[go: up one dir, main page]

ME03344B - Mono- ili di-supstituisani indoli kao inнibitori replikacije denga virusa - Google Patents

Mono- ili di-supstituisani indoli kao inнibitori replikacije denga virusa

Info

Publication number
ME03344B
ME03344B MEP-2019-37A MEP201937A ME03344B ME 03344 B ME03344 B ME 03344B ME P201937 A MEP201937 A ME P201937A ME 03344 B ME03344 B ME 03344B
Authority
ME
Montenegro
Prior art keywords
compound
fluoro
methoxyphenyl
mmol
enantiomer
Prior art date
Application number
MEP-2019-37A
Other languages
German (de)
English (en)
French (fr)
Inventor
Bart Rudolf Romanie Kesteleyn
Jean-François Bonfanti
Tim Hugo Maria Jonckers
Pierre Jean-Marie Bernard Raboisson
Dorothée Alice Marie-Eve Bardiot
Arnaud Didier M Marchand
Original Assignee
Janssen Pharmaceuticals Inc
Univ Leuven Kath
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=54207512&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ME03344(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Janssen Pharmaceuticals Inc, Univ Leuven Kath filed Critical Janssen Pharmaceuticals Inc
Publication of ME03344B publication Critical patent/ME03344B/me

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/12—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/14—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/42—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

