JP6302487B2 - 新規生物活性ポリマー - Google Patents

Description

本発明は、新規生物活性ポリマー及びそれらの殺生物剤としての使用に関する。

下記一般式のポリグアニジン及びその様々な誘導体が、長い間知られている。

１９４３年にはすでに、特許文献が、米国特許２，３２５，５８６号において、ｉ）グアニジン若しくはその塩、ｉｉ）シアノハライド、ｉｉｉ）ジシアノアミド、又はｉｖ）イソシアニドジハライドのジアミンとの重縮合、或いはｖ）２つのジシアノジアミドが一緒になる重縮合（シアノ置換ポリグアニジンが得られる）による様々なポリグアニジンを製造するためのいくつかの方法、並びにこのように製造されるポリグアニジンの染色助剤としての使用を開示している。

既にその時点で、開示された反応ｉ）〜ｉｖ）におけるジアミンは、アルキレン及びフェニレンジアミン並びにオキシアルキレン又は他のポリエーテルジアミン（後にＪｅｆｆａｍｉｎｅｓ^（Ｒ）としても知られるようになるもの）である。

１０年後には、このようなポリグアニジンが、優れた殺生物剤であることが証明された。オスカーシュミットの周りのグループにより、ＷＯ９９／５４２９１Ａ１において、殺菌剤ポリ（ヘキサメチレングアニジン）の製造が、ＷＯ０１／８５６７６Ａ１において、グアニジンのポリオキシアルキレンとの縮合により製造される殺菌剤ポリグアニジンが、ＷＯ２００６／０４７８００Ａ１において、グアニジンのアルキレンジアミンとオキシアルキレンジアミンの混合物との重縮合により製造される、２つのタイプの二価の基Ｒ_１のうち１つのみを含むポリマーより低い毒性を有すると言われる殺生物剤（特に、殺菌剤）として作用するポリグアニジン誘導体が開示される。

ＷＯ０２／３０８７７Ａ１により、鎖中にフェニレン部分をさらに含む殺菌剤として使用される同様のポリグアニジンが開示される。研究者のロシアのグループ（Ｔｅｔｓ，Ｔｅｔｓ ｕｎｄ Ｋｒａｓｎｏｖ）により、ＷＯ２０１１／０４３６９０Ａ１（ＵＳ２０１１／０２６９９３６Ａ１及びＥＰ２，５２０，６０５Ａ１が由来する）において、ヒドラジン水和物の存在下でのグアニジンとヘキサメチレンジアミンの重縮合により製造される下記式の殺菌剤ポリグアニジンが開示される：

このように、重縮合の間、ヒドラジンにより、（少なくとも正式には）１つのグアニジン部分のみのアミノ基或いはまた２つのグアニジン部分のアミノ基が置き換えられ、交互のポリ（ヘキサメチレングアニジン）ブロック及びポリ（ヘキサメチレンアミノグアニジン）ブロックと共に、２つのタイプのブロックが以下に示すようなグアニジン二量体を介して結合しているブロックコポリマーをもたらすと言われている。

また、これらのポリマー及びその酸付加塩は、細菌、ウイルス及び菌類に対する殺生物剤として作用するとも言われている。しかしながら、７つの異なるポリマーを製造する当該出願で得られる実施例には、実施例１のポリマーが「固体のほぼ無色透明な物質」であるという記述を除いて、得られた生成物のいかなる物理データも含まれていない。

グアニジンのジアミンとの重縮合の間で形成してもよい可能な構造に関し、グラーツ工科大学の研究員のグループによるいくつかの記事が存在する。例えば、「Ａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ４（６），１８１１−１８１７（２００３）」及び「Ｆｅｉｅｒｔａｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｒａｐ．Ｃｏｍｍ．２４（９），５６７−５７０（２００３）」。出発モノマーの何れか１つで線状ポリマー鎖を終結する別の可能性に加えて、通常、下記一般式の環状分子もまた、無視できない部分で形成し、とりわけ、ジアミンの鎖長に依存する：

