SK7322000A3

SK7322000A3 - Intermediates and methods useful in the semisynthesis of paclitaxel and analogs

Info

Publication number: SK7322000A3
Application number: SK732-2000A
Authority: SK
Inventors: Ezio Bombardelli
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 1997-11-21
Filing date: 1998-11-19
Publication date: 2000-11-07
Also published as: EP1049686B9; CA2310778A1; RU2213739C2; HUP0100375A2; HK1028046A1; DK1049686T3; CA2310778C; JP3445973B2; DE69832202T2; AU1170599A; CN1279677A; SI1049686T1; PL340553A1; ES2251106T3; ATE308533T1; SK285797B6; CZ20001869A3; DE69832202D1; AU746448C; NO20002600D0

Description

Medziprodukt a spôsob prípravy paclitaxelu

Oblasť techniky

Vynález sa týka semisyntézy paclitaxelu a jeho analógov s použitím nových medziproduktov, ktorými sú deriváty 10-deacetyl-baccatinu III; vynález sa ďalej týka spôsobov prípravy týchto derivátov. Tieto nové deriváty majú v polohe 7 karbonátové substituenty, napríklad f-butoxy-karbonát.

Doterajší stav techniky

Paclitaxel je známa, účinná protinádorová zlúčenina, ktorá má široké spektrum protinádorových aktivít a ktorá má všeobecný vzorec I

Komerčné farmaceutické výrobky, ktoré obsahujú túto zlúčeninu sú vhodné napríklad na liečbu ovariálnej rakoviny a rakoviny prsníka žien. Z tohto dôvodu sa každým rokom vyžaduje stále väčší a väčší objem dodávok tejto zlúčeniny. Paclitaxel a baccatin III sa obtiažne extrahujú a vo všeobecnosti iba s malým výťažkom z kôry kmeňa druhov Taxus. Je zrejmé, že sú nevyhnutné aj alternatívne zdroje týchto látok.

Vo vedeckej a patentovej literatúre je opísaných niekoľko postupov syntéz, týkajúcich sa uvedených látok. Patent USA RE-34,277 (nové vydanie patentu USA

924 011) opisuje semisyntézu paclitaxelu s použitím derivátu 10-deacetyl-2baccatinu III, ktorý je v polohe 7 chránený tri-alkyl-silylovou skupinou, ktorá je špecificky označená ako tri-etyl-silylová skupina (TES) a ktorý je chránený tiež v polohe 10 acetylovou skupinou. Na prípravu paclitaxelu sa pred odstránením ochranných skupín tento baccatinový III derivát nechá reagovať s (2R,3S)-Nbenzoyl-2-O-(1-etoxyetyl)-3-fenyl-izoserínovou zlúčeninou.

V medzinárodnej PCT prihláške WO-93/06 094 sa opisuje príprava paclitaxelu reakciou prekurzora vedľajšieho reťazca β-laktámovej zlúčeniny s derivátom 7-O-TES-baccatínu III za vzniku 7-TES-baccatínového reakčného produktu. Paclitaxel sa získa záverečným miernym okyslením reakčnej zmesi.

V patente USA 5 476 954 sa pri syntéze paclitaxelu vychádza z chráneného derivátu 10-deacetyl-baccatinu III, ktorý obsahuje ochranné 2,2,2-tri-chlóretoxykarbonylové (TROC) skupiny v polohách 7 a 10 derivátu.

EP 0 617 034 opisuje spôsob prípravy 2-debenzoyl-2-acyl-taxolových derivátov. V patentovanom spôsobe sa C-13 substituované 2-benzoyl-taxolové analógy, v ktorých sú C-7 a C-10 hydroxylové skupiny chránené rôznymi ochrannými skupinami vrátane skupín ŕ-BOC, zbavia ochranných skupín a reacylujú v polohe 2 za vzniku 2-debenzoyl-2-acylových analógov.

WO 94/07 879 opisuje spôsob prípravy taxánových derivátov esterifikáciou ochrannými skupinami chráneného baccatinu III alebo 10-deacetyl-baccatinu III s použitím axazolidínovej kyseliny. Východiskový baccatinový materiál sa výhodne chráni v polohe C-7 s trichlóretylkarbonylovým alebo trichlórpropylkarbonylovým radikálom.

EP 0 735 036 opisuje spôsob prípravy taxánov s použitím substituovaných oxazolidínov. V patentovanom spôsobe sa C-13 substituované taxány pripravia reakciou oxazalidínov s taxánovým zoskupením, ktoré je chránené rôznymi ochrannými skupinami. C-7 hydroxylová skupina taxánového zoskupenia sa výhodne chráni trialkylsilylom.

