MC1674A1 - Sels de derives d'oxazaphosphorine,leur preparation et leur emploi - Google Patents

Description

Sels de dérivés d'oxazaphosphorine, leur préparation et: leur emploi.

Dans le brevet belge 892589 sont décrits des acides oxazaphosphorine-4-thio-alcanesulfoniquees ainsi que des sels particuliers de ces acides, de formule générale :

1 0

1 5

Rn

R-

20

s-x-so-

0

25

30

35

dans laquelle R^ , et R^, qui peuvent être identiques ou différents les uns des autres,représentent chacun l'hydrogène ou un groupe méthyle, éthyle, 2-chloroéthyle ou 2-méthanesulfonyloxyéthyle, deux au moins d'entre eux étant le groupe 2-chloroéthyle et/ou 2-méthanesulfonyloxyéthyle, R^, représente l'hydrogène ou un méthyle et X un alkylène à chaîne droite où ramifiée en C„ à C, pouvant z b avoir un groupe mercapto sur l'atome de carbone 1, 2, 3,

0

4 ou 5 de la chaîne, et Y désigne le cation hydrogène,

un cation de métal alcalin ou a 1ca 1ino-1erreux, le cation guanidinium, morpholinium ou cyc1ohexy1ammonium ou le cation d'une aminé de formule NR..R..R.,, les radicaux Rr et

5 6 7 5

R^, qui peuvent être identiques ou différents les uns des autres, étant 1'hydrogène,des alkyles en C ou C ou des

©

groupes hydroxyéthy1e ou encore Y est le cation

éthylènediammonium N-CH^-CI^-NH^ ou pipérazinonium,

z étant le nombre 1 si Y est un cation monovalent ou bien le nombre 2 si Y est un cation divalent ou le cation d'un composé ayant deux cations monovalents.

La demande de brevet allemand publiée 3133309 concerne en outre des dérivés de 4-carbamoyloxyoxaphospho-rine de formule générale

Rc X lb il 0 - N - C - Z

dans laquelle X représente l'oxygène ou le soufre, R^, R£>

Rj,qui peuvent être identiques ou différents les uns des autres, représentent chacun l'hydrogène ou le groupe méthyle,

éthyle, 2-chloroéthyle ou 2-méthanesu1fony1oxyéthy1e, les radicaux R^ , qui peuvent être identiques ou différents les uns des autres, représentent chacun l'hydrogène ou le groupe méthyle ou éthyle, R,. désigne l'hydrogène, un alkyle en un hydrôxyalkyle en ou un phényle, et Z entre autres est un groupe alkylamino en C.-Ci0 pouvant avoir différents

1 1 o substituants, entre autres le groupe carboxy, ainsi que les sels de ces dérivés utilisables en pharmacie. Il est décrit comme exemple un composé dans lequel Z est le groupe -NH-CH^COOH , et le sel de cyclohexylamine correspondant.

Les composés du brevet belge 892589 et de la demande allemande 3133309 précités ont une action antitumorale ainsi qu'un effet immunosuppres seur.

La présente invention concerne ce qui est défini dans les revendications ci-après.

-ir

Les composés de cette invention ont une forte activité antitumorale et ils peuvent être utilisés notamment pour lutter contre le cancer. Par rapport aux composés connus du brevet belge et delademande allemande précités, ils ont 5 par exemple une moindre toxicité (par exemple toxicité aiguë

et effets locaux toxiques réduits), ce qui leur confère un meilleur indice thérapeutique, et une meilleure compatibilité locale et générale ainsi que veineuse. De plus, les présents composés ont un effet immunosuppresseur réduit, ils irritent 10 moins les tissus et souvent ils ont une moindre action hémolytique. Ils n'ont pas en outre d'effets secondaires circulatoires (par exemple effets sympa thétiques) , ou alors ces effets ne sont que faibles, et aussi ils influencent de manière moins gênante la pression sanguine. 15 Le radical alkylène (alk) de la formule I

peut être à chaîne droite ou ramifiée, des exemples étant les groupes méthylène, diméthylène, triméthy1ène, tétraméthy-lène> pentaméthylène et hexamé thy 1 ène, ou encore par exemple les radicaux -CH-CH2> -CH-CH(CH2)2-, -C(CH3)2-CH2~ et 20 CH3 CH3

^CH„-CH-CH„-, la chaîne ayant en particulier 2 ou 3 atomes de

Z i ch3

carbone quand elle n'est pas ramifiée. Dans le cas où le radical alk est ramifié, la partie qui est liée au groupe acide 25 et à l'atome de soufre ou d'azote aura en particulier 2 ou 3 atomes de carbone. Dans le cas où le groupe carboxy se trouve sur le groupe alk, le groupe alk sera de préférence le groupe — C H 2~ . Dars le cas où le radical alk comprend un groupe mercapto (ce peut être notamment le cas s'il s'agit du groupe 30 -S'^-alk-SO^H) , ce groupe mercapto peut être à la position 1,

2, 3, 4 ou 5, là numérotation commençant à l'atome de carbone sur lequel se trouve le groupe acide, par exemple le groupe

-S0 H. Il s'agit ainsi en particulier du groupe -CH„-CH(SH)-3 ^

ch2~.

35 On utilise de préférence des composés dans lesquels

R3 est 1'hydrogène,et R2 sont chacun le groupe 2-chloroéthyle

10

25

30

et A le groupe -S-CH2-CH2-S03H ou -N(0H)-C0-NH-CH2~C02H.

Les groupes alkyles, alcoxy et alkylmercapto de la formule'II peuvent être à chaîne droite ou ramifiée.

L'alkyle en C^-C^q aura de préférence de 1 à 6 atomes de carbone, en ce qui concerne les groupes alcoxy et alkyl-mercapto, ils auront de préférence 1 à 4 atomes de carbone, notamment 1 ou 2, et il en est de même pour les radicaux et R , même s'il s'agit d'alkyles. Si R,. , dans la formule

P D

II, est un alkyle avec un groupe amino—C-C-alkylmercapto

1 6

(C -C,-alcoxy), il s'agira de préférence du groupe 1 D

H2N-CH2-CH2-S-CH2 OU H2N-CH2-CH2-0-CH2~.

Dans les composés de formule II R^ sera de préférence un hydroxyle, et de préférence aussi les radicaux R,-, R^ et Rg seront l'hydrogène, et R^ aura en particulier 15 les significations ci-après :

Des composés basiques préférés de formule II sont par exemple ceux dans lesquels R^ est un hydroxyle, R,. l'hydrogène ou le groupe difluorométhyle, R^ un alkyle en C.|-Cjq, en particulier en C.-C,, avec (de préférence à la position 2, 3,

1 D

20 4, 5 ou 6, la numérotation commençant toujours à l'endroit de liaison de l'alkyle avec le reste de la molécule) un groupe amino (notamment à la position 3 ou 4), un groupe amino-C2~C^-alkylthio, un groupe amino-C2~C^-alcoxy, un radical guanidino, imidazolyl-(4)-méthyle ou indoly1-(3)-méthyle, et R^ et Rg sont l'hydrogène ou des alkyles en C^-C^; ou encore des dérivés d1amino-acides de formule II dans lesquels R^ est un groupe amino ou C^-G^-alcoxy, R^ est l'hydrogène, R^ l'hydrogène ou un groupe phénylméthy1e, 4-hydroxyphénylméthy-

le ou C-C -alkyle avec (de préférence à la position 2, 3, 4 1 6

5 ou 6) un groupe hydroxy, mercapto, C -C^-alkylmercapto , aminocarbonyle, C-C^-alcoxycarbonyle ou un groupe uréido,

et R et R sont l'hydrogène ou des alkyles en C.-C..