実際に上記全てのポリグアニジン誘導体の主な欠点は、ヒドラジンのような毒物学分野で知られる扱いにくい成分の使用に加えて、一方では、これらの生成物の無視できない毒性、並びに高い反応性の成分を用いる場合には、比較的困難な製造方法である。そのため、本発明の目的は、単純な方法であり、可能な限り経済的であり、上記の欠点を回避する、新規であり且つより低い毒性にもかかわらず殺生物効果のあるポリグアニジンを製造することである。

本発明は、アミノグアニジン及び／又は１，３−ジアミノグアニジンの、１以上のジアミンとの新規重縮合生成物、即ち、下記式（Ｉ）：

［式中、
Ｘは、−ＮＨ_２、アミノグアニジノ及び１，３−ジアミノグアニジノから選ばれ；
Ｙは、−Ｈ及び−Ｒ_１−ＮＨ_２から選ばれるか；或いは
Ｘ及びＹが、一緒になって、化学結合を示し、環状構造を与え；
Ｒ_１は、２ないし２０個の炭素原子を有し、１個以上の炭素原子がＯ又はＮで置き換えられていてもよい二価の有機基から選ばれ；
ａ及びｂは、それぞれ、０又は１であり（ただし、１，３−ジアミノグアニジン単位が含まれていない場合はａ＋ｂ≠２である。）；
Ｒ_２は、−Ｈ及び−ＮＨ_２から選ばれ（ただし、ａ＋ｂ＝０の場合は、Ｒ_２が−ＮＨ_２であり、ａ＋ｂ＝１の場合は、Ｒ_２が−Ｈ又は−ＮＨ_２であり、ａ＋ｂ＝２の場合は、Ｒ_２が−Ｈである。）；
ｎ≧２である。］
のポリグアニジン誘導体又はその塩を提供することにより上記目的を達成する。

活性アッセイにおいて、式（Ｉ）の新規ポリグアニジン誘導体が、有効な抗菌性物質であることが証明された。しかしながら、下記の本発明の実施形態及び比較例で実証されるように、上記文献ＷＯ２０１１／０４３６９０Ａ１、ＵＳ２０１１／０２６９９３６Ａ１及びＥＰ２，５２０，６０５Ａ１の同様の構造のポリマーに比べて驚くほどはるかに低い毒性を示す。いかなる理論にも拘束されることを望まずに、発明者らは、アミノ及びジアミノグアニジノ部分が、特に、上記のヒドラゾ架橋グアニジン二量体を含むポリマー比べて、ヒト真核細胞がグアニジノ部分に対してより耐容性を示すと推測している。さらに、開示された方法は、重合プロセスにおいて、従来技術の状態に応じて一部のポリマー中に残留モノマーとして含まれる可能性がある有毒成分ヒドラジン水和物の使用を避けている。

上記式（Ｉ）は、（モノ）アミノグアニジン（以下ＭＡＧとして言及する）の重縮合生成物、並びに１，３−ジアミノグアニジン（以下ＤＡＧとして言及する）の重縮合生成物を示す。

式（Ｉ）は、アンモニアの同時分離と共に進行する重縮合の間、ＭＡＧ及びＤＡＧラジカルが、それらのアミノ又は互変異性イミノ基並びにそれらのヒドラゾ（ヒドラジニル）部分を介する当該重縮合に加わることができるという事実により説明され得る。その結果として、本発明のポリマー鎖に組み込まれる出発モノマーとしてのＭＡＧ及びＤＡＧに関して３つの異なる可能性がある。ＭＡＧの場合は、式（Ｉ）のヒドラゾ部分のみが、ＤＡＧの場合は、イミノ／アミノ部分のみが、左方向、右方向又は上方向を指し得る。

ＭＡＧについて、これは、式（Ｉ）における以下の可能なパラメーターを意味する：
ａ＝１、ｂ＝０、Ｒ_２が−Ｈ：ヒドラゾ部分が左方向を指す；
ａ＝０、ｂ＝１、Ｒ_２が−Ｈ：ヒドラゾ部分が右方向を指す；又は
ａ＝０、ｂ＝０、Ｒ_２が−ＮＨ_２：ヒドラゾ部分が上方向を指す。

ＤＡＧについては、以下のパラメーターの組み合わせが存在する：
ａ＝０、ｂ＝１、Ｒ_２が−ＮＨ_２：アミノ／イミノ部分が左方向を指す；
ａ＝１、ｂ＝０、Ｒ_２が−ＮＨ_２：アミノ／イミノ部分が右方向を指す；又は
ａ＝１、ｂ＝１、Ｒ_２が−Ｈ：アミノ／イミノ部分が上方向を指す。