Je dobre známe, že rozhodujúcim krokom semisyntézy paclitaxelu je selektívna ochrana polohy 7 niektorou výmennou skupinou, ktorá sa dá ľahko odstrániť. Tento krok je dôležitý preto, že hydroxylová skupina v uvedenej polohe taxánovej štruktúry je oveľa viac reaktívna ako hydroxylové skupiny v polohách 10 alebo 13; hydroxylová skupina v uvedenej polohe 7 je v syntetizovanom

-3paclitaxelovom produkte nevyhnutná. Za najužitočnejšiu ochrannú skupinu sa doteraz ale považuje TES. Pri použití 20 molov reakčnej zložky 10-deacetylbaccatínu III s TES je typický výťažok derivatizačného postupu približne 85 %. Acetylačný krok pri použití 5 ekvivalentov acetylchloridu poskytuje približne 85 % 7-TES-baccatínu III ako sa uvádza v medzinárodnej PCT patentovej prihláške WO-93/06 094 a v jeho US ekvivalentných dokumentoch, napríklad v patente USA 5 574 156.

So zreteľom na významnosť paclitaxelu sa ale stále vyžaduje nový a zlepšený spôsob jeho prípravy.

Tento vynález poskytuje zlepšenú syntézu paclitaxelu a jeho analógov použitím nových derivátov 10-deacetyl-baccatínu ako medziproduktov.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je medziprodukt všeobecného vzorca II v ktorom

A je

(II)

R¹ je ochranná skupina hydroxylovej skupiny alebo atóm vodíka; a

-4R² je ochranná skupina hydroxylovej skupiny, vybraná zo skupiny, pozostávajúcej z C1.4 acylových skupín karboxylových kyselín (napríklad acetyl), trialkylsilylových skupín, v ktorých každá alkylová skupina obsahuje 1 až 3 uhlíkové atómy, zo skupiny A, ktorá je určená hore; alebo R² znamená vodíkový atóm.

Príklady ochranných skupín hydroxylových skupín zahŕňajú Cí.4 acyly karboxylových kyselín, napríklad acetyl, trialkylsilylové skupiny v ktorých každá alkylová skupina obsahuje 1 až 3 uhlíkové atómy a skupinu A, určenú hore, napríklad ŕ-butoxykarbonylovú skupinu vzorca

Pretože R¹ je C1.4 acylová skupina karboxylovej kyseliny, napríklad acetyl, výhodná je trialkylsilylová skupina v ktorej každá alkylová skupina obsahuje 1 až 3 atómy uhlíka, alebo skupina A, určená hore, napríklad ŕ-butoxykarbonylová skupina, R² môže byť ktorákoľvek z uvedených skupín; pretože ale 13-hydroxylová skupina je menej reaktívna, nie je nevyhnutné ju chrániť ochrannou skupinou a tak R² môže bežne byť vodík.

V priebehu semisyntézy paclitaxelu sa do polohy 13 príslušne chráneného derivátu baccatínu III vloží /V-benzoyl-(2R,3S)-3-fenylizoserínová skupina. Výsledný chránený derivát paclitaxelu má všeobecný vzorec Ha

(Ha) v ktorom A je

R¹ je ochranná skupina hydroxylovej skupiny alebo atóm vodíka; a R^2a je (2R,3S)-3-fenylizoserínový derivát vzorca

όβΗδ v ktorom R³ je ochranná skupina hydroxylovej skupiny, napríklad A (určená hore), metoxymetylová skupina, 1-etoxyetyl, benzyloxymetyl, β-trialkylsilyletoxylmetyl v ktorom každá alkylová skupina obsahuje 1 až 3 atómy uhlíka, tetrahydropyranyl alebo 2,2,2-trichlóretoxykarbonylová skupina; alebo vodíkový atóm.

Vynález sa ďalej týka spôsobu výroby paclitaxelu krokmi, ktoré zahŕňajú vytvorenie medziproduktovej zlúčeniny, ktorá má vzorec Ha a odstránenie skupín A a R³ za vzniku paclitaxelu.

Na prípravu zlúčenín, ktoré majú vzorec II a Ha, v ktorých R¹ je acetyl, zahŕňa spôsob podľa tohto vynálezu výhodné vytvorenie medziproduktovej zlúčeniny II reakciou 10-deacetylbaccatínu III s činidlom, schopným vložiť ŕ-butoxykarbonylovú skupinu, napríklad ŕ-butoxy-pyrokarbonát za vzniku 7-ŕ-butoxykarbonyl-10-deacetyl baccatínu III. Týmto spôsobom získaný 7-ŕ-butoxykarbonyl-10-deacetyl baccatín III sa potom môže acetylovať, aby sa získal 7-ŕ-butoxykarbonyl-baccatín III.