7 0 1 t

Pour les amino—acides ou dérivés d'amino—acides précédemment indiqués, les sels par exemple se forment toujours 35 avec une mole d'oxazaphosphorine I et une mole du composé II.

Cf

On peut en outre prendre comme composés basiques de formule II par exemple ceux dans lesquels est un groupe amino ou un alcoxy en C ^ - C ^ , Rest l'hydrogène ou le groupe difluorométhyle, R^ un alkyle en C^-C^q, en particulier en C^-C^avec (de préférence à la position 2, 3, 4 ouw ) un groupe amino, Un groupe amino-C2~C^-alky1thio, un groupe amino-C 2 - C ^ - a 1 c o x y ou un radical guanidino, imidazolyl-(4)-méthyle ou indolyl—(3)-méthyle, et R7 et R sont l'hydrogène ou

/ o des alkyles en C.-C..

14

Avec les dérivés d'amino-acides mentionnés en dernier lieu, les sels se forment par exemple toujours avec 2 moles de 1'oxazaphosphorine et ur£ mole du dérivé d'amino-.Hcide de formule II.

Des exemples particuliers de composés de formule II sont les suivants :

diamide de l'acide aspartique (forme DL), ester diéthyli-que de l'acide aspartique (forme L), citru11inamide (H2N-CO-NH-(CH.2)3-CH(NH2)-CONH2, forme L) , arginine, arginiamide (forme L), 4-thialysine (H2N-CH2-CH2-S-CH2-CH(NH2) COOH), acide 2,6-diamino-oenanthic (£-mé thy 1-ly s ine ) ,

4-oxalys ine (H2N-CH2CH2-0-CH2-CH(NH2)-COOH), glycinamide, N,N-diméthy1glycinamide ainsi que les esters méthyliques et éthyliques correspondants, prolinamide, hydroxylpro1inamide, phénylalaninamide, ester méthylique ou éthylique de l'analine ou de la phénylanaline, homocystéine-thio1actone (forme DL), a -amino-e-caprolactame (forme D(+)), lysine (en'particulier lysine L), difluorométhyl-ornithine (forme DL ou L), ester méthylique de la valine (forme L), ester éthylique de la thréonine, ester méthylique de 1'histidine,histidinamide, alaninamide et ornithine.

Dans les sels de cette invention, dans les cas où dans le composé II R^ est un groupe amino ou alcoxy et où il n'y a pas par ailleurs de groupe basique, ou bien dans les cas où R^ est un hydroxyle et où il n'y a pas par ailleurs de groupe basique, le composé I (composant acide) et le composé II (composante basique) se trouventpratiquement

dans le rapport 1 (cela est également vrai si le composant basique est 1 "homocy stéine-thiolactone ou 1 1 a-amino- £-capro-lactame). Par ailleurs, si dans le composant basique II R ^ est un groupe amino ou un alcoxy et qu'il y ait en plus du groupe ot-amino, un autre groupe basique, le rapport du composé I au composé II sera de préférence le rapport 2 . Les présents sels sont des sels neutres. Dnas le cas de sels d'acide suifonique, le pH est par exemple compris entre 3,5 et 6, et d an s le cas de sels carboxyliques le pH est par exemple de 6 à 9, en particulier de 6 à 8.

En ce qui concerne le procédé a :

Le procédé est exécuté dans un solvant à des températures de -60°Ç à +90°C, de préférence de - 30° à +60°C et notamment de -20 à + 30° C, c'est-à-dire soit avec refroidis' sement, soit à la température ordinaire soit avec chauffage. La réaction peut se faire en présence d'un catalyseur acide tel qu'un acide minéral ou organique, par exemple l'acide tri -chloroâcétiquej, p-toluènesulfonique, trif luorométhane-sulfoni-que ou même un acide de Lewis tel que AlCl^, ZnC^» ou l'éthérate de trifluorure de bore. Le pH est réglé entre 1 et 8, de préférence entre 2 et 6 pour la réaction, notamment si les composés dont on part sont utilisés sous forme de sels, et le cas échéant aussi si l'on emploie l'acide libre AH et que A comporte un groupe carboxy.

Comme solvants on peut prendre par exemple l'eau,

des alcools, notamment des alcanols en C à C^ tels que le

1 o méthanol, l'éthanol, le propanol, l'isobutanol et l'hexanol,

des alkylcétones en C^-C^ dans le groupe alkyle, en particut:

lier l'acétone ou la méthy1éthy1cétone, des solvants aproti-

ques (par exemple le diméthy1 su1foxyde, 1'acétonitri1e, la

N-méthyIpyro1idine , le diméthy1formamide, 1'hexaméthy1-

triamide de l'acide phosphori que) , des hydrocarbures halogé-

nés en C. à C comme le chloroforme et le dichlorure s 1 3

d'éthylène, des éthers cycliques saturés tels que le tétrahy-drofuranne et le dioxanne, des éthers aliphatiques inférieurs saturés'comme l'éther diéthylique ou des solvants semblables,

on encore des mélanges de plusieurs de ces solvants.