これに限定されるものではないが、得られた重縮合物のＮＭＲスペクトルは、後述する本発明の実施例に記載されているように、重縮合反応が、一貫して三つの可能な方向のうちいくつかの混合物をもたらすことを証明しているようである。これは、いくつかの方向の同じモノマーが、鎖内に存在するという推定につながる（まだ１００％明らかにされていない）。

これに関連して、グアニジノ部分のＣ＝Ｎ二重結合の位置（並びに二重結合でのＲ_２置換基の空間位置）が互変異性の通常の影響を受けるということが明確に言及されるべきである。これは、グアニジンの二重結合は、鎖内にあっても鎖外にあってもよく、Ｒ_２が左方向或いは右方向を指してもよいことを意味する。したがって、このような上記式（Ｉ）の重縮合生成物の互変異性体もまた、本発明の範囲内である。

Ｘ及びＹの上記選択肢は、環化して環状重縮合物を得る可能性を含む鎖を終結する異なる可能性（ＭＡＧ、ＤＡＧ又はその両方の混合物が、出発モノマーとして用いられるかどうかに依存する）からの結果である。アルバートらによる及びフェールタークらによる上記の記事も参照。もちろん、同じ選択肢が、鎖内の部分として末端アミノグアニジノ（ＭＡＧ）部分及び１，３−ジアミノグアニジノ（ＤＡＧ）部分のために利用可能である（即ち、鎖への結合は、任意の窒素原子を介していてもよい）。

本発明によれば、Ｒ_１基は、２ないし２０個の炭素原子、好ましくは４ないし１８個の炭素原子、より好ましくは６ないし１２個の炭素原子を有し、一部のＣ原子がＯ及び／又はＮで置き換えられていてもよい、直鎖状、分枝状又は環状の飽和又は不飽和の二価炭化水素基であってもよい。上記設定は、以下の考慮事項の結果である。非常に短いＲ_１基の場合、活性型ＭＡＧ又はＤＡＧ部分は、互いに非常に接近しており、ポリマーの活性を抑えることができる；しかしながら、長い基であるとそれらは、非常に離れている。したがって、２０個を超える原子を有する基は、基本的に可能であるが、それらは経済的な観点から好ましくはない。その理由は、単位重量あたりに比較的少数の抗感染的に有効なグアニジノ部分が含まれる式（Ｉ）のポリマーをもたらすためである。

好ましくは、Ｒ_１基は、鎖の親水性を増大させるために１以上の炭素原子がＯ又はＮで置き換えられていてもよいアルキレン基から選ばれ、より好ましくは、Ｒ_１が、下記一般式（ＩＩ）〜（Ｖ）の基から選ばれる：

式中、Ｚ_１〜Ｚ_４は、それぞれ独立して、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり、表示ｃ〜ｇは、それぞれ独立して、１ないし１２の範囲の整数であり、Ｒ_１基の原子総数は、２０を超えない。１つのＲ_１基における全てのヘテロ原子Ｚが、Ｏ又はＮの何れかであることが特に好ましい。

殺菌効果又は毒性に関するアッセイの最良の結果は、Ｒ_１が、４，９−ジオキサドデカン−１，１２−ジアミン、ポリオキシエチレン及び／又はプロピレンジアミンのようなポリエーテルジアミンの二価の基を示し、ｎは、好ましくは２ないし１５、より好ましくは２ないし１０、最も好ましくは２ないし６である化合物で達成された。

式（Ｉ）の新規ポリグアニジンの有用な塩は、ハロゲン化水素酸、窒素、硫黄又はリンの酸素酸、ホウ酸、炭酸、カルボン酸、チオカルボン酸、カルバミン酸、スルホン酸、ホスホン酸又はホスフィン酸、並びにこれらの酸の多価形態の部分エステル類又は部分アミド類のような１以上の無機酸又は有機酸との任意の酸付加塩である。本発明によれば、好ましくは、医薬上許容される塩が用いられ、より好ましくは、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素の形態の酸付加塩、硫酸塩、メチル硫酸塩、炭酸塩、ホウ酸塩、シアン酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、メシル酸塩、硝酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩又はこれらが二官能性以上の場合にこれらの酸の部分エステル類である。このような部分エステル類の好ましいアルコール成分は、医薬上許容されるアルコールであり、特に、エタノールである。

