MC1554A1

MC1554A1 - Ethers-oxydes de l'antibiotique x-14868a et procede pour leur preparation

Info

Publication number: MC1554A1
Application number: MC831673A
Authority: MC
Inventors: Louis H Foley; Lilian H Sello; John Westley
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1982-11-29
Filing date: 1983-11-25
Publication date: 1984-08-31
Also published as: FI834342A0; DK542283D0; DK158740C; FI74023C; NZ206388A; IL70324A0; CA1218059A; PH18658A; FI74023B; IE832787L; NO156793C; IE56648B1; DE3363094D1; IL70324A; FI834342L; EP0112517B1; PT77750A; PT77750B; HUT35258A; AU575791B2

Description

- 1

La présente invention concerne les éthers-oxydes de l'anti-

f)Mp biulique X-14868A de formule

.OMe

Me

10 dans laquelle R est un alkyle inférieur ou hydroxyalkyle inférieur et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

Le terme "alkyle inférieur", tel qu'il est employé ici et sauf modification contraire, signifiera des radicaux hydrocarbonés à la fois à chaîne droite et ramifiée (C^ à ^7^' c'0 préférence des radicaux hy-15 drocarbonés en C„ à Cc tels qu'éthyle, butyle, hexyle, etc...

/ D

Dans 1?. formule, la terminologie abrégée "Me" représente le méthyle^.

Le composé X-14868A est un composé connu qui a été révélé dans le brevet U.S. n° 4.278.663 paru le 14 juillet 1981 avec une méthode 20 de production de l'antibiotique employant le Nocardia sp. X-14868, brevet déposé et accessible au public dans la collection American Type Culture, Rockville, Maryland sous la référence ATCC 31585.

Les composés de la formule I, à savoir le composé connu de la formule I, dans laquelle R est méthyle, ainsi que les composés nouveaux, dans 25 lesquels R est alkyle ou hydroxyalkyle inférieur, sont préparés en faisant réagir le X-14868 de formule QMe

CMe

30

OMe iiuMe

? keY^>MÉ

Me H Me H H H OH

J4e Me

35 sur un alcool primaire ou secondaire en à ou sur un alcool bifonc-tionnel, à savoir un diol en à C^, en présence de la forme H d'une résine échangeuse d'ions acide telle quB la forme H+ d'une résine acide sulfonique, par exemple la forme H+ de DOWEX 50U. On effectue la réac-

tien en employant l'alcool ou le diol comme solvant de la réaction ou dans un solvant inerte à des températures proches de la température ambiante, par exemple la température de la pièce.

Parmi les exemples d'alcools convenables, on trouve les alcools en C2 à à chaîne linéaire ou ramifiée, par exemple éthyle, n-propyle et isopropyle, n-butyle, n-hexyle, etc... Parmi les exemples de diols convenables, on trouve les alcools bifonctionnels de longueur C2 à C^, tels que l'éthylèneglycol, le n-butylèneglycol, etc...

Telles qu'on les utilise ici, on peut inclure éventuellement, dans le cadre de la présente invention, les configurations (r) et (s) de certains éthers-oxydes.

Les composés de la présente invention présentent une activité en tant qu'agents anticoccidiens. Par exemple, l'éther-oxyde n-propy-lique et l'éther-oxyde éthylique, au cours d'essais comparatifs sur des poulets de deux semaines entre des poulets de batterie et des poulets de ferme Eimeria isolés, ont présenté une activité à partir d'environ vingt (20) à trente cinq (35) ppm. L'essai consistait en des méthodes de laboratoire habituelles pour la coccidiose. On a utilisé des témoins non contaminés et non traités (TI\II\l) et des témoins contaminés et non traités (TCN). Les volailles ont été traitées deux jours avant contamination pendant huit (8) jours consécutifs. Les poulets ont été contaminés avec 400.000 oocytes mélangés de souches naturelles de E. acer-vulina, E. mivati, E. maxima, E. necatrix et E. tenella. Il y avait dix (10) volailles par groupe. Les résultats sont représentés comme suit:

Conc. dans Gain de % Compte des lésions aliment, ppm poids, f l Mort.

Sup.

Milieu

Caecum

Moyenne

TNN

i

0

100

0

0,0

TCN

0

48

40

3,1

3,0

3,2

3,1

ETHER-0XYDE

35

73

0

0,0

ETHYLIQUE

25

75

0

0,5

0,0

0,2

de X-14868A

20

81

0

1,5

1,6

1,5

ETHER-0XYDE

35

55

0

0,0

n-PROPYLIQUE

25

87

0

0,1

0,0

0,03

de X-14868A

20

72

0

1,5

1,4

1,5

- 3 -

Lee composés de la présente invention présentent une activité en tant qu'agents entipaludiques. On a effectué des essais comparatifs entrs les éthere-exydee éthylèneglycolique, n-hexylique, éthylique, n-butylique et n-propylique et des composés de chloroquine et pyrimé-5 thamine dont 1*activité antipaludique est connue. Les composés ont été essayés deux fois dans un filtre in vitro contre deux souches de Plas-modium falciparum. L'activité est exprimée en jjg/l. Les résul tats, sous forms de deux valeurs, sont exprimés de la manière suivante:

10 Composé Plasmodium falciparum

Souche 13 T9 clone 96

chloroquine 390- 550 3-4-75

pyriméthamine > 55-61 68-70

éther-oxyde n-propylique de 300- 84-0 560-450

15 X-14868A 142_ 270 205-145 éther-oxyde éthylique de X-14868A

îtï/^SÏy?0 ?"5Ut^qUe dB 500-U00 1150-830 X-14868A (sel de Na)