Si dans le composé III X est un groupe hydroxy ou alcoxy, la réaction peut aussi être, effectuée en 2 étapes, par exemple d'abord réaction du composé III avec un composé AH (sans acidification) puis addition au mélange réactionnel, éventuellement après concentration et addition d'un autre des solvants indiqués, du composant basique II ou bien d'homo-cy s t é ine-thio lac t one ou d ' <*-amino-£ - caprolactame dans un solvant. ;L'emploi d'un composé III dans lequel X est un groupe hydroxy ou alcoxy est particuloèremnent approprié si le produit final est obtenu à l'état cristallisé. ;Si X n'est pas un groupe hydroxy ou alcoxy ou s'il est à l'état salifié, le composé A'H-, ou ce composé à l'état de sel, est employé en excès, par exemple de 1,05 à 10 molaire, de préférence de 2 à 5 moles du composé A'H ou de son sel par mole du composé III. On ajuste le pH de la solution réactionnelle par exemple entre 5,5 et 9, de préférence entre 6,5 et 8, avec une solution alcaline, par exemple d'hydroxyde de sodium aqueux , ou bien avec 1'aminé qui se trouve déjà comme composant basique dans le sel utilisé. Dans certains cas un pH pouvant s'élever jusqu'à 12 peut aussi être favorable, notamment si les composés de départ sont employés à l'état de sels ou des acides libres (par exemple si A contient le groupe carboxy). La température de réaction est par exemple de 10 à 90°C, de préférence de 25 à 60°C, et le temps de réaction par exemple de plusieurs secondes à plusieurs heures. Ensuite on refroidit par exemple la solution réactionnelle au-desous de 10°C et on porte le pH entre 4 et 5,5 ou éventuellement jusqu'à 7 avec un acide minéral tel que H^SO^, HCl ou l'acide phosphorique, un acide sulfonique, par exemple un acide mercapto C^-C^-alcane sulfo-nique comme l'acide mercaptohexanesulfonique ou l'acide mercaptométhanesulfonique, ou avec un échangeur d'ions sous la forme H®. ;9 ;On peut isoler le produit formé par exemple par cristallisation ou chromatographie, notamment par chromatographie préparative en phase liquide à haute pression, éventuellement une fois encore avec réaction ultérieure 5 supplémentaire sous la forme du sel voulue/sur un échangeur/ ;de cations aveë la charge correspondante. ;Si le groupe A de la formule III est à l'état salifié, on- peut employer des sels tels que ceux qui sont indiqués dans la demande allemande 313309 ou le brevet belge 10 892589 précités. On peut prendre par exemple le sel d'ammonium, de cyclohexy1ammonium ou de guanidinium, mais il va sans dire que l'on peut prendre aussi d'autres sels courants, par exemple de bases optiques ordinaires utilisées pour la résolution d'un racémate, sels que l'on peut obtenir 15 par une méthode analogue aux méthodes décrites. ;Les composés de départ de formule III sont également décrits par exemple dans les références suivantes, ou bien on peut les obtenir par une méthode analogue aux méthodes qui sont d é c rites dans ces références : 20 Tetrahedron Letters N ° . 10 (1979), pages 883-886, Cancer Treatment Reports 60, N° 4 (1976), pages 429-435. ;Si X est un groupe alkylthio en C^-C^q éventuellement substitué, on emploiera spécialement des composés de formule III ;dans lesquels X est un alkylthio en C.-C, , un groupe ;1 o ;25 -S-(CH„) -C0„H (n étant un nombre de 1 à 6, notamment de 2 n 2 ;1 à 3), un groupe -S-tCI^^-OH (n étant un nombre de ;2 à 6, notamment de 2 à 4) ou un groupe -S-(CH^)^-COOC^H^ (n étant un nombre de 1 à 6, notamment de 1 à 3). Si X ;est un groupe alcanoylthio en C^-C^, il s'agira de préférence 30 du groupe acétylthio, et si X est un groupe -N(OH)-CO-NHR ;et R un alkyle en C^-Cg/R aura de préférence 1 à 4 atomes de carbone et plus spécialement 1 ou 2. ;la préparation des sels AH de formule IV et des sels A'H de formule V peut se faire par exemple par réac- ;35 tion d'un composé AH ou A'H avec un composé basique ou bien ;{! ;~iiy ;11homocystéine-thio13ctone ou 1'a-amino-e-capro1 actame ou avec un composé de formule II, avec ou sans solvant, à des températures de 0 à 40°C. Comme solvants conviennent par exemple l'eau, des alcanols en C^-C^ tels que le méthanol et 5 l'éthanol, des cétones aliphatiques inférieures comme l'acé ;tone, des éthers cycliques comme le dioxanne, un hydrocarbure chloré tel que le chlorure de méthylène, le dichloru-re d'éthylène, le chloroforme ou le tétrachlorure de carbone, des éthers aliphatiques inférieurs saturés commel'éther diéthy-10 lique, des solvants aprotiques, par exemple le diméthy1forma-mide, le diméthylsylfoxyde ou 1 ' acry 1onitri1e, ou des mélanges de ces solvants. On peut également préparer ces sels par exemple en dissolvant un sel de métal alcalin comme le sel de sodium, de l'acide AH ou A'H, dans de l'eau pour en 15 faire par exemple une solution à une teneur de 1 à 20% en poids, ;solution que l'on fait passer sur une colonne d'un échangeur d'ions qui est un acide fort (forme H , en excès de 3), ;puis on neutralise l'acide libre de l'éluat avec le composant basique, on concentre le mélange sous vide et le cas échéant 20 on recristallise la matière restante dans un alcool inférieur tel que le méthanol ou l'éthanol, une cétone inférieure comme l'acétone ou un éther tel que l'éther diéthylique. ;En ce qui concerne le procédé b : ;Ce procédé est exécuté à des températures de 0 à 25 25°C, de préférence de 0 à 5°C, et comme solvants conviennent par exemple l'eau, des alcools aliphatiques inférieurs, des cétones aliphatiques inférieures ou des mélanges de ces solvants. On fait ainsi réagir 1 mole du composant I avec 1 mole du composant II, et il est approprié d'opérer à un pH 30 compris entre 3 et 8. Si l'on part de composés I dans lesquels A est un groupe S-alk-SO^H ou un sel de ce groupe, on opérera de préférence à un pH de 3 à 6, mieux encore de 3,8 à 5 et notamment à pH 4, et si l'on part de composés I dans lesquels A est un groupe -N(OH)-CO-NH-alk-CO^H ou un sel de ce groupe, 35 on opérera de préférence à un pH de 6 à 8, mieux encore à pH ;7 . ;-If ;Souvent l'addition d'un tampon se montre favo- ;10 ;1 5 ;20 ;25 ;30 ;rable, Comme tampons ayant une gamme de pH de 3,8 à 5,0 par exemple, on peut prendre les tampons acide citrique/ citrate de sodium ; acide acétique/acétate de sodium ; ;acide phosphorique/hydrogénophosphate de sodium ; ;acide tartrique/tartrate de sodium ; aminoacide/formiate ;1 ;de sodium ; hydrogénophosphate de sodium/aaide citrique ; ;acide citrique/succinate de sodium ; acide propionique/pro- ;pionate de sodium ; acide aconitique/aconitate de sodium ; ;acide B, 8-diméthylglutarique et son sel sodique ; acide maléiqueVmaléate de sodium ; composé Il/acide citrique. ;Comme tampons pour une gamme de pH de 6 à 8 on peut prendre par exemple les tampons citrate de sodium/NaOH, tris~(hydro~ ;xyméthyl)-aminométhane-ma1éate/NaOH, KH^PO^/NaOH et KH^PO^/ ;Na HPO.. ;2 4 ;A la place d'une solution d'hydroxyde de sodium pour obtenir le tampon, on peut également utiliser l'homo-cystéine-thio1actone ou 1 ' «(-amino-cap ro lac tame ou un composé basique de formule II, et ainsi le tampon comprendra déjà le composant basique, qui se trouve également dans le produit final de formule I. ;L'échange du composant basique d'un sel du composé ;I contre un composant basique de l'invention peut se faire par exemple sur des échangeurs d'ions acides chargés d'homo-cy. s t é ine-th io 1 ac tone , d '^-amino- é-capro lac tame ou du composé basique de formule II, et dans ce cas le composé basique ;II (qui est alors lié aux groupes acides de l'échangeur d'ions) est employé en excès, par exemple à raison de 2 à 10 moles, de préférence de 5 moles, par mole du composant I. ;Comme échàngeur d'ions acides on peut utiliser par exemple ceux dont la matrice polymère porte des groupes sulfoniques ou carboxy1iques. La matrice de l'échangeur d'ions peut être par exemple une résine de polystyrène pouvant comprendre éventuellement 2 à 6%, de préférence de 4 à 8%, de divinylbenzène ou d'une résine phéno1ique,et le polystyrène sera de préférence à l'état de gel. La charge de l'échangeur