Ｒ_１基が１以上のＯＨ基又はＣＯＯＨ基を含む場合、無機塩基又は有機塩基との塩もまた本発明の範囲内であり、好ましくは、医薬上許容される塩基との塩であり、より好ましくは、グアニジン誘導体との塩であり、特に、アミノ又はジアミノグアニジンとの塩、即ち、本発明の新規ポリグアニジンの製造の基本となるグアニジン誘導体との塩である。通常、酸性部分及び塩基性部分の分子内塩が、いずれの場合においても、それぞれの分子内で形成されるだろう。

本発明の第二の形態において、グアニジン誘導体又はその塩のジアミンとの重縮合による、第一形態に従う本発明のポリグアニジン誘導体を製造する方法であって、ＭＡＧ及び／又はＤＡＧ又はその酸付加塩を、加熱することにより、少なくとも１つのジアミンＨ_２Ｎ−Ｒ_１−ＮＨ_２と重縮合させることを特徴とする方法が提供される。

先行技術の状態とは対照的に、本発明の方法は、ＭＡＧ又はＤＡＧを１以上のジアミン（好ましくはただ一つのジアミン）と反応させることを含む。これは、ロシアの研究員により行われた上述方法のものに比べて、より明確に定義された生成物の製造を可能にする。その理由は、反応過程で、本発明に従って調製された反応混合物中に、クロマトグラフ上でも湿式化学的にも遊離ヒドラジンが検出されなかったからである。上記の従来技術で望ましいものの、本明細書では全く望ましくないヒドラジンとの（副）反応は、このように効果的に回避され得る。

好ましくは、本発明の方法は、ＭＡＧ又はＤＡＧの塩（特に、その塩酸塩）を、ジアミンと一緒に加熱することにより行われる。ジアミンは、好ましくは、グアニジン誘導体の完全な変換を保証するために小モル過剰（例えば、（ジ）アミノグアニジンに対して３ないし５モル％、或いは経済的な理由のため最大で１０モル％）で用いられる。加熱は、反応速度を制御するために、第一に、より低温（好ましくは、およそ８０〜１５０℃、より好ましくは１１０〜１３０℃）で行い、次いで第二に、より高温（好ましくは１５０〜２５０℃、より好ましくは１６０〜１８０℃）で行う。また、このようにしてガスを形成する。反応混合物は、反応の完結を保証するために、第一の温度で、好ましくは１ないし３時間、より好ましくは２時間保持され、次いで第二の温度で、好ましくは１ないし８時間、より好ましくは３ないし５時間保持される。

反応は、好ましくは、常圧で、水を排除して行われる。それは、例えば、はじめに反応容器を不活性ガスでパージし、反応容器に乾燥管を装備することにより達成できる。しかしながら、遊離アンモニア並びに残留モノマー（即ち、主に過剰なジアミン）を可能な限り完全に蒸発させるために、真空を適用することも可能である（特に、精製工程の過程における反応終了時）。

反応終了後、好ましくは、得られたポリグアニジン誘導体を、水（例えば、３〜１０倍の量の水）に溶解する。これは、一方では、任意の水不溶解性成分を分離するために有効であり、他方で、水溶液が、新規ポリマーの使用のための好ましい製剤である。それは、該当する場合、任意のアジュバントを添加した後に、以下のように直接使用することができる可能性があることを意味する。

現時点であまり好ましくはないさらなる精製の選択肢は、例えば、水溶液から水を蒸発させること、及び真空中でポリマーを乾燥すること、或いは酸の添加及びそれに続く乾燥により水溶液から塩析することを含み、ここでは、好ましいものとして記載されている医薬上許容される酸が有用である。塩析の一つの実施形態は、ＣＯ_２を導入し、炭酸塩又は炭酸水素塩としてポリグアニジンを塩析することを含む。所望のポリグアニジンを、塩として用いず、遊離塩基として用いる場合、塩析した後に塩基で処理し、水性又は非水性の溶液又は懸濁液中で提供することができる。