10-Deacetylbaccatín III je vysoko nerozpustný vo väčšine bežných rozpúšťadiel a preto výber rozpúšťadla je veľmi dôležitý aby sa zabezpečila prijateľná rýchlosť a vysoký výťažok reakcie, pri ktorej sa viaže uvedená ŕ-butoxykarbonylová skupina. 10-Deacetyl je napríklad vysoko nerozpustný v metylénchloride. Ak sa pre reakciu 10-deacetylbaccatínu s ŕ-butoxypyrokarbonátom (pozri napríklad Príklad 1 v

-6ďalšom texte) použije ako rozpúšťadlo metylénchlorid, reakcia v malom objeme prebieha prijateľnou rýchlosťou, ale vo veľkom môže byť neprípustné pomalá.

Ak sa ale na vykonanie reakcie použije polárne aprotické rozpúšťadlo, obsahujúce dusík, ako je napríklad pyridín (pozri napríklad Príklad 8 v ďalšom texte), uvedená reakcia prebieha rýchlejšie, ale výťažok reakcie môže byť nižší v dôsledku tvorby vedľajšieho produktu 7,10-di-(ŕ-butoxykarbonyl)baccatínu.

Použitie pyridinu ako rozpúšťadla v priemyselnej mierke sa javí ako výhodné z hľadiska vyššej rýchlosti reakcie, hoci nižší výťažok môže byť menšou nevýhodou. Možno tiež vykonať ďalší krok procesu, to znamená naviazanie acetylovej skupiny do polohy 10 bez oddeľovania alebo čistenia vyžadovaného 7-ŕ-butoxykarbonyl-10deacetylbaccatínu; to znamená, že sa reakcia, v ktorej sa naviaže ŕ-butoxykarbonylová skupina a vykoná acetylacná reakcia vykoná v jednej násade.

Ďalej, ak sú východiskové látky v amorfnom (bezvodom) stave, reakcia prebieha s vyššou rýchlosťou ako keď je sú východiskové látky vo forme kryštalického hemihydrátu.

Hydroxylová skupina v polohe 13 7-ŕ-butoxy-karbonyl-baccatínu III sa potom môže premeniť na (2/?,3S)-3-fenylizoserínovú skupinu, ktorá má štruktúru

v ktorom R³ je vodík, reakciou 7-ŕ-butoxy-karbonyl-baccatínu III s oxazolidínovým derivátom, ktorý má vzorec III

(III)

-7v ktorom

R⁴ je arylová skupina, alebo nerozvetvená alebo rozvetvená alkylová alebo alkenylová skupina, ktoré majú 1 až 5 uhlíkových atómov; a

R⁵ je R⁴ alebo ŕ-butoxyskupina, a

R⁶ a R⁷ každé je halogénované metylová skupina.

Výhodné je použiť nadbytočné množstvo 7-ŕ-butoxy-karbonyl-baccatínovej III zlúčeniny vzhľadom na množstvo oxazolidínového derivátu.

Vynález ďalej zahŕňa oxazolidínový derivát, ktorý má vzorec III

(Hl) v ktorom

R⁴, R⁵, R⁶ a R⁷ boli už určené hore.

Výhodné je, ak R⁴ je fenyl, R⁵ je fenyl alebo skupina ŕ-butoxy, a každý z R⁶ a R⁷ je skupina CICH₂-, BrCH₂-, alebo F₃C-.

Oxazolidínové deriváty všeobecného vzorca III možno pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca IV

R⁸ (IV) s ketónom všeobecného vzorca V R⁶R⁷CO.

Vo vzorcoch IV a V sú R⁴, R⁵, R⁶ a R⁷ určené rovnako ako hore a R⁸ je zvyšok alkoholu R⁸OH, v ktorom R⁸ je napríklad alkylová skupina, napríklad metylová skupina.

Tento vynález zahŕňa nové spôsoby semisyntéz paclitaxelu všeobecného vzorca I, dané použitím nových medziproduktov všeobecných vzorcov II alebo lla.

-8Tieto nové medziprodukty sú viacúčelové medziprodukty, ktoré možno použiť tiež na semisyntézu docetaxelu a ďalších analógov paclitaxelu. Opisuje sa aj postup ich prípravy.