d'ions avec les composants basiques ;"12." ;peut se faire par exemple de la manière suivante ; 150 ml de la résine échangeuse d'ions, 1,2 mval/ml. Le producteur de l'échangeur d'ions indique la capacité de celui-ci (c'est-à-dire la quantité de groupes fonctionnels tels que -SO^H ou -CO^H) en mval/ml ou mval/g de la résine échangeuse. On opère dans une colonne d'environ 4 cm de diamètre avec chemise de refroidissement, colonne que l'on régénère avec de l'acide chlorhydrique et qu'on lave à l'eau distillée jusqu'à neutralité et élimination des ions chlorure. On traite ensuite l'échangeur avec une solution aqueuse à 10% du composé basique (220 moles) et on le lave à l'eau distillée. On peut en outre traiter l'échangeur avec un tampon (acide citrique/citrate ou acide acétique/acétate) à pH 4 environ, puis éliminer le tampon par lavage. On peut de plus charger aussi l'échangeur d'ions avec des sels d'amino-acides neutres de formule II ou des sels neutres d'homocy stéine-thiolactone ou d'et-amino-e-capro lac tame, par exemple le chlorhydrate ou le bromhydrate. ;Dans le cas où l'on utilise un échangeur d'ions, il est favorable d'ajouter le tampon dans le receveur de l'éluat, et dans quelques cas il est également avantageux de procéder à l'élution commune du sel avec le tampon et/ou le sel d'un acide mercap10-C2~Cg-alcanesu 1fonique à travers l'échangeur d'ions. Par exemple, on dissout dans un tampon à pH 3,8 à 5,0, de préférence à pH 4,1, le composé dont on part, c'est-à-dire le composé I (A = S-alk-SO^H) pu un sel connu ordinaire de ce composé, on fait passer la solution sur la colonne d'échange d'ions et on capte l'éluat dans une solution tampon correspondante. L'éluat, ou le produit lyophilisé obtenu à partir de celui-ci, est alors constitué par le sel selon l'invention et le tampon et/ou le sel de l'acide mercaptoalcanesulfonique. De préférence l'éluat, dans un cas donné après dilution à l'eau, est parfois aussitôt congelé ou lyophilisé. Si dans le composé de départ I le symbole A représente le groupe -N(OH)-CO-NH-alk-CO^H, ;on applique un procédé analogue, mais alors à un pH compris entre 6 et 8, par exemple à pH 7. ;Dans ce cas toutefois, on peut également faire passer un sel courant du composé I (par exemple un sel de métal alcalin)en solution aqueuse sur l'échangeur d'ions acide ;0 ;comme il a été dit plus haut, sous la forme H , puis neutraliser le composé I dans l'éluat avec le composant basique de- formule II ou avec 1'homocystéine-thio1 actone ou 1'a-amino-E-caprolactame, et cette voie opératoire possible convient particulièrement bien si le produit final est obtenu à l'état cristallisé. ;Comme sels du composé de formule I on peut prendre par exemple ceux qui sont indiqués dans la demande allemande 3133309 ou dans le brevet belge 892589 précités, par exemple le sel d'ammonium, de cyclohexylammonium ou de guanidinium, ;mais on peut toutefois employer aussi d'autres sels courants, par exemple ceux de bases optiquement actives qui sont courants pour la résolution d'un racémate, et que l'on peut obtenir par une méthode analogue aux méthodes décrites. ;Les présents dérivés d'oxazaphosphorine comprennent tous les stéréoisomères possibles et leurs mélanges, par exemple les isomères cis-trans sur le cycle d'oxazaphos-phorine, c'est-à-dire suivant la position cis ou trans du groupe A par rapport à l'atome d'oxygène à la position 2 (oxygène du groupe phosphory1e), ainsi, par exemple, les isomères cis et les isomères trans (parfois le racémate et les énantiomères correspondants), les isomères cis séparés et les isomères trans séparés. On petit séparer de manière connue, mais de préférence par cristallisation fractionnée, ;des sels diastéréomères, par exemple si l'on a formé les sels avec une aminé chirale. Les énantiomères purs peuvent être obtenus par les méthodes habituelles de résolution de racémates,par exemple par cristallisation fractionnée des sels diastéréomères à partir d'acides racémiques de formule I et de bases optiquement actives, ou dans certains cas en partant dans la synthèse de matières optiquement actives de formule III. ;" \ tfz ;D'une manière générale, des mélanges cis/trans peuvent se former dans la synthèse, mélanges qui habituellement comprennent principalement les isomères cis avec jusqu'à 5 à 10% environ des isomères trans. Par exemple, les composésdes exemples 1 à 5 ci-après sont constitués par les isomères cis avec moins de 5 à 10% de la forme trans. ;Avec des composés qui cristallisent bien, on obtient à partir de tels mélanges la forme cis ou la forme trans à l'état cristallisé, en particulier la forme cis. ;Cependant, si la réaction est effectuée dans des solvants anhydres ou qui ne contiennent que peu d'eau, on n'obtient exclusivement ou dans une proportion prépondérante qu'une seule forme, notamment la forme cis. On peut ainsi obtenir par exemple la forme cis pure d'un composé de formule I qui ne cristallise pas ou qui cristallise mal en ajoutant une solution dans l'acétone du composé de formule III à une solution aqueuse du composé de formule IV ou d'un sel de ce composé, à des températures de -30 à +20°C, et une fois la réaction terminée en faisant précipiter à plusieurs reprises. ;Les composés de formule III peuvent être employés à l'état de racémiques ou d'isomères cis et trans (dont la formation a été indiquée plus haut), sous les formes cis et trans optiquement actives ou leurs mélanges (voir à cet égard le brevet belge 892589 précité et la demande allemande 313330 9 précitée, page 12). ;Pour la résolution des racémates, on peut utiliser par exemple comme bases optiquement actives la 1-phénylé-thylamine, la brucine, la guanidine, la strychnine etla cin-chonine ainsi que d'autres bases, et appliquer les méthodes qui sont décrites dans la publication "Optical Resolution Procédures for Chemical Compounds", volume 2, Paul Newman, 1981, Publishèr Optical Resolution Information Center in Riverdale, EUA. A cette fin, on transforme par exemple un sel racémique de l'invention en un sel de l'une des bases optiquement actives précédemment indiquées, de la ;-15- ;manière déjà dite, on sépare les énantiomèresde manière connue puis on remplace également la base optiquement active des énantiomères ainsi obtenus par un composé basique selon cette invention. Toutefois, on peut aussi employer dans le procédé a les bases optiquement actives précédemment indiquées, dans la réaction d'un composé de formule III avec un composé de formule IV ou V, ou bien dans le procédé b à l'état de sel basique. Dans ce cas, cette base optiquement active est ensuite échangée de la manière habituelle contre le sel basique de l'invention correspondant à la définition donnée. ;Les sels basiques de cette invention, l'homocysté-ine-thio1actone, 1'a-amino-e-capro1actame ainsi que le composé de formule II peuvent être utilisés à l'état des racémates ou des énantiomères purs. ;On donné généralement la préférence aux formes L. ;Les sels de l'invention comprennent toutes les formes qui résultent de la présence de divers atomes de carbone asymétriques, par exemple les racémates, les formes optiquement actives, les diastéréomères. ;Il est recommandé de ne garder des sels en solution que le moins longtemps possible pour éviter leur hydrolyse en 4-hydroxyoxazaphosphorines et/ou cycle d'oxazaphosphorine (transformation de la forme cis en la forme trans), ou de faire en sorte que l'hydrolyse soit aussi faible que possible. Si les sels sont fortement contaminés, par exemple s'ils contiennent de fortes proportions de composés de départ, on peut les obtenir à l'état pur par des méthodes chromatographi-ques usuelles ou par chromatographie préparative en phase liquide à haute pression. ;Les présents sels sont stables, notamment à la température de 40°C, et l'on peut en faire facilement des préparations galéniques, par exemple des solutions injectables qui restent stables à l'hydrolyse, des produits lyophi-: lises,et pour cela, notamment en ce qui concerne la stabilité ;-16- ;au stockage, il est également recommandé d'ajuster a des pH d'environ 3,5 à 7 avec des dérivés d'acides suifoniques, à l'aide de tampons courants, par exemple d'un tampon de citrate, le pH optimal étant de 4,0-4,3. Si le radical A ^ provient du groupe N-(OH)-CO-NH-alk-CO^H, un pH de 6,5-7,5 est approprié. Ces ajustementdu pH peuvent se faire aussi bien pour des solutions et des suspensions que pour des préparations galéniques solides. ;De plus, et indépendamment de l'addition d'un ;19 tampon, il est également avantageux d'ajouter 0,5 à 5 ;équivalents d'un sel (par exemple d'un sel de métal alcalin, ;notamment le sel sodique) d'un acide mercapto-C„-C.