EP3201177
MONO- ILI DI-SUPSTITUISANI INDOLI KAO INHIBITORI REPLIKACIJE DENGA VIRUSA
Opis
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na mono- ili di-supstituisana jedinjenja indola, i takođe se odnosi na pomenuta jedinjenja za upotrebu kao lek, poželjnije za upotrebu kao lek za tretman ili prevenciju infekcija denga virusa. Ovaj pronalazak se dalje odnosi na farmaceutske sastave ili kombinovane pripreme jedinjenja, na sastave ili pripreme za upotrebu kao lek, poželjnije za prevenciju ili tretman infekcija denga virusa. Takođe su opisani postupci za dobijanje jedinjenja.
STANJE TEHNIKE
[0002] Flavivirusi, koji se prenose od strane komaraca ili krpelja, izazivaju infekcije koje ugrožavaju život kod ljudi, kao što su encefalitis i hemoragijska groznica. Poznata su četiri različita, ali blisko povezana serotipa denga virusa, takozvani DENV1, -2, -3 i -4. Denga je endemska u većini tropskih i suptropskih regija širom sveta, uglavnom u urbanim i polu urbanim područjima. Prema Svetskoj zdravstvenoj organizaciji (WHO), 2,5 milijardi ljudi, od kojih je 1 milijarda dece, izloženi su riziku od DENV infekcije (WHO, 2002). Procenjuje se da se na godišnjem nivou na nivou celog sveta javlja 50 do 100 miliona slučajeva denga groznice, pola miliona slučajeva teške denga bolesti (tj. denga hemoragična groznica [DHF] i sindrom denga šoka [DSS]), i više od 20.000 smrtnih slučajeva. DHF je postao vodeći uzrok hospitalizacije i smrti među decom u endemskim regionima. Sve u svemu, denga je najčešći uzrok arbovirusne bolesti. Zbog nedavnih velikih epidemija u zemljama u Latinskoj Americi, jugoistočnoj Aziji i zapadnom Pacifiku (uključujući Brazil, Portoriko, Venecuelu, Kambodžu, Indoneziju, Vijetnam, Tajland), broj slučajeva denga groznice je dramatično porastao tokom proteklih godina. Ne samo da se broj slučajeva denga groznice povećava kako se bolest širi na nova područja, već su i pojave bolesti teže.
[0003] Kako bi se sprečilo i/ili kontrolisalo oboljenje povezano sa infekcijom denga virusa, jedini dostupne postupci trenutno su strategije za iskorenjivanje komaraca, kao kontrola vektora. Iako je postignut napredak u razvoju vakcina protiv dinge, uočene su mnoge poteškoće. Ovo uključuje postojanje fenomena koji se naziva pojačanje zavisno od antitela (ADE).
[0004] Oporavak od infekcije jednim serotipom pruža doživotni imunitet protiv tog serotipa, ali daje samo delimičnu i prolaznu zaštitu protiv naknadne infekcije od strane jednog od ostala tri serotipa. Nakon infekcije sa drugim serotipom, već postojeća heterologna antitela formiraju komplekse sa novo zaraženim serotipom denga virusa, ali ne neutrališu patogen. Umesto toga, veruje se da je ulazak virusa u ćelije olakšan, što dovodi do nekontrolisane replikacije virusa i viših virusnih titara. U primarnim i sekundarnim infekcijama viši titri virusa povezani su sa težom denga bolešću. Budući da majčinska antitela mogu lako preći na novorođenčad dojenjem, to može biti jedan od razloga zašto su deca više pogođena teškim denga oboljenjem od odraslih.
[0005] Na lokacijama sa dva ili više serotipa koji cirkulišu istovremeno, takođe se nazivaju hiper endemski regioni, rizik od ozbiljne bolesti denga je znatno veći zbog povećanog rizika od pojave sekundarne, teže infekcije. Štaviše, u situaciji hiper endemičnosti, povećava se verovatnoća pojave virulentnih sojeva, što opet povećava verovatnoću hemoragijske denga groznice (DHF) ili sindroma denga šoka.
[0006] Komarci koji nose dengu, uključujući Aedes aegipti i Aedes albopictus (tigrasti komarac), kreću se ka severnijim područjima. Prema Centrima za kontrolu i prevenciju bolesti (Centers for Disease Control and Prevention – CDC) Sjedinjenih Američkih Država, oba komarca su trenutno sveprisutna u južnom Teksasu. Širenje ka severu komaraca koji nose dengu nije ograničeno na SAD, već je takođe primećeno i u Evropi.
[0007] Uprkos velikim naporima u protekle tri decenije, trenutno ne postoji vakcina za zaštitu ljudi od bolesti denga virusa. Glavni problem je da se razvije vakcina koja nudi zaštitu od sva četiri serotipa (tetravalentna vakcina) u istoj meri. Štaviše, danas specifični antivirusni lekovi za tretman ili prevenciju infekcije virusom denga groznice nisu dostupni. Jasno je da još uvek postoji velika neispunjena medicinska potreba za terapeuticima za prevenciju ili tretman virusnih infekcija kod životinja, naročito kod ljudi, i posebno za virusne infekcije izazvane Flavivirusima, posebno denga virusom. Veoma su potrebna jedinjenja sa dobrom antivirusnom potencijom, bez ili sa niskim nivoom neželjenih efekata, širokim spektrom aktivnosti protiv višestrukih serotipa denga virusa, niske toksičnosti i/ili dobrih farmakokinetičkih ili -dinamičkih svojstava. WO2013/045516 opisuje indolna jedinjenja kao inhibitore replikacije virusa.
[0008] Predmetni pronalazak sada pruža jedinjenja, mono- ili di-supstituisane derivate indola, koji pokazuju visoko potentnu aktivnost protiv svih četiri (4) serotipa denga virusa. Takođe, jedinjenja prema pronalasku poseduju dobar farmakokinetički profil i iznenađujuće, ova specifična jedinjenja pokazuju poboljšanu hiralnu stabilnost.
SAŽETAK PRONALASKA
[0009] Ovaj pronalazak se zasniva na neočekivanom otkriću da se bar jedan od gore pomenutih problema može rešiti sa predmetnim jedinjenjima pronalaska.
[0010] Ovaj pronalazak pruža jedinjenja za koja se pokazalo da poseduju snažnu antivirusnu aktivnost protiv sva četiri (4) serotipa koji su trenutno poznati. Ovaj pronalazak dalje pokazuje da ova jedinjenja efikasno inhibiraju proliferaciju denga virusa (DENV). Prema tome, ova jedinjenja čine korisnu klasu potentnih jedinjenja koja se mogu koristiti u tretmanu i/ili prevenciji virusnih infekcija kod životinja, sisara i ljudi, specifičnije za tretman i/ili prevenciju infekcija denga virusa.
[0011] Ovaj pronalazak se dalje odnosi na takva jedinjenja koja se koriste kao lekovi, i na njihovu upotrebu u proizvodnji lekova za tretman i/ili prevenciju virusnih infekcija, posebno kod virusa koji pripadaju porodici denga virusa kod životinja ili sisara, još preciznije, kod ljudi. Ovde su takođe opisani postupci za dobijanje svih takvih jedinjenja i farmaceutski sastava koji ih sadrže u efikasnoj količini.
[0012] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na takva jedinjenja za upotrebu u postupku tretmana ili prevencije infekcija denga virusa kod ljudi davanjem efikasne količine jednog ili više takvih jedinjenja, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, opciono u kombinaciji sa jednim ili više drugih lekova, poput drugog antivirusnog agensa, pacijentu kom je to potrebno.
[0013] Jedan aspekt pronalaska je pružanje jedinjenja formule (I)
njegovog stereoizomernog oblika, farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili polimorfa koji obuhvataju mono- ili di-supstituisanu indol grupu; gde je navedeno jedinjenje izabrano iz grupe gde:
R1 je H, R2 je F i R3 je H, F ili CH3;
R1 je F ili CH3, R2 je OCH3 i R3 je H;
R1 je H, R2 je Cl i R3 je H ili CH3;
R1 je F, R2 je H i R3 je CH3;
R1 je H, R2 je OCH3 i R3 je Cl,
R1 je F, R2 je F i R3 je H,
R1 je H, R2 je OCH3 i R3 je CH3 ili
R1 je CH3, R2 je H i R3 je F.
[0014] Posebno, jedinjenja pronalaska ili njihov stereoizomerni oblik, farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf su izabrani iz grupe:
ili
ili
[0015] Deo ovog pronalaska je takođe farmaceutski sastav koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegov stereoizomerni oblik, farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili polimorf zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata, razblaživača ili nosača.
[0016] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I) uključuju njihove kisele adicione i bazne soli. Pogodne kisele adicione soli formiraju se od kiselina koje formiraju netoksične soli. Pogodne bazne soli formiraju se od baza koje formiraju netoksične soli.
[0017] Jedinjenja pronalaska mogu takođe postojati u ne-solvatiranim i solvatiranim oblicima. Izraz „solvat“ se ovde koristi da opiše molekularni kompleks koji sadrži jedinjenje pronalaska i jedan ili više molekula farmaceutski prihvatljivog rastvarača, na primer, etanol.
[0018] Izraz „polimorf“ se odnosi na sposobnost jedinjenja pronalaska da postoji u više od jednog oblika ili kristalne strukture.
[0019] Jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu primenjivati kao kristalni ili amorfni proizvodi. Ona se mogu dobiti, na primer, kao čvrsti čepovi, prahovi ili folije postupcima kao što su taloženje, kristalizacija, sušenje smrzavanjem, sušenje raspršivanjem ili sušenje isparavanjem. Ona se mogu primenjivati sama ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih jedinjenja pronalaska ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih lekova. Generalno, ona će se primenjivati kao formulacija zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata. Izraz „ekscipijent“ se ovde koristi da opiše bilo koji sastojak koji nije jedinjenje pronalaska. Izbor ekscipijenta u velikoj meri zavisi od faktora kao što su poseban način primene, efekat ekscipijenta na rastvorljivost i stabilnost, i priroda doznog oblika.
[0020] Jedinjenja predmetnog pronalaska ili bilo koja njihova podgrupa mogu biti formulisana u različite farmaceutske oblike u svrhu primene. Kao odgovarajući sastavi mogu se navesti svi sastavi koje se obično koriste za sistemsko davanje lekova. Kako bi se pripremili farmaceutski sastavi ovog pronalaska, efikasna količina određenog jedinjenja, opciono u obliku adicione soli, kao aktivni sastojak je kombinovana u bliskoj smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, gde nosač može imati širok spektar oblika u zavisnosti od oblika preparata koji je poželjan za primenu. Poželjno je da su ovi farmaceutski sastavi u jediničnom doznom obliku pogodnom, na primer, za oralnu ili rektalnu primenu. Na primer, u pripremi sastava u oralnom doznom obliku, može se koristiti bilo koji od uobičajenih farmaceutskih medijuma, kao što su, na primer, voda, glikoli, ulja, alkoholi i slično u slučaju oralnih tečnih preparata kao što su suspenzije, sirupi, eliksiri, emulzije i rastvori; ili čvrsti nosači kao što su skrobovi, šećeri, kaolin, razblaživači, lubrikanti, veznici, agensi za dezintegraciju i slično u slučaju prašaka, pilula, kapsula i tableta. Zbog njihove lakoće primene, tablete i kapsule predstavljaju najpovoljnije oralnih jediničnih doznih oblika, u kom slučaju se očigledno koriste čvrsti farmaceutski nosači. Takođe su uključeni preparati u čvrstom obliku koji se mogu neposredno pre upotrebe prevesti u tečne oblike.
[0021] Posebno je korisno formulisati gore pomenute farmaceutske sastave u jediničnom doznom obliku za jednostavnu primenu i ujednačenost doziranja. Jedinični dozni oblik, kad se ovde koristi, odnosi se na fizički diskretne jedinice koje su pogodne kao jedinstvene doze, gde svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog sastojka izračunatu da proizvede željeni terapeutski efekat u vezi sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Primeri takvih jediničnih doznih oblika su tablete (uključujući urezane ili obložene tablete), kapsule, pilule, paketiće praška, vafere, čepiće, rastvore ili suspenzije za injekcije i slično, i njihovi segregirane multiplikate.
[0022] Stručnjaci u lečenju infektivnih bolesti će biti u stanju da odrede efektivnu količinu iz rezultata testa prikazanih u daljem tekstu. Uopšteno se smatra da bi efikasna dnevna količina bila od 0,01 mg/kg do 50 mg/kg telesne težine, poželjnije od 0,1 mg/kg do 10 mg/kg telesne težine. Može biti prikladno da se zahtevana doza primeni kao dve, tri, četiri ili više pod-doza u odgovarajućim intervalima tokom dana. Navedene pod-doze mogu biti formulisane kao jedinični dozni oblici, na primer, koji sadrže 1 do 1000 mg, i naročito 5 do 200 mg aktivnog sastojka po jediničnom doznom obliku.
[0023] Tačno doziranje i učestalost primene zavisi od određenog jedinjenja formule (I) koje se koristi, od određenog stanja koje se tretira, težine stanja koje se tretira, starosti, težine i opšteg fizičkog stanja određenog pacijenta, kao i drugih lekova pojedinac može uzeti, kao što je dobro poznato stručnjacima. Dalje, očigledno je da se efikasna količina može smanjiti ili povećati u zavisnosti od odgovora tretiranog pacijenta i/ili zavisno od procene lekara koji propisuje jedinjenja ovog pronalaska. Gore pomenuti efektivni opsezi su stoga samo smernice i nemaju nameru da ograniče obim ili upotrebu pronalaska u bilo kojoj meri.
[0024] Predmetno obelodanjenje takođe treba da uključi bilo koje izotope atoma prisutnih u jedinjenjima prema pronalasku. Na primer, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijum, dok izotopi ugljenika uključuju C-13 i C-14.
[0025] Predmetna jedinjenja koja se koriste u predmetnom pronalasku mogu takođe postojati u svom stereo-hemijskom izomernom obliku, definišući sva moguća jedinjenja sačinjena od istih atoma vezanih istom sekvencom veza, ali koja imaju različite trodimenzionalne strukture, koje nisu međusobno zamenljive. Ukoliko nije drugačije pomenuto ili naznačeno, hemijska oznaka jedinjenja obuhvata mešavinu svih mogućih stereo-hemijskih izomernih oblika koje navedena jedinjenja mogu imati.
[0026] Navedena smeša može da sadrži sve dia-stereomere i/ili enantiomere osnovne molekularne strukture pomenutog jedinjenja. Svi stereo-hemijski izomerni oblici jedinjenja korišćeni u ovom pronalasku, bilo u čistom obliku ili u smeši jedan sa drugim, namenjeni su da budu obuhvaćeni u okviru ovog pronalaska, uključujući bilo koje racemske smeše ili racemate.
[0027] Čisti stereoizomerne oblici jedinjenja i međuproizvoda kao što je ovde pomenuto su definisani kao izomeri koji su u suštini slobodni od drugih enantiomernih ili dijastereomernih oblika iste osnovne molekularne strukture pomenutih jedinjenja ili međuproizvoda. Posebno, izraz „stereoizomerno čist“ odnosi se na jedinjenja ili međuproizvode koji imaju stereoizomerni višak od najmanje 80% (tj. najmanje 90% jednog izomera i maksimalno 10% drugih mogućih izomera) do stereoizomernog viška od 100% (tj. 100% jednog izomera i ništa od drugog), konkretnije, jedinjenja ili međuproizvodi imaju stereoizomerni višak od 90% do 100%, i još konkretnije imaju stereoizomerni višak od 94% do 100% i najkonkretnije imaju stereoizomerni višak od 97% do 100%. Izrazi „enantiomerno čisti“ i „dijastereomerno čisti“ treba da se razumeju na sličan način, ali uzimajući u obzir na enantiomerni višak, odnosno diastereomerni višak dotične smeše.
[0028] Čisti stereoizomerni oblici jedinjenja i međuproizvoda koji se koriste u ovom pronalasku mogu se dobiti primenom postupaka poznatih u struci. Na primer, enantiomeri mogu biti odvojeni jedan od drugog selektivnom kristalizacijom njihovih diastereomernih soli sa optički aktivnim kiselinama ili bazama. Njihovi primeri su vinska kiselina, dibenzoil-vinska kiselina, ditoluoil-vinska kiselina i kamfosulfonska kiselina. Alternativno, enantiomeri se mogu razdvojiti hromatografskim tehnikama koristeći hiralne stacionarne faze. Pomenuti čisti stereohemijski izomerni oblici mogu takođe biti izvedeni iz odgovarajućih čistih stereohemijski izomernih oblika odgovarajućih polaznih materijala, pod uslovom da se reakcija odvija stereospecifično. Poželjno, ako se želi specifični stereoizomer, navedeno jedinjenje će biti sintetizovano stereospecifičnim postupcima pripreme. Ovi postupci će pogodno koristiti enantiomerno čiste početne materijale.
Opšti sintetički pristupi
[0029] Sinteza jedinjenja opšte formule I može se izvesti kao što je prikazano u Šemi 1. 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)sirćetna kiselina (II) može da se konvertuje u odgovarajući 2-(4-fluoro-2-metoksifenil) acetil hlorid (III) sa reagensom za hlorinaciju kao što je na primer tionil hlorid. Friedel-Crafts-ova reakcija kiselog hlorida III sa supstituisanim indolom opšte formule IV može se izvesti upotrebom Lewis-ovog kiselog reagensa kao što je na primer AlCl3 ili Et2AlCl u pogodnom rastvaraču kao što je na primer CH2Cl2, i pod odgovarajućim reakcionim uslovima koji obično uključuju hlađenje, kako bi se dobio 3-acilovani indol opšte formule V. Uvođenje anilinske grupe u alfa položaju na karbonilnu grupu jedinjenja opšte formule V može se postići reakcionom sekvencom koja uključuje na primer bromiranje V sa reagensom kao što je na primer feniltrimetilamonijum tribromid u pogodnom rastvaraču kao što je na primer THF, kako bi se dobila jedinjenja opšte formule VI, i naknadnu reakciju jedinjenja opšte formule VI sa 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanolom (VII) u pogodnom rastvaraču kao što je na primer CH3CN, i tipično upotrebom baze kao što su na primer TEA ili DIPEA, kako bi se dobila jedinjenja opšte formule I kao racemske smeše. Alternativno, jedinjenja opšte formule VI mogu da reaguju sa O-zaštićenim anilinom opšte formule VIII (PG = zaštitna grupa) u pogodnom rastvaraču kao što je na primer CH3CN, i tipično upotrebom baze kao što su na primer TEA ili DIPEA, kako bi se dobila jedinjenja opšte formule IX. Korisne zaštitne grupe su na primer (ali nisu ograničene na) terc-butil (PG = tBu). Uklanjanje zaštitne grupe jedinjenja opšte formule IX može se postići postupcima koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti i uključuju, na primer (ali nisu ograničeni na) reagens kao što je na primer koncentrovana hlorovodonična kiselina (za PG = tBu), kako bi se dobila jedinjenja opšte formule I kao racemske smeše. Hiralno razdvajanje jedinjenja opšte formule I može se izvesti, na primer, hiralnom hromatografijom kako bi se dobili Enantiomeri A i B opšte formule I.
Primeri
LC/MS postupci
[0030] Merenje tečne hromatografije visokih performansi (HPLC) je izvršeno korišćenjem LC pumpe, niza dioda (DAD) ili UV detektora i kolone kao što je navedeno u odgovarajućim postupcima. Ako je potrebno, uključeni su dodatni detektori (pogledati tabelu postupaka u nastavku).
[0031] Protok iz kolone je doveden do masenog spektrometra (MS) koji je konfigurisan sa izvorom jona atmosferskog pritiska. Stručnjaku je poznato da postavi parametre podešavanja (npr. opseg skeniranja, vreme zadržavanja...) kako bi se dobili joni koji omogućavaju identifikaciju nominalne monoizotopne molekulske težine jedinjenja (MV). Prikupljanje podataka izvršeno je odgovarajućim softverom.
[0032] Jedinjenja su opisana svojim eksperimentalnim vremenima retencije (Rt) i jonima. Ako nije drugačije navedeno u tabeli podataka, prijavljeni molekularni ion odgovara [M+H]+ (protonisan molekul) i/ili [M-H]- (deprotonisan molekul). U slučaju da jedinjenje nije direktno jonizujuće, tip adukta je naveden (tj. [M+NH4]+, [M+HCOO]-, itd ...). Za molekule sa višestrukim izotopskim obrascima (Br, CI), prijavljena vrednost je ona dobijena za najnižu masu izotopa. Svi rezultati su dobijeni sa eksperimentalnim nesigurnostima koje se obično povezuju sa korišćenim postupkom.
[0033] U daljem tekstu, „SQD“ označava jedan kvadrupolni detektor, „MSD“ maseni selektivni detektor, „RT“ sobnu temperaturu, „BEH“ premošćeni etilsiloksan/silicijum hibrid, „DAD“ detektor niza dioda, „HSS“ silicijum visokog napona.
[0034] Šifre LCMS postupka (protok izražen u ml/minut; temperatura kolone (T) u °C; vreme rada u minutima)
Šifra postupka
Instrument
Kolona
Mobilna faza
Gradijent
Protok
------T kolone
Vreme rada (min)
LC-A
Waters: Acquity® UPLC® - DAD-SQD
Waters: BEH C18 (1,7µm, 2,1*50mm)
A: 10 mM CH3COONH4 u 95% H2O + 5% CH3CN
Od 95% A do 5% A za 1,3 minuta, drži se 0,7 minuta.
0,8 ml/minut
------55°C
2
B: CH3CN
LC-B
Waters: Acquity® UPLC® - DAD-SQD
Waters: HSS T3 (1,8µm, 2,1*100mm)
A: 10 mM CH3COONH4 u 95% H2O + 5% CH3CN
Od 100% A do 5% A u 2,10minuta, do 0% A za 0,90minuta, do 5% A u 0,5min
0,7 ml/minut
------55°C
3,5
B: CH3CN
LC-C
Waters: Acquity® UPLC® - DAD-Quattro Mi cro™
Waters: BEH C18 (1,7µm, 2,1x100mm)
A: 95% CH3COONH4 7mM/5% CH3CN,
84,2% A za 0,49minuta, do 10,5% A u 2,18minuta, drži se tokom 1,94minuta, nazad do 84,2% A u 0,73minuta, drži se 0,73minuta.
0,343 ml/minut
------40°C
6,2
B: CH3CN
LC-D
Dionex®: Ultima® 3000® -DAD-Brucker® Esquire 6000
Sunfire® C18 (3,5µm, 3,0*100mm) sa zaštitom (3,5µm, 3,0*20mm)
A: 0,1% mravlja kiselina u H2O
50% A za 0,20 minuta, do 10% A za 5,8 minuta, drži se 4,8 minuta, nazad do 50% A u 0,20 minuta, drži se 3,00 minuta
1,0 ml/minut
------30°C
14
B: CH3CN
LC-E
Dionex®: Ultima® 3000®-DAD-Brucker® Esquire 6000
X-Bridge® C18 (3,5µm, 3,0*100mm) sa zaštitom (3,5µm, 3,0*20mm)
A: 10 mM CH3COONH4 u H2O podesiti pH 10 sa rastvorom amonijaka
80% A za 0,20 minuta, do 40% A za 6,8 minuta, do 10% A za 1 minut drži se 2,8 minuta, nazad do 80% A za 0,20 minuta, drži se 3,00 minuta.
1,0 ml/minut
------30°C
14
B: CH3CN
SFC-MS postupci
[0035] SFC merenje je izvršeno korišćenjem sistema za analitičku superkritičnu tečnu hromatografiju (SFC) sastavljenog od binarne pumpe za isporuku ugljen dioksida (CO2) i modifikatora, autosamplera, peći za kolone, detektora sa nizom dioda opremljenog protočnom ćelijom visokog pritiska koja stoji do 400 bara. Ako je konfigurisan sa masenim spektrometrom (MS), protok iz kolone je doveden do (MS). Stručnjaku je poznato da postavi parametre podešavanja (npr. opseg skeniranja, vreme zadržavanja...) kako bi se dobili joni koji omogućavaju identifikaciju nominalne monoizotopne molekulske težine jedinjenja (MV). Prikupljanje podataka izvršeno je odgovarajućim softverom.
[0036] Analitički SFC-MS postupci (protok izražen u mL/min; temperatura kolone (T) u °C; Vreme rada u minutima, Povratni pritisak (BPR) u barima.
Šifra postupka
Kolona
Mobilna faza
Gradijent
Protok
------T kolone
Vreme rada
------T BPR
SFC-A
Daicel Chiralpak® AD-H kolona (5 µm, 150 x 4,6 mm)
A:CO2
30% B drži se 7 minuta.
B: MeOH
SFC-B
Daicel Chiralpak® AD-H kolona (5 µm, 150 x 4,6 mm)
A: CO2
40% B drži se 7 minuta.
B: MeOH
SFC-C
Daicel Chiralcel® OJ-H kolona (5 µm, 250 x 4,6 mm)
A: CO2
40% B drži se 7 minuta.
B: MeOH
SFC-D
Daicel Chiralcel® OD-H kolona (5 µm, 150 x 4,6 mm)
A: CO2
40% B drži se 7 minuta.
B: MeOH
SFC-E
Daicel Chiralcel® OD-H kolona (5 µm, 150 x 4,6 mm)
A: CO2
30% B drži se 7 minuta.
B: MeOH
SFC-F
Daicel Chiralpak® AS3 kolona (3,0 µm, 150 x 4,6 mm)
A: CO2
25% B drži se 6 minuta, do 50% za 1 min držite 2.5 min
B: EtOH +0.2% iPrNH2+3% H2O
SFC-G
Daicel Chiralpak® OD-H kolona (5,0 µm, 250 x 4,6 mm)
A: CO2
35% B drži se 4 minuta, do 50% za 1 minut drži se 2 minuta
B: EtOH +0.2% iPrNH2
SFC-H
Daicel Chiralpak® OD3 kolona (3,0 µm, 150 x 4,6 mm)