第三形態において、本発明は、細菌感染、真菌感染及びウイルス感染並びにそれらの後遺症に拮抗するためにヒト医学及び獣医学分野において用いるため、農業分野及び環境分野において殺虫剤及び殺菌剤として用いるため、一般的に、病原菌を減少させ除去するための殺菌剤（殺生物剤）として用いるため、抗寄生虫薬として用いるため、製品を安定化（滅菌）するための補助剤として用いるため、或いはコールド／ウェット噴霧化、微粒子化及び蒸気滅菌のために溶解した形態の噴霧化物質として用いるための本発明の第一の形態に基づくポリグアニジン誘導体、或いは本発明の第二の形態に基づく方法により製造されたポリグアニジン誘導体を提供する。

以下、比較例と共に非限定的に例示する実施形態を用いて、本発明をより詳細に説明するだろう。図（図１）のみが、毒性アッセイの結果をまとめたものである。

図１は、毒性アッセイの結果をまとめたものである。

実施例１〜６及び比較例１及び２−ポリマーの製造
実施例１
２３ｍｍｏｌの１，３−ジアミノグアニジニウム塩酸塩及び２４ｍｍｏｌの４，９−ジオキサドデカン−１，１２−ジアミンを、乾燥管でふさいだ反応容器内で攪拌しながら１２０℃にて９０分間加熱し、次いで温度を１８０℃に１００分間昇温し、この反応時間の終わりに、４５分間減圧下（５０ｍｂａｒ）とした。反応混合物を８０℃未満に冷却した後、２５ｍｌの水をゼラチン状の反応生成物に加えた。数時間後、透明な溶液を得た。

得られた水溶液の試料から水を留去し、得られた残渣を真空乾燥し、赤みがかった粘性液体を得た。それを２ｍｌのＤ_２Ｏ（重水素化度＞９９．５％）に溶解し、^１Ｈ核共鳴（^１Ｈ−ＮＭＲ−）スペクトルを得た。このように識別可能な生成物におけるＲ_１基のメチレンプロトン基の位置は、以下の通りである：

^１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ），δ（ｐｐｍ）：１．５４−１．６７（ｍ，ＯＣＨ_２ ＣＨ _２ ＣＨ _２ ＣＨ_２Ｏ），１．８０−１．９５（ｍ，ＮＣＨ_２ ＣＨ _２ ），３．２３−３．３８ｐｐｍ（ｍ，ＮＣＨ _２ ），３．４２−３．６５ｐｐｍ（ｍ，ＣＨ_２ ＣＨ _２ ＯＣＨ _２ ＣＨ_２）．

これにより、使用されるジアミン成分４，９−ジオキサドデカン−１，１２−ジアミンの構造が確認される。

実施例２
４．６ｍｍｏｌの１，３−ジアミノグアニジニウム塩酸塩及び４．８ｍｍｏｌの４，９−ジオキサドデカン−１，１２−ジアミンを、乾燥管でふさいだ反応容器内で攪拌しながら１２０℃にて９０分間加熱し、次いで温度を１８０℃に８時間昇温し、この反応時間の終わりに４５分間減圧下（５０ｍｂａｒ）とした。反応混合物を８０℃未満に冷却した後、１６ｍｌの水をゼラチン状の反応生成物に加えた。数時間後、透明溶液を得た。

実施例３
４．６ｍｍｏｌのＮ−アミノグアニジニウム塩酸塩及び４．８ｍｍｏｌの４，９−ジオキサドデカン−１，１２−ジアミンを乾燥管でふさいだ反応容器内で攪拌しながら１２０℃にて９０分間加熱し、次いで温度を１８０℃に３．５時間昇温し、この反応時間の終わりに６０分間減圧下（５０ｍｂａｒ）とした。反応混合物を８０℃未満に冷却した後、１６ｍｌの水をゼラチン状の反応生成物に加えた。数時間後、透明溶液を得た。

実施例４
１．１６ｍｍｏｌの１，３−ジアミノグアニジニウム塩酸塩及び１．２１ｍｍｏｌのトリス（２−アミノエチル）アミンを、乾燥管でふさいだ反応容器内で攪拌しながら１２０℃にて１５０分間加熱し、次いで温度を１６０℃に２．５時間昇温し、この反応時間の終わりに４５分間減圧下（５０ｍｂａｒ）とした。反応混合物を８０℃未満に冷却した後、４ｍｌの水をゼラチン状の反応生成物に加えた。数時間後、透明溶液を得た。