-alcane- ;Z o sulfonique, par exemple de l'acide 2-mercaptoéthane-sulfonique, et son disulfure, ainsi que des thiols, par exemple de la cystéine. Des thiols et disulfures et leur méthode d'emploi sont décrits dans la demande de brevet européen 83439. Pour cette nature de sels on peut prendre par exemple les sels de métaux alcalins (Na, K)ou les sels d'un composant basique selon l'invention (composés 20 de formule II, homocystéine-thio1actone, a -amino-e-capro-1ac tame). ;L'addition d'un sel d'un acide mercapto-C2-C^-alcanesulfonique par exemple peut se faire par addition d'une solution aqueuse du sel de l'acide sulfonique (sel alcalin, par exemple à 20%' en poids) à une solution aqueuse du sel de l'invention, de préférence tamponnée à' un pH de 4 a 4,3, et le mélange ainsi obtenu est ensuite par exemple lyophilisé. ;Les avantages de l'addition d'un sel d'acide mercaptoalcanesulfonique par ce moyen sont les suivants : amélioration de la stabilité au stockage ainsi que de la stabilité en solutions aqueuses avec les présents sels (cela est important par exemple dans la production des sels mais aussi par exemple pour la mise en solution avant l'emploi de 35 produits lyophilisés) ; et amélioration de la chimiothérapie de maladies cancéreuses avec les présents sels, notamment en ;25 ;30 ;ce qui concerne la toxicité (cf. demande de brevet européen 8 3439 et brevet européen 2495). ;Les sels de cette invention conviennent pour la préparation de compositions pharmaceutiques contenant un ou plusieurs de ces sels comme matière active, éventuellement avec d'autres matières ayant une activité pharmaco1ogique ou pharmaceutique. La production des médicaments peut se faire avec les véhicules et adjuvants pharmaceutiques connus et courants. ;Les médiaaments peuvent être donnés par exemple par la voie entérale, parentérale, orale, perlinguale et/ou appliqués en pulvérisations, par exemple sous la forme de comprimés., Capsules, pilules, dragées, tampons, liquides ou aérosols. Comme liquides on peut utiliser par exemple des solutions ou suspensions huileuses ou aqueuses et des émulsions, ;solutions ou suspensions injectables, aqueuses ou huileuses. ;Les compo sés de la présente invention donnent de bons effets cytostatiques et curatifs, en administration intraveineuse, intrapéritonéale ou orale, sur diverses tumeurs expérimentales du rat et de la souris. On obtient par exemple, suivant la dose, un effet curatif sur le rat 5 jours après l'implantation intrapéritonéale de 10^ cellules de la leucémie L5222, avec différentes doses données par 4a voie intraveineuse, intrapéritonéale ou orale, la guérison étant définie par la survivance, après 90 jours, d'animaux ayant la tumeur, sans récidives ni métastases. D'après la fréquence des guérisons qui sont obtenues avec différentes doses ,par des analyses suivant R. Fisher, on calcule comme dose curative moyenne (DC 50) la dose qui peut guérir 50% des animaux ayant la tumeur. ;Par exemple, les présents composés ont également été donnés à diverses doses par la voie intraveineuse, ;intrapéritonéale ou orale, un jour après l'implantation £ ;de 10 cellules du sarcome ascite AH 13 de Yoshida ( Yo sh id a—As c i t e s-^S ar coma AH 1 3 ) , et on a observé un effet curatif fonction de la dose. f ;-18- ;Ici aussi l'effet curatif est défini par la survivance après 9 0 jours des animaux ayant la tumeur, sans récidives ni métastases. ;On calcule également, après des analyses suivant 5 R. Fisher, comme dose curative moyenne (DC 50), la dose à laquelle 50% des animaux ayant la tumeur peuvent être guéris._ ;De plus, les présents composés ont été donnés à diverses doses par la voie intraveineuse, intrapéritonéale 10 ou orale, une fois ou à plusieurs reprises (4 fois), à des jours successifs après l'implantation intrapéritonéale £ ;de 10 cellules de la leucémie de la souris L1210>ce qui a produit un effet cytos tatique. ;L'effet cytostatique est évalué par l'augmentation 15 du temps de survie moyen des animaux ayant la tumeur, et il est exprimé en pourcentage, dépendant de la dose, d'augmentation du temps de survivance par rapport à un groupe d'animaux témoins qui n'ont pas été traités. ;La dose curative moyenne pour les tumeurs du rat est indépendante de la forme d'administration dans l'intervalle de 0,1 à 10 mg/kg, les mêmes doses produisant une augmentation du temps de survie moyen de 100% dans le cas de la leucémie de la souris L1210. ;En outre, les présents composés stimulent la production d'anti-corps dans une gamme particulière de doses plus basse, gamme qui est, par exemple pour le composé de l'exemple 5 ci-après, de 20 à 50 mg/kg chez le rat par la voie intraveineuse ou intrapéritonéale. A titre comparatif, dans la même gamme la production d'anti-corps par l'agent antitumoral connu qu'est le cyclophosphamide est déjà supprimée. ;Bibliographie : ;N. Brock : Pharmako1ogisch Grundlagen des Krebs Chenotherapie, dans : ;35 A. Georgu (Hrsg), Verhandlungender Deutschen Krebs- ;gesellschaft Volume 1, pages 15-42, Gustav Fisher Verlag, Stuttgart (1978). ;20 ;2 5 ;30 ;19- ;Cet effet curatif et cytostatique est comparable à celui des médicaments connus que sont le cyclophosphamide et 1'i f o s famid e. ;La plus faible dose curative ou cytostatique 5 chez les animaux indiqués est par exemple : ;0,01 mg/kg par la voie orale ;0,01 mg/kg par la voie intrapéritonéale ;0,01 mg/kg par la voie intraveineuse. ;On peut considérer chez ces animaux, comme gamme 10 générale d'action curative et cytostatique : ;0,01-100 mg/kg par voie orale, en particulier 0,1-10,0 mg/kg ;0,01-100 mg/kg par voie intrapéritonéale, en particulier 0,1-10,0 mg/kg 15 0,01-100 mg/kg par voie intraveineuse , ;en particulier 0,1-10,0 mg/kg ;Les composés de la présente invention sont indiqués pour le traitement de maladies malignes chez l'homme et autres animaux. Les préparations pharmaceutiques contiennent ordinai-20 rement de 1 mg à 1 g du ou des composants actifs, de préféren ce de 100 à 1000mg,et leur administration peut se faire par exemple sous forme de comprimés)capsules, pilules, dragées, tampons, pommades, gels, crèmes, poudres, aérosols, ou sous forme liquide, les formes liquides pouvant être par exemple 25 des solutions huileuses, alcooliques ou aqueuses, ainsi que des suspensions et émulsions. Mais les formes préférées sont cependant des comprimés contenant de 10 à 200 mg de matière active, ou des solutions en contenant de 0,1 à 5%. ;Les doses individuelles des composants actifs 30 peuvent être par exemple les suivantes : ;(a) formes orales du médicament, de 1 à 100 mg/kg, de préférence de 10 à 60 mg/kg ;(b) pour des formes parentérales, par exemple intraveineuses ou intramusculaires, de 1 à 100 mg/kg, de préférence de ;35 10 à 60 mg/kg ;-10- ;(c) pour des applications par la voie rectale ou vaginale, de 1 à 100 mg/kg, de préférence de 10 à 60 mg/kg ;(d) pour des applications locales sur la peau ou des membranes muqueuses (par exemple solutions, lotions, ;5 émulsions, pommades etc.), de 1 à 100 mg/kg, de préfé ;rence de 10 à 60 mg/kg. ;Dans tous les cas les doses s'entendent en base libre. ;On peut recommander, par exemple, 1 à 3 fois par 10 jour 1 à 10 comprimés contenant de 10 à 300 mg de matière active, ou bien par exemple pour des injections intraveineuses 1 ou 2 fois par jour une ou plusieurs ampoules de 1 à 10 ml contenant 10 à 250 mg de matière active. Pour des administrations par la voie orale, la dose quotidienne 15 minimale ••.pourra être par exemple de 200 mg, la dose quotidienne maximale ne devant pas dépasser 5000 mg. ;On peut également recommander, dans des cas individuels, des doses s'étendant sur 12 heures et plus, ;ce qui correspond à une perfusion continue. 