A: CO2
40% B drži se 6 minuta, do 50% za 1 minut drži se 2.5 minuta
B: EtOH +0.2% iPrNH2+3% H2O
SFC-I
Daicel Chiralpak® AS3 kolona (3,0 µm, 150 x 4,6 mm)
A: CO2
30% B drži se 6 minuta, do 50% za 1 minut drži se 2.5 minuta
B: EtOH +0.2% iPrNH2+3% H2O
SFC-J
Daicel Chiralpak® OD-H kolona (5,0 µm, 250 x 4,6 mm)
A: CO2
30% B drži se 4 minuta, do 50% za 1 minut drži se 2 minuta
B: EtOH +0.2% iPrNH2
SFC-K
Daicel Chiralpak® OD3 kolona (3,0 µm, 150 x 4,6 mm)
A: CO2
35% B drži se 6 minuta, do 50% za 1 minut drži se 2.5 minuta
B: MeOH +0.2% iPrNH2+3% H2O
Tačke topljenja
[0037] Vrednosti su ili vršne vrednosti ili rasponi topljenja, i dobijaju se sa eksperimentalnim nesigurnostima koje se obično povezuju sa ovim analitičkim postupkom.
DSC823e (označen kao DSC)
[0038] Za određeni broj jedinjenja, tačke topljenja su određene sa DSC823e (Mettler-Toledo). Tačke topljenja su merene sa temperaturnim gradijentom od 10°C/minut. Maksimalna temperatura je bila 300°C.
Optičke rotacije:
[0039] Optičke rotacije su merene na Perkin-Elmer 341 polarimetru sa natrijumskom lampom i prikazane na sledeći način: [α]° (λ, c g/100ml, rastvarač, T°C).
[0040] [α]λT = (100α) / (l x c): gde l je dužina puta u dm i c koncentracija u g/100 ml za uzorak na temperaturi T (°C) i talasnoj dužini λ (u nm). Ako upotrebljena talasna dužina svetlosti iznosi 589 nm (natrijum D linija), tada se može koristiti simbol D. Znak rotacije (+ ili -) treba uvek dati. Kada se koristi ova jednačina, koncentracija i rastvarač se uvek daju u zagradama posle rotacije. Rotacija se prijavljuje u stepenima, i ne daju se jedinice koncentracije (pretpostavlja se da je g/100 ml).
Primer 1: sinteza 1-(6-fluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanona (Jedinjenje 1) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 1A i 1B.
[0041]
Sinteza međuproizvoda 1a:
[0042] 2-(4-Fluoro-2-metoksifenil)sirćetna kiselina [CAS 886498-61-9] (28,9 g, 157 mmol) je dodata iz malih delova tionil hloridu (150 mL) i rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrisan pod redukovanim pritiskom i ko-isparen sa toluenom kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorid 1a (31,8 g) kao uljani ostatak koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg pročišćavanja.
Sinteza međuproizvoda 1b:
[0043] Rastvor 6-fluoro-1H-indola [CAS 399-51-9] (14,2 g, 105 mmol) u CH2Cl2 (400 mL) je ohlađen do 0°C pod N2-atmosferom. Rastvor dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (160 mL, 160 mmol) je dodat tokom perioda od 10 minuta mešanom rastvoru i rezultujuća smeša je držana na 0°C tokom 40 minuta. Zatim, rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorida 1a (31,8 g, 160 mmol) u CH2Cl2(300 mL) je dodat kapanjem tokom perioda od 2,5 sata uz održavanje unutrašnje temperature reakcione smeše ispod 5°C. Temperatura mešane reakcione smeše je održavana na 0°C tokom 3,5 sata. Ledena kada je uklonjena i nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata, reakciona smeša je ohlađena opet do 0°C i reakcija je ugašena sporim dodavanjem rastvora kalijum natrijum tartrat tetrahidrata (Rochelle so) [CAS 6100-16-9] (59,6 g, 210 mmol) u vodi (70 mL) uz održavanje unutrašnje temperature smeše ispod 10°C. Nakon mešanja tokom dodatnih 30 minuta na 0°C, ledena kada je uklonjena i rezultujuća smeša je rastvorena sa THF (1 L). Na2SO4(150 g) je dodat i nakon mešanja preko noći, smeša je filtrirana preko dicalite®. Filter kolač je opran dvaput sa THF (2x 1 L). Kombinovani filtrati su ispareni pod redukovanim pritiskom do rezidualne zapremine od otprilike 50 mL. Beli talog je filtriran i osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio 1-(6-fluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 1b (22,3 g) kao beli prašak.
Sinteza Jedinjenja 1 i hiralno razdvajanje Enantiomera 1A i 1B:
[0044] Mešani rastvor 1-(6-fluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-etanona 1b (11,0 g, 36,5 mmol) u THF (300 mL) je ohlađen do 0°C pod N2-atmosferom. Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (13,9 g, 36,9 mmol) u THF (100 mL) je dodat kapanjem tokom perioda od 45 minuta. Rezultujuća suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati i isparena pod redukovanim pritiskom do belog ostatka. Ovaj ostatak, koji sadrži sirov 2-bromo-1-(6-fluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 1c, je rastvoren u acetonitrilu (300 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon dodavanja 2-(3-amino-5-metoksi-fenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (13,4 g, 73 mmol) i diizopropiletilamina (12,6 mL, 73 mmol), smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dva dana - do završetka konverzije u Jedinjenje 1. Reakciona smeša je sipana u vodu (1,5 L) i ekstrakovana sa 2-metil-THF (2x 750 mL). Kombinovani ekstrakti su oprani sa 0,5N HCl (800 mL), zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (200 mL) i rasolom (200 mL), osušeni preko MgSO4 i ispareni pod redukovanim pritiskom. Uljasti ostatak je pročišćen Preparativnom HPLC (Stacionarna faza: RP Uptisphere® Prep C18 ODB - 10 µm, 30 x 150 mm, Mobilna faza: 0,25% NH4HCO3 rastvor u vodi, CH3CN). Fragmenti proizvoda su koncentrisani, rastvoreni u metanolu i ponovo koncentrisani dajući kao prinos 1-(6-fluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 1, 9,3 g) kao racemsku smešu.
[0045] Hiralno razdvajanje enantiomera Jedinjenja 1 (9,3g) je izvršeno putem normalne faze hiralne HPLC (Stacionarna faza: kao 20 µm (1 kg), Mobilna faza: 100% MeOH). Fragmenti proizvoda su kombinovani i ispareni kako bi se dobio Enantiomer 1A (4,5 g) kao prvi eluiran proizvod i Enantiomer 1B (4,6 g) kao drugi eluiran proizvod. Oba enantiomera 1A i 1B javila su se kao lepljiva ulja. Enantiomer 1A (4,5 g) je taložen od rastvora u MeOH (20 mL) sporim dodavanjem vode (11 mL). Nakon mešanja tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi bela čvrsta supstanca je filtrirana, oprana sa malim količinama MeOH/voda (1/1) smeša i osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio Enantiomer 1A (2,4 g) kao amorfni beli prašak. Enantiomer 1B (4,6 g) je očvrsnut mlevenjem uljastog ostatka sa smešom MeOH (10 mL) i vode (15 mL) pod snažnim mešanjem tokom 25 minuta. Čvrste supstance su filtrirane i potom kristalizovane od smeše MeOH (70 mL) i vode (30 mL) pod mešanjem na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Beli talog je filtriran i osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio Enantiomer 1B (2,50 g) kao amorfni beli prašak.
Jedinjenje 1:
[0046] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,64 (q, J=4,9 Hz, 2 H), 3,61 (s, 3 H), 3,76 - 3,90 (m, 2 H), 3,96 (s, 3 H), 4,80 (t, J=5,3 Hz, 1 H), 5,72 (t, J=2,2 Hz, 1 H), 5,94 (d, J=2,2 Hz, 2 H), 6,14 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 6,38 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 6,73 (td, J=8,4, 2,6 Hz, 1 H), 6,93 (dd, J=11,5, 2,4 Hz, 1 H), 7,06 (ddd, J=9,7, 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 7,27 (dd, J=9,5, 2,2 Hz, 1 H), 7,37 (dd, J=8,6, 6,8 Hz, 1 H), 8,15 (dd, J=8,8, 5,9 Hz, 1 H), 8,43 (s, 1 H), 12,07 (br. S, 1 H)
LC/MS (postupak LC-B): Rt 1,86 minuta, MH+ 483
Enantiomer 1A:
[0047] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,60 (s, 3 H) 3,64 (m, J=6,60 Hz, 2 H) 3,73 - 3,90 (m, 2 H) 3,95 (s, 3 H) 4,80 (t, J=4,94 Hz, 1 H) 5,71 (br. S., 1 H) 5,93 (br. S., 2 H) 6,14 (d, J=7,95 Hz, 1 H) 6,38 (d, J=7,97 Hz, 1 H) 6,73 (t, J=8,41 Hz, 1 H) 6,93 (d, J=11,24 Hz, 1 H) 7,05 (t, J=9,02 Hz, 1 H) 7,27 (d, J=9,58 Hz, 1 H) 7,37 (t, J=7,70 Hz, 1 H) 8,09 - 8,19 (m, 1 H) 8,43 (s, 1 H) 12,06 (s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,03 minuta, MH+ 483
[α]D20: +96,9° (c 0,389, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-F): Rt 1,73 minuta, MH+ 483, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 1B:
[0048] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,61 (s, 3 H) 3,64 (t, J=5,12 Hz, 2 H) 3,76 - 3,89 (m, 2 H) 3,95 (s, 3 H) 4,77 (br. S, 1 H) 5,71 (t, J=2,01 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=2,11 Hz, 2 H) 6,14 (d, J=7,97 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=8,00 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,49, 2,44 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=11,36, 2,48 Hz, 1 H) 7,05 (td, J=9,29, 2,38 Hz, 1 H) 7,26 (d, J=9,49 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,58, 6,88 Hz, 1 H) 8,14 (dd, J=8,77, 5,59 Hz, 1 H) 8,42 (s, 1 H) 12,08 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,03 minuta, MH+ 483
[α]D20: -100,0° (c 0,478, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-F): Rt 2,38 minuta, MH+ 483, hiralna čistoća 100%.
Primer 1.1: Hiralna stabilnost Enantiomera 1A na pH 7,4
[0049] Hiralna stabilnost Enantiomera 1A (R = OMe) je procenjena određivanjem enantiomernog viška (ee%) nakon inkubacije tokom 24 sata i 48 sati u puferisanom rastvor na pH 7,4 na 40°C i 60°C. Kako bi se procenio uticaj metoksi-supstituenta Enantiomera 1A (R = Ome) na stabilnost u odnosu na racemizaciju, hiralna stabilnost Enantiomera 1'A (R = H) je testirana pod istim uslovima.
[0050] Sa ovim ciljem, 5 µM puferisanih (pH = 7,4) rastvora od 1A i 1'A su pripremljeni mešanjem 25 µL od 100 µM rastvora 1A ili 1'A u DMSO sa 475 µL vodenim puferom pH 7,4. Uzorci su uzeti 24 sata i 48 sati nakon inkubacije na 40°C i 60°C. Analitički uzorci su analizirani Hiralnom SFC (MS detektovanje) i hiralna čistoća je izražena kao enantiomerni višak (ee% = %enantiomera A - %enantiomera B). Oba enantiomera 1A i 1'A su imala hiralnu čistoću od 100% pre svoje inkubacije.
Jedinjenje
Temperatura
ee%
Vremenske tačke uzimanja uzoraka (sati)
24
48
1A
40°C
100
100
60°C
100
96
1'A
40°C
92
84
60°C
26
9
Primer 2: Sinteza 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1 -(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanona (Jedinjenje 2) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 2A i 2B.
[0051]
Sinteza međuproizvoda 2a:
[0052] Mešani rastvor 6-fluoro-7-metil-1H-indola [CAS 57817-10-4] (5,41 g, 36,2 mmol) u CH2Cl2 (100 mL) je ohlađen na ledu pod N2-atmosferom. Rastvor dietilaluminijum hlorida 1M u heksanu (54,4 mL, 54,4 mmol) je dodat kapanjem. Nakon 15 minuta na 0°C, rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorida 1a (11,0 g, 54,4 mmol, za sintezu: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (30 mL) je dodat kapanjem uz održavanje unutrašnje temperature ispod 5°C. Ledena kada je uklonjena i rezultujuća suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Reakciona smeša je sipana polako u ohlađen (0°C) zasićen vodeni rastvor NaHCO3. Smeša je filtrirana preko dicalite® i filter kolač je opran sa THF. Kombinovani filtrati su ekstrakovani sa EtOAc, osušeni preko MgSO4 i ispareni pod redukovanim pritiskom. Ostatak je usitnjen sa CH2Cl2 i čvrste supstance su filtrirane kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)-etanon 2a (7,47 g) kao beli prašak.
Sinteza međuproizvoda 2b:
[0053] Mešani rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanona 2a (7,43 g, 23,56 mmol) u THF (100 mL) je ohlađen na 0°C pod N2-atmosferom. Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (8,96 g, 23,8 mmol) u THF (100 mL) je dodat kapanjem. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi.
[0054] Suspenzija je filtrirana kako bi se uklonile čvrste supstance i filtrat je isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je usitnjen sa CH2Cl2, čvrste supstance su filtrirane i osušene pod vakuumom kako bi se dobio 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanon 2b (8,95 g).
Sinteza Jedinjenja 2 i hiralno razdvajanje Enantiomera 2A i 2B:
[0055] Smeša 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanona 2b (3,30 g, 8,38 mmol), 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanol [CAS 725237-16-1] (1,54 g, 8,38 mmol), i diizopropiletilamin (1,44 mL, 8,38 mmol) su mešani u CH3CN (100 mL) i smeša je zagrejana pod refluksom tokom 3 sata. Nakon hlađenja do sobne temperature, rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom i ostatak je pročišćen kolonskom hromatografijom na silicijum dioksidu (Stacionarna faza: HP-Spher 25 µm (340 g), Mobilna faza: heptan/EtOAc gradijent: 100/0 do 0/100). Fragmenti proizvoda su koncentrisani i potom pročišćeni Preparativnom HPLC (Stacionarna faza: Uptisphere® C18 ODB - 10 µm, 200 g, 5 cm, Mobilna faza: 0,25% NH4HCO3 rastvor u vodi, CH3CN). Fragmenti proizvoda su koncentrisani, rastvoreni u metanolu i ponovo koncentrisani kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 2, 1,4 g) kao racemska smeša.
[0056] Hiralno razdvajanje enantiomera Jedinjenja 2 (1,18 g) je izvršeno putem Preparativne SFC (Stacionarna faza: Chiralcel® Diacel® OD 20 x 250 mm, Mobilna faza: CO2, EtOH sa 0,2% iPrNH2) i isparavanja fragmenata proizvoda pod redukovanim pritiskom. Prvi eluirani enantiomer je izolovan kao so hlorovodonične kiseline taloženjem smeše MeOH (30 mL), 1N HCl (5 mL) i vode (130 mL). Beli talog se formirao nakon mešanja preko noći i filtriran je i osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi kako bi se dobilo 328 mg enantiomera 2A (kao so hlorovodonične kiseline). Drugi eluirani enantiomer je očvrsnut liofilizacijom od smeše CH3CN/vode kako bi se dobilo 385 mg enantiomera 2B kao amorfni prašak.
Jedinjenje 2:
[0057] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,38 (d, J=1,62 Hz, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,12 Hz, 2 H) 3,76 - 3,89 (m, 2 H) 3,96 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,54 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,11 Hz, 1 H) 5,95 (d, J=2,13 Hz, 2 H) 6,16 (d, J=7,95 Hz, 1 H) 6,36 (d, J=7,96 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,49, 2,47 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,37, 2,49 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=10,29, 8,71 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,62, 6,85 Hz, 1 H) 7,96 (dd, J=8,73, 5,18 Hz, 1 H) 8,43 (s, 1 H) 12,19 (s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,08 minuta, MH+ 497
Enantiomer 2A:
[0058] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,38 (d, J=0,22 Hz, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (t, J=5,21 Hz, 2 H) 3,83 (qt, J=10,02, 5,27 Hz, 2 H) 3,96 (s, 3 H) 5,71 (t, J=1,46 Hz, 1 H) 5,95 (d, J=2,11 Hz, 2 H) 6,16 (br. S., 1 H) 6,36 (br. S, 1 H) 6,72 (td, J=8,55, 2,62 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,33, 2,46 Hz, 1 H) 7,01 (t, J=9,49 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,64, 6,90 Hz, 1 H) 7,96 (dd, J=8,73, 5,39 Hz, 1 H) 8,43 (d, J=3,24 Hz, 1 H) 12,19 (d, J=2,95 Hz, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,08 minuta, MH+ 497
[α]D20: -82,7° (c 0,5055, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-G): Rt 1,69 minuta, MH+ 497, hiralna čistoća 100%.
CHN analiza: Analitički izračunato za C27H26F2N2O5.HCl: C, 60,85; H, 5,11; N, 5,26. Otkriveno: C, 62,83; H, 5,02; N, 5,36.
Enantiomer 2B:
[0059] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,38 (d, J=1,62 Hz, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,43 Hz, 2 H) 3,75 - 3,89 (m, 2 H) 3,96 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,58 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,11 Hz, 1 H) 5,95 (d, J=2,20 Hz, 2 H) 6,16 (d, J=7,97 Hz, 1 H) 6,36 (d, J=8,00 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,56, 2,56 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,37, 2,49 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=10,29, 8,72 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,68, 6,89 Hz, 1 H) 7,96 (dd, J=8,75, 5,21 Hz, 1 H) 8,43 (s, 1 H) 12,19 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,09 minuta, MH+ 497
[α]D20: +86,7° (c 0,5075, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-G): Rt 2,88 minuta, MH+ 497, hiralna čistoća 100%.
Primer 3: Sinteza 1-(6-hloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanona (Jedinjenje 3) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 3A i 3B.
[0060]
Sinteza međuproizvoda 3a:
[0061] Mešani rastvor 6-hloro-7-metil-1H-indol [CAS 57817-09-1] (3,2 g, 19,3 mmol) u CH2Cl2 (150 mL) pod N2-protokom, je ohlađen na kadi za hlađenje sa ledenim NaCl. Dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (29 mL, 29 mmol) je dodat tokom perioda od 2 minuta i ohlađeni rastvor je mešan na -10°C tokom 30 minuta. Rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorida 1a (5,48 g, 27,1 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (30 mL) je dodat kapanjem preko 30 minuta uz održavanje unutrašnje temperature ispod -10°C i rezultujuća smeša je mešana tokom dodatna 2 sata na -10°C. Reakcija je ugašena sporim dodavanjem rastvora kalijum natrijum tartrat tetrahidrata (Rochelle so) [CAS 6100-16-9] (10,9 g, 38,6 mmol) u vodi (10 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Beli talog je stavljen u reakcionu smešu. Talog je izolovan filtriranjem, opran sa vodom i osušen pod vakuumom kako bi se dobio 1-(6-hloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 3a (4200 mg) kao beličasta čvrsta supstanca.
Sinteza međuproizvoda 3b:
[0062] Rastvor 1-(6-hloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-etanon 3a (2000 mg, 6,03 mmol) u THF (120 mL) je mešan na sobnoj temperaturi pod N2-atmosferom. Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (2,38 g, 6,33 mmol) u THF (35 mL) je dodat kapanjem i smeša je mešana tokom dodatnih 90 minuta na sobnoj temperaturi. Talog je filtriran i filtrat je koncentrisan pod vakuumom kako bi se dobio 2-bromo-1-(6-hloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 3b (2200 mg) kao beličasti prašak.
Sinteza Jedinjenja 3 i hiralno razdvajanje Enantiomera 3A i 3B:
[0063] 2-Bromo-1-(6-hloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-etanon 3b (1,31 g, 2,23 mmol) je suspendovan u CH3CN (60 mL). 2-(3-Amino-5-metoksifenoksi)etanol [CAS 725237-16-1] (0,6 g, 2,46 mmol), i diizopropiletilamin (847 µL, 4,91 mmol) su dodati i mešana smeša je zagrejana na 65°C preko noći. Smeša je koncentrisana u vakuumu i ostatak je podeljen između EtOAc i vode. Organski sloj je razdvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je pročišćen putem Preparativne HPLC (Stacionarna faza: Uptisphere® C18 ODB - 10 µm, 200 g, 5 cm, Mobilna faza: 0,25% NH4HCO3 rastvor u vodi, CH3CN) kako bi se dobio 1-(6-hloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 3, 590 mg) kao racemska smeša.
[0064] Hiralno razdvajanje enantiomera Jedinjenja 3 (560 mg) je izvršeno koristeći hiralno razdvajanje normalne faze (Stacionarna faza: kao 5 µm, Mobilna faza: 100% MeOH, izokratsko eluiranje. Talasna dužina detektovanja 308 nm, protok 1mL/minuta). Fragmenti proizvoda su kombinovani i ispareni kako bi se dobio Enantiomer 3A kao prvi eluiran proizvod i Enantiomer 3B kao drugi eluiran proizvod. Oba enantiomera 3A i 3B javila su se kao lepljiva ulja. Enantiomeri su rastvoreni u MeOH/CH2Cl2 (1/1) smeša i isparena pod redukovanim pritiskom kako bi se dobili Enantiomer 3A (245 mg) i Enantiomer 3B (263 mg) kao amorfni prašci.
Jedinjenje 3:
[0065] 1H NMR (400 MHz, hloroFORM-d) δ ppm 2,48 (s, 3 H) 3,70 (s, 3 H) 3,88 - 3,92 (m, 2 H) 3,93 - 4,02 (m, 2 H) 4,03 (s, 3 H) 5,55 (br. S, 1 H) 5,83 (t, J=2,20 Hz, 1 H) 5,89 (d, J=2,16 Hz, 2 H) 6,12 (s, 1 H) 6,54 - 6,66 (m, 2 H) 7,28 (d, J=7,80 Hz, 1 H) 7,33 (dd, J=8,55, 6,60 Hz, 1 H) 8,12 - 8,17 (m, 2 H) 8,59 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-B): Rt 2,08 minuta, MH+ 513
Enantiomer 3A:
[0066] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,50 (s, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,54 Hz, 2 H) 3,77 - 3,90 (m, 2 H) 3,96 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,40 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,12 Hz, 1 H) 5,95 (d, J=2,13 Hz, 2 H) 6,17 (d, J=7,96 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=7,96 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,48, 2,49 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,35, 2,50 Hz, 1 H) 7,21 (d, J=8,61 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,60, 6,87 Hz, 1 H) 7,98 (d, J=8,50 Hz, 1 H) 8,44 (s, 1 H) 12,23 (s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,12 minuta, MH+ 513
[α]D20: +95,2° (c 0,605, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-H): Rt 3,21 minuta, MH+ 513, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 3B:
[0067] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,50 (s, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,38 Hz, 2 H) 3,76 - 3,90 (m, 2 H) 3,96 (s, 3 H) 4,77 (t, J=5,51 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,12 Hz, 1 H) 5,95 (d, J=2,13 Hz, 2 H) 6,16 (d, J=7,96 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=7,96 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,48, 2,49 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,35, 2,49 Hz, 1 H) 7,21 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,60, 6,87 Hz, 1 H) 7,98 (d, J=8,50 Hz, 1 H) 8,44 (s, 1 H) 12,23 (s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,12 minuta, MH+ 513
[α]D20: -87,2° (c 0,625, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-H): Rt 1,85 minuta, MH+ 513, hiralna čistoća 100%.
Primer 4: sinteza 1-(6-hloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanona (Jedinjenje 4) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 4A i 4B.
[0068]
Sinteza međuproizvoda 4a:
[0069] Mešani rastvor 6-hloro-1H-indola [CAS 17422-33-2] (2,23 g, 14,7 mmol) u CH2Cl2 (125 mL) pod N2-protokom, je ohlađen do 0°C koristeći ledenu kadu. Rastvor dietilaluminijum hlorida 1M u heksanu (22,1 mL, 22,1 mmol) je dodat kapanjem i smeša je mešana tokom 10 minuta na 0°C. Zatim, rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorida 1a (4,47 g, 22,1 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (30 mL) je dodat kapanjem tokom perioda od 50 minuta i rezultujuća smeša je držana na 0°C tokom 1 sata i potom mešana na 10°C tokom 1 sata. Nakon ponovnog hlađenja do 0°C, reakcija je ugašena sporim dodavanjem rastvora kalijum natrijum tartrat tetrahidrata (Rochelle so) [CAS 6100-16-9] (8,31 g, 29,4 mmol) u vodi (9 mL) i smeši je omogućeno da se zagreje do sobne temperature tokom 1 sata. Reakciona smeša je rastvorena dodavanjem 2-metil-THF (150 mL) i mešana tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Na2SO4 (30 g) je dodat i nakon mešanja tokom 30 minuta, smeša je filtrirana preko dicalite®. Filter kolač je opran nekoliko puta sa 2-metil-THF i kombinovani filtrati su koncentrisani u vakuumu do rezidualne zapremine od 25 mL. Nakon stajanja tokom 2 sata, talog je filtriran i osušen pod vakuumom kako bi se dobio 1-(6-hloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 4a (2,85 g).