éther-oxyde éthylèneglycolique de

20 X-14868A (sel de Na) 39- 76 48- 39

éther-oxyde n-hexylique de S 3 0-650 X-14868A (sel de Na)

éther-oxyde n-pentylique de 1600-8 00 X-14868A (sel de Na)

25 On a réalisé une autre étude évaluant l'activité anticoccidienne de l'éther-oxyde propanediolique-1,3 de l'antibiotique X-14868A contre des espèces mélangées d'Eimeria chez des poulets de batterie de 2 semaines. Les souches d1 Eimeria utilisées pour cette étude ont été récupérées à partir d'opérations sur des poulets de chair du commerce non 30 utilisés dans des études antérieures. On a utilisé, pour des besoins de comparaison, les antibiotiques monensine,. lasolocide et l'antibiotique X-14868A. Dans toutes les études, on a utilisé des poulets de chair Hubbard Cross de deux eemaines obtenus à partir d'un couvoir commercial et conservés dans des couveuses artificielles à plancher

métallique chauffé électriquement. On a inclu, dans chacune des trois répétitions d'essais par groupe» dix volailles sélectionnées selon le poids et le sexe (50$ rie femelles at 50/é de mâles). Les poulets ont été traités deux jours avant contamination et maintenus sous antibiotique jusqu'à la fin de l'essai, six jours après la contamination. Pour chaque expérience, on a utilisé des témoins TNN (témoins non contaminé et non traités) et TCN (témoins contaminés et non traités).

On e utilisé, comme ration basais, une pâtée de démarrage pour poulets de chair, formule d'alimentation complète exempte de médicament. L'aliment médicamenté a été préparé en ajoutant à la ration basale la concentration désirée de médicaments. Chaque concentration de médicaments a été parfaitement mélangée à la pâtée avant l'emploi pour donner un mélange uniforme. Dans tous les ces, on a donné en nourriture l'aliment médicamenté deux jours avant la contamination et pendant un total de huit jours consécutifs.

La contamination a été provoquée en donnant oralement è chaque volaille une suspension contenant des oocytes sporulés de E. acer-vulina/E. mivati - 500.000, E. maxima - 100.000, E. tenella - 100.000 et E. brunetti - 50.000 convenablement agitée et mise en suspension dans de l'eau distillée stérile en quantité de 1,0 ml et inoculée directement dans le jabot au moyen d'une aiguille épointée attachée à une seringue étalonnée.

A la fin des essais, les volailles survivantes ont été sacrifiées, disséquées et on a noté les lésions flagrantes. Toutes les volailles qui sont mortes pendant les expériences ont été disséquées. Le diagnostic a été basé sur la situation de la lésion et sa morphologie. On a enregistré les résultats obtenus en degré moyen de contamination (DMC) selon le barème suivant:

0 = normal, 1 = léger, 2 = modéré, 3 = grave, 4 = mort.

En outre, on a enregistré les gains de poids (%).

Antibiotique

Conc. dans

1'alimentation ppm

Gain de poids (%)

TNN

TCN

Ether-oxyde propanediolique-1,3- de X-14868A

Antibiotique X-14868A

Lasalocide Monensine

0 0

15 12.5 10 7,5

S

2.5 10

5 100 100

100 50

71

81 96 91

82 59

86 100

83 99 80

Sup. 0,0

2-, 7

0.0 0.0 0.1 0.7

1.0 2.3

0.1 0.4 1.3 .0.5

1.1

Mil. 0.0

2,4

0.0

0.0 •

0.03

0.3

0.9

2.1

0.07

0.2

1.1

0.5

1,1

Caecum

0.0 2.8

0.0 0.07 0.1 0.5

1.1

2.2

0.2 0.6 1-2 0.9 2,0

DMC

0.0 2.6

0.0

0.02

0.1

0.3

1.0

2.2

0.1 0.4

1.2 0.6

M

L'administration des éthers-oxydes antibiotiques de X-14868A désignés par la suite "antibiotiques".ou "composés antibiotiques" prévient et traite la cétcse et améliore également le rendement des aliments chez les ruminants ou les euidés. Le mécanisme provocateur de la cétose est une production déficiente de composés propionates. Un traitement actuellement recommandé est l'administration d'acide propionique ou d'aliments qui produisent de préférence des propionates. Il est évident que le fait d'encourager la production de propionates è partir des aliments ordinaires provoquera un abaissement des cas de cétose.

On a trouvé que les éthers-oxydes de X-14868A augmentent l'efficacité du rendement des aliments chez les animaux ruminants lorsqu' ils sont administrés oralement aux animaux. La manière la plus aisée d'administrer les antibiotiques est de les mélanger aux aliments pour animaux.

Cependant, on peut administrer utilement les antibiotiques par d'autres méthodes. Par exemple, on peut les incorporer à des comprimés, des breuvages, des bols, ou des gélules et les administrer par doses aux animaux. De telles formulations eoue forme dosée des composés antibiotiques peuvent être réalisées au moyen de méthodes bien connues de l'art pharmaceutique vétérinaire.

Les gélules sont facilement fabriquées en remplissant des capsules de gélatine avec toute forme désirée des antibiotiques désirés, □n peut éventuellement diluer les antibiotiques avec un diluant en poudre inerte, tel que le sucre, l'amidon, ou la cellulose cristalline purifiée, afin d'augmenter leur volume pour permettre un remplissage plus commode des gélules.