20 Le dosage individuel, dans le traitement de chiens et de chats, est généralement par la voie orale de 10 à 60 mg/kg; et par la voie parentérale de 10 à 60 mg/kg. ;Le dosage individuel pour le traitement de chevaux et du bétail est en général par la voie orale 25 d'environ 10 à 75 mg/kg, et par la voie parentérale d'environ 10 à 60 mg/kg. ;La toxicité aiguë des présents composés chez la souris,représentée par la DL 50 mg/kg (méthode Miller et Tainter : Proc. Soc. Exper. Biol. a. Med. 5_7 ( 1 944) 26 1 ), 30 est par exemple en administration orale de 100 à 1000 mg/kg. ;Les présents médicaments peuvent être employés en médecine humaine ou vétérinaire ainsi qu'en agriculture, seuls ou mélangés avec d'autres matières ayant une activité pharmacologique. ;35 ;u- ;Exemple 1 ;Sel de glycinamide du 4-(2-su 1foéthy1thio)-cyc1o-phosphamide ;(le cyclophosphamide est la 2-J2-(bis-(2-chloroéthy1)-amino)y 5 -2-oxo-tétrahydro~2H-1,3,2-oxazaphospho riue) ;A 4,0 g (18 mmoles) de 4-hydroxy-cyclophosphamide dans 10 ml d'eau distillée on ajoute 5 g (18 mmoles) du sel de glycinamide de l'acide 2-mercaptoéthane-su 1fonique dans 40 ml d'acétone, on acidifie la solution à pH 4 avec de 10 l'acide trich1oroacétique et on la maintient pendant 2 heures à 5°C puis pendant 20 heures à -25°C > Le sel formé se sépare à l'état cristallisé. On l'isole par filtration au vide, on le lave, on le sèche et on le recrista11ise dans un mélange d'eau et d'acétone. ;15 Point de fusion 90-98°C ; rendement 76% du rende ment théorique, soit 7,2 g. Ce sel contient environ 1 équivalent d'acétone. ;Exemple 2 ;Sel de lysine (L-lysine) du 4-[\-hydroxy-3-carboxy-20 méthy1-uréido-(1 YJ~ cyclophosphamide ;On maintient dans 50 ml d'alcool anhydre pendant 20 heures, à la température de 0°C, 7,5 g (24,6 mmoles) de 4-éthoxycyclophosphamide avec 3 g (22,4 mmoles) de 1-hydro-. xy-3-carboxyméthyl-urée, puis on concentre la solution 25 réactionnelle à 20°C sous vide, on reprend la matière restante dans 200 ml d'acétone, on traite avec 3,3 g ( 2'2, 6 mmoles) de L-lysine dans 25 ml de méthanol et après un court moment de repos on centrifuge le précipité gélatineux formé. On dissout le résidu dans de l'eau, on filtre et on précipite 30 avec de l'acétone, puis on sépare le produit par filtration au vide et on le lave avec de l'acétone et de l'éther. ;I ;PF : 125-128°C ; rendement : 54%, soit 6,5 g Exemple 3 ;Sel de glycinamide du 4-(2-sulfo-éthylthio)-35 cyclophosphamide ;-XL- ;On règle à pH 7,5 avec de l'hydroxyde de sodium aqueux et on chauffe pendant 5 minutes aux environs de 40 °C une solution de 3,1 g (5 mmoles) du sel de guanidine du 4-(3-su1fopropy1thio)-cyc1ophosphamide et de 4,2 g (19,6 mmoles) du sel de glycinamide et de l'acide 2-mercaptoéthane-sulfonique dans 15 ml d'eau, on refroidit ensuite la solution à 0°C et on ajuste le pHa 4,5 avec de l'acide sulfurique, on lui ajoute 70 ml d'acétone et on maintient pendant 3 jours à 40°C. On sépare alors par filtration au vide le précipité formé et on le recristallise dans un mélange d'eau et d'acétone. ;PF : à partir de 85°C avec décomposition ; rendement : 14%, soit 430 mg. ;Exemple 4 ;Sel d'arginine (L-arginine) du 4-(2-sulfoéthylthio) -cyclophosphamide. ;On dissout 37,2 g (74,5 mmoles) du sel de cyclohe-xylamine du 4^(2-su 1foéthy1thio)-cyc1ophosphamide dans 320 ml d'eau distillée à 5°G (pH 4,3) et on fait passer la solution sur une colonne, refroidie à 4°C, contenant 150 ml d'un échangeur de cations qui est un gel d'une résine de polystyrène à 8% de divinylbenzène, avec également des groupes su lf oniques,. échangeur qui est chargé d'arginine, à un débit d'écoulement de 6 ml par minute. On rince ensuite la colonne avec 250 ml d'eau, on refroidit l'éluat à 4°C et on le dilue à l'eau froide pour en former une solution à 5%, puis on lyophilise. ;PF : 85-90°C avec décomposition ; rendement : 100% du rendement théorique, soit 42,9 g. ;L'addition d'une matière tampon et/ou d'un acide mercaptoalcanesulfonique peut se faire de la manière suivante : ;(a) addition d'un tampon de citrate de sodium ;On procède comme indiqué ci-dessus mais on capte l'éluat dans le tampon de citrate de sodium (pH 4,1) puis on le dilue par exemple pour avoir une solution 0,5 molaire dans ;n le citrate de sodium, à 5 % de matière active, et on lyophil-1i s e ensuite la solution. ;Rendement : 100% soit 42,9 du composé de l'exemple 4 avec le tampon de citrate de sodium. ;5 (b) addition d'un tampon de citrate de sodium et de 2-mercap toé thane-sulfonat e de sodium (Mesna). ;On procède comme indiqué ci-dessus sauf que l'éluat est capté dans une solution tampon refroidie de citrate de sodium à pH 4,1 contenant 8,2 g (50 mmoles) de Mesna, puis la 10 solution est lyophilisée. ;Rendement : 100 % coit 42,9 g du composé de l'exemple 4 avec le sulfonate Mesna et le tampon de citrate de sodium. ;Exemple 5 ;Sel de lysine (L-lysine) du 4-(2-sulfo-éthylthio)-15 cyclophosphamide ;On élue comme dans l'exemple 4 37,5 g (74,5 mmoles) de sel de cyc1ohexy1aminé du 4-(2-su 1foéthy1thio)-cyc 1 o-phosphamide sur un échangeur d'ions (forme lysine protonée) puis on lyophilise. ;20 PF : à partir de 85°C avec décomposition ; rendement 100%, soit 40,8 g. ;Un procédé différent pour cet exemple est le suivant. ;On dissout 82,4 g (16,5 mmoles) du sel de cyclo-25 hexyalmine du 4-( 2-su1foéthy1thio)-cyc1ophosphamide dans 85 0 ml d'eau distillée à 5°C, on ajuste la solution à pH 4,1 avec un échangeur d'ions fortement acide en particules ( à groupes su If onique s) et onla verse goutte à goutte au débit de 5 ml/minute sur une colonne refroidie à 4°C, conte-30 nant 800 ml du même échangeur d'ions qu'à l'exemple 4 précédent comprenant 820 mmoles de groupes acide suifonique-L-lysine. On rejette les premiers 180 ml de l'éluat puis on ajuste d'une manière continue l'éluat qui suit, tout en agitant et en refroidissant avec de l'eau glacée, à pH 35 4,1 avec au total environ 1,5 ml de l'échangeur d'ions à ;groupes suifoniques fortement acide. On rince ensuite l'échangeur avec 900 ml d'eau distillée refroidie à 0°C puis ff- ;H ;on dilue l'éluat à l'eau froide pour avoir un.e solution à 5 % et on lyophilise aussitôt. ;PF : à partir de 85°C; rendement 100% soit 90 g. ;• Composé de l'exemple 5 avec tampon, lysine-citrate (lysine et acide citrique) ;Ondissout 7,2 g (14,4 mmoles) du sel de cyclo-hexylamine du 4-(2-su1foéthy1thio)-cyc1ophosphamide dans 80 ml d'un tampon de citrate de sodium 0,05 molaire à pH 4,1, à la température de 4°C, et on fait passer la solution sur une colonne contenant 40 ml d'une résine échangeuse de cations (forme lysine protonée) refroidie à 4°C. On rince ensuite la colonne avec 80 ml de la solution de tamponnage, on complète l'éluat à 150 g de solution et on lyophilise. ;Rendement 100%, soit 7,9 g du composé de l'exemple 5 avec tampon lysine-citrate. ;• ' Composé de l'exemple 5 avec le sel de lysine de l'acide 2-mercaptoéthanesulfonique et le tampon lysine-citrate. ;On dissout 7,2 g (14,4 mmoles) du sel de cyclo-hexylamine du 4-^ ( 2-cy c loé t hy 1 th io )-cy c 1 o pho s phamide et 1,5 g (9,2 mmoles) de Mesna dans 80 ml d'un tampon de citrate de sodium 0,05 molaire à pH 4,1, à la température de 4°C, et on fait passer la solution sur une colonne de 40 ml d'une résine échangeuse de cations (forme lysine protonée) refroidie à 4°C. On rince ensuite la colonne avec 50 et 30 ml de la solution tampon, on complète l'éluat refroidi à 150 g de solution et on lyophilise. ;Rendement : 100%, soit 7,9 g du composé de l'exemple 5 avec 2,6 g (rendement 100%) du sel de lysine de l'acide 2-mercaptoéthanesu1fonique et le tampon lysine-citrate (pH 4,1). ;Exemple 6 ;Sel de glycinamide du 4-(2-cyc1oéthy1thio)-cyclophosphamide. ;f ;*s"