Sinteza međuproizvoda 4c:
[0070] Rastvor 1-(6-hloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanona 4a (1 g, 3,15 mmol) u 2-metil-THF (50 mL) je mešan pod N2-protokom i ohlađen je na ledenoj kadi. Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (1,24 g, 3,31 mmol) u THF (10 mL) i 2-metil-THF (10 mL) je dodat kapanjem i smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata i potom na 10°C tokom 90 minuta. Zatim, rastvor 3-(2-(tert-butoksi)etoksi)-5-metoksianilina [CAS 1428973-39-0] (0,83 g, 3,46 mmol) i diizopropiletilamina (1,63 mL, 9,44 mmol) u CH3CN (40 mL) je dodat kapanjem i reakciona smeša je zagrejana pod refluksom tokom 90 minuta. Rastvarači su ispareni pod redukovanim pritiskom. Ostatak je uzet u CH3CN (30 mL) i zagrejan pod refluksom tokom 5 sati. Nakon hlađenja do sobne temperature, rastvarač je isparen pod vakuumom i ostatak je pročišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu (Stacionarna faza: Grace Reveleris® Silika 80 g, Mobilna faza: heptan/EtOAc gradijent 100/0 do 0/100). Željeni fragmenti su kombinovani i ispareni, i ko-ispareni sa 1,4-dioksanom kako bi se dobio 2-((3-(2-(tert-butoksi)etoksi)-5-metoksifenil)amino)-1-(6-hloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 4c (1,5 g, LC čistoća = 71%). Sirov proizvod je korišćen kao takav u sledećem koraku.
Sinteza Jedinjenja 4 i hiralno razdvajanje Enantiomera 4A i 4B:
[0071] 2-((3-(2-(tert-Butoksi)etoksi)-5-metoksifenil)amino)-1-(6-hloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 4c (1,5 g, 1,92 mmol) je mešan sa hlorovodoničnom kiselinom 4M u dioksanu (25 mL, 0,1 mol) i smeša je mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Smeša je degazirana i sipana polako u vodeni zasićen rastvor NaHCO3. Proizvod je ekstrakovan dvaput sa 2-metil-THF i kombinovani ekstrakti su osušeni preko MgSO4, filtrirani i ispareni. Ostatak je pročišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu (Stacionarna faza: Biotage® SnapUltra Silika 50 g, Mobilna faza: heptan/EtOAc/EtOH gradijent 100/0/0 do 60/30/10). Željeni fragmenti su kombinovani i ispareni i potom pročišćeni putem Preparativne HPLC (Stacionarna faza: Uptisphere® C18 ODB - 10 µm, 200 g, 5 cm, Mobilna faza: 0,25% NH4HCO3 rastvor u vodi, CH3CN). Fragmenti proizvoda su kombinovani i ispareni. Ostatak je ko-isparen od MeOH/CH3CN smeše kako bi se dobio racemski 1-(6-hloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)-etanon (Jedinjenje 4, 500 mg) kao ulje.
[0072] Hiralno razdvajanje Jedinjenja 4 (500 mg) je obavljeno putem hiralnog razdvajanja normalne faze (Stacionarna faza: kao 20 µm, Mobilna faza: 100% MeOH). Fragmenti proizvoda su kombinovani i ispareni. Prvi eluiran proizvod je dalje pročišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu (stacionarna faza: Biotage® SnapUltra Grace Reveleris® Silika 12 g, Mobilna faza: heptan/EtOAc gradijent 100/0 do 0/100). Fragmenti proizvoda su kombinovani, ispareni pod redukovanim pritiskom i potom ko-ispareni sa CH3CN. Ostatak je očvrsnut liofilizacijom od CH3CN/vode kako bi se dobio Enantiomer 4A (135 mg) kao amorfni prašak. Drugi eluiran proizvod je dalje pročišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu (stacionarna faza: Biotage® SnapUltra GraceReveleris® Silika 12 g, Mobilna faza: heptan/EtOAc gradijent 100/0 do 0/100). Fragmenti proizvoda su kombinovani i ispareni pod redukovanim pritiskom. Ostatak je očvrsnut liofilizacijom od CH3CN/vode kako bi se dobio Enantiomer 4B (160 mg) kao amorfni prašak.
Jedinjenje 4:
[0073] LC/MS (postupak LC-B): Rt 1,99 minuta, MH+ 499
Enantiomer 4A:
[0074] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,61 (s, 3 H) 3,62 - 3,66 (m, 2 H) 3,77 - 3,89 (m, 2 H) 3,95 (s, 3 H) 4,76 (t, J=5,72 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,12 Hz, 1 H) 5,93 (d, J=2,14 Hz, 2 H) 6,14 (d, J=7,97 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=8,00 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,49, 2,51 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=11,36, 2,52 Hz, 1 H) 7,20 (dd, J=8,53, 1,93 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,60, 6,88 Hz, 1 H) 7,52 (d, J=1,92 Hz, 1 H) 8,13 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 8,44 (s, 1 H) 12,09 (br. S, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,09 minuta, MH+ 499
[α]D20: +107,4° (c 0,565, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-I): Rt 1,54 minuta, MH+ 499, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 4B:
[0075] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,61 (s, 3 H) 3,64 (t, J=4,93 Hz, 2 H) 3,76 - 3,90 (m, 2 H) 3,95 (s, 3 H) 4,80 (br. S., 1 H) 5,71 (t, J=2,09 Hz, 1 H) 5,93 (d, J=2,12 Hz, 2 H) 6,14 (d, J=8,03 Hz, 1 H) 6,39 (d, J=8,05 Hz, 1 H) 6,73 (td, J=8,48, 2,46 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,37, 2,48 Hz, 1 H) 7,21 (dd, J=8,52, 1,94 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,59, 6,88 Hz, 1 H) 7,53 (d, J=1,93 Hz, 1 H) 8,14 (d, J=8,53 Hz, 1 H) 8,46 (s, 1 H) 12,12 (br. S, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,08 minuta, MH+ 499
[α]D20: -102,6° (c 0,5295, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-I): Rt 1,90 minuta, MH+ 499, hiralna čistoća 100%.
Primer 5: sinteza 1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanona (Jedinjenje 5) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 5A i 5B.
[0076]
Sinteza međuproizvoda 5a:
[0077] Rastvor 6,7-difluoro-1H-indol [CAS 271780-84-8] (3,0 g, 19,6 mmol) u CH2Cl2 (75 mL) je mešan pod N2 i ohlađen na ledu. Rastvor dietilaluminijum hlorida 1M u heksanu (30 mL, 30 mmol) je dodat kapanjem i smeša je mešana tokom 10 minuta na 0°C. Zatim, rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorida 1a (5,0 g, 24,7 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (15 mL) je dodat kapanjem i rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Reakciona smeša je sipana polako u ohlađen (0°C) vodeni zasićen rastvor NaHCO3. Smeša je filtrirana preko dicalite® i filter kolač je opran sa THF. Organski sloj je razdvojen od kombinovanih filtrata, osušen preko MgSO4, filtriran i isparen pod redukovanim pritiskom. Čvrsti ostatak je usitnjen sa CH2Cl2, čvrste supstance su filtrirane i osušene u vakuumu na 50°C kako bi se dobio 1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 5a (4,46 g) kao beli prašak.
Sinteza međuproizvoda 5b:
[0078] 1-(6,7-Difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 5a (4,45 g, 13,93 mmol) je suspendovan u THF (60 mL) i ohlađen na ledu pod N2. Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (5,30 g, 14,1 mmol) u THF (35 mL) je dodat kapanjem i smeša je potom mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Talog je filtriran i opran sa THF. Kombinovani filtrati su ispareni pod redukovanim pritiskom. Ostatak je usitnjen sa malom količinom CH2Cl2, filtriran i osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio 2-bromo-1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 5b (4,10 g) kao beli prašak.
Sinteza Jedinjenja 5 i hiralno razdvajanje na Enantiomere 5A i 5B:
[0079] Smeša 2-bromo-1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-etanona 5b (4,10 g, 10,31 mmol), 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (1,91 g, 10,43 mmol), i diizopropiletilamina (1,8 mL, 10,44 mmol) je mešana u CH3CN i zagrejana pod refluksom preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, rastvarači su ispareni pod redukovanim pritiskom i ostatak je pročišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu (Stacionarna faza: Silika 340 g HP-Spher 25 µm, Mobilna faza: CH2Cl2/EtOAc gradijent 100/0 do 50/50). Fragmenti proizvoda su kombinovani i ispareni pod redukovanim pritiskom. Ostatak je dalje pročišćen putem Preparativne HPLC (Stacionarna faza: Uptisphere® C18 ODB - 10 µm, 200 g, 5 cm. Mobilna faza: 0,25% NH4HCO3 rastvor u vodi, MeOH). Fragmenti proizvoda su koncentrisani, rastvoreni u metanolu i ponovo koncentrisani dajući kao prinos 1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 5, 1,62 g) kao racemsku smešu. Mali deo ove serije je očvrsnut liofilizacijom od CH3CN/voda smeše kako bi se dobio Jedinjenje 5 (65 mg) kao amorfni beli prašak. Hiralno razdvajanje Jedinjenja 5(1,50 g) je izvršeno putem Preparativne SFC (Stacionarna faza: Chiralcel® Diacel® OD 20 x 250 mm, Mobilna faza: CO2, EtOH sa 0,2% iPrNH2). Fragmenti proizvoda su kombinovani i ispareni pod redukovanim pritiskom. Prvi eluiran proizvod je dalje pročišćen kolonskom hromatografijom na silicijum dioksidu (Stacionarna faza: Silika 25 g HP-Spher 25 µm, Mobilna faza: CH2Cl2/MeOH gradijent 100/0 do 0/100). Fragmenti proizvoda su koncentrisani do rezidualne količine od 2 mL. Beli talog je filtriran, opran nekoliko puta sa CH2Cl2 i osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio Enantiomer 5A (414 mg) kao amorfni beli prašak. Drugi eluiran proizvod je dalje pročišćen kolonskom hromatografijom na silicijum dioksidu (Stacionarna faza: Silika 25 g HP-Spher 25 µm, Mobilna faza: CH2Cl2/MeOH gradijent 100/0 do 0/100). Fragmenti proizvoda su koncentrisani do rezidualne količine od 2 mL. Beli talog je filtriran, opran nekoliko puta sa CH2Cl2 i osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio Enantiomer 5B (437 mg) kao amorfni beli prašak.
Jedinjenje 5:
[0080] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,36 Hz, 2 H) 3,74 - 3,89 (m, 2 H) 3,93 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,66 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,01 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=2,18 Hz, 2 H) 6,16 (d, J=8,06 Hz, 1 H) 6,38 (d, J=8,06 Hz, 1 H) 6,73 (td, J=8,42, 2,55 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,35, 2,55 Hz, 1 H) 7,18 - 7,27 (m, 1 H) 7,37 (dd, J=8,43, 6,95 Hz, 1 H) 7,92 (dd, J=8,60, 4,92 Hz, 1 H) 8,49 (s, 1 H) 12,76 (s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,07 minuta, MH+ 501
Enantiomer 5A:
[0081] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,63 Hz, 2 H) 3,75 - 3,89 (m, 2 H) 3,94 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,53 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,12 Hz, 1 H) 5,95 (d, J=2,22 Hz, 2 H) 6,16 (d, J=8,21 Hz, 1 H) 6,38 (d, J=8,11 Hz, 1 H) 6,73 (td, J=8,52, 2,53 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,35, 2,62 Hz, 1 H) 7,19 - 7,27 (m, 1 H) 7,37 (dd, J=8,55, 6,88 Hz, 1 H) 7,92 (dd, J=8,94, 4,36 Hz, 1 H) 8,49 (s, 1 H) 12,77 (s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,07 minuta, MH+ 501
[α]D20: -88,3° (c 0,506, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-J): Rt 2,46 minuta, MH+ 501, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 5B:
[0082] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,05 Hz, 2 H) 3,76 - 3,89 (m, 2 H) 3,94 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,55 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,16 Hz, 1 H) 5,95 (d, J=2,07 Hz, 2 H) 6,16 (d, J=8,09 Hz, 1 H) 6,38 (d, J=8,15 Hz, 1 H) 6,73 (td, J=8,43, 2,69 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,35, 2,67 Hz, 1 H) 7,16 - 7,28 (m, 1 H) 7,37 (dd, J=8,55, 6,87 Hz, 1 H) 7,92 (dd, J=8,92, 4,37 Hz, 1 H) 8,49 (s, 1 H) 12,77 (br. S, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,07 minuta, MH+ 501
[α]D20: +90,3° (c 0,523, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-J): Rt 4,27 minuta, MH+ 501, hiralna čistoća 100%.
Primer 6: sinteza 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)-1-(6-metoksi-5-metil-1H-indol-3-il)etanona (Jedinjenje 6) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 6A i 6B.
[0083]
Sinteza međuproizvoda 6a:
[0084] Dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (18,6 mL, 18,6 mmol) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 6-metoksi-5-metil-1H-indola [CAS 1071973-95-9] (2 g, 12,4 mmol) u CH2Cl2 (60 mL). Nakon 30 minuta na 0°C, 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorid 1a (3,3 g, 16,3 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (60 mL) je dodat polako na 0°C. Reakcija je mešana na 0°C tokom 3 sata. Ledena voda je dodata i talog je filtriran, opran sa vodom, i osušen pod vakuumom kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-metoksi-5-metil-1H-indol-3-il)etanon 6a (3,15 g).
Sinteza međuproizvoda 6b:
[0085] Na 0°C, rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (3,8 g, 10,1 mmol) u THF (90 mL) je dodat kapanjem smeši 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-metoksi-5-metil-1H-indol-3-il)etanona 6a (3,15 g, 9,6 mmol) u THF (90 mL). Smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata i na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata. Talog je filtriran i opran sa EtOAc. Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Rezultujući ostatak je uzet sa minimalnom količinom CH3CN i diizopropiletera. Talog je filtriran i osušen pod vakuumom kako bi se dobio 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-metoksi-5-metil-1H-indol-3-il)etanon 6b (2,8 g).
Sinteza Jedinjenja 6 i hiralno razdvajanje na Enantiomere 6A i 6B:
[0086] Smeša 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-metoksi-5-metil-1H-indol-3-il)etanona 6b (1,0 g, 2,46 mmol), 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (676 mg, 3,69 mmol) i diizopropiletilamina (0,64 mL, 3,69 mmol) u CH3CN (10 mL) i THF (10 mL) je zagrejana na 70°C tokom 1 sata koristeći mikrotalasni Biotage® Initiator EXP 60 sa izlaznom snagom u rasponu od 0 do 400W (fiksno vreme držanja). Rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je uzet sa EtOAc. Organski sloj je opran dvaput sa 1N HCl, oprana sa vodom, osušen preko MgSO4, filtriran i rastvarač je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Pročišćavanje je sprovedeno fleš hromatografijom na silika gelu (15-40 µm, 40 g, CH2Cl2/CH3OH 99,5/0,5). Čisti fragmenti su prikupljeni i ispareni do suvoće kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)-1-(6-metoksi-5-meti-1H-indo-3-il)etanon (Jedinjenje 6, 330 mg) kao racemska smeša. Ovaj fragment je kombinovan sa drugom serijom Jedinjenja 6 (60 mg) pre hiralnog razdvajanja. Hiralno razdvajanje Jedinjenja 6 (390 mg) je izvršeno putem Preparativne Hiralne SFC (Stacionarna faza: Chiralpak® IC 5 µm 250 x 30 mm, Mobilna faza: 70% CO2, 30% MeOH) dajući kao prinos 137 mg prvog eluiranog enantiomera i 146 mg drugog eluiranog enantiomera. Prvi eluirani enantiomer je kombinovan sa drugom serijom (fragment 1, ukupna količina: 246 mg). Drugi eluirani enantiomer je kombinovan sa drugom serijom (fragment 2, ukupna količina: 245 mg). Fragment 1 je pročišćen opet fleš hromatografijom na silika gelu (15-40 µm, 12 g, CH2Cl2/CH3OH 99,5/0,5). Čisti fragmenti su prikupljeni i ispareni do suvoće kako bi se dobio 207 mg. Jedinjenje je očvrsnuto od Et2O/heptana i nekoliko kapi CH3CN kako bi se dobio Enantiomer 6A(173 mg) kao amorfni prašak. Fragment 2 je pročišćen opet fleš hromatografijom na silika gelu (15-40 µm, 12 g, CH2Cl2/CH3OH 99,5/0,5). Čisti fragmenti su prikupljeni i ispareni do suvoće kako bi se dobilo 204 mg. Jedinjenje je očvrsnuto od Et2O/heptana i nekoliko kapi CH3CN kako bi se dobio Enantiomer 6B (158 mg) kao amorfni prašak.
Jedinjenje 6:
[0087] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,20 (s, 3 H) 3,60 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,4 Hz, 2 H) 3,77- 3,87 (m, 5 H) 3,96 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,70 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 (d, J=1,6 Hz, 2 H) 6,10 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,31 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,5, 2,2 Hz, 1 H) 6,89 - 6,95 (m, 2 H) 7,32 - 7,38 (m, 1 H) 7,89 (s, 1 H) 8,22 (s, 1 H) 11,74 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,89 minuta, MH+ 509
Enantiomer 6A:
[0088] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,20 (s, 3 H) 3,55 - 3,68 (m, 5 H) 3,74 - 3,91 (m, 5 H) 3,96 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,70 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 (d, J=2,0 Hz, 2 H) 6,10 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,29 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,67 - 6,76 (m, 1 H) 6,88 - 6,96 (m, 2 H) 7,36 (dd, J=8,5, 6,9 Hz, 1 H) 7,89 (s, 1 H) 8,22 (s, 1 H) 11,73 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,88 minuta, MH+ 509
[α]D20: +116,9° (c 0,278, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-A): Rt 4,07 minuta, MH+ 509, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 6B:
[0089] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,20 (s, 3 H) 3,55 - 3,67 (m, 5 H) 3,75 - 3,90 (m, 5 H) 3,96 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,70 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 (d, J=2,0 Hz, 2 H) 6,10 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,29 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,71 (td, J=8,5, 2,4 Hz, 1 H) 6,87 - 6,97 (m, 2 H) 7,36 (dd, J=8,5, 6,9 Hz, 1 H) 7,89 (s, 1 H) 8,22 (s, 1 H) 11,73 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,88 minuta, MH+ 509
[α]D20: -118,6° (c 0,279, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-A): Rt 7,13 minuta, MH+ 509, hiralna čistoća 100%.
Primer 7: sinteza 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-6-metoksi-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 7) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 7A i 7B.
[0090]
Sinteza međuproizvoda 7a:
[0091] Dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (20 mL, 20 mmol) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 5-fluoro-6-metoksi-1H-indola [CAS 1211595-72-0] (2,2 g, 13,3 mmol) u CH2Cl2 (60 mL). Nakon 30 minuta na 0°C, 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorid 1a (3,85 g, 19 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (60 mL) je dodat polako na 0°C. Reakcija je mešana na 0°C tokom 3 sata. Ledena voda i vodeni rastvor NaHCO3 su dodati. Reakciona smeša je ekstrakovana sa CH2Cl2/MeOH. Organski sloj je opran sa vodom, osušen preko MgSO4, filtriran, i rastvarač je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je uzet sa minimumom CH2Cl2. Talog je filtriran i osušen kako bi se dobio 2-4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-6-metoksi-1H-indol-3-il)etanon 7a (3,2 g).
Sinteza međuproizvoda 7b:
[0092] Na 0°C, rastvor feniltrimetilamonijum tribromid [CAS 4207-56-1] (3,22 g, 8,56 mmol) u THF (80 mL) je dodat kapanjem smeši 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-6-metoksi-1H-indol-3-il)etanona 7a (2,7 g, 8,15 mmol) u THF (80 mL). Smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata i na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata. Talog je filtriran, opran sa EtOAc i vodom i osušen kako bi se dobila prva serija 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-6-metoksi-1H-indol-3-il)etanona 7b (1,5 g). Organski sloj filtrata je razdvojen, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Rezultujući ostatak je uzet sa minimalnom količinom CH3CN i diizopropiletera. Talog je filtriran i osušen pod vakuumom kako bi se dobila druga serija od 7b (1,7 g).
Sinteza Jedinjenja 7 i hiralno razdvajanje na Enantiomere 7A i 7B:
[0093] Smeša 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-6-metoksi-1H-indol-3-il)etanona 7b (0,8 g, 1,95 mmol), 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (0,39 g, 2,15 mmol) i trietilamina (0,54 mL, 3,9 mmol) u THF (5 mL) i CH3CN (5 mL) je mešana na 70°C tokom 12 sata. Ostatak je rastvoren sa CH2Cl2 i H2O. Organski sloj je razdvojen, osušen preko MgSO4, filtriran, i rastvarač je isparena pod redukovanim pritiskom. Sirovo jedinjenje je pročišćeno kolonskom hromatografijom na silika gelu (15-40 µm, 40 g u CH2Cl2/MeOH/NH4OH (99/1/0,1)). Fragmenti koji sadrži Jedinjenje 7 su kombinovani i rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2 i opran sa 1N HCl. Organski sloj je razdvojen, osušen preko MgSO4, filtriran i rastvarač je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Drugo pročišćavanje je izvršeno putem reverzno fazne HPLC (Stacionarna faza: X-Bridge®-C18 5 µm 30 x 150 mm, Mobilna faza: gradijent od 60% NH4HCO3 0,5%/40% MeOH do 0% NH4HCO3 0,5%/100% MeOH) kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-6-metoksi-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 7, 350 mg) kao racemska smeša. Enantiomeri su razdvojeni putem Preparativne Hiralne SFC (Stacionarna faza: Chiralpak® IC 5 µm 250 x 30 mm, Mobilna faza: 60% CO2, 40% MeOH) kako bi se dobilo 70 mg Jedinjenja 2 kao racemska smeša, 104 mg prvog eluiranog enantiomera i 100 mg drugog eluiranog enantiomera. Prvi eluirani enantiomer je kristalizovan od CH3CN/Et2O kako bi se dobio Enantiomer 7A (76 mg). Drugi eluirani enantiomer je kristalizovan od CH3CN/Et2O kako bi se dobio Enantiomer 7B (62 mg).
Jedinjenje 7:
[0094] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,56 - 3,68 (m, 5 H) 3,76 - 3,88 (m, 5 H) 3,95 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,4 Hz, 1 H) 5,70 (s, 1 H) 5,92 (s, 2 H) 6,11 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,4, 2,0 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=11,0, 1,9 Hz, 1 H) 7,14 (d, J=7,6 Hz, 1 H) 7,36 (t, J=7,7 Hz, 1 H) 7,81 (d, J=12,0 Hz, 1 H) 8,33 (s, 1 H) 11,93 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,74 minuta, MH+ 513
Enantiomer 7A:
[0095] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,59 - 3,67 (m, 5 H) 3,77 - 3,88 (m, 5 H) 3,95 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=1,6 Hz, 1 H) 5,92 (d, J=1,6 Hz, 2 H) 6,11 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,4, 2,2 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=11,3, 2,2 Hz, 1 H) 7,14 (d, J=7,3 Hz, 1 H) 7,31 - 7,41 (m, 1 H) 7,81 (d, J=11,7 Hz, 1 H) 8,33 (s, 1 H) 11,71 - 12,11 (m, 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,74 minuta, MH+ 513
[α]D20: +85,7° (c 0,28, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-B): Rt 1,87 minuta, MH+ 513, hiralna čistoća 100%.
Tačka topljenja: 226°C
Enantiomer 7B:
[0096] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,58 - 3,66 (m, 5 H) 3,76 - 3,87 (m, 5 H) 3,95 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,70 (t, J=1,6 Hz, 1 H) 5,92 (d, J=1,6 Hz, 2 H) 6,11 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,4, 2,2 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=11,3, 2,2 Hz, 1 H) 7,14 (d, J=7,3 Hz, 1 H) 7,36 (t, J=7,7 Hz, 1 H) 7,81 (d, J=11,7 Hz, 1 H) 8,33 (s, 1 H) 11,92 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,74 minuta, MH+ 513
