS02R9, - (CH2) rC02R3 , y (CH2) rCONR3R4 en la cual r es un entero de 1 a 3 ; R9 es arilo o alquilo CX~CS; Rx0 se selecciona de alquilo Cx-Cxo; arilo y W; X2 se selecciona del grupo que consiste de un enlace directo, -NH-, -N(CH3)~, -NCONR3R4, -NCOOR3, y - X3 se selecciona de O, S, SO y S02; W es un grupo heterocíclico o carbocíclico saturado ; Y se selecciona del grupo que consiste de COOH, C00R3, CONR3R4, CONHS02R5, hidroximetilo, -CH2COOH, CH2CONR3R4; y 5-tetrazolilo; e hidratos y sales de los mismos, y derivados etiquetados de los mismos .
36. Una biblioteca combinatoria de acuerdo con la reivindicación 35 en la cual los compuestos son de la Fórmula (I) .
37. Una biblioteca combinatoria de acuerdo con la reivindicación 35 en la cual los compuestos son de la Fórmula (II) .
38. Una biblioteca combinatoria de acuerdo con la reivindicación 35 en la cual los compuestos son de la Fórmula (III) .
39. Un método para la detección sistemática de una o más proteínas para la actividad del dominio PDZ que comprende poner en contacto la una o más proteínas con un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.
40. Un ordenamiento para la detección sistemática para la actividad del dominio PDZ o inhibición del mismo, o para estudiar las interacciones proteína-proteína que comprende dos o más compuestos de acuerdo con la reivindicación 1.
41. Un método para tratar un cáncer en células cancerígenas o en un paciente que comprende poner en contacto las células cancerígenas con, o administrar al paciente, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.
42. Un método para tratar un cáncer en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2.
43. Un método para tratar un cáncer en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3.
44. Un método para tratar un cáncer en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4.