Les comprimés d'antibiotiques sont fabriqués au moyen de procédés pharmaceutiques classiques. La fabrication des comprimés est un ert bien connu et hautement perfectionné. En plus des principes actifs, un comprimé contient habituellement une base, un désintégra-teur, un absorbant, un liant et un lubrifient. Parmi les bases typiques, on trouve le lactose, le sucre glace fin, le chlorure de sodium, l'amidon et le mannitol. L'amidon est également un bon désin-tégrateur, de même que 1'acide alginique. On utilise aussi quelquefois des agents tensio-actifs tels que le laurylsulfate de sodium et

et le dioctylBUlfosuccinate de sodium. Parmi les absorbants couramment utilisés, on trouve encore l'amidon et le lactose, tandis que le carbonate de magnésium est utile également pour les substances huileuses. Le gélatine, les gommes, l'amidon, la dextrine et divers dérivés de cellulose sont des liants fréquemment utilisés. Parmi les lubrifiants couramment utilisés, se trouvent le stéarate de magnésium, le talc, la paraffine, divers savons métalliques et le poly éthylèneglycol.

L'administration des composés antibiotiques peut se faire sous forme d'un bol à libération lente. De tels bols sont fabriqués comme des comprimés, sauf qu'il est prévu un moyen de retarder la dissolution des antibiotiques. Les bols sont faits pour restituer sur des périodes prolongées. La dissolution lente est assistée en choisissant, pour les antibiotiques, une forme extrêmement insoluble dans l'eau. Pour augmenter la densité du bol et le garder statique au fond du rumen, on ajoute une substance telle que la limaille de fer.

La dissolution des antibiotiques est retardée grâce à l'emploi d'une matrice de matériaux insolubles dans laquelle on incorpore le médicament. Par exemple, des substances telles que les cires végétales, les cires minérales purifiées et les matières polymères insolubles dans l'eau sont utiles.

La manière la plus facile de préparer des breuvages des anti biotiques est de choisir, pour les antibiotiques, une forme hydroso-luble. Si, pour une raison quelconque, on désire une forme insoluble, on peut fabriquer une suspension. Autrement, on peut formu 1er un breuvage sous forme de solution dans un solvant physiologique ment acceptable tel que le polyéthylèneglycol.

On peut préparer des suspensions des formes insolubles des antibiotiques dans des non-solvants tels que les huiles végétales, par exemple l'huile d'arachide, l'huile de maïs ou l'huile de sésame dans un glycol tel que le propylèneglycol ou un polyéthylèneglycol; ou dans l'eau, selon la forme des antibiotiques choisie.

Des adjuvants convsnables physiologiquement acceptables sont nécessaires afin de maintenir les antibiotiques en suspension. Les adjuvants peuvent être choisis parmi les épaississants, tels que la

carboxyméthylcellulose, le pclyvinylpyrrolidone, . la gélatine et les elginates. De nombreuses classes de tensio-actifs servent h mettre en suspension les antibiotiques. Par axampls, la lécithino, les composés d'addition alkylphénol polyoxyéthylène, les naphtalène-sulfonates, les alkylbenzènesulfonates et les esters polyoxyéthylène sorbitanne sont utiles pour fabriquer des suspensions dans des non-solvants liquidas.

En outre, de nombreuses substances qui affectent l'hydro-philis, la densité st la tension de surface du liquide peuvent assister la fabrication de suspensions dans des cas particuliers. Par exemple, les silicones antimousses, les glycols, le sorbitol et les sucres sont des agents de suspension utiles.

Les antibiotiques capables d'être mis en suspension peuvent être offerts à l'éleveur sous forme de suspension ou de mélange sec des antibiotiques et des adjuvants à diluer avant l'emploi.

Les antibiotiques peuvent aussi être administrés dans l'eau de boisson des ruminants. L'incorporation dans l'eau de boisson s'effectue en ajoutant à l'eau, en quantité convenable, une forme hydrosoluble ou capable d'être mise en suspension dans l'eau des antibiotiques. La formulation des antibiotiques destinés à l'addition à l'eau de boisson suit les mêmes principes que la formulation des breuvages.

La façon la plus pratique de traiter des animaux avec les composés antibiotiques est de formuler les composés au sein de l'alimentation. Tous les types d'aliments peuvent être médicamentés à l'aide des composés antibiotiques, y compris les aliments secs courants, les aliments liquides et les aliments granulés.

Les méthodes de formulation des médicaments au sein des aliments pour animaux sont bien connues. Il est habituel de fabriquer un prémélange de médicament concentré, comme matière première pour les aliments médicamentés. Par exemple, des prémélanges de médicaments typiques peuvent contenir à partir d'environ 0,1 jusqu'à environ 25 grammes de médicament par tonne de prémélange. L'écart important vient de l'écart important des concentrations eR médicament qui peuvsnt être désirées dans l'aliment final. Les prémélanges peuvent être soit liquides soit solides.

La formulation des aliments pour ruminants contenant les quantités convenables d'antibiotiques pour un traitement utile est bien comprise. Il faut simplement calculer la quantité de composé que l'on désire administrer à chaque animal, . tenir compte de la quantité d'aliment que l'animal mange par jour et de la concentration du composé antibiotique dans le prémélange à employer, et calculer la concentration convenable de composé antibiotique ou de prémélange dans l'aliment.