[α]D20: -87,6° (c 0,283, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-B): Rt 3,24 minuta, MH+ 513, hiralna čistoća 100%.
Tačka topljenja: 226°C
Primer 8: sinteza 1-(7-hloro-6-metoksi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 8) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 8A i 8B.
[0097]
Sinteza međuproizvoda 8a:
[0098] Dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (16,5 mL, 16,5 mmol) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 7-hloro-6-metoksi-1H-indola [CAS 1227604-21-8] (2 g, 11 mmol) u CH2Cl2 (60 mL). Nakon 30 minuta na 0°C, 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorid 1a (3,3 g, 16,3 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (60 mL) je dodat polako na 0°C. Reakcija je mešana na 0°C tokom 3 sata. Ledena voda je dodata i talog je filtriran, opran sa vodom, i osušen pod vakuumom kako bi se dobio 1-(7-hloro-6-metoksi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 8a (2,7 g).
Sinteza međuproizvoda 8b:
[0099] Na 0°C, rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (3,06 g, 8,15 mmol) u THF (80 mL) je dodat kapanjem smeši 1-(7-hloro-6-metoksi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanona 8a (2,7 g, 7,76 mmol) u THF (80 mL). Smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata i na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata. Talog je filtriran, opran sa EtOAc. Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom, solubilizovan opet u EtOAc i opran sa vodom. Organski sloj je razdvojen, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Rezultujući ostatak je uzet sa minimalnom količinom CH3CN i diizopropiletera. Talog je filtriran i osušen pod vakuumom kako bi se dobio 2-bromo-1-(7-hloro-6-metoksi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 8b (3,2 g).
Sinteza Jedinjenja 8 i hiralno razdvajanje na Enantiomere 8A i 8B:
[0100] Smeša 2-bromo-1-(7-hloro-6-metoksi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanona 8b (2 g, 4,69 mmol), 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (0,86 g, 4,69 mmol) i trietilamina (1,3 mL, 9,4 mmol) u CH3CN (100 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, i zatim na 50°C tokom 2 sata. Sirov proizvod je pročišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (15-40 µm, 80 g) u toluen/2-propanol/NH4OH (90/10/0,1)) kako bi se dobilo 800 mg sirovog Jedinjenje 8. Deo ove serije je kristalizovan od diizopropiletera kako bi se dobila prva serija od 1-(7-hloro-6-metoksi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanona (Jedinjenje 8, 90 mg). Pročišćavanje preostalog materijala od sirovog Jedinjenja 8 je izvršeno putem kolonske hromatografije (Stacionarna faza: neregularni goli silicijum dioksin 40 g, Mobilna faza: 0,3% NH4OH, 97% CH2Cl2, 3% MeOH) kako bi se dobio Jedinjenje 8(500 mg) kao racemsku smešu.
[0101] Enantiomeri su razdvojeni putem Hiralne SFC (Stacionarna faza: Chiralpak® IC 5 µm 250 x 30 mm, Mobilna faza: 55% CO2, 45% MeOH) kako bi se dobilo 184 mg prvog eluiranog enantiomera i 190 mg drugog eluiranog enantiomera. Prvi eluirani enantiomer je kristalizovan od heptan/diizopropileter/CH3CN kako bi se dobio Enantiomer 8A (135 mg) kao amorfna čvrsta supstanca. Drugi eluirani enantiomer je kristalizovan od heptan/diizopropileter/CH3CN kako bi se dobio Enantiomer 8B (150 mg) kao amorfna čvrsta supstanca.
Jedinjenje 8:
[0102] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,59 - 3,67 (m, 5 H) 3,77 - 3,90 (m, 5 H) 3,95 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,4 Hz, 1 H) 5,71 (s, 1 H) 5,94 (d, J=1,6 Hz, 2 H) 6,14 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,5, 2,2 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,3, 2,2 Hz, 1 H) 7,10 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,32 - 7,40 (m, 1 H) 8,04 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 8,33 (s, 1 H) 12,16 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,89 minuta, MH+ 529
Enantiomer 8A:
[0103] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,54 - 3,68 (m, 5 H) 3,73 - 3,90 (m, 5 H) 3,95 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,6 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=2,0 Hz, 2 H) 6,14 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,36 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,5, 2,3 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,1, 2,3 Hz, 1 H) 7,10 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,36 (dd, J=8,6, 7,1 Hz, 1 H) 8,04 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 8,33 (s, 1 H) 12,03 - 12,26 (m, 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,88 minuta, MH+ 529
[α]D20: +84,3° (c 0,267, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-C): Rt 4,82 minuta, MH+ 529, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 8B:
[0104] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,58 - 3,68 (m, 5 H) 3,76 - 3,90 (m, 5 H) 3,95 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,6 Hz, 1 H) 5,71 (s, 1 H) 5,94 (s, 2 H) 6,14 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,5, 2,3 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,1, 2,3 Hz, 1 H) 7,10 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,31 - 7,41 (m, 1 H) 8,04 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 8,33 (s, 1 H) 12,06 - 12,31 (m, 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,88 minuta, MH+ 529
[α]D20: -84,7° (c 0,268, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-C): Rt 6,42 minuta, MH+ 529, hiralna čistoća 99,36%.
Primer 9: sinteza 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanona (Jedinjenje 9) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 9A i 9B.
[0105]
Sinteza međuproizvoda 9a:
[0106] Dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (22 mL, 22 mmol) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 5-fluoro-7-metil-1H-indola [CAS 1082041-52-8] (1,62 g, 10,9 mmol) u CH2Cl2 (45 mL). Nakon 30 minuta na 0°C, rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorid 1a (3,3 g, 16,3 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (30 mL) je dodat polako na 0°C. Reakcija je mešana na 0°C tokom 3 sata. Rochelle so rastvor (1N, 75 mL) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Talog je filtriran i podeljen između u EtOAc i 1N HCl. Organska faza je oprana sa 1N HCl i rasolom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrisana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je uzet sa minimalnom količinom EtOAc. Talog je filtriran kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanon 9a(2,4 g).
Sinteza međuproizvoda 9b:
[0107] Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (2,2 g, 5,85 mmol) u THF (60 mL) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanona 9a (1,66 g, 5,26 mmol) u THF (45 mL). Smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata i na sobnoj temperaturi preko noći. Talog je filtriran i opran sa EtOAc. Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanon 9b (1,9 g).
Sinteza Jedinjenja 9 i hiralno razdvajanje na Enantiomere 9A i 9B:
[0108] Smeša 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanona 9b (0,202 g, 0,512 mmol) i 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (0,468 g, 2,554 mmol) u CH3CN (2 mL) i THF (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 28 sati. Reakciona smeša je rastvorena sa EtOAc i oprana sa 1N HCl. Organska faza je oprana sa vodenim zasićenim NaHCO3 rastvorom i rasolom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrisana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je pročišćen fleš hromatografijom na silika gelu (10 g) koristeći gradijent izopropanola (10% do 40%) u heptanu. Fragmenti koji sadrže očekivano jedinjenje su kombinovani i koncentrisani pod redukovanim pritiskom. Ostatak je usitnjen sa EtOAc i heptanom kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 9, 147 mg) kao racemska smeša. Hiralno razdvajanje Jedinjenja 9 (430 mg) je izvršeno putem hiralne SFC (Stacionarna faza: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, Mobilna faza: 55% CO2, 45% MeOH) kako bi se dobilo 198 mg prvog eluiranog enantiomera i 188 mg drugog eluiranog enantiomera. Prvi eluirani enantiomer je kristalizovan od CH2Cl2/diizopropiletera kako bi se dobio Enantiomer 9A (138 mg). Drugi eluirani enantiomer je kristalizovan od CH2Cl2/diizopropileter kako bi se dobio Enantiomer 9B (151 mg).
Jedinjenje 9:
[0109] 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,47 (s, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,62 - 3,67 (m, 2 H) 3,77 - 3,89 (m, 2 H) 3,96 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,1 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=2,0 Hz, 2 H) 6,14 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,69 - 6,73 (m, 1 H) 6,89 - 6,95 (m, 2 H) 7,34 - 7,39 (m, 1 H) 7,63 - 7,67 (m, 1 H) 8,45 (s, 1 H) 12,21 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-D): Rt 3,9 minuta, MH+ 497
Enantiomer 9A:
[0110] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,47 (s, 3 H) 3,52 - 3,67 (m, 5 H) 3,76 - 3,89 (m, 2 H) 3,96 (s, 3 H) 4,72 - 4,83 (m, 1 H) 5,71 (br. S., 1 H) 5,94 (s, 2 H) 6,15 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,36 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,69 - 6,77 (m, 1 H) 6,90 - 6,97 (m, 2 H) 7,36 (t, J=7,9 Hz, 1 H) 7,62 - 7,69 (m, 1 H) 8,44 (s, 1 H) 12,21 (br. S., 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,92 minuta, MH+ 497
[α]D20: -80,0° (c 0,436, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-D): Rt 2,14 minuta, MH+ 497, hiralna čistoća 100%.
Tačka topljenja: 181 °C
Enantiomer 9B:
[0111] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,47 (s, 3 H) 3,53 - 3,68 (m, 5 H) 3,74 - 3,88 (m, 2 H) 3,96 (s, 3 H) 4,78 (t, J=5,4 Hz, 1 H) 5,66 - 5,73 (m, 1 H) 5,94 (s, 2 H) 6,15 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,36 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,0, 1,6 Hz, 1 H) 6,85 - 6,98 (m, 2 H) 7,36 (t, J=8,0 Hz, 1 H) 7,65 (dd, J=9,5, 1,6 Hz, 1 H) 8,44 (s, 1 H) 12,04 - 12,43 (m, 1 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,93 minuta, MH+ 497
[α]D20: +81,1° (c 0,388, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-D): Rt 3,45 minuta, MH+ 497, hiralna čistoća 100%.
Tačka topljenja: 179°C
Primer 10: sinteza 1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 10) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 10A i 10B.
[0112]
Sinteza međuproizvoda 10a:
[0113] Dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (9,8 mL, 9,8 mmol) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 5,6-difluoro-1H-indol [CAS 169674-01-5] (1,00 g, 6,5 mmol) u CH2Cl2 (12 mL). Nakon 30 minuta na 0°C, rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorida 1a (1,99 g, 9,8 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (3 mL) je dodat polako na 0°C. Reakcija je mešan na 0°C tokom 3 sata. 1M rastvora Rochelle soli je dodat i reakciona smeša je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Formirane čvrste supstance su filtrirane i podeljene između EtOAc i 1N HCl. Faze su razdvojene. Organski sloj je opran sa rasolom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrisan pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio 1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 10a (1,26 g).
Sinteza međuproizvoda 10b:
[0114] Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (1,63 g, 4,34 mmol) u THF (5 mL) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanona 10a (1,26 g, 3,95 mmol) u THF (35 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Talog je filtriran i opran sa EtOAc. Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je uzet sa minimum acetonitrila. Talog je filtriran, opran sa acetonitrilom i osušen pod vakuumom kako bi se dobio 2-bromo-1-(5,6-difiuoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanon 10b (0,758 g).
Sinteza Jedinjenja 10 i hiralno razdvajanje na Enantiomere 10A i 10B:
[0115] Smeša 2-bromo-1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)etanona 10b (0,758 g, 1,90 mmol) i 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (0,746 g, 4,07 mmol) u THF (10 mL) i CH3CN (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 dana. Reakciona smeša je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je podeljen između EtOAc i 1N HCl. Faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc. Organske faze su kombinovane, oprane sa vodenim zasićenim NaHCO3 rastvorom i rasolom, osušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrisane pod redukovanim pritiskom. Ostatak je pročišćen fleš hromatografijom na silika gelu koristeći gradijent od EtOAc (15% do 100%) u heptanu. Fragmenti koji sadrži Jedinjenje 10 su kombinovani i koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Drugo pročišćavanje je izvršeno putem reverzno fazne HPLC (Stacionarna faza: X-Bridge®-C18 5 µm 19 x 100 mm, Mobilna faza: gradijent od 80% mravlje kiseline 0,1%/20% CH3CN do 10% mravlje kiseline 0,1%/90% CH3CN) kako bi se dobio 1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 10, 499 mg) kao racemska smeša.
[0116] Enantiomeri Jedinjenja 10 (459 mg) su razdvojen putem Preparativne Hiralne SFC (Stacionarna faza: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, Mobilna faza: 60% CO2, 40% MeOH) kako bi se dobilo 208 mg prvog eluiranog enantiomera i 221 mg drugog eluiranog enantiomera. Prvi eluirani enantiomer je očvrsnut od heptana kako bi se dobio Enantiomer 10A(168 mg). Drugi eluirani enantiomer je očvrsnut od heptana kako bi se dobio Enantiomer 10B (174 mg).
Jedinjenje 10:
[0117] 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,55 - 3,70 (m, 5 H) 3,83 (m, 2 H) 3,94 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,72 (s, 1 H) 5,93 (d, J=1,9 Hz, 2 H) 6,13 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,38 (d, J=8,3 Hz, 1 H) 6,73 (td, J=8,5, 2,3 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,3, 2,3 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,5, 7,0 Hz, 1 H) 7,54 (dd, J=10,7, 7,0 Hz, 1 H) 8,00 (dd, J=10,9, 8,3 Hz, 1 H) 8,47 (s, 1 H) 12,17 (s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-E): Rt 8,3 minuta, MH+ 501
Enantiomer 10A:
[0118] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,17 (br. S., 1 H) 8,47 (s, 1 H) 7,99 (dd, J=11,0, 8,2 Hz, 1 H) 7,53 (dd, J=10,6, 7,1 Hz, 1 H) 7,36 (t, J=7,7 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=11,3, 2,2 Hz, 1 H) 6,73 (td, J=8,5, 2,2 Hz, 1 H) 6,38 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,13 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 5,93 (s, 2 H) 5,71 (br. S, 1 H) 4,79 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 3,94 (s, 3 H) 3,82 (m, 2 H) 3,57 - 3,67 (m, 5 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,89 minuta, MH+ 501
[α]D20: -86,4° (c 0,5727, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-E): Rt 2,97 minuta, MH+ 501, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 10B:
[0119] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,17 (br. S., 1 H) 8,47 (s, 1 H) 7,99 (dd, J=10,9, 8,4 Hz, 1 H) 7,53 (dd, J=10,6, 7,1 Hz, 1 H) 7,36 (t, J=7,7 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=11,3, 1,6 Hz, 1 H) 6,73 (t, J=7,7 Hz, 1 H) 6,38 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 6,13 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 5,93 (s, 2 H) 5,71 (br. S, 1 H) 4,79 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 3,94 (s, 3 H) 3,77- 3,88 (m, 2 H) 3,58 - 3,67 (m, 5 H)
LC/MS (postupak LC-C): Rt 2,89 minuta, MH+ 501
[α]D20: +90,7° (c 0,5227, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-E): Rt 4,67 minuta, MH+ 501, hiralna čistoća 100%.
Primer 11: sinteza 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)-1-(6-metoksi-7-metil-1H-indol-3-il)etanon (Jedinjenje 11) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 11A i 11B.
[0120]
Sinteza međuproizvoda 11a:
[0121] Dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (40,8 mL, 40,8 mmol) je dodat kapanjem na -25°C rastvoru 6-metoksi-7-metil-1H-indol [CAS 19500-05-1] (4,39 g, 27,2 mmol) u CH2Cl2 (200 mL) pod N2-atmosferom. Nakon mešanja tokom 15 minuta na -25°C, rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorida 1a (7,72 g, 38,1 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (200 mL) je dodat kapanjem na -25°C. Mešanje je nastavljeno na -25°C tokom 1 sata i reakcionoj smeši je potom omogućeno da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 2 sata. Reakciona smeša je sipana u rastvor ledene vode/Rochelle soli, i nakon mešanja neko vreme, čvrste supstance su uklonjene filtriranjem preko dicalite® i filter kolač je ispran nekoliko puta sa malim delovima od THF. Faze su razdvojene i vodeni sloj je ekstrakovan sa THF. Kombinovani organski slojevi su oprani sa rasolom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i ispareni pod redukovanim pritiskom. Čvrsti ostatak je suspendovan u CH2Cl2 (20 mL). Čvrste supstance su filtrirane, oprane sa malim delovima od CH2Cl2 i osušene pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-metoksi-7-metil-1H-indol-3-il)etanon 11a (7,5 g).
Sinteza međuproizvoda 11b:
[0122] Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (5,8 g, 15,5 mmol) u THF (200 mL) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-metoksi-7-metil-1H-indol-3-il)etanona 11a (4,95 g, 14,1 mmol) u THF (200 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Talog je filtriran i oprana sa THF. Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je usitnjen sa malom količinom CH2Cl2. Talog je filtriran, oprana sa CH2Cl2 i osušen pod vakuumom kako bi se dobio 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-metoksi-7-metil-1H-indol-3-il)etanon 11b (4,04 g).
Sinteza Jedinjenja 11 i hiralno razdvajanje na Enantiomere 11A i 11B:
[0123] Smeša 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(6-metoksi-7-metil-1H-indol-3-il)etanona 11b (1434 mg, 3,78 mmol) i 2-(3-amino-5-metoksi-fenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (1037 mg, 5,66 mmol) i diizopropiletilamina (976 µL, 5,66 mmol) u CH3CN (100 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakciona smeša je koncentrisana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je podeljen između CH2Cl2 i 0,5N HCl. Faze su razdvojene. Organski sloj je opran sa vodom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je pročišćen fleš hromatografijom na silika gelu (Stacionarna faza: Biotage® SNAP Ultra 100 g, Mobilna faza: EtOAc:EtOH(3:1)/heptan gradijent 0/100 do 60/40). Fragmenti koji sadrže Jedinjenje 11 su kombinovani i koncentrisani pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)-1-(6-metoksi-7-metil-1H-indol-3-il)etanon (Jedinjenje 11, 995 mg) kao racemska smeša.
[0124] Hiralno razdvajanje enantiomera Jedinjenja 11 (995 mg) je izvršeno koristeći hiralno razdvajanje normalne faze (Stacionarna faza: (S,S) Whelk-O 1 (500 g), Mobilna faza: 100% EtOH, izokratsko eluiranje). Fragmenti proizvoda su kombinovani i ispareni kako bi se dobio Enantiomer 11A kao prvi eluiran proizvod i Enantiomer 11B kao drugi eluiran proizvod. Enantiomeri 11A je dalje pročišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (Stacionarna faza: Biotage® SNAP Ultra 10 g, Mobilna faza CH2Cl2/MeOH gradijent 100/0 do 98/2). Fragmenti proizvoda su kombinovani, rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom i ostatak je osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio Enantiomer 11A (255 mg) kao amorfni beli prašak. Enantiomer 11B je dalje pročišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (Stacionarna faza: SNAP Ultra 10 g, Mobilna faza CH2Cl2/MeOH gradijent 100/0 do 98/2). Fragmenti proizvoda su kombinovani, rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom i ostatak je osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio Enantiomer 11B (270 mg) kao amorfni beli prašak.
Jedinjenje 11:
[0125] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,29 (s, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,2 Hz, 2 H) 3,79 (s, 3 H) 3,80 - 3,90 (m, 2 H) 3,97 (s, 3 H) 4,77 (t, J=5,4 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=2,0 Hz, 2 H) 6,13 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,32 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 6,71 (td, J=8,5, 2,5 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=11,3, 2,4 Hz, 1 H) 6,94 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,6, 6,9 Hz, 1 H) 7,93 (d, J=8,9 Hz, 1 H) 8,31 (d, J=2,9 Hz, 1 H) 11,83 (d, J=3,1 Hz, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,10 minuta, MH+ 509
Enantiomer 11A:
[0126] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,29 (s, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,4 Hz, 2 H) 3,79 (s, 3 H) 3,80 - 3,89 (m, 2 H) 3,97 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,70 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=2,2 Hz, 2 H) 6,13 (d, J=7,7 Hz, 1 H) 6,34 (d, J=7,7 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,4, 2,6 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,5, 2,4 Hz, 1 H) 6,94 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,6, 6,8 Hz, 1 H) 7,93 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 8,32 (br s, 1 H) 11,85 (br s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,05 minuta, MH+ 509
[α]D20: +98,8° (c 0,5285, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-F): Rt 2,26 minuta, MH+ 509, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 11B:
[0127] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,29 (s, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,1 Hz, 2 H) 3,79 (s, 3 H) 3,80 - 3,90 (m, 2 H) 3,97 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,70 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=2,2 Hz, 2 H) 6,13 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,34 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,72 (td, J=8,4, 2,6 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,5, 2,4 Hz, 1 H) 6,94 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,8, 7,0 Hz, 1 H) 7,93 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 8,32 (br s, 1 H) 11,85 (brs, 1 H)
LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,05 minuta, MH+ 509
[α]D20: -94,1° (c 0,461, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-F): Rt 2,73 minuta, MH+ 509, hiralna čistoća 100%.
Primer 12: sinteza 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanona (Jedinjenje 12) i hiralno razdvajanje na Enantiomere 12A i 12B.