Neočakávane sa zistilo, že ochranou hydroxylovej skupiny v polohe 7 10deacetylbaccatínu III (alebo podobných taxánových derivátov s rovnakou základnou štruktúrou), pomocou určitej karbonátovej zlúčeniny sa dosiahne zlepšenie prípravy paclitaxelu z uvedených derivátov.

Výhodná ochranná skupina je ŕ-butoxy-pyrokarbonát (BOC)

CH₃

O / ___ C__O--C--CH₃ \

ch₃

Táto ochranná skupina môže byť substituovaná v polohe 7 a ak sa vyžaduje tiež v polohe 10.

Keďže poloha 10 nie je tak reaktívna ako poloha 7, možno pre polohu 10 použiť mnohé iné ochranné skupiny. Podrobnejšie, možno použiť skupinu -OR¹, v ktorej R¹ je ochranná skupina hydroxylovej skupiny alebo vodíkový atóm. Možno použiť ktorúkoľvek z najrôznejších skupín na ochranu hydroxylovej skupiny, vrátane karbonátových skupín, opísaných hore pre A, G¹ skupiny zlúčenín so vzorcom III z patentu USA 5 578 739 alebo 5 621 121, R² skupiny zlúčenín so vzorcom III z patentu USA 5 476 954, alebo R³ substituenty zlúčenín so vzorcom IV z patentu USA RE-34 227.

Z 10-deacetylbaccatínu III možno dosiahnuť takmer kvantitatívny výťažok derivátu 7-BOC-10-deacetylbaccatínu III. Uvedená BOC ochranná skupina sa ľahko a selektívne odstráni vo veľmi miernom kyslom prostredí použitím katalytického množstva minerálnych alebo organických kyselín, výhodne kyseliny mravčej alebo F3C-COOH.

Syntéza 7-BOC-10-deacetylbaccatínu III alebo jeho analógov sa môže vykonať v chlórovanom rozpúšťadle, výhodne v prostredí metylénchloridu s použitím ko-rozpúšťadla dimetylformamidu; 1 mol 10-deacetylbaccatínu III alebo

-9zvoleného taxánového analóga sa nechá reagovať s 1,2 až 2,5 ekvivalentami tbutoxy-pyrokarbonátu v prítomnosti 1,2 ekvivalentu etyldiizopropylamínu a katalytického množstva 4-dimetylaminopyridínu. V týchto podmienkach možno dosiahnuť takmer kvantitatívny výťažok 7-BOC-derivátu. Získaná zlúčenina sa môže premeniť na 7-BOC-acetylderivát použitím acetylchloridu, bromidu alebo diketénu, ako sa opisuje v príkladoch.

Uvedené deriváty možno premeniť na biologicky účinné zlúčeniny esterifikáciou hydroxylovej skupiny v polohe 13 s oxazolidínovým derivátom, ktorý má vzorec III

v ktorom

R⁴ je arylová skupina, alebo alkylová alebo alkenylová skupina, s nerozvetveným alebo rozvetveným reťazcom s 1 až 5 atómami uhlíka; a

R⁵ je R⁴, alebo skupina ŕ-butoxy a

R⁶ a R⁷ sú halogenované metylové skupiny.

Uvedená reakcia sa vo všeobecnosti vykoná v aprotických rozpúšťadlách, výhodne v benzéne, toluéne, xyléne, chlórbenzéne alebo etylbenzéne, výhodne v prítomnosti kondenzačného Činidla ako je napríklad dicyklohexylkarbodiimid (DCC) a katalytického množstva zásady, napríklad dialkylaminopyridínu, výhodne 4-dimetylaminopyridínu pri teplotách v oblasti od približne 50 °C do 100 °C, výhodne pri 70 °C.

Na prípravu vyžadovanej zlúčeniny sa výhodne použijú 4 moly kondenzačného činidla a 1,5 molu oxazolidínového derivátu na 1 mol taxánu s chránenými skupinami. Po eliminácii vedľajších reakčných produktov a rozpúšťadla sa môže 13-ester izolovať v surovom stave. Táto zlúčenia sa môže spracovať v prostredí metanolu s katalytickým množstvom bezvodého HCI pri teplote miestnosti, alebo pri teplotách v rozmedzí približne 5 °C až 10 °C, výhodne pri 0 °C s

-10koncentrovanou kyselinou mravčou (98 %) až do úplného odstránenia BOC skupiny v polohe 7 a ochrannej skupiny R⁷ bočného reťazca v polohe 13. Po spracovaní reakčnej zmesi s roztokom soli sa môže taxánový derivát extrahovať rozpúšťadlom, ktoré je nemiesíteľné s vodou, výhodne s etyíesterom kyseliny octovej. Po oddestilovani extrakčného rozpúšťadla možno taxánové deriváty priamo kryštalizovať v prostredí vhodného rozpúšťadla, alebo sa podrobia chromatografickému čisteniu s použitím napríklad silikagélu a elučného rozpúšťadla, ktoré výhodne pozostáva zo zmesi hexánu a etylesteru kyseliny octovej vo vhodnom pomere.