Toutes les méthodes de formulation, de mélange et de granulation des aliments normalement employées dans l'art de l'alimentation des ruminants sont entièrement appropriées pour fabriquer des aliments contenant les composés antibiotiques.

Comme on l'a montré, l'administration orale de l'antibiotique mod fie avantageusement la production de propionates par rapport à la production d'acétate dans le rumen. Dn peut donc postuler que le même traitement pourrait aussi être avantageux pour les animaux mono-gastriques qui fermentent des matières végétales fibreuses dans le caecum, dans la mesure où l'on s'attendrait à ce qu'un changement avantageux dans le rapport propionate/acétate se produise par administration orale de l'antibiotique instantané. Les chevaux, les suidés et les lapins sont des exemples d'animaux qui digèrent une partie de leur nourriture par fermentation caecale.

Détermination de la production d'acides gras volatils

On utilise, comme eource de fluide de rumen, un bovin modifié chirurgiquement avec une fistule au rumen. L'intégrité du rumen est maintenue par une canule pour rumen (Laboratoires Bar Diamond, Parma, Idaho) qui est ouverte de façon à prélever des échantillons de fluide. L'animal est nourri deux fois par jour avec une ration de 80$ de concentré (ration AHRES nD 39)/20$ de matières non digestibles. Le fluide de rumen est prélevé avant l'alimentation du matin.

Le fluide de rumen est essoré à travers 4 couches de gaze dans un récipient de Nalgène d'un gallon et est maintenu sous C02 de qualité anaérobis. A 2000 ml d'un tampon glacé basé sur celui défini par Cheng et al., 3. Dair Soi., 38, 1225 (1955), on ajoute mille ml du fluide de rumen essoré. La composition de ce tampon est la suivante:

- 10 -

Na2HPC>4

kh2po4

NaHC03 : NaCl KCl

0,316 g/1

MgS04

0, 152

CaCl2

2,260

FeSO^.

7H?0

0,375

ZnS04.

O

CM

œ

r-

0, 375

CuSO^.

5H20

0, 112 i 0,038 ! 0,008

i

0, 004 0, 002

Le fluide de rumen tamponné est maintenu dans une ampoule à décanter d'1 litre. Afin d'aider à conserver ls caractère anaéro-bie du fluide de rumen et l'homogénéité du fluide de rumsn tamponné,

on fait barboter constamment à travers le fluide, dans une ampoule à 10 décanter, en commançant approximativement 1,5 cm au dessus du robinet de fermeture de l'ampoule à décanter, du C02 de qualité anaérobie.

Pour chaque fermentation individuelle, on utilise des flacons Erlenmeyer de cent vingt cinq ml. Chaœun des flacons auxquels on ajoutera un composé contient 0,75 gramme d'une ration finement broyée de 80$ de concen-15 tré/20$ de foin de luzerne. Les flacons prévus pour être utilisés comme témoin non médicamenté contiennent 0,82 grammes de la ration finement broyée.

On ajoute dans chaque flacon 0,6 ml de composé test dissout dans un solvant approprié et on laisse reposer une nuit. Chaque composé est examiné à une concentration finale de 50 ppm. On ajoute dans 20 les flacons de fermentation témoins non médicamentés du solvant sans composé test. On utilise, comme témoin positif, de la nonensine à 50 ppm.

A chaque flacon contenant un composé test, on ajoute soixante grammes de fluide de rumen tamponné et, aux flacons témoins, on en 25 ajoute 65,90 grammes. Les flacons auxquels on a ajouté tous les composants sont bouchés à l'aide d'une fermeture équipée d'une vanne à gaz à utï sens pour permettre l'échappement des gaz produits par la fermentation. On prélève, dans tous les flacons témoins, des échantillons de six ml comme échantillons ài la date 0. On laisse incu-30 ber les flacons, en les agitant (120 oscillations par minute), pendant 4 heures.

Le fluide de rumen est versé dans des tubes de verre de 25 x 150 mm et maintenus dans un bain de glace pendant environ 15 minutes pour permettre la déposition des particules de matière.

- 11 -

Lbb 6 ml de fluide de rumen sont ensuite ajoutés à une quantité de 2 ml d'acide métaphosphorique è 25$ (p/v) (3.T. Baker) placés dans des tubes de polycarbonetBB à contrifugation de 13ml (Autoclear., IEC). Chaque tube est bouché et mélangé complètement. Les tubas sont maintenus à 5 température ambiante pendant 30 minutes, puis centrifugés è 16.000 tours par mn pendant 10 minutes, è un Bngle au sommet de B74 dans une centrifugeuse IEC B20, On ajoute ensuite, à 4 ml de la liqueur *

surnageante, 1 ml de l'étalon interne (acide méthyl-2 valérique à 0,25$, Alcrich Chemical Company). Le mélange résultant est filtré 10 à travers un filtre Millipore de 0,22 micron à l'aide d'un filtre Swinnex et d'une seringue de 5 ml. Le filtrat est enfermé hermétiquement dans des fioles de verre, d'un ml è l'aide de septa è doublage caoutchouc sertis.

Chaque fiole, représentant chacune des fermentations indivi-15 duelles, est analysée par chromatographie gaz liquide pour déterminer les acides gras volatils.

Chaque fiole est analysée par trois injections consécutives dans la colonne. On calcule les concentrations en acétate, propio-nate, isobutyrate, n-butyrate, isovalérate et n-valérate en comparant 20 avec les analyses d'une solution étalon des acides gras volatils au moyen d'une méthode d'étalonnage interne.