On dissout dans 35 ml d'eau distillée 2,9 g (8, 6 mmoles) de 4- (.hy d r o xy é thy 1 t h i o ) - c y c 1 o pli o s pha m i d e et 5,6 g (2 6 mmoles) du sel de glycinamide de l'acide 2-mercaptoéthane su1fonique,on ajuste le pH de la solution à 8 avec du glycinamide puis on chauffe pendant environ 4 minutes aux environs de 40°C. On refroidit ensuite la solution réactionne lie à 0 °C , on ajuste son pH à 4,5 avec de l'acide 2-mercaptoéthanesulfonique et on ajoute 500 ml d'acétone, puis on maintient le mélange pendant plusieurs jours à 4°C, on sépare par filtration au vide le précipité formé et on le recristallise dans un mélange d'eau et d'acétone.

PF : à partir de 85°C ; rendement 9%, soit 410 mg.

Le sel ainsi obtenu contient environ 1 équivalent d'acétone.

Exemples de préparations pharmaceutiques a) Exemple de préparation d'un lyophylisat du sel de lysine du 4-(suifoéthylthio)-cyclophosphamide.

On dissout sous agitation 90 g du sel de L -lysine du 4-(su 1foéthy1thio)-cyc1ophosphamide dans 400 ml d'eau pour injections, on refroidit à 4°C puis on complète à 1800 ml avec de l'eau à 4°C. On ajuste le pH aux environs de 4,2 avec un échangeur de cations régénéré en particules (forme H ), on soumet la solution à une filtration stérile de manière connue et on lyophilise, en refroidissant le récipient récepteur. Toutes les opérations qui suivent la filtration stérile sont effectuées dans des conditions aseptiques.

On met 2 ml de la solution stérile dans des flacons pour injections de 10 ml, la teneur en matière active étant de 100 mg.

On garnit les flacons de bouchons stériles pour lyophilisation et on lyophilise, puis on désaère l'installation avec de l'azote sec stérile et on ferme les flacons. Pour obtenir une solution injectable on dissout les contenus

u des flacons dans 5 ml d'eau pour injections.

Le lyophilisât est conservé au réfrigérateur entre 0 et 6 °C.

b) Exemple de préparation d'un lyophilisât dè 5 sel de l.ysine (L-lysine) du 4-(2 sul foéthylthio ))-cyclo phosphamide avec un tampon d'acide citrique et de lysine.

1. Dans une colonne d'échange d'ions avec chemise de refroidissement on met 1300 ml d'un échangeur d'ions acide, on le régénère avec 2 litres d'acide chlorhydrique à 10% 10 et on lave avec de l'eau pour injections jusqu'à neutra lité et élimination de l'ion chlorure.

2. On charge ensuite la colonne avec 3 litres d'une solution de lysine à 10% , on élimine l'excès de lysine par lavage avec de l'eau pour injections et on lave

15 jusqu'à neutralité.

3. On fait passer sur la colonne 1,4 litre de la composition suivante :

Sel de cyclohexylamine du 4-(sulfoéthylthio)-cyclophosphamide : 137,12g 20 Acide citrique sans eau 28,83 g NaOH IN 19 3,20 ml Eau pour injections pour 1,4 litre.

On dissout la matière active et l'adjuvant dans 25 de l'eau aux environs de 4°C, le pH de la solution étant de 4,1. On refroidit également aux environs dé 4°C la colonne d'échange de cations et on y fait passer la solution ci-dessus au débit de 10 ml/minute.

On capte l'éluat dans un récepteur refroidi , en 30 en rejetant les premiers 300 ml, puis on lave la colonne avec de l'eau pour injections, on la refroidit à 4°C et on complète à 3 litres le volume total de l'éluat.

L'éluat, qui doit être ensuite lyophilisé, a la composition suivante :

35

-Vh

Sel de lysine (L-lysine) du 4-(2-su1foéthy1thio)-cyc1o-.■phosphami.de : 150,00 g

Acide citrique sans eau : 2 8,83 g L-lysine sans eau : 28,24 g

Eau pour injections : 2870,93 g

3078,00 g 3000 ml

4. Pour préparer le lyophilisât on soumet la solution ci-dessus à une filtration stérile de manière connue, en refroidissant le récipient récepteur. Toutes les opérations qui suivent la filtration stérile sont effectuées dans des conditions aseptiques.

On met la solution stérile dans des flacons pour injections à raison de 2 ml de solution par flacon de 10 ml la teneur en matière active étant de 100 mg, ou bien de 500 mg pour 10 ml de solution dans un flacon de 30 ml.

On garnit les flacons de bouchons stérilès pour lyophilisation et on lyophilise, puis on désaère l'installation avec de l'azote sec stérile et on ferme les flacons.

Pour préparer des solutions injectables, on dissout les contenus des flacons contenant 100 mg de matière active dans 5 ml d'eau pour injections, et les contenus des flacons contenant 500 mg de matière active dans 25 ml de cette eau.

c) Exemple de préparation d'un lyophilisât du sel d'arginine du 4-(sulfoéthy1thio)-cyclophosphamide .