Paclitaxel a jeho analógy možno voliteľne pripraviť esterifikáciou. chráneného baccatínu s fenylizoserínovým reťazcom, esterifikovaným v polohe 2 s BOC. Pri príprave s oxazolidínovým derivátom možno zvoliť reakčné podmienky, uvedené hore.

Hydroxylovú skupinu v polohe 13 možno esterifikovať mnohými inými spôsobmi, napríklad spôsobmi opísanými v patentoch USA 5 578 739, 5 574 156, 5 621 121, 5 476 954, 5 470 866, 4 857 653, 4 814470 a RE-34 277 a v európskej patentovej prihláške 0 525 589-A. Všetky patenty, citované v tomto podrobnom opise sa týmto odkazom výslovne zahŕňajú do rozsahu tohto vynálezu.

Ďalej uvedené príklady slúžia na ozrejmenie, ako možno tento vynález prakticky uskutočniť; príkladmi nie je nijako obmedzený rozsah tohto vynálezu. Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Syntéza 7-BOC-10-deacetylbaccatínu III

500 mg vzorky 10-deacetylbaccatínu III (0,92 molu) sa suspendovalo v metylénchloride (5 ml) a etyldiizopropylamíne (1,01 mmolu, 1,2 ekvivalentu), pridal sa ŕ-butoxypyrokarbonát (240 mg, 1,10 mmolu, 1,2 ekvivalentu) a DMAP (4-dimetylaminopyridín, 20 mg).

Reakčná zmes sa 48 hodin miešala pri teplote miestnosti, potom sa pridali rovnaké množstva reaktantov ako hore a zmes sa nechala miešať ďalších 48 hodín.

-11 Reakčná zmes sa potom spracovala zriedením s metylénchloridom, premytím s HCI a roztokom soli. Po vysušení sa získalo 580 mg 7-BOC-10-deacetylbaccatínu III, ktorý mal nasledujúce vlastnosti: teplotu topenia 148 °C;

¹H NMR (200 MHz, CDCI₃, TMS ako vnútorný štandard): Bz 8,10, br d, J 8; Bz 7,70, br t, J 8; Bz 7,55, br t J 8; H2, 5,64 d J 7; H10, 5,54, s; H7, 5,36, dd, J 11,0, 8,0; H5, 4,95, d J 8; H13, 4,91, br t J 7,5; H₂Oa, 4,32 d, J 8,0; H₂Ob 4,26, d, J 8,0; H3, 4,09 d, J 8,8; Ac 2,29 s; H18 2,09, s; H19 1,83 s; Boe 1,46 s; H16 1,34 s; H17 1,20 s;

IR (KBr) 3 480 (OH), 1 740 (široká, C = O), 1 603, 1 371, 1 275, 1 259, 1 158, 1 092, 712.

Príklad 2

Syntéza 7-BOC-10-deacetylbaccatínu III

500 mg vzorky 10-deacetylbaccatínu III (0,92 molu) sa rozpustilo v dimetylformamide, roztok sa zriedil 4 ml metylénchloridu. Reakčné činidlá a podmienky reakcie boli rovnaké ako v Príklade 1.

Príklad 3

Syntéza 7-BOC-baccatínu III

644 mg (1 mmol) 7-BOC-10-deacetylbaccatínu III, pripraveného spôsobom uvedeným v Príklade 1 alebo v Príklade 2 sa rozpustilo v 5 ml pyridínu a po ochladení na 0 °C a za miešania sa počas 15 hodín pridalo 1,2 g acetylchloridu (15,5 mmólu). Po skončení reakcie sa roztok zriedil metylénchloridom a za miešania sa premyl 60 ml vody. Organická fáza sa potom niekoľkokrát premyla vodou a zriedenou HCI sa eleminoval pyridin. Extrakt sa sušil nad Na₂SO₄ a odparil vo vákuu, zvyšok sa kryštalizoval z prostredia hexánu/acetónu. Získalo sa 660 mg 7Boc-baccatínu III, ktorý mal nasledujúce vlastnosti:

¹H NMR (200 MHz, CDCI₃, TMS ako vnútorný štandard): Bz 8,10, br d, J 8; Bz 7,70, br t, J 8; Bz 7,55, br t J 8; H2, 5,64 d J 7; H10, 5,52, s; H7, 5,44, dd, J 10,3, 7,0; H5,

-124,98, d J 7,9; H13, 4,50, br t; H₂Oa, 4,32 d, J 8,0; H₂Ob 4,22, d, J 8,0; H3, 4,02 d, J 6,7; Ac 2,30 s; H18 2,19, s; H19 1,80 s; Boe 1,48 s; H16 1,17 s; H17 1,07 s.