On a déterminé l'activité du composé en mesurant les variations relatives de production de propionate (C3) et d'acétate (C2) et d'n-butyrate (C^), c'est-à-dire au moyen du rapport molaire des 25 AGl^Cg/Cg + C^). L'augmentation par rapport au témoin du rapport (CjA^ + C^) obtenu avec chaque composé est présenté sous forme d'un pourcentage de l'augmentation obtenue avec le témoin positif. Les résultats sont donnés dans le tableau suivpnt:

Rapports molaires des AGI/ produits par fermentation des

30 composés à 50 ppm

Composé Rapport molaire AGI/ Augmentation par $ d'augmentation

C3/C2 + C4 rapport au témoin avec la Monensine

Témoin non traité 0,3 56

MonensinB

0,549 0,193 100

35 Ether-oxyde n-propylique de X-14868A 0,497 0,141 73,1

Ether-oxyde éthylique de X-14868A 0,541 0,185 25,9

- 12 ■

Ether-oxyde n-butylique 0,502

de X-14B6BA

Ether-oxyde éthylèneglycolique a 574.

de X-14868A

5 Ether-oxyde n-hexylique de

X-1486BA 0,549

Ether-oxyde n-pentylique de X-1486BA 0>482

Ether-oxyde butylèneglycolique 10 de X-14868A

Les sels sont préparés è partir de la forme acide libre des éthers-oxydes par des méthodes bien connues de l'art pour les composés du type polyéthers-oxydes; par exemple en lavant l'acide libre en solution avec une base ou un sel convenables. Parmi les exem-15 pies de telles substances basiques pharmaceutiqusment acceptables capables de former des sels pour les besoins de la présente invention, on trouve des bases de métaux alcalins, telles que l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, l'hydroxyde de lithium, etc...; des bases de métaux alcalino-terreux, telles que l'hydroxyde de cal-20 cium, l'hydroxyde de barium, etc...; et l'hydroxyde d'ammonium.

Parmi les sels de métaux alcalins ou alcalino-terreux convenant à la formation de sels pharmaceutiquement acceptables, on peut inclure des anions tels que les carbonates, les bicarbonates et les sulfates. Comme exemples de bases organiques formant des sels pharma-25 ceutiquement acceptables avec les composés polyéthers-oxydes, on a les alkylamines inférieures et les hydroxyalkylamines inférieures primaires, secondaires et tertiaires telles que l'éthylamine, l'iso-propylamine, la diéthylamine, la méthyl-n-butylamine, l'éthanolamine et la diéthanolamine.

30 Une aminé particulièrement préférée est la N-méthylglucamine.

Les sels de N-méthylglucamine sont particulièrement intéressants pour leur hydrosolubilité qui les rend susceptibles d'être employés pa-rentéralement.

Les composés de cette invention sont efficaces typiquement 35 du fait qu'il augmentent l'efficacité de la valeur alimentaire lorsqu'ils sont administrés oralement è des ruminants à des taux

0 ,146

0,218

0,193

0,1 Z6 0,174r

75,6 113,0 100,0

65,3 9 9,4-

- 13 -

allant d'environ 0,003 mg/kg/jour 6 environ 0,75 mg/kg/jour. Dn obtient les résultats les plue avantageux aux taux allant d'environ 0,03 mg/kg/jour è environ 0,075 mg/kg/jour.

Exemple 1

Préparation de l'acide libre de j.'éther-oxyde éthylique de l'antibiotique X-14S6BA

L'acide libre de l'antibiotique X-14B6BA (1,2 g, 0,00128 mole) a été dissous dans l'éthanol absolu (40 ml) et on a ajouté la forme H+ de la résins échangeuse d'ions AG 50W-X4 (maille 200-400) (2,0 g conservée pendant la nuit sous éthanol, filtrée et lavéB avec de l'éthanol frais avant l'emploi). Ce mélange a été agité pendant 3 heures à la température ambiante et ensuite la résine a été filtrée et lavée avec de l'éthanol. Les filtrats d'éthanol combinés ont été concentrés à un volume d'environ 10 ml et cette solution a été placée au froid (0-5°C) pendant la nuit.

La filtration a donné le produit désiré sous forma de cristaux blancs, F = 166-168°C.

Exemple 2

Préparation de l'acide libre de l'éther-oxyde n-propylique de l'antibiotique X-14B68A

L'acide libre de l'antibiotique X-14868A (6,2 g, 0,0066 mole) a été dissous dans le propanol-1 (80 ml) è température ambiante et on a ajouté la forme H+ de la résine échangeuse d'ions AG 50W-X4 (maille 200-400) (6,0 g, conservée pendant la nuit sous propanol-1, filtrée et lavée avec du propanol-1 avant l'emploi). Le mélangB résultant a été agité pendant 4 heures à la température ambiante, ou jusqu'à ce qu'une CCI*l (éther, hexane, méthanol, acétone, NH^OH dans un rapport 7/3/0,5/l/0,02) ait montré que la réaction était totale.

La résine a été filtrée et lavée avec du propanol-1. Les filtrats combinés ont d'abord été concentrés à 1'évaporateur rotatif et finalement à la pompe pour donner le produit désiré sous forme de mousse blanche. On a cristallisé un échantillon dans une quantité minimale de propanol-1, F = 109-111°C, décomp.

- 14 -

Exemple 3

Préparation du bb! de Na de l'éther-oxyde n-butyllque de l'antibiotique X-14S6BA

Dans 20 ml d'alcool n-butylique, on a dissous, à température ambiante, tout en agitant, 1 g du ssl de Na de l'antibiotique X-14868A. A cette solution, on a ajouté 5 g de la forme H+ de la résins AG50U-X4 (Maille 200-400) - trempée auparavant pendant une nuit dans l'alcool n-butylique, filtrée et lavée è l'alcool n-butylique. Le mélange réactionnel a été agité pendant 4 heures è la température ambiante.

Le mélange réactionnel a été filtré, le filtrat concentré sous vide, le résidu dissous dans l'acétats d'éthyle et lavé è l'aide d'une solution de Na^O^ (saturée è température ambiante), puis lavé avec HgO et séché sur Nb2S0^. Après filtration et concentration, le résidu a été cristallisé dans l'acétonitrile par addition d'eau. F = 146-150°C.

Exemple 4

Préparation du sel de Na de l'éther-oxyde n-butylique de l'antibiotique X-1486BA

Dans 20 ml d'alcool n-butylique, on a dissous, à température ambiante, tout en agitant, 1 g du sel de Na de l'antibiotique X-14868A. A cette solution, on a ajouté 5 g de la forme H+ de la résine AG50U-X4 (maille 200-400) - trempée auparavant pendant une nuit dans l'alcool n-butylique, filtrée st lavée à l'alcool n-butylique. Le mélange réactionnel a été agité pendant une nuit à la température ambiante. Le mélange réactionnel a été filtré, concentré sous vide, le résidu dissous dans le chlorure de méthylène et lavé avec Na^O^ (saturé à température ambiante), puis lavé avec H20 et séché sur Na2S0^. Après filtration, la solution a été concentrée et chroma-tographiée sur 200 g de silicagel, préparé dans le chlorure de méthylène, l'élution ayant été effectuée avec 1 litre de chlorure de méthylène, 3 litres de mélange 7/3/1 éther-oxyde diéthylique/hexane/acétone, suivis de 2 litres de mélange 7/3 éther-oxyde diéthylique/acétone. Les fractions contenant ls produit ds la réaction ont été concentrées et cristallisées dans l'acétonitrile par eddition d'eau. F = 155°C.

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Exemple 5

Préparation du sBl.dg-Na dB l'éther-oxyde n-amylique de l'antibiotique X-14B6BA

On a préparé le sel de Na de l'éther-oxyde n-amylique de l'antibiotique X-1486BA comme il est décrit dans l'exemple 3 mais en utilisant l'alcool n-amylique bu lieu ds l'alcool n-butylique.

F = 136-140°C.

Exemple 6

• Préparation du sel de Na de l'éther-oxyde n-hBxylique de l'antibiotique X-14B68A

On a préparé le sel ds Na dB l'éthsr-oxyde n-hexylique de 1'antibiotique X-14868A comme il est décrit dans l'exempls 3 mais an utilisant l'alcool n-hexyliqus au lisu de l'alcool n-butylique.

F = 137-139°C.

Exemple 7

Préparation du sel de Na.de 1 'éther-oxvde éthvlèneQlvcvlioue de l'antibiotique X-14868A

On a dissous 6 g de sel de Na de X-14B6BA dans un volume minimal de chlorure de méthylène/acétone. On a ajouté de l'éthylène-glycol (100 ml) et 30 g de la forme H+ de la résine AG50U-X4 (maille 200-400) (la résine a été trempée auparavant pendant la nuit dans l'éthylèneglycol), et le mélange réactionnel a été agité pendant la nuit à température ambiante. On a ajouté de l'eau au mélange réactionnel, filtré la résine et extrait le filtrat trois fois avec de l'éther-oxyde diéthylique. La phase éthérée a été lavée tour à tour avec h^O, Na2C03> 1^0 et séchée sur Na2S0^. La phase solvant a été éliminée sous vide et le résidu a été cristallisé dans l'acétonitrile par addition d'eau. F = 162-165°C.

Exemple 8

Préparation du sel de K de l'éther-oxyde éthylèneqlycdigue de l'antibiotique X-14B6BA

On a préparé le sel de K de l'éther-o^yde éthylèneglycolique de l'antibiotique X-14868A comme il est décrit dans l'exempls 7 mais sn

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utilisant KOH eu lieu de Na^CO^ et en séchant l'extrait ethéré du mélange réactionnel par filtration à travers un lit dB célite. F = 15B-162°C.

Exemple 9

5 Préparation du sb! de Na de l'éther-oxyde butylèneqlycoiiQue-1.4 de l'antibiotique X-14868A

On e préparé le sel de Ne de l'éther-oxyde butylèneglyc oliquB-1,4 de . 1 ' antibiotique X-14868A comme il est décrit dans l'exemple 7 sauf qu'on a utilisé le butanediol-1,4 à la place de l'éthylèneglycol. 10 Le produit est une mousse blanche (amorphe).HoO ^ = 27,7° dans CHC13> c as 1$.

Exemple 10

Acide libre de l'éther-oxyde propanoliquB-2 de l'antibiotique X-1486BA Dans du propanol-2 (50 ml), on a dissous, à la température 15 ambiante, le sel de sodium ionophore de l'antibiotique X-14868A (1,1 g) et on a ajouté à ce mélange la forme H+ de la résine échangeuse d'ions AG 50X-X4 (maille 200-400) (1,1 g conservé sous propanol-2, filtré et lavé au propanol-2 avant l'emploi) et l'on a agité à température ambiante pendant 24 heures. La résine a été filtrée et lavée avec 20 de l'alcool isopropylique frais. Le filtrat a d'abord été concentré à l'évaporateur rotatif et finalement à la pompe pour donner une mousse blenche.