Dans 1500 ml d'eau pour injections refroidie à 4°C on dissout 90 g du sel d'arginine du 4~(sulfoéthylthio)■ cyclophosphamide et 135 g de 2-mercaptoéthanesulfonate de sodium, et quand la dissolution est totale on complète à 1800 ml avec de l'eau à la température de 4°C, puis on ajuste le pH de la solution aux environs de 4,2 avec l'échangeur de cations régénéré en particules sous la forme + ,

H . Pour obtenir le lyophilisât ou soumet cette solution à

$

-28-

une filtration stérile de manière connue, en refroidissant le récipient récepteur, et toutes les opérations qui suivent cette filtration sont effectuées dans des conditions aseptiques. On met la solution stérile dans des flacons 5 pour injections de 10 ml, à raison de 2 ml par flacon, la teneur en matière active étant ainsi de 100 mg. On munit les flacons de bouchons stériles pour lyophilisation et on lyophilise puis on désaère l'installation de lyophilisation par un courant d'azote sec et stérile et on ferme les fla-

%

10 __ cons. Pour préparer une solution injectable on dissout les contenus des flacons dans 50 ml d'eau pour injections. Le lyophilisât est conservé entre 0 et 6°C au réfrigérateur.

23

Claims (7)

revendications

1. Sels de dérivés d'oxazaphosphorine de formule

10

(I)

15

20

25

Pans laquelle , R^ et R^, qui peuvent identiques ou différents les uns des autres, représentent chacun l'hydrogène ou le groupe méthyle, éthyle, 2-chloréthyle ou 2-méthanesulf onyloxyéthyle, au moins deux de ces radicaux étant le groupe 2-chloroéthyle et/ou 2-méthanesulfonyloxyéthyle, et A désigne un groupe -S-alk-SO^H ou -N(OH)-CONH-alk-CO^H,

alk étant un alkylène en C -C_ avec éventuellement un groupe

2 6

mercapto,mais pouvant être aussi -CH2~ s'^ Y a un groupe carboxy lié à ce groupe) avec 1'homocystéine-thiolactone ou 1'a-amino-é-caprolactame ou un composé basique de formule r6 - cr5 - cor4

nr7r8

(ii)

30

35

(dans laquelle R^ est un groupe hydroxy, amino ou alcoxy en C^-Cg, R|_ est l'hydrogène ou le groupe difluorométhyle, R^ est l'hydrogène, un radical indoly1-(3)-méthyle ou imidazo-lyl-(4)-méthyle, un groupe alkyle en Cj-Cjq avec éventuellement un hydroxyle, un groupe alcoxy en C^-Cg, mercapto,

-go-

I

alkylmercapto en ~C , phényle ou hydroxyphényle , un groupe amino-C^-C -alkylmercapto ou amino-C^-C -aleoxy,

un groupe amino, aminocarbonyle, uréido (H NCONH-) ,

guanidino ou alcoxycarbonyle en C,-C dans 1 'alcoxy, ou

1 6

encore R^ forme avec la partie ">CR^(NR^R^) un radical de proline, de 4-hydroxyproline ou de 2-oxo-3-amino-3

difluorométhyl-pipéridine, et R et R représentent chacun

7 8

l'hydrogène ou un alkyle en C.-C ) .

1 6

2. Un procédé de préparation des sels de dérivés d'oxazaphosphorine de formule générale I

ou différents les uns des autres, représentent chacun l'hydrogène ou le groupe méthyle, éthyle, 2-chloroéthyle ou 2-méthane-sulfonyloxyéthyle, au moins deux de ces radicaux étant le groupe 2-chloroéthyle et/ou 2-méthanesulfonyl-oxyéthyle, et A désigne un groupe -S-alk-SO^H ou -N(OH)-CONH-àlk-CO^H, alk étant un alkylène en C2_C6 avec éventuellement un groupe mercapto» mais pouvant être aussi -CH - s'il y à un groupe carboxy lié à ce groupe) avec 1 ' homocys téine-thiolactone ou 1 ' ot-amino-6 -caprolac tame ou un composé basique de formule

Rg — CRcj ~ COR4

NH7R8 (II)

10

-31-

(dans laquelle R^ est un groupe hydroxy, amino ou alcoxy en Cj-Cg, Rj_ est l'hydrogène ou le groupe difluorométhyle,

R est l'hydrogène, un radical indolyl-(3)-méthyle ou imidazolyl-(4)-méthyle, un groupe alkyle en c^_c^q avec

éventuellement un hydroxyle, un groupe alcoxy en C.-C ,

1 6

mercapto, i alkylmercapto en C^-C^, phényle ou hydroxy-

phényle, un groupe amino-C -C^-a1kylmercapto ou amino-C j-Cg-al-

coxy,un groupe amino, aminocarbonyle, urëidoCH^NCONH-).guanidino ou alcoxy-

carbonyle en C.-C, dans l'alcoxy,ou encore R, forme avec la partie Io 6

)CRc(NR R ) un radical de proline, de 4-hydroxyproline ou 5 7 8

de 2-oxo-3-amino-3-difluorométhy1-pipéridine, et R et R

7 8

représentent chacun l'hydrogène ou un alkyle en C.-C.),

1 6

procédé caractérisé en ce que a) on fait réagir un composé de formule

15

20

(III)

25 X désignant un groupe hydroxy ou un alcoxy en Cj-C4' avec un sel d'un composé

ah (iv)

A ayant la signification ci-dessus et le composant sel 30 basique étant 1'homocystéine-thiolactone, l'ot-amino-e-

caprolactame ou le composé basique de formule II définie ci-dessus, ou bien on commence par le faire réagir avec le composé AH puis avec les composés basiques précédents ou un composé de formule III dans lequel X est un radical 35 benzylthio, alcanoylthio en alkylthio en c^-c^0 avec l*

-31r

éventuellement un groupe carboxy, un groupe hydroxy ou un aleoxycarbonyle en C^-C^, ou encore dans lequel X est le groupe -N(OH)-CO-NHR, R étant l'hydrogène, un alkyle en

C -C , un benzyle, un phényle, un halogénophényle ou un 1 6

alkylphényle, ou encore dans lequel X est le groupe A et peut-être éventuellement salifié, et on fait réagir avec un excès d'un composé de formule :

.A'H (V)

ou d'un sel du composé a'h- ou avec 1 ' homocystéine-thiolactone , 1'a-amino-e-caprolactame ou le composé basique de formule II ci-dessus défini, a' étant différent de a et ayant les significations indiquées pour a, ou bien b) on fait réagir un composé de formule I ou un sel de ce composé avec 1'homocystéine-thiolactone, 1'a-amino-e-caprolactame ou un composé basique de formule II ci-dessus défini pour former le sel correspondant,

et le cas échéant on échange les composants basiques des composés formés ou l'hydrogène acide du groupe A si ce groupe A n'est pas salifié, contre un autre composant basique tel que défini.

3. Médicament contenant un sel selon la revendication 1 ou 2 avec des véhicules et/ou diluants, adjuvants et excipients pour usage pharmaceutique.

4. Médicament selon la revendication 3 contenant en plus un tampon et/ou un sel de métal alcalin d'un acide mércaptoalcane-sulfonique en C -C .

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5. Un procédé de préparation de médicaments, procédé caractérisé en ce qu'avec un composé de formule générale I selon la revendication 1 et des véhicules ou diluants ou autres adjuvants pharmaceutiques, on fait des préparations pharmaceutiques, ou bien on met ce composé sous une forme utilisable en thérapeutique.

6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'on utilise également un tampon et/ou un sel de métal alcalin d'un acide mercaptoalcane-sulfonique en C -C .

-Si-

7. L'emploi des composés de formule générale I selon la revendication 1 pour la production de médicaments.

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