Príklad 4

Syntéza paclitaxelu (4S,5R)-2,2-di(chlórmetyl)-4-fenyl-/V-benzoyl-5-oxazolidínová kyselina (1,65

g) sa nechala reagovať v prostredí toluénu s 0,69 g 7-Boc-baccatínu III v prítomnosti 1,1 ekvivalentu DCC a 60 mg 4-dimetylaminopyridínu. Reakčná zmes sa udržiavala 12 hodín pri 60 °C za miešania pod ochrannou atmosférou argónu.

Po ukončení reakcie (TLC) sa reakčná zmes odfiltrovala od nerozpustných vedľajších produktov a roztok v rozpúšťadle sa premyl vodou a rozpúšťadlo sa oddestilovalo vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil v 10 ml koncentrovanej kyseliny mravčej pri 0 °C a v tomto stave sa udržiaval 2 hodiny. Potom sa reakčná zmes zriedila 100 ml vody a zakalený roztok sa trikrát extrahoval (vždy s 50 ml) metylénchloridu. Spojené organické vrstvy sa premyli roztokom NaHCO3 a potom vodou. Organická fáza sa sušila nad bezvodým síranom sodným a skoncentrovala vo vákuu. Zvyšok sa kryštalizoval z prostredia etanolu/vody a získalo sa 0,81 g paclitaxelu, ktorý mal dobre známe vlastnosti, uvádzané v literatúre.

Príklad 5

Reakcia 10-deacetylbaccatínu III s Boc-pyrokarbonátom

500 mg vzorky 10-deacetylbaccatínu III (0,92 mmólu) sa dispergovalo v metylénchloride (5 ml) a do suspenzie sa pridali etyldiizopropylamín (190 μΙ, 1,10 mmólu, 1,2 mol.ekvivalentu), Boc-pyrokarbonát (240 mg, 1,10 mmólu, 1,2 mol.ekvivalentu) a DMAP (4-dimetylaminopyridín, 20 mg). Reakčná zmes sa 48 hodín miešala pri teplote miestnosti a pridali sa ďalší Boc-pyrokarbonát (240 mg, 1,10 mmólu, spolu 2,4 mol.ekvivalentov) a etyldiizopropylamín (190 μΙ, 1,10 mmólu, spolu 2,4 mol.ekvivalentu). Reakčná zmes sa ďalej miešala 120 hodín a potom sa spracovala zriedením s metylénchloridom, premytím HCI a roztokom soli. Po vysušení sa zvyšok čistil stĺpcovou chromatografiou (približne 5 g silikagélu).

-13Elúciou hexánom/EtOAc (6:4) sa získal BC DAB (výťažok :55 % konverzia: 92 % teoretického výťažku). Elúciou s ETOAc sa znova získalo 195 mg DAB.

Príklad 6

Reakcia 10-deacetylbaccatíhu III s BOC-ON

Do roztoku 10-deacetylbaccatinu III (400 mg, 0,73 mmolu) v pyridíne (3 ml) sa pridali BOC-ON (= 2-(ŕerc-butoxykarbonyloxyimino)-2-fenylacetonitril ) (543 mg, 2,19 mmolu, 3 mol.ekvivalety) a 4-dimetylaminopyridín (90 mg, 0,73 mmolu, 1 mol. ekvivalent).

Priebeh reakcie sa sledoval TLC (hexán-EtOAc, 4:6, Rf východiskového materiálu 0,1; Rf BOC derivátu 0,50; Rf 7,10-diBOC derivátu 0,56). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 10 dní, potom sa ďalej spracovala zriedením vodou a extrakciou chloroformom. Po premytí nasýteným roztokom kyseliny citrónovej a ďalej nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a nakoniec roztokom soli sa reakčná zmes sušila (MgSO4) a odparila, čím sa získal polotuhý zvyšok (1,07 g). Analýzou tohto zvyšku ¹H NMR spektrometriou (200 MHz) sa ukázalo, že obsahuje deriváty 7-BOC a 7,10-diBOC v pomere 85:15. Čistením stĺpcovou chromatografiou (hexán-EtOAc 6:4) sa získalo 265 mg 7-BOC-10-deacetylbaccatinu III (výťažok 56 % teoretického výťažku).