[0128]
Sinteza međuproizvoda 12a:
[0129] Dietilaluminijum hlorid 1M u heksanu (25,6 mL, 25,6 mmol) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 7-fluoro-5-metil-1H-indola [CAS442910-91-0] (2,54 g, 17,0 mmol) u CH2Cl2 (150 mL) pod N2-atmosferom. Nakon mešanja tokom 30 minuta na 0°C, rastvor 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)acetil hlorida 1a (5,2 g, 25,6 mmol, sinteza: pogledati Primer 1) u CH2Cl2 (150 mL) je dodat kapanjem na 0°C. Mešanje je nastavljeno na 0°C tokom 1 sata i reakcionoj smeši je potom omogućeno da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 3 sata. Reakciona smeša je sipana u rastvor ledene voda/Rochelle soli, i nakon mešanja neko vreme, čvrste supstance su uklonjene filtriranjem preko dicalite® i filter kolač je ispran nekoliko puta sa malim delovima od THF. Faze su razdvojene i vodeni sloj je ekstrakovan sa THF. Kombinovani organski slojevi su oprani sa rasolom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i ispareni pod redukovanim pritiskom. Čvrsti ostatak je suspendovan u CH2Cl2 (20 mL). Čvrste supstance su filtrirane, oprane sa malim delovima CH2Cl2/heptana (1/1) i osušene pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)etanon 12a (4,13 g).
Sinteza međuproizvoda 12b:
[0130] Rastvor feniltrimetilamonijum tribromida [CAS 4207-56-1] (5,39 g, 14,3 mmol) u THF (150 mL) je dodat kapanjem na 0°C rastvoru 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)etanon 12a (4,11 g, 13,0 mmol) u THF (100 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Talog je filtriran i opran sa THF. Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je usitnjen sa malom količinom CH2Cl2. Talog je filtriran, opran sa CH2Cl2 i osušen pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)etanon 12b (4,81 g).
Sinteza Jedinjenja 12 i hiralno razdvajanje na Enantiomere 12A i 12B:
[0131] Smeša 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)etanona 12b (1096 mg, 2,78 mmol) i 2-(3-amino-5-metoksifenoksi)etanola [CAS 725237-16-1] (764 mg, 4,17 mmol) i diizopropiletilamina (718 µL, 4,17 mmol) u CH3CN (25 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 90 sati. Reakciona smeša je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je podeljen između CH2Cl2 i 0,5N HCl. Faze su razdvojene. Organski sloj je opran sa vodom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je pročišćen fleš hromatografijom na silika gelu (Stacionarna faza: Biotage® SNAP Ultra 100 g, Mobilna faza: EtOAc: EtOH(3:1)/heptan gradijent 0/100 do 50/50). Fragmenti koji sadrži Jedinjenje 12 su kombinovani i koncentrisani pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio 2-(4-fluoro-2-metoksifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroksietoksi)-5-metoksifenil)amino)etanon (Jedinjenje 12, 919 mg) kao racemska smeša.
[0132] Hiralno razdvajanje enantiomera Jedinjenja 12 (919 mg) je izvršeno putem Preparativne SFC (Stacionarna faza: Chiralcel® Diacel® OD 20 x 250 mm, Mobilna faza: CO2, EtOH sa 0,2% iPrNH2). Fragmenti proizvoda su kombinovani, ispareni i osušeni pod vakuumom na 50°C kako bi se dobio Enantiomer 12A (307 mg) kao prvi eluiran proizvod i Enantiomer 12B (302 mg) kao drugi eluiran proizvod. Oba enantiomera se javila kao amorfni beli prašci.
Jedinjenje 12:
[0133] LC/MS (postupak LC-A): Rt 1,08 minuta, MH+ 497
Enantiomer 12A:
[0134] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,39 (s, 3 H) 3,62 (s, 3 H) 3,65 (q, J=5,4 Hz, 2 H) 3,77 - 3,90 (m, 2 H) 3,95 (s, 3 H) 4,80 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,72 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,95 (d, J=2,2 Hz, 2 H) 6,15 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,35 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,74 (td, J=8,5, 2,4 Hz, 1 H) 6,92 (dd, J=12,1, 1,1 Hz, 1 H) 6,94 (dd, J=11,3, 2,2 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,8, 7,0 Hz, 1 H) 7,79 (s, 1 H) 8,40 (s, 1 H) 12,48 (br s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-B): Rt 1,98 minuta, MH+ 497
[α]D20: -113,5° (c 0,355, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-K): Rt 2,26 minuta, MH+ 497, hiralna čistoća 100%.
Enantiomer 12B:
[0135] 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,38 (s, 3 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 (q, J=5,1 Hz, 2 H) 3,77 - 3,89 (m, 2 H) 3,94 (s, 3 H) 4,79 (t, J=5,5 Hz, 1 H) 5,71 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=1,8 Hz, 2 H) 6,15 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 6,34 (d, J=7,7 Hz, 1 H) 6,73 (td, J=8,5, 2,4 Hz, 1 H) 6,91 (br d, J=12,1 Hz, 1 H) 6,93 (dd, J=11,3, 2,6 Hz, 1 H) 7,36 (dd, J=8,4, 7,0 Hz, 1 H) 7,78 (s, 1 H) 8,39 (s, 1 H) 12,46 (br s, 1 H)
LC/MS (postupak LC-B): Rt 1,98 minuta, MH+ 497
[α]D20: +117,0° (c 0,448, DMF)
Hiralna SFC (postupak SFC-K): Rt 3,67 minuta, MH+ 497, hiralna čistoća 100%.
ANTIVIRUSNA AKTIVNOST JEDINJENJA PRONALASKA
DENV-2 antivirusni test
[0136] Antivirusna aktivnost svih jedinjenja pronalaska je testirana protiv DENV-2 16681 soja koji je obeležen sa pojačanim zelenim fluorescentnim proteinom (eGPF). Medijum za kulturu se sastoji od minimalnog esencijalnog medijuma dopunjenog sa 2% toplotno inaktiviranog fetalnog telećeg seruma, 0,04% gentamicina (50 mg/mL) i 2mM L-glutamina. Vero ćelije, dobijene iz ECACC, su suspendovane u medijumu za kulturu i dodato je 25 µL na 384-komorične ploče (2500 ćelija/komorica), koje već sadrže antivirusna jedinjenja. Tipično, ove ploče sadrže četvorostruko serijsko razblaženje od 9 koraka razblaživanja test jedinjenja u 200 puta konačnoj koncentraciji u 100% DMSO (200 nL). Pored toga, svaka koncentracija jedinjenja je testirana u kvadruplikatu (krajnji raspon koncentracije: 25 µM – 0,00038 µM). Konačno, svaka ploča sadrži komorice koje su dodeljene kao kontrole virusa (koje sadrže ćelije i virus u odsustvu jedinjenja), kontrole ćelija (koje sadrže ćelije u odsustvu virusa i jedinjenja) i kontrolne medijuma (sadrže medijum u odsustvu ćelija, virus i jedinjenja). U komorice dodeljene kao kontrola medijuma, umesto Vero ćelija je dodato 25 µL medijuma kulture. Kada se ćelije dodaju na ploče, ploče se inkubiraju 30 minuta na sobnoj temperaturi, kako bi se omogućilo da se ćelije ravnomerno raspodele unutar komorica. Zatim su ploče inkubirane u potpuno ovlaženom inkubatoru (37°C, 5% CO2) do sledećeg dana. Zatim, DENV-2 soj 16681, obeležen sa eGFP, je dodat sa multiplicitetom infekcije (MOI) od 0,5. Prema tome, 15 µL virusne suspenzije je dodato svim komoricama koje sadrže testirano jedinjenje i komoricama dodeljenim kao kontrola virusa. Paralelno, 15 pL medijuma kulture je dodato u kontrole medijuma i ćelija. Zatim, ploče su inkubirane 3 dana u potpuno ovlaženom inkubatoru (37°C, 5% CO2). Na dan očitavanja, eGFP fluorescencija je merena korišćenjem automatizovanog fluorescentnog mikroskopa na 488 nm (plavi laser). Koristeći in-house LIMS sistem, izračunate su krive odgovora na dozu inhibicije za svako jedinjenje i polovina maksimalne efektivne koncentracije (EC50) je određena. Prema tome, procenat inhibicije (I) za svaku test koncentraciju se izračunava korišćenjem sledeće formule: = 100*(ST-SCC)/(SCV-SCC); ST, SCC i SVC su količina eGFP signala u komoricama sa ispitivanim jedinjenjem, kontrolom ćelija i kontrolom virusa, respektivno. EC50 predstavlja koncentraciju jedinjenja kod koga je replikacija virusa inhibirana sa 50%, mereno 50% redukcijom eGFP fluorescentnog intenziteta u poređenju sa kontrolom virusa. EC50 izračunava se korišćenjem linearne interpolacije (Tabela 1).
[0137] Paralelno, toksičnost jedinjenja je procenjivana na istim pločama.
[0138] Jednom kada je izvršeno očitavanje za eGFP signal, 10 µL resazurina, boja za vitalnost ćelija je dodato u sve komorice ploča sa 384-komorica. Test rezazurina se zasniva na redukciji plavog resazurina pomoću NADH, proizvedenog u ćelijama, u visoko fluorescentni proizvod, resorufin. Formiranje ružičastog fluorescentnog resorufina direktno je povezano sa brojem živih ćelija u komorici. Ploče su inkubirane dodatnih 5 sati u potpuno ovlaženom inkubatoru (37°C, 5% CO2). Zatim, ploče su merene na Infinite čitaču (Tecan) koristeći talasnu dužinu pobuđivanja od 530nm. Polu maksimalna citotoksična koncentracija (CC50) je takođe određena, definisana kao koncentracija koja je potrebna da se smanji konverzija resazurina za 50% u poređenju sa onom iz komorica kontrole ćelija (Tabela 1). Konačno, određen je indeks selektivnosti (SI) za jedinjenja, koju je izračunat na sledeći način: SI = CC50/EC50.
Tabela 1: EC50, CC50, i SI za jedinjenja pronalaska u DENV-2 antivirusnom testu
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1
0,0080
4
11
4
>1564
4
1A
0,0038
5
8,4
4
2100
4
1B
0,66
5
12
5
18
5
2
0,0054
4
7,0
4
1291
4
2A
0,66
5
5,4
4
8,1
4
2B
0,0022
5
5,3
4
2581
4
3
0,0021
3
6,3
4
2915
3
3A
0,00077
6
4,1
5
5120
5
3B
0,18
5
5,8
5
32
5
4A
0,0016
4
5,9
4
3698
4
4B
0,38
4
7,7
4
20
4
5
0,0089
4
5,2
4
586
4
5A
0,44
5
7,4
4
17
4
5B
0,0025
30
6,5
30
2673
29
6A
0,0027
9
7,5
8
2968
8
6B
0,29
5
9,6
5
33
5
7
0,014
4
> 9,7
4
1049
4
7A
0,0046
6
> 8,6
5
1864
5
7B
0,54
5
14
5
39
5
8
0,0039
4
6,8
4
1733
4
8A
0,0010
7
8,6
6
10020
6
8B
0,15
5
9,1
6
59
5
9
0,0094
4
7,5
4
794
4
9A
0,63
6
8,8
5
14
5
9B
0,0034
6
5,5
5
1575
5
10
0,0068
3
9,3
3
1362
3
10A
0,58
3
11
3
19
3
10B
0,0027
3
6,9
2
2565
2
11
0,0024
3
10
2
4455
2
11A
0,00081
3
8,9
3
10981
3
11B
0,41
3
12
3
28
3
12A
0,93
3
9,2
3
10
3
12B
0,0051
3
5,5
3
1063
3
N= broj nezavisnih eksperimenata u kojima su jedinjenja testirana.
Kvantitativni-PCR (RT-qPCR) test tetravalentne reverzne transkriptaze: Protokol A.
[0139] Antivirusna aktivnost jedinjenja pronalaska je testirana protiv DENV-1 soja TC974#666 (NCPV), DENV-2 soja 16681, DENV-3 soja H87 (NCPV) i DENV-4 sojeva H241 (NCPV) i EDEN (SG)/06K2270DK1/2005; Genbank Pristupni broj KG398256) u RT- qPCR testu. Prema tome, Vero ćelije su inficirane ili sa DENV-1, ili -2, ili -3, ili -4 u prisustvu ili odsustvu test jedinjenja. Na dan 3 nakon infekcije, ćelije su lizirane i ćelijski lizati su korišćeni za pripremu cDNK i od virusnog cilja (3'UTR DENV; Tabela 2) i ćelijskog referentnog gena (β-aktin, Tabela 2). Zatim je izveden dupli realni PCR na Lightcycler480 instrumentu. Generisana Cp vrednost je obrnuto proporcionalna količini RNK eksprimiranja ovih ciljeva. Inhibicija DENV replikacije sa testiranim jedinjenjem rezultuje pomeranjem Cp za 3'UTR gen. S druge strane, ako je test jedinjenje toksično za ćelije, sličan efekat na eksprimiranje β-aktina će biti primećen. Za izračunavanje EC50 koristi se komparativni ΔΔCp postupak koji je zasnovan na relativnom eksprimiranju gena ciljnog gena (3'UTR) normalizovanog sa ćelijskim genom za održavanje (β-aktin). Pored toga, CC50 Vrednosti su određene na osnovu Cp vrednosti dobijenih za β-aktina gen za održavanje.
Tabela 2: Prajmeri i sonde korišćeni za kvantitativni RT-PCR u realnom vremenu.
Prajmer/sonda
Cilj
Sekvencaa,b
F3utr258
DENV 3'-UTR
5'-CGGTTAGAGGAGACCCCTC-3'
R3utr425
DENV 3'-UTR
5'-GAGACAGCAGGATCTCTGGTC-3'
P3utr343
DENV 3'-UTR
FAM-5'-AAGGACTAGAGGTTAGAGGAGACCCCCC-3'-BHQ1
Factin743
β-aktin
5'-GGCCAGGTCATCACCATT-3'
Ractin876
β-aktin
5'-ATGTCCACGTCACACTTCATG-3'
Pactin773
β-aktin
HEX-5'-TTCCGCTGCCCTGAGGCTCTC-3'-BHQ1
aElementi reporter boja (FAM, HEX) i gašenje (BHQ1) su označeni podebljanim slovima i kurzivom.
bNukleotidna sekvenca prajmera i sondi je izabrana od konzervisanog regiona u 3'UTR regionu genoma denga virusa, na osnovu poravnanja 300 nukleotidnih sekvenci od četiri denga serotipa deponovanih u Genbank (Gong et al., 2013, Methods Mol Biol, Chapter 16).
[0140] Medijum za kulturu se sastojao od minimalnog esencijalnog medijuma dopunjenog sa 2% toplotno inaktiviranog fetalnog telećeg seruma, 0,04% gentamicina (50 mg/mL) i 2mM L-glutamina. Vero ćelije, dobijene iz ECACC, su suspendovane u medijumu za kulturu i dodato je 75 µL/komorica u ploče sa 96 komorica (10000 ćelija/komorica), koje već sadrže antivirusna jedinjenja. Tipično, ove ploče sadrže četvorostruko serijsko razblaživanje od 9 koraka razblaživanja test jedinjenja u 200 puta konačnoj koncentraciji u 100% DMSO (500 nL; krajnji raspon koncentracije: 25 µM - 0,00038 µM). Pored toga, svaka ploča sadrži komorice koje su dodeljene kao kontrole virusa (koje sadrže ćelije i virus u odsustvu jedinjenja) i kontrole ćelija (koje sadrže ćelije u odsustvu virusa i jedinjenja). Kada se ćelije dodaju na ploče, ploče se inkubiraju u potpuno ovlaženom inkubatoru (37°C, 5% CO2) do sledećeg dana. Zatim su dodati DENV-1 soj TC974#666, DENV-2 soj 16681, DENV-3 soj H87 ili DENV-4 sojevi H241 ili EDEN. Prema tome, 25 µL virusne suspenzije, gde je postignut Cp od -22 u RTqPCR, su dodate svim komoricama koje sadrže test jedinjenje i komoricama dodeljenim kao kontrola virusa. Paralelno, 25 µL medijuma kulture je dodato u kontrole ćelija. Zatim, ploče su inkubirane 3 dana u potpuno ovlaženom inkubatoru (37°C, 5% CO2). Posle 3 dana, supernatant je uklonjen iz komorica i ćelije su isprane dva puta ledeno hladnim PBS (~100 µL). Ćelijske pelete unutar ploča sa 96 komorica su čuvane na -80°C najmanje 1 dan. Zatim, RNK je ekstrakovana korišćenjem Cells-to-CT™ kompleta za lizu, u skladu sa uputstvom proizvođača (Applied Biosystems). Ćelijski lizati se mogu čuvati na -80°C ili odmah koristiti u koraku reverzne transkripcije.
[0141] U pripremi reverznog transkripcionog koraka, pripremljena je mešavina A (Tabela 3A) i 7,57 µL/komorica je raspodeljeno na ploči sa 96 komorica. Nakon dodavanja 5 µL ćelijskih lizata, izveden je petominutni denaturacioni korak na 75°C (Tabela 3B). Nakon toga, dodato je 7m43 µL mešavine B ( Tabela 3C) i započet je korak reverzne transkripcije (tabela 3D) kako bi se dobila cDNK.
[0142] Konačno, pripremljena je RT-qPCR mešavina, mešavina C (Tabela 4A), raspodeljena u 96-komorične LightCycler qPCR ploče na koje je dodato 3 µL cDNA i qPCR je izveden u skladu sa uslovima u Tabeli 4B na LightCicler 480.
[0143] Koristeći LightCycler softver i in-house LIMS sistem, izračunate su krive doza odgovora za svako jedinjenje i polovina maksimalne efektivne koncentracije (EC50) i polovina maksimalne citotoksične koncentracije (CC50) su utvrđene (Tabele 6-9).
Kvantitativni-PCR (RT-qPCR) test tetravalentne reverzne transkriptaze: Protokol B.
[0144] Vero ćelije (4 × 104) su posejane u ploče sa 96 komorica. Posle jednog dana, medijum za kulturu ćelija je zamenjen sa 100 µL medijuma za ispitivanje koji sadrži 2×, 3× ili 5× serijsko razblaženje jedinjenja (koncentracioni opseg: 50 µg/mL - 0,00038 µg/mL, 50 µg/mL - 0,0076 pg/mL, i 50 µg/mL – 0,00013 µg/mL, respektivno) i 100 µL razblaživanja denga virusa, gde je postignut Ct od -20 u RTqPCR. Nakon perioda inkubacije od 2 sata, ćelijski monosloj je ispran tri puta sa medijumom za analizu kako bi se uklonio rezidualni, ne adsorbovani virus i kulture su dalje inkubirane bilo 4 dana (DENV-2 NGC-Tongalike) ili 7 dana (DENV-1 Džibuti soj D1/H/IMTSSA/98/606, DENV-3 soj H87 prototip, DENV-4 soj H241') u prisustvu inhibitora. Supernatant je sakupljen i virusno RNK opterećenje je određeno kvantitativnom RT-PCR u realnom vremenu. 50% efektivna koncentracija (EC50), koja je definisana kao koncentracija jedinjenja koja je potrebna za inhibiciju replikacije virusne RNA za 50%, određena je logaritamskom interpolacijom (Tabele 7 i 8).
[0145] RNK je izolovana iz 100 µL supernatanta sa NucleoSpin 96 Virus kompletom (Filter Service, Düren, Germany) kao što je opisano od strane proizvođača. Sekvence TaqMan prajmera (DENV-For, DENV-Rev; Tabela 5) i TaqMan sonde (DENV-Probe Tabela 5) su odabrane od ne-strukturnog gena 3 (NS3) ili NS5, odgovarajućih flavivirusa pomoću Primer Express softvera (verzija 2.0; Applied Biosystems, Lennik, Belgium). TaqMan sonda je fluorescentno obeležena sa 6-karboksifluoresceinom (FAM) na 5 'kraju kao reporter bojom, i sa malim vezivnim kanalom (MGB) na 3' kraju kao gašenje (Tabela 5). Jedan korak, kvantitativna RT-PCR je izvedena u ukupnoj zapremini od 25 µL, koja sadrži 13,9375 µL H2O, 6,25 µL master smeše (Eurogentec, Seraing, Belgium), 0,375 µL prednji prajmer, 0,375 pL reverzni prajmer, 1 pL sonda, 0,0625 µL reverzne transkriptaze (Eurogentec) i 3 pL uzorka. RT-PCR je izveden korišćenjem ABI 7500 Fast Real-Time PCR sistema (Applied Biosystems, Branchburg, New Jersey, USA) uz korišćenje sledećih uslova: 30 min na 48°C i 10 min na 95°C, praćeno sa 40 ciklusa 15 sekundi na 95°C i 1 minut na 60°C. Podaci su analizirani korišćenjem ABI PRISM 7500 SDS softvera (verzija 1.3.1; Applied Biosystems). Za apsolutnu kvantifikaciju, standardne krive su generisane korišćenjem 10-strukih razblaženja preparata za šablone poznatih koncentracija.
Tabela 5: Prajmeri i sonde za kvantitativni RT-PCR u realnom vremenu.
Prajmer/sonda
Sekvenca (5 '→ 3')a
Izvor b
Cilj
DENV-For
TCGGAGCCGGAGTTTACAAA (SEQ ID N.7)
DENV 2 NGC
NS3
DENV-Rev
TCTTAACGTCCGCCCATGAT (SEQ ID N.8)
DENV-Probe
FAM-ATTCCACACAATGTGGCAT-MGB (SEQ ID N.9)
DenS
GGATAGACCAGAGATCCTGCTGT (SEQ ID N.10)
DENV-1, -3, -4
NS5
DenAS1-3
CATTCCATTTTCTGGCGTTC (SEQ ID N.11)
DENV-1, -3
DenAS4
CAATCCATCTTGCGGCGCTC (SEQ ID N.12)
DENV-4
DEN_1-3 probe
FAM-CAGCATCATTCCAGGCACAG-MGB (SEQ ID N.13)
DENV-1, -3
DEN_4 probe
FAM-CAACATCAATCCAGGCACAG-MGB (SEQ ID N.14)
DENV-4
a Elementi reporter boja (FAM, HEX) i gašenje (BHQ1) su označeni podebljanim slovima i kurzivom.b Nukleotidna sekvenca i položaj prajmera i sondi unutar genoma su izvedeni iz nukleotidne sekvence DENV 2 NGC (Genbank Pristupni broj M29095; Irie et al., 1989), denga virus serotipa 1 Džibuti soj D1/H/IMTSSA/98/606 (Genbank Pristupni broj AF298808), denga virusa serotipa 3 soja H87 prototip (c93130), denga virus serotip 4 soja H241 (nema raspoloživih sekvenci).
Citotoksični test (Protokol B)
[0146] Potencijalni citotoksični efekti jedinjenja su procenjeni u neinficiranim Vero ćelijama. Ćelije su posejane na 4 × 104 ćelija/komorica na ploči sa 96 komorica u prisustvu dvo-, tro- ili peto-strukih serijskih razblaženja (u rasponu od 50 µg/mL – 0,0038 µg/mL, 50 µg/mL – 0,0076 µg/mL, i 50 µg/mL – 0,00013 µg/mL, respektivno) jedinjenja i inkubirane su 4 do 7 dana. Medijum za kulturu je odbačen i 100 µL 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-karboksimetoksifenil)-2-(4-sulfofenil)-2-H-tetrazolijum/fenazinmetosulfat (MTS/PMS; Promega, Leiden, The Netherlands) u PBS je dodat u svaku komoricu. Nakon perioda inkubacije od 2 sata na 37°C, optička gustina je određena na 498 nm. Citotoksična aktivnost je izračunata korišćenjem sledeće formule: % odr\ivosti ćelija = 100 × (ODjedinjenje/ODCC), gde ODjedinjenje i ODCC odgovaraju optičkoj gustini na 498 nm od neinficiranih kultura ćelija tretiranih sa jedinjenjem, i onoj od neinficiranih, neobrađenih ćelijskih kultura, respektivno. 50% citotoksične koncentracija (tj. koncentracija koja smanjuje ukupni broj ćelija sa 50%; CC50) izračunata je korišćenjem linearne interpolacije (Tabele 7 i 8).
Tabela 6: EC50, CC50, i SI za jedinjenja protiv serotipa 1 u RT-qPCR testovima
Protokol A
RT-qPCR serotip 1 TC974#666
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1A
0,018
6
8,7
5
447
5
2B
0,013
3
3,6
3
261
3
3A
0,016
3
4,1
3
224
3
4A
0,020
3
5,9
3
280
3
5B
0,027
3
6,3
3
224
3
6A
0,016
3
5,4
3
327
3
7A
0,029
3
3,8
3
129
3
8A
0,032
3
10
3
291
3
9B
0,019
3
3,8
3
175
3
10B
0,016
3
3,8
3
261
3
11A
0,020
3
6,3
2
307
2
12B
0,020
3
5,0
3
230
3
Protokol B
RT-qPCR serotip 1 Džibuti
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1A
0,040
3
13
5
333
2
2B
0,041
3
9,2
6
265
3
3A
0,045
3
7,6
6
144
2
4A
0,027
3
9,7
6
325
2
5B
0,065
3
12
7
172
3
6A
0,021
3
9,7
9
341
3
7A
0,055
3
16
5
308
2
8A
0,049
3
9,6
8
206
3
9B
0,042
3
8,8
6
263
3
10B
0,052
2
7,3
5
141
2
11A
0,023
2
11
5
534
2
12B
0,096
3
9,4
8
97
3
N= broj nezavisnih eksperimenata u kojima su jedinjenja testirana.
Tabela 7: EC50, CC50, i SI za jedinjenja protiv serotipa 2 u RT-qPCR testovima
Protokol A
RT-qPCR serotip 2 16681
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1A
0,0032
6
12
6
4043
6
2B
0,0023
3
4,9
3
1700
3
3A
0,00079
4
4,2
4
5745
4
4A
0,0016
3
13
3
7510
3
5B
0,0036
3
3,6
3
1087
3
6A
0,0017
6
4,1
6
2535
6
7A
0,0034
4
4,3
4
1316
4
8A
0,00090
4
10
4
11745
4
9B
0,0032
4
3,7
4
1180
4
10B
0,0032
3
6,5
3
1818
3
11A
0,00084
5
7,2
6
9329
5
12B
0,0081
3
4,7
3
520
3
Protokol B
RT-qPCR serotip 2 NGC-Tongalike
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1A
0,0010
3
13
3
11200
1
2B
0,00081
3
15
3
18500
3
3A
<0,00028
5
13
4
46900
4
4A
<0,00029
3
18
3
109414
1
5B
0,00044
3
11
3
30000
1
6A
<0,00035
5
17
3
39200
3
7A
0,0016
3
18
3
9980
1
8A
<0,00024
4
NA
NA
9B
0,00080
2
14
2
17500
2
10B
0,0016
3
11
3
6750
3
11A
0,00068
3
12
3
17600
1
12B
0,0017
3
14
3
8070
3
N= broj nezavisnih eksperimenata u kojima su jedinjenja testirana. NA: nije odobreno.
Tabela 8: EC50, CC50, i SI za jedinjenja protiv serotipa 3 u RT-qPCR testovima
Protokol A
RT-qPCR serotip 3 H87
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1A
0,12
6
4,4
5
38
5
2B
0,11
3
> 2,5
1
> 32
1
3A
0,088
3
2,2
2
23
2
4A
0,14
3
3,6
3
22
3
5B
0,19
3
3,4
3
20
3
6A
0,13
3
3,1
2
27
2
7A
0,19
3
3,9
2
24
2
8A
0,20
3
5,8
2
41
2
9B
0,19
3
> 2,5
1
> 12
1
10B
0,13
3
2,3
3
18
3
11A
0,085
3
3,7
3
44
3
12B
0,27
3
2,8
3
11
3
Protokol B
RT-qPCR serotip 3 H87
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1A
0,053
3
13
5
207
3
2B
0,042
3
9,2
6
188
1
3A
0,032
4
7,6
6
232
4
4A
0,016
3
9,7
6
443
3
5B
0,050
3
12
7
212
3
6A
0,020
5
9,7
9
484
4
7A
0,041
3
16
5
339
3
8A
0,029
5
9,6
8
324
5
9B
0,066
3
8,8
6
109
1
10B
<0,022
3
7,3
5
>337
3
11A
0,040
3
11
5
261
3
12B
0,077
4
9,4
8
133
4
N= broj nezavisnih eksperimenata u kojima su jedinjenja testirana.
Tabela 9: EC50, CC50, i SI za jedinjenja protiv serotipa 4 u RT-qPCR testovima.
Protokol A
RT-qPCR serotip 4 H241
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1A
0,48
6
9,0
7
16
6
2B
0,32
3
3,7
3
11
3
3A
0,24
5
2,8
4
12
4
4A
0,40
4
7,0
4
17
4
5B
0,45
3
2,5
3
5
3
6A
0,20
6
2,8
6
15
6
7A
0,47
4
2,4
3
4
3
8A
0,52
4
6,6
3
15
3
9B
0,39
4
2,9
4
7
4
10B
0,39
3
4,5
2
7
2
11A
0,35
5
5,1
4
15
4
12B
0,29
3
5,0
3
20
3
Protokol A
RT-qPCR serotip 4 EDEN
jedinjenje#
EC50 (µM)
N
CC50 (µM)
N
SI
N
1A
0,012
6
12
6
1066
6
2B
0,011
4
4,9
4
416
4
3A
0,016
3
4,1
3
261
3
4A
0,016
4
6,7
4
422
4
5B
0,024
4
5,6
4
223
4
6A
0,013
4
6,6
4
506
4
7A
0,023
4
4,5
4
184
4
8A
0,021
4
6,8
4
311
4
9B
0,020
4
4,9
4
236
4
10B
0,020
4
6,0
4
284
4
11A
0,015
5
4,8
3
235
3
12B
0,017
3
3,8
3
219
3
N= broj nezavisnih eksperimenata u kojima su jedinjenja testirana.