Microanalyse: Calculé pour C_nHDC0„„: C, 62,61: H, 9,09

OU OO 1f

C, 62,73; H, 8,81

25 Exemple 11

Préparation du sel de. Na de l'éther-oxyde propanedioligue-l,3 (tximéthylè-neqlycolique) de l'antibiotique X-1486BA

On a dissous dans 100 ml de propanediol-1,3(triméthylèneglycol) cinq grammes de sel de Na de l'antibiotique X-1486BA, tout en agitant 30 à température ambiante. A cette solution, on a ajouté 20 g de la forme H+ de la résine AG502-X8 (maille 200-400) - trempée auparavant pendant une nuit dans du triméthylèneglycol, filtrée et lavée avec du triméthylèneglycol. Le mélange réactionnel a été agité pendant 3

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heures à température ambiante. On a ajouté de l'eau au mélange réactionnel, filtré la résine et extrait le filtrat deux fois avec de l'éther-oxyde diéthylique» Les phases éthérées rassemblées ont été lavées tour à tour avec HgO, Na^CO^» H^O Bt séchées sur Na^SO^. La phase solvant a été concentrée jusqu'à obtenir une huile qui a été chroma-tographiée sur 200 g de silicagel, préparé dans le chlorure de méthylène, l'élution ayant été effectuée avec 1 litre de mélange 7/3 éther-oxyde diéthylique/hexene, 2 litres de mélange 7/3/1 éther-oxyde diéthylique/ hexane/acétone, 1 litre de mélange 8/2 Bcétate d'éthyle/acétone',

suivis de 1 litre de mélange 6/4 acétate d'éthyle/acétone. Les fractions contenant le produit de la réaction ont été regroupées et le solvant a été éliminé sous vide pour donner une mousse blanche.

Microanelyse: Calculé pour CcnHo[-Na0.ri,-£Ho0 (1006,23).

OU oj 1O /L

Calculé: C 59,68; H 8,62; Na 2,29; HO 0,90. Trouvé: C 59,91; H 8,76;

oc z-

Na 2,0B; H20 1,02; D>0 J = 24,3° dans CHC13> c = 1%.

Exemple 12

Préparation du sel dB Na de l'éther-oxyde hydroxy-3 butylique (s)"

et (R) de l'antibiotipue X-14868A

On a préparé le sel de Na de l'éther-oxyde hydroxy-3 butylique (S) et (R) de l'antibiotique X-14868A comme il est décrit dans l'exemple 11, mais en utilisant 10 g de sel de Na de l'antibiotique X-14868A et du butanediol-1,3 au lieu du triméthylèneglycol. Les fractions 106-113 de la chromatographie sur silicagel ont conduit à une mousse blanche, le sel de Na de l'éther-oxyde hydroxy-3 butylique (5) deX-14868A. Microanalyse: Calculé pour Cc<.Ho_Na0.o (1011,25).

Ol O/ IQ

Calculé: C 60,58; H 8,67; Na 2,27. Trouv/é: C 60,52; H 8,62; Na 2,29;

= 28,3° dans CHC13, c = 1$. Les fractions 126-170 de la chromatographie sur silicagel ont conduit à une mousse blanche,

le sel de Na de l'éther-oxyde hydroxy-3 butylique (R) de l'antibiotique X-14868A. Microanalyse: Calculé pour C^Hg^NaO,^ (1011,25).

Calculé: C 60,58; H 8,67; Na 2,27; Trouvé: C 60,08; H 8,99; Na 2,07; &Q*5 = 25,9° dans CHC13, c = 1$.

L'identité du sbI de Na de l'éther-oxyde hydroxy-3 butylique (5) et (R) de l'antibiotique X-14868A a été confirmée en utilisant respectivement pour la réaction et la comparaison sur CCM du butane-

diol-1,3 (S) et du butanediol-1,3 (R) è 93$ de pureté.

Exemple 13

Préparation du sel de Na de l'éther-oxyde hydroxy-5 pentylique de l'antibiotique X-14B6SA

On a préparé le sel de Na de l'éther-oxyde hydroxy-5 pentylique de l'antibiotique X-14868A comme il est décrit dans l'exemple 11 mais en utilisant 10 g ds sel de Na de l'antibiotique X-14B68A et le pen-tanediol-1,5 au lieu du triméthylèneglycol. On a obtenu une mousse blanche, le sel de Na de l'éther-oxyde hydroxy-5 pentylique de l'antibiotiq X-14B68A. Microanalyse: Calculé pour C52HegNa0i8 (1025,27).

Calculé: C 60,92; H 8,75; Na 2,24. Trouvé: C 60,78; H 8,95; Na 2,14; tOg5 = 25,7° dans CHC13, c = 1$.

Exemple 14

Préparation du sel de Na de l'éther-oxyde propanediolique-l.2 de l'antibiotique X-14868A

En suivant la procédure de l'exemple 11 mais en utilisant le propanediol-1,2 au lieu du propanediol-1,3 on obtient l'éther-oxyde propanediolique-1,2 de l'antibiotique X-14868A.

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Claims

REVENDICATIONS

1. Procédé de production d'un composé de formule

OMe

.OMe

|iiii Me

Me H Me H ~ H H ~ 0R.

dans laquelle R est un alkyle en C1 à C? ou un hydroxyalkyle inférieur caractérisé par le fait que l'on fait réagir un composé de formule

OMe

CMe

5 sur un alcool primaire ou secondaire en C^ à C^, ou un alcool bifonc-tionnel en C2 à C? en présence de la forme H+ d'une résine échangeuse d'ions acide.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il se forme un composé de formule I ou un de ses sels pharmaceu-

10 tiquement acceptables, dans lequel R représente éthyle, n-propyle, iso-propyle, n-butyle, n-pentyle, n-hexyle, dihydroxy-1,2 éthyle ou dihydroxy-1,4 butyle.

3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il se forme un composé de formule I ou un de ses sels pharmaceu-

15 tiquement acceptables, dans lequel R représente dihydroxy-1,3-ou dihydroxy-1,2 propyle, hydroxy-3 butyle ou hydroxy-5pentyle (®) ou (R).

4. Procédé selon la revendication 1, caractérisée par 1b fait qu'il se forme l'éther-oxyde éthylique de l'antibiotique X-14868A ou eon eel pharmaceutiquement acceptable.

5. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait 5 qu'il se forme l'éther-oxyde éthylèneglycylique de l'antibiotique

X-14B68A ou son eel pharmaceutiquement acceptable.

6. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il se forme l'éther-oxyde n-hexylique de l'antibiotique X-14868A ou son sel pharmaceutiquement acceptable.

"10 7. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il se forme l'éther-oxyde butylèneglycylique-1,4 de l'antibiotique X-14868A ou son sel pharmaceutiquement acceptable.

8. Procédé sBlon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il se forme l'éther-oxyde propanediolique-1,3 de l'antibiotique

^ X-14868A ou son sel pharmaceutiquement acceptable.

9. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il se forme l'éther-oxyde hydroxy-3 butylique (s) de l'antibiotique X-14868A ou son sel pharmaceutiquement acceptable.

10. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait

20

qu'il se forme l'éther-oxyde hydroxy-3 butylique (r) de l'antibiotique X-14868A ou son -sel pharmaceutiquement acceptable.

11. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il se forme l'éther-oxyde propanediolique-1,2 de l'antibiotique X-14868A ou son sel pharmaceutiquement acceptable.

25

12. Procédé de préparation d'un agent antibiotique, d'un agent anticoccidien ou antipaludique ou d'un agent d'amélioration de la valeur alimentaire chez les ruminants et les suidés, caractérisé par le fait qu'il comprend la mise sous une forme convenant

^ à l'emploi envisagé d'un composé dB formule I indiqué dans la revendication 1, dans laquelle R est alkyle ou hydroxyalkyle inférieur, ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables.

13. Agent antibiotique contenant un composé de formule donnée dans la revendication 1, dans laquelle R est C2~C1 âlkyle ou hydroxyalkyle

^ inférieur, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et un support.

14. Agent anticoccidien contenant un composé de formule donnée dans la revendication 1, dans laquelle R est alkyle ou hydroxyalkyle inférieur, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptable et un support.

15. Agent antipaludique contenant un composé de formule donnée dans

*

r

- 21

la revendication 1, dans laquelle R est C2~C7 alkyle ou hydroxyalkyle inférieur, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et un support.

16. Agent d'amélioration de la valeur alimentaire chez les ruminants ou les suidés contenant un composé de formule donnée dans la revendication 1, 5 dans laquelle R est alkyle ou hydroxyalkyle inférieur, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et un support.

OMe dans laquelle R est un alkyle en à C? ou un hydroxyalkyle inférieur et leurs sels phaïmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication 1 ou par un équivalent chimique évident de 2Q celle-ci.

18. Composé selon la revendication 16, caractérisé par le fait que R représente éthyle, n-propyle, iso-propyle, n-butyle, n-pentyle, n-hexyle, dihydroxy-1,2 éthyle ou dihydroxy-1,4 butyle Bt leurs sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendica-

25 tion 2 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

19. Composé selon la revendication 16, caractérisé par le fait que R représente dihydroxy-1,3 ou dihydroxy-1,2 propyle, hydroxy-3 butyle ou hydroxy-5 pentyle (S) ou (R) et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication 3 ou par

30 un équivalent chimique évident de celle-ci.

20. EthBr-oxyde éthylique de liantibiotique X-14868A et ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication 4 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

21. Ether-oxyde éthylèneglycolique de l'antibiotique X-1486BA et 35 ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication 5 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

22. Ether-oxyde n-hexylique de l'antibiotique X-14868A et ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la reven

- 22 -

dication 6 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

23. Ether-oxyde butylèneglycolique-1,4 de l'antibiotique X-14B68A et ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication 7 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

24. EthBr-oxyde propanediolique-1,3 de l'antibiotique X-14B68A et ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication B ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

25. Ether-oxyde hydroxy-3 butylique (S) de l'antibiotique X-1485BA et ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication 9 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

26. Ether-oxyde hydroxy-3 butylique (R) de l'antibiotique X-14858A et ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication 10 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

27. Ether-oxyde propanediolique-1,2 de l'antibiotique X-14858A et ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon la revendication 11 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

28. Ether-oxyde méthyle de l'antibiotique X-14868A et ses sels pharmaceutiquement acceptables, lorsque préparés selon 1 revendication 1 ou par un équivalent chimique évident de celle-ci.

29. Invention telle que décrite ci-dessus.

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ORIGINA

Renvois

-moi rayé nuî

CURAU

Conseil en Propriété Industrielle

2$ bis, Boul. Princesse Charlotte MONTE-CARLO

procuratioi