Analýza 7-BOC-10-deacetylbaccatínu III

Biely prášok, teplota topenia 162 °C;

IR (KBr) spektroskópia: 3 480,1 740,1 371,1 275,1 259,1 158,1 092, 712;

CI-MS: 645 (M+H), C34H44O12;

¹H NMR (200 MHz, CDCI3): 8,10 (br d, J = 8,0 Hz, Bz); 7,70 (br t, J= 8,0 Hz.Bz); 7,55 (br t, J = 8,0 Hz, Bz); 5,64 (d, J = 7,0 Hz, H-2); 5,54 (s, H-10); 5,36 (dd, J = 11,0 Hz,H-7); 4,95 (d, J = 8,0 Hz, H-5); 4,91 (br t, J = 7,5 Hz, H-13); 4,32 (d, J = 8,0 Hz, H-20a); 4,26 (d, J = 8,0 Hz, H-20b); 4,09 (d, J = 8,0 Hz, H-3); 2,29 (s, OAc); 2,09 (brs, H-18); 1,83 (s, H-19); 1,46 (s, BOC); 1,34 (s, H-16); 1,20 (s, H-17).

-14Analýza 7-BOC-baccatínu III

Biely prášok, teplota topenia 197 °C;

IR (KBr) spektroskópia: 3 580, 3 497, 1 750, 1 724, 1 713, 1 273, 1 240,1 070, 980; Molekulová hmotnosť: 686 , C36H46O13;

¹H NMR (200 MHz, CDCI₃): 8,10 (br d, J = 8,0 Hz, Bz); 7,70 (br t, J= 8,0 Hz,Bz); 7,55 (br t, J = 8,0 Hz, Bz); 6,52 (s, H-10); 5,64 (d, J = 7,0 Hz, H-2); 5,41 (dd, J = 11,0 Hz,H-7); 4,98 (d, J = 8,0 Hz, H-5); 4,90 (br t, J = 7,5 Hz, H-13); 4,32 (d, J = 8,0 Hz, H-20a); 4,22 (d, J = 8,0 Hz, H-20b); 4,02 (d, J = 8,0 Hz, H-3); 2,30 (s, OAc); 2,19 (br s, H-18); 2,16 (s, OAc); 1,80 (s, H-19); 1,48 (s, BOC); 1,17 (s, H-16); 1,07 (s, H-17).

Príklad 7

Príprava dichlóroxazolidínového derivátu llla (Metylester zlúčeniny vzorca III s R⁴ = R⁵ = fenyl, R⁶ = R⁷ = Cl)

500 mg metylesteru /V-benzoyl-fenyl-izoserínu v 30 ml zmesi tetrahydrofuránu/benzénu (1:1) sa nechalo reagovať s 1 g dichlóracetónu a 50 mg PTSA (pyridinium-p-toluénsulfonát) v prítomnosti molekulového sita (3Ä). Reakčná zmes sa 2 dni zahrievala na teplotu varu pod spätným chladičom. Po ukončení reakcie sa zvyšok premyl hexánom na odstránenie dichlóracetónu.

Zvyšok sa rozmiešal s 20 ml MeOH a zmiešal s 220 mg bezvodého uhličitanu draselného v 20 ml vody. Po 2 hodinách sa vo vákuu odparil metanol a vodná fáza sa okyslila 5 % roztokom KHSO4 a potom extrahovala etylesterom kyseliny octovej.

Pripravená kyselina sa priamo použila na esterifikáciu 7-Boc-10-acetylbaccatínu III (pozri Príklad 4).

Príklad 8

Reakcia 10-deacetylbaccatínu III s Boc-pyrokarbonátom

BOC2O (800 mg, 37 mmolov, 2 mol.ekvivalenty) a DMASP ( 220 mg, 18,5 mmólu, 1 mol.ekvivalent) sa pridali do roztoku 10-deacetylbaccatínu III (1,0 g, 18,5

-15mmolov) v pyridíne (15 ml). Reakcia sa sledovala pomocou TLC (hexán-EtOAc 4:6, Rf východiskových látok = 0,10; Rf 7-Boc-derivátu 0,50; Rf 7,10-diBoc-derivátu 0,56).

Reakčná zmes sa 16 hodín miešala pri teplote miestnosti a potom sa ochladila na 0 °C a pridal sa AcCI (261 μΙ, 37 mmolov, 2 mol.ekvivalenty). Priebeh reakcie sa sledoval pomocou TLC (1,2-dichlóretán/EtOH 96:4 x 4).