Claims (8)

1. Jedinjenje formule (I) njegovi stereoizomerni oblik, farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf koji obuhvataju mono- ili di-supstituisanu indol grupu; gde je navedeno jedinjenje izabrano iz grupe gde:R1 je H, R2 je F i R3 je H, F ili CH3;R1 je F ili CH3, R2 je OCH3 i R3 je H;R1 je H, R2 je Cl i R3 je H ili CH3;R1 je F, R2 je H i R3 je CH3,R1 je H, R2 je OCH3 i R3 je Cl,R1 je F, R2 je F i R3 je H,R1 je H, R2 je OCH3 i R3 je CH3 iliR1 je CH3, R2 je H i R3 je F.
2. Jedinjenje ili njegov stereoizomerni oblik, farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf prema patentnom zahtevu 1, gde je navedeno jedinjenje izabrano iz grupe: ili
3. Farmaceutski sastav koji obuhvata jedinjenje formule (I) ili njegov stereoizomerni oblik, farmaceutski prihvatljivu so, solvat ili polimorf prema patentnom zahtevu 1 ili 2, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom, diluentom ili nosačem.
4. Jedinjenje formule (I) ili njegov stereoizomerni oblik, farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf prema patentnom zahtevu 1, ili farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 3, za upotrebu kao lek.
5. Jedinjenje formule (I) ili njegov stereoizomerni oblik, farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf prema patentnom zahtevu 1, ili farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 3, za primenu u tretmanu denge.
6. Jedinjenje predstavljeno narednom strukturalnom formulom (I) njegovi stereoizomerni oblik, farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili polimorf koji obuhvataju mono- ili di-supstituisanu indol grupu; gde je navedeno jedinjenje izabrano iz grupe gde:R1 je H, R2 je F i R3 je H, F ili CH3;R1 je F ili CH3, R2 je OCH3 i R3 je H;R1 je H, R2 je Cl i R3 je H ili CH3;R1 je F, R2 je H i R3 je CH3,R1 je H, R2 je OCH3 i R3 je ClR1 je F, R2 je F i R3 je H,R1 je H, R2 je OCH3 i R3 je CH3 iliR1 je CH3, R2 je H i R3 je Fza primenu u inhibiranju replikacije denga virusa u biološkom uzorku ili pacijentu.
7. Jedinjenje za primenu prema patentnom zahtevu 6 koje dalje obuhvata ko-primenu sa dodatnim terapeutskim agensom.
8. Jedinjenje za primenu prema patentnom zahtevu 7 gde je navedeni dodatni terapeutski agens drugi antivirusni agens.
MEP-2019-37A 2014-10-01 2015-09-30 Mono- ili di-supstituisani indoli kao inнibitori replikacije denga virusa ME03344B (me)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14187373 2014-10-01
EP15156073 2015-02-23
PCT/EP2015/072534 WO2016050831A1 (en) 2014-10-01 2015-09-30 Mono- or di-substituted indoles as dengue viral replication inhibitors
EP15771593.9A EP3201177B1 (en) 2014-10-01 2015-09-30 Mono- or di-substituted indoles as dengue viral replication inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ME03344B true ME03344B (me) 2019-10-20