実施例５
８．１２ｍｍｏｌの１，３−ジアミノグアニジニウム塩酸塩及び８．４７ｍｍｏｌのトリス（２−アミノエチル）アミンを、乾燥管でふさいだ反応容器内で攪拌しながら１３０℃にて１２０分間加熱し、次いで温度を１８０℃に８時間昇温し、この反応時間の終わりに９０分間減圧下（５０ｍｂａｒ）とした。反応混合物を８０℃未満に冷却した後、２８ｍｌの水をゼラチン状の反応生成物に加えた。数時間後、透明溶液を得た。

実施例６
２．３２ｍｍｏｌの１，３−ジアミノグアニジニウム塩酸塩及び２．４３ｍｍｏｌの３，６−ジオキサオクタン−１，８−ジアミンを、乾燥管でふさいだ反応容器内で攪拌しながら１２０℃にて６０分間加熱し、次いで温度を１７０℃に４時間昇温し、この反応時間の終わりに６０分間減圧下（５０ｍｂａｒ）とした。反応混合物を８０℃未満に冷却した後、７ｍｌの水をゼラチン状の反応生成物に加えた。数時間後、透明溶液を得た。

比較例１
２３．２ｍｍｏｌのグアニジニウム塩酸塩、５．４ｍｍｏｌの３，６−ジオキサオクタン−１，８−ジアミン及び１８．１ｍｍｏｌの１，６−ジアミノヘキサンを、乾燥管でふさいだ反応容器内で攪拌しながら１２０℃にて９０分間加熱し、次いで温度を１７０℃に８時間昇温し、この反応時間の終わりに９０分間減圧下（５０ｍｂａｒ）とした。反応混合物を８０℃未満に冷却した後、６０ｍｌの水をゼラチン状の反応生成物に加えた。数時間後、透明溶液を得た。

得られたポリマーの構造は、ＷＯ２００６／０４７８００Ａ１に開示されたものに対応する。

比較例２
２．００ｍｍｏｌのグアニジニウム塩酸塩、１．７０ｍｍｏｌの１，６−ヘキサメチレンジアミン及び０．３ｍｍｏｌのヒドラジン水和物を、乾燥管でふさいだ反応容器内で攪拌しながら１６０℃にて９０分間加熱し、次いで温度を１８０℃に３．５時間昇温し、この反応時間の終わりに６０分間減圧下（５０ｍｂａｒ）とした。反応混合物を８０℃未満に冷却した後、４ｍｌの水をゼラチン状の反応生成物に加えた。数時間後、透明溶液を得た。

得られたポリマーの構造は、ＷＯ２０１１／０４３６９０Ａ１に開示されたものに対応する。

実施例７−活性の測定：抗菌／抗真菌／抗ウイルス効果
新規化合物の活性を多くのスクリーニング系で試験した。抗菌活性及び抗真菌活性をＭＩＣアッセイで試験した。ＭＩＣとは、「最小阻害濃度」を言い、肉眼で識別可能な微生物の成長を阻害し得る物質の最低濃度である。ＭＩＣは、物質を希釈し次いで病原体を加える、いわゆる滴定濃度法を用いて決定する。

通常これにより、菌種の増殖を阻害するのに十分に高い抗生剤の濃度を決定することができる。ＭＩＣは、マイクログラムパーミリリッター（μｇ／ｍｌ）又は％パー体積で特定され、希釈は、一般的にｌｏｇ２のステップで行われる。ここで、１％の初期濃度を２倍ずつ希釈し、その結果として０．５％、０．２５％、０．１２５％等の試験濃度を得る。したがって、低い値は、抗感染性のより良好な活性を示す。

アッセイは、ＥＵＣＡＳＴ（欧州抗菌薬感受性試験法検討委員会）により要求される基準に従って行い、欧州臨床微生物感染症学会議（ＥＳＣＭＩＤ）のＡＦＳＴ（「抗真菌薬感受性試験」）規定に従って行った。

ウイルスのスクリーニング系は、宿主細胞がインビトロで感染する感染系であり、試験物質を感染前後に加え、その活性を決定した。これらの全てのアッセイは、類似段階希釈を、例えば抗菌/抗真菌アッセイで用いる薬剤スクリーニングに関するシーライフファルマの内部基準規定に従って行った。

下記表１〜３は、多耐性細菌及び菌類並びにウイルスに対する実施例１、３、４及び５の本発明新規化合物の抗感染効果に関する試験結果をまとめたものである。データは、複数測定の平均値である。

本発明新規化合物がグラム陽性並びにグラム陰性病原体に対して優れた活性を示すことは明らかである：

菌類及び酵母に対しても:

ウイルスに対しても:

したがって、試験された全ての新規化合物は、以下の毒性アッセイで示されるように先行技術により知られているポリグアニジン誘導体に比べて有意に低い毒性で、様々な病原体に対して非常に良好ないし非常に優れた活性を示す。

実施例８−毒性アッセイ
以下に記載されたＡｌａｍａｒＢｌｕｅ^（Ｒ）アッセイを、４種のポリマーをそれらの毒性ポテンシャル（増殖、細胞死、細胞代謝を含む）について試験するために用い、ＩＣ_５０値及び非毒性濃度を一次ケラチノサイト（ＨＫＥＲ）及び一次内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）で測定した。図1は、様々なポリマーの毒性効果がそれらの濃度に依存することを示す。

ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ^（Ｒ）アッセイ：２０，０００個のヒトケラチノサイト（ＨＫＥＲ）又は内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、９６個のウェルプレートで播種し、２４時間インキュベートし、その後、異なる濃度（５％〜０．００５％）の実施例１及び３の新規ポリマー並びに比較例１及び２の比較物質を加えた。２４時間後、１０μｌのＡｌａｍａｒＢｌｕｅ^（Ｒ）をそれぞれのウェル（１００μｌ培地）に加え、３時間のインキュベーション後、呈色反応を、マルチプレートリーダーを用いて検出した（ｅｘ：５３０ｎｍ；ｅｍ：５９０ｎｍ）。ＨＫＥＲ：「ヒト一次ケラチノサイト」；ＨＵＶＥＣ：「ヒト臍帯静脈内皮細胞」。

比較例１及び２のポリマーは、すでに非常に低濃度（即ち、およそ０．０１％以下のＩＣ_５０）でＨＫＥＲ並びにＨＵＶＥＣに対して有意な毒性効果を示す。比較的に、本発明者らにより製造された実施例１及び３の新規ポリマーは、有意により高い濃度で毒性効果を示す（両方の細胞形態でのＩＣ_５０が、実施例１については、およそ１％、実施例３については、０．０５％ないし０．１％の範囲である。）。比較例により生み出された毒性は、実施例３のポリマーは５倍の濃度でのみで到達し、実施例１のポリマーは少なくとも１００倍の濃度でのみ到達する。したがって、ＤＡＧ誘導体は、ＭＡＧポリマーよりも本アッセイでより良好な結果を示した。

結果として、新規化合物は、先行技術で知られているポリグアニジン誘導体よりも有意に低い毒性にて様々な病原体に対して非常に良好な優れた活性を示す。

Claims (19)

1. アミノグアニジン及び／又は１，３−ジアミノグアニジンの１以上のジアミンとの重縮合生成物、即ち、下記式（Ｉ）：
   
   ［式中、
   Ｘは、−ＮＨ_２、アミノグアニジノ及び１，３−ジアミノグアニジノから選ばれ；
   Ｙは、−Ｈ及び−Ｒ_１−ＮＨ_２から選ばれるか；或いは
   Ｘ及びＹが、一緒になって、化学結合を示し、環状構造を与え；
   Ｒ_１は、２ないし２０個の炭素原子を有し、１個以上の炭素原子がＯ又はＮで置き換えられていてもよい二価の有機基から選ばれ；
   ａ及びｂは、それぞれ０又は１であり（ただし、１，３−ジアミノグアニジン単位が含まれない場合はａ＋ｂ≠２である。）；
   Ｒ_２は、−Ｈ及び−ＮＨ_２から選ばれ（ただし、ａ＋ｂ＝０の場合はＲ_２が−ＮＨ_２であり、ａ＋ｂ＝１の場合はＲ_２が−Ｈ又は−ＮＨ_２であり、ａ＋ｂ＝２の場合はＲ_２が−Ｈである。）；
   ｎ≧２である。］
   のポリグアニジン誘導体又はその塩。
2. Ｒ_１が、１以上の炭素原子がＯ又はＮで置き換えられていてもよいアルキレン基から選ばれることを特徴とする請求項１に記載のポリグアニジン誘導体。
3. Ｒ_１が、下記一般式（ＩＩ）〜（Ｖ）：
   
   ［式中、Ｚ_１〜Ｚ_４は、それぞれ独立して、Ｏ及びＮから選ばれるヘテロ原子であり、表示ｃ〜ｇは、それぞれ独立して、１ないし１２の範囲の整数であり、Ｒ_１基の原子総数は２０を超えない。］
   の基から選ばれることを特徴とする請求項２に記載のポリグアニジン誘導体。
4. １個のＲ_１基内の全てのヘテロ原子Ｚが、Ｏ又はＮの何れかであることを特徴とする請求項３に記載のポリグアニジン誘導体。
5. Ｒ_１が、ポリエーテルジアミンの二価の基を示すことを特徴とする請求項４に記載のポリグアニジン誘導体。
6. ｎ＝２〜６であることを特徴とする請求項１〜５の何れか１項に記載のポリグアニジン誘導体。
7. 塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素の形態の酸付加塩、硫酸塩、炭酸塩、ホウ酸塩、シアン酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、メシル酸塩、硝酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、二官能性以上の場合にこれらの酸の何れかの部分エステル、又は２以上のこれらの塩及び／又は部分エステルの混合物として存在することを特徴とする請求項１〜６の何れか１項に記載のポリグアニジン誘導体。
8. 加熱することにより、アミノグアニジン若しくは１，３−ジアミノグアニジン又はそれらの酸付加塩を、少なくとも１つのジアミンＨ_２Ｎ−Ｒ _１ −ＮＨ_２と重縮合させることを特徴とするグアニジン誘導体又はその塩のジアミンとの重縮合による請求項１〜７の何れか１項に記載のポリグアニジン誘導体の製造方法。
9. 少なくとも１つのジアミンが、グアニジン誘導体に対して３ないし５モル％の過剰量で用いられることを特徴とする請求項８に記載の方法。
10. アミノグアニジン又は１，３−ジアミノグアニジンの塩を、少なくとも１つのジアミンと共に、まず、第一のより低い温度、次いで、第二のより高い温度に加熱することを特徴とする請求項８又は９に記載の方法。
11. アミノグアニジン又は１，３−ジアミノグアニジンの塩を、少なくとも１つのジアミンと共に、まず１１０〜１３０℃、次いで１６０〜１８０℃に加熱することを特徴とする請求項１０に記載の方法。
12. 反応混合物を、第一の温度で１ないし３時間、第二の温度で１ないし８時間保持することを特徴とする請求項１０又は１１に記載の方法。
13. 得られたポリグアニジン誘導体を、３〜１０倍量の水に溶解することにより精製することを特徴とする請求項８〜１２の何れか１項に記載の方法。
14. 細菌感染、真菌感染及びウイルス感染に拮抗するためにヒト医学分野及び獣医学分野において用いるための請求項１〜７の何れか１項に記載のポリグアニジン誘導体を含む薬剤。
15. 有効量のポリグアニジン誘導体が、３〜１０倍量の水中において溶液として存在することを特徴とする、請求項１４に記載の薬剤。
16. 請求項１〜７の何れか１項に記載のポリグアニジン誘導体を含む殺菌剤。
17. 有効量のポリグアニジン誘導体が、３〜１０倍量の水中において溶液として存在することを特徴とする、請求項１６に記載の殺菌剤。
18. コールド／ウェット噴霧化、微粒子化及び蒸気滅菌のために溶解した形態の噴霧化物質として用いるための請求項１〜７の何れか１項に記載のポリグアニジン誘導体を含む薬剤。
19. 有効量のポリグアニジン誘導体が、３〜１０倍量の水中において溶液として存在することを特徴とする、請求項１８に記載の薬剤。