Reakčná zmes sa miešala 5 hodín pri 0 °C, potom sa pridali ďalšie 2 ekvivalenty AcCI; v miešaní sa pri 0 °C pokračovalo ďalšie 2 hodiny. Potom sa reakčná zmes v reakčnej nádobe zriedila vodou (asi 150 ml). Po 30 minútach sa zmes dekantovala z reakčnej nádoby a lepkavá usadenina sa zo stien vybrala do EtOAc (30 ml), premyla zriedenou HCI (10 ml) roztokom soli (10 ml). Po vysušení (MgSO₄) a odparení rozpúšťadla sa získalo 1,18 g žltého prášku. Podľa analýzy NMR prášok obsahoval zmes 82:18 7-Boc-baccatínu III a 7,10-diBoc-baccatínu III.

7Ψ ΐ$Ζ~20Μ>

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Medziprodukt všeobecného vzorca II (II) v ktorom

A je

R¹ je ochranná skupina hydroxylovej skupiny alebo atóm vodíka; a

R² je ochranná skupina hydroxylovej skupiny, vybraná zo skupiny, pozostávajúcej z Ci_4 acylových skupín karboxylových kyselín (napríklad acetyl), trialkylsilylových skupín, v ktorých každá alkylová skupina obsahuje 1 až 3 uhlíkové atómy, zo skupiny A, ktorá je určená hore; alebo R² znamená vodíkový atóm, na prípravu paclitaxelu.
2. Medziprodukt podľa nároku 1, v ktorom R¹ je A, acetylová skupina alebo trialkylsilylová skupiny, v ktorej každá alkylová skupina obsahuje 1 až 3 atómy uhlíka.
3. Medziprodukt podľa nároku 1, v ktorom R¹ je vodík.
4. Medziprodukt podľa nároku 1, v ktorom R¹ je acetyl.
5. Medziprodukt všeobecného vzorca III

CO₂H (III) v ktorom

R⁴ je arylová skupina, alebo nerozvetvená alebo rozvetvená alkylová alebo alkenylová skupina, ktoré majú 1 až 5 uhlíkových atómov; a

R⁵ je R⁴ alebo ŕ-butoxyskupina, a

R⁶ a R⁷ každé je halogenovaná metylová skupina, na prípravu paclitaxelu.

I
6. Medziprodukt podľa nároku 5, v ktorom R⁴ je fenyl, R⁵ je fenyl alebo skupina ŕ-butoxy, a R⁶ a R⁷ každé je skupina CICH₂-, BrCľh- alebo F₃C-.
7. Spôsob prípravy paclitaxelu, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje:

a) vytvorenie medziproduktu reakciou 10-deacetylbaccatínu III s ŕ-butoxypyrokarbonátom za vzniku 7-ŕ-butoxy-karbonyl-10-deacetyl-baccatínu III;

b) acetyláciu v polohe 10 7-f-butoxy-karbonyl-10-deacetyl-baccatínu III na získanie 7-ŕ-butoxy-karbonyl-baccatínu III;

c) vloženie skupiny c₆h₅conh é₆H_s

-18v ktorej R³ je ochranná skupina hydroxylovej skupiny, napríklad f-BOC, metoxymetyl, 1-etoxyetyl, benzyloxymetyl, β-trialkylsilyletoxymetyl, v ktorom každá alkylová skupina obsahuje 1 až 3 atómy uhlíka, tetrahydropyranyl alebo 2,2,2-trichlóretoxykarbonyl, alebo vodíkový atóm, do polohy 13 7-ŕ-butoxy-karbonyl-baccatínu III reakciou chráneného baccatínu III s oxazolidínovým derivátom všeobecného vzorca III v ktorom R⁴ je fenylová skupina; R⁵ je R⁴ alebo skupina ŕ-butoxy, a každé R⁶ a R⁷ je halogenovaná metylová skupina; a

d) selektívne odstránenie skupín A a R³ v mierne kyslom prostredí s použitím minerálnej alebo organickej kyseliny.
8. Spôsob podľa nároku 7, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že R⁵ je fenylová alebo ŕ-butoxylová skupina a R⁶ a R⁷ každé je skupina CICH2-, alebo BrCH₂-, alebo F₃C-.
9. Spôsob prípravy podľa nároku 7 alebo 8, vyznačujúci sa tým, že sa použije nadbytok zlúčeniny 7-ŕ-butoxy-karbonyl-baccatínu III vzhľadom na množstvo oxazolidí nového derivátu.
10. Spôsob prípravy podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že acetylácia sa uskutoční použitím acetylhalogenidu alebo diketénovej zlúčeniny.