Family

ID=54207512

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MEP-2019-37A ME03344B (me) 2014-10-01 2015-09-30 Mono- ili di-supstituisani indoli kao inнibitori replikacije denga virusa

Country Status (31)

Country Link
US (1) US10206902B2 (me)
EP (1) EP3201177B1 (me)
JP (1) JP6701185B2 (me)
KR (1) KR102478309B1 (me)
CN (1) CN107001265B (me)
AU (1) AU2015326920A1 (me)
BR (1) BR112017006708A2 (me)
CA (1) CA2958022A1 (me)
CL (1) CL2017000742A1 (me)
CY (1) CY1121972T1 (me)
DK (1) DK3201177T3 (me)
EA (1) EA033845B1 (me)
ES (1) ES2711117T3 (me)
HR (1) HRP20190139T1 (me)
HU (1) HUE042628T2 (me)
IL (1) IL251401A0 (me)
LT (1) LT3201177T (me)
MA (1) MA40769B1 (me)
ME (1) ME03344B (me)
MX (1) MX2017004298A (me)
PH (1) PH12017500503A1 (me)
PL (1) PL3201177T3 (me)
PT (1) PT3201177T (me)
RS (1) RS58394B1 (me)
SG (1) SG11201702464WA (me)
SI (1) SI3201177T1 (me)
SM (1) SMT201900093T1 (me)
TW (1) TW201619130A (me)
UY (1) UY36339A (me)
WO (1) WO2016050831A1 (me)
ZA (1) ZA201702299B (me)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
US9453018B2 (en) 2014-10-01 2016-09-27 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidinones as factor XIa inhibitors
JP6662865B2 (ja) 2014-10-01 2020-03-11 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ ボロン酸誘導体
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) * 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
CA3013407A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
AU2017242893A1 (en) 2016-03-31 2018-08-09 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
KR102359766B1 (ko) * 2016-04-01 2022-02-07 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 뎅기 바이러스 복제 억제제로서 치환된 인돌 화합물 유도체
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
DK3630724T3 (da) 2017-05-22 2021-07-26 Janssen Pharmaceuticals Inc Substituerede indolinderivater som inhibitorer af virusreplikation af denguevirus
JP7203764B2 (ja) 2017-05-22 2023-01-13 ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド デングウイルス複製阻害剤としての置換インドリン誘導体
CN114989131B (zh) * 2022-05-30 2023-10-24 云南大学 N’-(2-(苯并[1,3]二氧戊烷-5-基)酰基)芳酰肼类化合物及其合成和用途

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2928645A1 (fr) * 2008-03-14 2009-09-18 Sanofi Aventis Sa Nouveaux derives de carbazole inhibiteurs d'hsp90, compositions les contenant et utilisation
JP2012500260A (ja) * 2008-08-18 2012-01-05 イェール・ユニヴァーシティー Ｍｉｆモジュレーター
UA108221C2 (uk) * 2010-01-15 2015-04-10 Похідні тіофен-2-карбонової кислоти як інгібітори вірусів flaviviridae
GB201116559D0 (en) * 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
KR102478311B1 (ko) * 2014-10-01 2022-12-15 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 １치환 또는 ２치환 인돌 유도체
JOP20160086B1 (ar) * 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) * 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك

Also Published As

Publication number Publication date
DK3201177T3 (en) 2019-03-04
CA2958022A1 (en) 2016-04-07
MA40769A (fr) 2017-09-09
US10206902B2 (en) 2019-02-19
JP6701185B2 (ja) 2020-05-27
EA033845B1 (ru) 2019-12-02
JP2017531638A (ja) 2017-10-26
ES2711117T3 (es) 2019-04-30
PH12017500503A1 (en) 2017-08-30
KR20170063675A (ko) 2017-06-08
HUE042628T2 (hu) 2019-07-29
KR102478309B1 (ko) 2022-12-15
EA201790700A1 (ru) 2017-08-31
SI3201177T1 (sl) 2019-05-31
HRP20190139T1 (hr) 2019-03-22
PL3201177T3 (pl) 2019-05-31
MX2017004298A (es) 2017-07-19
CL2017000742A1 (es) 2017-11-03
BR112017006708A2 (pt) 2017-12-26
EP3201177B1 (en) 2018-11-21
PT3201177T (pt) 2019-02-12
ZA201702299B (en) 2018-12-19
AU2015326920A1 (en) 2017-03-02
EP3201177A1 (en) 2017-08-09
CY1121972T1 (el) 2020-10-14
WO2016050831A1 (en) 2016-04-07
UY36339A (es) 2016-04-01
MA40769B1 (fr) 2019-03-29
RS58394B1 (sr) 2019-04-30
CN107001265A (zh) 2017-08-01
LT3201177T (lt) 2019-03-12
CN107001265B (zh) 2021-06-15
TW201619130A (zh) 2016-06-01
SMT201900093T1 (it) 2019-02-28
IL251401A0 (en) 2017-05-29
SG11201702464WA (en) 2017-04-27
US20170224658A1 (en) 2017-08-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7451626B2 (ja) デングウイルス複製阻害剤としての一または二置換インドール誘導体
EP3201177B1 (en) Mono- or di-substituted indoles as dengue viral replication inhibitors
EP3201176B1 (en) Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
EP3244886B1 (en) Indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
AU2016323535B2 (en) Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
HK1246688B (en) Indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
HK1242299A1 (en) Mono- or di-substituted indoles as dengue viral replication inhibitors
EA040657B1 (ru) Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге